CN106164278B - 用于生产轻质可再生生物燃料的方法 - Google Patents

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Abstract

描述了用于生产生物燃料的方法，所述方法包括：在含有大于1g/升的水平的磷酸根的生长培养基中培养罗旺醋杆菌(Acetobacter lovaniensis)细菌，其中所述细菌的培养产生所述生物燃料。

Description

用于生产轻质可再生生物燃料的方法
发明领域
本发明涉及通过在特定生长条件下培养醋杆菌属(Acetobacter)微生物而生产轻质可再生生物燃料的方法。
发明背景
近年来，对化石燃料的消耗和温室气体的产生的关注越来越多。降低地球对化石燃料的依赖的一种途径是来自可再生能源的生物燃料的开发。生物燃料如生物汽油、生物柴油和生物乙醇被认为是更清洁、更环保的化石燃料替代品。
尽管生物燃料可以帮助降低温室气体排放，它们并非没有问题。有争议的方面是“食物用于燃料”问题，其中对能源作物的需求已经被认为推高了粮食商品的价格。另一个严重的缺点是对生态敏感的生态系统如热带雨林(在那里，能源作物如大豆和棕榈的种植已经造成了大规模的破坏)造成损害。
生物燃料行业正在转向第二代和第三代生物燃料以缓解这些问题。借助微生物的燃料生产和废料底物的使用是重要的研究领域。
二氧化碳向燃料分子的转化是已知的。二氧化碳可以通过化学方法、通过电化学方法、和直接地或间接地通过微生物转化。
WO2013/011292记述了能够产生长链脂族羧酸的微生物，其通过固定二氧化碳产生甲酸盐，然后连续向主链上添加碳原子以产生长链脂族羧酸。该文件记述了一种称为罗旺醋杆菌(Acetobacter lovaniensis)FJ1的特定菌株，其保藏号为NCIMB 41808(根据布达佩斯条约的规定，于2011年1月12日保藏在NCIMB Ltd.(Ferguson Building，CraibstoneEstate，Bucksburn，Aberdeen，AB21 9YA))。
发明概述
已经令人惊讶地发现，当在富含磷酸盐的生长方案中生长时，WO2013/011292记载的罗旺醋杆菌菌株能够产生替代范围的产物，诸如醇、酯和单萜。据信在这样的生长条件下发生代谢转换。之前并不知晓该微生物能够产生此类产物。因此，本发明涉及一种利用WO2013/011292中记述的微生物生产生物燃料的方法。WO2013/011292的公开内容完全结合在本文中。
在第一方面，本发明提供一种生产生物燃料的方法，所述方法包括：在含有大于1g/升的水平的磷酸根的生长培养基中培养罗旺醋杆菌细菌，其中该细菌的培养产生生物燃料。
罗旺醋杆菌细菌在含有大于1g/升的磷酸根的生长培养基中培养。1g/升是生长培养基中磷酸根离子(PO4 3-)的量而不是生长培养基中包含磷酸根的化合物的量。例如，磷酸二氢钾(KH2PO4)具有136的相对分子量。其磷酸根部分具有95的相对分子量。因此，如果将136克KH2PO4加入到100升水中，则在水中有1.36g/升的KH2PO4，而水中的磷酸根将为0.95g/升。
在一些实施方案中，生长培养基优选地含有大于2g/升水平的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有大于3g/升的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有大于4g/升的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有大于5g/升的磷酸根。在一些实施方案中，生长培养基含有大于6g/升的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有大于7g/升的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有大于8g/升的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有大于9g/升的磷酸根。在一些实施方案中，生长培养基含有大于10g/升的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有大于11g/升的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有大于12g/升的磷酸根。在优选的实施方案中，生长培养基含有大于13g/升的磷酸根。在另一个优选的实施方案中，生长培养基含有大于14g/升的磷酸根。
在一些实施方案中，生长培养基含有小于150g/升的水平的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有小于100g/升的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有小于80g/升的磷酸根。在多个实施方案中，生长培养基含有小于70g/升的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有小于60g/升的磷酸根。在一些实施方案中，生长培养基含有小于50g/升的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有小于45g/升的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有小于40g/升的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有小于35g/升的磷酸根。在一些实施方案中，生长培养基含有小于30g/升的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有小于25g/升的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有小于20g/升的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有小于15g/升的磷酸根。
在一些实施方案中，生长培养基含有在1至150g/升之间的水平的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有2至100g/升之间的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有3至80g/升之间的磷酸根。在多个实施方案中，生长培养基含有4至70g/升之间的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有5至60g/升之间的磷酸根。在一些实施方案中，生长培养基含有6至50g/升之间的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有7至45g/升之间的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有8至40g/升之间的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有9至35g/升之间的磷酸根。在一些实施方案中，生长培养基含有10至30g/升之间的磷酸根。在其他实施方案中，生长培养基含有11至25g/升之间的磷酸根。在进一步的实施方案中，生长培养基含有12至20g/升之间的磷酸根。在具体的实施方案中，生长培养基含有13至15g/升之间的磷酸根。
生长培养基可以是允许罗旺醋杆菌细菌生长和繁殖并且产生生物燃料的任意适当的生长培养基。生长培养基可以包含多种允许细菌生长和繁殖的成分/营养物。生长培养基可以包含下述添加剂中的一种或多种：钾盐，镁盐，锰盐，铁盐，铜盐，钴盐，钠盐，锌盐，钙盐，钼盐，氯化物，硫酸盐，钼酸盐和碳酸盐。这些添加剂通常以0.01至2g/升之间存在于生长培养基中。
在一些实施方案中，生长培养基可以具有下述指定量的一种或多种添加剂：
成分 g/1000ml
磷酸一氢钾 10-30
氯化镁 0.1-2
氯化锰 0.01-0.1
三氯化铁 0.01-0.1
硫酸铜 0.01-0.1
氯化钴 0.01-0.1
钼酸钠 0.01-0.1
氯化锌 0.1-1
在具体的实施方案中，生长培养基具有下述组成：
成分 g/1000ml
磷酸一氢钾 20
氯化镁 1
氯化锰 0.05
三氯化铁 0.05
硫酸铜 0.05
氯化钴 0.05
钼酸钠 0.05
氯化锌 0.5
优选地，生长培养基不包含外源性氮源。由于该细菌能够固定溶解在生长培养基中的来自大气的氮，因此这是不需要的。
所述细菌能够固定二氧化碳。因此，除溶解在生长培养基中的来自大气的二氧化碳，生长培养基不需要外源性碳源。然而，在一些实施方案中，在培养细菌之前或在培养过程中，二氧化碳可以在生长培养基中鼓泡，以增加溶解在生长培养基中的二氧化碳的量。细菌可以使用二氧化碳作为唯一的碳源。
在一些实施方案中，向生长培养基中加入甘油作为另外的碳源。优选地，这在所述细菌开始生长和繁殖后加入。
生长培养基可以具有3.5至9之间的pH。优选地，生长培养基具有4至7之间的pH。在具体的实施方案中，生长培养基的pH约是4.5。
生长培养基优选地是水性的，以使营养物/添加剂溶解在水中。
所述细菌通常在0℃至60℃之间的温度培养。优选地，所述细菌在10℃至40℃之间的温度培养。在一些实施方案中，所述细菌在15℃至30℃之间的温度培养。
所述细菌通常培养至生长培养物达到在600nm测量的0.75至1.00之间的光密度(OD600)。
在培养过程中，培养物可以用另外的生长培养基稀释，以增加培养物的体积。因此，当需要提取生物燃料时，培养物应该具有0.75至1.00之间的最终光密度。
所述细菌可以培养12至36小时之间。在一些实施方案中，细菌可以培养18小时-30小时。
通过培养罗旺醋杆菌细菌而产生生物燃料。所述细菌可以是能够产生生物燃料的任意合适的罗旺醋杆菌细菌。这包括菌株FJ1(保藏号为NCIMB 41808)和与FJ1相关或衍生于FJ1的相似的菌株。术语“衍生于”意指可以将FJ1修饰或突变，以产生另外的细菌。例如，可以插入基因或从FJ1去除基因。衍生于FJ1的细菌应该与FJ1功能等同，并且应该能够产生生物燃料。此外，衍生的细菌应该能够在与FJ1相同的条件下生长。优选地，所述细菌是保藏号为NCIMB 41808的菌株FJ1。细菌可以通过本领域技术人员公知的方法鉴定为罗旺醋杆菌细菌，例如，通过使用16S rDNA分析进行鉴定。
细菌在其生长时产生生物燃料，因此，当完成细菌的培养时，在生长培养基中将存在生物燃料。然后，如果需要，可以提取生物燃料。
术语“生物燃料”意指能够用作燃料并且燃烧释放能量的可燃分子。由本发明的方法产生的生物燃料包括挥发性的醇、酯和单萜。
所述方法可以进一步包括从生长培养基中分离生物燃料的步骤。这可以是第一分离步骤。这可以以任意适当的方式进行，并且多种方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。
例如，生物燃料可以利用蒸馏分离，包括标准蒸馏，分馏，真空蒸馏，用夹带剂蒸馏，溶剂萃取然后用蒸馏回收，和连续蒸馏。其他分离方法包括膜灌注、电化学分离或使用临界二氧化碳。
如果在1大气压下进行蒸馏(而不是如真空蒸馏那样在减压下进行)，例如，使用侧臂冷凝器进行，生物燃料将包含在前10％的馏出物中。通常，该初始馏出物在95℃至100℃之间的温度收集，具体地，在约98℃收集。典型地，作为共沸物的一部分收集生物燃料。
当分离了生物燃料时，其可以通过向生物燃料中加入酸而进行酸化。适当的酸包括盐酸和硫酸。pH可以降低至5以下，或优选4.5以下。这对进一步的分离步骤有帮助，原因在于在蒸馏A中形成的共沸物‘破裂’并释放生物燃料的轻馏分。
可以进行第二分离步骤以进一步从存在的任意其他产物中分离/纯化生物燃料。该第二分离可以使用任意适当的方法进行。例如，生物燃料可以利用蒸馏分离，包括标准蒸馏，分馏，真空蒸馏，用夹带剂蒸馏，溶剂萃取然后用蒸馏回收，和连续蒸馏。其他分离方法包括膜灌注、电化学分离或使用临界二氧化碳。
如果在1大气压下进行蒸馏(而不是如真空蒸馏那样在减压下进行)，例如，使用分馏柱进行，生物燃料将70℃至90℃之间的温度馏出，典型地在约85℃馏出。这通常是第一馏分。
一旦分离，可以将生物燃料干燥，以去除一些水。这可以使用试剂(诸如，但不限于，氯化物盐(钙或钠))或分子筛3A进行。
然后，如果需要，可以进一步处理生物燃料，以进一步分离特定的目标成分或改良生物燃料的特征。例如，所述方法可以任选地包括下述步骤中的一个或多个：
1)分离生物燃料的特定成分；
2)过滤所述生物燃料；
3)将所述生物燃料与不同的燃料如生物乙醇或汽油共混；
4)化学改性所述生物燃料；和
5)馏掉生物燃料的某些馏分。
在具体的实施方案中，提供用于生产生物燃料的方法，所述方法包括：
在包含10至30g/升之间的水平的磷酸根的生长培养基中培养保藏号为NCIMB41808的罗旺醋杆菌菌株FJ1，其中所述细菌的培养产生生物燃料；和
从生长培养基中分离所述生物燃料。
在这一实施方案中，磷酸根水平记述为10至30g/升之间。然而，在该具体实施方案中，可以使用上述任一水平。例如，磷酸根水平可以大于1g/升，或磷酸根水平可以为13至15g/升之间，或者是介于之间的任意实施方案。
由所述细菌产生的产物包括一系列挥发性的醇、酯和单萜。这些分子具有用作生物燃料的潜力。
在由所述细菌产生的目标化合物中有醇，包括乙醇，丁醇，戊醇和4-甲基戊醇。醇，诸如乙醇，用作汽油替代物，或者用于与汽油共混。汽油具有32MJ/l的能量密度，乙醇的能量密度为21MJ/l。当与乙醇比较时，戊醇异构体是有利的，原因在于戊醇异构体具有约28MJ/l的能量密度和低得多的针对水的亲和力。
因此，所述方法可以包括从生物燃料中分离醇。这可以通过任意适当的方式进行，并且适当的方法，诸如蒸馏，是本领域技术人员所清楚的。
还合成了多种酯分子，包括乙酸丁酯。乙酸丁酯是一种已知的汽油添加剂，其是辛烷值提升剂(octane booster)。该分子也是潜在的可再生的生物燃料添加剂。
因此，所述方法可以包括从生物燃料中分离酯分子。这可以通过任意适当的方式进行，并且适当的方法，诸如蒸馏，是本领域技术人员所清楚的。
由所述细菌产生的其他目标化合物是单萜，包括α-松油醇，γ-松油醇，γ-松油烯，D-柠檬烯和桉叶脑。单萜是C10类异戊二烯，其表现出作为汽油的替代分子以及在进一步催化氢化后的喷气式飞机和火箭燃料的替代品的巨大潜力。类异戊二烯和它们的氢化产物是已知的燃料。
因此，所述方法可以包括从生物燃料中分离单萜。这可以通过任意适当的方式进行，并且适当的方法，诸如蒸馏，是本领域技术人员所清楚的。
单萜可以进行进一步的处理，诸如氢化。
本发明还提供通过上述方法产生的生物燃料。
进一步地，本发明提供所述生物燃料或其成分的用途，例如，作为上文所述的添加剂的用途。
认为负责产生生物燃料的酶在所述细菌的细胞外。这些酶起作用，而不管是否存在细菌的细胞。因此，在本发明的另一方面，提供用于生产生物燃料的方法，所述方法包括：提供包含在含有大于1g/升的水平的磷酸根的生长培养基中培养的罗旺醋杆菌细菌的无细胞提取物的水性培养基，其中在所述水性培养基中产生生物燃料。
以上对于本发明第一方面的方法所描述的步骤，例如，涉及分离生物燃料等，同等适用于本发明的这一方面。
所述培养基可以通过将所述细菌培养一段时间以允许在培养基中产生酶系统而产生。可以通过在培养后从培养基中去除细菌的细胞，例如，通过反复超滤去除，而制备无细胞提取物。
在本发明的另一方面，提供包含在含有大于1g/升的水平的磷酸根的生长培养基中培养的罗旺醋杆菌细菌的无细胞提取物的水性培养基。
发明详述
现在将仅参考附图通过举例的方式详细描述本发明，在所述附图中：
图1是显示通过罗旺醋杆菌FJ1合成生物燃料(在存在升高的磷酸根水平的条件下，依赖二氧化碳生长)及其后续的回收的流程图。
概述
在存在富集的磷酸根水平的条件下，并且任选地在不存在外源性氮源和碳源的条件下，罗旺醋杆菌FJ1产生不同的代谢物组合。
不希望困于具体的理论，认为在存在升高的磷酸根水平的条件下，存在经由羟基丙酸酯循环向二氧化碳固定的代谢转换(Tabita，F.J.，PNAS(2009)，106，21015-21016；Strauss，G.和Fuchs.G.，Eur.J.Biochem(1993)，215，633-643)。另外，经由固氮酶型复合物的氮固定导致产生氢(Tamagnini P.，Axelssen R.，Lindberg P.，Oxelfelt F.，Wenschiers R.和Lindblad P.，Microbiology and Molecular Biology Reviews(2002)，66，11-20)，其由氢化酶利用并且平衡生物体的氧化还原系统。尽管在其他的生物体中注意到碳和氮同化作用(Levican G.，Ugalde J.A.，Ehrenfeld M.，Maass A.，和Parada P.，BMCGenomics(2008)，581，1186；Dubbs J.M.和Tabita F.R.，Fems Microbiol Rev.(2004)，28，353-356；McKinlay J.B.和Harwood C.S.，PNAS(2010)，1073，1-7)，利用二氧化碳作为经由固氮酶系统的氧化还原循环机制之前仅在不产生氧的光养性细菌(诸如非硫紫菌)中注意到，其中二氧化碳经由Calvin Benson Basham循环被还原。醋杆菌属(Acetobacter)物种可以能够利用该作用。
生产生物燃料的过程
将罗旺醋杆菌FJ1(保藏号：NCIMB 41808)在极限盐培(minimal salt media)养基上生长，其中排除了氮源，并且其中磷酸根水平升高。该培养基的组成显示在下表中。
表1:用于生长罗旺醋杆菌FJ1的极限盐培养基的组成
Figure BDA0001072360060000091
Figure BDA0001072360060000101
将该培养基溶解在水中并过滤。所用的水可以是蒸馏水或自来水。微生物可以在非无菌条件下生长，并且不需要通过高压灭菌或一些其他适当的方法对培养基和设备进一步灭菌。
将微生物接种在摇瓶或其他适当的容器中的两升量的培养基中，并且生长至A600为0.75至1.00之间。然后，将两升培养基在新鲜培养基中稀释至10升的体积，并且再培养至A600为0.75至1.0之间。通过培养物的反复分裂，将培养基的体积增加至需要的体积。
可以将用过的细菌培养基储存多至12个月的延长的时间段。
将用过的细菌培养基蒸馏，以利用图1所示的一般过程回收目标产物。
可以使用标准蒸馏设置，其使用烧瓶、加热器罩，用或不用分馏柱和具有冷凝器的蒸馏头。然而，其他蒸馏方法，如真空蒸馏、用夹带剂蒸馏、溶剂萃取然后用蒸馏回收，和连续蒸馏，也是适用的。也可以使用其他用于回收代谢物的方法，诸如膜灌注、电化学分离或利用临界二氧化碳回收。
可以将馏出的生物燃料酸化。这可以辅助生物燃料成分的进一步分离。例如，酸化可以用于催化酯向羧酸和醇的转化。然后，可以将醇分离(与或不与其他成分一起分离)。例如，任意的乙醇可以在大约84℃馏出。
可以使用质谱法，依据样品的来源和类型，在使用或不使用衍生作用的情况下鉴定个体产物。对于需要衍生的样品，将材料提取到适当的溶剂中，然后用BSTFA(N,O-二(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺)和TMS(三甲基甲硅烷基)处理。仪器典型地以80℃的注入温度然后每分钟升高7℃直到达到300℃的完全温度而运行。然后，将该柱在该温度保持5分钟。使用基本的库搜索(basic library search)来鉴定峰。
实施例：
实施例1：在不存在外源添加的氮的条件下，生物体依赖二氧化碳作为唯一的碳源 的生长
当在存在升高的磷酸根水平的条件下，生物体典型地具有72小时的生长周期，并且在20℃达到0.07g/l/h细胞干重。
实施例2：通过简单的两步蒸馏法产生生物燃料
生物燃料可以以简单的两步蒸馏法回收。
1.将用过的细菌培养基在简单的蒸馏罐中蒸馏，不使用分馏柱，但是使用侧臂冷凝器。在前10％馏出物中收集生物燃料馏分。这为“蒸馏A”。
2.将汇集的来自蒸馏A的馏分在使用10升反应烧瓶和填装的分馏柱的蒸馏单元中再次蒸馏。在蒸馏之前，将汇集的来自蒸馏A的馏分用适当的无机酸酸化。在蒸馏B中，然后在75℃至85℃之间移除包含乙醇和其他挥发性馏分的前5％(馏分1)。该馏分是生物燃料。然后，如果需要，可以将该产物进一步处理或分离，或者作为单独的燃料使用。
可以向生物燃料中加入添加剂。依据燃料类型，可能需要添加剂，诸如抗氧化剂，加氧物，热稳定性改进剂，稳定剂，冷流改进剂，燃烧改进剂，消泡添加剂，防雾添加剂，腐蚀抑制剂，润滑改进剂，抗结冰抑制剂，进样器清洁添加剂，烟雾抑制剂，降低阻力的添加剂，金属钝化剂，分散剂，去污剂，去乳化剂，染料，标记物，静电消散剂，杀生物剂，鲸蜡烷改进剂。
“单独的”燃料，意指在70-85℃收集的粗馏分(馏分1)，可以无需进一步分离成个体成分而进行使用。在将水含量减少至可接受的水平后，该燃料可以按原样用在发电机、加热器、燃烧器、组合式热动力发动机、内燃机(如汽油发动机)中。
馏分1可以用在单纯的燃烧器中，诸如目前用来燃烧生物乙醇进行照明、加热和烹煮的那些燃烧器。燃料能够在存在多至30％的水的条件下点燃，并且因此可以作为乳液或凝胶使用。燃料可以与胶凝剂(诸如，但不限于，乙酸钙)混合，以在万一溢出时提高产物的安全性。燃料可以与上述添加剂组合使用，以用于多种更复杂的发动机，诸如组合式热动力发电机，发电机，和其他内燃机，如汽油发动机。
馏分1可以通过分馏或在减压下蒸馏进一步分离，以产生其醇馏分。所述醇馏分包括戊醇和4-甲基戊醇。该馏分可以与适合用作燃料的添加剂组合用作燃料或与汽油组合用作共混燃料。
馏分1可以通过分馏或在减压下蒸馏进一步分离，以产生其酯馏分。该馏分由乙酸丁酯组成。乙酸丁酯可以作为辛烷值提升剂与常规燃料(如汽油)、可再生的燃料(如脂肪酸甲酯)和氢化的类异戊二烯一起以及与馏分1的个体成分组合使用。
馏分1可以通过分馏或在减压下蒸馏进一步分离，以产生其异戊二烯或单萜馏分。该馏分可以进一步氢化，以产生适用于液体导弹、喷气式飞机、汽油和柴油发动机的燃料类型。氢化可以在存在适当的催化剂(如铂，钯或雷尼镍(Raney nickel))的条件下用氢气实现。以不同的方式使用升高的温度和压力，以进行氢化反应。备选地，可以在存在5-乙基-甲基光黄素(methylumflavin)高氯酸盐作为催化剂的条件下，用肼还原单萜馏分。可以使用备选的催化剂，诸如氢化铝锂，来实现还原。单萜组成组分可以在分离后或作为粗馏分被还原。上述添加剂可以以适用于特定燃料类型的多种组合使用。例如，尽管汽油燃料需要辛烷值提升剂，但是柴油型燃料需要鲸蜡烷提升剂。
通过上述方法生产的示例性的生物燃料的特性如下所述：
Figure BDA0001072360060000121
Figure BDA0001072360060000131

Claims (21)

1.一种用于生产生物燃料的方法，所述方法包括：
在含有大于10 g/升的水平的磷酸根的生长培养基中培养保藏号为NCIMB 41808的罗旺醋杆菌(Acetobacter lovaniensis)细菌，
其中所述细菌的培养产生包含挥发性的醇、酯和单萜的生物燃料，
从所述生长培养基分离所述生物燃料。
2.权利要求1的方法，其中所述生长培养基含有大于13 g/升的磷酸根。
3.权利要求1的方法，其中所述生长培养基含有10至30 g/升之间的磷酸根。
4.权利要求1的方法，其中所述生长培养基含有10至20 g/升之间的磷酸根。
5.权利要求1的方法，其中所述生长培养基不包含外源性氮源。
6.权利要求1的方法，其中所述生长培养基不包含外源性碳源。
7.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述生长培养基含有甘油。
8.权利要求1的方法，其中所述生长培养基具有4至7之间的pH。
9.权利要求1的方法，其中所述细菌在15°C至30°C之间的温度培养。
10.权利要求1的方法，其中培养所述细菌直到所述生长培养基达到0.75至1.00之间的OD600。
11.权利要求1的方法，其中所述方法还包括将分离的生物燃料酸化的步骤。
12.权利要求1的方法，其中所述方法还包括分离所述分离的生物燃料的步骤。
13.权利要求1的方法，其中所述方法还包括干燥所述生物燃料的步骤。
14.权利要求1的方法，其中所述方法还包括从所述生物燃料提取一种或多种个体成分的步骤。
15.权利要求14的方法，其中所述方法还包括化学改性或处理所述生物燃料或所述一种或多种个体成分的步骤。
16.权利要求15的方法，其中所述方法还包括向所述生物燃料中、向所述一种或多种个体成分中或向所述化学改性的或处理的生物燃料或一种或多种个体成分中加入一种或多种添加剂的步骤。
17.权利要求1的方法，其中所述方法还包括从所述生物燃料提取挥发性的醇、酯或单萜的步骤。
18.权利要求1的方法，其中所述方法用于生产生物燃料，所述方法包括：
在包含10至100 g/升之间的水平的磷酸根的生长培养基中培养保藏号为NCIMB 41808的罗旺醋杆菌菌株FJ1，其中所述细菌的培养产生所述生物燃料；
从所述生长培养基中分离所述生物燃料。
19.权利要求1的方法，其中所述方法包括下述步骤中的一个或多个：
1) 分离生物燃料的特定成分；
2) 过滤所述生物燃料；
3) 将所述生物燃料与不同的燃料共混；
4) 化学改性所述生物燃料；
5) 馏掉所述生物燃料的某些馏分；和
6) 干燥所述生物燃料。
20.权利要求19所述的方法，其中所述不同的燃料是生物乙醇或汽油。
21.一种用于生产生物燃料的方法，所述方法包括：
提供包含在含有大于10 g/升的水平的磷酸根的生长培养基中培养的保藏号为NCIMB41808的罗旺醋杆菌细菌的无细胞提取物的水性培养基，其中在所述水性培养基中产生生物燃料，并且所述生物燃料包含挥发性的醇、酯和单萜；和
从所述水性培养基中分离所述生物燃料。
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