CN106132430A - 稳定肽制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

公开了一种用于肠胃外注射的稳定制剂及其使用方法和制备方法，其包含已经预先从含水组合物中干燥的肽或其盐，所述含水组合物包含部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、或强碱、或其任意组合，其中经干燥的肽或其盐具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式；和非质子极性溶剂，其中经干燥的肽或其盐在非质子极性溶剂中重构，并在非质子极性溶剂具有第二电离模式，其中第一电离模式和第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。

Description

稳定肽制剂及其制备方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年2月6日提交的美国临时申请61/936,675号的权益，其内容通过引用并入本申请中。

发明背景

I.技术领域

本发明涉及药物制剂，更具体地涉及具有改善稳定性的肽的药物制剂，以及使用这类药物制剂治疗各种疾病、病症和病况的方法。

II.背景技术

糖尿病在现代社会中是严重的健康问题。胰岛素对于I型和II型糖尿病都是关键的治疗剂。过去二十年的研究已经证实通过使用胰岛素对葡萄糖的严格代谢控制不仅降低了发病率，而且延迟患有1型和2型糖尿病的人的并发症的发展。不幸地，实现严格葡萄糖控制所需要的密集的胰岛素治疗还与发展的低血糖症或“低血糖”显著增加的风险有关。

低血糖症的症状在患者之间有很大不同，但是一般包括震颤、心悸、易激惹、焦虑、神经质、饥饿、心动过速、头痛和苍白。一旦血糖恢复到正常水平，症状一般就会消退。如果低血糖症没有逆转，血糖的进一步降低会导致中枢神经系统中葡萄糖的枯竭以及与此相关的神经低糖症状，例如难以集中精神、口齿不清、视力模糊、体温降低、行为改变以及如果不经治疗导致的失去知觉、癫痫和可能的死亡。

通常，低血糖症可以如以下定义为较轻的至中等的低血糖症或严重的低血糖症：

较轻的至中等的低血糖症：无论症状的严重程度患者可以自我治疗的发作，或者其中血糖水平低于70mg/dL(3.9毫摩尔/升)任何无症状的血糖测量。

严重的低血糖症：操作上定义为患者不能自我治疗而需要外部治疗的低血糖症的发作。一般地，神经低糖症状和认知损伤在血糖水平大约为50mg/dL(2.8毫摩尔/升)时开始。

较轻至中等的低血糖症的大部分发作可以通过摄取快速作用的糖类例如葡萄糖片或食物(果汁、软饮料或甜的零食)相对容易地自我治疗。按照定义，严重的低血糖症不能自我治疗，从而需要外部介入。如果患者可以吞咽并且是合作的，那么适合使用凝胶剂或例如蜂蜜或果冻的产品放置到面颊内部。如果患者不能吞咽，那么使用皮下或肌内注射的胰高血糖素来治疗严重的低血糖症。

胰高血糖素是天然存在的肽激素，其在长度上为29个氨基酸并由胰腺的α细胞分泌。胰高血糖素的主要功能是通过糖原分解和糖原异生两者维持葡萄糖产生，主要由肝介导。胰高血糖素是主要的胰岛素反调节激素，并用作糖尿病患者的严重低血糖症的一线治疗剂。

已经进行了许多尝试以开创用于治疗紧急情况下的严重低血糖症的胰高血糖素救护药物。当前，在美国目前可用的有两种胰高血糖素试剂盒，由Eli Lilly(GlucagonEmergency Kit)和Novo Nordisk(HypoKit)制造。两种产品都将冷冻干燥的胰高血糖素的小瓶与预装满含水稀释液的注射器结合。冷冻干燥的胰高血糖素必须采用在紧急情况下难以使用的复杂步骤来重构。因为胰高血糖素难溶于水，这些产品还提供大体积注射。最近，已经进行尝试以改善胰高血糖素在水溶液中的稳定性，以开创更稳定的胰高血糖素类似物和/或改善经粉末注射的胰高血糖素的递送。

尽管已经取得了一些进展，但是仍然需要用于治疗紧急情况下的严重低血糖症的更加用户友好的胰高血糖素救护药物。这种胰高血糖素救护药物会需要由糖尿病患者和/或其护理人员持续携带，从而会需要在非冷冻温度(25-30℃)下是长时间(>2年)稳定的。理想地，其还会需要对于普通人群易于施用，并且在施用于低血糖症患者之前不需要过多的处理/重构。胰高血糖素救护药物还会需要在一定温度范围内多种温度下，包括从0℃至30℃的温度下起作用。

发明内容

为了解决这种需求和其他的需求，本发明提供一种稳定的胰高血糖素救护制剂以及使用该稳定的胰高血糖素制剂来治疗较轻的、中等的或严重的低血糖症的方法。有利地，在本发明的制剂中胰高血糖素是稳定化的，使得能够长期存储和/或在延长的时间递送。同样地，本发明的胰高血糖素制剂在非冷冻温度(例如，如25℃至30℃的室温)下长时间稳定，易于施用而不需要重构，并在多种温度下，包括从0℃至30℃、或0℃至-30℃、优选0℃至30℃的温度下起作用。

尤其，本发明的配制技术是平台配制技术，其本身可以普遍地适用于如胰高血糖素一样在含水环境中具有差的或有限的稳定性和溶解度的许多治疗肽的递送。特别地，利用非质子极性溶剂，例如DMSO、NMP、乙酸乙酯或其混合物将肽配制成高浓度的非水溶液对于这类重要的肽疗法是有价值的递送平台。此外，本发明的配制技术可以普遍适用于在同一溶液中两种或更多种肽的递送，从而能够制备组合药物递送制剂。

在本发明的一个方面，公开了用于肠胃外注射的稳定制剂。或者，可以使用经皮给药，例如通过局部施用至皮肤。制剂可以包含：(a)已经预先从含水组合物中干燥的肽或其盐，所述含水组合物包含部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、或强碱、或其任意组合，其中经干燥的肽或其盐具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式；和非质子极性溶剂，其中经干燥的肽或其盐被重构到非质子极性溶剂中并在非质子极性溶剂中具有第二电离模式，其中第一电离模式和第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。用于测量干燥肽的电离状态的一个非限制性方法包括将经干燥的肽重构到未缓冲的水中并利用pH指示物，例如pH试纸或校准的pH电极测量重构的肽的pH。用于测量已经在非质子极性溶剂中重构的肽的电离状态的一个非限制性方法包括向非质子极性溶剂中加入至少20％的水并利用pH指示物测量pH。当在前述的干燥步骤之前、肽在含水组合物中时，肽或其盐可以具有第三电离模式。第三电离模式可以与第一电离模式或第二电离模式相差至少1个pH单位(例如，含水组合物可以配制为使得含水组合物的pH补偿在干燥所述含水组合物期间反荷离子或缓冲剂成分或两者的损失)。或者，第三电离模式可以与第一电离模式或第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。用于测量在所述干燥步骤前在含水组合物中的肽的电离状态的一个非限制性方法是用pH指示物测量水溶液的pH。在一些具体的方面，含水组合物配制为使得在干燥所述含水组合物期间第三电离模式转变为第一电离模式。经干燥的肽可以部分溶解或完全溶解于非质子极性溶剂中。完全溶解可以通过将经干燥的肽添加到非质子极性溶剂中直到所述肽的溶解极限来获得。对于部分溶解，可以形成悬浮液和糊状物使得一定比例的肽溶解于非质子极性溶剂中，一定比例的肽悬浮或分散在所述非质子极性溶剂中。含水组合物可以包含部分挥发性缓冲剂，其非限制性实例包括乙酸钠或磷酸铵或其任意组合。含水组合物可以包含挥发性缓冲剂，其非限制性实例包括乙酸铵、甲酸铵、碳酸铵、碳酸氢铵、吡啶乙酸盐、吡啶甲酸盐、或乙酸三乙基铵、或其任意组合。含水组合物可以包含强酸，其非限制性实例包括盐酸。含水组合物可以包含强碱，其非限制性实例包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、或氢氧化钙、或其任意组合。在一些方面，含水组合物不包含任何缓冲剂或不包含非挥发性缓冲剂。或者，含水组合物可以包含不同缓冲剂的混合物。在一个非限制性方面，混合物可以包括非挥发性缓冲剂的混合物，部分挥发性缓冲剂的混合物，挥发性缓冲剂的混合物，非挥发性缓冲剂和部分挥发性缓冲剂的混合物，非挥发性缓冲剂和挥发性缓冲剂的混合物，部分挥发性缓冲剂和挥发性缓冲剂的混合物，或非挥发性缓冲剂、部分挥发性缓冲剂和挥发性缓冲剂的混合物。干燥步骤可以通过冻干、喷雾干燥、脱水、薄膜冷冻、喷雾冷冻干燥或其任意组合来实施。制剂的水分含量或水含量可以是小于15％、10％、5％、1％或更少。非质子极性溶剂的非限制性实例包括二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺(DMF)、碳酸丙二醇酯、或其混合物。制剂还可以包含使制剂的凝固点降低的共溶剂(例如，乙醇、丙二醇、甘油及其混合物)。制剂还可以包含稳定化赋形剂(例如，糖、淀粉或其混合物)。在优选的方面，制剂中的肽是胰高血糖素或其盐。在肽为胰高血糖素或其盐的情况下，第一电离模式或第二电离模式可以对应于在溶解于具有约2至3的pH范围的水溶液中时的胰高血糖素的电离模式。第三电离模式可以对应于在溶解于具有约2至3的pH范围的水溶液中时的胰高血糖素的电离模式，第三电离模式可以对应于在溶解于具有大于3、或大于3至14、或大于3至10、或大于3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14、或其中任意范围的pH范围的水溶液中时的胰高血糖素的电离模式。或者，第三电离模式可以对应于在溶解于具有小于2、或小于2至0、或小于2至1、或1、或0、或其中任意范围的pH范围的水溶液中时的胰高血糖素的电离模式。此外，在将所述经干燥的肽或其盐重构到极性非质子溶剂中之前，可以通过将经干燥的肽或其盐重构到含有有机溶剂和有机相缓冲剂的有机溶剂体系中来保持第一电离模式。通过将有机溶剂体系与极性非质子溶剂混合，可以将经干燥的肽或其盐重构到极性非质子溶剂中。有机溶剂体系可以通过本领域已知的分离方法与极性非质子溶剂分离。有机溶剂体系可以是基本无水的(例如，小于1重量％、小于0.5重量％或小于0.1重量％)或无水的。稳定制剂可以被包含于注射器、笔式注射装置、自动注射器装置或泵装置中。可以使用不同于胰高血糖素的其他肽，其非限制性实例包括普兰林肽、胰岛素、亮丙瑞林、LHRH激动剂、甲状旁腺素(PTH)、糊精、肉毒杆菌毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素、芋螺毒素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、GLP-1激动剂、艾塞那肽、其类似物、及其混合物。此外，制剂可以包含至少2种、3种、4种或更多种不同的肽，每种肽具有对应于其最佳稳定性和最佳溶解性的电离模式。在一些实施方案中，可以将稳定制剂与至少第二肽、第三肽、第四肽和/或第五肽或其盐共同配制。第二肽、第三肽、第四肽或第五肽或其盐可以彼此不同并且与第一肽不同。第二肽、第三肽、第四肽或第五肽或其盐可以从第二、第三、第四或第五水溶液或含水组合物中干燥，其中第二经干燥的肽、第三经干燥的肽、第四经干燥的肽或第五经干燥的肽分别具有约等于在所述第二肽、第三肽、第四肽或第五肽溶解于第二、第三、第四或第五水溶液或含水组合物中时的第二肽、第三肽、第四肽或第五肽的电离模式的电离模式。所述第二、第三、第四或第五水溶液或含水组合物的pH可以约等于第二肽、第三肽、第四肽或第五肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。第二肽、第三肽、第四肽或第五肽可以部分溶解或完全溶解于非质子极性溶剂中。

在又一个方面，本发明的制剂可以由以下步骤制备：(a)将包含肽或其盐和部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、或强碱、或其任意组合的含水组合物干燥为干燥肽粉末，其中干燥肽粉末具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式；和(b)在非质子极性溶剂中重构干燥肽粉末，其中重构的干燥肽粉末在非质子极性溶剂中具有第二电离模式，其中第一电离模式和第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。肽或其盐在干燥前，在含水组合物中可以具有第三电离模式，其中第三电离模式与第一电离模式或第二电离模式相差至少1个pH单位。含水组合物配制为使得在所述含水组合物干燥时第三电离模式转变为第一电离模式。肽或其盐在干燥前在含水组合物中可以具有第三电离模式，其中第三电离模式与第一电离模式或第二电离模式大致相同，例如彼此相差至少1个pH单位以内。含水组合物配制为使得含水组合物的pH补偿在所述含水组合物干燥时反荷离子或缓冲剂成分或两者的损失。肽或其盐可以是胰高血糖素，在干燥前含水组合物可以具有约2至3的pH范围，其中第一电离模式或第二电离模式或两者对应于在溶解于所述含水组合物时的胰高血糖素的电离模式。第三电离模式可以对应于在溶解于含水组合物时的胰高血糖素的电离模式。含水组合物在干燥前可以具有大于3至7的pH范围，其中第一电离模式或第二电离模式或两者对应于在溶解于具有约2至3的pH范围的水溶液时的胰高血糖素的电离模式。在一些情况下，在步骤(b)前，可以在包含有机溶剂和有机相缓冲剂的有机溶剂体系中重构干燥肽粉末，其中有机相缓冲剂的pH设置为使得肽粉末保持其第一电离模式或使得肽粉末的电离模式被重新调节至其第一电离模式。可以将有机溶剂体系与非质子极性溶剂组合或混合，以获得两相体系，其中第一相包含极性非质子溶剂和至少一部分悬浮的或部分悬浮的干燥肽粉末，第二相包含具有有机溶剂和有机缓冲剂的有机溶剂体系。有机溶剂体系可以是基本无水的或无水的。有机溶剂的非限制性实例包括己烷、庚烷、十二烷、十六烷、乙醚、异丙醚、丁基醚、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、吡啶、丙酮、2-戊酮、2-庚酮(2-heptanine)或其任意组合。有机相缓冲剂的非限制性实例包括三苯基乙酸、三异辛基胺或其任意组合。

还公开了用于肠胃外注射或经皮给药的稳定制剂，其包含：(a)具有第一电离模式的肽或其盐，第一电离模式对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性，其中已经用包含有机溶剂和有机相缓冲剂的有机溶剂体系设置所述第一电离模式；和(b)包含肽或其盐的非质子极性溶剂，其中肽或其盐在非质子极性溶剂中具有第二电离模式，其中第一电离模式和第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。来自(a)的肽或其盐可以预先从包含部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、强碱、或非挥发性缓冲剂、或其任意组合的含水组合物中干燥。稳定制剂可以包含至少两相，包含含有肽或其盐的非质子极性溶剂的第一相，和包含有机溶剂体系的第二相。有机溶剂体系可以是基本无水的或无水的。有机溶剂的非限制性实例包括己烷、庚烷、十二烷、十六烷、乙醚、异丙醚、丁基醚、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、吡啶、丙酮、2-戊酮、2-庚酮、或其任意组合。有机相缓冲剂的非限制性实例包括三苯基乙酸、三异辛基胺或其任意组合。稳定制剂可以被包含于注射器、笔式注射装置、自动注射器装置或泵装置中。此外，制剂可以包含第二肽或其盐(或第三肽或第四肽或第五肽或更多肽)。另外的肽可以与第一肽不同。第二肽(以及第三肽、第四肽、第五肽或更多肽)可以具有对应于第二肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第三电离模式，其中已经用包含第二有机溶剂和第二有机相缓冲剂的第二有机溶剂体系设置所述第三电离模式。

在另一个方面，公开了试剂盒，其包含：(a)包含有机溶剂体系的第一组合物，所述第一组合物包含有机溶剂、有机相缓冲剂和具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式的肽或其盐；和(b)包含非质子极性溶剂的第二组合物，所述非质子极性溶剂能够部分溶解或完全溶解肽或其盐并保持第一电离模式。第一组合物和第二组合物可以分别容纳在第一容器和第二容器中。肽或其盐可以预先从包含部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、强碱、或非挥发性缓冲剂、或其任意组合的含水组合物中干燥。第一电离模式可以由从所述水溶液中干燥所述肽或其盐获得。第一电离模式可以由第一组合物获得。肽或其盐可以悬浮或部分悬浮于有机溶剂体系中。第一组合物可以是基本无水的或无水的。

在另一个方面，公开了用于肠胃外注射的稳定制剂，该制剂包含：(a)肽或其盐，其中肽已经从水溶液中干燥为粉末，水溶液中的pH已经调节为干燥(例如，通过冻干)后产生含肽粉末，其中粉末中肽的电离状态约等于水溶液中肽的电离状态，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH；和(b)非质子极性溶剂，其中肽一旦在非质子极性溶剂中重构，就保持约等于粉末中肽的电离状态的电离状态。

在又一个方面，本发明提供一种用于肠胃外注射的稳定制剂，所述制剂包含：(a)第一肽或其盐，其中已经将第一肽从水溶液中干燥，其中第一经干燥的肽具有约等于在溶解于水溶液中时的肽的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于第一肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH；(b)第二肽或其盐，其中已经将第二肽从水溶液中干燥，其中第二经干燥的肽具有约等于在溶解于水溶液中时的肽的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于第二肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH；和(c)非质子极性溶剂。制剂的水分含量或水含量可以是小于15％、10％、5％、1％或更少。在非质子极性溶剂中重构后，第一肽保持约等于第一肽粉末的电离模式的第一电离模式，其中在非质子极性溶剂中重构后，第二经干燥的肽保持约等于第二肽粉末的电离模式的第二电离模式。还可以将第三肽、第四肽、第五肽或更多肽与第一肽和第二肽共同配制。每种肽可以是不同的(例如，第一肽可以与第二肽、第三肽、第四肽、和第五肽不同，第二肽可以与第三肽、第四肽和第五肽不同，等)。此外，与第一肽共同配制的另外的肽可以部分溶解或完全溶解于非质子极性溶剂中。

在又一个方面，本发明提供用于肠胃外注射的稳定制剂，该制剂包含：肽或其盐(例如其盐酸盐或乙酸盐)；和非质子极性溶剂，其中制剂的水分含量小于15％、10％、5％、1％或更少。

本文所描述的稳定制剂可用于在含水环境中具有有限的或差的稳定性或溶解度的任意肽的肠胃外注射。因此，在一些实施方案中，肽(或第一肽和第二肽的每一种)或其盐选自胰高血糖素、普兰林肽、胰岛素、亮丙瑞林、LHRH激动剂、甲状旁腺素(PTH)、糊精、肉毒杆菌毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素、芋螺毒素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、GLP-1激动剂、艾塞那肽、其类似物、及其混合物。在一个优选的实施方案中，肽是胰高血糖素或胰高血糖素类似物或胰高血糖素肽模拟物。在另一个实施方案中，肽是甲状旁腺素。在又一个实施方案中，肽是亮丙瑞林。在再一个实施方案中，肽是格拉默。在又一个实施方案中，第一肽是普兰林肽，第二肽是胰岛素。在再一个实施方案中，第一肽是胰高血糖素，第二肽是艾塞那肽。

在一些方面，可以将肽(或在一些实施方案中，当制剂包含两种或更多种肽时，其中的每一种肽)溶解于水溶液中，干燥为干燥肽粉末，然后在非质子极性溶剂中重构。可以将从其中干燥肽的水溶液的pH调节为使得在干燥后(例如，通过冻干)粉末中的肽具有约等于水溶液中的肽的电离状态的电离状态，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。从其中干燥肽的水溶液可以包含一种或更多种缓冲剂，其中缓冲剂可以是非挥发性缓冲剂、部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂或其混合物。

当水溶液包含非挥发性缓冲剂时，水溶液中的肽的电离状态可以约等于粉末中的肽的电离状态(即，“约等于”指以下情况：从pH X的水溶液中干燥的肽的电离模式对应于水溶液中的肽的电离模式，其中所述水溶液的pH和pH X之间的差在1个pH单位以内(或等于1个pH单位))。合适的非挥发性缓冲剂包括但不限于甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物。在一个优选的实施方案中，非挥发性缓冲剂是甘氨酸缓冲剂。在另一个优选的实施方案中，非挥发性缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲剂的混合物。在其中制剂包含两种或更多种肽的一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂和第二非挥发性缓冲剂相同。在其中制剂包含两种或更多种肽的一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂和第二非挥发性缓冲剂不同。当水溶液包含部分挥发性缓冲剂或挥发性缓冲剂时，水溶液中的肽的电离状态可以不约等于粉末中的肽的电离状态(即，“不等于”指以下情况：从pH X的水溶液中干燥的肽的电离模式对应于水溶液中肽的电离模式，其中所述水溶液的pH和pH X之间的差大于1个pH单位)。在其中制剂包含两种或更多种肽的一些实施方案中，第一缓冲剂和第二缓冲剂相同。在其中制剂包含两种或更多种肽的一些实施方案中，第一缓冲剂和第二缓冲剂不同。当从其中干燥肽的水溶液不包含缓冲剂，并使用强酸和/或强碱(例如，HCL和/或NaOH)调节pH时，粉末中的肽的电离状态可以或可以不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离状态。因此，取决于从其中干燥肽的水溶液的组分，粉末中的肽的电离状态可以或可以不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离状态。

在其他实施方案中，可以在将经干燥的肽在有机溶剂(例如，己烷、庚烷)中重构后通过使用有机相缓冲剂(由足够疏水以至于电离形式可溶于有机相中的化合物制备)调节肽的电离状态。这类化合物的非限制性实例包括三苯基乙酸和三异辛基胺，如Blackwood等人，1994年所描述的(Blackwood等人，(1994)‘Organic phase buffers’controlbiocatalyst activity independent of initial aqueous pH,Biochimica etBiophysica Acta,1206卷，161-165页)，其通过引用并入本文。有机溶剂可以用非质子极性溶剂例如DMSO代替，其中肽可以分配到非质子极性溶剂中，有机相缓冲剂可以分配到更疏水的有机溶剂中。在该实施方案中，粉末中的肽的电离状态可以不约等于水溶液中的肽的电离状态，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。在有机溶剂(例如，己烷、庚烷)中重构后，可以使用有机相缓冲剂将肽的电离状态调节为约等于水溶液中的肽的电离状态，其中所述水溶液的pH约等于通过使用有机相缓冲剂的肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。

在本发明的一些制剂中，将肽与稳定化赋形剂混合，然后干燥为干燥肽粉末。合适的稳定化赋形剂包括但不限于糖、淀粉及其混合物。在一些实施方案中，糖是海藻糖。在一些实施方案中，淀粉是羟乙基淀粉(HES)。在一些实施方案中，稳定化赋形剂以约1％(w/v)到约60％(w/v)、约1％(w/v)到约50％(w/v)、约1％(w/v)到约40％(w/v)、约1％(w/v)到约30％(w/v)、约1％(w/v)到约20％(w/v)、约5％(w/v)到约60％(w/v)、约5％(w/v)到约50％(w/v)、约5％(w/v)到约40％(w/v)、约5％(w/v)到约30％(w/v)、约5％(w/v)到约20％(w/v)、约10％(w/v)到约60％(w/v)、约10％(w/v)到约50％(w/v)、约10％(w/v)到约40％(w/v)、约10％(w/v)到约30％(w/v)、约10％(w/v)到约20％(w/v)的量存在于制剂中。在其中制剂包含两种肽的一些实施方案中，第一水溶液中的第一肽和第二水溶液中的第二肽均还包含稳定化赋形剂，第一水溶液中与第一肽共存的稳定化赋形剂和第二水溶液中与第二肽共存的稳定化赋形剂相同。在其中制剂包含两种肽的其他实施方案中，第一水溶液中的第一肽和第二水溶液中的第二肽均还包含稳定化赋形剂，第一水溶液中与第一肽共存的稳定化赋形剂和第二水溶液中与第二肽共存的稳定化赋形剂不同。

一旦将如上所讨论的可能包含赋形剂的肽干燥为粉末，就在非质子极性溶剂中溶解或重构干燥肽粉末。非质子极性溶剂的实例包括但不限于以下溶剂：二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)、碳酸丙二醇酯、及其混合物。二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯、以及DMSO、NMP和乙酸乙酯中的一种或更多种的混合物是特别优选的非质子极性溶剂。在一个优选的实施方案中，非质子极性溶剂是DMSO。在另一个优选的实施方案中，非质子极性溶剂是DMSO和NMP的混合物。在又一优选的实施方案中，非质子极性溶剂是DMSO和乙酸乙酯的混合物。

在一些实施方案中，肽在非质子极性溶剂(例如二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)、碳酸丙二醇酯、或其混合物)和降低制剂的凝固点的共溶剂的混合物中重构。在一些实施方案中，共溶剂使制剂的凝固点降低至少约5℃、至少约10℃、至少约15℃、或至少约20℃。在一些实施方案中，共溶剂使制剂的凝固点降低到约3℃、到约2℃、到约1℃、或到约0℃或更低。在一些实施方案中，共溶剂是极性质子溶剂。在优选的实施方案中，共溶剂选自乙醇、丙二醇(PG)、甘油及其混合物。在一些实施方案中，共溶剂以约10％(w/v)到约50％(w/v)、约10％(w/v)到约40％(w/v)、约10％(w/v)到约30％(w/v)、约10％(w/v)到约25％(w/v)、约15％(w/v)到约50％(w/v)、约15％(w/v)到约40％(w/v)、约15％(w/v)到约30％(w/v)、约15％(w/v)到约25％(w/v)的量存在于制剂中。

可以选择从其中干燥肽的水溶液的pH以获得粉末，其中粉末中的肽具有约等于水溶液中的肽的电离模式的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。当在非质子极性溶剂(例如，DMSO)中重构该肽粉末时，肽的电离模式约等于粉末中的肽的电离状态。同样地，在优选的实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于其中pH为约2.0至约3.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。在其他实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约3.0至约5.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。在其他实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约4.0至约5.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。在其他实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约4.0至约6.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。在其他实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约6.0至约8.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。在其中制剂包含两种肽的一些实施方案中，制剂中的第一肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约4.0至约6.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解，第二肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约1.5至约2.5或约6.0至约8.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。在其中制剂包含两种肽的一些实施方案中，制剂中的第一肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约3.0至约5.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解，第二肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约1.5至约2.5或约6.0至约8.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。在其中制剂包含两种肽的其他实施方案中，第一肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约2.0至约3.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解，第二肽的电离状态应约等于其中所述水溶液的pH为约4.0至约5.0的水溶液中的肽的电离状态，以确保最佳的稳定性、最大的溶解性和最小的降解。如何确定用于获得具有最佳稳定性、最大溶解度和最小降解的肽的最佳pH对本领域技术人员会是明显的。

可以在本发明的稳定制剂中配制任意合适剂量的肽。通常地，肽(或在包含两种或更多种肽的实施方案中，每种肽)以约0.5mg/mL到约100mg/mL的量存在于制剂中。在一些实施方案中，肽以约10mg/mL到约60mg/mL的量存在于制剂中。在其他实施方案中，肽以约20mg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在其他实施方案中，肽以约5mg/mL到约15mg/mL的量存在于制剂中。在其他实施方案中，肽以约0.5mg/mL到约2mg/mL的量存在于制剂中。在其他实施方案中，肽以约1mg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。再一次地，肽的剂量可以根据所用的肽以及待治疗的疾病、病症或病况而改变对技术人员会是明显的。

在一些实施方案中，本发明的制剂还包含抗氧化剂。在其他实施方案中，制剂还包含螯合剂。在其他实施方案中，本发明的制剂还包含防腐剂。

在另一个方面，本发明提供一种用于治疗可以通过向对象施用对治疗、缓解或预防疾病、病症或病况有效量的如本文所描述的稳定肽制剂来治疗、缓解或预防的疾病、病症或病况的方法。在一些实施方案中，疾病、病症或病况是低血糖症。在其中疾病、病症或病况是低血糖症的一些实施方案中，该方法包括施用对治疗低血糖症有效量的本发明的稳定胰高血糖素制剂。在一些实施方案中，疾病、病症或病况是糖尿病。在其中疾病、病症或病况是糖尿病的一些实施方案中，该方法包括施用对治疗糖尿病有效量的本发明的稳定的胰岛素和普兰林肽制剂。在其他方面，疾病、病症或病况是先天性高胰岛素症、胰岛瘤或其中过量胰岛素水平会引发低血糖症的任何其他病况。

在又一个方面，本发明提供制备用于肠胃外注射的稳定制剂的方法，该方法包括：将肽从水溶液中干燥为干燥肽粉末，其中粉末中的肽具有约等于水溶液中的肽的电离模式的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH；和用非质子极性溶剂重构干燥肽粉末，从而制备稳定制剂，其中稳定制剂的水分含量小于5％。在一些实施方案中，干燥肽粉末具有约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式，当在非质子极性溶剂中重构干燥肽粉末时，经干燥的肽保持约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式。在其他实施方案中，干燥肽粉末具有不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式，当在非质子极性溶剂中重构干燥肽粉末时，干燥肽粉末保持电离模式。

在又一个方面，本发明提供用于治疗疾病、病症或病况的试剂盒，该试剂盒包括：包含一种或更多种肽或其盐的稳定制剂，其中肽已经被干燥为粉末，其中粉末中的肽具有约等于水溶液中的肽的电离模式的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH；和非质子极性溶剂；其中制剂的水分含量小于5％，其中经干燥的肽保持约等于水溶液中的肽的电离模式电离模式，其中当在非质子极性溶剂中重构经干燥的肽时，所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH；和用于将稳定制剂施用至对象的注射器。

在一些实施方案中，试剂盒用于治疗低血糖症，稳定制剂包含如本文所描述的胰高血糖素制剂。在一些实施方案中，试剂盒用于治疗糖尿病，稳定制剂包含如本文所描述的胰岛素和普兰林肽制剂。在一些实施方案中，注射器是笔式注射装置、自动注射器装置或泵的一部分。在一些实施方案中，注射器预装满稳定制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括说明书，其中说明书指导稳定制剂的施用以治疗有此需要的患者。

在施用组合物前，患者可以具有轻微的低血糖症或中等的低血糖症。在一些情况下，患者可以具有严重的低血糖症(例如，不能自我治疗或用药以至于需要外部治疗(例如，医疗服务提供者，如医生、或护士、或机械设备如泵(例如双激素泵)))，或被诊断为具有低于70mg/dL、60mg/dL、50mg/dL、40mg/dL、30mg/dL、20mg/dL、10mg/dL、5mg/dL或0mg/dL的血糖水平，或被诊断为具有0至10mg/dL、10mg/dL至20mg/dL、20mg/dL至30mg/dL、30mg/dL至40mg/dL、40mg/dL至50mg/dL、50mg/dL至60mg/dL或60mg/dL至70mg/dL的血糖水平，或被诊断为具有5mg/dL至70mg/dL、5mg/dL至60mg/dL、5mg/dL至50mg/dL、5mg/dL至40mg/dL、5mg/dL至30mg/dL、5mg/dL至20mg/dL或5mg/dL至10mg/dL的血糖水平，或被诊断为具有10mg/dL至70mg/dL、10mg/dL至60mg/dL、10mg/dL至50mg/dL、10mg/dL至40mg/dL、10mg/dL至30mg/dL的血糖水平，或被诊断为具有20mg/dL至70mg/dL、20mg/dL至60mg/dL、20mg/dL至50mg/dL、20mg/dL至40mg/dL的血糖水平，或被诊断为具有30mg/dL至70mg/dL、30mg/dL至60mg/dL或30mg/dL至50mg/dL的血糖水平。或者，在一些情况下，患者可以具有处于、大约为、或大于50mg/dL、60mg/dL、70mg/dL、80mg/dL、90mg/dL、100mg/dL、110mg/dL、120mg/dL、130mg/dL、140mg/dL、150mg/dL、160mg/dL、170mg/dL、180mg/dL、190mg/dL或200mg/dL(或其中的任意范围或整数)的血糖水平，以及具有即将出现的低血糖症的迹象，或血糖水平将在一定时间内(例如，在30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟内)降至低于70mg/dL、60mg/dL或50mg/dL的迹象。该迹象可以通过确认血糖水平的下降趋势(例如，通过血糖监测装置)以及该下降趋势的速率或轨迹来确定。在任一情况下(例如，患者被诊断具有低血糖症或处于发展低血糖症的危险中)，向患者施用组合物可以导致患者在施用组合物后1分钟至20分钟、1分钟至15分钟、1分钟至10分钟、1分钟至5分钟内、或在1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟、13分钟、14分钟、15分钟、16分钟、17分钟、18分钟、19分钟、或20分钟内维持或增加血糖水平至大于50mg/dL至180mg/dL。在具体的方面，在施用组合物前患者可以被诊断为具有10mg/dL至小于40mg/dL的血糖水平。在另一种情况下，患者的血糖水平可以以上文所讨论的方式基于葡萄糖监测装置和下降趋势被确定为50mg/dL至70mg/dL。在具体的方面，在施用组合物后1分钟至10分钟或1分钟至5分钟内，患者的血糖水平可以大于50mg/dL至180mg/dL。

除了肠胃外施用，本发明的制剂可以经皮递送，例如通过局部施用至皮肤。“局部施用”指将组合物施用或涂敷到角质组织的表面上。“角质组织”包括作为哺乳动物最外保护层的含有角质的层，“角质组织”包括但不限于嘴唇、皮肤和头发。举例来说，局部施用可以包括但不限于直接地将组合物涂敷到皮肤上或将组合物加载到基体上(例如，绷带或皮肤贴剂)并将基体施用至皮肤。

肽的“最佳稳定性和最佳溶解性”指其中肽的溶解性高的pH环境(处于或接近溶解性相对于pH的最大值，或适合于产品的要求)，并且相对于其他pH环境其降解是最小化的。尤其是，肽可以具有最佳稳定性和最佳溶解性的多于一个pH。本领域的普通技术人员可以通过参照文献或通过实施试验容易地确定给定肽的最佳稳定性和最佳溶解性。

“电荷模式”、“电荷状态”、“电离状态”和“电离模式”可以相互交换地使用，并且指肽的可离子化基团的电离状态(即，由于质子化和/或去质子化)。

“治疗剂”包括肽化合物连同其药学上可接受的盐。有用的盐是本领域技术人员已知的，包括与无机酸、有机酸、无机碱或有机碱的盐。本发明中有用的治疗剂是无论单独或与其他药物赋形剂或惰性成分组合，对人类或动物施用后产生希望的、有益的且通常药理学的效果的那些肽化合物。

“肽”、“多肽”和“肽化合物”指的是通过酰胺(CONH)键结合在一起的最多约100个或更优选最多约80个氨基酸残基的聚合物。本文公开的任何肽化合物的类似物、衍生物、激动剂、拮抗剂和药学上可接受的盐包括在这些术语内。该术语还包括具有D-氨基酸，D-或L-构型的改性的、衍生化的或非天然存在的氨基酸，和/或肽模拟物单元作为其结构的一部分的肽和/或肽化合物。

“患者”、“对象”或“个体”指的是哺乳动物(例如，人类、灵长类、狗、猫、牛、羊、猪、马、小鼠、大鼠、仓鼠、兔或豚鼠)。

“抑制”或“减少”或这些术语的任意变体包括为了实现预期结果的任何可测量的减少或完全抑制。

“有效的”或“治疗的”或“预防的”或这些术语的任意变体指足以实现预期的、期望的或意图的结果。

“单一相溶液”指由溶解于溶剂或溶剂体系(例如，两种或更多种溶剂的混合物)中的粉末制备的溶液，其中微粒物质在溶剂中完全地溶解，并再无可见的微粒物质，以至于溶液可以被描述为光学透明的。

“缓冲剂”指阻止添加其他酸和/或碱后溶液pH快速或显著的改变的弱酸或弱碱。当向水中添加缓冲剂时形成缓冲溶液。例如，缓冲溶液可以包含弱酸及其共轭碱，或弱碱及其共轭酸。在普通的化学使用中，pH缓冲剂是物质或物质的混合物，其使得溶液在添加少量的H⁺和OH^-离子后抵抗pH大的变化。普通的缓冲剂混合物包含两种物质，共轭酸(质子供体)和共轭碱(质子受体)。两种物质(共轭酸和共轭碱的共轭酸碱对)共同通过部分地吸收向溶液添加的H⁺和OH^-离子来抵抗溶液pH大的变化。

“非挥发性缓冲剂”指其中缓冲剂组分不是充分挥发性的，不足以使其可以在干燥期间(例如，在冻干期间)从组合物中移除的缓冲剂。磷酸钠是非挥发性缓冲剂的一个非限制性实例。

“部分挥发性缓冲剂”指其中缓冲剂组分中的一种是充分挥发性的，以使其可以在干燥期间(例如，在冻干期间)从组合物中移除的缓冲剂。磷酸铵是部分挥发性缓冲剂的一个非限制性实例。

“挥发性缓冲剂”指组分均是充分地挥发性的，以至于其可以在干燥期间(例如，在冻干期间)从组合物中移除的缓冲剂。甲酸铵是挥发性缓冲剂的一个非限制性实例。

“有机相缓冲剂”指充分疏水的弱酸/弱碱和它们的共轭碱/共轭酸，以至于甚至缓冲剂的离子形式可溶于有机相(例如，己烷、庚烷)中，并且不能够分配到邻近的水相中。

肽的“等电点”(pI)对应于肽的总体净电荷为零的pH值。由于其相对于其一级结构而变化的组成，肽可以具有变化的等电点。在肽中可以有许多带电的基团(例如，已经质子化或去质子化的可离子化基团)，在等电点这些电荷的净和为零，即，负电荷数与正电荷数平衡。在高于等电点的pH，肽的总体净电荷会是负的，在低于等电点的pH，肽的总体净电荷会是正的。在本领域中存在多种已知的方法用于确定肽的等电点，包括实验方法例如等电点聚焦，和其中可以通过计算算法由肽的氨基酸序列估计等电点的理论方法。

当提及药物组合物时，“重构的”指已经通过向包含活性药物成分的固体材料添加适当的非水溶剂而形成的组合物。通常在不能制备具有可接受的贮藏寿命的液体组合物的情况下应用用于重构的药物组合物。重构的药物组合物的实例为当向冷冻干燥的组合物添加生物相容的非质子极性溶剂(例如，DMSO)时产生的溶液。

“一级结构”指包含肽/多肽链的氨基酸残基的线性序列。

当提及肽时，“类似物”指经改性的肽，其中肽的一个或更多个氨基酸残基已经由其他氨基酸残基取代，或其中一个或更多个氨基酸残基已经从肽中删除，或其中一个或更多个氨基酸残基已经添加至肽，或这些改性的任意组合。沿着包含肽的一级结构可以在任意点，或多个点进行氨基酸残基的这种添加、删除或取代，包括在肽的N-末端和/或在肽的C-末端。

与母肽相比，“衍生物”指经化学改性的母肽或其类似物，其中至少一种取代基在母肽或其类似物中是不存在的。一个这样的非限制性实例是已经共价改性的母肽。典型的改性为酰胺、糖类、烷基、酰基、酯、聚乙二醇化改性等。

“非水溶剂”指不是水的溶剂。

“非质子极性溶剂”指不含有酸性氢并且不作为氢键供体的极性溶剂。非质子极性溶剂的实例包括但不限于二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)和碳酸丙二醇酯。术语非质子极性溶剂还包括两种或更多种非质子极性溶剂的混合物，例如二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)和碳酸丙二醇酯中的两种或更多种的混合物。

“肠胃外注射”指小分子药物通过在动物，例如人类的一层或更多层皮肤或黏膜下或者穿过动物，例如人类的一层或更多层皮肤或黏膜的注射的施用。标准的肠胃外注射在动物，例如人类患者的皮下、肌肉内或皮肤内的区域中进行。以这些深的位置为目标是因为相对于浅的真皮位点，组织更容易扩展以容纳递送最多的治疗剂所需的0.1至3.0cc(mL)注射体积。

“生物利用度”指从制剂中吸收治疗剂例如肽化合物所达到的程度。

关于治疗剂，例如肽化合物向对象的递送或施用，“系统的”指治疗剂为在对象的血浆中以生物学显著的水平可检测的。

“控制释放”指在约一小时或更长，优选12小时或更长的时间内以使得血液(例如血浆)浓度保持在治疗范围内，但是低于毒性浓度的速度释放治疗剂。

“药学上可接受的载体”指药学上可接受的溶剂、悬浮剂或用于将本发明的药物化合物递送到哺乳动物例如动物或人类的载剂。

“药学上可接受的”成分、赋形剂或组分是与合理的收益/风险比相称的适合对人类和/或动物使用而没有过度不良副作用(例如毒性、刺激性和过敏反应)的成分、赋形剂或组分。

当提及治疗剂，例如肽或其盐时，“化学稳定性”指通过化学途径，例如氧化或水解所产生的产生可接受百分比部分的降解产物。具体地，如果产品在预期储存温度(例如室温)下储存一年，或者产品在30℃/60％的相对湿度下储存一年，或者产品在40℃/75％的相对湿度下储存一个月并优选三个月之后，形成不超过约20％的分解产物，那么认为制剂是化学稳定的。在一些实施方案中，化学稳定制剂具有产品在预期储存温度下长时间储存后所形成的小于20％、小于15％、小于10％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％的分解产物。

当提及治疗剂，例如肽或其盐时，“物理稳定性”指形成可接受百分比的聚集体(例如二聚体、三聚体和更大形式)。具体地，如果产品在预期储存温度(例如室温)下储存一年，或者产品在30℃/60％的相对湿度下储存一年，或者产品在40℃/75％的相对湿度下储存一个月并优选三个月之后，形成不超过约15％的聚集体，那么认为制剂是物理稳定的。在一些实施方案中，物理稳定制剂具有产品在预期储存温度下长时间储存后所形成的小于20％、小于15％、小于10％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％的聚集体。

“稳定制剂”指在室温下储存两个月后保留至少约65％的化学稳定和物理稳定的治疗剂，例如肽或其盐。特别优选的制剂是在这些储存条件下保留至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的化学稳定和物理稳定的治疗剂的那些。尤其优选的稳定制剂是在灭菌辐照(例如γ射线、β射线或电子束)后不表现出降解的那些。

术语“大约”或“约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于，在一个非限制性实施方案中定义为在10％以内，优选在5％以内，更优选在1％以内，最优选在0.5％以内。另外，“基本上非水”指以水的重量或体积计小于5％、4％、3％、2％、1％或更小。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”一起使用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

词语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。

组合物及其使用方法可以“包含”任意贯穿说明书全文所公开的成分或步骤、“主要由……组成”或“由其组成”。对于过渡形式“主要由……组成”，在一个非限制性方面，本说明书所公开的制剂和方法的基本且新颖的特征包括所述制剂内肽或其盐的稳定性和溶解性。因此，在权利要求使用过渡形式“主要由……组成”的情况下，可以大幅改变制剂中肽或其盐的稳定性或溶解性的成分会被排除在所述制剂之外。

由以下的详细说明和权利要求，本发明的其他目的、特征和优势对本领域技术人员会是明显的。

附图说明

以下附图形成本说明书的一部分，并被包括以进一步证实本发明的特定方面。通过参照这些附图中的一幅或更多幅结合本文所提供的具体实施方案的详细说明可以更好地理解本发明。

图1可以用于制备本发明组合物的各种步骤的示意图。

具体实施方式

不希望受理论约束，认为通过确立肽在干燥期间最佳稳定性和最佳溶解性的电离模式(使得肽的可离子化基团具有固态(即，作为粉末)中的最佳稳定性和最佳溶解性的该电离状态)，然后通过在非质子极性溶剂中重构(这会溶解肽而不改变肽的电离状态)，非质子极性溶剂中的肽的电离模式会是最佳稳定性和最佳溶解性的电离模式，使得能够制备高浓度、热稳定的制剂。因此，当在非质子极性溶剂中重构肽粉末时，作为粉末的肽的电离模式不会改变。

在水溶液中可以存在水溶液中的肽分子的稳定性和溶解性最大化的最佳pH。当溶液的pH等于肽的等电点(pI)时，肽不会具有总体净电荷。在高于等电点的pH，肽的总体净电荷会是负的，在低于等电点的pH，肽的总体净电荷会是正的。具有同符号(即，正-正，负-负)总体净电荷的分子之间较长程的静电排斥可以防止通常引起聚集且会通过原纤维形成和沉淀导致物理降解的短程疏水相互作用。

溶液中肽的稳定性和溶解性可以随肽溶解于其中的水溶液的pH被设置为远离肽的等电点而增加。这样的实例可以由肽胰高血糖素看出，肽胰高血糖素在中性pH(约等于胰高血糖素分子的pI)具有有限的溶解性，但是在酸性溶液和碱性溶液中具有增加的溶解性。

当将包含肽的水溶液干燥为粉末(例如，通过冻干)时，肽上的可离子化基团可以电离。因此，在干燥期间能够赋予粉末中的肽最佳电离状态，以使粉末中的肽的电离模式约等于水溶液中的肽的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。

当在非质子极性溶剂，例如DMSO中重构粉末时，通过粉末中的肽的可离子化基团获得的电离模式会保持。因为非质子极性溶剂没有可交换的质子，所以当在非质子极性溶剂中重构干燥的肽时，重构的制剂会保持肽的最佳电离状态的溶解度和稳定性特性。因此，粉末中的肽的电离状态影响肽在非质子极性溶剂中的溶解性和稳定性。

因此，能够制备肽粉末，其中粉末中的肽的电离模式约等于水溶液中的肽的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。当在非质子极性溶剂中重构该肽粉末时，所得制剂中的肽的电离模式会约等于水溶液中的肽的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。

I.简介

肽可以通过许多不同的机制降解，包括脱酰胺基作用、氧化、水解、二硫键互换和外消旋作用。此外，水作为塑化剂，其促进蛋白质分子的解折叠和不可逆的分子聚集。因此，为了提供在环境温度或生理温度下随时间稳定的肽制剂，通常需要非水的或基本上非水的肽制剂。

将含水肽制剂浓缩成干粉制剂是一种增加药物肽制剂稳定性的方法。例如，肽制剂可以使用各种技术进行干燥，包括喷雾干燥、冻干或冷冻干燥、脱水、喷雾冷冻干燥、或其任意组合。通过这样的技术获得的干粉肽制剂显示出在环境温度或甚至生理温度下显著增加的随时间的稳定性。

本发明部分地基于以下出人意料的发现：稳定肽制剂(例如稳定的胰高血糖素救护制剂)可以通过首先将含肽水溶液中的一种或更多种肽(例如胰高血糖素肽)冷冻干燥为干燥肽粉末而容易地制备。经干燥的肽分子会具有在干燥过程期间被赋予的确定电离模式。该电离状态可以约等于由其中干燥该肽的水溶液中的肽的电离状态(即，“约等于”指以下情况：pH X的水溶液中干燥的肽的电离模式对应于水溶液中的肽的电离模式，其中所述水溶液的pH和pH X之间的差在1个pH单位以内(或等于1个pH单位))。粉末中的肽的电离状态与从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离状态是否不同(即以下情况：从pH为X的水溶液中干燥的肽的电离模式对应于水溶液中肽的电离模式，其中所述水溶液的pH和pH X之间的差大于1个pH单位)可以取决于肽自身、水溶液的组分(例如，赋形剂)和/或用于制备肽粉末的干燥方法。

作为一个非限制性实例，如果从包含非挥发性缓冲剂的水溶液中干燥肽，那么粉末中的肽的电离状态可以约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离状态。然而，如果从包含部分挥发性缓冲剂或挥发性缓冲剂的水溶液中干燥肽，那么粉末中的肽的电离状态可以不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离状态。此外，如果从未缓冲的溶液中干燥肽，其中在干燥前已经使用强酸和/或强碱(例如，HCL、NaOH)调节pH，那么粉末中的肽的电离状态可以与从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离状态不同。

用于测量干燥肽的电离状态或非质子极性溶剂中的肽的电离状态的方法在本领域中是已知的。在一个众所周知和接受的方法中，肽的电离状态可以通过将经干燥的肽重构到非缓冲的水中，并用pH指示物例如pH试纸或校准的pH电极测量重构的肽的pH来获得。或者，对于已经在非质子极性溶剂(例如，DMSO)中重构的肽，通过向非质子极性溶剂(例如，DMSO)添加至少20％的水和用pH指示物测量pH，可以确定肽的电离状态。参见例如Baughman和Kreevoy，“Determination of Acidity in 80％Dimethyl Sulfoxide-20％Water,”Journal of Physical Chemistry,78(4):421-23(1974)。在非质子极性溶剂-水溶液中pH的测量可能需要小的校正(即，根据前述的Baughman和Kreevoy，不大于0.2个pH单位)。或者，可以使用光谱技术来测量给定肽的电离状态。

在一些实施方案中，当在非质子极性溶剂中重构的肽的电离模式在从其中干燥肽的水溶液中的肽的pH的一个pH单位以内时，经干燥的肽具有约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式(因此，例如，如果当在干燥后或在非质子极性溶剂中重构所述粉末后在粉末中测量时，肽的电离模式对应于具有2.0至4.0的pH的水溶液中的肽的电离模式，那么从pH 3.0的水溶液中干燥的肽被称为具有约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式)。在一些实施方案中，当在非质子极性溶剂中重构的肽的电离模式和不在从其中干燥肽的水溶液中的肽的pH的一个pH单位以内时，经干燥的肽具有不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式(或与其显著不同)(因此，例如，如果当在干燥后或在非质子极性溶剂中重构所述粉末后在粉末中测量时，肽的电离模式不对应于具有2.0至4.0的pH的水溶液中的肽的电离模式，那么从pH 3.0的水溶液中干燥的肽具有不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式(或与其显著不同)的电离模式)。

在一些实施方案中，当在非质子极性溶剂中重构的肽的电离模式在从其中干燥肽的水溶液中的肽的pH的半个pH单位以内时，经干燥的肽具有约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式(因此，例如，如果当在干燥后或在非质子极性溶剂中重构所述粉末后在粉末中测量时，肽的电离模式对应于在具有2.5至3.5的pH的水溶液中的肽的电离模式时，那么从pH 3.0的水溶液中干燥的肽具有约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式)。在一些实施方案中，当在非质子极性溶剂中重构的肽的电离模式不在从其中干燥肽的水溶液中的肽的pH的半个pH单位以内时，经干燥的肽具有不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式(或与其显著不同)的电离模式(因此，例如，如果当在干燥后或在非质子极性溶剂中重构所述粉末后在粉末中测量时，肽的电离模式不对应于在具有2.5至3.5的pH的水溶液中的肽的电离模式时，那么从pH 3.0的水溶液中干燥的肽具有不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式(或与其显著不同)的电离模式)。

在一些实施方案中，当在非质子极性溶剂中重构的肽的电离模式不在从其中干燥肽的水溶液中的肽的pH的一个pH单位以内时，经干燥的肽具有不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式。在一个非限制性实例中，将用挥发性缓冲剂缓冲的具有从约4至约5调节的pH的肽胰高血糖素的水溶液干燥成粉末，其中胰高血糖素肽的电离模式约等于水溶液中的胰高血糖素肽的电离模式，其中所述水溶液的pH为约2.0至约3.0，以确保最佳稳定性、最大溶解性和最小降解。当在非质子极性溶剂(例如，DMSO)中重构经干燥的胰高血糖素肽粉末时，非质子极性溶剂中的胰高血糖素肽的电离模式约等于粉末中的胰高血糖素肽的电离模式。

一旦干燥，就将所得肽粉末，例如经冷冻干燥的胰高血糖素溶解于非质子极性溶剂中，从而形成稳定制剂，其中制剂的水分含量或水含量小于15％、10％、5％、1％、0.5％、0.25％、0.15％或小于0.1％。当在非质子极性溶剂中重构时，经干燥的肽保持其确定的电离模式，即在非质子极性溶剂中重构时肽的电离模式约等于经干燥的肽的电离模式。有利地，一经制备，制剂(例如胰高血糖素制剂)就是长时间稳定的，准备好使用而无需重构，并且在多种温度下可以起作用。

尤其，本发明的制剂技术是制剂平台技术，制剂平台技术广泛地适用于许多像胰高血糖素一样在含水环境中具有差的或有限的稳定性和溶解性的其他肽的递送。用非质子极性溶剂(例如，DMSO、NMP、乙酸乙酯或其混合物)将肽配制为高浓度的非水溶液对于重要类型的治疗剂-治疗肽是极其重要的递送平台。本文所描述的稳定制剂有利地促进肽药物的均匀递送，并且提供额外的贮藏稳定性对抗与降解途径相关的聚集、氧化和水解。

在一些优选的实施方案中，本文所描述的稳定制剂在延长的时间段维持肽药物为稳定形式，例如足以提供期望的制剂贮藏寿命，而在使用前无不可接受的治疗剂的物理降解和化学降解水平的时间段。可注射制剂的期望性能是它们是非水的和相对于肽非反应性的。在该实施方案中，可以直接在注射装置本身内存储可注射制剂。

本发明的稳定可注射制剂包含期望递送剂量的治疗肽(例如，药物治疗所需的剂量)，并优选低体积的。例如，在一些实施方案中，包含治疗剂量的肽(例如胰高血糖素)的可注射制剂具有至少约1.0微升(根据装填设备的下限)，更优选约10毫升至约250微升的体积。在一些优选的实施方案中，以低体积递送治疗剂量的肽是通过在根据本发明的用于注射的合适非质子极性溶剂中浓缩所述剂量的稳定形式的治疗肽(例如胰高血糖素)来实现的。

此外，本发明的稳定制剂适合于不需要在注射前稀释地施用。许多目前可用的治疗肽和疫苗产品以固体颗粒的形式生产以提高放置时的稳定性。这些制剂在注射前在无菌水、磷酸缓冲溶液或等渗盐水中稀释。相反地，在本发明的一些优选实施方案中，治疗肽使用医药工业通常采用的颗粒制备加工技术(例如喷雾干燥、冻干等)进行浓缩以制备用于注射的制剂。在优选的实施方案中，通过溶解肽来获得治疗剂量的肽药物，所述肽首先经冷冻干燥(和任选地例如稳定化赋形剂的另外的成分)为具有非常少的残余水分含量的经干燥的粉末。一经制备，干燥肽粉末就溶解于非质子极性溶剂中，例如DMSO、NMP、乙酸乙酯或这些溶剂的共混物。因此，根据本发明的目的，本发明的低体积稳定制剂被注射、灌输或者施用到动物(例如人类患者)，而不用如大部分重构产品所需要的在注射前首先稀释制剂。同样地，在优选的实施方案中，本发明的低体积制剂不用首先进行稀释或重构或冷却而可施用。

II.经干燥的肽的重构

在本发明的稳定制剂中，一旦将肽(和任选的成分)干燥成粉末，或制剂包含两种或更多种肽的情况下，一旦将肽中的每一种(各自任选地还包含任选的成分)干燥成粉末，就在非质子极性溶剂中溶解或重构干燥肽粉末。在一些实施方案中，非质子极性溶剂选自二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)、碳酸丙二醇酯及其混合物。在一些实施方案中，非质子极性溶剂是二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)和碳酸丙二醇酯中的两种或更多种的混合物。二甲基亚砜(DMSO)、乙酸乙酯和N-甲基吡咯烷酮(NMP)是特别优选的非质子极性溶剂，其每一种都是生物相容的溶剂。在一些实施方案中，非质子极性溶剂是二甲亚砜(DMSO)。在其他实施方案中，非质子极性溶剂是N-甲基吡咯烷酮(NMP)。在其他实施方案中，非质子极性溶剂是二甲亚砜(DMSO)和N-甲基吡咯烷酮(NMP)的混合物。在其他实施方案中，非质子极性溶剂是二甲基亚砜(DMSO)和乙酸乙酯的混合物。在一些实施方案中，在“纯净的”，即不含共溶剂的非质子极性溶剂中重构干燥肽粉末。在一些实施方案中，在包含非质子极性溶剂且不包含作为共溶剂的水的溶液中重构干燥肽粉末。

在一些实施方案中，本发明的制剂还包含降低制剂的凝固点的至少一种共溶剂。共溶剂是极性质子溶剂。在一些实施方案中，共溶剂选自乙醇、丙二醇(PG)、甘油及其混合物。在一些实施方案中，共溶剂是乙醇或丙二醇(PG)。共溶剂可以以约10％(w/v)至约50％(w/v)，例如约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、或约50％(w/v)的量存在于制剂中。在一些实施方案中，共溶剂以约10％(w/v)至约50％(w/v)、约10％(w/v)至约40％(w/v)、约10％(w/v)至约30％(w/v)、约10％(w/v)至约25％(w/v)、约15％(w/v)至约50％(w/v)、约15％(w/v)至约40％(w/v)、约15％(w/v)至约30％(w/v)、或约15％(w/v)至约25％(w/v)的量存在于制剂中。在一些实施方案中，相比于其他不包含共溶剂的相同制剂，至少一种共溶剂使制剂的凝固点降低至少5℃、至少10℃、至少15℃、至少20℃或更多。在一些实施方案中，至少一种共溶剂使制剂的凝固点降低至约3℃、至约2℃、至约1℃、或至约0℃或更低。

III.稳定化赋形剂

在一些优选的实施方案中，本文所描述的制剂可以进一步稳定化以确保其中并入的肽的稳定性。在一些实施方案中，可注射制剂的稳定性通过在干燥肽前将一种或更多种稳定剂或稳定化赋形剂包含到制剂中来增强。在其他实施方案中，可注射制剂的稳定性通过在非质子极性溶剂中利用稳定剂或稳定化赋形剂重构干燥的肽来增强。

在一些实施方案中，稳定化赋形剂是冷冻保护剂。冷冻保护剂，例如海藻糖的添加保护本发明的肽制剂以避免与冷冻-解冻循环相关的不稳定性。此外，冷冻保护剂海藻糖的添加还促进冷冻肽制剂的改善解冻。该改善解冻的性质出人意料地有利，特别是在紧急的医疗情况下，例如严重的低血糖症发作，且本发明的肽制剂是冷冻的并需要迅速施用。因此，在本发明的另一个方面中，稳定制剂具有改善的冷冻-解冻稳定性、提高的解冻速率和/或改善的解冻模式。

在一些实施方案中，稳定化赋形剂选自糖、淀粉、糖醇及其混合物。用于稳定化赋形剂的合适的糖的实例包括但不限于海藻糖、葡萄糖、蔗糖等。用于稳定化赋形剂的合适的淀粉的实例包括但不限于羟乙基淀粉(HES)。用于稳定化赋形剂的合适的糖醇的实例包括但不限于甘露醇和山梨醇。在一些实施方案中，至少一种稳定化赋形剂(例如糖、淀粉、糖醇或其混合物)能够增强肽在冷冻-解冻过程中的稳定性，提高制剂的解冻速率或改善制剂的解冻曲线。

在一些实施方案中，稳定化赋形剂以约1％(w/v)至约60％(w/v)、约1％(w/v)至约50％(w/v)、约1％(w/v)至约40％(w/v)、约1％(w/v)至约30％(w/v)、约1％(w/v)至约20％(w/v)、约5％(w/v)至约60％(w/v)、约5％(w/v)至约50％(w/v)、约5％(w/v)至约40％(w/v)、约5％(w/v)至约30％(w/v)、约5％(w/v)至约20％(w/v)、约10％(w/v)至约60％(w/v)、约10％(w/v)至约50％(w/v)、约10％(w/v)至约40％(w/v)、约10％(w/v)至约30％(w/v)、约10％(w/v)至约20％(w/v)的量存在于制剂中。在一些实施方案中，稳定化赋形剂以约1％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、或约60％(w/v)的量存在于制剂中。

在一些实施方案中，在包含两种或更多种肽的制剂中，在包含稳定化赋形剂的混合物中干燥每一种肽。对于每一种肽，肽和稳定化赋形剂的混合物可以是相同的，或者用于干燥每一种肽的稳定化赋形剂可以是不同的。在其他实施方案中，可以在包含稳定化赋形剂的混合物中干燥肽的一部分但不是全部，并可以从不存在稳定化赋形剂的水溶液中干燥其他肽。

在一些实施方案中，制剂还包含另外的稳定剂，另外的稳定剂包括例如抗氧化剂、螯合剂和防腐剂。合适的抗氧化剂的实例包括但不限于抗坏血酸、半胱氨酸、蛋氨酸、硫代甘油、硫代硫酸钠、亚硫酸盐、BHT、BHA、抗坏血酸棕榈酸酯、没食子酸丙酯、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)和维生素E。合适的螯合剂的实例包括但不限于EDTA、酒石酸及其盐、甘油、和柠檬酸及其盐。合适的防腐剂的实例包括但不限于苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯及其混合物。

在一些实施方案中，制剂还包含稳定化多元醇。例如，在美国专利第6,290,991号和第6,331,310号中描述了这类制剂和材料，其中每一个的内容都通过引用并入本文。

IV.制备稳定肽制剂的方法

在又一个方面，本发明提供制备用于肠胃外注射的稳定制剂的方法，该方法包括：将肽从肽水溶液中干燥为干燥肽粉末，其中粉末中的肽具有约等于水溶液中的肽的电离模式的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH；和用非质子极性溶剂重构干燥肽粉末，从而制备稳定制剂。在一些实施方案中，干燥肽粉末具有约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式，且当在非质子极性溶剂中重构干燥肽粉末时，肽保持约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式。在其他实施方案中，干燥肽粉末具有不约等于从其中干燥肽的水溶液中的肽的电离模式的电离模式，且当在非质子极性溶剂中重构干燥肽粉末时，肽保持该电离模式。

用于制备稳定肽制剂的方法是平台制剂方法，其可以用于配制在水性环境中具有有限的或差的稳定性或溶解性的任意肽。适合于在本发明的制剂中使用的肽(或其盐)包括但不限于胰高血糖素、胰岛素、亮丙瑞林、黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂、普兰林肽、甲状旁腺素(PTH)、糊精、肉毒杆菌毒素、芋螺毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、GLP-1激动剂、艾塞那肽及其类似物。在一个优选的实施方案中，肽是胰高血糖素或胰高血糖素类似物或胰高血糖素肽模拟物。在另一个实施方案中，肽是甲状旁腺素。在又一个实施方案中，肽是亮丙瑞林。在又一个实施方案中，肽是格拉默。

更进一步，无论潜在疾病的状态，本发明的技术可以应用于所有类型的肽。举例来说，本发明的稳定制剂可以包含一种、两种、三种、四种或更多种肽或其盐、其类似物和/或其混合物。适合于在本发明的制剂中使用的肽(及其盐)包括但不限于胰高血糖素、普兰林肽、胰岛素、亮丙瑞林、黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂、甲状旁腺素(PTH)、糊精、肉毒杆菌毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、GLP-1激动剂、艾塞那肽、其类似物、及其混合物。在一些实施方案中，肽是盐酸盐或乙酸盐。再次，预期除以上列举的其他肽在本发明的情况下也是有用的。

在一些实施方案中，将两种、三种、四种或更多种肽配制到稳定制剂中。在将两种或更多种肽配制到稳定制剂中的实施方案中，将每一种肽分别从水溶液中干燥为干燥肽粉末，每一种干燥肽粉末具有约等于水溶液中的肽的电离模式的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。用非质子极性溶剂重构两种或更多种干燥肽粉末，其中每种干燥肽粉末保持约等于水溶液中的肽的电离状态的肽的电离状态，其中所述水溶液的pH约等于肽最佳稳定性和最佳溶解性的pH(即，当在非质子极性溶剂中重构第一经干燥的肽时，第一经干燥的肽保持第一电离状态，当在非质子极性溶剂中重构第二经干燥的肽时，第二经干燥的肽保持第二电离状态)。

如以上所解释的，当肽溶解于水溶液时，水溶液的pH调节为使得干燥肽粉末具有约等于水溶液中的肽的电离模式的电离模式，其中所述水溶液的pH约等于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的pH。一经干燥，肽就会具有最佳稳定性/最小降解的电离模式，并且当在非质子极性溶剂中溶解或重构时会保留该电离模式。同样地，在一个实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于水溶液中的肽的电离状态，其中所述水溶液的pH为约2至约3。在另一个实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于水溶液中的肽的电离状态，其中所述水溶液的pH为约4至约6。在又一个实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于水溶液中的肽的电离状态，其中所述水溶液的pH为约4至约5。在又一个实施方案中，制剂中的肽的电离状态应约等于水溶液中的肽的电离状态，其中所述水溶液的pH为约6至8、8至10、或10至12。

一旦肽(和任选地在干燥前添加到包含肽的水溶液的其他组分，例如稳定化赋形剂)干燥成粉末，就在如本文所描述的非质子极性溶剂(例如二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯及其混合物)中溶解或重构干燥肽粉末。在一些实施方案中，非质子极性溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。在其他实施方案中，非质子极性溶剂是N-甲基吡咯烷酮(NMP)。在其他实施方案中，非质子极性溶剂是DMSO和NMP的混合物。

在一些实施方案中，重构干燥肽粉末的步骤包括用含有非质子极性溶剂和降低制剂凝固点的共溶剂的混合物稀释或重构经干燥的肽。在一些实施方案中，共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。在一些实施方案中，共溶剂以约10％(w/v)至约50％(w/v)，例如约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、或约50％(w/v)的量存在于制剂中。

在前述方法中，将肽化合物从水溶液(任选地包含赋形剂)中干燥使用喷雾干燥技术、冷冻干燥技术或冻干技术来实施。喷雾干燥技术是本领域技术人员众所周知的。喷雾干燥包括将含有一种或更多种溶质(例如治疗剂、赋形剂)的溶液经由喷嘴转盘或其他装置雾化之后，从液滴中蒸发溶剂的步骤。得到的粉末的性质是包括起始溶质浓度、所生成的液滴的尺寸分布和溶质去除速率的若干工艺参数变量的函数。所生成的颗粒根据溶剂去除的速率和条件可以包括由晶体和/或非晶体固体构成的初级颗粒的聚集体。

用于制备生物大分子，例如蛋白质、寡肽、高分子量多糖和核酸的超细粉末的喷雾干燥法在例如美国专利第6,051,256号中描述。冷冻干燥过程在本领域是众所周知的，并在例如美国专利第4,608,764号和第4,848,094号中描述。喷雾-冷冻干燥法例如在美国专利5,208,998号中描述。其他的喷雾-干燥技术例如在美国专利第6,253,463号、第6,001,336号、第5,260,306号和PCT国际公布第WO 91/16882号和WO 96/09814号中描述。

冻干技术是本领域技术人员众所周知的。冻干是当产品在冷冻状态(真空条件下的冰升华)和在真空条件下(通过缓慢加热干燥)时进行的脱水技术。这些条件使产品稳定，使氧化和其他降解过程最小化。冷冻干燥的条件允许在低温下进行该方法，因此可以保藏热不稳定的产品。冷冻干燥的步骤包括预处理、冷冻、初级干燥和二级干燥。预处理包括在冷冻之前处理产品的任何方法。这可以包括浓缩产品、制剂修正(即加入成分以增加稳定性和/或改善加工性)、减少高蒸气压溶剂或增加表面积。预处理的方法包括：冷冻浓缩、溶液相浓缩和特别地配制以保留产品外观或为反应性产品提供冻干保护，并且其例如在美国专利第6,199,297号中进行描述。“标准的”冻干法条件例如在美国专利第5,031,336号和在“Freeze Drying of Pharmaceuticals”(DeLuca，Patrick P.,J.Vac.Sci.Technol.，14卷,No.1,1977年一月/二月)和“The Lyophilization of Pharmaceuticals:A LiteratureReview”(Williams,N.A.和G.P.Polli,Journal of Parenteral Science andTechnology,38卷,1984年三月/四月第二期)中描述。

在一些优选的实施方案中，冻干循环部分地高于治疗剂制剂的玻璃化转变温度(Tg)进行以引起团块塌陷，从而形成含有残留水分的致密结块。在其他实施方案中，冻干循环低于玻璃化转变温度实施以避免塌陷，从而获得颗粒的完全干燥。

V.治疗方法

在另一个方面，本发明提供通过向对象施用对治疗、减轻或预防疾病、病症或病况有效量的如本文所描述的稳定制剂来治疗疾病或病症的方法。在一些实施方案中，待利用本发明的稳定制剂治疗的疾病、病症或病况是糖尿病病症。糖尿病病症的实例包括但不限于1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、前驱糖尿病、高血糖症、低血糖症和代谢综合征。在一些实施方案中，疾病、病症或病况是低血糖症。在一些实施方案中，疾病、病症或病况是糖尿病。

在一些实施方案中，本发明的治疗方法包括通过向患有低血糖症的对象施用对治疗低血糖症有效量的如本文所描述的稳定制剂来治疗低血糖症。在一些实施方案中，向对象施用包含胰高血糖素的稳定制剂。

在一些实施方案中，本发明的治疗方法包括通过向患有糖尿病的患者施用对治疗糖尿病有效的量的如本文所描述的稳定制剂来治疗糖尿病。在一些实施方案中，向对象施用包含胰岛素的稳定制剂。在一些实施方案中，向对象施用包含普兰林肽的稳定制剂。在一些实施方案中，向对象施用包含胰岛素和普兰林肽的稳定制剂。在一些实施方案中，向对象施用包含艾塞那肽的稳定制剂。在一些实施方案中，向对象施用包括胰高血糖素和艾塞那肽的稳定制剂。

用于治疗疾病、病症、病况(例如糖尿病病症、例如低血糖症或糖尿病)的如本文所描述的肽药物的施用剂量与本领域技术人员所实践的剂量和计划疗程一致。在本发明中所使用的所有药物试剂的合适剂量的通用指南在前述的Goodman和Gilman的ThePharmacological Basis of Therapeutics，第11版，2006和在Physicians’DeskReference(PDR)，例如在第65版(2011)或第66版(2012)，PDR Network，LLC中提供，其各自通过引用在此并入本文。用于治疗如本文所描述的疾病、病症或病况的肽药物的合适剂量会根据几种因素，包括组合物的配方、患者反应、病症的严重性、对象的体重和处方医师的判断而变化。有效剂量的所述制剂递送医学上有效量的肽药物。剂量可以根据个体患者的需要随着时间增加或减少。

有效量或剂量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其根据本文所提供的详细公开。通常地，递送这些剂量的制剂可以含有一种、两种、三种、四种或更多种肽或肽类似物(全体“肽”，除非明确地排除肽类似物)，其中每种肽以约0.1mg/mL到最多肽在制剂中的溶解极限的浓度存在。该浓度优选为约1mg/mL到约100mg/mL，例如约1mg/mL、约5mg/mL、约10mg/mL、约15mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约35mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、约50mg/mL、约55mg/mL、约60mg/mL、约65mg/mL、约70mg/mL、约75mg/mL、约80mg/mL、约85mg/mL、约90mg/mL、约95mg/mL或约100mg/mL。

本发明的制剂可以用于皮下、皮肤内或肌肉内的施用(例如通过注射或通过输注)。在一些实施方案中，制剂是皮下施用的。制剂还可以经皮递送，例如通过将组合物局部地施用至皮肤(例如，将组合物涂敷在皮肤上或将组合物加载到皮肤贴剂上并将皮肤贴剂附着到皮肤上)。

本公开的制剂可以使用任何合适的装置通过输注或通过注射来施用。例如，本发明的制剂可以放置到注射器、笔式注射装置、自动注射器装置或泵装置内。在一些实施方案中，注射装置是多剂量注射器泵装置或多剂量自动注射器装置。制剂以使得制剂在驱动注射装置，例如自动注射器后能够容易地流出针头的方式存在于装置中，以递送肽药物。合适的笔式/自动注射器装置包括但不限于由Becton-Dickenson、Swedish HealthcareLimited(SHL Group)、YpsoMed Ag等制造的那些笔式/自动注射装置。合适的泵装置包括但不限于由Tandem Diabetes Care,Inc.、Delsys Pharmaceuticals等制造的那些泵装置。

在一些实施方案中，在小瓶、灌注器或预装满的注射器中提供准备好施用的本发明的制剂。

在另一个方面，本发明提供如本文所描述的稳定制剂用于配制药物的用途，该药物用于治疗可以用制剂的肽治疗的任意疾病、病症或病况。在一些实施方案中，稳定制剂用于配制治疗糖尿病病症，例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、前驱糖尿病、高血糖症、低血糖症或代谢综合征的药物。

在一些实施方案中，稳定制剂用于配制用于治疗低血糖症的药物。在一些实施方案中，稳定制剂包含胰高血糖素或其盐(例如醋酸胰高血糖素)。在一些实施方案中，稳定制剂包含胰高血糖素和艾塞那肽。

在一些实施方案中，稳定制剂用于配制用于治疗糖尿病的药物。在一些实施方案中，稳定制剂包含胰岛素。在一些实施方案中，稳定制剂包含艾塞那肽。在一些实施方案中，稳定制剂包含普兰林肽。在一些实施方案中，稳定制剂包含胰岛素和普兰林肽。

VI.试剂盒

在另一个方面，本发明提供用于治疗如本文所描述的疾病、病症或病况的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒包括：包含一种、两种、三种、四种或更多种肽或其盐的稳定制剂，其中所述肽已经被干燥在非挥发性缓冲剂中，并且其中经干燥的肽具有约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆；和非质子极性溶剂；其中制剂的水分含量小于5％，并且其中当经干燥的肽在非质子极性溶剂中重构时，经干燥的肽保持约等于肽在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆；和用于向对象施用稳定制剂的注射器。

在一些实施方案中，试剂盒包括用于在治疗对象的低血糖症中使用的如本文所描述的稳定的胰高血糖素制剂。在一些实施方案中，试剂盒包括胰高血糖素制剂，所述胰高血糖素制剂包含：胰高血糖素或其盐(例如醋酸胰高血糖素)，其中所述胰高血糖素已经被干燥在非挥发性缓冲剂中，并且其中经干燥的胰高血糖素具有约等于胰高血糖素在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的非挥发性缓冲剂中的pH，其中经干燥的胰高血糖素的pH记忆为约2.0到约3.0；和选自二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯及其混合物的非质子极性溶剂；其中制剂的水分含量小于1％，并且其中当经干燥的胰高血糖素在非质子极性溶剂中重构时，经干燥的胰高血糖素保持约等于胰高血糖素在非挥发性缓冲剂中的pH的pH记忆。在一些实施方案中，胰高血糖素制剂还包含降低制剂的凝固点的共溶剂，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。在一些实施方案中，胰高血糖素制剂还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳定化赋形剂。在一些实施方案中，胰高血糖素以约1mg/mL至约50mg/mL的量存在于制剂中。

在一些实施方案中，试剂盒包括用于在治疗对象的糖尿病中使用的如本文所描述的稳定的胰岛素和普兰林肽制剂。在一些实施方案中，试剂盒包括胰岛素和普兰林肽制剂，所述胰岛素和普兰林肽制剂包含：胰岛素，其中所述胰岛素已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的第一非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中经干燥的胰岛素具有约等于胰岛素在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第一pH记忆，其中第一pH记忆为约1.5至约2.5或约6.0至约8.0；普兰林肽，其中所述普兰林肽已经在选自甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂及其混合物的第二非挥发性缓冲剂中被干燥，并且其中经干燥的普兰林肽具有约等于普兰林肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆，其中第二pH记忆为约3.0到约5.0或约4.0到约6.0；和选自二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯及其混合物的非质子极性溶剂；其中制剂的水分含量小于1％，其中当干燥的胰岛素在非质子极性溶剂中重构时，干燥的胰岛素保持约等于胰岛素在第一非挥发性缓冲剂中的pH的第一pH记忆，并且其中当经干燥的普兰林肽在非质子极性溶剂中重构时，干燥的普兰林肽保持约等于普兰林肽在第二非挥发性缓冲剂中的pH的第二pH记忆。在一些实施方案中，胰岛素和普兰林肽制剂还包含降低制剂的凝固点的共溶剂，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。在一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂中的胰岛素和第二非挥发性缓冲剂中的普兰林肽中的一者或两者还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳定化赋形剂。在一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂和第二非挥发性缓冲剂相同。在一些实施方案中，第一非挥发性缓冲剂和第二非挥发性缓冲剂不同。在一些实施方案中，胰岛素和普兰林肽中的每一者都以约1mg/mL到约50mg/mL的量存在于制剂中。在一些实施方案中，第一pH记忆为约1.5到约2.5。在一些实施方案中，第一pH记忆为约6.0到约8.0。在一些实施方案中，第二pH记忆为约3.0到约5.0。在一些实施方案中，第二pH记忆为约4.0到约6.0。在一些实施方案中，第一pH记忆为约1.5到约2.5，并且第二pH记忆为约3.0到约5.0。

在一些实施方案中，试剂盒包括作为笔式注射装置、自动注射器装置或泵的一部分的注射器。在一些实施方案中，注射器预装满稳定制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括说明书，其中所述说明书指导稳定制剂的施用以治疗有此需要的患者(例如具有低血糖症或糖尿病的患者)。

在另一实例中，试剂盒可以包括：(a)包含有机溶剂体系的第一组合物，该有机溶剂体系包含有机溶剂、有机相缓冲剂和具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式的肽或其盐；和(b)包含非质子极性溶剂的第二组合物，该非质子极性溶剂能够部分溶解或完全溶解肽或其盐并保持第一电离模式。第一组合物和第二组合物可以分别容纳在第一容器和第二容器中。或者，试剂盒可以设计为使得两种组合物在单一的容器中，但是通过分隔件来分隔，所述分隔件可以根据需要移除或改装以允许两种组合物彼此相互接触。试剂盒可以包括用以混合两个容器的内容物或用以破坏或移除分隔件以获得两相体系的说明，其中两相体系中的一相包含非质子极性溶剂，其中肽或其盐溶解于所述溶剂中。另一相可以包含有机溶剂体系。该试剂盒可以包括用以分离两相并将具有肽或其盐的非质子极性溶剂注射到患者的装置。

实施例

本发明通过具体的实施例将被更加详细地描述。以下实施例是出于说明的目的提供的，不打算以任何方式限制本发明。本领域技术人员会容易地意识到可以改变或改进而产生基本相同结果的各种非关键性参数。

实施例1

(乙酸盐缓冲剂中的肽pH记忆)

将乙酸普兰林肽(37个氨基酸，人类激素糊精的合成类似物)溶解于包含5％(w/v)海藻糖并用10mM乙酸盐缓冲的水溶液(pH 4.0)中。在添加普兰林肽盐后，用1.0N的HCL将溶液的pH重新调节至4.0。在水溶液中的乙酸普兰林肽的最终浓度为0.9mg/mL。通过冻干法将溶液干燥至粉末。干燥后，肽粉末的pH通过用未缓冲的水将肽粉末重构至原始的(冻干前)浓度(0.9mg/mL)来评价。发现重构的样品(N＝3)的pH为4.1至4.2。

样品溶液(N＝3)通过将冻干的粉末在纯净的DMSO中直接溶解至0.9mg/mL的乙酸普兰林肽浓度来制备。为了测试在极性非质子溶剂中的制剂稳定性，将样品(N＝3)在40℃下储存在密封的玻璃小瓶中6周。在储存6周后，样品溶液(N＝3)是澄清的并且无沉淀和可见的聚集体；发现T＝6周时剩余的普兰林肽的浓度为通过RP-HPLC评价的初始测量值(T＝0周)的99.6％。

实施例2

(预示实施例)

除了在实施例1中制备的乙酸普兰林肽制剂外，本发明的制剂可以用各种方式制备。图1提供了两种该方法的非限制性实例。使用含水组合物的第一方法可以包括以下步骤：

步骤1：选择治疗剂，例如肽或其盐。确定其等电点和赋予该试剂最佳电离状态的pH，使得其在水溶液中具有最佳稳定性和最佳溶解性。

步骤2：将治疗剂添加到包含赋予所述溶液中期望pH的组分的水溶液中。所述组分包含足以确立期望pH的量的部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、或强碱、或其任意组合。该组分还可以包括非挥发性缓冲剂。水溶液的pH可以约等于治疗剂的最佳稳定性和最佳溶解性的pH(即相差1个pH单位以内)。或者，水溶液的pH可以比治疗剂的最佳稳定性和最佳溶解性的pH大至少1个pH单位。在任一情况下，水溶液可以设计为使得在干燥后pH保持较恒定或使得在干燥后溶液的pH改变以落入最佳pH内。

步骤3：使水溶液经历干燥步骤(例如，冻干或喷雾干燥)以制备干燥形式或粉末形式的所述治疗剂。所述治疗剂的干燥形式或粉末形式会具有对应于治疗剂在水溶液中的最佳稳定性和最佳溶解性的电离模式。

步骤4：在非质子极性溶剂中重构经干燥的治疗剂或粉末使得重构的治疗剂也会具有约等于经干燥的治疗剂的电离模式的电离模式。尤其，无论步骤2水溶液中的初始pH是在治疗剂的最佳pH之内还是之外，均可以获得该结果。

使用不含水组合物的第二方法可以包括以下步骤：

步骤1：选择治疗剂，例如肽或其盐。确定其等电点和赋予该治疗剂最佳电离状态的pH，使得其在水溶液中具有最佳稳定性和最佳溶解性。如果需要的话，可以使用方法1的步骤3中的经干燥的治疗剂。然而，该治疗剂不是必须进行干燥，或不是必须以该方法的步骤3中所述的方式进行(见图1)。

步骤2：将治疗剂添加到包含有机溶剂和有机相缓冲剂的有机溶剂体系中。有机溶剂体系的pH可以约等于治疗剂的最佳稳定性和最佳溶解性的pH(即相差1个pH单位以内)，pH是通过将所述治疗剂置于水溶液中测量的。在优选的方面，治疗剂悬浮或部分悬浮于有机溶剂体系中。

步骤3：将足以使得通过溶剂交换获得两相体系的量的非质子极性溶剂添加到有机溶剂体系中。第一相包含极性非质子溶剂和至少一部分溶解形式的治疗剂，第二相包含具有有机溶剂和有机缓冲剂的有机溶剂体系。有机溶剂体系是基本无水的。可以通过本领域已知的分离方法将有机溶剂体系从非质子极性溶剂中移出。

此外，可以制备共制剂使得单一制剂包含至少两种不同肽、或至少三种不同肽、或至少四种不同肽、或至少五种不同肽、或更多肽。可以通过上述两种方法中的任一种制备每种另外的肽。

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本文中所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本公开制成和实现，而不需要过度实验。尽管已经按照一些实施方案描述了本发明的组合物和方法，但是对于本领域技术人员明显的是，可以改变所述组合物和方法以及本文所描述方法的步骤或步骤的顺序，而不脱离本发明的构思、精神和范围。更具体地，明显地，化学上和生理学上两方面都相关的一些试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。对本领域技术人员明显的所有这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和构思内。

Claims (66)

1.一种用于肠胃外注射的稳定制剂，其包含：

(a)已经预先从含水组合物中干燥的肽或其盐，所述含水组合物包含部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、或强碱、或其任意组合，其中经干燥的肽或其盐具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式；和

(b)非质子极性溶剂，其中经干燥的肽或其盐在非质子极性溶剂中重构，并在非质子极性溶剂中具有第二电离模式，

其中所述第一电离模式和第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。

2.根据权利要求1所述的稳定制剂，其中所述肽或其盐在干燥前在含水组合物中具有第三电离模式，其中所述第三电离模式与所述第一电离模式或第二电离模式相差至少1个pH单位。

3.根据权利要求2所述的稳定制剂，其中所述含水组合物配制为使得在所述含水组合物干燥时第三电离模式转变为第一电离模式。

4.根据权利要求1所述的稳定制剂，其中所述肽或其盐在干燥前在含水组合物中具有第三电离模式，其中所述第三电离模式与所述第一电离模式或第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。

5.根据权利要求4所述的稳定制剂，其中所述含水组合物配制为使得所述含水组合物的pH补偿在所述含水组合物干燥时反荷离子或缓冲剂成分或两者的损失。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的稳定制剂，其中所述经干燥的肽部分溶解或完全溶解于非质子极性溶剂中，优选完全溶解于所述非质子极性溶剂中。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的稳定制剂，其中所述经干燥的肽部分悬浮或完全悬浮于非质子极性溶剂中。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的稳定制剂，其中所述含水组合物包含部分挥发性缓冲剂，例如乙酸钠或磷酸铵或其任意组合。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的稳定制剂，其中所述含水组合物包含挥发性缓冲剂，例如乙酸铵、甲酸铵、碳酸铵、碳酸氢铵、吡啶乙酸盐、吡啶甲酸盐、或乙酸三乙基铵、或其任意组合。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的稳定制剂，其中所述含水组合物包含强酸，例如盐酸。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的稳定制剂，其中所述含水组合物包含强碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、或氢氧化钙、或其任意组合。

12.根据权利要求10至11中任一项所述的稳定制剂，其中所述含水组合物不包含缓冲剂。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的稳定制剂，其中所述含水组合物不包含非挥发性缓冲剂。

14.根据权利要求1至12中任一项所述的稳定制剂，其中所述含水组合物包含不同缓冲剂的混合物。

15.根据权利要求14所述的稳定制剂，其中所述不同缓冲剂的混合物包括非挥发性缓冲剂的混合物，部分挥发性缓冲剂的混合物，挥发性缓冲剂的混合物，非挥发性缓冲剂和部分挥发性缓冲剂的混合物，非挥发性缓冲剂和挥发性缓冲剂的混合物，部分挥发性缓冲剂和挥发性缓冲剂的混合物，或非挥发性缓冲剂、部分挥发性缓冲剂和挥发性缓冲剂的混合物。

16.根据权利要求1至12或14至15中任一项所述的稳定制剂，其还包含非挥发性缓冲剂，例如甘氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、或其混合物。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的稳定制剂，其中干燥是通过冻干、喷雾干燥、脱水、薄膜冷冻、喷雾冷冻干燥、或其任意组合来实施的。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的稳定制剂，其中制剂的水分含量小于15％、或小于10％、或小于5％、或小于1％、或是无水的。

19.权利要求1至18中任一项所述的稳定制剂，其中所述非质子极性溶剂选自二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺(DMF)、碳酸丙二醇酯、或其混合物。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的稳定制剂，其还包含降低所述制剂的凝固点的共溶剂，其中所述共溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油及其混合物。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的稳定制剂，其还包含选自糖、淀粉及其混合物的稳定化赋形剂。

22.根据权利要求21所述的稳定制剂，其中所述稳定化赋形剂为海藻糖。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的稳定制剂，其中所述肽或其盐为胰高血糖素。

24.根据权利要求23所述的稳定制剂，其中第一电离模式或第二电离模式或两者对应于在溶解于具有约2至3的pH范围的水溶液时的胰高血糖素的电离模式。

25.根据权利要求23或24中任一项所述的稳定制剂，其中第三电离模式对应于在溶解于具有约2至3的pH范围的水溶液时的胰高血糖素的电离模式。

26.根据权利要求23或24中任一项所述的稳定制剂，其中第三电离模式对应于在溶解于具有大于3或小于2的pH范围的水溶液时的胰高血糖素的电离模式。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的稳定制剂，其中所述肽或其盐选自普兰林肽、胰岛素、亮丙瑞林、LHRH激动剂、甲状旁腺素(PTH)、糊精、肉毒杆菌毒素、hematide、淀粉样肽、缩胆囊素、芋螺毒素、胃抑制肽、胰岛素样生长因子、生长激素释放因子、抗微生物因子、格拉默、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、GLP-1激动剂、艾塞那肽、其类似物、及其混合物。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的稳定制剂，其中将在经干燥的肽或其盐重构到极性非质子溶剂中之前，通过将经干燥的肽或其盐重构到包含有机溶剂和有机相缓冲剂的有机溶剂体系中来保持第一电离模式。

29.根据权利要求28所述的稳定制剂，其中通过将有机溶剂体系与极性非质子溶剂混合并任选地将极性非质子溶剂与有机溶剂体系分离，将经干燥的肽或其盐重构到极性非质子溶剂中。

30.根据权利要求28至29中任一项所述的稳定制剂，其中所述有机溶剂体系为基本无水的。

31.根据权利要求1至30中任一项所述的稳定制剂，其中所述稳定制剂被包含于注射器、笔式注射装置、自动注射器装置或泵装置中。

32.根据权利要求1至31中任一项所述的稳定制剂，其还包含第二肽或其盐。

33.根据权利要求32所述的稳定制剂，其中所述第二肽或其盐已经从第二含水组合物中干燥，其中第二经干燥的肽具有约等于在溶解于第二含水组合物时的第二肽的电离模式的电离模式，其中所述第二含水组合物的pH约等于第二肽最佳稳定性和最佳溶解性的pH。

34.根据权利要求32至33中任一项所述的稳定制剂，其中所述第二肽部分溶解或完全溶解于非质子极性溶剂中。

35.一种制备根据权利要求1至34所述的用于肠胃外注射的稳定制剂中任一种的方法，所述方法包括：

(a)将包含肽或其盐和部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、或强碱、或其任意组合的含水组合物干燥为干燥肽粉末，其中所述干燥肽粉末具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式；

(b)在非质子极性溶剂中重构所述干燥肽粉末，其中重构的干燥肽粉末在非质子极性溶剂中具有第二电离模式，

其中所述第一电离模式和第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。

36.根据权利要求35所述的方法，其中所述肽或其盐在干燥前在含水组合物中具有第三电离模式，其中所述第三电离模式与所述第一电离模式或第二电离模式相差至少1个pH单位。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述含水组合物配制为使得在所述含水组合物干燥时第三电离模式转变为第一电离模式。

38.根据权利要求35所述的方法，其中所述肽或其盐在干燥前在含水组合物中具有第三电离模式，其中所述第三电离模式与所述第一电离模式或第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述含水组合物配制为使得所述含水组合物的pH补偿在所述含水组合物干燥时反荷离子或缓冲剂成分或两者的损失。

40.根据权利要求35至39中任一项所述的方法，其中所述肽或其盐为胰高血糖素。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述含水组合物在干燥前具有约2至3的pH范围，其中所述第一电离模式或第二电离模式或两者对应于在溶解于所述含水组合物时的胰高血糖素的电离模式。

42.根据权利要求41所述的方法，其中所述第三电离模式对应于在溶解于所述含水组合物时的胰高血糖素的电离模式。

43.根据权利要求40所述的方法，其中所述含水组合物在干燥前具有大于3至7的pH范围，其中第一电离模式或第二电离模式或两者对应于在溶解于具有约2至3的pH范围的水溶液时的胰高血糖素的电离模式。

44.根据权利要求35至43中任一项所述的方法，其中在步骤(b)前，在包含有机溶剂和有机相缓冲剂的有机溶剂体系中重构所述干燥肽粉末，其中有机相缓冲剂的pH设置为使得肽粉末保持其第一电离模式或使得肽粉末的电离模式被重新调节至其第一电离模式。

45.根据权利要求44所述的方法，其中将肽粉末悬浮或部分悬浮于有机溶剂体系中。

46.根据权利要求44或45中任一项所述的方法，其中将所述有机溶剂体系与所述非质子极性溶剂组合或混合，以获得两相体系，其中第一相包含极性非质子溶剂和至少一部分悬浮的或部分悬浮的干燥肽粉末，第二相包含具有有机溶剂和有机缓冲剂的有机溶剂体系。

47.根据权利要求44至46中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂体系为基本无水的。

48.根据权利要求44至47中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂为己烷、庚烷、十二烷、十六烷、乙醚、异丙醚、丁基醚、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、吡啶、丙酮、2-戊酮、2-庚酮、或其任意组合。

49.根据权利要求44至48中任一项所述的方法，其中所述有机相缓冲剂为三苯基乙酸、三异辛基胺或其任意组合。

50.根据权利要求35至49中任一项所述的方法，其中所述稳定制剂被包含于注射器、笔式注射装置、自动注射器装置或泵装置中。

51.一种用于将根据权利要求1至34所述的稳定制剂中的任一种施用于对象的方法，其包括将所述稳定制剂肠胃外地施用于对象。

52.一种用于治疗低血糖症的方法，其包括对有此需要的对象肠胃外地施用对治疗低血糖症有效量的权利要求1至34所述的稳定制剂中的任一种。

53.一种用于治疗糖尿病的方法，其包括对有此需要的对象肠胃外地施用对治疗糖尿病有效量的权利要求1至34中任一项所述的稳定制剂。

54.一种用于肠胃外注射的稳定制剂，其包含：

(a)具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式的肽或其盐，其中已经用包含有机溶剂和有机相缓冲剂的有机溶剂体系设置所述第一电离模式；和

(b)包含所述肽或其盐的非质子极性溶剂，其中所述肽或其盐在非质子极性溶剂中具有第二电离模式，

其中所述第一电离模式和第二电离模式大致相同，例如彼此相差1个pH单位以内。

55.根据权利要求54所述的稳定制剂，其中来自(a)的肽或其盐已经预先从包含部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、强碱、或非挥发性缓冲剂、或其任意组合的含水组合物中干燥。

56.根据权利要求54至55中任一项所述的稳定制剂，其中所述稳定制剂包含至少两相，包含含有肽或其盐的非质子极性溶剂的第一相，和包含有机溶剂体系的第二相。

57.根据权利要求54至56中任一项所述的稳定制剂，其中所述稳定制剂被包含于注射器、笔式注射装置、自动注射器装置或泵装置中。

58.根据权利要求54至56中任一项所述的稳定制剂，其还包含第二肽或其盐。

59.根据权利要求58所述的稳定制剂，其中第二肽或其盐具有对应于第二肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第三电离模式，其中已经用包含第二有机溶剂和第二有机相缓冲剂的第二有机溶剂体系设置所述第三电离模式。

60.一种试剂盒，其包括：

(a)包含有机溶剂体系的第一组合物，所述第一组合物包含有机溶剂、有机相缓冲剂、具有对应于肽的最佳稳定性和最佳溶解性的第一电离模式的肽或其盐；和

(b)包含非质子极性溶剂的第二组合物，所述非质子极性溶剂能够部分溶解或完全溶解所述肽或其盐并保持所述第一电离模式。

61.根据权利要求60所述的试剂盒，其中所述第一组合物和第二组合物分别容纳在第一容器和第二容器中。

62.根据权利要求60或61中任一项所述的试剂盒，其中所述肽或其盐已经预先从包含部分挥发性缓冲剂、挥发性缓冲剂、强酸、强碱、或非挥发性缓冲剂、或其任意组合的含水组合物中干燥。

63.根据权利要求62所述的试剂盒，其中所述第一电离模式是由从所述水溶液中干燥所述肽或其盐而获得的。

64.根据权利要求60至63中任一项所述的试剂盒，其中所述第一电离模式是由第一组合物获得的。

65.根据权利要求60至64中任一项所述的试剂盒，其中所述肽或其盐悬浮或部分悬浮于有机溶剂体系中。

66.根据权利要求60至65中任一项所述的试剂盒，其中所述第一组合物为基本无水的。