CN106093436A - 一种简便检测rna与蛋白互作的试剂盒及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒及其使用方法，包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液。本发明用RNA去抓与之相互作用的蛋白质，首先把已知序列的RNA做好标记（例如biotin),依靠这个标记将RNA固定到某Beads上，再和含有蛋白的物质共孵育，之后去掉未与RNA作用的上清收集从Beads上洗下来的蛋白，得到的蛋白可做质谱或免疫印迹实验。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物领域，尤其涉及一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒及其使用方法。
背景技术
非编码RNA是众多细胞过程的关键调控子，对维持细胞内稳态非常关键，与发育和癌症进程密切相关。非编码RNA主要包括长非编码RNA(lncRNA)和microRNAs(miRNA)，它们可以调节转录因子的表达、指导染色质的重组和修饰、减少mRNA的翻译对基因表达进行控制。
RNA结合蛋白(RNA-binding proteins)在转录后基因表达调节中起着重要的作用,它通过和RNA相互作用来调节细胞的功能。RNA结合蛋白参与RNA剪接、多聚腺苷化作用、序列编辑、RNA转运、维持RNA的稳定和降解、细胞内定位和翻译控制等RNA代谢的各个方面。RNA结合蛋白根据结构或功能的不同可分为核糖核蛋白（RNP）、KH基序RNA结合蛋白、双螺旋RNA结合蛋白和冷酸基序RNA结合蛋白RNA结合蛋白质包括异源核糖核蛋白、小核糖核蛋白、Poly（A）结合蛋白、叶绿体RNA结合蛋白、植物富含甘氨酸RNA结合蛋白、哺乳动物富含甘氨酸RNA结合蛋白和蓝细菌RNA结合蛋白。
蛋白质与RNA的相互作用是许多细胞功能的核心，如蛋白质合成、mRNA组装、病毒复制、细胞发育调控等。了解它们之间相互作用的分子机制对理解这些生物学过程非常重要。然而，之前的分析方法往往受限于使用放射性标记，或实验步骤过多，不仅耗时费力，也增加了实验结果的不稳定。另外，稳定的实验体系也需要耗费较长时间建立。许多研究者不确定实验的阴性、阳性。综上所述，本领域中没有特别稳定且省时的方法检测RNA与蛋白的相互作用。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷，本发明的在于克服现有技术的不足，提供一种特异性好、经济、完整的简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒及其使用方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液。本发明用RNA去抓与之相互作用的蛋白质，首先把已知序列的RNA做好标记（例如biotin), 依靠这个标记将RNA固定到某Beads上，再和含有蛋白的物质（ 例如细胞裂解物）共孵育，之后去掉未与RNA作用的上清 收集从Beads上洗下来的蛋白，得到的蛋白可做质谱或免疫印迹实验。
进一步地，所述细胞裂解液的配方包括如下原料：
0.05~1.5体积% NP-40；
0.15~0.35体积% 去氧胆酸钠；
Tris-HCL 45~55 mmoL/L ；
Nacl 140~160 mmoL/L；
EDTA 0.8~1.2 mmoL/L；
PMSF 0.8~1.2mmoL/L；
所述Tris-HCL的pH值为7.2~7.5。
其中，NP-40是一种去垢剂，可以裂解胞膜，0.25%左右的去氧胆酸钠可以裂解细胞膜；去氧胆酸钠是一种离子型去垢剂，可以裂解胞膜，0.25%左右的去氧胆酸钠可以裂解细胞膜，0.5%的去氧胆酸钠可以裂解核膜；Tris-HCL作为一种缓冲液，可以维持稳定的pH值，pH值为7.2~7.5，与细胞正常PH值（7.4左右）保持一致,保持正常的DNA和蛋白形态；Nacl作为一种电解质，协调细胞内外的离子浓度；EDTA为乙二胺四乙酸，可以和金属离子络合，作为核酸酶和蛋白酶的抑制剂；PMSF为磷酸酶抑制剂，主要抑制磷酸酶的活性。
所述洗液的配方包括如下原料：
Tris-HCL 45~55 mmoL/L；
EDTA 0.8~1.2 mM；
KCl 80~120 mM；
0.1~0.2体积% TritonX-100；
0.05~0.15体积%甘油；
4.5~5.5体积% DTT；
所述Tris-HCL的pH值为6.8~7.2。
其中，KCl作为一种电解质，可以协调细胞内外的离子浓度；TritonX-100为一种去垢剂，0.1%以上的TritonX-100可以去除大部分脂类物质；少量的，即1%左右的甘油可以结合大量分子，稳定蛋白的结构，降低蛋白的降解；DTT是一种还原剂，5%左右可以稳定蛋白的活性。蛋白的外界环境一般是中性，PH=7.0左右，所以所述Tris-HCL的pH值调为6.8~7.2。
所述蛋白洗脱液的配方包括如下原料：
220~280 mM Tris-HCl；
8.5~11.5%（W/V）SDS；
0.2~0.6%（W/V）溴酚蓝；
45~55%（V/V）甘油；
4~6%（W/V）β-巯基乙醇；
所述Tris-HCL的pH值为6.6~7.0。
其中，10%左右的SDS可以使蛋白变性，并使蛋白均匀带负电荷；溴酚蓝为指示剂，电泳时指示蛋白条带的位置；甘油可增加溶液的粘稠度，上样后，使液体更容易沉淀；5%左右的β-巯基乙醇可以使蛋白变性；蛋白带负电荷，溶液的PH值应保持在偏酸性，所以所述Tris-HCL的pH值调为6.6~7.0。
所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
S1、制备标记生物素RNA探针：以含有目的基因的T载体为模板，标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP为底物，通过T7RNA聚合酶经体外转录标记RNA；
S2、制备细胞蛋白提取液：
S21、将3~5×107个细胞收集至1.5ml离心管中；
S22、加0.5~1ml细胞裂解液，再加入10~20U/ml RNase inhibitor和0.5~1ug/ml的蛋白酶抑制剂，裂解细胞 ，取上清作为蛋白提取液；
S3、链霉亲和磁珠与标记生物素RNA探针孵育：将步骤S1制备的RNA探针与链霉亲和磁珠孵育，使RNA探针结合到链霉亲和磁珠上，用洗液洗掉未结合磁珠；
S4、标记RNA探针的磁珠与蛋白提取液孵育，富集RNA结合蛋白，得到蛋白：将S3制备的含有RNA探针的磁珠与细胞裂解液或纯蛋白孵育，用洗液洗掉未结合蛋白，加洗脱液洗脱结合蛋白。
步骤S1的具体步骤为：
依次加入线性化DNA片段1~2ug、Biotin RNA labeling mix 2ul、10X buffer 2ul、T7RNA 聚合酶 2ul，加水补足18ul，在温度为37℃条件下孵育2~3h，进行反转录，并标记此RNA；再加1.5~2ul DNase I，在温度为37℃条件下孵育15~20min，然后加2~2.5ul 0.2MEDTA，调至pH=7.5~8.0； 95℃条件下加热2min，冰浴3min，室温静置30min，去除DNA。
步骤S3包括如下步骤：先采用500ul~700 ul Wash Buffer 冲洗50ul链霉亲和磁珠3~5 次，再将步骤S1标记的RNA加入链霉亲和磁珠，在温度4℃条件下过夜孵育；然后，在转速为3000~5000rpm条件下离心1~2min，去上清液，最后用Wash buffer I 洗3~5次。
步骤S4包括如下步骤：向S3制备的含有RNA探针的磁珠磁珠中加入1~2mg蛋白提取液，在温度4℃条件下孵育4h；再在转速为3000~5000rpm条件下离心1~2min，去上清液；然后用Wash buffer I 洗3~5次后加30~50ul 蛋白洗脱液，在转速为12000rpm条件下离心，取上清液。
本步骤中，蛋白提取液最多加入2mg蛋白，蛋白过量后，会增加磁珠的非特异性结合，一定要在4℃条件下孵育，抑制蛋白的降解，转速不要超过5000rpm，超过后，未结合蛋白会沉淀下来，造成假阳性。
所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒用于免疫印迹检测时，阳性对照的RNA为U1的正义链，检测蛋白为snRNP70，阴性对照的RNA为U1的反义链，检测蛋白为snRNP70。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
（1）脱硫生物素化的目标RNA能够直接富集RBP；
（2）操作简单，步骤简化，耗时短；
（3）使用不同长度的体外转录RNA或合成RNA进行标记；可成功富集内源、过表达和体外翻译的裂解液中的蛋白； （4）特异性好，磁珠背景低，反义链的RNA与正义链富集的RNA有明显区别；
（5）本发明比单独购买合成的末端标记RNA、磁珠和试剂更为经济，可工业化生产； （6）完整：包含标记和富集组分，阳性对照RNA、阴性对照RNA；
（7）最终得到的蛋白用途广泛，可用于质谱、银染、Western。
附图说明
图1为本发明原理图；
图2为本发明的银染图； SHAPE \* MERGEFORMAT
图3为本发明的免疫印迹检测图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
实施例1
一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液。
其中，所述细胞裂解液的配方包括如下原料：
1% NP-40；
0.25%去氧胆酸钠；
Tris-HCL 50mmoL/L ；
Nacl 150 mmoL/L；
EDTA 1 mmoL/L；
PMSF 1 mmoL/L；
所述Tris-HCL的pH值为7.4。
所述洗液的配方包括如下原料：
Tris-HCL 50mmoL/L；
EDTA 1mM；
KCl 100Mm；
TritonX-100；
0.1%丙三醇；
5%DTT 1mM；
所述Tris-HCL的pH值为7.0。
所述蛋白洗脱液的配方包括如下原料：
250 mM Tris-HCl；
10%（W/V）SDS；
0.5%（W/V）溴酚蓝；
50%（V/V）甘油；
5%（W/V）β-巯基乙醇；
所述Tris-HCL的pH值为6.8。
所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
S1、制备标记生物素RNA探针：
依次加入线性化DNA片段1ug、Biotin RNA labeling mix 2ul、10X buffer 2ul、T7RNA 聚合酶 2ul，加水补足18ul，在温度为37℃条件下孵育2h，进行反转录，并标记此RNA；再加2ul DNase I，37℃孵育15min，然后加2ul 0.2M EDTA，调至PH=8.0； 加StructureBuffer，95℃加热2min，冰浴3min，室温静置30min，去除DNA。
S2、制备细胞蛋白提取液：
S21、将3×107个细胞收集至1.5ml离心管中
S22、加0.5ml细胞裂解液，再加入10U/ml RNase inhibitor和0.5ug/ml的蛋白酶抑制剂，裂解细胞 ，取上清作为蛋白提取液
S3、链霉亲和磁珠与标记生物素RNA探针孵育：先采用500ul Wash Buffer 冲洗链霉亲和磁珠3次，再将步骤S1标记的RNA加入链霉亲和磁珠，在温度4℃条件下过夜孵育；然后，在转速为3000rpm条件下离心1min，去上清液，最后用Wash buffer I 洗3次；
S4、标记RNA探针的磁珠与蛋白孵育，富集RNA结合蛋白，得到蛋白：向S3制备的含有RNA探针的磁珠磁珠中加入1mg蛋白提取液，在温度4℃条件下孵育4h；再在转速为3000rpm条件下离心1min，去上清液；然后用Wash buffer I 洗3次后加50ul 蛋白洗脱液，在转速为12000rpm条件下离心，取上清液。
将上述获得的蛋白进行银染、免疫印迹检测、质谱，具体如下：
（1）银染：将洗脱的蛋白样品，取3~5ul，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离蛋白样品，对聚丙烯酰胺凝胶进行银染，蛋白条带显现，对差异蛋白进行分析。
如图2为银染图；其中，蛋白的分子标记为指示蛋白大小；Input；总蛋白为细胞SW480的全蛋白提取液；正义链为细胞SW480中，U1的正义链结合的蛋白；反义链为 U1正义链的反向互补链，细胞SW480中，U1的反义链结合的蛋白；磁珠为去除背景。差异条带可进行质谱分析。
（2）免疫印迹检测：将洗脱的蛋白样品，取20~25ul，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离蛋白样品，再将蛋白转到PVDF膜上，用特定抗体进行免疫印记，使特定蛋白显现。
如图3为免疫印迹检测图，其中，总蛋白为细胞SW480的全蛋白提取液的5%上样；正义链为细胞SW480中，U1的正义链结合的蛋白；反义链为细胞SW480中，U1的反义链结合的蛋白,检测蛋白为小核核糖核蛋白，条带大小为70KD。
其中，U1的RNA序列见序列表。
实施例2
一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液。
其中，所述细胞裂解液的配方包括如下原料：
0.05体积% NP-40；
0.15体积% 去氧胆酸钠；
Tris-HCL 45 mmoL/L ；
Nacl 140 mmoL/L；
EDTA 0.8 mmoL/L；
PMSF 0.8mmoL/L；
所述Tris-HCL的pH值为7.2。
所述洗液的配方包括如下原料：
Tris-HCL 45 mmoL/L；
EDTA 0.8 mM；
KCl 80 mM；
0.1体积% TritonX-100；
0.05体积% 丙三醇；
4.5体积% DTT；
所述Tris-HCL的pH值为6.8。
所述蛋白洗脱液的配方包括如下原料：
220 mM Tris-HCl；
8.5%（W/V）SDS；
0.4%（W/V）溴酚蓝；
45%（V/V）甘油；
4%（W/V）β-巯基乙醇；
所述Tris-HCL的pH值为6.6。
所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
S1、制备标记生物素RNA探针：依次加入线性化DNA片段1ug、Biotin RNA labeling mix2ul、10X buffer 2ul、T7 RNA 聚合酶 2ul，加水补足18ul，在温度为37℃条件下孵育2h，进行反转录，并标记此RNA；再加1.5ul DNase I，37℃条件下孵育15min，然后加2ul 0.2MEDTA，调至PH=7.5； 加Structure Buffer，在95℃条件下加热2min，冰浴3min，室温静置30min，去除DNA；
S2、制备细胞蛋白提取液：
S21、将3×107个细胞收集至1.5ml离心管中；
S22、加0.5ml细胞裂解液，再加入10U/ml RNase inhibitor和0.5ug/ml的蛋白酶抑制剂，裂解细胞 ，取上清作为蛋白提取液；
S3、链霉亲和磁珠与标记生物素RNA探针孵育：：先采用500ul Wash Buffer 冲洗链霉亲和磁珠3 次，再将步骤S1标记的RNA加入链霉亲和磁珠，在温度4℃条件下过夜孵育；然后，在转速为3000rpm条件下离心1min，去上清液，最后用Wash buffer I 洗3次；
S4、标记RNA探针的磁珠与蛋白提取液孵育，富集RNA结合蛋白，得到蛋白：向S3制备的含有RNA探针的磁珠磁珠中加入1mg蛋白提取液，在温度4℃条件下孵育4h；再在转速为3000rpm条件下离心1min，去上清液；然后用Wash buffer I 洗3次后加30ul 蛋白洗脱液，在转速为12000rpm条件下离心，取上清液。
实施例3
一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液。
其中，所述细胞裂解液的配方包括如下原料：
1.5体积% NP-40；
0.35体积% 去氧胆酸钠；
Tris-HCL 55 mmoL/L ；
Nacl 160 mmoL/L；
EDTA 1.2 mmoL/L；
PMSF 1.2mmoL/L；
所述Tris-HCL的pH值为7.5。
所述洗液的配方包括如下原料：
Tris-HCL 55 mmoL/L；
EDTA 1.2 mM；
KCl 120 mM；
0.2体积% TritonX-100；
0.15体积% 丙三醇；
5.5体积% DTT；
所述Tris-HCL的pH值为7.2。
所述蛋白洗脱液的配方包括如下原料：
280 mM Tris-HCl；
11.5%（W/V）SDS；
0.6%（W/V）溴酚蓝；
55%（V/V）甘油；
6%（W/V）β-巯基乙醇；
所述Tris-HCL的pH值为7.0。
所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
S1、制备标记生物素RNA探针：依次加入线性化DNA片段2ug、Biotin RNA labeling mix2ul、10X buffer 2ul、T7 RNA 聚合酶 2ul，加水补足18ul，在温度为37℃条件下孵育3h，进行反转录，并标记此RNA；再加2ul DNase I，37℃条件下孵育20min，然后加2.5ul 0.2MEDTA，调至PH=8.0； 加Structure Buffer，在95℃条件下加热2min，冰浴3min，室温静置30min，去除DNA；
S2、制备细胞蛋白提取液：
S21、将5×107个细胞收集至1.5ml离心管中；
S22、加1ml细胞裂解液，再加入20U/ml RNase inhibitor和1ug/ml的蛋白酶抑制剂，裂解细胞 ，取上清作为蛋白提取液；
S3、链霉亲和磁珠与标记生物素RNA探针孵育：：先采用700 ul Wash Buffer 冲洗链霉亲和磁珠5 次，再将步骤S1标记的RNA加入链霉亲和磁珠，在温度4℃条件下过夜孵育；然后，在转速为5000rpm条件下离心2min，去上清液，最后用Wash buffer I 洗5次；
S4、标记RNA探针的磁珠与蛋白提取液孵育，富集RNA结合蛋白，得到蛋白：向S3制备的含有RNA探针的磁珠磁珠中加入1.5mg蛋白提取液，在温度4℃条件下孵育4h；再在转速为5000rpm条件下离心2min，去上清液；然后用Wash buffer I 洗5次后加50ul 蛋白洗脱液，在转速为12000rpm条件下离心，取上清液。
SEQUENCE LISTING
<110> 高飞
<120> 一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒及其使用方法
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 164
<212> RNA
<213> U1的RNA序列
<400> 1
auacuuaccu ggcaggggag auaccaugau cacgaaggug guuuucccag ggcgaggcuu 60
auccauugca cuccggaugu gcugaccccu gcgauuuccc caaauguggg aaacucgacu 120
gcauaauuug ugguaguggg ggacugcguu cgcgcuuucc ccug 164
Claims (9)
1.一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，其特征在于，包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混合物、T7RNA聚合酶、细胞裂解液、链霉亲和磁珠、洗液和蛋白洗脱液。
2.根据权利要求1所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解液的配方包括如下原料：
0.05~1.5体积% NP-40；
0.15~0.35体积% 去氧胆酸钠；
Tris-HCL 45~55 mmoL/L ；
Nacl 140~160 mmoL/L；
EDTA 0.8~1.2 mmoL/L；
PMSF 0.8~1.2mmoL/L；
所述Tris-HCL的pH值为7.2~7.5。
3.根据权利要求1所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，其特征在于，所述洗液的配方包括如下原料：
Tris-HCL 45~55 mmoL/L；
EDTA 0.8~1.2 mM；
KCl 80~120 mM；
0.1~0.2体积% TritonX-100；
0.05~0.15体积% 丙三醇；
4.5~5.5体积% DTT；
所述Tris-HCL的pH值为6.8~7.2。
4.根据权利要求1所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒，其特征在于，所述蛋白洗脱液的配方包括如下原料：
220~280 mM Tris-HCl；
8.5~11.5体积%（W/V）SDS；
0.4~0.6体积%（W/V）溴酚蓝；
45~55%（V/V）甘油；
4~6%（W/V）β-巯基乙醇；
所述Tris-HCL的pH值为6.6~7.0。
5.根据权利要求1~4任意一项所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、制备标记生物素RNA探针：以含有目的基因的T载体为模板，标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP为底物，通过T7RNA聚合酶经体外转录标记RNA；
S2、制备细胞蛋白提取液：
S21、将3~5×107个细胞收集至1.5ml离心管中；
S22、加0.5~1ml细胞裂解液，再加入10~20U/ml RNase inhibitor和0.5~1ug/ml的蛋白酶抑制剂，裂解细胞 ，取上清作为蛋白提取液；
S3、链霉亲和磁珠与标记生物素RNA探针孵育：将步骤S1制备的RNA探针与链霉亲和磁珠孵育，使RNA探针结合到链霉亲和磁珠上，用洗液洗掉未结合磁珠；
S4、标记RNA探针的磁珠与蛋白提取液孵育，富集RNA结合蛋白，得到蛋白：将S3制备的含有RNA探针的磁珠与细胞裂解液或纯蛋白孵育，用洗液洗掉未结合蛋白，加洗脱液洗脱结合蛋白。
6.根据权利要求5所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S1的具体步骤为：
依次加入线性化DNA片段1~2ug、Biotin RNA labeling mix 2ul、10X buffer 2ul、T7RNA 聚合酶 2ul，加水补足18ul，在温度为37℃条件下孵育2~3h，进行反转录，并标记此RNA；再加1.5~2ul DNase I，在温度为37℃条件下孵育15~20min，然后加2~2.5ul 0.2MEDTA，调至pH=7.5~8.0； 95℃条件下加热2min，冰浴3min，室温静置30min，去除DNA。
7.根据权利要求5所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S3包括如下步骤：先采用500ul~700 ul Wash Buffer 冲洗链霉亲和磁珠3~5 次，再将步骤S1标记的RNA加入链霉亲和磁珠，在温度4℃条件下过夜孵育；然后，在转速为3000~5000rpm条件下离心1~2min，去上清液，最后用Wash buffer I 洗3~5次。
8.根据权利要求5所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S4包括如下步骤：向S3制备的含有RNA探针的磁珠磁珠中加入1~1.5mg蛋白提取液，在温度4℃条件下孵育4h；再在转速为3000~5000rpm条件下离心1~2min，去上清液；然后用Washbuffer I 洗3~5次后加30~50ul 蛋白洗脱液，在转速为12000rpm条件下离心，取上清液。
9.根据权利要求1~4任一一项所述简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒用于免疫印迹检测时，阳性对照的RNA为U1的正义链，检测蛋白为snRNP70，阴性对照的RNA为U1的反义链，检测蛋白为snRNP70。
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|---|---|
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108427000A (zh) * | 2017-02-15 | 2018-08-21 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 一种捕获核酸结合蛋白的方法和试剂盒 |
| CN109957579A (zh) * | 2018-12-01 | 2019-07-02 | 复旦大学 | 基于CRISPR/cas9和APEX2系统识别特异性位点互作RNA的方法 |
| CN111366731A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-07-03 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 一种检测蛋白质和rna相互作用的方法 |
| CN112251490A (zh) * | 2020-09-17 | 2021-01-22 | 上海泽恒生物科技有限公司 | 一种RNA pulldown的回收试剂盒及其应用 |
| CN114457072A (zh) * | 2021-04-19 | 2022-05-10 | 苏州系统医学研究所 | 一种具有抗病毒活性的多核苷酸及其用途 |
| WO2022155986A1 (zh) * | 2021-01-19 | 2022-07-28 | 上海交通大学 | 一种基于共价连接的已知分子与蛋白质相互作用检测系统及其鉴定或验证方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1914222A (zh) * | 2003-12-22 | 2007-02-14 | 宾夕法尼亚州大学理事会 | 鉴定rna结合蛋白的方法和组合物 |
| CN101333564A (zh) * | 2007-06-27 | 2008-12-31 | 上海仁度生物科技有限公司 | 提取、纯化靶核酸的方法及其应用 |
-
2016
- 2016-07-25 CN CN201610592411.3A patent/CN106093436B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1914222A (zh) * | 2003-12-22 | 2007-02-14 | 宾夕法尼亚州大学理事会 | 鉴定rna结合蛋白的方法和组合物 |
| CN101333564A (zh) * | 2007-06-27 | 2008-12-31 | 上海仁度生物科技有限公司 | 提取、纯化靶核酸的方法及其应用 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| THERMO SCIENTIFIC: "Piece magnetic RNA-protein pull-down kit", 《百度文库》 * |
| TONG-HONG WANG等: "Long noncoding RNA CPS1-IT1 suppresses the metastasis of hepatocellular carcinoma by regulating HIF-1 alpha activity and inhibiting epithelial-mesenchymal transition.", 《ONCOTARGET》 * |
| 伍会健、唐颖主编: "《细胞与分子生物学实验指南》", 31 July 2011 * |
| 刘玲燕: "非编码RNA调控食管癌转移的功能机制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
| 叶棋浓主编: "《现代分子生物学技术及实验技巧》", 31 August 2015 * |
| 汪家政、范明主编: "《蛋白质技术手册》", 31 March 2001 * |
| 韩为: "PCBP2在人神经胶质瘤细胞中的作用及其分子机制", 《中国博士学位论文全文数据库》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108427000A (zh) * | 2017-02-15 | 2018-08-21 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 一种捕获核酸结合蛋白的方法和试剂盒 |
| CN108427000B (zh) * | 2017-02-15 | 2021-06-08 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 一种捕获核酸结合蛋白的方法和试剂盒 |
| CN109957579A (zh) * | 2018-12-01 | 2019-07-02 | 复旦大学 | 基于CRISPR/cas9和APEX2系统识别特异性位点互作RNA的方法 |
| CN111366731A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-07-03 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 一种检测蛋白质和rna相互作用的方法 |
| CN112251490A (zh) * | 2020-09-17 | 2021-01-22 | 上海泽恒生物科技有限公司 | 一种RNA pulldown的回收试剂盒及其应用 |
| CN112251490B (zh) * | 2020-09-17 | 2024-03-22 | 上海泽恒生物科技有限公司 | 一种RNA pulldown的回收试剂盒及其应用 |
| WO2022155986A1 (zh) * | 2021-01-19 | 2022-07-28 | 上海交通大学 | 一种基于共价连接的已知分子与蛋白质相互作用检测系统及其鉴定或验证方法 |
| CN114457072A (zh) * | 2021-04-19 | 2022-05-10 | 苏州系统医学研究所 | 一种具有抗病毒活性的多核苷酸及其用途 |
| CN114457072B (zh) * | 2021-04-19 | 2023-08-15 | 苏州系统医学研究所 | 一种具有抗病毒活性的多核苷酸及其用途 |
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