CN106085888B - 扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途 - Google Patents

扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN106085888B
CN106085888B CN201610438783.0A CN201610438783A CN106085888B CN 106085888 B CN106085888 B CN 106085888B CN 201610438783 A CN201610438783 A CN 201610438783A CN 106085888 B CN106085888 B CN 106085888B
Authority
CN
China
Prior art keywords
saccharomycopsis fibuligera
new strains
bacterial strain
fibuligera
saccharomycopsis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610438783.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106085888A (zh
Inventor
邓小晨
吴谦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Boyu Biological Engineering Co ltd
Original Assignee
Sichuan Boyu Biological Engineering Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Boyu Biological Engineering Co ltd filed Critical Sichuan Boyu Biological Engineering Co ltd
Priority to CN201610438783.0A priority Critical patent/CN106085888B/zh
Publication of CN106085888A publication Critical patent/CN106085888A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106085888B publication Critical patent/CN106085888B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor

Abstract

本发明属于微生物领域，具体涉及涉及一种扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)新菌株及其培养方法和用途。本发明要解决的技术问题是提供能同时具有较好的脱除硫甙和棉酚能力的技术手段。本发明解决该技术问题的技术方案是提供一种新的扣囊复膜孢酵母菌株。该扣囊复膜孢酵母菌株的保藏号CGMCC No.12221，命名为扣囊复膜孢酵母WNY‑2号。该菌株对菜粕中硫葡萄糖甙以及棉粕中棉酚均有较强脱毒能力的扣囊复膜孢酵母，并且试验证明其口服安全无毒。本发明为杂粕类微生物技术处理提供了菌种资源，为大规模制备新型生物蛋白原料提供了可靠基础，在饲料养殖领域具有极大的应用价值。

Description

扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及涉及一种扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsisfibuligera)新菌株及其培养方法和用途。
背景技术：
目前我国有大量农副产品及加工副产物或被废弃或未能有效利用，如菜粕和棉粕等杂粕类，我国每年菜粕年产量约900万吨，棉粕产量约600万吨，蛋白含量高，营养成分丰富，但由于含有较多毒性物质和抗营养因子，在饲料中利用率极低。菜粕中毒性物主要是硫葡萄糖甙(简称硫甙)，棉粕中毒性物主要是棉酚。未经处理的菜粕及棉粕，在畜禽饲料中添加量仅能达到3～5％(幼小畜禽不能添加)，过量使用会造成畜禽器官损害，生长和繁殖性能下降。
目前，使用微生物技术处理杂粕类生物质已有所报道，使用微生物处理能使硫甙或棉酚含量降低，饲喂价值提高，可替代部分进口豆粕，降低养殖成本。另外，经发酵处理后的粕类含有大量益生菌，能提高动物非特异性抗病力，减少抗菌药物的使用，提高食品安全性。因此，筛选出有较强脱毒能力的菌株对杂粕类生物技术处理有重要意义。目前未见有同时具有较好的脱除硫甙和棉酚能力的菌种报道。
发明内容：
本发明中涉及一株Saccharomycopsis fibuligera扣囊复膜孢酵母WNY-2号，该菌株于2016年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.12221，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
本发明要解决的技术问题是提供一种能同时具有较好的脱除硫甙和棉酚能力的新菌种。本发明解决该技术问题的技术方案是提供一种新的扣囊复膜孢酵母菌株。该扣囊复膜孢酵母菌株的保藏号CGMCC No.12221。
其中，该扣囊复膜孢酵母的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。
本发明还提供了上述扣囊复膜孢酵母的培养方法。该方法包括以下步骤：将所述扣囊复膜孢酵母新菌株接种到配方为蔗糖10～20g︰土豆浸出液1000ml的培养基中，在28～32℃温度下培养72～96h。
其中，上述方法中所述的土豆浸出液由以下步骤制得：将土豆削皮后切成块状，每200g土豆加入1000ml的自来水，煮沸20分钟，纱布过滤，弃土豆渣取上清液，用自来水定容到1000ml。
本发明还提供了扣囊复膜孢酵母在菜粕生物发酵中的用途。扣囊复膜孢酵母在菜粕上进行发酵可降解硫甙。
本发明还提供了扣囊复膜孢酵母在棉粕生物发酵中的用途。扣囊复膜孢酵母在棉粕上进行发酵可降解棉酚。
本发明的有益效果在于：本发明发现一株对菜粕中硫葡萄糖甙以及棉粕中棉酚均有较强脱毒能力的扣囊复膜孢酵母。该菌株在48小时内，对硫葡萄糖甙的去除率可达到约80％，对棉酚的去除率可达60％以上，并且试验证明其口服安全无毒。本发明为杂粕类微生物技术处理提供了菌种资源，并为大规模制备新型生物蛋白原料提供了可靠基础，在饲料养殖领域具有极大的应用价值。
本发明提供的扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)WNY-2号，于2016年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.12221。保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
附图说明：
图1本菌株扣囊复膜孢酵母的细胞形态，放大倍数10×10
图2本菌株扣囊复膜孢酵母的细胞形态，放大倍数40×10
图3本菌株扣囊复膜孢酵母的菌落形态
具体实施方式：
本发明创造性地提供了扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)的一种新菌株，该菌株对硫葡萄糖甙和棉酚都具有较高的降解能力，能同时用在棉粕和菜粕的处理中，命名为扣囊复膜孢酵母WNY-2，于2016年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.12221。
该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。
该菌株的形态学特征如下：
镜下特征：
细胞呈椭圆形，细胞大小长5～7.5μm(平均6.2μm)；宽3.8～5μm(平均4.5μm)。可见细胞出芽，呈单边出芽繁殖。早期生长形成菌丝，并产生芽孢子。(参见图1和图2)
菌落特征：
菌落白色，扁平；直径约5～10mm；表面粗糙，呈颗粒感；菌落边缘不齐，似放射丝状，在放大镜下，可见菌丝。(参见图3)
进一步的，该菌株的生理生化特征如下：
糖发酵实验：麦芽糖、蔗糖、果糖、海藻糖、半乳糖、木糖和赤癣糖阳性；乳糖、阿拉伯糖、棉籽糖和水苏糖阴性；
碳源同化实验：乳酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、丙酸钠、甘油、乙醇、乳糖、阿拉伯糖、棉籽糖和水苏糖阳性。
氮源利用实验：能利用硝酸盐、硫酸铵和尿素。
本发明菌株可由以下具体的培养方法进行培养：
1、斜面保存菌种及培养
从扣囊复膜孢酵母斜面菌种中，用接种环挑取1环接种到土豆蔗糖培养基的斜面中，其成分为蔗糖10～20g，土豆浸出液1000ml，20g琼脂粉，自然pH。置于28～32℃温度下，培养72～96h。
进一步的，所述培养基成分中土豆浸出液的制备方法是，将新鲜土豆削皮后切成大指姆大小的块状，称取200g，加入1000ml的自来水，煮沸20分钟，纱布过滤，弃渣取上清液，用自来水定容到1000ml；
2、扩大培养
(1)用于菜粕发酵
取菜粕粉150g，加水1000ml，小火煮沸20min，取上清液，加入蔗糖10g、KH2PO4 1g、MgSO4 0.5g、溶化后水定容1000ml，蒸汽灭菌120℃维持30分钟，待冷后备用；
(2)用于棉粕发酵
取棉粕粉150g，加水1000ml，小火煮沸20min，取上清液，加入棉籽糖10g、KH2PO41g、MgSO4 0.5g，溶化后水定容1000ml，蒸汽灭菌120℃维持30分钟，待冷后备用；
从斜面菌株中挑取培养物，接入以上培养液中，接种量按1环/200ml。于28～32℃温度下，摇瓶培养48～60h，振摇速度120～150rpm，得到扣囊复膜孢酵母培养液。
以下通过实施例对本发明进行更进一步的说明。
实施例1菌株的筛选
在研究传统白酒酿造的过程中，本发明从酒厂丢糟中筛选得到一些菌株。经过进一步的研究，一些菌株培养中的生物量较高，因而将其在各种农副产物(包括丢糟等各类加工糟渣)为基质上培养，均生长良好。进一步发现有一株菌在饼粕类原料上，有降低毒性物质含量的作用。将其命名为WNY-2，并进行进一步的研究。
实施例2菌株的鉴定——16S rDNA序列分析
(1)总DNA提取
用土豆蔗糖培养液培养后，离心收集细胞，并用无菌蒸馏水洗涤3次，溶于提取缓冲液(100mMTris·Cl，100mM EDTA-Na2，200mM NaCl，2％CTAB，pH8.0)中，37℃振荡45min，加入20％SDS，65℃水浴1h。12,000rpm，离心10min，收集上清液。上清液用等体积的酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)抽提2次，加入终浓度0.3M的NaAC(pH5.2)及2倍体积的无水乙醇，室温沉淀1h。4℃下离心(12,000rpm)20min。沉淀用70％乙醇洗涤2次，挥干后溶于50μL TE(10mmTris-Hcl，1mmNa2EDTA)中。
(2)16S rDNA扩增和测序
以总DNA为模板，用试剂盒扩增得到16S rDNA产物，送测序公司测序。测序结果表明，该菌株的16S rDNA(SEQ ID No.1)序列如下：
TCAATTCGTCAAGTGGAGTTGCCTCCTCCTTTAACCAATCCTGAGGCCTCACTAAGCCATTCAATCGGTACTAGCGACGGGCGGTGTGTACAAAGGGCAGGGACGTAATCAACGCAAGCTGATGACTTACGCTTACTAGGAATTCCTCGTTGAAGAGCAATAATTGCAATGCTCTATCCCCAGCACGACGGAGTTTCACAAGATTACCCATACCTCTCGGCAAAGGATATACTCGTTGGCTCCGTCAGTGTAGCGCGCGTGCGGCCCAGAACGTCTAAGGGCATCACAGACCTGTTATTGCCTCAAACTTCCATCGGCTTGAAACCGATAGTCCCTCTAAGAAGTAACTATATCAGCAAACGCTAACAGTACTATTTAGTAGGTTAAGGTCTCGTTCGTTATCGCAATTAAGCAGACAAATCACTCCACCAACTAAGAACGGCCATGCACCACCACCCACAAAATCAAGAAAGAGCTCTCAATCTGTCAATCCTTATTGTGTCTGGACCTGGTGAGTTTCCCCGTGTTGAGTCAAATTAAGCCGCAGGCTCCACTCCTGGTGGTGCCCTTCCGTCAATTCCTTTAAGTTTCAGCCTTGCGACCATACTCCCCCCAGAACCCAAAAACTTTGATTTCTCGTAAGGTGCCGAGTGAGTCAGTAAAAGAACAACACCCGATCCCTAGTCGGCATAGTTTATGGTTAAGACTACGACGGTATCTGATCATCTTCGATCCCCTAACTTTCGTTCTTGATTAATGAAAACGTCCTTGGCAAATGCTTTCGCAGTAGTTAGTCTTCAATAAATCCAAGAATTTCACCTCTGACAATTGAATACTGATGCCCCCGACCGTCCCTATTAATCATTACGATGGTCCTAGAAACCAACAAAATAGAACCATACGTCCTATTTCATTATTCCATGCTAATATATTCGAGCTAAACGCCTGCTTTGAACACTCTAATTTTTTCAAAGTAATAGTCCTGGATCATATGCAGCTGAGACAAGCCCAACTACACAGAAACCAGGAGGAAAGGCTCGGCTGAAAACCAGTACTCGTTAAAAAACGGACCGGCCAGCCAAGCCCAAAGTTCAACTACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTCTTGGAGCTGGAATTACCGCGGCTGCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCCTCGTTAAGGTATTTAAATTGTACTCATTCCAATTACAAGACCCGTAAGGGCCCTGCATCGTTATATATTGTCACTACCTCCCTGTGTCAGGATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTTGGATGTGGTAGCCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACCCTTATTCCCCGTTACCCGTTGAAACCATGGTAGGCCACTATCCTACCATCGAAAGTTGATAGGGCAGAAATTTGAATGAACCATCGCCAGCATGAAGCCTTGCGATTCGAGAAGTTATTATGAATCACCAAAGAGCACCGAAGTTATTG。
表1同源性对比分析结果
经同源性对比分析(结果参见表1)，将其命名为扣囊复膜孢酵母WNY-2，于2016年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCCNo.12221。
实施例3本发明菌株CGMCC No.12221的形态特征及生理生化特性鉴定
1、菌落及菌体形态观察
将本菌株划线接种在土豆蔗糖平板培养基上，30℃培养4天，培养期间观察菌落形态(见图3)；用接种针挑取少许菌体，用水浸片法制片，于显微镜下观察菌体形态(见图1和图2)。
结果如下：镜下细胞呈椭圆形，细胞大小长5～7.5μm(平均6.2μm)；宽3.8～5μm(4.5μm)。可见细胞出芽，呈单边出芽繁殖。早期生长形成菌丝，并产生芽孢子(见图1和图2)
菌落特征：
菌落白色，扁平；直径约5～10mm；表面粗糙，呈颗粒感；菌落边缘不齐，似放射丝状，在放大镜下，可见菌丝。(见后图3)
2、生理生化特征
无碳基础培养液配方：
(NH4)2SO4 0.1％、KH2PO4 0.1％MgSO4 0.05％酵母膏0.2％自然pH
无氮基础培养液配方：
葡萄糖1％、KH2PO4 0.1％MgSO4 0.05％酵母膏0.2％自然pH
所用碳源和氮源如下：
糖类：麦芽糖、蔗糖、乳糖、果糖、阿拉伯糖、海藻糖、半乳糖、赤癣糖、棉籽糖、木糖、水苏糖
非糖类：乳酸钠柠檬酸钠乙酸钠丙酸钠甘油乙醇
氮源：硝酸钠、硫酸铵、尿素
糖发酵试验：
将无碳基础培养液分装试管5ml/只(加杜氏管)，将不同的糖类分别加入不同试管中(50mg/管)。灭菌115℃维持25min。待冷后接种。30℃培养4天。
碳源同化试验：
将无碳基础培养液分装三角瓶40ml/只，每瓶加入不同的碳源(糖类及非糖类，乙醇除外)0.5ml(液体)或0.5g(固体)，以及0.8g琼脂。灭菌115℃维持25min。待冷却到50℃时倒平板(乙醇在倒平板前加入)。待平板凝固后接种，每皿在不同位置点种3点，30℃培养4天。
氮源利用试验：
将无氮基础培养液分装三角瓶40ml/只，分别加入硝酸钠、硫酸铵和尿素，各50mg，以及0.8g琼脂。灭菌115℃维持25min。待冷却到50℃时倒平板。待平板凝固后接种，每皿在不同位置点种3点，30℃培养4天。
实验结果如下表2、表3和表4所示：
表2糖发酵实验结果
注：—表示生长并有气泡，+表示生长无气泡，-表示不生长。
表3碳源同化实验结果
注：+生长，-表示不生长。
表4氮源利用实验结果
硝酸盐 硫酸铵 尿素
本菌株 + + +
注：+表示生长
实施例4棉酚降解实验
将棉粕原料粉碎，得到棉粕粉。再制备扣囊复膜孢酵母CGMCC No.12221的固体菌种；
从扣囊复膜孢酵母的斜面保藏菌种中挑取1环(接种环)，接入100mL棉粕扩大培养液中，于30℃温度摇瓶培养(150rpm)50h，得到扣囊复膜孢酵母培养液。
取扣囊复膜孢酵母液50ml，接入已灭菌的4000g麸皮玉米培养基中(以干料计)，拌合均匀，于30℃温度培养48h，即得扣囊复膜孢酵母固体菌种。
麸皮玉米培养基的制备：取麸皮3000g，玉米1000g，自来水3200ml，拌合均匀后，于120℃灭菌30min，冷却后可接种。
配制混合营养盐：称取KHPO4 200g、MgSO4 100g、FeSO4 10g和ZnSO4 5g用粉碎机混合粉碎，全部过100目。
取棉粕粉990g、扣囊复膜孢酵母固体菌种8g、混合营养盐2g、和800g水。
拌合混匀，在不锈钢盘中平铺均匀，厚度4cm，于30℃温度下发酵48h，50℃温度下干燥24h后，即得到发酵棉粕。
游离棉酚测定方法按GB 13086—91。
对照未发酵棉粕原料的游离棉酚为833mg/kg，水分11.9％、粗蛋白46.2％。
测定发酵棉粕的细胞数为1.8×109/g，水分12.5％、粗蛋白51.4％、游离棉酚309mg/kg。游离棉酚降低62.9％。
实施例5本菌株芥子酶测定
(1)粗酶液制备
从扣囊复膜孢酵母CGMCC No.12221菌株斜面中挑取1环，接种在100ml 20％菜粕培养液(20g菜粕粉，加100ml水，煮沸20min，水定容100ml，再加0.05g KH2PO4，灭菌待用)中，30℃，150r/min振荡培养48h，离心收集细胞。用0.02mol/ml Tris-HCl(pH6.0)洗涤3次，并悬浮沉淀定容至10ml。在冰浴中超声破碎20min。在4℃下离心10000rpm 10min，取上清液。
(2)芥子酶鉴定
配制3mg/ml丙烯基硫甙标品(Sigma)溶液。分别取0.5ml粗酶液至两只10ml比色管中，将其中一支置于沸水浴中加热10min(灭酶)，冷却至室温。在两只比色管中各加30ul硫甙标品溶液，37℃保温3h，用蒸馏水定容至5ml。再用3,5-二硝基水杨酸(DNS)定糖法测定两只比色管溶液中葡萄糖差值，从葡萄糖标准曲线推算硫甙含量为2.95mg/ml。粗酶液与硫甙标品反应生成了葡萄糖，表明本菌株提取物中含有芥子酶。
实施例6本菌株发酵菜粕降解硫甙实验
1、固体菌种制备
从扣囊复膜孢酵母CGMCC No.12221的斜面保藏菌种中挑取1环，接入100mL菜粕扩大培养液中，于30℃温度摇瓶培养(150rpm)48h，得到扣囊复膜孢酵母培养液。
取扣囊复膜孢酵母液50ml，接入已灭菌的4000g麸皮玉米培养基中(以干料计)，拌合均匀，于30℃温度培养48h，即得扣囊复膜孢酵母固体菌种。
麸皮玉米培养基的制备：取麸皮3000g，玉米1000g，自来水3200ml，拌合均匀后，于120℃灭菌30min，冷却后可接种。
2、菜粕发酵
配制混合营养盐：称取KH2PO4 200g、MgSO4 90g和ZnSO4 10g用粉碎机混合粉碎，全部过100目。
取菜粕粉、扣囊复膜孢酵母、混合营养盐和水。拌合混匀，实验分组见下表5。在不锈钢盘中平铺均匀，厚度3cm，于30℃温度下发酵48h，50℃温度下干燥24h后，即得到发酵菜粕。
表5菜粕发酵实验分组
样品号 1 2 3 4 5
菜粕粉(g) 993 990 988 983 990
固体菌种(g) 5 8 10 15 8
混合营养盐(g) 2 2 2 2 2
水(ml) 800 800 800 800 900
3、硫甙测定
采用微生物酶法测定，粗酶液制备参见实施例5。
取发酵样品2g，加入0.02mol/ml Tris-HCl(pH6.0)100ml，振荡(120rpm)30℃浸泡30min，离心取上清液。
分别取1ml粗酶液至两支比色管中，将其中一支置于沸水浴中加热10min(灭酶)，冷却至室温。再在两支中各加发酵菜粕上清液1ml。置于37℃水浴锅中保温3h，再用蒸馏水定容至5ml。加入0.5ml DNS试剂。置于沸水浴中显色反应5min。冷却至室温，蒸馏水定容至10ml。于540nm波长条件下测定吸光度A，在葡萄糖标准曲线中查出葡萄糖含量。根据葡萄糖差值算出硫甙含量。结果见下表6。
表6发酵菜粕样品中硫甙含量测定
样品号 吸光度A差值 硫甙含量(mg/g) 降低(％)
原料 0.523 53.44 ——
1 0.034 16.15 69.78
2 0.014 11.01 79.39
3 0.034 14.45 72.96
4 0.034 17.98 66.35
5 0.034 16.91 68.36
结果表明，该菌株对单一菜粕作为发酵底物时，可以降低其中的硫甙达79.39％。
实施例7菌株安全性试验—小鼠经口急性毒性试验
1、受试物
制备方法：将新鲜土豆削皮后切块，称取100g，加水500ml，煮沸20分钟，过滤后取上清液，加入蔗糖10g，用水定容到500ml，分装250ml三角瓶，每瓶100ml，包扎并蒸汽灭菌120℃维持30分钟。从扣囊复膜孢酵母斜面菌种中挑取1环，接种到三角瓶中，30℃摇瓶培养(150rpm)48h，做为动物实验的受试物。
2、实验动物动物
由四川省医学科学院实验动物研究所提供的昆明种小鼠20只，体重为18～20g，雌雄各半。动物采用群饲，饲料来源于四川省医学科学院实验动物研究所。实验动物房为SPF级，温度20～25℃，相对湿度40～70％。
3、剂量和染毒方式：试验前禁食16小时，不限饮水。实验采用的最大耐受剂量法，设20ml/kg.b.w(d＝1.01,20×1.01＝20200mg/kg.b.w)为最大剂量。共20只动物，雌雄各半。一次经口灌胃给予受试物，给药量按20ml/kg.b.w等容量计。染毒后观察动物的一般状况、中毒症状及死亡情况。观察二周称体重后处死动物并进行大体解剖，记录动物内脏的改变，根据MTD值进行急性毒性分级。
3、实验结果
染毒后二周内，雌、雄小鼠均未出现明显的中毒症状及死亡，实验结束时处死动物进行大体解剖，也未见异常改变。见表7。
表7小鼠急性经口毒性试验结果
4、结论
试验结果表明，本菌株发酵产物对雌、雄小鼠急性经口最大耐受剂量均大于15000mg/kg.b.w，按急性毒性分级，属无毒级。

Claims (5)

1.扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)新菌株，其特征在于：所述扣囊复膜孢酵母新菌株的保藏号为CGMCC No.12221。
2.权利要求1所述的扣囊复膜孢酵母新菌株的菌种保藏培养方法，其特征在于包括以下步骤：将所述扣囊复膜孢酵母新菌株接种到配方为蔗糖10～20g︰土豆浸出液1000ml的培养基中，在28～32℃温度下培养72～96h。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述土豆浸出液由以下步骤制得：将土豆削皮后切成块状，每200g土豆加入1000ml的自来水，煮沸20分钟，纱布过滤，弃土豆渣取上清液，用自来水定容到1000ml。
4.权利要求1所述的扣囊复膜孢酵母新菌株在菜粕生物发酵处理中的用途。
5.权利要求1所述的扣囊复膜孢酵母新菌株在棉粕生物发酵处理中的用途。
CN201610438783.0A 2016-06-17 2016-06-17 扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途 Active CN106085888B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610438783.0A CN106085888B (zh) 2016-06-17 2016-06-17 扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610438783.0A CN106085888B (zh) 2016-06-17 2016-06-17 扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106085888A CN106085888A (zh) 2016-11-09
CN106085888B true CN106085888B (zh) 2019-04-23

Family

ID=57236760

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610438783.0A Active CN106085888B (zh) 2016-06-17 2016-06-17 扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106085888B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106987531B (zh) * 2017-05-05 2019-12-20 湖南农业大学 一株葡萄酒复膜孢酵母及其在单萜生产中的应用
CN107475030A (zh) * 2017-10-12 2017-12-15 绍兴文理学院 一种纯种小曲的生产工艺
CN108251317B (zh) * 2018-03-30 2020-03-10 陕西枫丹百丽生物科技有限公司 一株扣囊复膜孢酵母及其应用
CN112980704B (zh) * 2020-12-29 2022-07-08 江苏瑞霆生物科技有限公司 一种用于制备天然香气发酵大米滤液的酵母菌及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563352A (zh) * 2004-03-18 2005-01-12 浙江省农业科学院 用于农业废弃物处理的发酵菌剂及其制备方法
CN1724642A (zh) * 2005-04-29 2006-01-25 东北农业大学 改善奶牛生产性能的酵母培养物及其培养方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563352A (zh) * 2004-03-18 2005-01-12 浙江省农业科学院 用于农业废弃物处理的发酵菌剂及其制备方法
CN1724642A (zh) * 2005-04-29 2006-01-25 东北农业大学 改善奶牛生产性能的酵母培养物及其培养方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
糖化酵母直接发酵甘薯原料生产蛋白强化饲料;王普等;《浙江工业大学学报》;19981231;第26卷(第4期);282-287 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106085888A (zh) 2016-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102181376B (zh) 同时降解玉米赤霉烯酮和纤维素的枯草芽孢杆菌及其应用
CN106260540B (zh) 一种用于教槽料的生物饲料及教槽料
CN106085888B (zh) 扣囊复膜孢酵母新菌株及其培养方法和用途
CN103098981B (zh) 一种提高柑橘渣饲料蛋白水平的脱水固态组合菌剂及其制作方法
CN103396956B (zh) 一种酿酒酵母及其筛选培养方法和用于豆粕发酵的方法
CN115287202B (zh) 一株马克斯克鲁维酵母菌及其在制备功能性饲料方面的应用
CN102093958B (zh) 一种超薄发酵床菌剂的生产方法
CN109423465A (zh) 一种控制黄曲霉毒素b1的复合生物制剂及其应用
CN103468594A (zh) 一种产朊假丝酵母菌株及其应用
CN107177521A (zh) 一种发酵有机肥的复合菌剂及其制备方法和应用
CN102329749B (zh) 一株经航天育种技术选育的枯草芽孢杆菌及其应用
CN106578723A (zh) 一种香菇菌渣发酵饲料及改善吉富罗非鱼肉质的饲养方法
CN106566788B (zh) 利用耐银土壤芽孢杆菌生物合成纳米硒的方法及其应用
CN101270336A (zh) 热带假丝酵母zd-3菌株及其用途及用以生产生物蛋白饲料的方法
CN101481664A (zh) 一种抑制黄曲霉危害花生生产、贮藏的工艺技术
CN106479944A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN107937286B (zh) 一种异常毕赤酵母及其发酵培养物和应用
CN103642695B (zh) 一株米曲霉及其在微生物发酵制备饲料添加剂中的应用
CN1264969C (zh) 用于农业废弃物处理的发酵菌剂及其制备方法
CN112877223B (zh) 微生物腐熟剂及其制备和在有机物料发酵腐熟中的应用
CN110150457A (zh) 一种抑菌型酵母培养物及其应用
CN111690573B (zh) 一种可用于动物肠道益生菌的希氏乳杆菌及其发酵制备的酵素和应用
CN100338211C (zh) 农业废弃物发酵菌剂及其制备方法
CN111748490A (zh) 一种清酒乳杆菌及其应用
CN111363692A (zh) 一种复合菌剂及其发酵产物的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant