CN106085886A - 一种可诱导芒果流胶病菌产生子囊孢子的培养基 - Google Patents

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郭堂勋
黄穗萍
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Abstract

本发明提供一种可诱导芒果流胶病菌产生有性态子囊孢子的培养基，是在PDA培养基的基础上添加无菌松针得到的。将芒果流胶病菌菌丝块接种于本发明的培养基上，在25‑28℃下光照条件下培养1周，然后转移至有太阳光照射的25‑28℃培养室内窗台继续培养1‑2周即可产生大量子囊壳、子囊及子囊孢子。本发明为人工培养而获得大量芒果流胶病菌子囊孢子提供了一种简单、经济有效的培养基及方法，为芒果流胶病原菌的生物学特性、侵染特性及其它遗传学研究提供了技术支持。

Description

一种可诱导芒果流胶病菌产生子囊孢子的培养基
技术领域
本发明属于植物保护技术领域，具体来说，本发明涉及一种可诱导芒果流胶病菌产生有性态子囊孢子的培养基及其应用。
背景技术
葡萄座腔菌科(Botryosphaeriaceae)真菌广泛分布于世界各地，其种类繁多，寄主植物多种多样，既可作为病原菌引起树木溃疡病，又能作为内生真菌潜伏在寄主植物组织中。芒果流胶病是我国芒果种植区的常见病害，各地均有发生。该病可由葡萄座腔菌属的可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae，七叶树壳梭孢Fusicoccum aesculi和小新壳梭孢Neofusicoccum parvum引起，其中主要病原是可可毛色二孢。
迄今为止，关于芒果流胶病菌的侵染特性及病害发生规律的报道较少，给防治该病带来了较大困难。芒果流胶病菌可产生子囊孢子和分生孢子，子囊孢子可能是病原菌主要的初侵染来源之一。目前其有性态子囊壳及子囊孢子只在田间寄主植物上少量观察到，国内外尚未见该菌在人工培养基上产生子囊壳、子囊及子囊孢子的报道。真菌通用的培养基如马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、燕麦培养基可以满足该病原菌菌丝生长，但不能很好的满足该菌生长发育产生有性态的子囊孢子。由于在实验室内获得子囊孢子较为困难，极大的影响了对芒果流胶病病原菌生活史、遗传变异及其发生规律等的研究，从而阻碍了对该病防治技术的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诱导芒果流胶病菌子囊孢子的培养基。
本发明的一种可诱导芒果流胶病菌产生子囊孢子的培养基是含有松针的PDA培养基。
在本发明的一个实施例中，是将松针剪短至5-8cm长，称量1-3g，用1％次氯酸钠表面消毒10min，无菌水冲洗2-3次后，将松针转移至含有20mL PDA的平板上。
所述培养基是将灭菌松针加入PDA培养基中，松针与PDA培养基的质量体积比为1-10g：5-150ml。
优选地，灭菌松针与PDA培养基的质量体积比为1-3g：10-100ml。
更优选地，灭菌松针与未凝固的PDA培养基的质量体积比为2-3g：20-50ml。
本发明的培养基，每20毫升能够产生≥1×107个子囊孢子。
本发明提供了上述培养基在诱导芒果流胶病菌产生有性态子囊孢子中的应用。
本发明提供上述培养基在研究芒果流胶病菌生物学特性或侵染特性中的应用。
进一步地，本发明提供了一种可诱导芒果流胶病菌产生子囊孢子的方法，包括以下步骤：
(1)将芒果流胶病菌接种于上述含无菌松针的PDA培养基中；
(2)光照下连续培养7-10天；
(3)自然状态下继续培养7-21天。
其中，步骤(1)所述的芒果流胶病菌为可可毛色二孢(Lasiodiplodiatheobromae)、七叶树壳梭孢(Fusicoccum aesculi)或小新壳梭孢(Neofusicoccumparvum)。
在本发明的一个实施例中，是将PDA培养基上培养的芒果流胶病菌菌丝块(直径5-8mm)转移至表面放有松针的PDA平板上。
其中，步骤(2)培养条件：温度为25-28℃，光照强度为400-1500LUX。
其中，步骤(3)所述的自然状态是指白天有太阳光，晚上为黑暗的培养状态，且培养温度为25-28℃。
本发明的有益效果在于：本发明各物质成分价格低廉，操作简单，分别以葡萄糖和马铃薯汁提供营养生长的必需元素，加入的无菌松针并辅以太阳光照射诱导了芒果流胶病菌产生子囊壳、子囊及子囊孢子。常规的马铃薯葡萄糖琼脂或单独的松针均不能产生子囊孢子，而本发明巧妙的将PDA和松针结合为含有松针的培养基，培养2-3周产生子囊孢子量可多于1×107个孢子/20mL培养基。本发明可为芒果流胶病病原菌的生物学特性、生活史、侵染特性、病害发生规律及防治技术研究奠定基础，也可为其他寄主植物的葡萄座腔菌属子囊孢子的产生提供借鉴。
附图说明
图1为可可毛色二孢在含有松针的PDA培养基上生长及产生子囊壳情况；
图2为七叶树壳梭孢在含有松针的PDA培养基上生长及产生子囊壳情况；
图3为小新壳梭孢在含有松针的PDA培养基上生长及产生子囊壳情况；
图4为显微镜下可可毛色二孢菌子囊壳(×100)；
图5为显微镜下七叶树壳梭孢菌子囊壳(×100)；
图6为显微镜下小新壳梭孢菌子囊壳(×100)；
图7为显微镜下可可毛色二孢菌子囊及子囊孢子(×1000)；
图8为显微镜下七叶树壳梭孢菌子囊及子囊孢子(×1000)；
图9为显微镜下小新壳梭孢菌子囊及子囊孢子(×1000)。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，本发明实施例中所用的实验材料、试剂和仪器等均可市售获得，若未具体指明，实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)、七叶树壳梭孢(Fusicoccumaesculi)或小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)为申请人从芒果流胶病发病枝条上分离得到，现保藏于广西农业科学院植物保护研究所真菌室，并经致病性测定、形态学和分子生物学鉴定确认。病原分离和鉴定的相关内容请见植物保护学报，2015，42(4):669－670。
实施例1不同培养基对芒果可可毛色二孢菌丝生长及产子囊孢子的影响
1、七种培养基的配方及制作方法：
(1)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)
葡萄糖20g，去皮土豆200g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，新鲜松针。将去皮土豆200g，加1000mL水煮沸15min，四层纱布过滤，然后将滤汁定容至1000mL，琼脂粉15-20g，加琼脂粉融化后分装灭菌。
(2)燕麦琼脂培养基(OA)
燕麦片30g，琼脂15-20g，水1000mL。燕麦片加水1000mL，煮沸30min，纱布过滤后加水补足1000mL，加琼脂粉融化后分装灭菌。
(3)无菌松针
将松针剪短至5-8cm长，称量1-3g，用1％次氯酸钠表面消毒10min，无菌水冲洗2-3次后，晾干转移至培养皿内。
(4)水琼脂松针
琼脂15-20g，水1000mL，加热至琼脂完全融化后分装灭菌。将水琼脂加热融化后，用移液器吸取20mL到9cm的培养皿内制成水琼脂平板，然后将松针剪短至5-8cm长，称量1-3g，用1％次氯酸钠表面消毒10min，无菌水冲洗2-3次后，将松针转移至水琼脂平板上。
(5)无菌柏树叶
将柏树叶剪短至3-6cm长，称量1-2g，用1％次氯酸钠表面消毒10min，无菌水冲洗2-3次后，晾干转移至培养皿内。
(6)马铃薯葡萄糖松针培养基
将PDA培养基融化后，用移液器吸取20mL到9cm的培养皿内制成PDA平板，然后将松针剪短至5-8cm长，称量1-3g，用1％次氯酸钠表面消毒10min，无菌水冲洗2-3次后，将松针转移至PDA平板上。含松针的PDA培养基即为本发明的培养基。
(7)马铃薯葡萄糖柏树叶培养基
将PDA培养基融化后，用移液器吸取20mL到9cm的培养皿内制成PDA平板，然后将柏树叶剪短至3-6cm长，称量1-2g，用1％次氯酸钠表面消毒10min，无菌水冲洗2-3次后，将柏树叶转移至PDA平板上。
将在PDA上培养4-5天的芒果流胶病菌菌丝块(直径5-8mm)，分别接种到上述七种培养基上：马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、燕麦培养基(OA)、无菌松针、柏树叶、水琼脂加松针、含松针的PDA培养基、马铃薯葡萄糖琼脂加柏树叶等培养基上，置于25℃-28℃下光照(400-1500LUX)培养7天，然后置于有太阳光照射的25℃-28℃培养室内窗台上自然状态下继续培养7-14天。
结果发现可可毛色二孢在松针、柏树叶、水琼脂加松针上生长缓慢或不生长，在PDA、OA菌丝生长迅速但不产生子囊孢子，在PDA加松针的培养基上，菌丝生长迅速且在培养2-3周后产生子囊壳及子囊孢子(见图1，图4，图7)，孢子数量可达5×107个孢子/20mL培养基。
实施例2不同培养基对芒果七叶树壳梭孢生长及产子囊孢子的影响
将在PDA上培养4-5天的芒果七叶树壳梭孢菌丝块(直径5-8mm)，分别接种到实施例1制得的七种培养基中。马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、燕麦培养基(OA)、无菌松针、柏树叶、水琼脂加松针、含有无菌松针的PDA培养基、马铃薯葡萄糖琼脂加柏树叶等培养基上，置于25℃-28℃下光照(400-1500LUX)培养7天，然后置于有太阳光照射的25℃-28℃培养室内窗台上自然状态下继续培养7-14天。结果发现七叶树壳梭孢在松针、柏树叶、水琼脂加松针上生长缓慢或不生长，在PDA、OA菌丝生长迅速但不产生子囊孢子，在含有无菌松针的PDA培养基上，菌丝生长迅速且在培养2-3周后产生子囊壳及子囊孢子(见图2，图5，图8)，孢子数量可达2×107个孢子/20mL培养基。
实施例3不同培养基对芒果小新壳梭孢生长及产子囊孢子的影响
将在PDA上培养4-5天的芒果小新壳梭孢菌丝块(直径5-8mm)，分别接种到实施例1制得的七种马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、燕麦培养基(OA)、无菌松针、柏树叶、水琼脂加松针、含无菌松针的PDA培养基、马铃薯葡萄糖琼脂加柏树叶等培养基上，置于25℃-28℃下光照(400-1500LUX)培养7天，然后置于有太阳光照射的25℃-28℃培养室内窗台上自然状态下继续培养7-14天。结果发现小新壳梭孢在松针、柏树叶、水琼脂加松针上生长缓慢或不生长，在PDA、OA菌丝生长迅速但不产生子囊孢子，在PDA加松针的培养基上，菌丝生长迅速且在培养2-3周后产生子囊壳及子囊孢子(见图3，图6，图9)，孢子数量可达1×107个孢子/20mL培养基。
实施例1-3的结果说明，用PDA加松针的培养基培养芒果流胶菌可以有效诱导芒果流胶菌产生有性态的子囊壳、子囊、子囊孢子。

Claims (10)

1.一种可诱导芒果流胶病菌产生子囊孢子的培养基，其特征在于，其为含有松针的PDA培养基。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基是将灭菌松针加入PDA培养基中，松针与PDA培养基的质量体积比为1-10g：5-150ml。
3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，灭菌松针与PDA培养基的质量体积比为1-3g：10-100ml。
4.如权利要求1-3任一所述的培养基，其特征在于，每20毫升培养基能够产生≥1×107个子囊孢子。
5.权利要求1-4任一所述的培养基在诱导芒果流胶病菌产生有性态子囊孢子中的应用。
6.权利要求1-4任一所述的培养基在研究芒果流胶病菌生物学特性或侵染特性中的应用。
7.一种可诱导芒果流胶病菌产生有性态子囊孢子的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将芒果流胶病菌接种于权利要求1-4任一所述的培养基中；
(2)光照下连续培养7-10天；
(3)自然状态下继续培养7-21天。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的芒果流胶病菌为可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)、七叶树壳梭孢(Fusicoccum aesculi)或小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)培养条件：温度为25-28℃，光照强度为400-1500LUX。
10.如权利要求7-9任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的自然状态是指白天有太阳光照射，晚上为黑暗的培养状态，且培养温度为25-28℃。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108795776A (zh) * 2018-01-05 2018-11-13 东北林业大学 一种培养五棱散尾鬼笔的培养基及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101843196A (zh) * 2010-04-19 2010-09-29 杨毅 冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法
CN102283020A (zh) * 2011-07-11 2011-12-21 广东省微生物研究所 一种布朗灵芝子实体的人工栽培方法
CN102465100A (zh) * 2010-11-18 2012-05-23 南开大学 一株苯并[a]芘高效降解菌及其应用
WO2014052971A1 (en) * 2012-09-30 2014-04-03 The Regents Of The University Of Michigan Immunogenic compositions comprising nanoemulsions
CN103918724A (zh) * 2014-02-21 2014-07-16 湖北省农业科学院植保土肥研究所 Lasiodiplodia pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101843196A (zh) * 2010-04-19 2010-09-29 杨毅 冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法
CN102465100A (zh) * 2010-11-18 2012-05-23 南开大学 一株苯并[a]芘高效降解菌及其应用
CN102283020A (zh) * 2011-07-11 2011-12-21 广东省微生物研究所 一种布朗灵芝子实体的人工栽培方法
WO2014052971A1 (en) * 2012-09-30 2014-04-03 The Regents Of The University Of Michigan Immunogenic compositions comprising nanoemulsions
CN103918724A (zh) * 2014-02-21 2014-07-16 湖北省农业科学院植保土肥研究所 Lasiodiplodia pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
农业部农民科技教育培训中心: "《药用真菌高效生产技术》", 31 March 2006 *
梁宗琦 等: "《虫草人工培养》", 31 March 2013 *
蒲晓娟 等: "华山松变蓝真菌(Leptographium qinlingensis)的生物学特征", 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 *
魏铁铮 等: "不同培养基对松口蘑菌丝生长的影响", 《食用菌学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108795776A (zh) * 2018-01-05 2018-11-13 东北林业大学 一种培养五棱散尾鬼笔的培养基及其制备方法

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