CN106061492A - 含有氨基酸的益生元口腔护理组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种口腔护理组合物，其包含：(a)具有式Xaa1‑Xaa2或Xaa2‑Xaa1的二肽；其中Xaa1为具有极性不带电荷的侧链的氨基酸；并且Xaa2选自具有疏水性侧链的氨基酸、具有极性不带电荷的侧链的氨基酸，和脯氨酸；或(b)具有式Xaa3‑Xaa4或Xaa4‑Xaa3的二肽；其中Xaa3为具有疏水性侧链的氨基酸；并且Xaa4选自具有疏水性侧链的氨基酸和具有带电荷侧链的氨基酸。

Description

含有氨基酸的益生元口腔护理组合物
背景技术
口腔含有许多不同种类的细菌。一些种类的口腔病原性细菌(例如牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)、福赛斯坦纳菌(Tannerella forsythia)和伴放线放线杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans))已牵扯到牙周病(诸如牙周炎、牙龈炎、坏死性牙周炎、坏死性齿龈炎和种植体周围炎(peri-implantitis))的发展。某些种类的口腔病原性细菌(例如变异链球菌(Streptococcus mutans))已牵涉到牙齿损坏。
据信某些种类的口腔细菌有益于维持牙周组织的健康状态。在不受任何理论限制的情况下，据信这些有益口腔细菌可妨碍口腔上皮的病原性口腔细菌的定植(colonization)。例如，研究已显示血链球菌(Streptococcus sangumts)、缓症链球菌(Streptococcus mitis)和唾液链球菌对体外上皮细胞的伴放线放线杆菌定植具有抑制效应(W.Teughels等，J Dent Res 86(7)，611-617，2007)。使用犬科动物模型也显示，在根面平整术之后将有益细菌施用至牙周袋延迟并减少了病原性细菌对牙周袋的定植(W.Teughels等，J Dent Res，86(11)，1078-1082，2007)。有益细菌血链球菌、缓症链球菌和唾液链球菌也已显示出抑制伴放线放线杆菌诱导的人口腔角质形成细胞系HOK-18A对炎症性细胞因子白介素-8(IL-8)的产生，所述炎症性应答牵涉到牙周炎相关的组织破坏(I.Sliepen等，J Dent Res 88(11)，1026-1030，2009)。
据信有益口腔细菌的选择性刺激可为口腔健康，例如在牙周炎的预防中提供有效的预防性途径。
发明内容
在一方面，本发明提供了一种口腔护理组合物，其包含：(a)具有式Xaal-Xaa2或Xaa2-Xaal的二肽；其中Xaal为具有极性不带电荷的侧链的氨基酸；并且Xaa2选自具有疏水性侧链的氨基酸、具有极性不带电荷的侧链的氨基酸，和脯氨酸；或(b)具有式Xaa3-Xaa4或Xaa4-Xaa3的二肽；其中Xaa3为具有疏水性侧链的氨基酸；并且Xaa4选自具有疏水性侧链的氨基酸和具有带电荷侧链的氨基酸。
任选地，Xaal、Xaa2、Xaa3和Xaa4为L-氨基酸。
任选地，以口腔护理组合物的重量为基准，所述组合物中的二肽存在量为0.01重量％至10重量％。
任选地，Xaa2为具有脂肪族疏水性侧链的氨基酸。此外任选地，Xaa2为丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸。再此外任选地，Xaa2为亮氨酸或缬氨酸。
可替代地，Xaa2为天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸或苏氨酸。任选地，Xaa2为天冬酰胺或谷氨酰胺。
可替代地，Xaa2为脯氨酸。
任选地，Xaal为丝氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺。此外任选地，Xaal为丝氨酸。可替代地，Xaal为甲硫氨酸。
任选地，Xaa3为具有芳族疏水性侧链的氨基酸。此外任选地，Xaa3为色氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸。再此外任选地，Xaa3为色氨酸。可替代地，Xaa3为苯丙氨酸。
任选地，Xaa4为天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、组氨酸或赖氨酸。此外任选地，Xaa4为谷氨酸或组氨酸。
可替代地，Xaa4为具有脂肪族疏水性侧链的氨基酸。任选地，Xaa4为丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸。
任选地，组合物为洁齿剂、牙膏、凝胶、牙粉、漱口水、口腔清洗剂、锭剂、片剂、喷雾剂、口香糖或膜剂。
任选地，组合物还包含对口腔健康具有有益效应的至少一个种类的细菌。此外任选地，对口腔健康具有有益效应的细菌种类选自缓症链球菌、唾液链球菌、血链球菌、粘性放线菌(Actmomyces viscosus)、小韦荣球菌(Veillonella parvula)、格氏链球菌(Streptococcus gordonii)、生痰二氧化碳嗜纤维菌(Capnocytophaga sputigena)、内氏放线菌(Actmomyces naeslundii)以及其组合。
在另一方面，本发明提供了一种本发明的口腔护理组合物，其用于在口腔中进行选择性地促进：相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植。在另一方面，本发明提供了一种本发明的口腔护理组合物，其用于在口腔中相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成。在另一方面，本发明提供了一种本发明的口腔护理组合物，其用于维持和/或重新建立健康的口腔微生物群。在另一方面，本发明提供了一种本发明的口腔护理组合物，其用于预防牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种。
在另一方面，本发明提供了一种在受试者口腔中进行选择性地促进：相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植的方法；所述方法包括使口腔与本发明的口腔护理组合物接触。在另一方面，本发明提供了一种在受试者口腔中相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成的方法；所述方法包括使口腔与本发明的口腔护理组合物接触。本发明还提供了一种在受试者中维持和/或重新建立健康的口腔微生物群的方法，所述方法包括使受试者的口腔与本发明的口腔护理组合物接触。本发明还提供了一种预防受试者的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种的方法，所述方法包括使受试者的口腔与本发明的口腔护理组合物接触。
在另一方面，本发明提供了以下项在口腔护理组合物中的用途：(i)具有式Xaal-Xaa2或Xaa2-Xaal的二肽；其中Xaal为具有极性不带电荷的侧链的氨基酸；并且Xaa2选自具有疏水性侧链的氨基酸、具有极性不带电荷的侧链的氨基酸，和脯氨酸；或(ii)具有式Xaa3-Xaa4或Xaa4-Xaa3的二肽；其中Xaa3为具有疏水性侧链的氨基酸；并且Xaa4选自具有疏水性侧链的氨基酸和具有带电荷侧链的氨基酸；所述用途为：(a)相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植；(b)相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成；(c)在受试者中维持和/或重新建立健康的口腔微生物群；或(d)预防受试者的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种。
任选地，二肽在与对口腔健康具有有益效应的细菌和病原性口腔细菌一起孵育24小时后，相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植。
任选地，二肽在与对口腔健康具有有益效应的细菌和病原性口腔细菌一起孵育48小时后，相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植。
本发明的其他适用范围将从下文提供的详述变得显而易见。应理解，详述和具体实施例虽然指示了本发明的优选实施方案，但是仅仅意图用于说明目的而不是意图限制本发明的范围。
详述
以下优选实施方案的说明实质上只是示例性的并且决不意图限制本发明、本发明的应用或用途。
为了描述所述范围之内的各个和每个数值，贯穿全文使用的范围是作为简写形式使用的。在所述范围之内的任何数值都可以被选为所述范围的边界。此外，本文中引用的所有参考文献均在此以引用方式整体并入。如果本公开中的定义和引用的参考文献的定义出现冲突，以本公开为准。
除非另外规定，否则本文和在本说明书中其他地方表达的所有百分比和量应理解为是指重量百分比。给出的量是以材料的有效重量为基准。
如本文所用，措辞“口腔”不仅包括口腔本身，而且还包括唾液、牙齿、牙龈、牙周袋、脸颊、舌、粘膜、扁桃体、任何植入物以及置入口腔中的任何设备或结构体。扁桃体为可产生口臭的厌氧细菌生长提供了储藏所(reservoir)(扁桃体结石)。
如本文所用，短语“健康的口腔微生物群”是指当口腔处于非患病状态时(例如，当不存在牙周病，例如牙龈炎、牙周炎、龋齿、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎和/或坏死性牙周炎时)的口腔微生物群体，即健康相关联的口腔微生物群。
术语“有益细菌”涵盖口腔中的在健康口腔中以较高数目或比例存在，但在口腔疾病(诸如像牙龈炎、牙周炎、龋齿、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎和坏死性牙周炎)状态时以较低数目或比例存在的那些细菌。所述术语还包括来自口腔或非口腔来源的已被确认通过预防或治疗口腔疾病而对口腔健康具有有益效应的细菌，所述细菌可本来存在于口腔中或者可有意地引入到口腔中(例如像益生菌)。有益细菌可通过其存在或代谢活性来：降低病原性口腔细菌的数目或比例；减少炎症和炎症性过程；降低病原性物种的代谢活性；降低病原性细菌对毒力因子的产生或抑制病原性细菌所产生的毒力因子；减少或抑制生物膜形成；占据可以其他方式由病原体定植的适当位置(niche)；限制病原体附着口腔表面的能力；影响病原体的生存力、代谢活性或生长；降低病原体产生毒性因子的能力；降解由病原体或口腔生物群产生的毒性因子；和/或减弱寄主对病原性物种的应答。如上所论述，据信这些有益口腔细菌可妨碍病原性口腔细菌对口腔上皮的定植。据信有益口腔细菌的选择性刺激可为口腔健康，例如在牙周炎的预防中提供有效的预防性途径。
细菌需要某些物质以便能够使它们生长、繁殖、具有代谢活性并且能够进行定植。某些物质可被某些微生物(例如细菌)选择性地利用以有利于所述微生物的生长、代谢活性、繁殖和定植，从而直接或间接地抑制其他微生物的生长。本发明研究了通过以下方式修饰受试者的口腔微生物群的可能性：通过选择性地增加受试者所固有的有益口腔细菌群体，通过为有益口腔细菌群体提供适当的用于生长/繁殖的物质。
有益细菌的实例包括缓症链球菌、唾液链球菌、血链球菌、粘性放线菌、小韦荣球菌、格氏链球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌和内氏放线菌。病原性细菌的实例包括变异链球菌、中间普雷沃菌(Prevotella intermedia)、牙龈卟啉单胞菌、核粒梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)、福赛斯坦纳菌、伴放线放线杆菌和远缘链球菌(Streptococcus sobrinus)。
本发明已发现某些二肽能够使得有益口腔细菌的生长、代谢活性和生物膜形成增加，而未使得病原性口腔细菌的生长、代谢活性和生物膜形成增加。
因此本发明提供了一种口腔护理组合物，其包含：(a)具有式Xaal-Xaa2或Xaa2-Xaal的二肽；其中Xaal为具有极性不带电荷的侧链的氨基酸；并且Xaa2选自具有疏水性侧链的氨基酸、具有极性不带电荷的侧链的氨基酸，和脯氨酸；或(b)具有式Xaa3-Xaa4或Xaa4-Xaa3的二肽；其中Xaa3为具有疏水性侧链的氨基酸；并且Xaa4选自具有疏水性侧链的氨基酸和具有带电荷侧链的氨基酸。
在一些实施方案中，Xaal、Xaa2、Xaa3和Xaa4为L-氨基酸。
在一些实施方案中，氨基酸Xaal(具有极性不带电荷的侧链的氨基酸)为丝氨酸(Ser)、甲硫氨酸(Met)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、天冬酰胺(Asn)或谷氨酰胺(Gln)。在某些实施方案中，Xaal为丝氨酸或苏氨酸。在其他实施方案中，Xaal为甲硫氨酸或半胱氨酸。在一些实施方案中，Xaal为丝氨酸。在其他实施方案中，Xaal为甲硫氨酸。
当Xaa2为具有疏水性侧链的氨基酸时，Xaa2在某些实施方案中可以为具有脂肪族疏水性侧链的氨基酸。在这些实施方案中的一些中，Xaa2为丙氨酸(Ala)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)或缬氨酸(Val)。在某些实施方案中，Xaa2为亮氨酸或缬氨酸。在某些实施方案中，二肽为Ser-Leu、Ser-Val、Leu-Ser或Val-Ser。在一些实施方案中，二肽为Ser-Leu或Ser-Val。
当Xaa2为具有极性不带电荷的侧链的氨基酸时，Xaa2在某些实施方案中可以为天冬酰胺(Asn)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gln)、甲硫氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)。在这些实施方案的一些中，Xaa2为天冬酰胺或谷氨酰胺。在其他实施方案中，Xaa2为半胱氨酸或甲硫氨酸。在其他实施方案中，Xaa2为丝氨酸或苏氨酸。在某些实施方案中，二肽为Ser-Asn、Ser-Gln、Asn-Ser或Gln-Ser。在一些实施方案中，二肽为Ser-Asn或Ser-Gln。
在一些实施方案中，Xaa2为脯氨酸(Pro)。在一个实施方案中，二肽为Met-Pro。
在一些实施方案中，氨基酸Xaa3(具有疏水性侧链的氨基酸)为具有芳族疏水性侧链的氨基酸。在某些实施方案中，Xaa3为色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)或酪氨酸(Tyr)。在一些实施方案中，Xaa3为色氨酸。在其他实施方案中，Xaa3为苯丙氨酸。
当Xaa4为具有疏水性侧链的氨基酸时，Xaa4在某些实施方案中可以为具有脂肪族疏水性侧链的氨基酸。在这些实施方案中的一些中，Xaa4为丙氨酸(Ala)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)或缬氨酸(Val)。在某些实施方案中，Xaa4为亮氨酸或缬氨酸。在某些实施方案中，Xaa4为亮氨酸。在某些实施方案中，二肽为Trp-Leu或Leu-Trp。
当Xaa4为具有带电荷的侧链的氨基酸时，Xaa4在某些实施方案中可以为天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)或赖氨酸(Lys)。在某些实施方案中，Xaa4为天冬氨酸或谷氨酸。在其他实施方案中，Xaa4为精氨酸、组氨酸或赖氨酸。在其他实施方案中，Xaa4为谷氨酸或组氨酸。在一些实施方案中，二肽为Trp-Glu、Trp-His、Glu-Trp、Glu-His、Phe-Glu或Glu-Phe。在一些实施方案中，二肽为Glu-Trp、His-Trp或Phe-Glu。在一些实施方案中，二肽为Phe-Glu。
在一些实施方案中，二肽为Ser-Leu、Ser-Val、Ser-Asn、Ser-Gln、Met-Pro、Phe-Glu、Glu-Trp、Trp-Leu或His-Trp。在一些实施方案中，二肽为Ser-Leu或Ser-Val。在其他实施方案中，二肽为Ser-Asn、Ser-Gln、Met-Pro、Phe-Glu、Glu-Trp、Trp-Leu或His-Trp。
在一些实施方案中，以口腔护理组合物的重量为基准，所述组合物中的二肽存在量为0.01重量％至10重量％、0.05重量％至7.5重量％、0.1重量％至5重量％或1重量％至2.5重量％。
在任一以上实施方案中，组合物中的二肽存在量可以为1μmol/ml至50μmol/ml、2.5μmol/ml至35μmol/ml、5μmol/ml至25μmol/ml或10μmol/ml至20μmol/ml。在某些实施方案中，组合物中的二肽存在量为5μmol/ml至10μmol/ml或10μmol/ml至25μmol/ml。
如任一以上实施方案中所述的口腔护理组合物可以为洁齿剂、牙膏、凝胶、牙粉、漱口水、口腔清洗剂、锭剂(其可以为可溶解的或可咀嚼的)、片剂、喷雾剂、口香糖或膜剂(其可以为可全部或部分溶解的，或不可溶解的)。
如任一以上实施方案中所述的口腔护理组合物还可包含对口腔健康具有有益效应的至少一个种类的细菌。在这些实施方案中，组合物可被称之为共生型组合物(synbiotic composition)，因为其含有益生菌(对口腔健康具有有益效应的细菌)和益生元(刺激益生菌的生长、代谢活性和/或定植的二肽)。在某些实施方案中，对口腔健康具有有益效应的细菌种类选自缓症链球菌、唾液链球菌、血链球菌、粘性放线菌、小韦荣球菌、格氏链球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌、内氏放线菌以及其组合。
本发明还提供了一种根据任一上述实施方案的口腔护理组合物，其用于(a)在口腔中进行选择性地促进：相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植；(b)在口腔中相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成；(c)维持和/或重新建立健康的口腔微生物群；或(d)预防牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种。
本发明还提供了如任一以上实施方案中所述的二肽在口腔护理组合物中的用途，所述用途为(a)相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植；(b)相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成；(c)在受试者中维持和/或重新建立健康的口腔微生物群；或(d)预防受试者的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种。
本发明还提供了进行以下的方法：(a)在受试者口腔中进行选择性地促进：相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植；(b)在受试者口腔中相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成；(c)在受试者中维持和/或重新建立健康的口腔微生物群；或(d)预防受试者的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种。这些方法中的每一种包括使受试者的口腔与根据任一上述实施方案的口腔护理组合物接触。
在以上方法中，受试者可以为哺乳动物。在一些实施方案中，受试者为人。在一些实施方案中，受试者为动物，例如伴侣动物(例如猫或狗)。
在某些实施方案中，口腔与口腔护理组合物的接触包括使用刷将口腔护理组合物施用至口腔，用呈漱口水形式的口腔护理组合物清洗口腔，或使用例如喷雾器将口腔护理组合物喷入口腔中。
在方法和用途的任一以上实施方案中，对口腔健康具有有益效应的细菌可选自缓症链球菌、唾液链球菌、血链球菌、粘性放线菌、小韦荣球菌、格氏链球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌、内氏放线菌以及其组合。另外或可替代地，病原性细菌可选自变异链球菌、中间普雷沃菌、牙龈卟啉单胞菌、核粒梭杆菌、福赛斯坦纳菌、伴放线放线杆菌、远缘链球菌以及其组合。
在其中方法和用途涉及相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植选择性促进(在受试者口腔中)对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植的任一以上实施方案中，具有口腔健康的有益效应的细菌可选自缓症链球菌、唾液链球菌、粘性放线菌、小韦荣球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌以及其组合。另外或可替代地，病原性细菌可选自变异链球菌、中间普雷沃菌、牙龈卟啉单胞菌、核粒梭杆菌、福赛斯坦纳菌、伴放线放线杆菌、远缘链球菌以及其组合，并且在某些实施方案中可选自中间普雷沃菌、牙龈卟啉单胞菌、核粒梭杆菌、福赛斯坦纳菌以及其组合。
在其中方法和用途涉及相对于病原性口腔细菌的生物膜形成选择性促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成的任一以上实施方案中，病原性细菌可选自变异链球菌、中间普雷沃菌、牙龈卟啉单胞菌、核粒梭杆菌、福赛斯坦纳菌、伴放线放线杆菌以及其组合。另外或可替代地，具有口腔健康的有益效应的细菌可选自血链球菌、格氏链球菌以及其组合。
在一些实施方案中，二肽在与对口腔健康具有有益效应的细菌和病原性口腔细菌一起孵育24小时后，相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植。
在一些实施方案中，二肽在与对口腔健康具有有益效应的细菌和病原性口腔细菌一起孵育48小时后，相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植。
在包含二肽的本发明组合物中，二肽的氨基酸序列被从N端末端(含有游离的氨基)报告至C端末端(含有游离的羧基)。因此，以“Ser-Val”为例，结构如式I所示；并且对于“His-Trp”，结构如式II所示。
本发明的口腔护理组合物还可以包含额外的成分。这些额外的成分可包括但不限于研磨剂、稀释剂、碳酸氢盐、pH改性剂、表面活性剂、泡沫调节剂、增稠剂、湿润剂、甜味剂、调味剂、颜料、抗菌剂、防龋剂、防牙垢剂或牙石控制剂以及其混合物。
在一些实施方案，特别是(但不限于)其中口腔护理组合物为牙膏的那些实施方案中，本发明的组合物还可包含研磨剂。可使用的研磨剂包括二氧化硅研磨剂，诸如具有高达约20微米平均粒径的沉淀或水合的二氧化硅，诸如由J.M.Huber化学部(Havre de Grace，Md.21078)市售的Zeodent 105和Zeodent 114，或由W.R.Grace&Company的Davison化学部市售的Sylodent 783。还可包括诸如来自PQ公司的Sorbosil AC 43的研磨剂。其他可用的洁齿剂研磨剂包括氧化铝、硅酸铝、煅烧氧化铝、膨润土或其他硅质材料、不溶性磷酸盐以及其混合物。研磨剂的存在量可以为以组合物重量为基准的5至30重量％，任选地以组合物重量为基准的10至20重量％。在某些实施方案，特别是(但不限于)其中口腔护理组合物为漱口水或口腔清洗剂的那些实施方案中，组合物可不含研磨剂。
在一些实施方案中，本发明的口腔护理组合物包含至少一种碳酸氢盐，所述碳酸氢盐由于起泡和释放二氧化碳而可用于例如赋予牙齿和胶“清洁感”。可使用任何口服可接受的碳酸氢盐，包括(不限于)碱金属碳酸氢盐诸如碳酸氢钠和碳酸氢钾、碳酸氢铵等。以组合物的总重量计，一种或多种额外的碳酸氢盐任选的存在总量为约0.1重量％至约50重量％，例如约1重量％至20重量％。
在一些实施方案中，本发明的口腔护理组合物包含至少一种pH改性剂。所述改性剂包括降低pH的酸化剂、升高pH的碱化剂以及将pH控制在需要范围内的缓冲剂。例如，可包含选自酸化剂、碱化剂和缓冲剂的一种或多种化合物以提供2至10，或在各种例示性实施方案中，2至8、3至9、4至8、5至7、6至10、7至9等的pH。可使用任何口服可接受的pH改性剂，包括(不限于)羧酸、磷酸和磺酸、酸盐(例如，柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、苹果酸一钠等)、碱金属氢氧化物诸如氢氧化钠、碳酸盐诸如碳酸钠、碳酸氢盐、倍半碳酸盐、硼酸盐、硅酸盐、磷酸盐(例如，磷酸二氢钠、磷酸三钠)、咪唑等。一种或多种pH改性剂任选地以有效维持组合物在口服可接受的pH范围内的总量存在。
本发明的口腔护理组合物还可包含至少一种表面活性剂。可使用任何口服可接受的表面活性剂，它们大部分是阴离子型、非离子型或两性离子型的。合适的阴离子型表面活性剂包括(不限于)C8-20烷基硫酸酯、磺化的C8-20脂肪酸甘油单酯的水溶性盐、肌氨酸盐、牛磺酸盐等。这些和其他种类的例示性实例包括十二烷基硫酸钠、椰子甘油单酯磺酸钠、月桂基肌氨酸钠、月桂基羟乙基磺酸钠(sodium lauryl isoethionate)、月桂醇聚醚羰酸钠(sodium laureth carboxylate)和十二烷基苯磺酸钠。合适的非离子型表面活性剂包括(不限于)泊洛沙姆、聚氧乙烯失水山梨醇酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、叔胺氧化物、叔膦氧化物、二烷基亚砜等。合适的两性型表面活性剂包括(不限于)具有阴离子基团(诸如羰酸根、硫酸根、磺酸根、磷酸根或膦酸根)的C8-20脂肪族仲胺和叔胺的衍生物。还可以使用甜菜碱，其合适的实例是椰油酰胺丙基甜菜碱。以组合物的总重量计，一种或多种表面活性剂任选的存在总量为约0.01重量％至约10重量％，例如，约0.05重量％至约5重量％或约0.1重量％至约2重量％。
本发明的口腔护理组合物可包含至少一种泡沫调节剂，所述调节剂可用于例如增加组合物在搅拌时所形成的泡沫的量、稠度或稳定性。可使用任何口服可接受的泡沫调节剂，包括(不限于)聚乙二醇(PEG)，也称为聚氧乙烯。高分子量PEG是合适的，包括平均分子量为200,000至7,000,000，例如500,000至5,000,000或1,000,000至2,500,000的那些。以组合物的总重量计，一种或多种PEG任选的存在总量为约0.1重量％至约10重量％，例如约0.2重量％至约5重量％，或约0.25重量％至约2重量％。
本发明的口腔护理组合物可包含至少一种增稠剂，所述增稠剂可用于例如赋予组合物所需要的稠度和/或口感。可使用任何口腔可接受的增稠剂，包括(不限于)卡波姆(也称为羧乙烯基聚合物)、角叉菜胶(也称为爱尔兰藓)且更具体地ι-角叉菜胶(ι-角叉菜胶(iota-carrageenan))、纤维素聚合物(诸如羟乙基纤维素、羧甲基纤维素(CMC)及其盐例如CMC钠)、天然树胶(诸如刺梧桐胶、黄原胶、阿拉伯胶和黄蓍胶)、胶体硅酸镁铝、胶体二氧化硅等。优选的增稠剂或胶凝剂种类包括丙烯酸与季戊四醇的烷基醚或蔗糖的烷基醚交联的一类均聚物，或卡波姆。卡波姆可从B.F.Goodrich以系列商购获得。特别优选的卡波姆包括Carbopol 934、940、941、956、974P以及其混合物。也可使用二氧化硅增稠剂诸如DT 267(来自PPG工业)。以组合物的总重量计，一种或多种增稠剂任选的存在总量为约0.01重量％至15重量％，例如约0.1重量％至约10重量％，或约0.2重量％至约5重量％。
本发明的组合物可包含至少一种粘度调节剂，所述调节剂可用于例如帮助抑制成分的沉淀或分离或者促进液体组合物在搅拌时的重新分散性。可使用任何口服可接受的粘度调节剂，包括(不限于)矿物油、凡士林、粘土和有机改性的粘土、二氧化硅等。以组合物的总重量计，一种或多种粘度调节剂任选的存在总量为约0.01重量％至约10重量％，例如约0.1重量％至约5重量％。
本发明的组合物还可包含至少一种湿润剂。可使用任何口服可接受的湿润剂，包括(不限于)多元醇诸如甘油、山梨醇(任选地为70重量％的水溶液)、木糖醇或低分子量的聚乙二醇(PEG)。大多数湿润剂还充当甜味剂。以组合物的总重量计，一种或多种湿润剂任选的存在总量为约1重量％至约70重量％，例如，约1重量％至约50重量％，约2重量％至约25重量％，或约5重量％至约15重量％。
本发明的组合物还可包含至少一种甜味剂，所述甜味剂可用于例如增强组合物的味道。一种或多种甜味剂任选的存在总量密切取决于选择的特定甜味剂，但是通常为以组合物的总重量计的0.005重量％至5重量％，任选地0.005重量％至0.2重量％，还任选地以组合物的总重量计的0.05重量％至0.1重量％。
本发明的组合物还可包含至少一种调味剂，所述调味剂可用于例如增强组合物的味道。可使用任何口服可接受的天然或合成的调味剂，包括(不限于)茶调味剂、香草醛、鼠尾草、马郁兰、欧芹油、留兰香油、肉桂油、冬青油(水杨酸甲酯(methylsalicylate))、薄荷油、丁香油、月桂油、茴香油、桉树油、柑橘油、水果油和水果香精(包括源自柠檬、桔子、酸橙、葡萄柚、杏子、香蕉、葡萄、苹果、草莓、樱桃、菠萝等的那些)、源自豆类和坚果的调味剂(诸如咖啡、可可、可乐果、花生、杏仁)等，吸附的和包封的调味剂等。还涵盖在本文的调味剂之内的是在口腔中提供芳香和/或其他感官效果(包括凉爽或温热效果)的成分。所述成分例示性地包括薄荷醇、乙酸薄荷酯、乳酸薄荷酯、樟脑、桉树油、桉油醇、茴香脑、丁香酚、肉桂(cassia)、覆盆子酮(oxanone)、α-紫罗兰酮、丙烯基乙基愈创木酚(propenylguaiethol)、麝香草酚、里哪醇、苯甲醛、肉桂醛、N-乙基-对-薄荷烷-3-甲酰胺(N-ethyl-p-menthan-3-carboxamine)、N，2，3-三甲基-2-异丙基丁酰胺、3-(1-薄荷氧基)-丙烷-1，2-二醇、肉桂醛甘油缩醛(CGA)、薄荷酮甘油缩醛(MGA)等。以组合物的总重量计，一种或多种调味剂任选的存在总量为约0.01重量％至约5重量％，例如，约0.03重量％至约2.5重量％，任选约0.05重量％至约1.5重量％，还任选约0.1重量％至约0.3重量％。
本发明的组合物可包含至少一种着色剂。本文中的着色剂包括颜料、染料、色淀和赋予特定光泽或反射率的试剂诸如珠光剂。可使用任何口服可接受的着色剂，包括(不限于)滑石、云母、碳酸镁、碳酸钙、硅酸镁、硅酸镁铝、二氧化硅、二氧化钛、氧化锌、红色、黄色、褐色和黑色铁氧化物、氰亚铁酸铁铵(ferric ammonium ferrocyanide)、锰紫(manganese violet)、群青、钛酸化云母(titaniated mica)、氯氧化铋等。以组合物的总重量计，一种或多种着色剂任选的存在总量为约0.001重量％至约20重量％，例如，约0.01重量％至约10重量％，或约0.l重量％至约5重量％。
本发明的组合物还可包含抗菌剂或防腐剂，诸如氯己定、三氯生、季铵化合物(例如苯扎氯铵)或对羟基苯甲酸酯(paraben)(诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)。以组合物的总重量计，组合物中的一种或多种抗菌剂或防腐剂任选的存在总量为约0.01重量％至约0.5重量％，任选约0.05重量％至约0.1重量％。
口腔护理组合物还可包含氟化物离子源。氟化物离子源包括但不限于：氟化亚锡、氟化钠、氟化钾、单氟磷酸钾、单氟磷酸钠、单氟磷酸铵、氟硅酸钠、氟硅酸铵、氟化胺诸如奥拉氟(N′-十八烷基三乙烯二胺-N，N，N′-三(2-乙醇)-二氢氟化物(N′-octadecyltrimethylendiamine-N，N，N′-tris(2-ethanol)-dihydrofluoride))、氟化铵以及其组合。在某些实施方案中，氟化物离子源包括氟化亚锡、氟化钠、氟化胺、单氟磷酸钠以及其混合物。在某些实施方案中，本发明的口腔护理组合物还可含有氟化物离子源或提供氟的成分，所述提供氟的成分的量足以提供约50至约5000ppm的氟化物离子，例如，约100至约1000、约200至约500，或约250ppm氟化物离子。可向本发明组合物添加的氟化物离子源的水平为约0.001重量％至约10重量％，例如，约0.003重量％至约5重量％、0.01重量％至约1重量％，或约0.05重量％。然而，应理解提供适当水平氟化物离子的氟化物盐的重量将基于盐中的反离子的重量而明显不同，本领域技术人员可容易地测定这些量。优选的氟化物盐可以为氟化钠。
本发明的组合物可包含可用于例如改善口腔干燥的唾液刺激剂。可使用任何口服可接受的唾液刺激剂，包括不限于食用酸，如柠檬酸、乳酸、苹果酸、琥珀酸、抗坏血酸、己二酸、富马酸和酒石酸，以及其混合物。一种或多种唾液刺激剂任选地以有效刺激唾液的总量存在。
本发明的组合物可包含抗敏感剂，例如，钾盐诸如硝酸钾、碳酸氢钾、氯化钾、柠檬酸钾和草酸钾；辣椒素；丁香酚；锶盐；氯化物盐以及其组合。所述试剂可添加的有效量为(例如)以组合物的总重量为基准的约1重量％至约20重量％，这取决于选择的试剂。
本发明的组合物还可包含抗氧化剂。可使用任何口腔可接受的抗氧化剂，包括丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、维生素A、类胡萝卜素、维生素E、类黄酮、多酚、抗坏血酸、草本抗氧化剂、叶绿素、褪黑激素及其混合物。
本发明的组合物此外可任选地包含如下面提供的牙石控制(防牙垢)剂。本文可用的那些牙石控制剂包含特定试剂的盐，包括碱金属盐和铵盐。所述试剂包括：磷酸盐和多磷酸盐、聚氨基丙烷磺酸(AMPS)、聚烯烃磺酸盐、聚烯烃磷酸盐、二磷酸盐诸如氮杂环烷-2，2-二磷酸盐(例如，氮杂环庚烷-2，2-二磷酸)、N-甲基氮杂环戊烷-2，3-二磷酸、乙烷-1-羟基-1，1-二磷酸(EHDP)和乙烷-1-氨基-1，1-二磷酸盐、膦酰基烷烃羧酸和。可用的无机磷酸盐和多磷酸盐包括磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和磷酸钠、三聚磷酸钠、四聚磷酸盐、三偏磷酸钠、六偏磷酸钠以及其混合物。其他可用的牙石控制剂包括多羧酸盐聚合物和聚乙烯甲醚/马来酸酐(PVM/MA)共聚物，诸如
实例
实施例1
研究了各种有益口腔细菌和病原性口腔细菌在二肽Ser-Leu、Ser-Val、Ser-Asn、Ser-Gln、Met-Pro、Phe-Glu、Glu-Trp、Trp-Leu或His-Trp存在下的代谢活性。在实施例中，二肽中存在的氨基酸残基为L-氨基酸残基。
测试的有益口腔细菌是缓症链球菌、唾液链球菌、血链球菌、粘性放线菌、格氏链球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌、内氏放线菌和小韦荣球菌。测试的病原性口腔细菌是变异链球菌、中间普雷沃菌、牙龈卟啉单胞菌、核粒梭杆菌、福赛斯坦纳菌、伴放线放线杆菌和远缘链球菌。
能够增加以上有益细菌中的至少一种的代谢活性而不或仅极小程度地增加病原性细菌的生长的底物被认为是益生元底物。
通过针对微生物细胞(Biolog Inc.)的高通量表型微阵列系统(PM)研究了所测试细菌在以上提到的二肽存在下的24小时和48小时之后的代谢活性程度。每个PM可含有可充当细菌底物的高达95种不同的生物化学化合物(例如，二肽)以及不含有底物的一种阴性对照。使用了微阵列板，其中每个板的不同孔预加载有(通过制造商Biolog Inc.)待测试的不同二肽。使用单独的微阵列板来测试每种细菌物种。因此，在每个特定板上使用多种二肽测试了单一细菌物种。所述微阵列基于氧化还原技术，使用细胞呼吸作为通用的报告因子(reporter)。活性细胞呼吸引起四唑染料的减少以及浓颜色的形成-例如，当使用四唑染料“Biolog Redox Dye Mix D”时，当染料减少时颜色从透明/无色变成紫色。所述颜色变化的观察结果指示了哪种底物改善细胞的代谢活性和健康。
从血琼脂板(在37℃下厌氧孵育48小时)收集每种细菌物种并且将其转移至为营养缺乏型培养基的IF-0基础接种液(Biolog Inc.)。使用BioRad SmartSpec3000Photometer在492nm下将所得细胞悬浮液调节至42％的透射率(相对于不存在细菌物种的基础接种液的透射率)(通过添加其他接种液或其他细菌来进行调节，直到获得42％的透射率)。通过将3mL 42％透射率细胞悬浮液与15mL接种液(所述接种液通过将11.6mL无菌水、62.5mL IF-0基础接种液和0.9mL四唑染料“Biolog Redox Dye mix D”混合来形成)混合来制备所述悬浮液的1∶5稀释液，从而产生等于85％透射率(使用BioRad SmartSpec3000Photometer)的最终细胞密度。将680μL的2M琥珀酸钠/200μM柠檬酸铁的蒸馏水溶液添加到68mL的85％透射率细胞悬浮液并且将100μL所述混合液添加到每个孔(各种二肽已以粉末形式存在于如从供应商即Biolog Inc.获得的板的相关孔中)。
在37℃下在厌氧性气氛中孵育所有板。使用同一板在两个时间点24小时处和48小时处通过分光光度法(Thermo Scientific Multiskan Ascent)在492nm下测定颜色变化。对于每种所测试的细菌，还使用了相应的对照，对照是板中含有特定细菌(细胞悬浮液)但不含任何二肽的孔。在Multiscan微板读数器中处于连续振动24小时和48小时之后，针对每种细菌/二肽组合并且针对每种其相应对照(即其含有特定细菌但不含二肽)在492nm波长下测定(使用微板读数器)24小时和48小时处的合成培养基的光密度(OD)。对于每种细菌，将在24小时处和在48小时处获得的OD值除以相应对照在24小时处和在48小时处(分别地)获得的OD值，由此使得对照具有为1的值。因此，针对细菌与二肽的特定组合的大于1的值表明24小时或48小时之后的细菌代谢活性的增加大于针对对照所观察到的增加。
针对细菌与二肽的每种组合进行三次实验，其中每次重复在不同的天数时进行(因此提供了三个生物复制品)。对照也如上所述进行三次。所示的值是针对细菌与二肽的每种组合在24小时处和在48小时处所获得(如以上详述的)的三个单一值的平均值(均值)。结果显示于下表1至4中：
表1：24小时处的病原性细菌
＊＊伴放线放线杆菌
表2：24小时处的有益细菌
表3：48小时处的病原性细菌
＊＊伴放线放线杆菌
表4：48小时处的有益细菌
在以上数据中，将值2作为阈值，在所述阈值之上二肽使得细菌的代谢活性显著地增加。选择所述值以便排除低刺激的代谢物并且避免假阳性的结果。
如可从以上数据看出的，Ser-Leu、Ser-Val、Met-Pro、Phe-Glu、Ser-Asn和Ser-Gln在24小时处表现出益生元效应，并且Met-Pro、Phe-Glu、Ser-Asn、Ser-Gln、Glu-Trp、Trp-Leu和His-Trp在48小时处表现出益生元效应。在不受任何理论限制的情况下，据信在48小时处表现出益生元效应的那些物质可在长时间使用后向口腔提供有益效应。
因为Ser-Leu和Ser-Val被有益细菌代谢的速度比被病原性细菌代谢的速度更快(通过以上的在24小时处所达到的数据组中的值2所显示的)，所以预期Ser-Leu或Ser-Val的存在使得有益细菌在短时间范围内抑制病原性细菌的生长，从而维持健康的口腔微生物群。因为Ser-Leu和Ser-Val被有益细菌代谢的速度比被病原性细菌代谢的速度更快，所以在病原性细菌可开始利用这些二肽之前，这些二肽被有益细菌所消耗/代谢掉(由此被从环境中除去)。在不受任何理论限制的情况下，据信当(诸如在口腔中)存在有益细菌和病原性细菌的混合物时，可消除Ser-Leu和Ser-Val对病原性细菌的刺激效应(如在48小时处所看到的)，因为所述二肽物质已被有益细菌代谢掉，因此未被病原性细菌获得来利用。因此，如果在病原性细菌的生长/代谢活性/定植被刺激之前，有益细菌的生长/代谢活性/定植得以刺激，那么在病原性细菌有机会生长/繁殖之前，有益细菌可进行繁殖并且对病原性细菌产生抑制效应。
实施例2
研究了各种有益口腔细菌和病原性口腔细菌在二肽Met-Pro和Phe-Glu(作为实例)存在下的生长程度。二肽中存在的氨基酸残基为L-氨基酸残基。
测试的有益口腔细菌是缓症链球菌、唾液链球菌、血链球菌、粘性放线菌、格氏链球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌、内氏放线菌和小韦荣球菌。测试的病原性口腔细菌是变异链球菌、中间普雷沃菌、牙龈卟啉单胞菌、核粒梭杆菌、福赛斯坦纳菌、伴放线放线杆菌和远缘链球菌。
能够增加以上有益细菌中的至少一种的生长(或最大生长密度或生长程度)而不或仅极小程度地增加病原性细菌的生长(或最大生长密度)的底物被认为是益生元化合物。
通过在富营养型培养基(脑心浸液肉汤(BHI)，Oxoid)中经48小时建立生长曲线研究了所测试的细菌响应于选择的化合物(Met-Pro、Phe-Glu)的生长程度。通过将相应的细菌从血琼脂板转移至BHI制备了晚指数生长期液体培养物并且将所述培养物在37℃下在厌氧性气氛中针对粘性放线菌、小韦荣球菌、核粒梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普雷沃菌、福赛斯坦纳菌、内氏放线菌和生痰二氧化碳嗜纤维菌进行过夜孵育，并且在5％CO2环境中针对唾液链球菌、血链球菌、缓症链球菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌、远缘链球菌和格氏链球菌进行过夜孵育。将过夜培养物转移至BHI并且通过在600nm下测定(BioRad SmartSpec3000)光密度(OD600)将其调节至1×107CFU/ml(菌落形成单位数/ml)的浓度。对于每种菌株，将200μl细菌悬浮液添加至含有20μl相应二肽的96孔板中。将二肽的最终浓度设定为5、10、20和25μmol/ml。对于每种所测试的细菌，还使用了不含有二肽的相应对照。如先前所述来孵育板。
针对细菌/二肽的每种组合并且针对每种其相应对照(即在没有二肽的富营养型培养基中的特定细菌)，在0h、24h和48h处在630nm下测定(Thermo Scientific MultiskanAscent)光密度(OD630)。另外，还在0h和9h之间每隔一小时测定了在5％CO2环境中生长的细菌/二肽的组合的OD630。对于细菌/二肽的每种组合，将经48小时时间段获得的最大OD值除以相应对照经48小时时间获得的最大OD值，由此使得对照具有为1的值。因此，针对细菌与二肽的特定组合的大于1的值表明经48小时的细菌生长程度大于针对对照的经48小时的细菌生长程度。
针对细菌与二肽的每种组合并且针对每种对照，在不同的3天进行了实验(因此提供了3个生物复制品)并且在每天时进行四次实验(因此提供了4个技术复制品)。针对每天并且针对每种组合，计算针对四次技术复制品所获得的值(如以上详述的)的平均值(均值)以提供针对每天的每种组合的单一值。下面表5至6中示出的值是针对细菌与二肽的每种组合所获得的三个单一值的平均值(均值)。结果显示于下表5至6中：
表5：经48小时的病原性细菌
＊伴放线放线杆菌
表6：经48小时的有益细菌
在以上数据中，将值1.25作为阈值，在所述阈值之上二肽使得细菌的生长程度相对于对照显著地增加。选择所述值以便排除低刺激的代谢物并且避免假阳性的结果。
如可从以上数据看到的，Phe-Glu在5和10μmol/ml浓度下表现出益生元效应，并且Met-Pro在25、20和10μmol/ml浓度下表现出益生元效应。
实施例3
还研究了二肽Met-Pro和Phe-Glu(作为实例)对各种有益口腔细菌和病原性口腔细菌的生物膜生长的效应。二肽中存在的氨基酸残基为L-氨基酸残基。
能够增加以上有益细菌中的至少一种的生物膜量而不或仅极小程度地增加病原性细菌的生物膜量的底物被认为是益生元化合物。
通过在富营养型培养基(脑心浸液肉汤(BHI)，Oxoid)中经48小时建立生物膜生长试验研究了所测试的细菌响应于选择的化合物(Met-Pro、Phe-Glu)的生物膜形成的增加。通过将相应的细菌从血琼脂板转移至BHI制备了晚指数生长期液体培养物并且将所述培养物在37℃下在厌氧性气氛中针对粘性放线菌、小韦荣球菌、核粒梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普雷沃菌、福赛斯坦纳菌、内氏放线菌和生痰二氧化碳嗜纤维菌进行过夜孵育，并且在5％CO2环境中针对唾液链球菌、血链球菌、缓症链球菌、伴放线放线杆菌、变异链球菌和格氏链球菌进行过夜孵育。将过夜培养物转移至BHI并且通过在600nm下测定(BioRadSmartSpec 3000)光密度(OD600)将其调节至1×107CFU/ml的浓度。对于每种菌株，将200μl细菌悬浮液添加至含有20μl相应二肽的96孔板中。将二肽的最终浓度设定为5、10、20和25μmol/ml。对于每种所测试的细菌，还使用了不含有二肽的相应对照。另外，对于每种所测试的细菌，添加了背景对照以校正背景染色。所述背景对照含有所测试的细菌和0.03重量％氯己定(作为防腐剂)。如先前所述来孵育板。在48小时之后将上清液从板的孔中除去。用1×100μL PBS(磷酸盐缓冲盐水)将孔洗涤两次，用96％体积乙醇(96％体积水溶液)固定20分钟，并且用l重量％结晶紫(1重量％水溶液)将保留在孔底部的生物膜染色。用5％体积乙酸(5％体积水溶液)溶解结合的染料。通过使用Multiskan Ascent微板读数器(ThermoScientific)在630nm下测定吸光度来进行对染色生物膜的定量。
在扣除背景对照OD值之后，对于细菌/二肽的每种组合，将在48小时处获得的最大OD值除以针对相应对照所获得的OD值，由此使得对照具有为1的值。因此，针对细菌与二肽的特定组合的大于1的值表明经48小时的生物膜生长大于针对对照的经48小时的生物膜生长。
针对细菌与二肽的每种组合并且针对每种对照，在不同的3天进行了实验(因此提供了3个生物复制品)并且每天进行四次实验(因此提供了4个技术复制品)。针对每天并且针对每种组合，计算针对四次技术复制品所获得的值(如以上详述的)的平均值(均值)以提供针对每天的每种组合的单一值。下面表7至8中示出的值是针对细菌与二肽的每种组合所获得的三个单一值的平均值(均值)。结果显示于下表7至8中：
表7：48小时处的病原性细菌
＊伴放线放线杆菌
表8：经48小时的有益细菌
在以上数据中，将值1.6作为阈值，在所述阈值之上二肽使得细菌的生物膜生长相对于对照显著地增加。选择所述值以便排除低刺激的代谢物并且避免假阳性的结果。
如可从以上数据看到的，Phe-Glu在5和10μmol/ml浓度下表现出益生元效应，并且Met-Pro在25、20和10μmol/ml浓度下表现出益生元效应。

Claims (34)

1.一种口腔护理组合物，其包含：
(a)具有式Xaa1-Xaa2或Xaa2-Xaa1的二肽；其中Xaa1为具有极性不带电荷的侧链的氨基酸；并且Xaa2选自具有疏水性侧链的氨基酸、具有极性不带电荷的侧链的氨基酸，和脯氨酸；或
(b)具有式Xaa3-Xaa4或Xaa4-Xaa3的二肽；其中Xaa3为具有疏水性侧链的氨基酸；并且Xaa4选自具有疏水性侧链的氨基酸和具有带电荷的侧链的氨基酸。
2.如权利要求1所述的口腔护理组合物，其中Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4为L-氨基酸。
3.如任一前述权利要求所述的口腔护理组合物，其中以所述口腔护理组合物的重量为基准，所述组合物中的所述二肽存在量为0.01重量％至10重量％。
4.如任一前述权利要求所述的口腔护理组合物，其中Xaa2为具有脂肪族疏水性侧链的氨基酸。
5.如权利要求4所述的口腔护理组合物，其中Xaa2为丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸。
6.如权利要求5所述的口腔护理组合物，其中Xaa2为亮氨酸或缬氨酸。
7.如权利要求1至3中任一项所述的口腔护理组合物，其中Xaa2为天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸或苏氨酸。
8.如权利要求7所述的口腔护理组合物，其中Xaa2为天冬酰胺或谷氨酰胺。
9.如权利要求1至3中任一项所述的口腔护理组合物，其中Xaa2为脯氨酸。
10.如任一前述权利要求所述的口腔护理组合物，其中Xaa1为丝氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺。
11.如权利要求10所述的口腔护理组合物，其中Xaa1为丝氨酸。
12.如权利要求10所述的口腔护理组合物，其中Xaa1为甲硫氨酸。
13.如权利要求1至3中任一项所述的口腔护理组合物，其中Xaa3为具有芳族疏水性侧链的氨基酸。
14.如权利要求13所述的口腔护理组合物，其中Xaa3为色氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸。
15.如权利要求14所述的口腔护理组合物，其中Xaa3为色氨酸。
16.如权利要求14所述的口腔护理组合物，其中Xaa3为苯丙氨酸。
17.如权利要求13至16中任一项所述的口腔护理组合物，其中Xaa4为天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、组氨酸或赖氨酸。
18.如权利要求15所述的口腔护理组合物，其中Xaa4为谷氨酸或组氨酸。
19.如权利要求13至16中任一项所述的口腔护理组合物，其中Xaa4为具有脂肪族疏水性侧链的氨基酸。
20.如权利要求19所述的口腔护理组合物，其中Xaa4为丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸。
21.如前述权利要求中任一项所述的口腔护理组合物，其中所述组合物为洁齿剂、牙膏、凝胶、牙粉、漱口水、口腔清洗剂、锭剂、片剂、喷雾剂、口香糖或膜剂。
22.如前述权利要求中任一项所述的口腔护理组合物，其中所述组合物还包含对口腔健康具有有益效应的至少一种细菌物种。
23.如权利要求22所述的口腔护理组合物，其中对口腔健康具有有益效应的所述细菌物种选自缓症链球菌、唾液链球菌、血链球菌、粘性放线菌、小韦荣球菌、格氏链球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌、内氏放线菌以及其组合。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的组合物，所述组合物用于在口腔中进行选择性地促进：相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植。
25.根据权利要求1至23中任一项所述的组合物，所述组合物用于在口腔中相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的生物膜形成。
26.根据权利要求1至23中任一项所述的组合物，所述组合物用于维持和/或重新建立健康的口腔微生物群。
27.根据权利要求1至23中任一项所述的组合物，所述组合物用于预防牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种。
28.一种在受试者口腔中进行选择性地促进：相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植的方法；所述方法包括使所述口腔与如权利要求1至23中任一项所述的口腔护理组合物接触。
29.一种在受试者口腔中相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的生物膜形成的方法；所述方法包括使所述口腔与如权利要求1至23中任一项所述的口腔护理组合物接触。
30.一种在受试者中维持和/或重新建立健康的口腔微生物群的方法，所述方法包括使所述受试者的口腔与如权利要求1至23中任一项所述的口腔护理组合物接触。
31.一种预防受试者的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种的方法，所述方法包括使所述受试者的口腔与如权利要求1至23中任一项所述的口腔护理组合物接触。
32.以下项在口腔护理组合物中的用途：
(i)具有式Xaa1-Xaa2或Xaa2-Xaa1的二肽；其中Xaa1为具有极性不带电荷的侧链的氨基酸；并且Xaa2选自具有疏水性侧链的氨基酸、具有极性不带电荷的侧链的氨基酸，和脯氨酸；或
(ii)具有式Xaa3-Xaa4或Xaa4-Xaa3的二肽；其中Xaa3为具有疏水性侧链的氨基酸；并且Xaa4选自具有疏水性侧链的氨基酸和具有带电荷的侧链的氨基酸；
所述用途为：
(a)相对于病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生长、代谢活性或定植；
(b)相对于病原性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益效应的细菌的生物膜形成；
(c)在受试者中维持和/或重新建立健康的口腔微生物群；或
(d)预防受试者的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎以及龋齿中的一种或多种。
33.如权利要求32所述的用途，其中所述二肽在与对口腔健康具有有益效应的细菌和病原性口腔细菌一起孵育24小时后，相对于所述病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植选择性地促进对口腔健康具有有益效应的所述细菌的生长、代谢活性或定植。
34.如权利要求32所述的用途，其中所述二肽在与对口腔健康具有有益效应的细菌和病原性口腔细菌一起孵育48小时后，相对于所述病原性口腔细菌的生长、代谢活性或定植选择性地促进对口腔健康具有有益效应的所述细菌的生长、代谢活性或定植。
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