CN106011127A - 一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法 - Google Patents

一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法，属于壳寡糖的制备技术领域。本发明从蜗牛内脏中提取蜗牛酶，将其负载在阳离子染料废水改性后的凹凸棒土上，得到自制固定化蜗牛酶，再利用其酶解壳聚糖，喷雾干燥后，从而得到利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法。实例证明，本发明方法独特新颖，通过阳离子染料废水改性凹凸棒土，拓宽其层间距，增加了蜗牛酶的负载量，制得高效降解酶，解决了传统酶解法降解菌种单一，效率低的问题，而利用高剪切对壳聚糖进行增容、促溶预处理又弥补了壳聚糖酶解反应中浓度低，使生产的能耗水平和生产成本增加的不足，且生产工艺简单，产品得率高，对环境无污染，适合大规模生产。

Description

一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法
技术领域
本发明公开了一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法，属于壳寡糖的制备技术领域。
背景技术
壳聚糖降解所得壳寡糖水溶性好，易被人体吸收，具有较强的生物活性、独特的生理活性和功能。壳寡糖是指聚合度小于 10 的氨基葡萄糖的聚合物，不同聚合度的壳寡糖具有不同的生物活性，特别是在抗肿瘤方面，主要以壳五、壳六糖最佳。壳聚糖制备壳寡糖有化学降解法(如酸解法) 和酶解法。酸解法常采用盐酸降解壳聚糖，虽适合工业化生产，但产品单糖较多，壳寡糖含量低，生物活性难以体现，制备过程中会严重污染环境。降解甲壳素和壳聚糖的酶可分为专一性和非专一性水解酶。前者获得困难，价格昂贵，难以工业化大规模生产;后者主要有蛋白酶和脂肪酶等，大多数已商品化，来源广泛，适合工业化生产。用于壳聚糖降解的非专一性酶主要有木瓜蛋白酶和脂肪酶，来源有限。蜗牛酶为一种从蜗牛内脏中提出的含纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶的混合酶，对甲壳素有较高的降解作用。
壳聚糖是一种分子量在几十万甚至上百万的高聚物，溶于稀酸后黏度很高,而且溶解的过程十分缓慢,溶解度也不高,一般仅为1～3％。壳聚糖自身的这一特点决定了酶解反应中壳聚糖底物的浓度一般不会很高，文献报道都在5％以下。底物浓度较低直接导致了壳寡糖酶法制备的能耗水平和成产成本增加，与传统化学方法生产相比,没有真正的竞争力。因此提高酶解反应中壳聚糖的浓度成为壳寡糖酶法制备产业化的关键难题之一。
目前还鲜有采用一些技术手段加快壳聚糖溶解速度和提高壳聚糖溶液浓度的报道。尽管酶法制备壳寡糖的研究取得了很多进步，有些研究成果还应用到了实际的生产过程中,但是酶降解法生产壳寡糖还存在很多亟待解决的问题，例如缺少降解效率高且价格低廉的商品酶制剂，因此，要继续深入开展壳聚糖水解酶的降解机理、降解效率、产物分离纯化、产品质量控制等研究，为工业化生产提供技术保障，尤其是要继续筛选降解效率高、价格低廉的商品酶制剂、由于壳聚糖是一种高分子聚合物，分子量从几十万到上百万，溶液的黏度很高，溶解速率缓慢，反应体系的底物浓度普遍偏低，通常不超过,这直接导致了酶法生产壳寡糖在酶解、分离纯化、干燥等环节能耗水平的上升和生产周期的加长。因此要继续通过改进生产工艺，提高反应体系中底物的浓度，降低生产能耗和成本，提高产品的市场竞争力。
发明内容
本发明主要解决的技术问题：针对目前化学降解法制备壳寡糖导致产品单糖多，壳寡糖含量低且会严重污染环境，而传统的酶解法生产壳寡糖，又缺少降解效率高、价格低廉的酶制剂，另外原材料壳聚糖的自身特点导致其在酶解反应中浓度低，使生产的能耗水平和生产成本增加，与传统化学方法生产相比，没有真正的竞争力的现状，提供了一种从蜗牛内脏中提取蜗牛酶，将其负载在阳离子染料废水改性后的凹凸棒土上，得到自制固定化蜗牛酶，再利用其酶解壳聚糖，喷雾干燥后，从而得到壳寡糖。该方法独特新颖，通过阳离子染料废水改性凹凸棒土，拓宽其层间距，增加了蜗牛酶的负载量，制得高效降解酶，解决了传统酶解法降解菌种单一，效率低的问题，而利用高剪切对壳聚糖进行增容、促溶预处理又弥补了壳聚糖酶解反应中浓度低，使生产的能耗水平和生产成本增加的不足，且生产工艺简单，产品得率高，对环境无污染，适合大规模生产。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）挑选1～2kg体重30～40g的白玉蜗牛，饥饿处理一周并每天早晚各冲洗一次，处理完毕后人工解剖取出蜗牛内脏放入烧杯中，加入蜗牛内脏总体积3～5倍的去离子水，放入细胞破碎机中破碎处理30～40min；
（2）破碎处理后将得到的混合液移入卧式离心机，在10～15℃下以7000～9000r/min转速离心处理10～15min，分离得到上清液，再将上清液放入浓缩罐中，降低罐内压力至1000～1200Pa，减压浓缩至其原体积的1/3，得到蜗牛酶浓缩液；
（3）称取100～200g凹凸棒土浸入其体积5～8倍的阳离子染料废水中，超声振荡改性过夜，将改性后的混合物移入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤1～2h，得到改性凹凸棒土，再将改性后的凹凸棒土倒入烧杯并加入上述得到的蜗牛浓缩液，直至将凹凸棒土浸没，超声振荡吸附10～12h后真空冷冻干燥，再将干燥产物粉碎并过100目标准筛得到固定化蜗牛酶，备用；
（4）称取400～500g壳聚糖倒入6～8L去离子水中，转入高剪切分散机以2500～3000r/min转速剪切分散处理20～30min，再加入100～200mL冰醋酸，升高温度至45～55℃继续剪切5～10min后，补加200～300g壳聚糖和50～100mL冰醋酸，重复前述步骤直至壳聚糖溶液质量浓度达到15%；
（5）将上述得到的壳聚糖溶液倒入酶解罐中，加入溶液总质量5～8%备用的固定化蜗牛酶，搅拌均匀后用浓度为0.5mol/L盐酸调节溶液pH至4～5，移入恒温箱中在40～50℃下保温酶解5～7h；
（6）将上述酶解产物移入卧式离心机，在4000～5000r/min转速下离心分离5～10min得到上清液，再将上清液以20～30mL/min速率送入喷雾干燥机，在180℃的进风温度下干燥后包装，即可得到壳寡糖。
所述步骤（3）中的阳离子染料废水是阳离子嫩黄7GL染料废水、阳离子艳红5GN染料废水和阳离子红GTL染料废水中的一种或多种混合而得。
本发明的应用方法是：将本发明制得的壳寡糖通过制囊机制成壳寡糖胶囊，其中每个胶囊中的含量为0.2～0.5g，食用时，配以温水口服即可，其中成人每天三餐后服用，每次服用1～3片，连续服用7～14天，可提高人体免疫力，尤其是高血糖患者，可将血糖从原有的6.1～6.2mmol/L降低到3.9～4.8mmol/L，效果极其显著，可大规模推广应用。
本发明的有益效果是：
（1）本发明生产工艺简单，产品得率高，对环境无污染；
（2）本发明通过阳离子染料废水改性凹凸棒土，拓宽其层间距，增加了蜗牛酶的负载量，制得高效降解酶，解决了传统酶解法降解菌种单一，效率低的问题；
（3）本发明利用高剪切对壳聚糖进行增容、促溶预处理又弥补了壳聚糖酶解反应中浓度低，使生产的能耗水平和生产成本增加的不足；
（4）经检测，本发明产品得率高达68％以上，比低浓度条件下的制备工艺提高了18％以上，且产品质量较好，可大规模推广应用。
具体实施方式
首先挑选1～2kg体重30～40g的白玉蜗牛，饥饿处理一周并每天早晚各冲洗一次，处理完毕后人工解剖取出蜗牛内脏放入烧杯中，加入蜗牛内脏总体积3～5倍的去离子水，放入细胞破碎机中破碎处理30～40min；破碎处理后将得到的混合液移入卧式离心机，在10～15℃下以7000～9000r/min转速离心处理10～15min，分离得到上清液，再将上清液放入浓缩罐中，降低罐内压力至1000～1200Pa，减压浓缩至其原体积的1/3，得到蜗牛酶浓缩液；然后称取100～200g凹凸棒土浸入其体积5～8倍的阳离子染料废水中，超声振荡改性过夜，将改性后的混合物移入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤1～2h，得到改性凹凸棒土，再将改性后的凹凸棒土倒入烧杯并加入上述得到的蜗牛浓缩液，直至将凹凸棒土浸没，超声振荡吸附10～12h后真空冷冻干燥，再将干燥产物粉碎并过100目标准筛得到固定化蜗牛酶，备用；接下来称取400～500g壳聚糖倒入6～8L去离子水中，转入高剪切分散机以2500～3000r/min转速剪切分散处理20～30min，再加入100～200mL冰醋酸，升高温度至45～55℃继续剪切5～10min后，补加200～300g壳聚糖和50～100mL冰醋酸，重复前述步骤直至壳聚糖溶液质量浓度达到15%；将上述得到的壳聚糖溶液倒入酶解罐中，加入溶液总质量5～8%备用的固定化蜗牛酶，搅拌均匀后用浓度为0.5mol/L盐酸调节溶液pH至4～5，移入恒温箱中在40～50℃下保温酶解5～7h；最后将上述酶解产物移入卧式离心机，在4000～5000r/min转速下离心分离5～10min得到上清液，再将上清液以20～30mL/min速率送入喷雾干燥机，在180℃的进风温度下干燥后包装，即可得到壳寡糖。其中上述阳离子染料废水是阳离子嫩黄7GL染料废水、阳离子艳红5GN染料废水和阳离子红GTL染料废水中的一种或多种混合而得。
实例1
首先挑选1kg体重30g的白玉蜗牛，饥饿处理一周并每天早晚各冲洗一次，处理完毕后人工解剖取出蜗牛内脏放入烧杯中，加入蜗牛内脏总体积3倍的去离子水，放入细胞破碎机中破碎处理30min；破碎处理后将得到的混合液移入卧式离心机，在10℃下以7000r/min转速离心处理10min，分离得到上清液，再将上清液放入浓缩罐中，降低罐内压力至1000Pa，减压浓缩至其原体积的1/3，得到蜗牛酶浓缩液；然后称取100g凹凸棒土浸入其体积5倍的阳离子染料废水中，超声振荡改性过夜，将改性后的混合物移入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤1h，得到改性凹凸棒土，再将改性后的凹凸棒土倒入烧杯并加入上述得到的蜗牛浓缩液，直至将凹凸棒土浸没，超声振荡吸附10h后真空冷冻干燥，再将干燥产物粉碎并过100目标准筛得到固定化蜗牛酶，备用；接下来称取400g壳聚糖倒入6L去离子水中，转入高剪切分散机以2500r/min转速剪切分散处理20min，再加入100mL冰醋酸，升高温度至45℃继续剪切5min后，补加200g壳聚糖和50mL冰醋酸，重复前述步骤直至壳聚糖溶液质量浓度达到15%；将上述得到的壳聚糖溶液倒入酶解罐中，加入溶液总质量5%备用的固定化蜗牛酶，搅拌均匀后用浓度为0.5mol/L盐酸调节溶液pH至4，移入恒温箱中在40℃下保温酶解5h；最后将上述酶解产物移入卧式离心机，在4000r/min转速下离心分离5min得到上清液，再将上清液以20mL/min速率送入喷雾干燥机，在180℃的进风温度下干燥后包装，即可得到壳寡糖。
本发明操作简便，使用时，将本发明制得的壳寡糖通过制囊机制成壳寡糖胶囊，其中每个胶囊中的含量为0.2g，食用时，配以温水口服即可，其中成人每天三餐后服用，每次服用1片，连续服用7天，可提高人体免疫力，尤其是高血糖患者，可将血糖从原有的6.1mmol/L降低到3.9mmol/L，效果极其显著，可大规模推广应用。
实例2
首先挑选1.5kg体重35g的白玉蜗牛，饥饿处理一周并每天早晚各冲洗一次，处理完毕后人工解剖取出蜗牛内脏放入烧杯中，加入蜗牛内脏总体积4倍的去离子水，放入细胞破碎机中破碎处理35min；破碎处理后将得到的混合液移入卧式离心机，在13℃下以8000r/min转速离心处理13min，分离得到上清液，再将上清液放入浓缩罐中，降低罐内压力至1100Pa，减压浓缩至其原体积的1/3，得到蜗牛酶浓缩液；然后称取150g凹凸棒土浸入其体积7倍的阳离子染料废水中，超声振荡改性过夜，将改性后的混合物移入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤1.5h，得到改性凹凸棒土，再将改性后的凹凸棒土倒入烧杯并加入上述得到的蜗牛浓缩液，直至将凹凸棒土浸没，超声振荡吸附11h后真空冷冻干燥，再将干燥产物粉碎并过100目标准筛得到固定化蜗牛酶，备用；接下来称取450g壳聚糖倒入7L去离子水中，转入高剪切分散机以2800r/min转速剪切分散处理25min，再加入150mL冰醋酸，升高温度至50℃继续剪切8min后，补加250g壳聚糖和80mL冰醋酸，重复前述步骤直至壳聚糖溶液质量浓度达到15%；将上述得到的壳聚糖溶液倒入酶解罐中，加入溶液总质量7%备用的固定化蜗牛酶，搅拌均匀后用浓度为0.5mol/L盐酸调节溶液pH至4.5，移入恒温箱中在45℃下保温酶解6h；最后将上述酶解产物移入卧式离心机，在4500r/min转速下离心分离8min得到上清液，再将上清液以25mL/min速率送入喷雾干燥机，在180℃的进风温度下干燥后包装，即可得到壳寡糖。
本发明操作简便，使用时，将本发明制得的壳寡糖通过制囊机制成壳寡糖胶囊，其中每个胶囊中的含量为0.35g，食用时，配以温水口服即可，其中成人每天三餐后服用，每次服用2片，连续服用10天，可提高人体免疫力，尤其是高血糖患者，可将血糖从原有的6.1mmol/L降低到4.2mmol/L，效果极其显著，可大规模推广应用。
实例3
首先挑选2kg体重40g的白玉蜗牛，饥饿处理一周并每天早晚各冲洗一次，处理完毕后人工解剖取出蜗牛内脏放入烧杯中，加入蜗牛内脏总体积5倍的去离子水，放入细胞破碎机中破碎处理40min；破碎处理后将得到的混合液移入卧式离心机，在15℃下以9000r/min转速离心处理15min，分离得到上清液，再将上清液放入浓缩罐中，降低罐内压力至1200Pa，减压浓缩至其原体积的1/3，得到蜗牛酶浓缩液；然后称取200g凹凸棒土浸入其体积8倍的阳离子染料废水中，超声振荡改性过夜，将改性后的混合物移入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤2h，得到改性凹凸棒土，再将改性后的凹凸棒土倒入烧杯并加入上述得到的蜗牛浓缩液，直至将凹凸棒土浸没，超声振荡吸附12h后真空冷冻干燥，再将干燥产物粉碎并过100目标准筛得到固定化蜗牛酶，备用；接下来称取500g壳聚糖倒入8L去离子水中，转入高剪切分散机以3000r/min转速剪切分散处理30min，再加入200mL冰醋酸，升高温度至55℃继续剪切10min后，补加300g壳聚糖和100mL冰醋酸，重复前述步骤直至壳聚糖溶液质量浓度达到15%；将上述得到的壳聚糖溶液倒入酶解罐中，加入溶液总质量8%备用的固定化蜗牛酶，搅拌均匀后用浓度为0.5mol/L盐酸调节溶液pH至5，移入恒温箱中在50℃下保温酶解7h；最后将上述酶解产物移入卧式离心机，在5000r/min转速下离心分离10min得到上清液，再将上清液以30mL/min速率送入喷雾干燥机，在180℃的进风温度下干燥后包装，即可得到壳寡糖。
本发明操作简便，使用时，将本发明制得的壳寡糖通过制囊机制成壳寡糖胶囊，其中每个胶囊中的含量为0.5g，食用时，配以温水口服即可，其中成人每天三餐后服用，每次服用3片，连续服用14天，可提高人体免疫力，尤其是高血糖患者，可将血糖从原有的6.2mmol/L降低到4.8mmol/L，效果极其显著，可大规模推广应用。

Claims (2)

1.一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）挑选1～2kg体重30～40g的白玉蜗牛，饥饿处理一周并每天早晚各冲洗一次，处理完毕后人工解剖取出蜗牛内脏放入烧杯中，加入蜗牛内脏总体积3～5倍的去离子水，放入细胞破碎机中破碎处理30～40min；
（2）破碎处理后将得到的混合液移入卧式离心机，在10～15℃下以7000～9000r/min转速离心处理10～15min，分离得到上清液，再将上清液放入浓缩罐中，降低罐内压力至1000～1200Pa，减压浓缩至其原体积的1/3，得到蜗牛酶浓缩液；
（3）称取100～200g凹凸棒土浸入其体积5～8倍的阳离子染料废水中，超声振荡改性过夜，将改性后的混合物移入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤1～2h，得到改性凹凸棒土，再将改性后的凹凸棒土倒入烧杯并加入上述得到的蜗牛浓缩液，直至将凹凸棒土浸没，超声振荡吸附10～12h后真空冷冻干燥，再将干燥产物粉碎并过100目标准筛得到固定化蜗牛酶，备用；
（4）称取400～500g壳聚糖倒入6～8L去离子水中，转入高剪切分散机以2500～3000r/min转速剪切分散处理20～30min，再加入100～200mL冰醋酸，升高温度至45～55℃继续剪切5～10min后，补加200～300g壳聚糖和50～100mL冰醋酸，重复前述步骤直至壳聚糖溶液质量浓度达到15%；
（5）将上述得到的壳聚糖溶液倒入酶解罐中，加入溶液总质量5～8%备用的固定化蜗牛酶，搅拌均匀后用浓度为0.5mol/L盐酸调节溶液pH至4～5，移入恒温箱中在40～50℃下保温酶解5～7h；
（6）将上述酶解产物移入卧式离心机，在4000～5000r/min转速下离心分离5～10min得到上清液，再将上清液以20～30mL/min速率送入喷雾干燥机，在180℃的进风温度下干燥后包装，即可得到壳寡糖。
2.根据权利要求1所述的一种利用固定化蜗牛酶制备壳寡糖的方法，其特征在于：所述步骤（3）中的阳离子染料废水是阳离子嫩黄7GL染料废水、阳离子艳红5GN染料废水和阳离子红GTL染料废水中的一种或多种混合而得。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136307A (zh) * 2018-09-06 2019-01-04 广东药科大学 一种用蜗牛酶制备壳寡糖的方法及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1216778A (zh) * 1998-10-10 1999-05-19 复旦大学 一种蜗牛酶的制备方法
CN1772915A (zh) * 2004-11-10 2006-05-17 中国科学院大连化学物理研究所 一种用固定化酶生产壳寡糖的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1216778A (zh) * 1998-10-10 1999-05-19 复旦大学 一种蜗牛酶的制备方法
CN1772915A (zh) * 2004-11-10 2006-05-17 中国科学院大连化学物理研究所 一种用固定化酶生产壳寡糖的方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴梧桐: "《生物制药工艺学》", 28 February 2006, 中国医药科技出版社 *
张剑 等: "甲壳素固定化蜗牛酶对壳聚糖的降解行为", 《高分子材料科学与工程》 *
张涛 等: "蜗牛酶降解壳聚糖制备壳寡糖的研究", 《华西药学杂志》 *
李建华: "《环境科学与工程技术词典》", 31 October 2005, 中国环境出版社 *
王亮 等: "酶法制备壳寡糖及其生物学功能", 《生物加工工程》 *
王建龙 等: "《现代环境生物技术》", 30 September 2008, 清华大学出版社 *
苏莉 等: "一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化和定性", 《中国微生态学杂志》 *
黄健花: "凹凸棒土的有机改性及其应用", 《中国博士学位论文全文数据库工程科技I辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136307A (zh) * 2018-09-06 2019-01-04 广东药科大学 一种用蜗牛酶制备壳寡糖的方法及其用途
WO2020048270A1 (zh) * 2018-09-06 2020-03-12 广东药科大学 一种用蜗牛酶制备壳寡糖的方法及其用途

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