CN105974034B - 一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品安全检测领域,特别涉及一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法。该方法为:采用快速溶剂萃取仪以环己烷为萃取剂将烟熏肉制品多环芳烃萃取出来,经旋转蒸发,浓缩后得到多环芳烃的待测品,采用HPLC进行检测,HPLC色谱条件为:采用Eclipse PAH色谱柱,以纯水和乙腈进行梯度洗脱,根据HPLC的检测结果,获得多环芳烃含量。本发明提供的检测方法可以准确检测烟熏肉制品中多环芳烃含量,检测效率高、省时、节约检测成本。
Description
技术领域
本发明涉及食品安全检测领域,特别涉及一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法。
背景技术
烟熏是一种已沿用多年的传统肉制品加工方法,长期以来,世界各地人们对不同浓度的烟熏味均有一定的喜好。传统的烟熏加工方法是采用木材不完全燃烧时产生的烟气熏制产品。烟熏可以使肉制品脱水,赋予产品特殊的香味,改善肉的颜色,并且有一定的杀菌防腐和抗氧化作用。虽然传统烟熏肉制品风味独特,但在烟熏肉制品的整个生产加工过程中会会引入大量有害物质,尤其多环芳烃的引入对人体伤害最大。现代加工方式虽然可减少多环芳烃的引入,但仍不能彻底消除。
多环芳烃(PAHs)是一类含有两个及两个以上苯环连在一起的环状化合物,是最早发现且数量最多的致癌物,在目前已查出的500多种主要致癌物中,有200多种属于该类化合物。PAHs是有机物不完全燃烧产生的,其中苯并[a]芘(B[a]P)是该类化合物种最具有代表的强致癌物,我国规定食品中B[a]P含量不得超标。目前烟熏肉制品中PAHs萃取的前处理方法麻烦、耗时且成本较高;并且我国对烟熏肉制品中多环芳烃的限量仅以B[a]P的残留量作为评价指标,这种评价方法相对较片面,无法与欧盟以苯并[a]蒽(B[a]A)、䓛(CHR)、苯并[b]荧蒽(B[b]F)以及苯并[a]芘(B[a]P)4种多环芳烃的总含量作为评价指标相媲美。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术的不足,而开发的可以对烟熏肉制品中的4种多环芳烃含量进行同时检测的方法,具有较高的精密度。采用该方法可以有效解决烟熏肉制品中多环芳烃检测前处理繁琐、检出个数少、检测成本高和耗时等问题。
本发明采用的技术方案如下:
一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:(1)制作苯并[a]蒽、䓛、苯并[b]荧蒽以及苯并[a]芘4种多环芳烃混合溶液的标准曲线;(2)将活化硅胶、与聚丙烯酸钠混匀的烟熏肉糜样品以及硅藻土依次装填入萃取池中,以环己烷为萃取剂,利用快速溶剂萃取仪萃取烟熏肉制品中的多环芳烃,萃取液经旋转蒸发、甲醇溶解后得到多环芳烃的待测品;采用HPLC进行检测,所述HPLC色谱条件为:采用C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用FLR检测器进行HPLC-FLR检测,根据HPLC的检测结果结合所述步骤(1)的标准曲线进行分析计算获得多环芳烃含量。
所述肉糜样品为1重量份,聚丙烯酸钠为0.6~1.0重量份,活化硅胶为4~5重量份,硅藻土填满萃取池。
所述快速溶剂萃取仪的程序设置为:萃取温度为80-100℃,加热5~6min,50~60%冲洗体积,静态萃取5~6min,循环1~3次,吹扫时间120s。
所述旋转蒸发的温度在55~60℃,转速为80~90rpm。
所述甲醇溶解体积为2~4mL。
所述梯度洗脱程序如下表:
所述HPLC检测的流速为1.6~2.4mL/min,柱温为22~27℃,进样量为10~20μL。
所述FLR检测器检测采用梯度波长法,波长设置为:
本发明有益效果主要有:
(1)相较于国标样品前处理,本方法前处理操作简便、节约溶剂、节约时间;
(2)所得到的液相方法可以同时测出样品中的4种多环芳烃,并且方法的灵敏度高、重现性好,检测效率高、省时、节约检测成本。
附图说明
图1为30ng/mL多环芳烃混合标准品液相色谱图。
图2为15ng/mL多环芳烃混合标准品液相色谱图。
图3为7.5ng/mL多环芳烃混合标准品液相色谱图。
图4为2.5ng/mL多环芳烃混合标准品液相色谱图。
图5为1.0ng/mL多环芳烃混合标准品液相色谱图。
图6为0.5ng/mL多环芳烃混合标准品液相色谱图。
图7为苯并[a]蒽的标准曲线图。
图8为䓛的标准曲线图。
图9为苯并[b]荧蒽的标准曲线图。
图10为苯并[a]芘的标准曲线图。
具体实施方式
(1)4种多环芳烃混合标准曲线的制作:
对质量浓度分别为30ng/ml、15ng/ml、7.5ng/ml、2.5ng/ml、1.0ng/ml、0.5ng/ml的多环芳烃混合液(PAHs mix4)采用Eclipse PAH C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为:
HPLC检测的流速为2mL/min,HPLC检测的进样量为20μL,色谱柱柱温为25℃。FLR检测波长如下表所示:
得到的液相色谱图如图1-6所示。4种多环芳烃的保留时间、回归方程与相关系数分别如下表所示:
以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制PAHs的HPLC标准曲线,曲线分别如图7-10所示。
(2)供测品溶液的制备:
准确称取1.0g肉糜样品,加入0.6~1.0g的聚丙烯酸钠,混匀。将4~5g活化后的硅胶、混匀后的肉糜样品以及硅藻土依次装填入萃取池中。采用环己烷作为萃取溶剂,对ASE350设置萃取条件为:萃取温度为80℃~100℃,加热5min~6min,50%~60%冲洗体积,静态萃取5 min~6min,循环1~3次,吹扫时间120s。将所得到的萃取液55℃下旋转浓缩至溶剂蒸发完全,溶于2~4ml甲醇溶液中,室温下10000rpm离心5分钟。将离心后的上清液过0.22μm微孔滤膜,滤液供HPLC检测。
(3)HPLC-FLR检测:
HPLC采用Eclipse PAH C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为:
HPLC检测的流速为1.6~2.4mL/min,HPLC检测的进样量为10~20μL,色谱柱柱温为22~27℃。FLR检测波长如下表所示。
(4) 4种多环芳烃含量的计算
根据HPLC多环芳烃峰面积通过标准曲线计算多环芳烃含量。
具体实施例如下:
实施例1、一种哈尔滨红肠中4种多环芳烃含量的检测。
(1)供测品溶液的制备
准确称取1.0g肉糜样品,加入0.6g的聚丙烯酸钠,混匀。将4g活化后的硅胶、混匀后的肉糜样品以及硅藻土依次装填入萃取池中。采用环己烷作为萃取溶剂,对ASE350设置萃取条件为:萃取温度为80℃,加热6min,60%冲洗体积,静态萃取6min,循环1次,吹扫时间120s。将所得到的萃取液55℃下旋转浓缩至溶剂蒸发完全,溶于2mL甲醇溶液中,室温下10000rpm离心5分钟。将离心后的上清液过0.22μm微孔滤膜,滤液供HPLC检测。
(2)HPLC-FLR检测
HPLC采用Eclipse PAH C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为:
HPLC检测的流速为1.6mL/min,HPLC检测的进样量为10μL,色谱柱柱温为22℃。FLR检测波长如下表所示:
(3) 4种多环芳烃含量的计算
根据HPLC多环芳烃峰面积通过标准曲线计算多环芳烃含量。
实施例2:一种烟熏火腿中4种多环芳烃含量的检测。
(1)供测品溶液的制备
准确称取1.0g肉糜样品,加入0.8g的聚丙烯酸钠,混匀。将4.5g活化后的硅胶、混匀后的肉糜样品以及硅藻土依次装填入萃取池中。采用环己烷作为萃取溶剂,对ASE350设置萃取条件为:萃取温度为85℃,加热6min,50%冲洗体积,静态萃取6min,循环2次,吹扫时间120s。将所得到的萃取液55℃下旋转浓缩至溶剂蒸发完全,溶于3mL甲醇溶液中,室温下10000rpm离心5分钟。将离心后的上清液过0.22μm微孔滤膜,滤液供HPLC检测。
(2)HPLC-FLR检测
HPLC采用Eclipse PAH C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为:
HPLC检测的流速为1.8mL/min,HPLC检测的进样量为20μL,色谱柱柱温为24℃。FLR检测波长如下表所示:
(3) 4种多环芳烃含量的计算
根据HPLC多环芳烃峰面积通过标准曲线计算多环芳烃含量。
实施例3:一种腊肉中4种多环芳烃含量的检测。
(1)供测品溶液的制备
准确称取1.0g肉糜样品,加入1.0g的聚丙烯酸钠,混匀。将5g活化后的硅胶、混匀后的肉糜样品以及硅藻土依次装填入萃取池中。采用环己烷作为萃取溶剂,对ASE350设置萃取条件为:萃取温度为100℃,加热5min,50%冲洗体积,静态萃取6min,循环3次,吹扫时间120s。将所得到的萃取液55℃下旋转浓缩至溶剂蒸发完全,溶于4mL甲醇溶液中,室温下10000rpm离心5分钟。将离心后的上清液过0.22μm微孔滤膜,滤液供HPLC检测。
(2)HPLC-FLR检测
HPLC采用Eclipse PAH C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为:
时间(MIN) | 纯水% | 乙腈% |
0 | 38 | 62 |
0.75 | 38 | 62 |
5.25 | 0 | 100 |
7.50 | 0 | 100 |
7.51 | 38 | 62 |
12 | 38 | 62 |
HPLC检测的流速为2mL/min,HPLC检测的进样量为20μL,色谱柱柱温为25℃。FLR检测波长如下表所示:
时间(min) | 激发波长(λex/nm) | 发射波长(λem/nm) |
0.00 | 275 | 385 |
6.50 | 275 | 385 |
6.51 | 256 | 446 |
7.50 | 256 | 446 |
7.51 | 260 | 410 |
9.00 | 260 | 410 |
(3) 4种多环芳烃含量的计算
根据HPLC多环芳烃峰面积通过标准曲线计算多环芳烃含量。
实施例4:一种培根中4种多环芳烃含量的检测。
(1)供测品溶液的制备
准确称取1.0g肉糜样品,加入1.0g的聚丙烯酸钠,混匀。将5g活化后的硅胶、混匀后的肉糜样品以及硅藻土依次装填入萃取池中。采用环己烷作为萃取溶剂,对ASE350设置萃取条件为:萃取温度为100℃,加热5min,50%冲洗体积,静态萃取6min,循环2次,吹扫时间120s。将所得到的萃取液55℃下旋转浓缩至溶剂蒸发完全,溶于4mL甲醇溶液中,室温下10000rpm离心5分钟。将离心后的上清液过0.22μm微孔滤膜,滤液供HPLC检测。
(2)HPLC-FLR检测
HPLC采用Eclipse PAH C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为:
时间(MIN) | 纯水% | 乙腈% |
0 | 38 | 62 |
0.75 | 38 | 62 |
5.25 | 0 | 100 |
7.50 | 0 | 100 |
7.51 | 38 | 62 |
12 | 38 | 62 |
HPLC检测的流速为2.4mL/min,HPLC检测的进样量为20μL,色谱柱柱温为26℃。FLR检测波长如下表所示:
时间(min) | 激发波长(λex/nm) | 发射波长(λem/nm) |
0.00 | 275 | 385 |
6.50 | 275 | 385 |
6.51 | 256 | 446 |
7.50 | 256 | 446 |
7.51 | 260 | 410 |
9.00 | 260 | 410 |
(3) 4种多环芳烃含量的计算
根据HPLC多环芳烃峰面积通过标准曲线计算多环芳烃含量。
实施例5 :方法学的确认。
为了验证多环芳提取方法的准确性进行了加标回收实验,分别已知浓度的样品中添加高(15μg/kg)、中(2.5μg/kg)以及低(1.0μg/kg) 3个质量浓度水平的多环芳烃混合标准液,提取、浓缩后用高效液相色谱进行检测,每个添加水平重复测定6次。结果见表。从表可以看出,三种加标水平下,4种多环芳烃的回收率均在70%-100%之间,相对标准偏差(RSD)<5%。表明了本发明回收率高,重复性好。
本发明涉及的其它未说明部分与现有技术相同。
Claims (7)
1.一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:(1)制作苯并[a]蒽、䓛、苯并[b]荧蒽以及苯并[a]芘4种多环芳烃混合溶液的标准曲线;(2)将活化硅胶、与聚丙烯酸钠混匀的烟熏肉糜样品以及硅藻土依次装填入萃取池中,以环己烷为萃取剂,利用快速溶剂萃取仪萃取烟熏肉制品中的多环芳烃,萃取液经旋转蒸发、甲醇溶解后得到多环芳烃的待测品;采用HPLC进行检测,所述HPLC色谱条件为:采用C18色谱柱,以纯水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用FLR检测器进行HPLC-FLR检测,根据HPLC的检测结果结合所述步骤(1)的标准曲线进行分析计算获得多环芳烃含量;所述梯度洗脱程序如下表:
。
2.根据权利要求1所述的一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:所述肉糜样品为1重量份,聚丙烯酸钠为0.6~1.0重量份,活化硅胶为4~5重量份,硅藻土填满萃取池。
3.根据权利要求1所述的一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:所述快速溶剂萃取仪的程序设置为:萃取温度为80-100℃,加热5~6min,50~60%冲洗体积,静态萃取5~6min,循环1~3次,吹扫时间120s。
4.根据权利要求1所述的一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:所述旋转蒸发的温度在55~60℃,转速为80~90rpm。
5.根据权利要求1所述的一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:所述甲醇溶解体积为2~4mL。
6.根据权利要求1所述的一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:所述HPLC检测的流速为1.6~2.4mL/min,柱温为22~27℃,进样量为10~20μL。
7.根据权利要求1所述的一种烟熏肉制品中4种多环芳烃含量的检测方法,其特征在于:所述FLR检测器检测采用梯度波长法,波长设置为:
。
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