CN105943540A - 一种西米杜鹃醇的用途 - Google Patents

一种西米杜鹃醇的用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种西米杜鹃醇在制备治疗上呼吸道感染的药物中的应用。通过实验证明，西米杜鹃醇对呼吸道感染相关病毒和细菌均有一定抑制作用，还降低了上呼吸道感染小鼠的肺指数、TNF‑α的含量、鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数，表明西米杜鹃醇具有明显的抗上呼吸道感染的作用。

Description

一种西米杜鹃醇的用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种西米杜鹃醇的用途。
背景技术
上呼吸道感染，简称上感，是鼻腔和咽部、喉部呼吸道黏膜炎症的总称，包括普通感冒、急性鼻窦炎、急性中耳炎等，临床表现为发热、头痛、鼻塞、咽痛、咳嗽等，病例特征为鼻腔内部水肿、咽粘膜充血等，是人类最常见的感染性疾病之一，容易出现并发症，累及临近器官，如气管、支气管、耳、眼以及颈部淋巴结等，治疗不及时会发展成为下呼吸道炎症，是5岁以下儿童病死的首位原因。
上呼吸道感染主要由病毒感染引起，如鼻病毒、流感病毒、冠状病毒等，后期会继发细菌感染。目前临床上用于治疗上呼吸道感染的药物主要有抗病毒药、非甾体类抗炎药、解热镇痛药和镇咳剂等，采用的治疗方案为病因治疗和病症治疗相结合。但病毒感染具有易突变性，针对特异性靶点的抗病毒药物临床疗效有限，且容易产生耐药性，对症治疗药物也只是缓解某一症状。
西米杜鹃醇是从传统中药植物艾叶中提取出来的成分，其结构式如下：
分子式：C30H50O，分子量：426.717。到目前为止，尚未发现涉及西米杜鹃醇治疗上呼吸道感染的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种西米杜鹃醇的新用途。
本发明提供了一种西米杜鹃醇在制备治疗上呼吸道感染的药物中的应用。
优选的，所述西米杜鹃醇的剂量为1.1～22.2mg/kg。
优选的，所述上呼吸道感染由病毒引起。
优选的，所述病毒为流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、冠状病毒、副流感病毒、柯萨奇病毒与单纯疱疹病毒中的一种或多种。
优选的，所述上呼吸道感染由细菌引起。
优选的，所述细菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌与乙型链球菌中的一种或多种。
本发明提供了一种西米杜鹃醇在制备治疗上呼吸道感染的药物中的应用。通过实验证明，西米杜鹃醇对呼吸道感染相关病毒和细菌均有一定抑制作用，还降低了上呼吸道感染小鼠的肺指数、TNF-α的含量、鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数，表明西米杜鹃醇具有明显的抗上呼吸道感染的作用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种西米杜鹃醇在制备治疗上呼吸道感染的药物中的应用。其中，所述上呼吸道感染为本领域技术人员熟知的上呼吸道感染，并无特殊的限制，当上呼吸道感染由病毒引起时，所述病毒优选为流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、冠状病毒、副流感病毒、柯萨奇病毒与单纯疱疹病毒中的一种或多种；当所述上呼吸道感染由细菌引起时，所述细菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌与乙型链球菌中的一种或多种。
在本发明的一些实施例中，所述流感病毒为流感病毒FM1株；在本发明的一些实施例中，所述鼻病毒为鼻病毒R14型；在本发明的一些实施例中所述呼吸道合胞病毒为呼吸道合胞病毒RSV-N3株；在本发明的一些实施例中，所述腺病毒为腺病毒3型；在本发明的一些实施例中，所述腺病毒为腺病毒7型；在本发明的一些实施例中，所述副流感病毒为HPIV-3；在本发明的一些实施例中，所述柯萨奇病毒为柯萨奇病毒B4株；在本发明的另一些实施例中，所述单纯疱疹病毒为单纯疱疹病毒1型(HSV-1)。
本发明中，所述西米杜鹃醇用于治疗上呼吸道感染的剂量优选为1.1～22.2mg/kg。
本发明提供了一种西米杜鹃醇在制备治疗上呼吸道感染的药物中的应用。通过实验证明，西米杜鹃醇对呼吸道感染相关病毒和细菌均有一定抑制作用，还降低了上呼吸道感染小鼠的肺指数、TNF-α的含量、鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数，表明西米杜鹃醇具有明显的抗上呼吸道感染的作用。
本发明还提供了一种上呼吸道感染的药物，包括西米杜鹃醇，优选还包括药学上可接受的辅料。
西米杜鹃醇可单独使用，也可将其与任何用于制备临床药剂的赋形剂混合使用，制备成口服剂、外用制剂、注射剂等临床可接受的药物剂型使用，优选为注射剂、口服制剂或喷雾剂。
当所述药物的剂型为口服制剂时，其用来治疗上呼吸道感染时的剂量优选为1.1～4.4mg/kg；当所述药物的剂型为注射剂时，其用来治疗上呼吸道感染的剂量优选为5.5～22.2mg/kg。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种西米杜鹃醇的用途及治疗上呼吸道感染的药物进行详细描述。
以下实施例中所用的试剂均为市售。
实施例1：西米杜鹃醇体外抗病毒作用试验研究
1、实验材料
1.1药物
西米杜鹃醇，纯度为91.15％，由艾叶药材提取纯化而得，由江苏康缘药业股份有限公司提供；
利巴韦林：山东圣鲁制药有限公司。
1.2材料
毒种：流感病毒FM1株由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，于MDCK狗肾细胞传代，以病变及鸡红血球血凝法来判断其滴度；鼻病毒R14型由中国医学科学院病毒所提供，KMB17双倍体细胞中传代，并进行测定；呼吸道合胞病毒购自中国预防医学科学院病毒所，为RSV-N3株，于Hep-2细胞上扩增，并进行测定；腺病毒3型毒种由中国医学科学院病毒所提供，于Hela细胞上传代，并进行测定；腺病毒7型引进自ATCC，于人肺二倍体细胞HEL上传代，并进行测定；冠状病毒(coronavirus)购自美国ATCC，于人肺二倍体细胞HEL上传代，并进行测定；副流感病毒(HPIV-3)购自美国ATCC，于Hep-2细胞上扩增，并进行测定；柯萨奇病毒B4株购自中国科学院武汉病毒研究所，于Vero细胞上扩增，并进行测定；单纯疱疹病毒1型(HSV-1)源自中国药品与生物制品检定所，于Vero细胞上扩增，并进行测定。
细胞：人肺KMB17原代细胞株，由中国医学科学院昆明生物制品研究所提供；MDCK、Hep-2、Hela、HEL、Vero引自中科院上海细胞库。
AL104电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；
离心机，Eppendorf 5424；
酶标仪，molecular devices spectraMax M2e。
1.3方法
(1)50％组织细胞感染剂量的测定
各病毒株用相应培养液稀释成不同浓度的病毒液，接种到相应细胞，37℃培养7d后观察感染细胞圆缩脱落等细胞病变(cytopathiceffect，CPE)情况，以测定各病毒引起50％组织细胞病变的感染剂量(50％tissue culture infectivedose，TCID50)。
(2)药物的细胞毒性试验
分别将不同浓度的西米杜鹃醇和对照药利巴韦林工作液加入96孔培养板单层细胞中，重复3孔，另设置3孔不加任何药物的正常细胞对照，5％CO2、37℃中培养7d，每天观察CPE一次，以不出现细胞病变的药物最低浓度为细胞毒性判断终点。
(3)抗病毒试验
在96孔培养板的细胞中分别加入终浓度为100TCID50病毒液，37℃孵育1h，吸弃病毒液，用无血清培养基洗涤两次，然后分别加入不同浓度西米杜鹃醇和利巴韦林工作液，重复3孔，实验中设置感染等量病毒不给药的感染对照和无病毒感染的正常对照。各培养板5％CO2、37℃培养7d，每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL，37℃，继续孵育4h，终止培养，小心吸去孔内培养上清液，每孔加入150μL DMSO，振荡10min，使结晶物充分溶解，选择450nm波长，在酶联检测仪上测定各孔光吸收值，计算IC50。
2、结果处理及分析
西米杜鹃醇体外抗病毒感染试验结果见表1，表1结果显示，西米杜鹃醇对鼻病毒R14、流感病毒FM1、呼吸道合胞病毒、腺病毒3型、腺病毒7型、冠状病毒、副流感病毒、柯萨奇病毒B4、单纯疱疹病毒1型均具有一定的抑制作用，其中，对流感病毒FM1、副流感病毒、柯萨奇病毒B4的抑制作用最强。
表1西米杜鹃醇体外抗病毒感染试验结果
上述实验结果显示，西米杜鹃醇对所试的9种病毒有不同程度的抑制作用，表明西米杜鹃醇具有一定的抗上呼吸道病毒感染的作用。
实施例2：西米杜鹃醇体外抗菌作用试验研究
1、实验材料
1.1药物
西米杜鹃醇，纯度为91.15％，由艾叶药材提取纯化而得，由江苏康缘药业股份有限公司提供；
盐酸环丙沙星，江京新药业股份有限公司。
1.2材料
标准菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、乙型链球菌由江苏省疾病预防控制中心微生物试剂厂鉴定提供。
临床分离菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、不动杆菌、肺炎克雷百氏菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌由江苏省人民医院微生物室分离鉴定提供。
营养肉汤，上海中科昆虫生物技术开发有限公司。
AL104电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司。
1.3方法
采用试管法，取18h培养的各菌株营养肉汤培养物，用营养肉汤作10-5稀释用于实验。灭菌试管11支，每管加入营养肉汤液体培养1mL，取西米杜鹃醇(20mg/mL，生理盐水溶解)1mL加入第1管中混匀后取1mL至第2管，依次稀释。第10管吸出1mL弃去，第11管不加药液作为对照。每管加入菌液(10-5稀释)0.1mL，37℃培养20h，取出观察各管有无菌生长，完全抑制细菌生长所含的最小药物浓度即为药物的最低抑菌浓度MIC。取环丙沙星(800μg/mL)按上述方法，依次稀释，培养作阳性对照。
2、结果处理及分析
西米杜鹃醇的体外抑菌活性试验结果见表2，试管法结果显示，西米杜鹃醇对标准金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，痢疾杆菌，临床金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，肺炎克雷百氏菌，表皮葡萄球菌，人葡萄球菌具有一定的抑制作用，抑菌MIC在1.25～5mg/mL。
表2西米杜鹃醇的体外抑菌活性(n＝2)
上述实验结果显示，西米杜鹃醇对所试的8种细菌有不同程度的抑制作用，表明西米杜鹃醇具有一定的抗上呼吸道细菌感染的作用。
实施例3：西米杜鹃醇对甲型流感病毒致上呼吸道感染小鼠模型的试验研究
1、实验材料
1.1药物
西米杜鹃醇，纯度为91.15％，由艾叶药材提取纯化而得，由江苏康缘药业股份有限公司提供；
利巴韦林：山东圣鲁制药有限公司。
1.2材料
AL104电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；
离心机，Eppendorf 5424；
酶标仪，molecular devices spectraMax M2e；
鸡胚(9日龄)，南京中牧股份药械厂；
小鼠TNF-α测试试剂盒，上海源叶生物科技有限公司；
甲型流感病毒A/PR8/34(H1N1)，由中国预防医学科学院病毒研究所提供。
动物：ICR小鼠90只，体重13～16g，雄性，购自北京维通利华实验动物中心；
饲料：基础营养饲料由江宁青龙山动物繁殖场提供。
1.3方法
(1)造模及分组
常规饲养1周后，ICR小鼠90只随机分为6组：对照组、模型组、阳性药组、西米杜鹃醇低、中、高剂量组，每组15只。
(2)造模及给药
给药当日，乙醚轻度麻醉下，正常对照组小鼠以生理盐水滴鼻，每鼠30μL。其余各组以4倍LD50(LD50＝10-1 . 71)的甲型流感病毒(A/PR8/34)液滴鼻感染，每鼠30μL，感染量为1倍LD50。
感染半小时后，正常组(等量生理盐水)、模型组(等量生理盐水)、利巴韦林组(25mg·kg-1)、西米杜鹃醇低、中、高剂量组用药量分别为10mg·kg-1、20mg·kg-1、40mg·kg-1，各组给药体积均为0.2mL·10g-1。灌胃给药，每天2次，连续7d。
(3)检测方法
观察肺指数：各组动物于取血后，颈椎脱臼处死动物，摘取完整的肺组织，洁净纱布吸干水分，称重后计算肺指数及肺指数抑制率。
肺指数＝肺全重(g)/体重(g)×100
抑制率＝(平均肺指数模型组-平均肺指数实验组)/平均肺指数模型组×100％
测定血清中TNF-α水平：各组小鼠于末次给药后，摘眼球取血，离心，取血清。采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定小鼠TNF-α水平，具体操作按试剂盒说明书进行。
2、结果处理及分析
2.1对模型小鼠肺指数的影响
西米杜鹃醇对上呼吸道感染小鼠肺指数的影响试验结果见表3，模型组小鼠体重降低，肺重增高。与空白对照组相比，模型组小鼠的肺指数显著增高(P<0.01)；不同剂量的西米杜鹃醇均可升高上呼吸道感染小鼠的体重，降低肺重，与模型组相比，西米杜鹃醇不同剂量给药组均可降低肺指数(P<0.01)，且具有一定量效关系。
表3西米杜鹃醇对上呼吸道感染小鼠肺指数的影响(n＝15)
注：*P<0.05(具有显著差异)，**P<0.01(具有极显著差异)，与模型组比较；#P<0.05，##P<0.01，与西米杜鹃醇低剂量组比较；$P<0.05，$$P<0.01，与西米杜鹃醇中剂量组比较。
2.2对模型小鼠TNF-α的影响
西米杜鹃醇对上呼吸道感染模型小鼠TNF-α的影响试验结果见表4，与空白对照组相比，模型组小鼠的TNF-α含量明显升高(P<0.01)；不同剂量的西米杜鹃醇均可显著降低上呼吸道感染小鼠的TNF-α含量(P<0.01)，且具有一定量效关系。
表4西米杜鹃醇对上呼吸道感染模型小鼠TNF-α的影响(n＝15)
注：*P<0.05，**P<0.01，与模型组比较；#P<0.05，##P<0.01，与西米杜鹃醇低剂量组比较；$P<0.05，$$P<0.01，与西米杜鹃醇中剂量组比较
上述实验结果显示，西米杜鹃醇低、中、高剂量组均可不同程度的降低上呼吸道感染小鼠的肺指数和TNF-α的含量，表明西米杜鹃醇具有明显的抗上呼吸道感染的作用，且具有一定量效关系。
实施例4：西米杜鹃醇对金黄色葡萄球菌致上呼吸道感染小鼠模型的试验研究
1、实验材料
1.1药物
西米杜鹃醇，纯度为91.15％，由艾叶药材提取纯化而得，由江苏康缘药业股份有限公司提供；
头孢唑林钠注射液：齐鲁制药有限公司。
1.2材料
AL104电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；
离心机，Eppendorf 5424；
酶标仪，molecular devices spectraMax M2e；
金黄色葡萄球菌(ATCC6538)由江苏省疾病预防控制中心微生物试剂厂鉴定提供；
动物：KM小鼠90只，雄性，体重18～22g，购自北京维通利华实验动物中心。
饲料：基础营养饲料由江宁青龙山动物繁殖场提供。
1.3方法
(1)造模及分组
常规饲养1周后，将90只KM小鼠中随机分为6组，分别为空白对照组、模型组、阳性组及西米杜鹃醇低、中、高剂量组，每组15只。实验前金黄色葡萄球菌经过小鼠活体接种传代2次，CO2环境37℃培养24h，用灭菌生理盐水对培养获得的细菌进行洗脱，浓度1.2×109个菌落形成单位(CFU)/ml菌液。75％酒精消毒小鼠外鼻孔、口腔和头部，待酒精挥干后，乙醚轻度麻醉状态仰卧位滴鼻，空白对照组小鼠以灭菌生理盐水滴鼻，其余各组以金黄色葡萄球菌菌液滴鼻造模，每鼠20μl。
(2)给药时间及方法
从造模当天开始，按以下方式尾静脉注射给药：空白组和模型组，灭菌生理盐水；头孢唑林钠注射液组(100mg·kg-1)；西米杜鹃醇低、中、高(50、100、200mg·kg-1)剂量组。每鼠200μl，一天1次，连续给药五天后，处死小鼠。
(3)检测方法
鼻咽部灌洗液培养：小鼠处死前先用75％酒精消毒外鼻孔、口腔和头部，待酒精挥干后处死小鼠，以灭菌生理盐水做鼻咽部灌洗，每次50μl，灌洗两次。取灌洗液5μl涂布于琼脂平板上，37℃、CO2环境培养48h后计数菌落数并以CFU/小鼠统计。
病理学检查：颈椎脱臼处死动物，无菌操作摘取小鼠鼻中隔，用10％甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，做HE染色，光学显微镜观察各组动物鼻粘膜组织炎性细胞计数，在100×10倍下油镜观察10个视野，取其均数。
观察肺指数：摘取完整的肺组织，洁净纱布吸干水分，称重后计算肺指数及肺指数抑制率。
肺指数＝肺全重(g)/体重(g)×100
抑制率＝(平均肺指数模型组-平均肺指数实验组)/平均肺指数模型组×100％
2、结果处理及分析
2.1对模型小鼠鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数的影响
表5为西米杜鹃醇对上呼吸道感染模型小鼠粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数的影响，与空白对照组相比，模型组小鼠的鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数明显升高(P<0.01)；不同剂量的西米杜鹃醇均可降低上呼吸道感染小鼠的鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数(P<0.01)，且具有一定量效关系。
表5西米杜鹃醇对上呼吸道感染模型小鼠鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部
灌洗液菌落数的影响(n＝15)
注：*P<0.05，**P<0.01，与模型组比较；#P<0.05，##P<0.01，与西米杜鹃醇低剂量组比较；$P<0.05，$$P<0.01，与西米杜鹃醇中剂量组比较。
2.2对模型小鼠肺指数的影响
结果见表6。由表6可知，模型组小鼠体重降低，肺重增高。与空白对照组相比，模型组小鼠的肺指数显著增高(P<0.01)；不同剂量的西米杜鹃醇均可升高上呼吸道感染小鼠的体重，降低肺重，与模型组相比，西米杜鹃醇不同剂量给药组均可降低肺指数(P<0.01)，且具有一定量效关系。
表6西米杜鹃醇对上呼吸道感染小鼠肺指数的影响(n＝15)
注：*P<0.05，**P<0.01，与模型组比较；#P<0.05，##P<0.01，与西米杜鹃醇低剂量组比较；$P<0.05，$$P<0.01，与西米杜鹃醇中剂量组比较。
上述实验结果显示，西米杜鹃醇低、中、高剂量组均可不同程度的降低上呼吸道感染小鼠的鼻粘膜炎性细胞计数和鼻咽部灌洗液菌落数，降低模型小鼠肺指数，表明西米杜鹃醇具有明显的抗上呼吸道感染的作用，且具有一定量效关系。

Claims (6)

1.一种西米杜鹃醇在制备治疗上呼吸道感染的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述西米杜鹃醇的剂量为1.1～22.2mg/kg。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述上呼吸道感染由病毒引起。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述病毒为流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、冠状病毒、副流感病毒、柯萨奇病毒与单纯疱疹病毒中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述上呼吸道感染由细菌引起。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌与乙型链球菌中的一种或多种。
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CN110407907A (zh) * 2019-08-14 2019-11-05 济南大学 西米杜鹃二醇及其制备方法和应用
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