CN105916497A - 生物活性的亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物及其使用方法 - Google Patents

生物活性的亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种包括亚铁血红素卤代过氧化物酶和氨基醇的组合物及其使用方法，所述组合物用于在过氧化物和卤化物的存在下，有效杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长。

Description

生物活性的亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年1月14日递交的美国临时申请号61/927406和2015年1月9日递交的美国申请号14/593648的权利，它们通过引用并入本文中。
技术领域
本发明涉及包括亚铁血红素卤代过氧化物酶和氨基醇的组合物以及该组合物的使用方法，所述组合物用于在过氧化物和卤化物的存在下，有效杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长。
背景技术
如美国专利号5,888,505和6,294,168中所述，在过氧化物和卤化物的存在下，卤代过氧化物酶可用于选择性地与目标病原微生物结合且抑制其生长，同时不会消除有利的微生物或显著损害目标微生物环境中的介质的其它成分，诸如宿主细胞和正常菌群。先前已经知晓的是，当存在合适的卤化物辅因子(X-)和作为底物的过氧化氢时，卤代过氧化物酶在自然体系中显示出杀死微生物的活性(Klebanoff,1968,J.Bacteriol.95:2131-2138)。卤代过氧化物酶结合的选择特性以及这些化合物在治疗应用、研究应用和工业应用中的利用是已知的。由于卤代过氧化物酶具有选择性结合的性质，当目标微生物，诸如病原微生物与卤代过氧化物酶的结合能力大于有利的微生物(诸如正常菌群的成员)的结合能力时，目标微生物会选择性结合卤代过氧化物酶，同时有利的微生物仅结合少量的卤代过氧化物酶或不结合卤代过氧化物酶。在过氧化物和卤化物的存在下，目标微生物所结合的卤代过氧化物酶在目标微生物的表面上催化卤化物氧化并且促进过氧化物歧化成单重态分子氧(1O2)，从而选择性杀死目标微生物，同时最大限度地降低对有利的微生物或生理介质的附带损害。因此，如在美国专利号5,888,505和6,294,168所公开的，卤代过氧化物酶可用作人受试者或动物受试者的治疗或预防性治疗中的抗菌剂，以选择性结合并杀死病原微生物，同时最大限度地降低对宿主细胞和宿主的正常菌群的附带损害。
卤代过氧化物酶也可用作消毒制剂或灭菌制剂，用于在体外抑制目标微生物的生长，尤其应用在生物医疗装置(诸如绷带、手术器械、缝合装置、导管、牙科用具、隐形眼镜等)的无菌处理中以抑制目标微生物的生长，同时当生物医疗装置后续在体内使用时不会损害受试者的宿主细胞。
如美国专利号5,389,369和5,451,402中所公开的，尽管已经发现在美国专利号5,888,505和6,294,168中公开的卤代过氧化物酶抗菌体系能高度有效地处理病原微生物，但是仍然需要增强杀微生物活性的试剂以有效地杀死酵母和形成孢子的微生物。微生物生命周期的孢子阶段的特征是代谢休眠，并且对能破坏处于营养阶段的微生物的环境因子具有耐受性。孢子萌发的初期阶段的特征是膨胀，以及从休眠状态转变到活性代谢。随后进行营养生长(例如出芽)，以及最终的繁殖。
细菌的内生芽孢和真菌孢子的萌发与代谢的增加，与对热及化学试剂的耐受性的降低相关。为了进行萌发，孢子必须感知到环境适于支持营养和繁殖。据报道，氨基酸L-丙氨酸刺激细菌孢子的萌发(Hills,1950,J Gen Microbiol 4:38；Halvorson and Church,1957,Bacteriol Rev 21:112)。还报道了L-丙氨酸和L-脯氨酸启动真菌孢子的萌发(Yanagita,1957,Arch Mikrobiol 26:329)。
简单的α-氨基酸，诸如甘氨酸和L-丙氨酸占据代谢的中心位置。α-氨基酸的转氨作用或脱氨作用产生代谢和生长所需的生糖原碳水化合物或生酮碳水化合物，以及氮。例如，L-丙氨酸的转氨作用或脱氨作用产生丙酮酸盐，该丙酮酸盐为糖代谢(埃姆登-迈耶霍夫-帕那斯途径，Embden-Meyerhof-ParnasPathway)的终产物。丙酮酸盐通过丙酮酸脱氢酶复合体的氧化产生乙酰-CoA、NADH、H+和CO2。乙酰-CoA是用于三羧酸循环(克雷布氏循环，Kreb's Cycle)的引发底物，其进而为线粒体电子传递链供应原料。乙酰-CoA还是用于脂肪酸合成以及甾醇合成的最终碳源。简单的α-氨基酸可提供用于萌发以及随后的代谢活性所需的氮、CO2、生糖原等价物和/或生酮等价物。
相应地，美国专利号5,389,369和5,451,402公开了通过用卤代过氧化物酶和特定的α-氨基酸的组合处理微生物，可以增强卤代过氧化物酶对酵母和孢子形式的微生物的杀微生物作用，其中特定的α-氨基酸为酵母出芽、形成孢子的微生物的萌发提供刺激作用，并且可能加速处于营养阶段的微生物的代谢。公开的用于此目的的代表性α-氨基酸包括丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸的L-对映异构体或D-对映异构体，甘氨酸，以及它们的烷基酯。尽管美国专利号5,389,369和5,451,402公开了利用α-氨基酸增强卤代过氧化物酶对酵母菌和孢子形式的微生物的杀微生物活性，但是这些专利并没有公开增强针对非孢子细菌的卤代过氧化物酶杀微生物体系。
美国专利申请公开号20090280102中记载了通过使髓过氧化物酶和至少两种氨基酸结合，增强了对细菌的卤代过氧化物酶、髓过氧化物酶的杀微生物体系。美国专利公开号20140120076记载了通过使嗜酸性粒细胞过氧化物酶和至少两种氨基酸结合，增强了卤代过氧化物酶、嗜酸性粒细胞过氧化物酶的针对细菌的杀微生物体系。
本发明的发明人已经发现：通过氨基醇，例如乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺的存在，能够增强卤代过氧化物酶的抗菌活性。因此，如本文所公开的，本发明涉及包括卤代过氧化物酶和氨基醇(例如乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺)的组合物及其使用方法。
发明内容
提供该发明内容，用于以简化的方式介绍构思的选择，该构思将在具体实施方式中进一步描述。该发明内容并不用于确立所要求保护的主题的关键特征，也不用作辅助确定所要求保护的主题的范围。
在一个方面中，本发明涉及在过氧化物和卤化物的存在下，用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物，所述组合物：包括亚铁血红素卤代过氧化物酶，例如嗜酸性粒细胞过氧化物酶；以及，乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在一个方面中，本发明涉及在过氧化物和卤化物的存在下，使用组合物杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的方法，所述组合物包括：亚铁血红素卤代过氧化物酶，例如嗜酸性粒细胞过氧化物酶；以及，乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
附图说明
结合所附附图，并参照以下具体实施方式进行更好地理解，将更容易地知晓本发明的前述各方面和许多伴随优点。
图1为对平板进行比较的图像，示出了以下组合物对细菌生长的影响：包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和三种氨基酸的组合物；以及包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和乙醇胺的组合物。
图2为对平板进行比较的图像，示出了包括比率为1:1w/w的嗜酸性粒细胞过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的组合物的系列两倍稀释液，对细菌生长的影响。
图3为对平板进行比较的图像，示出了在包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和乙醇胺的组合物中，用过氧化氢替代葡萄糖/葡萄糖氧化酶对细菌生长的影响。
图4为对平板进行比较的图像，示出了与纯的过氧化氢相比，包括不同浓度的过氧化氢、嗜酸性粒细胞过氧化物酶和乙醇胺的组合物对细菌生长的影响。
图5为对平板进行比较的图像，示出了在加入微生物之前，包括不同浓度的过氧化氢、嗜酸性粒细胞过氧化物酶和乙醇胺的组合物在1分钟或30分钟的孵育时段之后对细菌生长的影响。
图6为对平板进行比较的图像，示出了包括不同浓度的过氧化氢、嗜酸性粒细胞过氧化物酶，但不包括乙醇胺的组合物对细菌生长的影响。
图7为对平板进行比较的图像，示出了包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺和L-丝氨酸中的一种，以及嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢的组合物对细菌生长的影响。
图8A至图8C为对平板进行比较的图像，示出了包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，以及乙醇胺或丙醇胺的组合物对细菌生长的影响。
图9A至图9B为对平板进行比较的图像，示出了包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，以及乙醇胺、甘氨酰胺或甘氨酸甲酯的组合物对细菌生长的影响。
具体实施方式
本发明涉及在过氧化物和卤化物的存在下，用于杀死病原细菌或抑制细菌感染的组合物和方法，所述组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶以及具有式NH2CH2CH2OH(本文中被称为“乙醇胺”)、HN(CH2CH2OH)2(本文中被称为“二乙醇胺”)或NH2CH2CH2CH2OH(本文中被称为“丙醇胺”)的氨基醇。如本文中所使用的，术语“亚铁血红素卤代过氧化物酶”是指哺乳动物的含亚铁血红素辅基的卤代过氧化物酶。亚铁血红素卤代过氧化物酶为卤化物:过氧化氢氧化还原酶，其中卤化物(即，氯化物、溴化物或碘化物)或拟卤化物(例如硫氰酸盐)为电子供体或还原剂，而过氧化物为电子受体或氧化剂。在本发明的组合物和方法中所使用的亚铁血红素卤代过氧化物酶包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、髓过氧化物酶和乳过氧化物酶。
在本发明的一个方面中，提供了用于抑制病原微生物的生长或杀死病原微生物的组合物。代表性的病原微生物可包括，但不限于，革兰氏阳性生物和革兰阴性生物，诸如，例如粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Streptococcus agalactiae)，链球菌群C(Streptococcus Group C)、链球菌群F(Streptococcus Group F)、链球菌群G(Streptococcus Group G)、化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、不动杆菌属(Acintobacter spp.)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)。此外，本发明的组合物可用于抑制成形孢子的微生物的生长或杀死形成孢子的微生物，诸如细菌(诸如芽孢杆菌属(Bacillus sps.)和梭菌属(Clostridium sps.))以及真菌(诸如黑霉菌属(Aspergillis sps.)、镰刀菌属(Fusarium sps.)、毛癣菌属(Trichophyton sps.))。
在某些实施方式中，本发明的组合物包括：亚铁血红素卤代过氧化物酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶和乙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶和二乙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶和丙醇胺。
在某些实施方式中，所述亚铁血红素卤代过氧化物酶选自由嗜酸性粒细胞过氧化物酶、髓过氧化物酶和乳过氧化物酶所组成的组。在某些实施方式中，所述亚铁血红素卤代过氧化物酶为髓过氧化物酶。在某些实施方式中，所述亚铁血红素卤代过氧化物酶为乳过氧化物酶。在某些实施方式中，所述亚铁血红素卤代过氧化物酶为嗜酸性粒细胞过氧化物酶。
如实施例中所示，在卤化物的存在下，将乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺加入到含有过氧化物或产生过氧化物的氧化酶，和亚铁血红素卤代过氧化物酶(例如嗜酸性粒细胞过氧化物酶)的组合物中，增强了该组合物的杀微生物活性。
在某些实施方式中，用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化物和乙醇胺，其中乙醇胺增强了嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
在某些实施方式中，用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化物源和乙醇胺，其中乙醇胺增强了嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
在某些实施方式中，用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化物和二乙醇胺，其中二乙醇胺增强了嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
在某些实施方式中，用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化物源和二乙醇胺，其中二乙醇胺增强了嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
在某些实施方式中，用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化物和丙醇胺，其中丙醇胺增强了嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
在某些实施方式中，用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化物源和丙醇胺，其中丙醇胺增强了嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约5μg/mL至约100μg/mL或以上的嗜酸性粒细胞过氧化物酶。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约6.25μg/mL至约50μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL或100μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶。
在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约1mM至约20mM或以上的乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约1mM至约10mM的乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为1.25mM、2.5mM、3mM、5mM、10mM或20mM的乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
本发明的亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物的杀微生物活性涉及：过氧化物与卤化物反应以生成次卤酸盐(hypohalide)；以及，过氧化物与次卤酸盐(hypohalide)反应以生成单重态分子氧。因此，本发明的组合物的活性取决于在杀微生物活性的部位处，存在合适的过氧化物和卤化物。在某些情况下，由于例如天然存在的菌群的活性，过氧化物(例如，过氧化氢)可存在于杀微生物活性的部位处，而足量的卤化物可能存在于生理环境中以在转化反应中用作辅因子。在这些情况下，本发明的组合物不需要施加或包括额外的过氧化物或卤化物。在这些情况下，本发明的组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和乙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和二乙醇胺。在某些实施方式中，本发明的组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和丙醇胺。在其它情况下，可能需要或可取的是，在治疗部位额外提供过氧化氢和/或卤化物。因此，如下进一步讨论的，本发明的组合物可额外地包括(如果需要)卤化物，以及过氧化物或能够在体内或体外产生过氧化物的试剂。
在某些实施方式中，本发明的组合物进一步包括卤化物，诸如溴化物。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约1mM至约20mM或以上的卤化物。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约1mM至约10mM的卤化物。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约1.25mM、2.5mM、3mM、5mM、10mM或20mM的卤化物。在某些实施方式中，上述卤化物为溴化钠。在某些实施方式中，上述卤化物为溴化钾。
在某些实施方式中，本发明的组合物进一步包括过氧化物或过氧化物源。合适的过氧化物包括：过氧化氢；和式R-OOH的烷基氢过氧化物，其中，R为氢或具有1至3个碳原子的短链烷基；以及无机过氧化物，诸如过氧化硼(boroperoxide)或过氧化脲。如下所示，有机过氧化物的氧化活性通常随着R链长度的增加而降低：R＝H>>CH3>CH3CH2>CH3(CH2)2。
在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为约0.5mM至约9mM或以上的过氧化氢。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为0.5mM、0.89mM、1.1mM、2.2mM、4.4mM或8.9mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括100μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、20mM的溴化钠、20mM的乙醇胺以及8.9mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括50μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、10mM的溴化钠、10mM的乙醇胺以及4.5mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括25μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、5mM的溴化钠、5mM的乙醇胺以及2.2mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括12.5μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、2.5mM的溴化钠、2.50mM的乙醇胺以及1.1mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括6.25μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、1.25mM的溴化钠、1.25mM的乙醇胺以及0.5mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括10μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、2mM的溴化钠、3mM的乙醇胺以及0.89mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括10μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、2mM的溴化钠、3mM的二乙醇胺以及0.89mM的过氧化氢。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括50μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、20mM的磷酸钠、10mM的溴化钠、20mM的丙醇胺以及8.9mM的过氧化氢。
在某些实施方式中，本发明的组合物包括能够产生过氧化氢的试剂作为过氧化氢的替代物。在某些实施方式中，该试剂为产生过氧化物的氧化酶。产生过氧化物的氧化酶在底物的存在下产生过氧化氢。合适的产生过氧化物的氧化酶包括例如葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶和半乳糖氧化酶。在某些实施方式下，该产生过氧化物的氧化酶为葡萄糖氧化酶。对于该实施方式，底物为葡萄糖。在某些实施方式中，上述组合物包括浓度为约10μg/mL至约20μg/mL或以上的葡萄糖氧化酶。在某些实施方式中，本发明的组合物包括浓度为10μg/mL或20μg/mL的葡萄糖氧化酶。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括20μg/mL的葡萄糖氧化酶、40μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、2mM的溴化钠以及2.5mM的乙醇胺。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括20μg/mL的葡萄糖氧化酶、20μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、2mM的溴化钠以及1.2mM的乙醇胺。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括20μg/mL的葡萄糖氧化酶、10μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、2mM的溴化钠以及0.6mM的乙醇胺。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括20μg/mL的葡萄糖氧化酶、5μg/mL的嗜酸性粒细胞过氧化物酶、2mM的溴化钠以及0.3mM的乙醇胺。
在本发明的其它方面中，提供了使用本发明的亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物的方法。
在某些实施方式中，本发明提供了用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的方法。在某些实施方式中，该方法包括：在过氧化物和卤化物的存在下，使微生物与组合物接触；所述组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶选自由嗜酸性粒细胞过氧化物酶、髓过氧化物酶和乳过氧化物酶所组成的组。在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶为髓过氧化物酶。在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶为乳过氧化物酶。在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶为嗜酸性粒细胞过氧化物酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：在卤化物的存在下，使微生物与组合物接触；所述组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶，过氧化氢或产生过氧化物源，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，使微生物与组合物接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢以及乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，使微生物与组合物接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢以及二乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，使微生物与组合物接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢以及丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：使微生物与组合物接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，过氧化氢，溴化物，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，使微生物与组合物接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化物酶以及乙醇胺。在某些实施方式中，该产生过氧化物的氧化物酶为葡萄糖氧化酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，使微生物与组合物接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化物酶以及二乙醇胺。在某些实施方式中，该产生过氧化物的氧化物酶为葡萄糖氧化酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，使微生物与组合物接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化物酶以及丙醇胺。在某些实施方式中，该产生过氧化物的氧化物酶为葡萄糖氧化酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：使微生物与组合物相接触，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，葡萄糖氧化酶，溴化物，以及乙醇、二乙醇胺或丙醇胺。
在另一实施方式中，本发明提供了用于治疗人受试者或动物受试者中的感染的方法。所述方法包括将有效量的本发明的组合物施用到感染部位。
在某些实施方式中，上述方法包括：在过氧化物和卤化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶选自由嗜酸性粒细胞过氧化物酶、髓过氧化物酶和乳过氧化物酶所组成的组。在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶为髓过氧化物酶。在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶为乳过氧化物酶。在某些实施方式中，亚铁血红素卤代过氧化物酶为嗜酸性粒细胞过氧化物酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：在卤化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶，过氧化氢或产生过氧化物源，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢以及乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢以及二乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢以及丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，过氧化氢，溴化物，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢、溴化物以及乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢、溴化物以及二乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、过氧化氢、溴化物以及丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化酶以及乙醇胺。在某些实施方式中，该产生过氧化物的氧化物酶为葡萄糖氧化酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化酶以及二乙醇胺。在某些实施方式中，该产生过氧化物的氧化物酶为葡萄糖氧化酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：在溴化物的存在下，将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化酶以及丙醇胺。在某些实施方式中，该产生过氧化物的氧化物酶为葡萄糖氧化酶。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，葡萄糖氧化酶，溴化物，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、溴化物以及乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、溴化物以及二乙醇胺。
在某些实施方式中，上述方法包括：将组合物施用到感染部位，所述组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、溴化物以及丙醇胺。
在实践本发明的方法中，对于包括产生过氧化物的氧化酶(例如葡萄糖氧化酶)的亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物，优选地独立于施用包括该氧化酶的底物(例如葡萄糖)的组合物，将所述亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物施用到待治疗的部位。施用的次序并不是关键的，所述亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物可在施用底物组合物之前或之后来施加。
本发明的组合物和方法非常适用于在允许本发明的组合物与微生物感染直接接触的部位，局部治疗人或非人哺乳动物受试者中的微生物感染，诸如皮肤、眼睛、耳、口、鼻和窦内通道、外伤部位、手术部位等的感染。
本发明的组合物基于使用加双氧的亚铁血红素卤代过氧化物酶，例如嗜酸性粒细胞过氧化物酶，其对病原微生物显示出选择性亲和力。因此，当本发明的组合物用于人受试者或动物受试者时，对病原微生物具有高效力的杀微生物作用，且不会导致相关的宿主组织的损伤或正常菌群的破坏，即，抗菌作用是选择性的并且局限于病原微生物。
如本文所使用的，术语“正常菌群”是指通常存在于健康宿主体内或体表面上的处于共生水平的细菌。正常菌群例如包括人受试者的口、肠或阴道内的乳酸菌家族，例如口中的链球菌(草绿色链球菌)，以及外生殖器、前尿道、阴道以及哺乳喂养的婴儿的肠道内的乳酸菌属(例如，德氏杆菌(Tissier's bacillus)和德得来因氏杆菌(Doderlein's bacillus))。构成宿主的正常菌群的微生物是众所周知的(例如，参见感染疾病的原理和实践(Principles and Practice ofInfectious Diseases),上述,纽约,pp.34-36和161)。据发现，与正常菌群相比，亚铁血红素卤代过氧化物酶，例如嗜酸性粒细胞过氧化物酶优先选择性结合许多病原细菌和真菌。在体内应用中，优选使用不会从宿主中除去正常菌群的量的本发明的组合物来治疗宿主。
本发明的组合物和方法对治疗多微生物感染以及多重耐药性感染是有效的。多微生物疾病涉及多种感染原，以及被认为是复合的、复杂的、混合的、双重的、继发性的、协同的、并发的、多微生物的或共感染。多微生物疾病包括，例如，与脓肿有关的感染、AIDS-相关的机会性感染、结膜炎、胃肠炎、肝炎、多发性硬化症、中耳炎、牙周病、呼吸系统疾病和生殖器感染。此外，由于本发明的组合物通过与常规抗生素疗法中所涉及的作用机制完全不同的作用机制来起作用，在某些实施方式中，本发明的组合物在治疗至少部分由多重耐药性病原体所引起的感染中是非常有用的，其中多重耐药性病原体诸如为MRSA(耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌)、VRSA(耐万古霉素的金黄色葡萄球菌)、VRE(耐万古霉素的肠球菌)、耐青霉素的肠球菌、PRSP(耐青霉素的肺炎链球菌)、耐异烟肼/利福平的结核分枝杆菌，以及大肠杆菌、沙门氏菌、弯曲杆菌和链球菌的其它耐抗生素性菌株。这样的细菌在本文中被称为“耐抗生素性”或“耐药性”或“多重耐药性”或本领域技术人员熟知的其它相似术语。
本发明的组合物可单独施用，或与一种或多种其它治疗试剂组合施用。可与本发明的组合物组合使用的代表性的其它治疗试剂例如包括抗生素或抗菌剂，如抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂和/或抗寄生虫剂。在某些实施方式中，额外的治疗试剂可为一种或多种青霉素类、头孢菌素类、碳头孢烯类、头霉素类、碳青霉烯类、内酰胺类、氨基糖苷类、糖肽类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和/或喹诺酮类。在某些实施方式中，额外的治疗试剂可为碘、银、铜、氯己定、聚己缩胍、双胍类、壳聚糖和/或乙酸。本发明的一种或多种额外的治疗试剂可并入为同一组合物的一部分，或可单独施用。
对于体内应用，本发明的组合物可以任何有效的药学上可接受的形式(例如，局部剂型、灌洗剂型、口服剂型、阴道剂型或栓剂剂型)，作为局部、口腔、鼻喷雾剂，吸入气雾剂，或可将活性嗜酸性粒细胞过氧化物酶有效递送到微生物感染部位的任何其它方式，施用至包括人受试者和动物受试者的温血动物。施用途径优选经设计，以获得抗菌组合物与感染微生物的直接接触。
在本发明的一个方面中，本发明的组合物被局部递送或施用至人受试者或动物受试者的易受感染的区域，诸如例如，牙龈、眼睛、耳朵、皮肤、伤口、阴道部位、腹股沟区、褥疮、烧伤处，在医用敷料、尿布或其他可能被润湿的覆盖物下的区域，等等。
在某些实施方式中，本发明的组合物额外地包括药学上可接受的赋形剂，例如，水性或有机溶剂、缓冲剂、乳化剂、凝胶剂、保湿剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、防腐剂、缓释剂，以及少量的湿润剂、螯合剂、染料、香味剂，以及用于局部施用的药学组合物中通常采用的其它成分。在某些实施方式中，在某些实施方式中，本发明的组合物进一步包括磷酸盐缓冲液。在某些实施方式中，本发明的组合物进一步包括聚山梨醇酯80。
对于局部应用，药学上可接受的载剂可采用液体、膏体、泡沫、乳液、软膏、悬浮液、栓剂或凝胶的形式。此外，本发明的组合物可浸渍在吸收性材料，诸如缝合线、绷带和纱布中；或涂布在固相材料的表面，诸如主要原料(staples)、拉链和导管的表面上，以将组合物递送到用于预防微生物感染的部位。本领域技术人员很容易想到这种类型的其它递送系统。
在其它实施方式中，本发明提供了尤其在其中生物医疗装置，诸如绷带、手术器械、缝合装置、导管、牙科用具、隐形眼镜等需要灭菌或消毒的应用，和其中该生物医疗装置随后要与宿主组织接触的应用中，用于体外抑制病原微生物的生长的组合物和方法。因此，本发明的高效力的亚铁血红素卤代过氧化物酶制剂可用作体外灭菌或消毒的准备。通过限制过氧化氢可用性的时段，本发明的亚铁血红素卤代过氧化物酶制剂能够足够有力地确保材料或装置在与宿主组织接触前的灭菌和甚至消毒。当过氧化物耗尽时，对正常菌群和宿主组织的与使用这些高效力制剂有关的任何潜在毒性都会终止，并且因为这样，可在无需额外的清洗或脱毒的情况下，使经制剂处理的材料或装置与宿主组织接触。
在一个方面中，本发明的亚铁血红素卤代过氧化物酶组合物可构建为二元制剂，在所述二元制剂中，组合物的活性试剂被制成两种独立的部分，这两种独立的部分在使用时进行合并。
在某些实施方式中，上述二元制剂包括：第一组合物，该第一组合物包括在水性介质中的亚铁血红素卤代过氧化物酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺；和，第二组合物，该第二组合物包括过氧化物，例如过氧化氢。在某些实施方式中，该第一组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和乙醇胺。在某些实施方式中，该第一组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和二乙醇胺。在某些实施方式中，该第一组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和丙醇胺。该第一组合物和该第二组合物之一或两者可进一步包括卤化物。在某些实施方式中，该卤化物为溴化钠。在某些实施方式中，该卤化物为溴化钾。
在某些实施方式中，上述二元制剂包括：第一组合物，该第一组合物包括在水性介质中的亚铁血红素卤代过氧化物酶，产生过氧化物的氧化酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺；和，第二组合物，该第二组合物包括在水性介质中的所述产生过氧化物的氧化酶的底物。在某些实施方式中，该第一组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化酶和乙醇胺。在某些实施方式中，该第一组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化酶和二乙醇胺。在某些实施方式中，该第一组合物包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、产生过氧化物的氧化酶和丙醇胺。在某些实施方式中，该产生过氧化物的氧化酶为葡萄糖氧化酶并且该底物为葡萄糖。该第一组合物和该第二组合物之一或两者可进一步包括卤化物。在某些实施方式中，该卤化物为溴化钠。在某些实施方式中，该卤化物为溴化钾。
在某些实施方式中，其中本发明的二元制剂用于对器件进行消毒并且该二元制剂的第一组合物包括产生过氧化物的氧化酶，则第二组合物，即底物，可以以例如固体薄片(solid wafer)的形式来提供。对于器件(例如手术器械或隐形眼镜)的消毒，可将底物薄片连同待消毒的物品一起放置在消毒腔室中。随后，加入第一组合物以起始消毒，该第一组合物包括亚铁血红素卤代过氧化物酶，产生过氧化物的氧化酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺。在某些实施方式中，该第一组合物可额外地包括醇以促使底物溶解。只要存在足够的底物来推动该反应，则该体系将产生持续的杀微生物作用。
为了说明而非限制本发明，提供了以下实施例。
实施例
实施例1
本实施例表明，本发明的嗜酸性粒细胞过氧化物酶/乙醇胺组合物的杀微生物活性强于嗜酸性粒细胞过氧化物酶/氨基酸组合物的杀微生物活性。
表1：制剂A
表2：制剂B
通过在含2mM NaBr和1％(v:v)吐温-80的PBS(磷酸缓冲液)(pH 7.4)(“PBS+”)中，分别混合如表1和表2所示的成分来制备制剂A和制剂B。通过加入葡萄糖(4.5％w/v，终浓度)来引发各反应。在引发后1分钟，加入金黄色葡萄糖球菌(Staphylococcus aureus)(109cfu*/mL，终浓度)(*菌落形成单位)，并且反应在室温下孵育1分钟。通过将450μL无菌PBS加入到50μL各反应制剂中来终止反应，并且用0.1mL的各反应制剂进行铺板。平板在36℃下孵育过夜。
利用在PBS+中含20μg葡萄糖氧化酶的组合物(不含嗜酸性粒细胞、氨基酸或乙醇胺)进行对照反应。
通过在各平板上生长的细菌的量，来证实杀微生物活性。
结果.图1中示出了实施例1的结果。如图1所示，与包括pEPO和氨基酸的制剂B相比，包括pEPO和乙醇胺的制剂A更有效地杀死金黄色葡萄球菌(S.aureus)。从高浓度的pEPO(40μg/mL)和乙醇胺(2.4mM)到低浓度的pEPO(2.5μg/mL)和乙醇胺(0.15mM)的pEPO和乙醇胺的浓度范围中，都观察到更有效的杀微生物能力(与pEPO和氨基酸相比)。与包括pEPO和氨基酸的制剂相比，包括pEPO和乙醇胺的制剂的优异的杀微生物活性在较低浓度的pEPO和乙醇胺下尤其明显。参见pEPO/乙醇胺制剂的平板1、平板2、平板3和平板4，均没有显示出细菌生长；相比之下，参见pEPO/氨基酸制剂的平板1至平板5，均显示出一些细菌生长。
此外，在重量比重量的比例下，在乙醇胺的存在下，四分之一葡萄糖氧化酶浓度的pEPO的浓度在一分钟孵育时段后足以支持完全杀死微生物。参见图1，平板4(20μg GO：5μg pEPO)。
实施例2
本实施例表明，pEPO的杀微生物活性受限于葡萄糖氧化酶的量。
表3：制剂C
通过在PBS+中，混合如表3所示的葡萄糖氧化酶和pEPO来制备制剂C。如实施例1中所述来进行反应。
结果.图2中示出了实施例2的结果。结合图1中的结果，图2中的结果表明，pEPO的杀微生物活性受限于葡萄糖氧化酶的浓度。
实施例3
本实施例表明，包括过氧化氢、pEPO和乙醇胺的组合物的杀微生物活性与包括葡萄糖、葡萄糖氧化酶、pEPO和乙醇胺的组合物的相当。
表4：制剂D
表5：制剂E
通过在PBS+中，混合如表4所示的葡萄糖氧化酶、pEPO和乙醇胺来制备制剂D。通过在PBS+中，混合如表5示出的过氧化氢、pEPO和乙醇胺来制备制剂E。除了仅将葡萄糖加入到制剂D中之外，如实施例1中所述来进行反应。
结果.图3中示出了实施例3的结果。如实施例3所示，包括pEPO、乙醇胺和过氧化氢的组合物的杀微生物活性与包括pEPO、乙醇胺和葡萄糖/葡萄糖氧化酶的组合物的杀微生物活性相当。此外，低至10μg/mL的pEPO浓度有效地完全杀死细菌。
实施例4
本实施例表明，与纯的过氧化氢相比，包括过氧化氢和嗜酸性粒细胞过氧化物酶的组合物具有增强的杀微生物活性。
表6：制剂F
通过在PBS+1％吐温80中，混合如表6所示的成分来制备制剂F。加入金黄色葡萄球菌(S.aureus)(109cfu/mL，终浓度)，并且使反应在室温下孵育1分钟。通过铺板终止反应。该平板在36℃下孵育过夜。
结果.图4中示出了实施例4的结果。图4中的数据表明在1分钟的反应时间之后，分别低至6.25ug/mL和0.5mM的pEPO浓度和H2O2浓度，有效地完全杀死细菌。参见平板2。此外，平板2至平板5上示出的结果表明，将嗜酸性粒细胞过氧化物酶加入到过氧化氢的溶液中增强了过氧化氢的杀微生物活性。例如，如平板1所示，89mM高浓度的纯过氧化氢在杀死细菌方面是无效的，而如平板2所示，通过加入pEPO，低至0.5mM的过氧化氢浓度100％杀死了细菌。
实施例5
对于平板2至平板5，在如下额外的条件下，利用制剂F重复实施例4中所述的反应：在加入金黄色葡萄球菌(S.aureus)之前，将制剂孵育(熟化)1分钟或30分钟。在加入细菌之后，使反应在室温下孵育1分钟。加入额外的样品(100μg/mL pEPO；8.9mM H2O2；20mM乙醇胺；以及20mmM NaBr)。图5中示出了实施例5的结果。图5中的结果表明pEPO和H2O2的组合物保持其杀微生物活性至少达30分钟。
实施例6
本实施例表明，乙醇胺增强了包括pEPO和H2O2的组合物的杀微生物活性。
表7：制剂G
通过在PBS+1％吐温80中，混合如表7所示的成分来制备制剂G。如实施例5所述来进行该反应。
结果.图6中示出了来自实施例6的结果。图6中的结果表明，在没有乙醇胺的存在下，pEPO/H2O2组合物具有相对低的杀微生物活性。当图6中的结果与图5中的结果相比时，可以看出乙醇胺显著增强了pEPO/H2O2组合物的杀微生物活性。
实施例7
本实施例表明，将乙醇胺或二乙醇胺加入到包括pEPO的组合物中，增加了这种制剂保持杀微生物活性的时间量。
表8：制剂H
通过在PBS+1％吐温80+2mM NaBr中，混合如表8所示的成分来制备制剂H。如下所述，利用制剂H进行两组反应。
反应1.将108cfu/mL(终浓度)金黄色葡萄球菌(S.aureus)加入到各制剂H中。混合物在室温下孵育5分钟。通过将终浓度为0.89mM的过氧化氢加入到各反应混合物中来引发反应。使反应在室温下孵育1分钟，随后通过铺板该反应混合物来终止反应。该平板在36℃下孵育过夜。
反应2.将过氧化氢(终浓度为0.89mM)加入到各制剂H中。使反应混合物在室温下孵育5分钟。通过将108cfu/mL(终浓度)金黄色葡萄球菌(S.aureus)加入到各反应混合物中来引发反应。使反应在室温下孵育1分钟，随后通过铺板该反应混合物来终止反应。该平板在36℃下孵育过夜。
结果.图7中示出了实施例7的结果。反应1的结果示出在顶行中，反应2的结果示出在底行中。在反应1中，在加入H2O2之前，金黄色葡萄球菌(S.aureus)与pEPO孵育5分钟，因此反应1被“熟化”(在H2O2的存在下)0分钟。在反应2中，在加入金黄色葡萄球菌(S.aureus)之前，H2O2与pEPO孵育5分钟，因此反应2被“熟化”5分钟。
如图7的顶行所示，在与H2O2孵育1分钟之后，pEPO单独，以及与乙醇胺、二乙醇胺和丝氨酸的组合都呈现出一定的杀微生物活性。形成鲜明对比的是，pEPO与三乙醇胺的组合(平板4)显示出没有杀微生物活性。由于pEPO单独(没有添加剂)显示出一定的生物活性(平板1，熟化0分钟)，平板4(pEPO+三乙醇胺)上示出的结果表明三乙醇胺是抑制性的。
如图7的底行所示，当仅包括pEPO的制剂、包括pEPO与乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺或丝氨酸组合的制剂与H2O2孵育5分钟时，仅包括pEPO和乙醇胺或包括pEPO和二乙醇胺的制剂维持了杀微生物活性。
实施例8
本实施例表明，包括pEPO和乙醇胺或包括pEPO和丙醇胺的组合物保持杀微生物活性长达至少96小时。
表9：制剂I
通过在PBS+0.1％吐温80+20mM NaPO4、150mM NaCl、10mM NaBr中，混合如表9所示的成分来制备制剂I。如下所述，利用制剂I进行三组反应。
反应1.通过将终浓度为8.9mM的过氧化氢加入到各制剂I中来引发反应。使反应在室温下孵育2分钟。随后，将108cfu/mL(终浓度)的金黄色葡萄球菌(S.aureus)加入到各反应混合物中。使反应在室温下孵育1分钟，随后通过铺板该反应混合物来终止反应。该平板在36℃下生长过夜。
反应2.反应2的条件与反应1的条件相同，除了在加入金黄色葡萄球菌(S.aureus)之前，使反应在室温下孵育24小时。
反应3.反应3的条件与反应1的条件相同，除了在加入金黄色葡萄球菌(S.aureus)之前，使反应在室温下孵育96小时。
结果.图8A至图8C中示出了实施例8的结果。图8A中示出了反应1的结果，图8B中示出了反应2的结果，图8C中示出了反应3的结果。
如图8A至图8C所示，如完全杀死微生物(其中将该微生物加入到在加入细菌之前熟化长达96小时的制剂中)所证明的，根据本发明的包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、卤化物、过氧化氢，以及乙醇胺或丙醇胺的组合物保持杀微生物活性长达至少96小时。
实施例9
本实施例表明，包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，以及甘氨酰胺或甘氨酸甲酯的组合物随着时间失去杀微生物活性；而包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和乙醇胺的组合物保持杀微生物活性至少24小时。
表10：制剂J
通过在PBS+0.1％吐温80+20mM NaPO4、150mM NaCl、10mM NaBr中，混合如表9所示的成分来制备制剂I。如下所述，利用制剂J来进行两组反应。
反应1.通过将终浓度为8.9mM的过氧化氢加入到各制剂J中来引发反应。在加入微生物之前，使反应在室温下孵育2分钟。随后，将108cfu/mL(终浓度)的金黄色葡萄球菌(S.aureus)加入到各反应混合物。使反应在室温下孵育1分钟，随后通过铺板该反应混合物来终止反应。该平板在36℃下孵育过夜。
反应2.反应2的条件与反应1的条件相同，除了在加入金黄色葡萄球菌(S.aureus)之前，使反应在室温下孵育24小时。
结果.图9A和图9B示出了实施例9的结果。图9A中示出了反应1的结果，以及图9B中示出了反应2的结果。
如图9A所示，包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、卤化物、过氧化氢，以及甘氨酰胺或甘氨酸甲酯的组合物显示出最初的杀微生物活性。然而，如图9B所示，包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、卤化物、过氧化氢，以及甘氨酰胺或甘氨酸甲酯的组合物在24小时之后，失去了杀微生物活性。
这些结果与图9A和图9B示出的本发明的包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、卤化物、过氧化氢以及乙醇胺的组合物保持杀微生物活性24小时的结果，和图8A和图8B中示出的本发明的包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶、卤化物、过氧化氢，以及乙醇胺或丙醇胺的组合物保持杀微生物活性至少长达96小时的结果形成鲜明的对比。
总结.上述实施例的数据表明，与仅包括过氧化氢的组合物或包括过氧化氢与嗜酸性粒细胞过氧化物酶的组合的组合物相比，本发明的包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，过氧化氢或过氧化氢源，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺的组合物在杀死细菌方面更有效。上述数据还表明，与包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，以及氨基酸或甘氨酰胺或甘氨酸甲酯的化合物相比，包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺的组合物具有优越的杀微生物活性。
实施例中的数据进一步表明，本发明的包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶，过氧化氢，以及乙醇胺、二乙醇胺或丙醇胺的组合物在一段时间内保持杀微生物活性。
本文中所述的各成分的浓度仅用于说明性目的。本发明的组合物中的各成分的浓度依据组合物所使用的条件、使用的环境以及所需的结果可以进行较大的变动。
尽管已经示出并描述了本发明的优选实施方式，当应知晓的是，可在不背离本发明的精神和范围下进行各种改变。

Claims (30)

1.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
一种用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物，包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和氨基醇，所述氨基醇选自由乙醇胺、二乙醇胺和丙醇胺所组成的组。
2.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求1所述的组合物，其中，所述氨基醇增强所述嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
3.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求1所述的组合物，进一步包括过氧化物或过氧化物源。
4.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求3所述的组合物，其中，所述过氧化物为过氧化氢。
5.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求3所述的组合物，其中，所述过氧化物源为产生过氧化物的氧化酶。
6.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求5所述的组合物，其中，所述产生过氧化物的氧化酶为葡萄糖氧化酶。
7.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求1所述的组合物，其中，所述氨基醇为乙醇胺。
8.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求1所述的组合物，其中，所述氨基醇为二乙醇胺。
9.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求1所述的组合物，其中，所述氨基醇为丙醇胺。
10.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求1所述的组合物，进一步包括卤化物。
11.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求10所述的组合物，其中，所述卤化物为溴化物。
12.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
一种用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的组合物，包括：嗜酸性粒细胞过氧化物酶；过氧化物或过氧化物源；卤化物；以及氨基醇，所述氨基醇选自由乙醇胺、二乙醇胺和丙醇胺所组成的组；其中，所述氨基醇增强所述嗜酸性粒细胞过氧化物酶的杀微生物活性。
13.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求12所述的组合物，其中，所述过氧化物为过氧化氢。
14.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求12所述的组合物，其中，所述过氧化物源为产生过氧化物的氧化酶。
15.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求14所述的组合物，其中，所述产生过氧化物的氧化酶为葡萄糖氧化酶。
16.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求12所述的组合物，其中，所述卤化物为溴化物。
17.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
一种用于杀死病原微生物或抑制病原微生物的生长的方法，包括：在过氧化物和卤化物的存在下，使微生物与有效量的包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和氨基醇的组合物接触，所述氨基醇选自由乙醇胺、二乙醇胺和丙醇胺所组成的组。
18.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求17所述的方法，其中，所述过氧化物为过氧化氢。
19.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求17所述的方法，其中，所述卤化物为溴化物。
20.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
一种用于治疗人受试者或动物受试者中的微生物感染的方法，包括：在过氧化物和卤化物的存在下，将有效量的包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和氨基醇的组合物施用到感染部位，所述氨基醇选自由乙醇胺、二乙醇胺和丙醇胺所组成的组。
21.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求20所述的方法，其中，所述过氧化物为过氧化氢。
22.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求20所述的方法，其中，所述卤化物为溴化物。
23.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
一种二元制剂，包括：
将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
(a)包括嗜酸性粒细胞过氧化物酶和氨基醇的第一组合物，所述氨基醇选自由乙醇胺、二乙醇胺和丙醇胺所组成的组；以及
将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
(b)包括过氧化物的第二组合物。
24.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求23所述的二元制剂，其中，所述过氧化物为过氧化氢。
25.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求23所述的二元制剂，其中，所述第一组合物，所述第二组合物，或者所述第一组合物和所述第二组合物两者进一步包括卤化物。
26.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求25所述的二元制剂，其中，所述卤化物为溴化物。
27.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
一种二元制剂，包括：
将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
(a)第一组合物，所述第一组合物包括：嗜酸性粒细胞过氧化物酶；产生过氧化物的氧化酶；以及氨基醇，所述氨基醇选自由乙醇胺、二乙醇胺和丙醇胺所组成的组；以及
将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
(b)第二组合物，所述第二组合物包括所述产生过氧化物的氧化酶的底物。
28.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求27所述的二元制剂，其中，所述产生过氧化物的氧化酶为葡萄糖氧化酶，所述底物为葡萄糖。
29.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求27所述的二元制剂，所述第一组合物或所述第二组合物进一步包括卤化物；或者所述第一组合物和所述第二组合物均进一步包括卤化物。
30.将要求了专有性和特权的本发明的实施方式限定如下：
根据权利要求29所述的二元制剂，其中，所述卤化物为溴化物。
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