CN105902609A - 一种利用野生葛根制备高纯度葛根黄酮提取物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，该方法包括如下步骤：将粉碎后的野生葛根加入提前预冷的磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液，加入复合酶和碳酸亚铁，酶法低温提取；酶解后将酶解液过滤，定容，得到葛根提取液，将提取液通过超微波辐射处理，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根黄酮提取物；本发明采用复合酶解技术，酶解前加入提前预冷的磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液，由于低温酶解过程中加入了一定比例的碳酸亚铁，使得低温酶法提取既保证了酶解的效率，同时酶法低温提取保持了黄酮的活性，提高了黄酮的纯度；同时结合超微波辅助提取技术，充分发挥化学酶解和物理提取的技术优势，降低成本，并提高了葛根黄酮的提取率。

Description

一种利用野生葛根制备高纯度葛根黄酮提取物的方法
技术领域
本发明涉及一种黄酮提取物的制备方法，具体涉及一种利用野生葛根制备高纯度葛根黄酮提取物的方法。
背景技术
葛根为豆科植物野葛的干燥根,其味甘、辛、性平，既是中药材又是营养丰富食用原料，主要化学成分为葛根素、大豆素、大豆昔等黄酮类化合物。现代药理研究表明，葛根黄酮有降低血管阻力，改善心脑血液循环，降低心肌耗氧量等多种药理作用。
传统的葛根黄酮提取方法为：葛根醇提、提取物正丁醇萃取、萃取物再用乙酸结晶、烘干得葛根黄酮，传统提取方法存在的主要问题是正丁醇、乙酸沸点高，高沸点溶剂相应需高温干燥，干燥过程又产生胶糖异味，葛根黄酮的水溶性差和溶剂残留，限制了行业内许多品种不能应用，市场得不到拓展。鉴于目前葛根黄酮传统提取方法存在能耗大，时间长，效率低的缺点，不宜用于工业生产。因此结合化学酶解与物理提取的方法可有效作用在葛根细胞壁并最大程度提高细胞内容物的溶出，从而提高葛根黄酮的提取率，但目前酶法提取葛根黄酮提取出来的黄酮提取活性低，并且纯度低。
发明内容
发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法。
技术方案：如本发明所述一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将野生葛根冷冻干燥，粉碎过筛。
(2)将粉碎后的野生葛根粉加入提前预冷的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，加入复合酶和碳酸亚铁，在15-20℃酶解40-60min，pH值5.5-6.5。
(3)酶解后将酶解液过滤，定容，得到葛根提取液，将提取液通过超微波辐射处理，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根黄酮提取物。
进一步地，所述步骤(1)粉碎过40-60目筛。
进一步地，所述预冷的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液温度为4-10℃。
进一步地，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶质量比为2-5：1。
进一步地，所述复合酶和碳酸亚铁质量比为1：0.05-0.1。
进一步地，所述超微波辐射处理功率50-70W，温度控制在30-40℃提取20-30min。
有益效果：本发明采用纤维素酶和果胶酶复合酶解技术，酶解前加入提前预冷的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，由于低温酶解过程中加入了一定比例碳酸亚铁，使得低温酶法提取既保证了酶解的效率，同时酶法低温提取保持了黄酮的活性，提高了黄酮的纯度；同时结合超微波辅助提取技术，充分发挥化学酶解和物理提取的技术优势，降低成本，并提高了葛根黄酮的提取率。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
本实施例一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取野生葛根1000g进行冷冻干燥，通过粉碎机进行粉碎过40目筛；
(2)将粉碎后的野生葛根粉加入10L提前预冷的pH为6的4℃磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，加入2g纤维素酶和1g果胶酶的复合酶以及0.15g碳酸亚铁，在15℃酶解60min，pH值5.5；
(3)酶解后将酶解液过滤，定容，得到葛根提取液，将提取液通过超微波辐射处理，超微波辐射处理功率50W，温度控制在30℃提取30min，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根黄酮提取物。
实施例2
本实施例一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取野生葛根1000g进行冷冻干燥，通过粉碎机进行粉碎过60目筛；
(2)将粉碎后的野生葛根粉加入10L提前预冷的pH为6的10℃磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，加入5g纤维素酶和1g果胶酶的复合酶以及0.6g碳酸亚铁，在20℃酶解40min，pH值6.5；
(3)酶解后将酶解液过滤，定容，得到葛根提取液，将提取液通过超微波辐射处理，超微波辐射处理功率70W，温度控制在40℃提取20min，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根黄酮提取物。
实施例3
本实施例一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取野生葛根1000g进行冷冻干燥，通过粉碎机进行粉碎过50目筛；
(2)将粉碎后的野生葛根粉加入10L提前预冷的pH为6的7℃磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，加入4g纤维素酶和1g果胶酶的复合酶以及0.4g碳酸亚铁，在18℃酶解50min，pH值6.0；
(3)酶解后将酶解液过滤，定容，得到葛根提取液，将提取液通过超微波辐射处理，超微波辐射处理功率60W，温度控制在35℃提取25min，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根黄酮提取物。
实施例4
本实施例一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取野生葛根1000g进行冷冻干燥，通过粉碎机进行粉碎过50目筛；
(2)将粉碎后的野生葛根粉加入10L提前预冷的pH为6的7℃磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，加入3g纤维素酶和1g果胶酶的复合酶以及0.32g碳酸亚铁，在18℃酶解50min，pH值6.0；
(3)酶解后将酶解液过滤，定容，得到葛根提取液，将提取液通过超微波辐射处理，超微波辐射处理功率60W，温度控制在35℃提取25min，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根黄酮提取物。
实施例5
分别取实施例1、实施例2、实施例3、实施例4得到的葛根黄酮，根据如下公式计算葛根黄酮提取率：葛根黄酮提取率(％)＝葛根黄酮重量(g)/野生葛根总重量×100，结果见表1。
表1葛根黄酮提取率
葛根黄酮提取率(％)
对比例1 50.35±0.15
对比例2 68.25±0.25
实施例1 80.52±0.25
实施例2 80.78±0.20
实施例3 82.39±0.18
实施例4 81.48±0.26
对比例1采用本发明的方法，不同之处在于没有加入碳酸亚铁。
对比例2采用本发明的方法，不同之处在于没有加入碳酸亚铁，酶解的温度为40-60℃。从表1可以看出对比例1没有加入碳酸亚铁在酶法低温提取下，葛根黄酮提取率明显低于实施例；对比例2没有加入碳酸亚铁在常温酶解提取葛根黄酮提取率略低于实施例。
实施例6
葛根黄酮提取物纯度测定：
精确称取实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提取得到的葛根黄酮提取物20mg，置于250mL容量瓶中，加入70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精确吸取0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0于10mL容量瓶中，并各加70％乙醇1.0mL，再加蒸馏水稀释至刻度摇匀。另取70％乙醇1.0mL置10mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，作空白对照，在250nm波长处测定吸光度，根据标准曲线方程计算样品溶液中总黄酮的含量，进而计算出粗葛根黄酮样品中葛根黄酮的含量，根据下列公式计算出葛根黄酮纯度。
葛根黄酮纯度(％)＝葛根黄酮重量(mg)/5×100
葛根黄酮提取物抗氧化活性的测定：
取实施例1、实施例2、实施例3、实施例4提取得到的葛根黄酮提取液和DPPH自由基溶液各2.00ml加入同一具塞试管中，摇匀。30min后用无水乙醇溶剂作参比，测定其吸光度Ai，同时测定2.00mlDPPH自由基溶液与2.00ml溶剂混合后的吸光度A0，以及2.00ml黄酮溶液与2.00ml无水乙醇溶剂混合后的吸光度Aj，根据公式计算抑制率，抗氧化活性能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化活性越强。其公式为：抑制率＝1－(Ai－Aj)/A0×100％其中，Ai为加抗氧剂时DPPH自由基溶液的吸光度；Aj为提取液在测定波长的吸光度；A0为未加抗氧剂时DPPH自由基溶液的吸光度，葛根黄酮纯度以及葛根黄酮的抗氧化活性见表2。
表2葛根黄酮纯度以及葛根黄酮的抗氧化活性
葛根黄酮纯度 抑制率SA
对比例1 52.35±0.14 50.78±0.25
对比例2 60.56±0.19 60.43±0.17
实施例1 90.54±0.24 92.74±0.24
实施例2 88.25±0.22 90.57±0.21
实施例3 91.24±0.17 94.31±0.16
实施例4 92.04±0.25 95.34±0.19
对比例1采用本发明的方法，不同之处在于没有加入碳酸亚铁。
对比例2采用本发明的方法，不同之处在于没有加入碳酸亚铁，酶解的温度为40-60℃。
从表1可知，现有葛根黄酮的提取技术纯度一般在50-60％，对比例1和对比例2的黄酮纯度和活性要远低于本发明实施例，本发明实施例提供的制取方法可得到纯度90％以上的葛根黄酮，远高于现有技术，并且保持了黄酮的高活性。

Claims (6)

1.一种利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将野生葛根冷冻干燥，粉碎过筛；
(2)将粉碎后的野生葛根粉加入提前预冷的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，加入复合酶和碳酸亚铁，在15-20℃酶解40-60min，pH值5.5-6.5；
(3)酶解后将酶解液过滤，定容，得到葛根提取液，将提取液通过超微波辐射处理，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，所述步骤(1)粉碎过40-60目筛。
3.根据权利要求1所述利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，所述预冷的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液温度为4-10℃。
4.根据权利要求1所述利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶质量比为2-5：1。
5.根据权利要求1所述利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，所述复合酶和碳酸亚铁质量比为1：0.05-0.1。
6.根据权利要求1所述利用野生葛根制备葛根黄酮提取物的方法，其特征在于，所述超微波辐射处理功率50-70W，温度控制在30-40℃提取20-30min。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106676143A (zh) * 2017-01-10 2017-05-17 江苏农林职业技术学院 一种葛根黄酮改性的方法
CN107245483A (zh) * 2017-07-19 2017-10-13 江苏农林职业技术学院 一种用于提取葛根黄酮的复合酶及采用该复合酶进行提取的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102319284A (zh) * 2011-07-18 2012-01-18 句容茅宝葛业有限公司 一种从葛根中高效提取制备异黄酮的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102319284A (zh) * 2011-07-18 2012-01-18 句容茅宝葛业有限公司 一种从葛根中高效提取制备异黄酮的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张鹏斐等: "葛根黄酮类化合物的研究进展", 《农产品加工·学刊》 *
李德莹等: "金属离子对纤维素酶讲解汽爆秸秆的影响", 《湖北农业科学》 *
楚纪明等: "葛根有效成分及其姚莉作用研究进展", 《食品与药品》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106676143A (zh) * 2017-01-10 2017-05-17 江苏农林职业技术学院 一种葛根黄酮改性的方法
CN107245483A (zh) * 2017-07-19 2017-10-13 江苏农林职业技术学院 一种用于提取葛根黄酮的复合酶及采用该复合酶进行提取的方法

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