CN105886463A - 一种提取细小颗粒脂肪组织的方法 - Google Patents

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高博闻
程辰
何际洲
李青峰
李欣馨
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Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells

Abstract

本发明提供一种提取细小颗粒脂肪组织的方法，用于从脂肪抽吸混合物中提取细小颗粒脂肪组织。所述方法是利用II型胶原酶溶液与肪抽吸混合物中的脂肪层混合，震荡分离后获得细小颗粒脂肪组织。本发明提供了一种简单有效的细小颗粒脂肪组织的提取方法，使得获得的细小颗粒脂肪组织具有颗粒更细小、分化能力更强、活性更强等优点，可以提高操作移植后的存活率和干细胞对周围组织再生修复的作用，更大地满足了临床的实际需求。

Description

一种提取细小颗粒脂肪组织的方法
技术领域
本发明涉及金属铸造领域，特别涉及一种提取细小颗粒脂肪组织的方法。
背景技术
因此，本发明之目的，即在提供一种提取细小颗粒脂肪组织的方法，以期解决上述技术问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取细小颗粒脂肪组织的方法，通过利用II型胶原酶溶液对脂肪抽吸混合物进行处理，进而分离出更细小颗粒并含有更高干细胞含量的脂肪组织。
为了实现上述目的，本发明提供一种提取细小颗粒脂肪组织的方法，用于从脂肪抽吸混合物中提取细小颗粒脂肪组织。所述方法是利用II型胶原酶溶液与肪抽吸混合物中的脂肪层混合，震荡分离后获得细小颗粒脂肪组织。
在本发明一实施例中，所述II型胶原酶溶液与肪抽吸混合物中的脂肪层按体积比为1:1的比例混合。
在本发明一实施例中，所述震荡步骤的处理温度为35～39℃。
在本发明一实施例中，所述方法具体包括以下步骤：
(1)将脂肪抽吸混合物静置后，收集脂肪层；
(2)将步骤(1)收集获得的脂肪层与所述II型胶原酶溶液按照按体积比为1:1的比例混合均匀，获得混合液；
(3)将步骤(2)获得的混合液在35～39℃温度下恒温震荡后离心分离，即获得细小颗粒脂肪组织。
在本发明一实施例中，所述恒温震荡持续20～40分钟。优选地，所述恒温震荡的温度选择37℃。
在本发明一实施例中，所述离心分离的离心力为500～600g，离心时间为2～5分钟；优选地，离心时间为3分钟。
在本发明一实施例中，所述II型胶原酶溶液的质量体积比为0.2％。
在本发明中，利用II型胶原酶溶液对脂肪抽吸混合物进行处理，获得了更细小颗粒的脂肪组织。该细小颗粒脂肪组织的细胞大小约为目前可获得的粗颗粒脂肪细胞的1/3～1/2，而该细小颗粒脂肪组织中血管基质成分(SVF)是粗颗粒脂肪组织的1.3～1.5倍。
本发明提供了一种简单有效的细小颗粒脂肪组织的提取方法，使得获得的细小颗粒脂肪组织具有颗粒更细小、分化能力更强、活性更强等优点，可以提高操作移植后的存活率和干细胞对周围组织再生修复的作用，更大地满足了临床的实际需求。
附图说明
图1A是本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪组织在40倍放大率下的镜检图；
图1B是常规粗颗粒脂肪细胞在40倍放大率下的镜检图；
图2是流式细胞分析结果；
图3A和图3B、图4A和图4B以及图5A和图5B分别是干细胞诱导成脂实验中不同放大倍率下本实施例获得的细小颗粒脂肪组织和粗颗粒脂肪组织的镜检图；
图6是本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪组织的来源干细胞(ADSC)和粗颗粒脂肪组织的来源干细胞的活性生长曲线。
具体实施方式
以下，结合具体实施方式，对本发明的技术进行详细描述。应当知道的是，以下具体实施方式仅用于帮助本领域技术人员理解本发明，而非对本发明的限制。
在本实施例中，首先，提供一种提取细小颗粒脂肪组织的方法，用于从脂肪抽吸混合物中提取细小颗粒脂肪组织。所述方法具体包括以下步骤：
(1)将脂肪抽吸混合物静置后，收集脂肪层；通常，将脂肪抽吸混合物静置5分钟左右，即可将脂肪层与水分层分离，收集脂肪层待用；
(2)将步骤(1)收集获得的脂肪层与质量体积比为0.2％的II型胶原酶溶液按照按体积比为1:1的比例混合均匀，获得混合液；
(3)将步骤(2)获得的混合液在35～39℃温度下恒温震荡20～40分钟后，以离心力为500～600g离心分离2～5分钟，使得脂肪分为两层，上层为粗颗粒脂肪组织而下层即为细小颗粒脂肪组织，取下层即可获得细小颗粒脂肪组织。
申请人对本实施例获得的细小颗粒脂肪组织与粗颗粒脂肪细胞进行了镜检，用于观察细胞形态，镜检图请见图1A和图1B，其中，图1A是本实施例获得的细小颗粒脂肪组织镜检图，图1B是常规粗颗粒脂肪细胞镜检图。从图1A和图1B中可以发现，利用本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪组织的细胞大小约为所述粗颗粒脂肪细胞的1/3～1/2。
此外，申请人还对血管基质成分(SVF)进行了分析，请见表1数据。
表1. SVF含量对比
粗颗粒脂肪细胞(个/ml) 细粗颗粒脂肪细胞(个/ml) 相差倍数
126 190 1.51
324 473 1.46
241 188 1.28
由表1的数据可以发现，利用本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪组织中的血管基质成分(SVF)是粗颗粒脂肪组织的1.3～1.5倍。
申请人还对本实施例获得的细小颗粒脂肪组织与粗颗粒脂肪细胞进行了流式细胞分析，分析结果请见图2。根据图2所示的结果显示：利用本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪表达CD44、CD29细胞比例比粗颗粒脂肪多，而表达CD31细胞比例测比粗颗粒脂肪少。
申请人还对本实施例获得的所述细小颗粒脂肪组织与粗颗粒脂肪组织进行了干细胞诱导成脂实验。实验镜检图请见图3A～图5B。由这些附图可以发现：利用本发明所述方法获得的所述细小颗粒脂肪组织的脂肪来源干细胞(ADSC)比粗颗粒脂肪组织的脂肪来源干细胞的成脂能力更强。
申请人还利用CCK8试剂测定了本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪组织的来源干细胞(ADSC)和粗颗粒脂肪组织的来源干细胞的活性生长曲线，请见图6。如图6所示的，本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪组织的脂肪来源干细胞(ADSC)比粗颗粒脂肪组织的脂肪来源干细胞的活性更强。作为一应用实施例，将利用本发明所述方法获得的细小颗粒脂肪组织进行移植，应用于整形中，可以进行诸如头面部精细结构的填充、面部皱纹的填充等，可增加组织再生，具有补充容量和塑形的效果。
在本发明中，利用II型胶原酶溶液对脂肪抽吸混合物进行处理，获得了更细小颗粒的脂肪组织。该细小颗粒脂肪组织的细胞大小约为目前可获得的粗颗粒脂肪细胞的1/3～1/2，而该细小颗粒脂肪组织中血管基质成分(SVF)是粗颗粒脂肪组织的1.3～1.5倍。
本发明提供了一种简单有效的细小颗粒脂肪组织的提取方法，使得获得的细小颗粒脂肪组织具有颗粒更细小、分化能力更强、活性更强等优点，可以提高操作移植后的存活率和干细胞对周围组织再生修复的作用，更大地满足了临床的实际需求。
本发明已由上述相关实施例加以描述，然而上述实施例仅为实施本发明的范例。必需指出的是，已公开的实施例并未限制本发明的范围。相反地，包含于权利要求书的精神及范围的修改及均等设置均包括于本发明的范围内。

Claims (7)

1.一种提取细小颗粒脂肪组织的方法，用于从脂肪抽吸混合物中提取细小颗粒脂肪组织，其特征在于，所述方法是利用II型胶原酶溶液与肪抽吸混合物中的脂肪层混合，震荡分离后获得细小颗粒脂肪组织。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述II型胶原酶溶液与肪抽吸混合物中的脂肪层按体积比为1:1的比例混合。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述震荡步骤的处理温度为35～39℃。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
(1)将脂肪抽吸混合物静置后，收集脂肪层；
(2)将步骤(1)收集获得的脂肪层与所述II型胶原酶溶液按照按体积比为1:1的比例混合均匀，获得混合液；
(3)将步骤(2)获得的混合液在35～39℃温度下恒温震荡后离心分离，即获得细小颗粒脂肪组织。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述恒温震荡持续20～40分钟。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述离心分离的离心力为500～600g，离心时间为2～5分钟。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述II型胶原酶溶液的质量体积比为0.2％。
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