CN105866442A - 一种适用于末梢血的降钙素原免疫层析定量检测试纸条 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种适用于末梢血的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，试纸条的底板上依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫由玻璃纤维素膜和聚酯膜组成，上面固定有抗人红细胞抗体，生物素标记的PCT单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；硝酸纤维素膜上固定有识别PCT另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和多克隆抗体构成的质控线。该试纸条结构简单，可以对末梢血PCT进行检测。

Description

一种适用于末梢血的降钙素原免疫层析定量检测试纸条

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种可用于末梢血检测的高灵敏度降钙素原免疫层析定量检测试纸条。

背景技术

降钙素原(procalcitonin，PCT)是降钙素的前肽，是由116氨基酸组成、分子量为13KD、无激素活性的糖蛋白。PCT由神经内分泌细胞（包括甲状腺、肺和胰腺组织细胞）表达，经酶切分解为降钙素（CT）、羧基端肽和氨基端肽。PCT在人体内半衰期为20～24h，稳定性好，在正常人血清中水平极低。但在全身性细菌感染或霉菌、寄生虫感染者血清中含量迅速升高，特别是脓毒性休克时PCT时浓度成倍升高，感染后两个小时即可检测到，且持续时间长，其在血清中的水平与感染性疾病的严重程度呈正相关，经有效抗生素治疗后，PCT水平可迅速下降；而病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病、外伤(多创伤或手术创伤)、慢性炎症以及局部感染者，PCT水平维持在正常范围内或者有轻度升高。因此，PCT是细菌感染所致重症全身性炎症反应的良好指标，在全身性细菌感染和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察、等方面有很高的临床价值；利用它能有效地评估感染和炎症的严重程度及进展情况，还能监测药物疗效，指导外科围手术期的处理以及抗生素正确应用。

目前检测PCT的常用方法有：酶联免疫法、金标法、免疫荧光法、化学荧光法。但是这些方法检测步骤比较麻烦，检测耗时较长，所采用的血样均为静脉血。但是对于需要经常监测PCT水平的患者而言，静脉取血并不宜重复进行，末梢血采取方便，对人造成的伤口小，是更佳的血样来源。

但是末梢血与静脉血的成分有较大的区别，例如末梢血中的PCT、RBC、Hb、HCT、MCHC（红细胞平均血红蛋白浓度）明显低于静脉血。此外，末梢血的采血量一般比较少，比较难以满足试纸条检测所需要的最小样品量。因此，虽然目前有一些PCT检测试纸可以针对静脉血血清或者血浆中的PCT含量进行测定，但是这些检测试纸尚不能准确检测出末梢血液中的PCT含量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适用于末梢血降钙素原免疫层析定量检测试纸条。该检测试纸灵敏度高、检测稳定性强，特异性好，检测时间不大于10分钟，大大提高了诊断效率。

本发明的降钙素原免疫层析定量检测试纸条有如下结构特征：底板上依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。样品垫由玻璃纤维素膜和聚酯膜组成，上面固定有抗人红细胞抗体，生物素标记的PCT单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；硝酸纤维素膜上固定有识别PCT另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和多克隆抗体构成的质控线。

本发明与现有技术相比，具有如下优点：

（1）本发明将荧光蛋白作为标记物，此标记物稳定性良好，有利于提高检测稳定性。

（2）本发明提高检测灵敏度，降低非特异性结合，有利于提高试剂盒性能。

（3）利用发明进行降钙素原的检测时间不大于10分钟，检测线性范围为0.10ng/ml~100.00ng/ml，极大地提高了检测效率。

（4）本发明可通过荧光免疫分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠的诊断结果。

（5）本发明卡壳设有样品进入的加样孔和供观测结果的观察窗，根据分析仪器判定结果，准确可靠。

（6）本发明制作方便，体积小、便于携带，检测成本较低，可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速诊断；易于保存，有利于基层单位推广。

（7）可以对末梢血进行检测。

附图说明

图1是实施例一的结构示意图；

图2是实施例三的结构示意图；

图3是实施例二的结构示意图；

图4是实施例三的结构示意图。

具体实施方式

以下将结合实施例和附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部。在本领域的技术人员不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。另外，文中所提到的所有联接/连接关系，并非单指构件直接相接，而是指可根据具体实施情况，通过添加或减少联接辅件，来组成更优的联接结构。

实施例一、降钙素免疫层析定量检测试纸条1

如图1所示的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，底板4上依次设有样品垫1、硝酸纤维素膜2和吸水垫3。样品垫1上固定有生物素标记的PCT单克隆抗体（浓度0.3~1.5mg/mL）和链霉亲和素标记（或亲和素）的荧光蛋白（使用激发光波长530nm，发射光波长570nm，浓度0.1~1.0mg/mL）；硝酸纤维素膜2上固定有识别PCT另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线T（浓度0.5~3mg/mL）和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线C（浓度0.2~2.0mg/mL），质控线C用于检测试纸条的有效性。荧光蛋白是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白等中的一种。

当待测样品加到样品垫1上后，通过层析作用向前移动，样品中PCT与样品垫1上结合荧光标记物（荧光蛋白）的PCT抗体（Mab-PCT*Fluoro）反应形成复合物PCT—Mab-PCT*Fluoro，在层析作用下反应复合物继续向前移动经过硝酸纤维膜2上包被的PCT抗体（检测线）时，反应复合物被包被的PCT抗体捕获形成复合物（Mab-PCT—PCT—Mab-PCT*Fluoro）（检测线T），通过荧光免疫分析仪读取检测线的反应信号，在激发光源的作用下，荧光物质发射特定波长的荧光信号，荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数值，计算出样本中PCT的浓度，得到降钙素原检测结果。

实施例二、降钙素免疫层析定量检测试纸条2

相较于实施例一，实施例二有如下特征：样品垫1由玻璃纤维素膜和聚酯膜组成；样品垫1上加入抗人红细胞抗体。

实施例三、降钙素免疫层析定量检测试纸条的改进Ⅰ

如图3所示，在实施例二的试纸条基础上进行如下改进：样品垫1上包括层叠的第一样品垫10和第二样品垫11，第一样品垫10的一端垫在样品垫1的下方，第二样品垫11交叠压在硝酸纤维素膜2的一端。

进一步，将上述的第一样品垫10中插入样品垫下方的一端设制定位条12，样品垫1的下端面设制能容纳定位条22的定位槽。

实施例四、降钙素免疫层析定量检测试纸条的改进Ⅱ

如图2和图4所示，该试纸还可以包括卡壳5。底板4、样品垫1、硝酸纤维素膜2和吸水垫3均置于卡壳5内；卡壳5壳面上对应于硝酸纤维膜3的位置设有观察窗7，卡壳5壳面上对应于样品垫1的位置设有加样孔6。其中，卡壳5包含上壳50和下壳51。样品垫1可以是经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件，经表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后使用。底板4可以是聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。

降钙素免疫层析定量检测试纸条对样本的检测

使用实施例1的试纸条对不同病人的末梢血和静脉血进行检测，末梢血检测重复2次，以确定检测结果的稳定性，同时，将末梢血检测结果与传统的静脉血试纸条检测结果进行比较，以确定末梢血的检测结果是否适用于PCT检测。如果如下：

从检测结果来看，本发明的试纸条具有很好的稳定性，与静脉血的检测结果存在很好的关联性，完全可以满足末梢血检测的需要。使用末梢血进行PCT检测是可行的。本试纸条同样可以用于静脉血的PCT检测。

Claims (8)

1.一种适用于末梢血的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，包含有底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：样品垫上含有抗人红细胞抗体。

2.根据权利要求1所述的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：样品垫由玻璃纤维素膜和聚酯膜组成。

3.根据权利要求2所述的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：所述样品垫上固定有生物素标记的PCT单克隆抗体和链霉素亲和标记的荧光蛋白。

4.根据权利要求2所述的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：硝酸纤维膜上固定有识别PCT另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和多克隆抗体构成的质控线。

5.根据权利要求3所述的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：所述荧光蛋白是绿色荧光蛋白或藻胆蛋白。

6.根据权利要求1所述的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。

7.根据权利要求1至6任一项所述的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：该试纸条由卡壳覆盖，卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗，对应于样品垫的位置设有加样孔。

8.根据权利要求7所述的降钙素原免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：所述卡壳包含上壳和下壳。