CN105861329A - 一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其应用 - Google Patents
一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105861329A CN105861329A CN201610371277.4A CN201610371277A CN105861329A CN 105861329 A CN105861329 A CN 105861329A CN 201610371277 A CN201610371277 A CN 201610371277A CN 105861329 A CN105861329 A CN 105861329A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aspergillus oryzae
- spore
- strain
- soy sauce
- hgd13
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 title claims abstract description 30
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 title claims abstract description 29
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 abstract description 13
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 19
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 14
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 5
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 4
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 2
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 208000001130 gallstones Diseases 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000031891 intestinal absorption Effects 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/66—Aspergillus
- C12R2001/69—Aspergillus oryzae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Soy Sauces And Products Related Thereto (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其在酱油酿造中的应用，属于微生物技术领域。该菌株为米曲霉Aspergillus oryzaeHGD13，2016年05月03日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2016244，该米曲霉菌株HGD13除产蛋白酶外，还高产内切葡聚糖酶，可用于酱油酿造，提高原料利用率，提高酱油中水溶性膳食纤维的含量，使酱油中可溶性膳食纤维含量超过4.3 g/100ml。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其在酱油酿造中的应用。
背景技术
酱油是以大豆、小麦、面粉、麸皮等为原料，在多种微生物分泌的不同酶系的共同作用下，经过一系列复杂的生物化学变化，最终形成的具有明显香味特征的酿造调味品。米曲霉是酿造酱油制曲中的主体微生物，它是一种好氧微生物，能够自身分泌多种酶，其中最主要的是蛋白酶和淀粉酶，并且它们在制曲中的酶活力都很高，以至在分解原料时就会获得较多的氨基酸类和糖类物质，它们对酱油形成的特殊色泽、香气、滋味和体态起着重要的作用。
膳食纤维指一些既不能被小肠消化酶分解也不能被小肠吸收的多糖、木质素等植物性成分。膳食纤维对人体的生理作用已被广泛认同，被称为“第七营养素”，具有预防便秘和直肠癌、降低血清胆固醇、调节血糖血脂代谢、预防胆结石、减肥和抗癌等功效。近年来随着生活水平的提高，人们的膳食结构发生了改变，以动物蛋白为主的高蛋白高脂肪食品摄入量过多，谷物食品摄取的精细度提高，膳食纤维摄入比例减少，导致肥胖、糖尿病、心血管疾病等“文明病”发病率提高，膳食纤维的合理摄入能降低文明病的发生，增进机体健康。
酿造酱油主要原料，如大豆、小麦、面粉、麸皮等，经发酵、提油后产生大量废渣，由于其数量多、水分含量高、营养成分丰富，极易腐败变质，难以保存；生产厂家通常作为粗饲料添加物或丢弃处理，从而造成大量资源浪费，处理不当还会造成环境污染。大豆酱油渣除蛋白质已被大量利用外，其它组分（尤其是膳食纤维）利用率较低，因此，选育一株高效米曲霉菌株，既具有较高的蛋白酶活，使酱油酿造原料中蛋白质转化为氨基酸，又具有内切葡聚糖酶活，使酱油酿造原料中不溶性膳食纤维尽可能多的转化为酱油中可被人直接吸收的可溶性膳食纤维，提高原料利用率，减少环保压力，将具有重要的社会和经济意义。
发明内容
本发明的目的之一是提供一株产内切葡聚糖酶米曲霉Aspergillus oryzae HGD13的菌株，保藏编号：CCTCC NO：M 2016244，保藏时期：2016年05月03日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武昌珞珈山武汉大学。
米曲霉菌株HGD13从农家自酿豆酱中，经过大量的复壮、分离、纯化获得。
所述的米曲霉HGD13菌株形态学特征：米曲霉HGD13在酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基上，菌丝长得旺盛，但是不产孢子；在马铃薯培养基（PDA）和豆汁培养基上培养3-4 d后长满孢子，在豆汁培养基上的孢子是绿色而在PDA上的是浅黄色，且在豆汁培养基上产孢时间短、孢子产量多、菌丝层厚。
本发明的目的之二是提供米曲霉菌株HGD13产生内切葡聚糖酶的方法，该内切葡聚糖酶制备方法如下：
（1）将活化好的斜面米曲霉HGD13菌株接种2-3环到麸皮培养基（麸皮100份，水100份）中，30℃培养2 d，得到一级种曲孢子；
（2）按照一级种曲孢子与二级种曲培养基重量比为0.25-1.0%（w/w）比例接种一级种曲孢子到二级种曲培养基（麸皮85份，豆粕粉15份，水100份）中，培养温度30℃，培养时间2-3 d，得到二级种曲孢子；
（3）将培养好的二级种曲孢子按照接种量(0.25-1.0)×107个孢子/g（干基）接种到成曲培养基（豆粕60份，麸皮30份，面粉10份，水100份）中，培养温度30℃，培养2-3 d后，得到成曲；
（4）将0.1-0.3 mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH5.5）加入到成曲中，30-40℃浸提1-2 h，搅拌，过滤，得上清液，上清液用浓度40-50%（w/v）的(NH4)2SO4溶液盐析，弃上清，用0.1-0.3 mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH5.5）溶解沉淀，制得粗酶液。
本发明的目的之三是将米曲霉HGD13菌株应用于酱油酿造，步骤如下：
（1）将斜面上的米曲霉HGD13接种2-3环到麸皮培养基（麸皮100份，水100份），30℃培养2 d，得到一级种曲孢子；
（2）按照一级种曲孢子与二级种曲培养基重量比为0.25-1.0%（w/w）比例接种一级种曲孢子到二级种曲培养基（麸皮85份，豆粕粉15份，水100份）中，培养温度30℃，培养时间2-3 d，得到二级种曲孢子；
（3）将培养好的二级种曲孢子按照接种量（0.25-1.0）×107个孢子/g（干基）接种到成曲培养基（豆粕60份，麸皮30份，面粉10份，氯化钙0.1份，硫酸锌0.05份，酵母粉3份，葡萄糖2份，水100份）中，培养温度30℃，培养时间2-3 d，得到成曲；
（4）在步骤（3）的成曲中添加成曲重量2.5倍18%食盐水，30℃保温培养20-30 d后，发酵体系pH降为5.3左右时，按照总原料量的0.05-0.1%（w/w）添加活性干酵母（鲁氏酵母），30℃保温培养20-30 d后，按照总原料量的0.05-0.1%（w/w）添加活性干酵母（球拟酵母），30℃保温再培养20-30 d，最后按照酱油酿造常规方法，过滤，灭菌。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果: 提供了一株高效米曲霉菌株，既具有较高的蛋白酶活，使酱油酿造原料中蛋白质转化为氨基酸，又具有内切葡聚糖酶活，使酱油酿造原料中不溶性膳食纤维尽可能多地转化为酱油中可被人直接吸收的可溶性膳食纤维，提高原料利用率，减少环保压力，具有重要的社会和经济意义。
附图说明
图1为不同斜面培养基上米曲霉HGD13菌落形态图，图中从上至下分别为PDA、YPD、豆汁培养基。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步描述，但本发明的内容不仅仅局限于实施例所述的范围，凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1：不同斜面培养基上米曲霉HGD13菌落形态
（1）培养基配制
马铃薯（PDA）培养基：马铃薯（取新鲜马铃薯去皮，挖掉芽眼，洗净，切片，称取20 g，切成小块，加入100 ml水煮沸30 min后，双层纱布过滤，滤液补足水分）20 g，葡萄糖1 g，蒸馏水100 ml，琼脂2 g，pH自然，115 ℃灭菌20 min。
酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基：葡萄糖2 g，胰蛋白胨2 g，酵母膏1 g，蒸馏水100 ml，琼脂2 g，pH 5.0-5.5，115℃灭菌20 min。
豆汁培养基：豆汁1000 ml（100 g大豆浸泡24 h，加水800 ml煮沸30 min，定容到1000 ml），可溶性淀粉20 g，硫酸镁0.5 g，磷酸二氢钾1.0 g，琼脂20 g，pH 6.5-7.0。121℃灭菌20 min。
（2）不同斜面活化培养基上米曲霉HGD13菌落形态观察
米曲霉HGD13在PDA、YPD、豆汁培养基的菌落形态如图1所示。米曲霉HGD13菌株在YPD培养基上面，菌丝长得旺盛但是不产孢子；在PDA培养基和豆汁培养基上培养3-4 d后长满孢子，在豆汁培养基上的孢子是绿色而在PDA上的是浅黄色，且在豆汁培养基上产孢时间短、孢子产量多、菌丝层厚。
实施例2：米曲霉菌株HGD13产内切葡聚糖酶制备
（1）将活化好的斜面米曲霉HGD13菌株接种3环到麸皮培养基（麸皮100份，水100份）中，30℃培养2 d，得到一级种曲孢子。
（2）按照一级种曲孢子与二级种曲培养基重量比为0.25%（w/w）比例接种一级种曲孢子到二级种曲培养基（麸皮85份，豆粕粉15份，水100份）中，培养温度30℃，培养时间60 h，孢子数超过60亿个/g（发酵基质），得到二级种曲孢子。
（3）将培养好的二级种曲孢子按照接种量0.25×107个孢子/g（干基）接种到成曲培养基（豆粕60份，麸皮30份，面粉10份，水100份）中，培养温度30℃，培养24 h时，曲料表面长满白色菌丝，散发淡淡曲香，结块小，及时将曲料分散；培养36 h时，曲料白色菌丝较多，稍微有淡黄色孢子，有曲香味；培养48 h时，曲料菌丝浓密，表面布满黄色孢子，曲料蓬松且曲香浓郁；培养60 h时，曲料呈黄绿色，孢子丰满，曲料柔软，浓郁曲香味，得到成曲。
（4）按照成曲重量与醋酸-醋酸钠缓冲液体积比为1:20（w/v），加入0.02 mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH5.5）到成曲中，40℃浸提1 h，搅拌，过滤，得上清液；上清液用浓度40%（w/v）的(NH4)2SO4盐析，弃上清，用0.02 mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH5.5）溶解沉淀，制得粗酶液。
（5）以酪蛋白为底物，采用福林-酚法测定蛋白酶活力；以羧甲基纤维素钠为底物，采用二硝基水杨酸（DNS）法测定内切葡聚糖酶活力。该米曲霉HGD13菌株产内切葡聚糖酶活超过800 U/g（发酵基质），中性蛋白酶活大于3000 U/g（发酵基质）。
实施例3：高膳食纤维酱油的制备
（1）将活化好的斜面米曲霉HGD13菌株接种3环到麸皮培养基（麸皮100份，水100份）中，30℃培养2 d，得到一级种曲孢子。
（2）按照一级种曲孢子与二级种曲培养基重量比为0.25%（w/w）比例接种一级种曲孢子到二级种曲培养基（麸皮85份，豆粕粉15份，水100份）中，培养温度30℃，培养时间60 h，得到二级种曲孢子，孢子数超过60亿个/g（发酵基质）。
（3）将培养好的二级种曲孢子按照接种量0.5×107个孢子/g（干基）接种到成曲培养基（豆粕60份，麸皮30份，面粉10份，氯化钙0.1份，硫酸锌0.05份，酵母粉3份，葡萄糖2份，水100份）中，培养温度30℃，培养时间48 h，得到成曲，成曲中中性蛋白酶活大于3300 U/g（发酵基质），内切葡聚糖酶活超过1100 U/g（发酵基质）。
（4）在步骤（3）的成曲中添加成曲重量2.5倍18%食盐水，30℃保温培养30 d后，发酵体系pH降为5.3左右时，按照总原料量的0.08%（w/w）添加安琪活性干酵母（鲁氏酵母），30℃保温培养30 d后，按照总原料量的0.08%（w/w）添加安琪活性干酵母（球拟酵母），30℃保温再培养30 d。然后按照酱油酿造常规方法，过滤并灭菌。
（5）品质评价：酱油中可溶性膳食纤维含量超过4.3 g/100ml，与一般酱油相比，可溶性膳食纤维含量提高了40%以上。
Claims (2)
1.一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株，其特征在于：该菌株为米曲霉Aspergillus oryzaeHGD13，已于2016年05月03日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M 2016244。
2.一种如权利要求1所述的一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株Aspergillus oryzaeHGD13在酱油酿造中的应用，包括如下步骤：
(1)将活化好的米曲霉HGD13菌株接种到麸皮培养基中，30℃培养2d，得到一级种曲孢子；
(2)按照一级种曲孢子与二级种曲培养基重量比为0.25-1.0％的比例接种步骤(1)的一级种曲孢子到二级种曲培养基中，培养温度30℃，培养时间2-3d，得到二级种曲孢子；
(3)将培养好的二级种曲孢子按照接种量(0.25-1.0)×107个孢子/g(干基)接种到成曲培养基中，培养温度30℃，培养时间2-3d，得成曲；
(4)在步骤(3)的成曲中添加成曲重量2.5倍18％食盐水，30℃保温培养20-30d后，发酵体系pH降为5.3左右时，按照总原料重量的0.05-0.1％添加活性干鲁氏酵母，30℃保温培养20-30d后，按照总原料重量的0.05-0.1％添加活性干球拟酵母，30℃保温再培养20-30d，最后按照酱油酿造常规方法进行酱油的制备。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610371277.4A CN105861329B (zh) | 2016-05-30 | 2016-05-30 | 一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610371277.4A CN105861329B (zh) | 2016-05-30 | 2016-05-30 | 一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105861329A true CN105861329A (zh) | 2016-08-17 |
| CN105861329B CN105861329B (zh) | 2019-06-18 |
Family
ID=56642908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610371277.4A Active CN105861329B (zh) | 2016-05-30 | 2016-05-30 | 一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105861329B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114606138A (zh) * | 2022-03-21 | 2022-06-10 | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 | 菌株和酶在制备保健酱油中的应用及制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101595972A (zh) * | 2009-06-25 | 2009-12-09 | 四川恒泰企业投资有限公司 | 低盐稀态发酵酱油生产工艺方法 |
| CN103907897A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-07-09 | 湖北工业大学 | 一种多菌种制曲的酱油及其生产工艺 |
-
2016
- 2016-05-30 CN CN201610371277.4A patent/CN105861329B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101595972A (zh) * | 2009-06-25 | 2009-12-09 | 四川恒泰企业投资有限公司 | 低盐稀态发酵酱油生产工艺方法 |
| CN103907897A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-07-09 | 湖北工业大学 | 一种多菌种制曲的酱油及其生产工艺 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 周雄川等: "米曲霉Y6产中性蛋白酶和内切葡聚糖酶的研究", 《中国酿造》 * |
| 徐莹主编: "《发酵食品学》", 31 August 2011, 郑州大学出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114606138A (zh) * | 2022-03-21 | 2022-06-10 | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 | 菌株和酶在制备保健酱油中的应用及制备方法 |
| CN114606138B (zh) * | 2022-03-21 | 2024-01-26 | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 | 菌株和酶在制备保健酱油中的应用及制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105861329B (zh) | 2019-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ghorai et al. | Fungal biotechnology in food and feed processing | |
| CN111920031B (zh) | 一种高谷氨酸含量富硒酱油的酿造方法 | |
| CN104996722A (zh) | 一种多菌种两步联合发酵饲料的方法 | |
| CN107022493B (zh) | 一种高产饲用复合酶的米曲霉菌株及其应用 | |
| CN102132881B (zh) | 一种灵芝稻谷食品的制备方法 | |
| CN101433270A (zh) | 一种菜籽蛋白饲料及其制备方法 | |
| CN107828666A (zh) | 一株米曲霉za160及其应用 | |
| CN104195051A (zh) | 一种功能火龙果红曲的制备方法及其制品 | |
| CN109401983A (zh) | 一种米曲霉za151及其应用 | |
| CN107502563A (zh) | 一株马克斯克鲁维酵母菌及其生产β‑葡萄糖苷酶的方法 | |
| CN102168029B (zh) | 一种地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| CN1568790A (zh) | 黄豆酱混合菌种发酵剂的生产方法 | |
| CN101396112B (zh) | 一种酱油的制备方法 | |
| CN106804875A (zh) | 一种甘薯渣发酵饲料及其制备方法与应用 | |
| CN110089651A (zh) | 一种辣椒叶酵素饮料的生产方法 | |
| CN103783264A (zh) | 一种发酵松针饲料的制备方法 | |
| US9497980B2 (en) | Reduction of non-starch polysaccharides and alpha-galactosides in soy flour by means of solid-state fermentation using cellulolytic bacteria isolated from different environments | |
| CN105725163B (zh) | 一种香菇菌黑蒜酱 | |
| CN105861329B (zh) | 一株产内切葡聚糖酶米曲霉菌株及其应用 | |
| CN103642695A (zh) | 一株米曲霉及其在微生物发酵制备饲料添加剂中的应用 | |
| CN113373063B (zh) | 一株米曲霉za175及其应用 | |
| CN101792717B (zh) | 一种嗜热耐酸性β-葡萄糖苷酶产生菌及制备方法 | |
| CN103750011B (zh) | 一种含有纤维素酶的乳仔猪专用复合酶及其制备方法 | |
| CN101492708A (zh) | 混菌固态发酵制备生物活性专一的菜籽肽的方法 | |
| CN101440390A (zh) | 混菌固态发酵制备菜籽活性肽的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |