CN105849106B - 阿哌沙班合成中的关键中间体和杂质：阿哌沙班二醇酯 - Google Patents

阿哌沙班合成中的关键中间体和杂质：阿哌沙班二醇酯 Download PDF

Info

Publication number
CN105849106B
CN105849106B CN201580003432.0A CN201580003432A CN105849106B CN 105849106 B CN105849106 B CN 105849106B CN 201580003432 A CN201580003432 A CN 201580003432A CN 105849106 B CN105849106 B CN 105849106B
Authority
CN
China
Prior art keywords
formula
compound
eliquis
hplc
iii
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201580003432.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105849106A (zh
Inventor
埃莱娜·布拉索拉
菲利波·托马西
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fabbrica Italiana Sintetici SpA (FIS)
Original Assignee
Fabbrica Italiana Sintetici SpA (FIS)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fabbrica Italiana Sintetici SpA (FIS) filed Critical Fabbrica Italiana Sintetici SpA (FIS)
Priority to CN201610570710.7A priority Critical patent/CN106220624B/zh
Publication of CN105849106A publication Critical patent/CN105849106A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105849106B publication Critical patent/CN105849106B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8624—Detection of slopes or peaks; baseline correction
    • G01N30/8631—Peaks
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明的目的涉及一种改进的用于通过新的中间体制备阿哌沙班的方法，所述中间体经历更快的酰胺化反应。本发明还鉴定和定量阿哌沙班的杂质。

Description

阿哌沙班合成中的关键中间体和杂质：阿哌沙班二醇酯
技术领域
本发明涉及一种通过新的关键中间体制备名为阿哌沙班的活性药物成分的方法。
背景技术
阿哌沙班是一种活性药物成分，作为抗凝剂用于静脉血栓栓塞事件的治疗。
阿哌沙班具有化学名称1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-(2-氧代哌啶-1-基)苯基]-4,5-二氢吡唑并[5,4-c]吡啶-3-甲酰胺，并具有以下化学式(I)：
阿哌沙班的某些溶剂合物是已知的，例如，已知阿哌沙班和甲酰胺或者和二甲基甲酰胺的溶剂合物，两者都具有化学计量比1:1。
阿哌沙班二水合物，即每一个阿哌沙班具有两个水分子的阿哌沙班水合物形式，也是已知的。
文献中公开了阿哌沙班的一些合成途径，特别地，在WO2007/0001385中详细说明了在数千克规模上的阿哌沙班的首次工业合成。
PCT申请WO2007/0001385在实施例6中公开了一种通过阿哌沙班乙酯在10千克规模上的酰胺化反应根据以下反应方案制备阿哌沙班的方法：
根据上述程序，使用在丙二醇中的无水氨，并在90℃下进行反应至少12小时，以94.6％的分离摩尔收率获得阿哌沙班。
在WO2007/0001385的实施例6中公开的方法的最大优点(也与实施例7和9比较)是这种方法提供了具有名为N-1的多晶型的阿哌沙班，这种固体形式在同一申请的实施例9中被明确表征并且是阿哌沙班的热力学稳定形式。
根据由创始人提供的监管信息，阿哌沙班形式N-1是目前市场上出售的形式，因此，对于提供一种与创始人用于一般市场的形式具有完全相同的物理化学和治疗特性的活性药物成分这样一种目的来说，重要的是找到一种提供多晶型N-1的阿哌沙班的制备方法。
在出版物J.Med.Chem.，2007，vol.50，22，第5339-5356页中，根据以下反应方案，从阿哌沙班乙酯和5％氨水在乙二醇中加热到120℃4小时，以76％的摩尔收率制备阿哌沙班：
令人遗憾的是，上述出版物没有涉及由此方法制备阿哌沙班的固体形式。
出版物Synthetic Communication，43，第72-79页，(2013)公开了一种利用25％氨水在甲醇中在65℃下5小时以91％摩尔收率从中间体阿哌沙班乙酯制备阿哌沙班的方法。
然而，可能是因为在甲醇中而不是在二醇溶剂中进行，这种方法不提供阿哌沙班形式N-1，实际上产物的熔点是171-173℃，这与形式N-1的熔点235-237℃不同。此外，没有提供关于所述产物的纯度的数据。
在专利公布WO2013/119328的实施例2中，使用5％氨水在丙二醇中在100℃下过夜从阿哌沙班乙酯进行阿哌沙班的合成。不用形式N-1对该反应混合物进行接种，以致在加工结束时，分离出一种不同的固体形式，称为形式I。由此制备的阿哌沙班形式I是阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物。
考虑到上述现有技术和我们的初步实验结果，尽管如WO2007/0001385的实施例7和9中，醇溶剂的存在看起来倾向于提供固体形式H2-2，但是，例如在WO2007/0001385的实施例6中，二醇溶剂的存在看起来促进了多晶型N-1的制备。
因此，为了制备阿哌沙班形式N-1，从二醇溶剂分离阿哌沙班看起来是方便的。
然而，尽管WO2007/0001385中公开的用于制备阿哌沙班形式N-1的工业方法已经使用了二醇溶剂，但是这种方法具有要求在高温下长反应时间的缺点，即，在90℃下至少12小时，或者根据WO2013/119328在100℃下过夜，或者在120℃下4小时(参见上述J.Med.Chem.(2007))。
附图说明
图1显示对比阿哌沙班二醇酯向阿哌沙班的转化和阿哌沙班乙酯向阿哌沙班的转化的动力学研究，两种转化在相同的酰胺化条件下进行。
发明内容
因此，本发明解决的问题是提供一种改进的用于制备阿哌沙班和其溶剂合物或者水合物的方法，所述方法避免了长反应时间和/或高温。
这个问题通过如权利要求书中所概述的用于制备阿哌沙班和其盐的方法来解决，权利要求书的定义构成本说明书的一部分。
本发明方法的其他特征和优点源自于下文报告的对实现本发明的实施例的描述，所述实施例被提供作为对本发明的说明而不是作为对本发明的限制。
具体实施方式
本发明的目的是一种通过式(II)的化合物的酰胺化反应制备式(I)的阿哌沙班和其溶剂合物或者水合物的方法：
其中R选自直链或支链C2-C6烷基、-CH2-CH(OH)-CH2-和-(R1O)nR1-，其中R1是直链或支链C2-C4烷基并且n是1～6的整数。
已经确实令人惊讶地发现，从式(II)的化合物开始，即从阿哌沙班的二醇酯开始，将其转化为阿哌沙班的酰胺化反应比使用常规的阿哌沙班C1-C2烷基酯进行得快得多。
由本发明式(II)的化合物提供的效果可能是由自由氧烷基(oxydryl)引起的，所述自由氧烷基以任何方式有利于由氨进行的烷氧基取代，可能提供了一种邻位促进。或者，这样的效果可能是由于另一种氧的存在引起的，所述氧的电负性提供了一种容易被氨取代的酯。
换言之，通过酰胺化反应将式(II)的阿哌沙班的二醇酯转化成阿哌沙班，比常规的阿哌沙班酯容易得多或者快得多。
在比较的表2和图1中，提供了由本发明方法提供的效果的明显证据。
虽然在下列某些实施例中，酰胺化反应进行6小时(仅仅是为了完成实验标准方案)，但是它们远在此时间之前就已完成。
实际上，提供阿哌沙班的式(II)的化合物的酰胺化反应通常在80℃和90℃之间的温度下只持续3小时，达到99.0％的转化。
如表2所示，在完全相同的条件下，阿哌沙班乙酯转化为阿哌沙班至少耗费6小时。
根据在WO2007/0001385中公开的工业方法，所述转化在90℃下持续至少12小时。
因此，与已知的阿哌沙班酯的酰胺化反应相比，本发明的方法需要更短的反应时间。
本发明方法的进一步的优点是反应的副产物是二醇，二醇可以是所述反应的溶剂介质，从而避免了其它残留溶剂的存在，并避免了醇例如乙醇作为副产物的存在，根据WO2007/0001385的实施例7和9，醇例如乙醇看起来促进了固体形式H2-2。
所述酰胺化反应可以使用无水氨，氨水，铵盐例如氢氧化铵、氯化铵、溴化铵、硫酸铵等进行。
本发明方法的酰胺化反应可以在水性介质和/或在有机溶剂中进行。
所述有机溶剂可以是醇、二醇、醚、酯、腈、烃、氯代烃等和其混合物。
所述有机溶剂可以是醇，例如甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等。
所述有机溶剂可以是醚例如叔丁基甲醚，酯例如乙酸乙酯或乙酸异丙酯，腈例如乙腈、烃例如甲苯或二甲苯、氯代烃例如氯仿、二氯甲烷、氯苯等。
二醇溶剂是优选的，因为它们提供固体形式N-1的阿哌沙班，并且因为使用式HO-R-OH的二醇溶剂，其中R与式(II)的化合物中的R相同，反应的副产物是与所述溶剂相同的化合物，从而避免监测到另外的残留溶剂。
所述有机溶剂可以是选自以下的二醇：乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、二甘醇、PEG200、聚丙二醇、甘油。
根据本发明方法的优选实施方案，优选的溶剂是乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、二甘醇。
在本发明方法中使用的式HO-R-OH的二醇溶剂可以具有与式(II)的化合物的R基团有相同含义的R基团，或者可选地，R可以具有不同的含义。根据所述实施方案，式HO-R-OH的二醇溶剂具有与式(II)的化合物的R基团有相同含义的R基团。
在式(II)的化合物中，所述R基团选自直链或支链C2-C6烷基、-CH2-CH(OH)-CH2-、-(R1O)nR1-，其中R1是直链或支链C2-C4烷基，n是1～6的整数。
所述直链或支链C2-C6烷基是选自以下的基团：-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2(CH3)-CH2-、-(CH2)4-、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2、-CH2CH2CH(CH3)-、-(CH2)5-、-(CH2)6-等。
其中n是1～6的整数并且其中R1是直链或支链C2-C4烷基的基团-(R1O)nR1是选自以下的基团：-(CH2CH2O)nCH2CH2-、-(CH2CH2CH2O)nCH2CH2CH2-、-(CH(CH3)CH2O)nCH(CH3)CH2-、-(CH2CH(CH3)O)nCH2CH(CH3)-、-(CH2CH2CH2CH2O)nCH2CH2CH2CH2-等。
根据一种优选的实施方案，所述基团-(R1O)nR1-是(CH2CH2O)nCH2CH2-。
根据本发明的一种优选的实施方案，式(II)的化合物是一种分离的化合物，即，一种从用于制备所述化合物的反应混合物中分离出来的化合物。因此，所述式(II)的化合物通常是固体形式或者分离的油的形式。
根据本发明的一种优选的实施方案，式(II)的化合物是一种具有高于80％的纯度的化合物，所述纯度以HPLC A/A％测量，例如通过使用实施例13的分析方法测量。
本发明的方法是在60℃和140℃之间、优选在80℃和120℃之间、更优选在80℃和90℃之间的温度下进行的。
当酰胺化反应在80℃和90℃之间进行时，反应在大约3小时内完成(即转化高于99％)。
根据一种优选的实施方案，本发明的方法进一步包括利用式(III)的化合物的酯交换反应制备式(II)的化合物的步骤：
其中R选自直链或支链C2-C6烷基、-CH2-CH(OH)-CH2-和-(R1O)nR1-，其中R1是直链或支链C2-C4烷基，并且n是1～6的整数，
其中，R2是直链或支链C1-C6烷基。
因此，通过式(III)的化合物与二醇、与聚二醇或与甘油反应来进行所述式(III)的化合物的酯交换以提供式(II)的化合物。
所述酯交换反应通过式OH-R-OH的二醇的反应来进行，其中R选自直链或支链C2-C6烷基、-CH2-CH(OH)-CH2-和-(R1O)nR1-，其中R1是直链或支链C2-C4烷基并且n是1～6的整数。
优选的二醇是乙二醇、1,2-丙二醇，1,3-丙二醇和二甘醇。
优选的聚二醇是聚乙二醇(200)(简称PEG200)和丙二醇200(PPG200)。PEG具有以下化学结构HO-(CH2CH2O)nCH2CH2-OH。
所述酯交换反应可在7.5～10.0之间的pH下、优选在8.0～9.5之间的pH下进行。
所述酯交换反应可以在碱存在下进行，所述碱优选为无机碱，例如优选NaHCO3或KH2PO4，即磷酸氢二钾。
所述酯交换反应优选在磷酸氢二钾存在下进行，因为它提供更高和更快的转化。
所述酯交换反应在60℃和120℃之间、优选在70℃和80℃之间的温度下、更优选在大约75℃下进行。
所述酯交换反应使用过量的反应物二醇作为反应溶剂来进行。
根据一种可选的合成途径，式(II)的化合物可以通过式(IV)的化合物的内环合来制备：
其中R选自直链或支链C2-C6烷基，-CH2-CH(OH)-CH2-和-(R1O)nR1-，其中R1是直链或支链C2-C4烷基，并且n是1～6的整数。
式(IV)的化合物可以通过修改用于制备相应的酯的已知的现有技术方法来制备，以制备所述阿哌沙班二醇酯。使用该合成方法，可以制备式(II)的化合物，以避免之前式(III)的阿哌沙班酯的制备。参见以下的反应方案。
可以在碱例如t-BuOK存在下进行式(IV)的化合物的环化，以提供式(II)的化合物。
此外，式(II)的化合物可以根据其他合成方法制备，然而，所述其他合成方法不一定涉及式(III)的化合物或者酯中间体的制备。
在下面的反应方案中描述了通过腙起始原料的二醇酯的反应直接合成式(II)的化合物的实施例。
其中R选自直链或支链C2-C6烷基，-CH2-CH(OH)-CH2-和-(R1O)nR1-，其中R1是直链或支链C2-C4烷基，并且n是1～6的整数。
根据优选的实施方案，在本发明的用于制备阿哌沙班的方法中和/或在从式(III)的化合物开始制备式(II)的化合物的进一步的步骤中，式(II)的化合物中的R基团选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和CH2CH2OCH2CH2-，或者根据另外的实施方案，所述R基团选自-CH2CH2-、-(CH2)3-和CH2CH2OCH2CH2-。
所述式(II)的化合物可以方便地通过其中R例如为乙基的式(III)的化合物分别与乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇和二甘醇或者根据另外的实施方案，分别与乙二醇、1,3-丙二醇和二甘醇的酯交换而制备。
通过与1,2-丙二醇的酯交换从式(III)的化合物制备的式(II)的化合物是具有1:2比例的两种同分异构体的混合物，其中R是-CH(CH3)CH2，称为同分异构体A，或者R是-CH2CH(CH3)-，称为同分异构体B，即，所述两种同分异构体分别具有下列结构：
已经观察到，根据实施例13中所述的分析方法，同分异构体A(R＝-CH(CH3)CH2-的化合物(II))具有RRT＝1,18，同时根据同样的分析方法，同分异构体B(R＝-CH2CH(CH3)-的化合物(II))具有RRT＝1,16。
优选其中R是-CH2CH(CH3)-的式(II)的化合物，即同分异构体B，因为这是通过式(III)的化合物与1,2-丙二醇的酯交换反应制备的主要的同分异构体化合物。
相反，通过与乙二醇的酯交换从式(III)的化合物制备的式(II)的化合物只具有下面的一种结构：
根据本发明方法的一种优选的实施方案，所述式(II)的化合物的R取代基选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
根据本发明方法的另一种优选的实施方案，所述式(II)的化合物的R取代基选自-CH2CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
因此，本发明的目的还在于式(II)的化合物：
其中R选自直链或支链C2-C6烷基，其中R1是直链或支链C2-C4烷基并且n是1～6的整数的-(R1O)nR1-，和基团-CH2-CH(OH)-CH2-。
根据本发明式(II)化合物的一种优选的实施方案，R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
根据本发明式(II)化合物的另一种优选的实施方案，R选自-CH2CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
因此，本发明式(II)的化合物可以用于式(I)的阿哌沙班和其溶剂合物或水合物的制备。
根据本发明的一种实施方案，用于制备式(I)的阿哌沙班和其溶剂合物或水合物的方法包括以下步骤：
a)式(III)的化合物的酯交换反应：
其中，R2是直链或支链C1-C6烷基，
以提供式(II)的化合物：
其中R选自直链或支链C2-C6烷基，-CH2-CH(OH)-CH2-和-(R1O)nR1-，其中R1是直链或支链C2-C4烷基，并且n是1～6的整数，
b)分离式(II)的化合物，
c)式(II)的化合物的酰胺化反应：
以提供式(I)的阿哌沙班。
根据本发明方法的上述实施方案，式(II)的化合物是一种对于阿哌沙班的制备有用的中间体，其允许在通过阿哌沙班酯的直接酰胺化反应进行的已知的阿哌沙班合成中插入一个另外的步骤。
实际上，从式(III)的阿哌沙班酯开始制备和分离式(II)的化合物，能够提高所述式(II)的中间体的纯度，由此提高最终阿哌沙班的纯度。
换句话说，与已知的将式(III)的阿哌沙班酯直接转化成阿哌沙班的方法相比，根据所述优选的实施方案进行本发明的方法，其中式(II)的中间体被分离，所述方法允许提高最终产物阿哌沙班的纯度。
步骤(b)中式(II)的化合物的分离可以通过已知的有机合成技术(包括沉淀和过滤或离心)或可选地通过相分离来进行。
在步骤(b)结束时，所述式(II)的化合物可以任选地在烘箱内或在干燥过滤器内进行干燥。
此外，分离式(II)的化合物可用于满足监管机构的要求，所述监管机构要求所述方法由至少三个合成步骤组成。
根据刚才提到的本发明方法的优选实施方案，一种优选的方法是其中式(III)的化合物中的R2是乙基。
根据刚才提到的本发明方法的优选实施方案，一种优选的方法是其中式(II)的化合物中的R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
根据刚才提到的本发明方法的优选实施方案，另一种优选的方法是其中式(II)的化合物中的R选自-CH2CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
根据刚才提到的本发明方法的优选实施方案，一种优选的方法是其中式(III)的化合物中的R2是乙基并且其中式(II)的化合物中的R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
根据刚才提到的本发明方法的优选实施方案，另一种优选的方法是其中式(III)的化合物中的R2是乙基并且其中式(II)的化合物中的R选自-CH2CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
进行刚才提到的本发明优选实施方案的步骤(a)和(c)的条件与上面已经描述的用于本发明方法(包括其优选的实施方案)的条件是相同的。
正如利用化学合成获得的任何化合物，阿哌沙班和其溶剂合物或水合物可能包含少量被称为杂质的外来化合物。这些杂质可能是原材料、合成中间体、反应副产物和降解产物等。
所述阿哌沙班的杂质正如任何其他的药物活性成分或者相关药物的杂质(被称为“药物杂质”)可能影响药物的效力和安全性两者，在极端情况下，所述杂质甚至可能对患者是有害的。通过基于后面的化学反应的生产方法生产的活性成分如阿哌沙班的纯度对于商业化来说是一种关键因素。美国食品药品监督管理局(US Food and DrugAdministration)(FDA)和欧洲药品管理局(European Medicinal Agency)(EMA)以及相关的药典要求杂质保持在给定的限值之下。
化学反应的产物很少是一种具有足以满足监管标准的纯度的单一化合物。由于反应中使用的试剂的二次反应产生的副产物也可以存在于分离的产物中。在活性成分例如阿哌沙班的生产方法的某些步骤中，通常利用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)或者薄层色谱法(TLC)分析纯度，用于明确它是否适合后来的治疗并最终在药物产品中使用。
通常，通过光谱学方法鉴定杂质，因此，色谱峰位置例如色谱图的色谱峰位置或者TCL板上的点与所述杂质相关。
一旦将峰位置与特定的杂质相关后，可以针对色谱图中所述杂质的相对峰位置在样品中鉴定所述杂质，其中以在色谱柱中注入样品与洗脱杂质通过检测器之间的分钟数测量色谱图中的峰位置。色谱图中的峰位置被称为保留时间，保留时间之间的比率被称为相对保留时间。
制药领域的技术人员知晓相对纯的化合物可以被用作参比标准品。参比标准品和参比标记物相似，区别在于后者不仅可以用于检测杂质，也可以用于定量活性成分样品中存在的杂质的量这一事实。
本领域技术人员知道，通过了解过程杂质的化学结构、合成方法并例如用DOE确定影响最终产物中杂质的量的参数，显著改进了所述过程杂质的管控。阿哌沙班的杂质，包括没有完全反应的中间体，原材料的杂质、反应副产物、降解产物以及其他产物，可以影响包含阿哌沙班的药物形式的品质和效力。因此，需要一种确定阿哌沙班样品中杂质水平的方法和用于移除杂质或者限制其含量或者防止其形成的方法。
作为本发明的另一方面，在开发用于制备阿哌沙班的方法期间，已经发现式(II)的化合物倾向于残留在产物阿哌沙班中，换句话说，式(II)的化合物既是根据本发明方法合成阿哌沙班的起始原料或者中间体，又是阿哌沙班的一种杂质。
为了减少活性成分中杂质的量，必须使用适当的分析方法检测其存在，只有在能够方便地鉴定、定量杂质的情况下，才能够在之后提供一种能够防止所述杂质形成的合成方法和/或提供一种用于去除所述杂质的方法。然而，这实质上要求提供这种杂质的参比标准品或参比标记物。为此目的，可以利用上述方法方便地制备式(II)的化合物。
因此，本发明式(II)的化合物可以用作参比标记物或者参比标准品，用于鉴定和/或定量在阿哌沙班和其溶剂合物或水合物中的所述式(II)的化合物。
式(II)的化合物实际上可以根据下面的分析方法用于鉴定和/或定量在阿哌沙班和其溶剂合物或水合物中的所述式(II)的化合物。
一种用于检测或鉴定在阿哌沙班或其溶剂合物或水合物中的式(II)的化合物的方法，包括：
a)向阿哌沙班样品或其溶剂合物或水合物中加入已知量的式(II)的化合物，
b)进行步骤a)的阿哌沙班样品或其溶剂合物或水合物的HPLC分析，
c)检测式(I)的化合物的HPLC峰；
或，
a1)利用HPLC分析式(II)的化合物，
b1)利用HPLC分析阿哌沙班样品或其溶剂合物或水合物，
c1)通过比较保留时间或相对保留时间，检测式(II)的化合物的HPLC峰。
实质上使用以上方法，其允许在阿哌沙班样品或其溶剂合物或水合物的色谱图中鉴定关于式(II)的杂质化合物的峰。该分析可能是HPLC类型的。
除了鉴定在阿哌沙班或溶剂合物或水合物中的杂质峰，一种用于定量在阿哌沙班或其溶剂合物或水合物中的式(II)的化合物的方法，包括：
i)利用HPLC在具有未知量的式(II)的化合物的阿哌沙班或其溶剂合物或水合物中测量与式(II)的化合物相对应的峰面积；
ii)利用HPLC测量与含有已知量的式(II)的化合物的参比标准品相对应的峰面积；
iii)比较步骤a)中测量的面积与步骤ii)中测量的面积，确定阿哌沙班或其溶剂合物或水合物中式(II)的化合物的量。
由此可见，式(II)的化合物可以用作参比标记物或者参比标准品，分别用于鉴定和/或定量在阿哌沙班或其溶剂合物或水合物中的式(II)的化合物。
特别地，已经发现，根据本发明的方法生产并且用实施例13中所述的分析方法测得具有RRT＝1.16的阿哌沙班的杂质是下列结构的同分异构体B，而具有RRT＝1.18的杂质是下列结构的同分异构体A：
作为与通过本发明方法生产的阿哌沙班的固体形式有关的一个方面，进行一个研究，所述研究的目的是制备阿哌沙班固体形式N-1。
通过重复WO2007/0001385的实施例6的实验，但不加入形式N-1的晶种，已获得、制备和表征了式(V)的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物：
式(V)的具有化学计量比(2:1)的阿哌沙班1,2-丙二醇溶剂合物是白色固体。
之后，进行一个研究，所述研究的目的是找到一种从式(V)的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物获得N-1形式的方法。
使用阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物(缩写为APX·PG)作为起始原料的筛选，在所有情况下都使用形式N-1作为晶种进行。使用ICH指南第3类溶剂(除了甲醇，ICH指南第2类允许3000ppm的残留溶剂)进行实验。APX·PG在常见工业溶剂中的低溶解度限制了结晶的使用。
在表1中收集了从APX·PG提供阿哌沙班形式N-1的成功的实验。
表1：从APX·PG制备阿哌沙班形式N-1的方法：
浆化看来是制备形式N-1的最好程序，因为在结晶中需要大量的溶剂(36-60体积)。
由于其更低的沸点和良好的工业接受性，选择乙醇和异丙醇作为溶剂来将浆化实验按比例放大到1克。通过XRPD监测转化：
-在室温下，在乙醇中所述转化在1小时后完成。
-在异丙醇中，所述转化慢得多：在50℃下5小时后，转化没有完成，但是在一夜之后完成。
通过1H-NMR在阿哌沙班形式N-1中没有检测到丙二醇。遗憾的是，在两个实验中通过1H-NMR检测到残留溶剂(大约0.8重量％的乙醇和0.7重量％的异丙醇)。NMR分析表明，当使用乙酸乙酯时也有0.7重量％的残留溶剂。
通过结晶和浆化在乙醇中获得的形式N-1的1H-NMR分析表明，在结晶情况下残留溶剂的量更低(0.4重量％，而不是0.8重量％)。制备方法看起来对最终残留溶剂的量具有某些影响(或许是由于聚集体的不同粒度或者种类)。
通常，根据本发明方法制备的阿哌沙班形式N-1具有0.05％～0.1％之间的水含量。
实验部分
起始原料阿哌沙班乙酯可根据WO2007/001385的实施例5制备。
实施例1：从阿哌沙班乙酯制备式(V)的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物。
在通过氮气惰化的高压釜中装载阿哌沙班乙酯(15g，1.0当量)和丙二醇(1,2-丙二醇，135毫升)，并且用氨在p＝4巴和T＝80/85℃下加压该容器6小时。然后将混合物转移到圆底烧瓶中，冷却到45/50℃并且用水(85毫升)稀释。在T＝45/50℃下搅拌额外2小时后，将悬浮液冷却到20/25℃持续10小时并过滤。将湿滤饼用水(2×30毫升)洗涤。将固体在T＝75℃下在真空下干燥8小时以提供式(V)的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物(13.3g，0.86当量)。m.p.195℃。1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)，δ：7.49(d，J＝9Hz，2H)、7.35(d，J＝8Hz，2H)、7.28(d，J＝8Hz，2H)、6.95(d，J＝9Hz，2H)、6.91(s，1H)、5.91(s，1H)、4.13(t，J＝8Hz，2H)、3.84(bs，3H+0.5H CH丙二醇)、3.62(bm，2H+0.5H OH丙二醇)、3.39(bm，J＝8Hz，2H+0.5H OH丙二醇)，2,57(bs，2H+1H CH2丙二醇)、1.95(bs，4H)，1.14(d，J＝6.4Hz，1.5H CH3丙二醇)。13C NMR和DEPT 135 NMR(100MHz，CDCl3，ppm)，δ：170.3(C)、163.8(C)、159.9(C)、157.4(C)、141.4(C)、140.7(C)、140.0(C)、133.4(C)、132.5(C)、126.8(CH)、126.2(CH)、126.5(CH)、125.9(CH)、113.8(CH)、68.3(CH)、68.1(CH2)、55.6(CH3)、51.6(CH2)、51.2(CH2)、32.8(CH2)、23.5(CH2)、21.4(CH2)、21.3(CH2)、18.8(CH3)。ESI-MS m/z＝460([M+H]+)。IR(ATR，cm-1)：3447、3145、2940、2860、1687、1631、1543、1512、1465、1441、1401、1380、1350、1326、1297、1243、1170、1144、1111、1027、1016、982、945、831、812、761、705。X-RPD(2θ°)：6.6°、7.6°、8.1°、9.9°、11.7°、12.7°、13.7°、14.5°、15.1°、15.6°、16.3°、16.9°、17.2°、17.9°、18.2°、19.5°、20.0°、20.5°、20.8°、21.4°、22.8°、23.8°、24.8°、25.5°、29.0°、31.2°、33.0°。
对WO2007/001385的实施例6进行多次修改而不加入阿哌沙班形式N-1的晶种，始终提供式(V)的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物。
这与专利公布WO2013/119328的教导一致，在WO2013/119328中，在没有用形式N-1接种的情况下获得阿哌沙班形式I，即阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物。
实施例2：从阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物制备阿哌沙班形式N-1——不用形式N-1接种。
在圆底烧瓶中装载阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物(10克，1.0当量)和乙醇(400毫升)，将该混合物加热到回流4小时。将悬浮液缓慢冷却到20/25℃，在此温度下搅拌8小时，然后用乙醇(2×20毫升)过滤洗涤。将湿固体在75℃下在真空下干燥8小时，提供8.1克的阿哌沙班N-1形式(0.87当量)。mp 237℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：7.74(s，1H)、7.53(d，J＝12Hz，2H)、7.47(s，1H)、7.37(d，J＝8Hz，2H)、7.30(d，J＝12Hz，2H)、7.02(d，J＝8Hz，2H)、4.07(t，J＝8Hz，2H)、3.82(s，3H)，3.61(t，J＝4Hz，2H)、3.23(t，J＝8Hz，2H)、2.41(t，J＝4Hz，2H)、1.87(m，4H)。13C-NMR和DEPT 135NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.3(C)、163.7(C)、159.6(C)、157.1(C)、142.0(C)、141.9(C)、140.3(C)、133.5(C)、133.1(C)、127.3(C)、126.8(CH)、126.5(CH)、125.7(CH)、113.9(CH)、56.0(CH3)、51.3(CH2)、33.1(CH2)、23.5(CH2)、21.5(CH2)、21.4(CH2)。ESI-MS m/z＝460([M+H]+)。
实施例3：阿哌沙班形式N-1的表征。
通过几种技术表征了通过在乙醇中结晶获得的阿哌沙班形式N-1。
FT-IR
利用配备有光束分离器KBr系统、35mW He-Ne激光器作为激发光源和DTGS KBr检测器的Thermo Nicolet Nexus 870 FT-IR记录FTIR光谱。所述光谱在4cm-1分辨率下在32次扫描中获得。
IR(KBr)：v＝3483(m)、3311(m)、2909(m)、2866(W)、1683(s)、1630(s)、1595(s)、1519(m)、1295(m)、1256(m)、975(m)、848(s)、813(m)、668(m)、467(m)cm-1。
DSC
利用Mettler DSC822e记录DSC分析。将1.6770毫克的样品称取到具有针孔盖的40μL铝坩埚中，并在氮气(50毫升/分钟)下，以10℃/分钟从30℃加热到300℃。
形式N-1的特征是通过DSC分析(10℃/分钟)测量到的对应于在235.68℃(熔化焓-106.66J/g)开始的熔点的吸热尖峰。
TGA
在热重分析仪Mettler TGA/SDTA851e中记录热重分析。将4.2206毫克的样品称取到具有针孔盖的70μL氧化铝坩埚中，并在氮气(50毫升/分钟)下，以10℃/分钟从30℃加热到400℃。
形式N1的热重分析显示在熔点之前(在130℃和230℃之间)0.23％的重量损失。这个重量损失可能来自于乙醇痕量的消除。
X-RPD
以布拉格-布伦塔诺(Bragg-Brentano)几何学，使用具有Cu Kα辐射的PANalytical X'Pert衍射仪进行XRPD分析。该系统配备有单维的实时的多条检测器。在每分钟17.6°的扫描速率下从3°到40°(2θ)记录衍射图。选择的峰的列表(只显示具有大于或等于1％的相对强度的峰)：
在专利US7396932B2中，形式N-1通过SCXR和13C SSNMR描述。使用SCXR数据(晶胞，对称性和原子位置)，利用Mercury程序模拟XRPD。将该模拟的XRPD与实施例2中获得的实验性XRPD进行比较，证实了阿哌沙班N-1形式的形成。
卡尔费歇尔(Karl Fischer)
用Metrohm 787 KF Trinito记录卡尔费歇尔分析。将产品溶解在甲醇中。使用以下反应物分析两个样品：Hydranal-复合物5(Hydranal-Composite 5)(Riedel de Ref.34805)，Hydranal快速甲醇(Hydranal Methanol Rapid)(Riedel de Ref.37817)和Hydranal水标准1.0(Hydranal Water Standard 1.0)(Riedel de Ref.34828，用于计算该因子)。
在实施例2中制备的形式N-1的含水量是0.9％。
实施例4：从阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物在更大规模上制备阿哌沙班形式N-1——用形式N-1接种。
向配备有温度计和机械搅拌器的三颈圆底烧瓶中加入如在实施例1中制备的式(V)的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物(85.1克；171毫摩尔)，和乙醇/水(2:1)的混合物(850毫升，10体积)。将得到的悬浮液用形式N-1(如在实施例2中制备的)接种，并将它在50℃下加热。将该混合物在50℃下保持2.5小时，然后将它冷却到室温。将该浆料在室温下搅拌2～3小时。将固体用烧结漏斗(孔隙率2-非常好的过滤)过滤，用乙醇:水(2:1)(170毫升，2体积)、水(170毫升，2体积)洗涤，并在50℃下在真空下干燥过夜。得到作为灰白色粉末的阿哌沙班形式N-1(65.4克，83％收率)。1H-NMR分析显示该产品含有0.13％的残留乙醇。K.F.0.1％。通过HPLC测定化学纯度：99.4％。起始的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物具有98.3％的纯度。
重复上述程序，从具有95.2％纯度的阿哌沙班1,2-丙二醇半溶剂合物起始，制备的阿哌沙班形式N-1具有99.5％的纯度。
实施例5：合成式(II)的化合物，其中R是-CH2CH2-。
将阿哌沙班乙酯(10.0克，1.0当量)、磷酸氢二钾(K2HPO4，17.8克，5.0当量)和乙二醇(1,2-乙二醇，70毫升)的混合物加热到T＝75℃10小时，然后冷却至室温。装入水(70毫升)和二氯甲烷(70毫升)，将由此产生的两相溶液在室温下搅拌10分钟。一旦将相分开后，将有机层用分子筛处理以移除残留的水，然后在减小的压力下浓缩成残渣。使用由此产生的固体而无需进一步纯化(9.0克，0.87当量)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：7.52(d，J＝12Hz，2H)、7.37(d，J＝8Hz，2H)、7.30(d，J＝8Hz，2H)、7.03(d，J＝12Hz，2H)、4.98(t，J＝4Hz，1H)，4.35(t，J＝4Hz，2H)、4.09(t，J＝4Hz，2H)、3.82(s，3H)，3.74(dd，J1＝4Hz，J2＝4Hz，2H)、3.60(t，J＝4Hz，2H)、3.24(t，J＝4Hz，2H)、2.40(t，J＝4Hz，2H)、1.85(m，4H)。13C-NMR和DEPT 135NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.4(C)、162.0(C)、159.8(C)、156.9(C)、141.9(C)、140.2(C)、139.0(C)、133.5(C)、132.9(C)、127.4(CH)、127.2(CH)、126.8(CH)、126.5(CH)、114.0(CH)、66.8(CH2)、59.5(CH2)、56.0(CH3)、51.3(CH2)、51.2(CH2)、33.1(CH2)、23.5(CH2)、21.6(CH2)、21.4(CH2)。ESI-MS m/z＝505([M+H]+)。
实施例6：合成式(II)的化合物，其中R是-CH(CH3)2CH2-和-CH2CH(CH3)-。
将阿哌沙班乙酯(30.0克，1.0当量)、磷酸氢二钾(K2HPO4，53.4克，5.0当量)和丙二醇(1,2-丙二醇，210毫升)的混合物加热到T＝75℃10小时，然后冷却至室温。装入水(210毫升)和二氯甲烷(210毫升)，将由此产生的两相溶液在室温下搅拌10分钟。一将相分开后，将有机层用分子筛处理以移除残留的水，然后在减小的压力下浓缩成残渣。由此产生的固体是两种同分异构体(在1H-NMR表征中分别称为同分异构体A和同分异构体B)的1:2混合物，使用该固体而无需进一步纯化(25.2g，0.79当量)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：7.52(m，3H(2H同分异构体A和2H同分异构体B))、7.37(m，3H(2H同分异构体A和2H同分异构体B))、7.30(m，3H(2H同分异构体A和2H同分异构体B))、7.03(m，3H(2H同分异构体A和2H同分异构体B))、5.12(m，0.5H(1H同分异构体A)、4.96(m，1.5H(1H同分异构体A和1H同分异构体B))、4.20(m，2H(2H同分异构体B))、4.11(m，3H(2H同分异构体A和2H同分异构体B))、3.98(m，1H(1H同分异构体B))、3.83(m，4.5H(3H同分异构体A和3H同分异构体B))、3.61(m，3H(2H同分异构体A和2H同分异构体B)),3.26(m，3H(2H同分异构体A和2H同分异构体B)),1.88(m，6H(4H同分异构体A和4H同分异构体B)),1.29(d,J＝4Hz,1.5H(3H同分异构体A)),1.17(d,J＝4Hz,3H(3H同分异构体B))。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.4、161.8、161.6、159.8、156.9、141.9、140.2、139.3、139.0、133.5、133.0、127.3、127.2、126.8、126.5、114.0、72.7、69.9、64.5、64.1、56.0、51.3、51.2、33.1、23.5、21.7、21.4、20.5、16.9(观察到两种同分异构体的一些信号重叠)。ESI-MS m/z＝519([M+H]+)。
IR(ATR，cm-1)：3329、2934、2839、1708、1673、1627、1592、1511、1438、1403、1372、1325、1301、1252、1172、1144、1054、1021、988、949、832、788、699。X-RPD(2θ°)：6.7°、8.2°、8.5°、8.9°、10.5°、11.1°、11.6°、12.1°、13.0°、15.3°、15.9°、16.8°、17.2°、17.9°、19.3°、20.1°、20.4°、21.3°、22.8°、23.2°、23.8°、24.5°、25.4°、27.9°、30.3°。
实施例7：合成式(II)的化合物，其中R是-CH2CH2OCH2CH2-。
将阿哌沙班乙酯(10.0克，1.0当量)、磷酸氢二钾(K2HPO4，17.8克，5.0当量)和二甘醇(70毫升)的混合物加热到T＝75℃10小时，然后冷却至室温。装入水(70毫升)和二氯甲烷(70毫升)，将由此产生的两相溶液在室温下搅拌10分钟。一旦将相分开后，将有机层用分子筛处理以移除残留的水，然后在减小的压力下浓缩成残渣。使用由此产生的固体而无需进一步纯化(10.5克，0.93当量)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：7.53(d，J＝8Hz，2H)、7.37(d，J＝8Hz，2H)、7.30(d，J＝8Hz，2H)、7.03(d，J＝8Hz，2H)、4.65(t，J＝4Hz，1H)、4.45(m，2H)、4.10(d，J＝4Hz，2H)、3.83(s，3H)、3.77(m，2H)、3.53(m，4H)、7.53(d，J＝8Hz，2H)、3.24(d，J＝8Hz，2H)、2.41(m，2H)、1.86(m，4H)。13C-NMR和DEPT 135NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.4(C)、161.8(C)、159.8(C)、156.9(C)、141.9(C)、140.2(C)、138.8(C)、133.5(C)、132.9(C)、127.5(C)、127.2(CH)、126.8(CH)、126.5(CH)、114.0(CH)、72.8(CH2)、68.7(CH2)、64.3(CH2)、60.7(CH2)、56.0(CH3)、51.3(CH2)、51.2(CH2)、33.1(CH2)、23.5(CH2)、21.6(CH2)、21.4(CH2)。ESI-MS m/z＝549([M+H]+)。KF＝0.06％。
实施例8：从式(II)的化合物合成阿哌沙班形式N-1，其中R是-CH2CH2-。
在通过氮气惰化的高压釜中装载实施例5的化合物(式(II)的化合物，其中R是-CH2CH2-，8.0克，1.0当量)和丙二醇(1,2-丙二醇，80毫升)，将该容器在p＝4巴和T＝80/85℃下用氨加压6小时。然后将混合物转移到圆底烧瓶中，加热以溶解并且用水(16毫升)稀释。在T＝95/100℃下搅拌额外2小时后，加入更多的水(48毫升)，并将溶液用阿哌沙班N-1形式(如实施例2或4中制备的)接种。将悬浮液在T＝95/100℃下搅拌2小时，冷却至室温，并用乙醇(16毫升)稀释。在T＝20/25℃下搅拌3小时后，过滤浆料，并用水(2×8毫升)洗涤湿滤饼。将固体在T＝65℃下在真空下干燥8小时，提供阿哌沙班N-1形式(6.7克，0.92当量)。m.p.237℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm),δ：7.74(s，1H)、7.53(d，J＝12Hz，2H)、7.47(s，1H)、7.37(d，J＝8Hz，2H)、7.30(d，J＝12Hz，2H)、7.02(d，J＝8Hz，2H)、4.07(t，J＝8Hz，2H)、3.82(s，3H)，3.61(t，J＝4Hz，2H)、3.23(t，J＝8Hz，2H)、2.41(t，J＝4Hz，2H)、1.87(m，4H)。13C-NMR和DEPT 135NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.3(C)、163.7(C)、159.6(C)、157.1(C)、142.0(C)、141.9(C)、140.3(C)、133.5(C)、133.1(C)、127.3(C)、126.8(CH)、126.5(CH)、125.7(CH)、113.9(CH)、56.0(CH3)、51.3(CH2)、33.1(CH2)、23.5(CH2)、21.5(CH2)、21.4(CH2)。ESI-MS m/z＝460([M+H]+)。KF＝0.08％。
实施例9：从式(II)的化合物合成阿哌沙班形式N-1，其中R是-CH(CH3)2CH2-和-CH2CH(CH3)-。
在通过氮气惰化的高压釜中装载实施例6的化合物(式(II)的化合物，其中R是-CH(CH3)2CH2-和-CH2CH(CH3)-，11克，1.0当量)和丙二醇(1,2-丙二醇，100毫升)，将该容器在p＝4巴和T＝80/85℃下用氨加压6小时。然后将混合物转移到圆底烧瓶中，加热以溶解并用水(20毫升)稀释。在T＝95/100℃下搅拌额外2小时后，加入更多的水(60毫升)，并将溶液用阿哌沙班N-1形式接种。将悬浮液在T＝95/100℃下搅拌2小时，冷却至室温，并用乙醇(20毫升)稀释。在T＝20/25℃下搅拌3小时后，过滤浆料，并用水(2×10毫升)洗涤湿滤饼。将固体在T＝65℃下在真空下干燥8小时，提供阿哌沙班N-1形式(8.6克，0.88当量)。m.p.237℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm),δ：7.74(s，1H)、7.53(d，J＝12Hz，2H)、7.47(s，1H)、7.37(d，J＝8Hz，2H)、7.30(d，J＝12Hz，2H)、7.02(d，J＝8Hz，2H)、4.07(t，J＝8Hz，2H)、3.82(s，3H)，3.61(t，J＝4Hz，2H)、3.23(t，J＝8Hz，2H)、2.41(t，J＝4Hz，2H)、1.87(m，4H)。13C-NMR和DEPT135NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.3(C)、163.7(C)、159.6(C)、157.1(C)、142.0(C)、141.9(C)、140.3(C)、133.5(C)、133.1(C)、127.3(C)、126.8(CH)、126.5(CH)、125.7(CH)、113.9(CH)、56.0(CH3)、51.3(CH2)、33.1(CH2)、23.5(CH2)、21.5(CH2)、21.4(CH2)。ESI-MS m/z＝460([M+H]+)。KF＝0.05％。
实施例10：从式(II)的化合物合成阿哌沙班形式N-1，其中R是-CH2CH2OCH2CH2-。
在通过氮气惰化的高压釜中装载实施例7的化合物(式(II)的化合物，其中R是-CH2CH2OCH2CH2-，9.0克，1.0当量)和丙二醇(1,2-丙二醇，105毫升)，将该容器在p＝4巴和T＝80/85℃下用氨加压6小时。然后将混合物转移到圆底烧瓶中，加热以溶解并且用水(20毫升)稀释。在T＝95/100℃下搅拌额外2小时后，加入更多的水(60毫升)，并将溶液用阿哌沙班N-1形式接种。将悬浮液在T＝95/100℃下搅拌2小时，冷却至室温，并用乙醇(20毫升)稀释。在T＝20/25℃下搅拌3小时后，过滤浆料，并用水(2×10毫升)洗涤湿滤饼。将固体在T＝65℃下在真空下干燥8小时，提供阿哌沙班N-1形式(6.5克，0.86当量)。mp 237℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm),δ：7.74(s，1H)、7.53(d，J＝12Hz，2H)、7.47(s，1H)、7.37(d，J＝8Hz，2H)、7.30(d，J＝12Hz，2H)、7.02(d，J＝8Hz，2H)、4.07(t，J＝8Hz，2H)、3.82(s，3H)，3.61(t，J＝4Hz，2H)、3.23(t，J＝8Hz，2H)、2.41(t，J＝4Hz，2H)、1.87(m，4H)。13C-NMR和DEPT135NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.3(C)、163.7(C)、159.6(C)、157.1(C)、142.0(C)、141.9(C)、140.3(C)、133.5(C)、133.1(C)、127.3(C)、126.8(CH)、126.5(CH)、125.7(CH)、113.9(CH)、56.0(CH3)、51.3(CH2)、33.1(CH2)、23.5(CH2)、21.5(CH2)、21.4(CH2)。ESI-MS m/z＝460([M+H]+)。KF＝0.06％。
实施例11：从式(III)的化合物合成阿哌沙班形式N-1，其中R是-CH2CH3(WO2007/0001385的实施例6)-比较例
在通过氮气惰化的高压釜中装载阿哌沙班乙酯(65克，1.0当量)和丙二醇(1,2-丙二醇，455毫升)，将该容器在p＝4巴和T＝80/85℃下用氨加压6小时。然后将混合物转移到圆底烧瓶中用丙二醇(65毫升)洗涤高压釜，加热以溶解并用水(130毫升)稀释。在T＝95/100℃下搅拌额外2小时后，加入更多的水(390毫升)，并将溶液用阿哌沙班N-1形式接种。将悬浮液在T＝95/100℃下搅拌2小时，冷却至室温，并用乙醇(130毫升)稀释。在T＝20/25℃下搅拌3小时后，过滤浆料，并用水(2×130毫升)洗涤湿滤饼。将固体在T＝65℃下在真空下干燥8小时，提供阿哌沙班N-1形式(56.0克，0.917当量)。m.p.237℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm),δ：7.74(s，1H)、7.53(d，J＝12Hz，2H)、7.47(s，1H)、7.37(d，J＝8Hz，2H)、7.30(d，J＝12Hz，2H)、7.02(d，J＝8Hz，2H)、4.07(t，J＝8Hz，2H)、3.82(s，3H)，3.61(t，J＝4Hz，2H)、3.23(t，J＝8Hz，2H)、2.41(t，J＝4Hz，2H)、1.87(m，4H)。13C-NMR和DEPT 135NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)，δ：169.3(C)、163.7(C)、159.6(C)、157.1(C)、142.0(C)、141.9(C)、140.3(C)、133.5(C)、133.1(C)、127.3(C)、126.8(CH)、126.5(CH)、125.7(CH)、113.9(CH)、56.0(CH3)、51.3(CH2)、33.1(CH2)、23.5(CH2)、21.5(CH2)、21.4(CH2)。ESI-MS m/z＝460([M+H]+)。KF＝0.08％。
实施例12：与从阿哌沙班乙酯合成阿哌沙班相比，从式(II)的化合物合成阿哌沙班的反应速率。本发明的效果。
阿哌沙班可以从式(II)的化合物获得(如实施例9、实施例10或者实施例11中所述)，或根据现有技术的方法，从阿哌沙班乙酯获得(如比较例11中所述)(参见WO2007/0001385的实施例6)。
然而，当从式(II)的化合物例如其中R是–CH2CH(CH3)-和CH(CH3)2CH2-的化合物(II)(在图1和表2中称为丙二醇酯)开始时反应速率快得多。
如图1所示，采用丙二醇酯作为起始原料，在3小时内达到反应完成(转化率>99％)(图1中的三角形)，然而在完全相同的反应条件下，至少需要6小时从阿哌沙班乙酯达到相同的转化值(图1中的圆形)。
此外，比较6小时后收集的数据，当从丙二醇酯制备阿哌沙班时，阿哌沙班的量更高(99.25％对98.95％)。
表2中收集了关于丙二醇酯转化成阿哌沙班和阿哌沙班乙酯转化成阿哌沙班的动力学研究的详细数据。
表2：比较性动力学研究
用HPLC转化率表示数据。
实施例13：用于鉴定和定量式(II)的化合物的HPLC方法，其中R是-CH(CH3)2CH2-(同分异构体A)和–CH2CH(CH3)-(同分异构体B)，它们是典型的过程中间体和杂质。
如实施例10中所提到的，式(II)的化合物，特别是其中R是–CH2CH(CH3)-和-CH(CH3)2CH2-的式(II)的化合物，也是在通过上述实施例中描述的方法获得的分离的阿哌沙班产物中发现的典型的杂质。
可以通过下面的HPLC方法鉴定和监测该物质：
色谱条件：
应用上述的条件，预期的保留时间如下所示：
化合物 RRT
阿哌沙班 1.00
丙二醇酯–同分异构体B 1.16
丙二醇酯–同分异构体A 1.18
阿哌沙班乙酯 1.467
式(II)的化合物转化为阿哌沙班的量以面积百分比来确定。

Claims (14)

1.用于通过式(II)的化合物的酰胺化反应制备式(I)的阿哌沙班的方法：
其中R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述酰胺化反应利用无水氨、氨水或者铵盐进行。
3.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其中所述酰胺化反应在二醇溶剂中进行。
4.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其中所述酰胺化反应在大约3小时内、在80℃和90℃之间的温度下进行。
5.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其还包括利用式(III)的化合物的酯交换反应制备式(II)的化合物的步骤：
其中R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-，
其中R2是直链或者支链C1-C6烷基。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述酯交换反应在磷酸氢二钾或NaHCO3存在下进行。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其包括以下步骤：
a)式(III)的化合物的酯交换反应：
其中R2是直链或者支链C1-C6烷基，
以提供式(II)的化合物：
其中R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-，
b)分离式(II)的化合物，
c)式(II)的化合物的酰胺化反应：
以提供式(I)的阿哌沙班。
8.根据权利要求5所述的方法，其包括以下步骤：
a)式(III)的化合物的酯交换反应：
其中R2是直链或者支链C1-C6烷基，
以提供式(II)的化合物：
其中R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-，
b)分离式(II)的化合物，
c)式(II)的化合物的酰胺化反应：
以提供式(I)的阿哌沙班。
9.式(II)的化合物：
其中R选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-和-CH2CH2OCH2CH2-。
10.利用式(III)的化合物的酯交换反应制备根据权利要求9所述的式(II)的化合物的方法：
其中R2是直链或者支链C2-C6烷基。
11.根据权利要求9所述的式(II)的化合物在制备式(I)的阿哌沙班中的应用。
12.根据权利要求9所述的式(II)的化合物作为参比标记物或者参比标准品在鉴定和/或定量阿哌沙班中的所述式(II)的化合物中的应用。
13.一种用于在阿哌沙班中检测根据权利要求9所述的式(II)的化合物的方法，所述方法包括：
a)向阿哌沙班样品中加入已知量的式(II)的化合物；
b)进行步骤a)的阿哌沙班样品的HPLC分析；
c)检测式(I)的化合物的HPLC峰；
或，
a1)利用HPLC分析式(II)的化合物，
b1)利用HPLC分析所述阿哌沙班样品，
c1)通过比较保留时间或相对保留时间，检测式(II)的化合物的HPLC峰。
14.用于在阿哌沙班中定量根据权利要求9所述的式(II)的化合物的方法，所述方法包括：
i)利用HPLC在具有未知量的式(II)的化合物的阿哌沙班样品中测量与式(II)的化合物相对应的峰面积；
ii)利用HPLC测量与包含已知量的式(II)的化合物的参比标准品相对应的峰面积；
iii)比较在步骤a)中测量的面积与步骤ii)中测量的面积，确定在阿哌沙班中式(II)的化合物的量。
CN201580003432.0A 2014-10-15 2015-02-18 阿哌沙班合成中的关键中间体和杂质：阿哌沙班二醇酯 Active CN105849106B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610570710.7A CN106220624B (zh) 2014-10-15 2015-02-18 制备阿哌沙班n-1形式的方法

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14189007.9A EP3009435B1 (en) 2014-10-15 2014-10-15 Apixaban glycol esters as key intermediates and impurities of the synthesis of Apixaban
EP14189007.9 2014-10-15
PCT/EP2015/053350 WO2016058711A1 (en) 2014-10-15 2015-02-18 Key intermediates and impurities of the synthesis of apixaban: apixaban glycol esters

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610570710.7A Division CN106220624B (zh) 2014-10-15 2015-02-18 制备阿哌沙班n-1形式的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105849106A CN105849106A (zh) 2016-08-10
CN105849106B true CN105849106B (zh) 2018-01-05

Family

ID=51690965

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580003432.0A Active CN105849106B (zh) 2014-10-15 2015-02-18 阿哌沙班合成中的关键中间体和杂质：阿哌沙班二醇酯
CN201610570710.7A Active CN106220624B (zh) 2014-10-15 2015-02-18 制备阿哌沙班n-1形式的方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610570710.7A Active CN106220624B (zh) 2014-10-15 2015-02-18 制备阿哌沙班n-1形式的方法

Country Status (7)

Country Link
US (3) US9920051B2 (zh)
EP (2) EP3009435B1 (zh)
JP (1) JP6148412B1 (zh)
CN (2) CN105849106B (zh)
ES (1) ES2595508T3 (zh)
IL (1) IL248711A (zh)
WO (1) WO2016058711A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6200042B2 (ja) * 2015-08-06 2017-09-20 Ｊｘ金属株式会社 キャリア付銅箔、積層体、プリント配線板の製造方法及び電子機器の製造方法
CN107400131B (zh) * 2017-08-24 2021-03-12 沈阳药科大学 阿哌沙班衍生物及其制备方法和用途
CN109030655A (zh) * 2018-08-17 2018-12-18 无锡凯夫制药有限公司 一种快速测定阿哌沙班含量的方法
WO2022057826A1 (zh) * 2020-09-18 2022-03-24 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种吡唑并[3,4-c]吡啶化合物的晶型及其制备方法和用途

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002028810A2 (en) * 2000-10-02 2002-04-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Retinoids for the treatment of emphysema
US20050027120A1 (en) * 2003-06-02 2005-02-03 Reactimex, S.A. De C.V. Method for the synthesis of amides and related products from esters or ester-like compounds
WO2007001385A2 (en) * 2004-09-28 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing 4,5-dihydro-pyrazolo [3,4-c] pyrid-2-ones
CN101065379A (zh) * 2004-09-28 2007-10-31 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 制备4,5－二氢－吡唑并[3,4－c]吡啶－2－酮的方法
CN101967145A (zh) * 2010-09-09 2011-02-09 华东理工大学 一种抗血栓药物阿匹沙班的制备方法
WO2013119328A1 (en) * 2012-02-07 2013-08-15 Assia Chemical Industries Ltd. Solid state forms of apixaban

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200738672A (en) * 2001-12-10 2007-10-16 Bristol Myers Squibb Co Intermediated for the preparation of 4,5-dihydro-pyrazolo [3,4-c] pyrid-2-ones
DE102005030747B4 (de) 2005-06-29 2012-12-27 Zf Friedrichshafen Ag Kugelgelenk
WO2008063888A2 (en) * 2006-11-22 2008-05-29 Plexxikon, Inc. Compounds modulating c-fms and/or c-kit activity and uses therefor

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002028810A2 (en) * 2000-10-02 2002-04-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Retinoids for the treatment of emphysema
US20050027120A1 (en) * 2003-06-02 2005-02-03 Reactimex, S.A. De C.V. Method for the synthesis of amides and related products from esters or ester-like compounds
WO2007001385A2 (en) * 2004-09-28 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing 4,5-dihydro-pyrazolo [3,4-c] pyrid-2-ones
CN101065379A (zh) * 2004-09-28 2007-10-31 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 制备4,5－二氢－吡唑并[3,4－c]吡啶－2－酮的方法
CN101967145A (zh) * 2010-09-09 2011-02-09 华东理工大学 一种抗血栓药物阿匹沙班的制备方法
WO2013119328A1 (en) * 2012-02-07 2013-08-15 Assia Chemical Industries Ltd. Solid state forms of apixaban

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Discovery of 1-(4-Methoxyphenyl)-7-oxo-6-(4-(2-oxopiperidin-1-yl)phenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-3-carboxamide(Apixaban,BMS-562247),a Highly Potent,Selective,Efficacious,and Orally Bioavailable Inhibitor of Blood Coagulation Factor Xa;Donald J. P. Pinto 等;《J. Med. Chem.》;20071003;第50卷(第22期);第5339-5356页 *
Synthetic Communications: An International Journal for Rapid Communication of Synthetic Organic Chemistry;Jian"an Jiang 等;《Synthetic Communications》;20120905;第43卷(第1期);第72-79页，尤其是第74段流程图3以及第78页倒数第1段 *
阿哌沙班的合成工艺研究;陶海燕 等;《中国药物化学杂志》;20131030;第23卷(第5期);第385-389页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105849106A (zh) 2016-08-10
US9920051B2 (en) 2018-03-20
EP3098221A1 (en) 2016-11-30
ES2595508T3 (es) 2016-12-30
IL248711A (en) 2017-02-28
US20170001999A1 (en) 2017-01-05
US10040793B2 (en) 2018-08-07
US9624221B2 (en) 2017-04-18
CN106220624A (zh) 2016-12-14
EP3009435A1 (en) 2016-04-20
EP3009435B1 (en) 2016-08-17
CN106220624B (zh) 2018-06-12
JP2017518259A (ja) 2017-07-06
US20180086759A1 (en) 2018-03-29
US20160326171A1 (en) 2016-11-10
JP6148412B1 (ja) 2017-06-14
WO2016058711A1 (en) 2016-04-21
EP3098221B1 (en) 2017-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105849106B (zh) 阿哌沙班合成中的关键中间体和杂质：阿哌沙班二醇酯
EP2489661B1 (en) Impurity of lapatinib and salts thereof
CN106132408B (zh) 一种双环铂的制备方法
EP2985277B1 (en) Method for preparing an atropisomer of a pyrrole derivative
EA022756B1 (ru) Кристаллические формы элтромбопага и их применение
Putatunda et al. Regioselective N1-alkylation of 3, 4-dihydropyrimidine-2 (1H)-ones: Screening of their biological activities against Ca2+-ATPase
EP2279167A1 (en) NOVEL PROCESS FOR THE PREPARATION OF 4-FLUORO-ALPHA-Ý2-METHYL -1-OXOPROPYL¨-GAMMA-OXO-N-ß-DIPHENYLBENZENEBUTANAMIDE AND PRODUCTS THEREFROM
KR101709124B1 (ko) 신규한 키랄 금속 착물 및 분광법에 의해 전하를 띤 화합물의 키랄성을 분석하기 위한 이의 용도
EP3024821B1 (en) Process for the preparation of perampanel
EP2718268B1 (en) Novel process for the synthesis of 7-chloro-4-(piperazin-1-yl)-quinoline
Ukrainets et al. 4-Hydroxy-2-quinolones 144. Alkyl-, arylalkyl-, and arylamides of 2-hydroxy-4-oxo-4H-pyrido [1, 2-a] pyrimidine-3-carboxylic acid and their diuretic properties
JP6692408B2 (ja) アピキサバンの二量体不純物およびその除去方法
CN110563651A (zh) 一种连有邻羟基苯胺的1,9-蒽二酰亚胺化合物及其制备方法和应用
EP3471734B1 (en) Solid state forms of ixazomib citrate
CN106866625B (zh) 酮色林的制备方法
CN105294689B (zh) 一种四取代吡唑并异喹啉化合物及其合成方法
CN106317045B (zh) 一种氟罗沙星(绕丹宁不饱和酮)酰胺类衍生物及其制备方法和应用
CN109232539B (zh) 一类具有抗癌活性的双喹唑啉席夫碱衍生物及其制备与医药用途
CN105330660B (zh) 一种利伐沙班有关物质、其中间体、制备方法和用途
CN106317082B (zh) 一种芦氟沙星(绕丹宁不饱和酮)酰胺类衍生物及其制备方法和应用
CN114805220A (zh) 一种喹唑啉酮类化合物的制备方法
CN109265407A (zh) 一种双利奈唑胺的合成方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant