CN105842024A - 野生大豆标准样品的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物检疫标准样品技术研发领域，特别涉及大豆标准样品制备方法。野生大豆标准样品的制备方法，主要包括：确定专家组，标准样品来源，标准样品扩繁，标准样品筛选，标准样品生产工艺，标准样品均匀性检验，标准样品稳定性检验和标准样品储存，以田间采集的野生大豆种子为原料，通过隔离种植、扩繁、筛选、制备、均匀性检验、稳定性检验、包装和储存等程序制备成具有代表性的野生大豆标准样品，为植物检验检疫工作提供鉴定依据，为国家物种资源保护提供实物参考。

Description

野生大豆标准样品的制备方法

技术领域

本发明属于植物检疫标准样品技术研发领域，特别涉及大豆标准样品制备方法。

背景技术

野生大豆（Glycine soja），是栽培大豆的原始祖先种。自然条件下生长的野生大豆在遗传方面从未受到人为选择的影响，因此很多丰富的功能基因并没有因为人为的选择而丢失，这些基因很可能是大豆生存中多迫切需要的关键性基因。野生大豆资源中的高蛋白、多抗、广适应性和繁殖系数高的优良材料可以直接用于栽培大豆的优质、抗病、高产育种研究，野生大豆还是大豆系统发育和演化研究最重要的载体之一，是大豆生产可持续发展的重要遗传基础。

我国拥有世界上已知野生大豆资源的90%以上，逾6000种。然而随着我国改革开放的深入，国际贸易交流的扩大，我国野生大豆资源流失严重，美国曾公布，至2002年6月30日，从中国引进大豆资源4452份，包括野生大豆168份。而中国官方记载同意提供的仅2177份，并且野生大豆并没有被列入对外提供的品种资源目录。与此同时，科学家、农学家和育种学家们在全球搜集和交流有价值的大豆种质，包括栽培品种与野生大豆种质等，使得国外一些国家作物基因库中保存的大豆资源远远超过我国，其中很多原产于我国的大豆资源已经成为国外的专利产品并以低价倾销我国，使我国从世界上最大的大豆出口国变为最大的进口国，给我国大豆产业造成巨大的压力，同时也给我国大豆种质资源的保护带来挑战。

由于野生大豆在外观形态上差异很大，有的百粒重达80克，大小象一枚一角钱的硬币，有的百粒重不足1克，只有芝麻粒大小；颜色有黄色、绿色、黑色；形状有圆形、椭圆形。这些外部形态各异的大豆，有的根本就不像“豆”。这给我国检疫机构或实验室进行野生大豆鉴定时带来困难，影响检疫鉴定结果。当前国际上尚无统一的野生大豆标准样品用于有关部门进行检疫鉴定。所以，为加强生物物种资源管理，防止生物物种资源流失，研制在形态上典型一致，具有代表性的野生大豆物种材料标准样品具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供野生大豆物种材料标准样品制备方法，促进植物检疫实验室检疫鉴定工作，提高实验室检测水平，防止生物物种资源流失。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：野生大豆标准样品的制备方法：

第一步 确定专家组：专家组人数为5名及以上从事大豆物种鉴定工作的专家；

第二步 标准样品来源：野生大豆物种材料来源于田间采集，种子经专家鉴定及种植验证后扩繁，收获后将野生大豆种子进行比较，把形态上相对一致的混合在一起，确认野生大豆真实性；

第三步 标准样品扩繁：根据当地的气候条件，选择不同的播种时期。首先将土壤进行消毒处理，然后把消毒好的土壤装在大花盆中，再把花盆整齐摆放到隔离网室里，并做好标识；在野生大豆的整个生长季都对其生长情况进行观察和记录，并拍摄成图片，准备作为标准样品技术资料中的一部分，当野生大豆成熟后，进行采收并晾晒，将晾晒好的野生大豆装在干燥器中室温下保存，准备用于标准样品的筛选和制作；

第四步 标准样品筛选：在进行筛选前，为确保生物安全，首先要对种子进行灭活处理，将经灭活处理的种子倒在白磁盘中进行初筛，初筛过程主要挑选籽粒饱满、大小适中的种子，将挑选出的种子准备进行细筛，细筛过程要关注种子个体间的形态鉴定特征的细微差别，将经过细筛挑选出的种子分别放到白色磨口瓶内，准备做均匀性和稳定性试验；

第五步 标准样品生产工艺：将野生大豆物种材料标准样品镶嵌在树脂中，制成水晶标本。

第六步 标准样品均匀性检验：

均匀性检验：均匀性检验分两步完成，一是“瓶内”均匀性检验，二是“瓶间”均匀性检验：

①“瓶内”均匀性检验：从上述细筛后的野生大豆中随机选取100粒进行均匀性检验，将100粒野生大豆分成5组，每组20粒，把5组野生大豆种子分别寄给5位专家进行鉴定，要求专家首先对20粒该种子进行形态鉴定，判定其是否是野生大豆，然后给出野生大豆鉴定特征，根据这些鉴定特征，比较野生大豆每个个体间是否存在差异，存在的差异是否会对鉴定结果产生影响，给出野生大豆个体间均匀性结论，最后，专家对100粒野生大豆的鉴定结果没有疑义，鉴定结论均为野生大豆，每一位专家均认定野生大豆个体间存在的细微差异对该种子形态鉴定结果不会产生影响，野生大豆个体间在形态上是均匀的；

②“瓶间”均匀性检验：随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的野生大豆标准样品，首先肉眼观察野生大豆的外部形态，并将其与正常的没有进行包装处理的野生大豆进行比对，确定镶嵌在树脂中的野生大豆与正常没有进行包装处理的野生大豆在外部形态上是否存在差异，其次通过解剖镜进行观察，确定被镶嵌在树脂中的野生大豆与正常裸露的野生大豆在解剖镜下外部形态是否存在差异，如存在差异确定这些差异对野生大豆的鉴定结果是否会产生影响，通过对20个包装好的野生大豆标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上，镶嵌在水晶中的野生大豆与正常裸露的野生大豆几乎没有差异，说明外部包装材料对野生大豆的形态鉴定结果没有影响，野生大豆“瓶间”个体也是均匀的。

第七步 标准样品稳定性检验

验证野生大豆稳定性的方法需要用肉眼或放大镜、解剖镜进行观察，观察不同保存条件、不同“瓶间” 野生大豆的形态特征是否发生变化，发生的变化是否影响结果鉴定，保存条件的设计充分考虑到标准样品在储存、运输和使用过程中可能遇到的各种情况，设计出光照、温度、潮湿度、振动等不同条件下，经过一定的时间间隔，对野生大豆的形态均不会产生影响，说明该标准样品稳定性良好；

第八步 标准样品储存

野生大豆物种材料标准样品的包装采用可以长期保存并耐磨损、透光性好的树脂材料，因此野生大豆物种材料标准样品保存条件：常温下保存，防潮，避免阳光直射，有效期7年。

所述第三步标准样品扩繁：另外，从该批野生大豆中挑选籽粒饱满的种子装在信封中做好标识，作为野生大豆扩繁的种子资源。

所述第四步 标准样品筛选：灭活处理工艺是将野生大豆种子放置到50℃的恒温箱中，48h后进行种子发芽试验，确认种子已经失去活力。

所述第五步标准样品生产工艺：具体加工过程如下：

（1）制作模具，将亮漆天然树脂合成清漆均匀喷涂在模具表面；

（2）清洁模具后装好外模；

（3）将聚丙烯树脂加入纳米无尘填充料聚苯乙烯：

（4）加入固化剂T31、促进剂N-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡剂有机硅氧烷、透明母料等配料,按主料：固化剂：促进剂等=100:79:1配比，并搅均匀；所述树脂加入配料时，一定要注意比例，比例不正常将导致开裂或粘手，因树脂凝固时间短，一定要将加入配料的树脂一次性用完，否则无法再次使用。

（5）将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均匀，均匀后将模具放正，防止树脂凝固过程中变形，在树脂凝固过程中请勿移动模具；

（6）将种子放入树脂内；

（7）树脂完全凝固后，脱去模具；

（8）将产品打磨，抛光。

本发明与同类技术相比较，具有突显著的效果：本发明首次将我国生物物种保护资源野生大豆镶嵌在水晶树脂中，制备成标准样品。其优点有三，一树脂原料是呈液体状的，具有非常好的流动性，能够充分充斥样品表面，而干固成膜后不再溶于水，保证了样品的稳定性；树脂透明度极高，便于观察里面标准样品的细微结构，保证了样品的可视性及完整性；树脂具有阻燃、耐老化、无毒、抗氧化、耐热、绝缘等优良性能，保证了样品的安全性及长期有效性。二本发明野生大豆标准样品的制备方法工艺简单，降低了标准样品的成本，确保了标准样品的可普及性；三本发明野生大豆标准样品，消除了各检测机构由于使用不同参照物而造成的结果差异，保证了鉴定结果的溯源性，对确保野生大豆形态鉴定结果的准确性和可靠性具有重要作用，对填补国内外物种鉴定标准样品研制的空白，规范我国生物物种鉴定工作具有重要意义。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。

实施例1

第一步 在大豆物种鉴定领域中，挑选5位技术专家，专家分别从事大豆物种鉴定工作10年及以上，并技术职称为副高级及以上，组成野生大豆评定专家组；

第二步 标准样品来源：将田间采集的野生大豆种子经专家鉴定后，在生长季进行隔离种植，根据整个植株及花果特征对其进行进一步验证，确认野生大豆的真实性。

第三步 标准样品扩繁：土壤消毒处理 ►装入花盆中►放入隔离网室►植入野生大豆种子►观察、记录►收获、晾晒►保存；根据当地的气候条件，选择不同的播种时期。首先将土壤进行消毒处理，这样可以杀死土壤中的其它杂草籽和病原菌，然后把消毒好的土壤装在大花盆中，再把花盆整齐摆放到隔离网室里，并做好标识。在野生大豆的整个生长季都对其生长情况进行观察和记录，并拍摄成图片，准备作为标准样品技术资料中的一部分。当野生大豆成熟后，进行采收并晾晒。将晾晒好的野生大豆装在干燥器中室温下保存，准备用于标准样品的筛选和制作。另外，从该批野生大豆中挑选籽粒饱满的种子装在信封中做好标识，作为野生大豆扩繁的种子资源

第四步 标准样品筛选：首先对野生大豆种子进行灭活处理。将种子放置到50℃的恒温箱中，48h后进行种子发芽试验，确认种子已经失去活力。将经灭活处理的野生大豆种子倒在白磁盘中进行初筛。初筛过程主要挑选籽粒饱满、大小适中的种子，将挑选出的种子准备进行细筛。细筛过程要关注种子个体间的形态鉴定特征的细微差别。将经过细筛挑选出的种子分别放到白色磨口瓶内，准备做均匀性和稳定性试验。

第五步 标准样品均匀性检验：

均匀性检验：从上述细筛后的野生大豆中随机选取100粒，分成5组，每组20粒，把5组野生大豆分别寄给5位专家进行鉴定。专家认定个体间存在的细微差异对野生大豆形态鉴定结果没有影响，个体间在形态上是均匀的。

第六步 标准样品生产工艺：

（1）制作模具，将亮漆天然树脂合成清漆均匀喷涂在模具表面。

（2）清洁模具后装好外模。

（3）将聚丙烯树脂加入纳米无尘填充料聚苯乙烯，可根据要求填入有色浆及其它填充料。

（4）加入固化剂环氧树脂、促进剂N-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡剂有机硅氧烷、透明母料等配料并搅均匀。树脂加入配料时，一定要注意比例，比例不正常将导致开裂或粘手，因树脂凝固时间短，一定要将加入配料的树脂一次性用完，否则无法再次使用。

（5）将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均匀，均匀后将模具放正，防止树脂凝固过程中变形。在树脂凝固过程中请勿移动模具。

（6）将长方体模具按8等分挖槽；将野生大豆物种材料各1粒放入树脂内。

（7）树脂完全凝固后，脱去模具。

（8）将产品打磨，抛光。

第七步 标准样品稳定性检验

随即选取20个包装制作完成的野生大豆标准样品，分别通过肉眼或使用放大镜、解剖镜对其外部形态进行观察，并将其与没有包装处理的样品进行比对，二者在外部形态上没有差异，说明此样品稳定性良好。

第八步 标准样品储存

野生大豆物种材料标准样品的包装采用可以长期保存并耐磨损、透光性好的树脂材料，因此野生大豆物种材料标准样品保存条件：常温下保存，防潮，避免阳光直射，有效期10年。

Claims (5)

1.野生大豆标准样品的制备方法，其特征是：

第一步 确定专家组：专家组人数为5名及以上从事大豆物种鉴定工作的专家；

第二步 标准样品来源：野生大豆物种材料来源于田间采集，种子经专家鉴定及种植验证后扩繁，收获后将野生大豆种子进行比较，把形态上相对一致的混合在一起，确认野生大豆真实性；

第三步 标准样品扩繁：根据当地的气候条件，选择不同的播种时期；首先将土壤进行消毒处理，然后把消毒好的土壤装在大花盆中，再把花盆整齐摆放到隔离网室里，并做好标识；在野生大豆的整个生长季都对其生长情况进行观察和记录，并拍摄成图片，准备作为标准样品技术资料中的一部分，当野生大豆成熟后，进行采收并晾晒，将晾晒好的野生大豆装在干燥器中室温下保存，准备用于标准样品的筛选和制作；

第四步 标准样品筛选：在进行筛选前，为确保生物安全，首先要对种子进行灭活处理，将经灭活处理的种子倒在白磁盘中进行初筛，初筛过程主要挑选籽粒饱满、大小适中的种子，将挑选出的种子准备进行细筛，细筛过程要关注种子个体间的形态鉴定特征的细微差别，将经过细筛挑选出的种子分别放到白色磨口瓶内，准备做均匀性和稳定性试验；

第五步 标准样品生产工艺：将野生大豆物种材料标准样品镶嵌在树脂中，制成水晶标本；

第六步 标准样品均匀性检验：

均匀性检验：均匀性检验分两步完成，一是“瓶内”均匀性检验，二是“瓶间”均匀性检验：

①“瓶内”均匀性检验：从上述细筛后的野生大豆中随机选取100粒进行均匀性检验，将100粒野生大豆分成5组，每组20粒，把5组野生大豆种子分别寄给5位专家进行鉴定，要求专家首先对20粒该种子进行形态鉴定，判定其是否是野生大豆，然后给出野生大豆鉴定特征，根据这些鉴定特征，比较野生大豆每个个体间是否存在差异，存在的差异是否会对鉴定结果产生影响，给出野生大豆个体间均匀性结论，最后，专家对100粒野生大豆的鉴定结果没有疑义，鉴定结论均为野生大豆，每一位专家均认定野生大豆个体间存在的细微差异对该种子形态鉴定结果不会产生影响，野生大豆个体间在形态上是均匀的；

②“瓶间”均匀性检验：随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的野生大豆标准样品，首先肉眼观察野生大豆的外部形态，并将其与正常的没有进行包装处理的野生大豆进行比对，确定镶嵌在树脂中的野生大豆与正常没有进行包装处理的野生大豆在外部形态上是否存在差异，其次通过解剖镜进行观察，确定被镶嵌在树脂中的野生大豆与正常裸露的野生大豆在解剖镜下外部形态是否存在差异，如存在差异确定这些差异对野生大豆的鉴定结果是否会产生影响，通过对20个包装好的野生大豆标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上，镶嵌在水晶中的野生大豆与正常裸露的野生大豆几乎没有差异，说明外部包装材料对野生大豆的形态鉴定结果没有影响，野生大豆“瓶间”个体也是均匀的；

第七步 标准样品稳定性检验

验证野生大豆稳定性的方法需要用肉眼或放大镜、解剖镜进行观察，观察不同保存条件、不同“瓶间” 野生大豆的形态特征是否发生变化，发生的变化是否影响结果鉴定，保存条件的设计充分考虑到标准样品在储存、运输和使用过程中可能遇到的各种情况，设计出光照、温度、潮湿度、振动等不同条件下，经过一定的时间间隔，对野生大豆的形态均不会产生影响，说明该标准样品稳定性良好；

第八步 标准样品储存

野生大豆物种材料标准样品的包装采用可以长期保存并耐磨损、透光性好的树脂材料，因此野生大豆物种材料标准样品保存条件：常温下保存，防潮，避免阳光直射，有效期10年。

2.根据权利要求1所述的野生大豆标准样品的制备方法，其特征是：所述第三步标准样品扩繁：另外，从该批野生大豆中挑选籽粒饱满的种子装在信封中做好标识，作为野生大豆扩繁的种子资源。

3.根据权利要求1所述的野生大豆标准样品的制备方法，其特征是：所述第四步 标准样品筛选：灭活处理工艺是将野生大豆种子放置到50℃的恒温箱中，48h后进行种子发芽试验，确认种子已经失去活力。

4.根据权利要求1所述的野生大豆标准样品的制备方法，其特征是：所述第五步标准样品生产工艺：具体加工过程如下：

（1）制作模具，将亮漆天然树脂合成清漆均匀喷涂在模具表面；

（2）清洁模具后装好外模；

（3）将聚丙烯树脂加入纳米无尘填充料聚苯乙烯

（4）加入固化剂T31、促进剂N-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡剂有机硅氧烷、透明母料等配料，按主料：固化剂：促进剂等=100:79:1配比,并搅均匀；

（5）将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均匀，均匀后将模具放正，防止树脂凝固过程中变形，在树脂凝固过程中请勿移动模具；

（6）将种子放入树脂内；

（7）树脂完全凝固后，脱去模具；

（8）将产品打磨，抛光。

5.根据权利要求4所述的野生大豆标准样品的制备方法，其特征是：所述第六步标准样品生产工艺中第（4）步：所述树脂加入配料时，主料与配料比例是，主料：固化剂：促进剂等=100:79:1,比例不正常将导致开裂或粘手，因树脂凝固时间短，一定要将加入配料的树脂一次性用完，否则无法再次使用。