CN102410950B - 四纹豆象标准样品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物检疫领域。四纹豆象标准样品，经过确认的四纹豆象虫体镶嵌在树脂中，每块树脂中一头四纹豆象。本发明四纹豆象标准样品，四纹豆象镶嵌在树脂中，树脂原料是呈液体状的，它具有非常好的流动性，能够充分充斥样品表面，干固成膜后不能再溶于水。树脂透明度极高，便于观察里面标准样品的细微结构。此外，树脂还具有阻燃、耐老化、无毒、抗氧化、耐热、绝缘等优良性能，所以将四纹豆象标本镶嵌在树脂中可以延长标准样品的有效期，降低了标准样品成本。可以消除各实验室由于使用不同参照物而造成的结果差异，同时可以保证鉴定结果的溯源性，对确保四纹豆象形态鉴定结果的准确性和可靠性具有重要作用。

Description

四纹豆象标准样品及其制备方法

技术领域

本发明涉及植物检疫领域，特别是四纹豆象标准样品，另外本发明还涉及其制备方法。

背景技术

四纹豆象（Bruchus maculatus (Fabricius)）是我国检疫性有害生物名录中的重要害虫，最早发现在美国，现已遍及世界大部分国家和地区。四纹豆象能在田间和仓库内繁殖为害。主要对储藏的食用豆类造成严重危害。成虫产卵于豆荚或豆粒上，幼虫大多直种脐附近蛀入，蛀入豆粒后7~12天开始蜕皮，胸足退化，大量取食为害，严重侵害使，每粒菜豆上蛀孔可达12个以上。四纹豆象幼虫在田间及仓库内危害各类豆粒，把豆粒蛀成空壳，不能食用、种用，大大降低商品价值。四纹豆象主要通过被害种子的调运，藏匿于包装物、交通工具的缝隙处进行远距离传播。通过成虫飞翔、搬运货物或工具可近距离传播。危害木豆、鹰嘴豆、扁豆、大豆、金甲豆、绿豆、豇豆等多种豆类植物。此虫在广西严重危害绿豆、扁豆、蚕豆、豇豆，一般虫蛀率都在20%~30%，甚至80%以上，经济损失严重。

标准样品是具有一种或多种性能特征，经过技术鉴定和标准化主管部门批准的实物标准。标准样品是科学地制定技术标准（文字）和有效地实施技术标准，控制和提高工农业产品质量，保证食品安全，保障人身健康和环境质量等的重要技术手段。标准样品是整个标准化工作的一个有机组成部分，它是那些需要用标准样品来定量或定性说明文字标准内容要求的物质体现，对标准的实施起着重要的保证作用。它一般被用于分析测试物质的质量评定与控制、校准分析仪器、评定确认分析方法、分析数据对比、产品质量评价、检验人员技能水平评定和进行技术仲裁等。由于其特有的均匀性、稳定性、直观性和准确性等优点，标准样品研究工作越来越得到各个相关领域专家的关注。但是，在目前，标准样品只是在冶金、有色金属、化学、食品添加剂等方面应用比较广泛，开展的研究也比较深入，技术也已经成熟，但在植物检疫领域尚属空白，更没有从事和昆虫标准样品的研究，很多实验室在进行昆虫形态鉴定时仍然沿用传统手段，对照图片或实验室保存的标本进行鉴定，而这些标本的来源各异，不同的实验室保存的标本在形态上有时存在很大差异，甚至会出现错误的标本。这样，由于参照物的差异从而导致了不同实验室间鉴定结果存在很大的差异性和不可比性，鉴定结果也无法进行溯源。因此，研制一批形态典型一致、具有代表性的昆虫标准样品作为实验室进行昆虫鉴定时的参照物，可以消除各实验室由于使用不同参照物而造成的结果差异，同时可以保证鉴定结果的溯源性，对确保昆虫形态鉴定结果的准确性和可靠性具有重要作用，对填补国内外植物检疫标准样品研制的空白，规范我国昆虫形态鉴定工作具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供四纹豆象标准样品，兼具均匀性和稳定性，促进植物检疫实验室质量控制工作、发现实验室自身存在的问题、改进和提高实验室检测水平；本发明另一目的是提供四纹豆象标准样品的制备方法，工艺简单，易于操作。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：四纹豆象标准样品，经过确认的四纹豆象虫体镶嵌在树脂中，每块树脂中一头四纹豆象。

所述四纹豆象个体性状符合下述要求：

体长2.5－3.5mm，长卵形，黑色或黑褐色，疏生金黄色细毛；触角锯齿形，基部五节黄褐色，其余黑色，或全部黄褐色；前胸梯形，两侧向前狭缩，后缘中央有瘤突1对，上密被白色毛；鞘翅长略大于两鞘翅合并的宽度，每鞘翅有黑斑3个，肩部的极小，中部及端部的甚大；后足腿节外缘的齿大而钝，内缘的齿细长而尖锐。

本发明四纹豆象标准样品的制备方法，具体步骤如下：

第一步、四纹豆象标准样品的来源

四纹豆象标准样品的来源是从进境货物中截获的；

第二步、四纹豆象标准样品扩繁

将已经过挑选的四纹豆象放入昆虫饲养缸，用绿豆作为饲料饲养，当有大量成虫出现时，留一部分昆虫作为种子资源继续饲养，其余昆虫全部进行灭活处理，准备用于标准样品的筛选和制作；

第三步、四纹豆象标准样品筛选

将扩繁得到的四纹豆象进行初步筛选和仔细筛选，挑选出典型特征明显、形态鉴定特征差别小的虫体，备用；

第四步、标准样品制备

（1）制作模具，将亮漆天然树脂合成清漆均匀喷涂在模具表面；

    （2）清洁模具后装好外模；

    （3）将水晶树脂聚丙烯树脂加入纳米无尘填充料聚苯乙烯；

（4）加入固化剂环氧树脂固化剂、促进剂N-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡剂有机硅氧烷、透明母料聚丙烯透明母料等配料并搅均匀；

（5）将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均匀，均匀后将模具放正，防止树脂凝固过程中变形；

    （6）将种子放入树脂内；

    （7）树脂完全凝固后，脱去模具；

    （8）将产品打磨，抛光。

所述制得的四纹豆象标准样品进行均匀性和稳定性检验：

（1）均匀性检验

均匀性检验分两步完成，一是“瓶内”均匀性检验，二是“瓶间”均匀性检验：

在“瓶内”均匀性检验时，主要考虑尽可能减小昆虫个体间存在的差异，随机选取100头进行均匀性检验；

“瓶间”均匀性检验主要是考虑包装后每个标准样品个体间的差异，验证四纹豆象被镶嵌到树脂中后，这些外部包装材料对四纹豆象的外部形态是否产生影响，是否影响四纹豆象的形态鉴定：随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的四纹豆象标准样品，通过对20个包装好的四纹豆象标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上，镶嵌在树脂中的四纹豆象与正常裸露四纹豆象几乎没有差异；

（2）稳定性检验

在进行稳定性试验时，因为标本的生物学外部形态特征不会随着时间的推移进行很大的变化，而且又是被镶嵌在树脂中，避免了氧化、发霉、变质及外部机械力量损伤而导致的形态变化，所以保存条件的变化对标准样品外部形态没有影响，不同“瓶间”的标准样品也没有差异，四纹豆象标准样品的鉴定指标在很长时间内都是稳定的。

所述制得的四纹豆象标准样品进行定值

（1）四纹豆象标准样品形态特征确定原则

四纹豆象标准样品由专家进行确认，确认给出的四纹豆象标准样品是否是四纹豆象；

（2）四纹豆象个体符合下列要求：

体长2.5－3.5mm，长卵形，黑色或黑褐色，疏生金黄色细毛；触角锯齿形，基部五节黄褐色，其余黑色，或全部黄褐色；前胸梯形，两侧向前狭缩，后缘中央有瘤突1对，上密被白色毛；鞘翅长略大于两鞘翅合并的宽度，每鞘翅有黑斑3个，肩部的极小，中部及端部的甚大；后足腿节外缘的齿大而钝，内缘的齿细长而尖锐。

本发明的有益效果：针对植物检疫实验室工作的需要，本发明提供的样品为四纹豆象标准样品，四纹豆象标准样品镶嵌在树脂中，树脂原料是呈液体状的，它具有非常好的流动性，能够充分充斥样品表面，干固成膜后不能再溶于水。树脂透明度极高，便于观察里面标准样品的细微结构。此外，树脂还具有阻燃、耐老化、无毒、抗氧化、耐热、绝缘等优良性能，所以将四纹豆象标本镶嵌在树脂中可以延长标准样品的有效期，降低了标准样品成本。可以消除各实验室由于使用不同参照物而造成的结果差异，同时可以保证鉴定结果的溯源性，对确保四纹豆象形态鉴定结果的准确性和可靠性具有重要作用，对填补国内外植物检疫标准样品研制的空白，规范我国昆虫形态鉴定工作具有重要意义。

四纹豆象标准样品的制备方法，以实验室截获的四纹豆象为原料，通过扩繁、筛选、制备、均匀性检验、稳定性检验、标志和包装储存等程序制备成具有代表性的四纹豆象标准样品，为植物检疫实验室昆虫检疫鉴定工作提供鉴定依据，提高实验室检测水平。

四、具体实施方式：

以下结合具体实施例对本发明作进一步的描述，但本发明并不局限于具体实施例。

实施例1

四纹豆象标准样品的制备方法，具体步骤如下：

第一步、四纹豆象标准样品的来源

四纹豆象标准样品的来源是从进境货物中截获的；将进境货物中截获的四纹豆象经专家鉴定后，作为亲代饲养。

针对进境截获的四纹豆象，无论来自哪个国家和地区，都应进行隔离饲养，经过一代后，观察子代虫体的性状是否分离，然后选择作为标准样品的亲代虫体。对于截获的昆虫要重点关注其是否为活体，以便准备下一步扩繁。把截获的昆虫做好记录，特别是要清楚地标明该昆虫来自的国家。根据不同昆虫生长相应的条件选择好饲养的温湿度等生长条件，同时还要选择好相应的寄主作为昆虫生长需要的饲料。整个饲养过程中都要采取好防护措施，防止其向外传播扩散。特别是饲养昆虫使用的器皿和废弃的饲料残渣等，在更换新的以后，使用过的要注意做严格的灭活处理，防止卵、幼虫等随剩余物向外传播扩散。

第二步、四纹豆象标准样品扩繁：在对昆虫进行扩繁前，要做好一切准备工作，例如饲养器皿、饲养环境、防护设施等，同时还要设有专人负责日常管理。

四纹豆象饲料采用健康无虫的绿豆，具体做法如下：

将已经过挑选的四纹豆象放入昆虫饲养缸，用绿豆作为饲料，放入饲养缸中。饲养缸用5层细密的纱布将口密封，防止昆虫逃逸。将饲养缸放入22℃恒温培养箱中饲养，每日观察记录昆虫生长情况。

当有大量成虫出现时，留一部分昆虫作为种子资源继续饲养，其余昆虫全部进行灭活处理。在饲养缸中放入少量溴甲烷进行熏蒸，将死亡昆虫标本放入70%的酒精溶液中保存，准备用于标准样品的筛选和制作。同时所有在饲养过程中使用过的剩余饲料残渣、饲养缸等器具均需做灭活处理，防止昆虫向外逃逸。

第三步、四纹豆象标准样品筛选：将扩繁得到的四纹豆象倒在培养皿中进行初步筛选，该过程习惯上叫做初筛。标准样品的筛选是一项非常耗时的工作，考虑到工作量的原因，初筛工作一般由普通工作人员完成。初筛过程主要挑选虫体完整无损、各鉴定特征明显的四纹豆象（雌雄均可），将挑选出的昆虫标本准备用于标准样品研制下一个环节的均匀性和稳定性试验。

将经过初筛的四纹豆象进一步仔细筛选，该过程通常叫做细筛。细筛工作一般要由专业技术人员完成。细筛过程主要是结合样品均匀性试验来完成。细筛过程要关注虫体间形态鉴定特征的细微差别。将经过细筛挑选出的四纹豆象分别放到装有70%酒精溶液的白色磨口瓶内，备用；

第四步、标准样品制备

（1）制作模具，将亮漆天然树脂合成清漆均匀喷涂在模具表面；

    （2）清洁模具后装好外模；

    （3）将水晶树脂聚丙烯树脂加入纳米无尘填充料聚苯乙烯；

（4）加入固化剂环氧树脂固化剂、促进剂N-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺、消泡剂有机硅氧烷、透明母料聚丙烯透明母料等配料并搅均匀；

（5）将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均匀，均匀后将模具放正，防止树脂凝固过程中变形；

    （6）将种子放入树脂内；

    （7）树脂完全凝固后，脱去模具；

    （8）将产品打磨，抛光制得四纹豆象标准样品，经过确认的四纹豆象虫体镶嵌在树脂中，每块树脂中一头四纹豆象。

实施例2

上述实施例制得的四纹豆象标准样品进行均匀性和稳定性检验：

（1）均匀性检验

均匀性检验分两步完成，一是“瓶内”均匀性检验，二是“瓶间”均匀性检验。

在设计“瓶内”均匀性检验方案时，主要考虑尽可能减小昆虫个体间存在的差异。由于生物的多样性，同种昆虫每一个个体间存在一定的差异是不可避免的，两个四纹豆象个体不可能在形态上完全一致，但如果能够确保个体间存在的差异相对较小，这些差异对形态鉴定不会产生影响，那么也就证明了该批四纹豆象个体间是均匀的。通常情况下，“瓶内”均匀性检验通常结合专家定性判定来完成。

从上述细筛后的四纹豆象中随机选取100头进行均匀性检验。将100头四纹豆象分成5组，每组20头，把5组四纹豆象分别寄给5位专家进行鉴定。要求专家首先对20头四纹豆象进行形态鉴定，判定其是否是四纹豆象，然后给出四纹豆象鉴定特征；其次根据这些鉴定特征，比较四纹豆象每一个个体间是否存在差异，存在的差异是否会对鉴定结果产生影响，给出四纹豆象个体间均匀性结论。最后，专家对100头四纹豆象的鉴定结果没有疑义，鉴定结论均为四纹豆象。每一位专家均认定四纹豆象个体间存在的细微差异对四纹豆象形态鉴定结果不会产生影响，四纹豆象个体间在形态上是均匀的。

“瓶间”均匀性检验主要是考虑包装后每个标准样品个体间的差异，验证四纹豆象被镶嵌到树脂中后，这些外部包装材料对四纹豆象的外部形态是否产生影响，是否影响四纹豆象的形态鉴定。随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的四纹豆象标准样品，首先肉眼观察四纹豆象的外部形态，并将其与正常的没有进行包装处理的四纹豆象进行比对，确定镶嵌在树脂中的四纹豆象与正常没有进行包装处理的四纹豆象在外部形态上是否存在差异，是否会影响四纹豆象的形态鉴定。其次通过解剖镜进行观察，确定被镶嵌在树脂中的四纹豆象与正常裸露的四纹豆象在解剖镜下外部形态是否存在差异，如存在差异确定这些差异对四纹豆象的鉴定结果是否会产生影响。

通过对20个包装好的四纹豆象标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上，镶嵌在树脂中的四纹豆象与正常裸露四纹豆象几乎没有差异。说明外部包装材料对四纹豆象的形态鉴定结果没有影响，四纹豆象“瓶间”个体也是均匀的。

（2）稳定性检验

标准样品的稳定性是指“标准样品在规定的条件下贮存，在规定的时间间隔内，样品的物理化学性质和特性保持在规定范围内的能力。根据其固有的生物学特性和加工工艺，昆虫标准样品具有长周期稳定性。根据标准样品稳定性确定的原则，充分考虑稳定性研究过程中检测方法的稳定性、取样方法的一致性（也就是“瓶间”一致性）、保存条件的设计和实施等多方面问题。验证昆虫标准样品稳定性的方法非常简单，只需要肉眼观察或使用放大镜、解剖镜进行观察即可，观察不同保存条件、不同“瓶间”四纹豆象的形态特征是否发生变化，发生的变化是否影响结果鉴定。保存条件的设计充分考虑到标准样品在储存、运输和使用过程中可能遇到的各种情况，如设计出光照、温度、潮湿度、振动等不同条件下，经过一定的时间间隔，确定这些保存环境的改变是否对这四种标本的形态产生影响。在进行稳定性试验时，因为标本的生物学外部形态特征不会随着时间的推移进行很大的变化，而且又是被镶嵌在树脂中，避免了氧化、发霉、变质及外部机械力量损伤而导致的形态变化，所以保存条件的变化对标准样品外部形态没有影响，不同“瓶间”的标准样品也没有差异，四纹豆象标准样品的鉴定指标在很长时间内都是稳定的，因此，四纹豆象标准样品的有效期暂定为5年，最后要根据实际情况，对有效期进行最终确定。

实施例3

上述实施例制得的四纹豆象标准样品进行定值：

（1）四纹豆象标准样品形态特征确定原则

四纹豆象标准样品由昆虫领域5位专家进行确认，确认给出的四纹豆象标准样品是否是四纹豆象。

专家根据实际工作和实践经验分别对给出的四纹豆象形态鉴定特征描述进行确认。

（2）四纹豆象标准样品形态鉴定特征

体长2.5－3.5mm，长卵形，黑色或黑褐色，疏生金黄色细毛。触角锯齿形，基部五节黄褐色，其余黑色，或全部黄褐色。前胸梯形，两侧向前狭缩，后缘中央有瘤突1对，上密被白色毛。鞘翅长略大于两鞘翅合并的宽度，每鞘翅有黑斑3个，肩部的极小，中部及端部的甚大。后足腿节外缘的齿大而钝，内缘的齿细长而尖锐。

四纹豆象标准样品的包装采用可以长期保存并耐磨损、透光性好的树脂材料，并经过特殊加工工艺制作。四纹豆象标准样品保存条件：常温下保存，防潮，避免阳光直射。

Claims (3)

1.四纹豆象标准样品的制备方法，其特征是：用树脂将经过专家确认的四纹豆象虫体镶嵌其中，每块树脂中1头四纹豆象，具体步骤如下：

第一步、四纹豆象标准样品的来源

四纹豆象标准样品的来源是从进境货物中截获的；

第二步、四纹豆象标准样品扩繁

将已经过挑选的四纹豆象放入昆虫饲养缸，用绿豆作为饲料饲养，当有大量成虫出现时，留一部分昆虫作为种子资源继续饲养，其余昆虫全部进行灭活处理，准备用于标准样品的筛选和制作；

第三步、四纹豆象标准样品筛选

将扩繁得到的四纹豆象进行初步筛选和仔细筛选，挑选出典型特征明显、形态鉴定特征差别小的虫体，备用；

第四步、标准样品制备

（1）制作模具，将亮漆均匀喷涂在模具表面；

    （2）清洁模具后装好外模；

    （3）将水晶树脂加入纳米无尘填充料；

（4）加入固化剂、促进剂、消泡剂、透明母料并搅均匀；

（5）将树脂倒入模具后，摇动模具，使模具内树脂流动均匀，均匀后将模具放正，防止树脂凝固过程中变形；

    （6）将种子放入树脂内；

    （7）树脂完全凝固后，脱去模具；

    （8）将产品打磨，抛光；

第五步：制得的四纹豆象标准样品进行均匀性和稳定性检验：

（1）均匀性检验

均匀性检验分两步完成，一是“瓶内”均匀性检验，二是“瓶间”均匀性检验：

在“瓶内”均匀性检验时，主要考虑尽可能减小昆虫个体间存在的差异，随机选取100头进行均匀性检验；

“瓶间”均匀性检验主要是考虑包装后每个标准样品个体间的差异，验证四纹豆象被镶嵌到树脂中后，这些外部包装材料对四纹豆象的外部形态是否产生影响，是否影响四纹豆象的形态鉴定：随机选取20个已经加工制作完成并带有外包装的四纹豆象标准样品，通过对20个包装好的四纹豆象标准样品进行肉眼和解剖镜下观察，在外部形态上，镶嵌在树脂中的四纹豆象与正常裸露四纹豆象几乎没有差异；

（2）稳定性检验

在进行稳定性试验时，因为标本的生物学外部形态特征不会随着时间的推移进行很大的变化，而且又是被镶嵌在树脂中，避免了氧化、发霉、变质及外部机械力量损伤而导致的形态变化，所以保存条件的变化对标准样品外部形态没有影响，不同“瓶间”的标准样品也没有差异，四纹豆象标准样品的鉴定指标在很长时间内都是稳定的。

2. 根据权利要求1所述的四纹豆象标准样品的制备方法，其特征是：四纹豆象个体性状符合下述要求：

体长2.5－3.5mm，长卵形，黑色或黑褐色，疏生金黄色细毛；

触角锯齿形，基部五节黄褐色，其余黑色，或全部黄褐色；

前胸梯形，两侧向前狭缩，后缘中央有瘤突1对，上密被白色毛；

鞘翅长略大于两鞘翅合并的宽度，每鞘翅有黑斑3个，肩部的极小，中部及端部的甚大；

后足腿节外缘的齿大而钝，内缘的齿细长而尖锐。

3.根据权利要求1所述的四纹豆象标准样品的制备方法，其特征是，所述制得的四纹豆象标准样品进行定值

（1）四纹豆象标准样品形态特征确定原则

四纹豆象标准样品由专家进行确认，确认给出的四纹豆象标准样品是否是四纹豆象；

（2）四纹豆象个体符合下列要求：

体长2.5－3.5mm，长卵形，黑色或黑褐色，疏生金黄色细毛；触角锯齿形，基部五节黄褐色，其余黑色，或全部黄褐色；前胸梯形，两侧向前狭缩，后缘中央有瘤突1对，上密被白色毛；鞘翅长略大于两鞘翅合并的宽度，每鞘翅有黑斑3个，肩部的极小，中部及端部的甚大；后足腿节外缘的齿大而钝，内缘的齿细长而尖锐。