CN105836731A - 一种功能化离子液体修饰的碳纳米管及其固定化脂肪酶的方法 - Google Patents
一种功能化离子液体修饰的碳纳米管及其固定化脂肪酶的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105836731A CN105836731A CN201610310527.3A CN201610310527A CN105836731A CN 105836731 A CN105836731 A CN 105836731A CN 201610310527 A CN201610310527 A CN 201610310527A CN 105836731 A CN105836731 A CN 105836731A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cnt
- modified
- enzyme
- ion liquid
- functionalized ion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 28
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims abstract description 17
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims abstract description 17
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 title abstract description 19
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 title abstract description 19
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 title abstract 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 78
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 claims abstract description 24
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 11
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 55
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 52
- 239000002048 multi walled nanotube Substances 0.000 claims description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 22
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 21
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 18
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 12
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 10
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 claims description 9
- -1 halide ion Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 229910021135 KPF6 Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 229910001495 sodium tetrafluoroborate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- 229960005439 propantheline bromide Drugs 0.000 claims description 5
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 4
- 238000005034 decoration Methods 0.000 claims description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002071 nanotube Substances 0.000 claims description 3
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 claims description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000004567 concrete Substances 0.000 claims description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 74
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100021851 Calbindin Human genes 0.000 description 5
- 101000898082 Homo sapiens Calbindin Proteins 0.000 description 5
- 108010048733 Lipozyme Proteins 0.000 description 5
- 101001021643 Pseudozyma antarctica Lipase B Proteins 0.000 description 5
- FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N lipoamide Chemical group NC(=O)CCCCC1CCSS1 FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 4
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- KDHWOCLBMVSZPG-UHFFFAOYSA-N 3-imidazol-1-ylpropan-1-amine Chemical class NCCCN1C=CN=C1 KDHWOCLBMVSZPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- ZRSDQBKGDNPFLT-UHFFFAOYSA-N ethanol;oxolane Chemical compound CCO.C1CCOC1 ZRSDQBKGDNPFLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N triacetin Chemical compound CC(=O)OCC(OC(C)=O)COC(C)=O URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NKRZZXKPBFEUGH-UHFFFAOYSA-N 1-(3-methyl-2H-imidazol-1-yl)propan-1-amine Chemical compound NC(CC)N1CN(C=C1)C NKRZZXKPBFEUGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDLCZOVUSADOIV-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanol Chemical compound OCCBr LDLCZOVUSADOIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589220 Acetobacter Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 1
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 1
- 238000002479 acid--base titration Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000012893 effector ligand Substances 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001087 glyceryl triacetate Substances 0.000 description 1
- 235000013773 glyceryl triacetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 1
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- FDRCDNZGSXJAFP-UHFFFAOYSA-M sodium chloroacetate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CCl FDRCDNZGSXJAFP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229960002622 triacetin Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2002/00—Crystal-structural characteristics
- C01P2002/80—Crystal-structural characteristics defined by measured data other than those specified in group C01P2002/70
- C01P2002/88—Crystal-structural characteristics defined by measured data other than those specified in group C01P2002/70 by thermal analysis data, e.g. TGA, DTA, DSC
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种功能化离子液体修饰的碳纳米管及其固定化脂肪酶的方法。本发明通过在碳纳米管表面分别引入带有烷基、羧基、氨基、羟基等官能团的功能化离子液体，与酶分子氨基酸残基发生静电、氢键、疏水、共价等作用，增强载体与酶的结合力，改变酶所处的微环境，从而改善固定化酶的催化性能。本发明将功能性离子液体修饰碳纳米管用于脂肪酶的固定化，是脂肪酶固定化方法的一个创新。
Description
技术领域
本发明属于固定化酶技术和催化剂载体领域，涉及一种功能化离子液体修饰的碳纳米管在脂肪酶固定化中的应用。
背景技术
脂肪酶(EC3.1.1.3)能够催化天然底物进行油脂水解，广泛应用于医药、化工、食品、饲料和能源等行业，成为目前被重点研究的酶催化剂之一。
由于脂肪酶的化学本质为可溶性的蛋白质，游离的脂肪酶在工业应用中会遇到一系列的问题。如水相体系中游离酶在催化反应后难以分离；在反应过程中催化性能容易受到底物、产物等其它因素的影响；操作条件极端等。固定化酶具有稳定性好、能重复使用、易从反应系统中分离、便于运输和储存、有利于生产的连续化和自动化等优点，因而相比于游离酶具有更广阔的实际应用空间。载体作为固定化酶的一部分，其结构和性能对固定化酶的催化性能有着很大的影响，设计、开发和制备性能更加优异的载体材料已成为固定化酶研究的重点内容。
碳纳米管是由单层或多层石墨片按一定旋转角度绕中心轴卷曲成的纳米级圆管，具有较大的比表面积、有序的纳米孔道结构、良好的力学/电学/热学性能、突出的化学稳定性、生物相容性和可控的表面官能化修饰等特性，使它在生物医药及催化载体应用方面有着巨大的潜力，作为一种新型高效的酶固定化载体获得了生物、化学、材料、医学等众多领域研究者的广泛关注。现有技术中，专利CN104404027A成功将多种酶分别固定于碳纳米管上。专利CN101329296通过将葡萄糖酶负载在磁性碳纳米管复合材料上，从而制备出生物传感器。
尽管酶通过物理吸附方式可以直接吸附到碳纳米管上，但酶分子与载体结合力不强，容易导致酶的固定化效率及稳定性降低，而且酶易从载体脱落并污染催化反应产物等。此外，酶固定化后其催化作用由均相转移到多相，由此带来的扩散限制效应、空间位阻、分配效应等对酶的催化特性有很大影响。
离子液体被称为是“设计者的溶剂”，其结构可调性是离子液体最重要的特性。通过各种结构阴、阳离子的配对，或在阴和/或阳离子中引入不同的官能团从而调整离子液体的化学组成，实现离子液体物化性质的改变，从而得到具有所需性质的功能专一的离子液体，即功能化离子液体。将功能性离子液体修饰碳纳米管用于脂肪酶的固定化，是提高固定化酶的稳定性、催化活性的一个创新方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问扩散限制效应、催题在于现有固定化脂肪酶技术的不足，即固定化脂肪酶的稳定性、化活性存在改进的空间。
为了解决该技术问题，本发明提供了一种功能化离子液体修饰多壁碳纳米管固定化脂肪酶的方法。
具体的，本发明的技术方案为：
一种功能化离子液体修饰的碳纳米管，其中，纳米管表面存在能与酶氨基酸残基作用结合的来自于功能化离子液体的有机官能团。
本发明所述的功能化离子液体修饰的碳纳米管，其中，所述功能化离子液体的阳离子为含不同官能团的咪唑类离子。
本发明所述的功能化离子液体修饰的碳纳米管，其中，所述官能团为烷基、羧基、羟基或氨基。
本发明所述的功能化离子液体修饰的碳纳米管，其中，所述的功能化离子液体的阴离子是卤素离子、四氟硼酸根亲水阴离子或六氟磷酸根疏水阴离子。
本发明所述的功能化离子液体修饰的碳纳米管，其中，所述碳纳米管长度>5um，直径10-20 nm。
本发明所述的功能化离子液体修饰的碳纳米管，其中，还包括利用含硝酸和硫酸的混酸羧基化处理多壁碳纳米管的步骤。
本发明还提供了两种不同的利用功能化离子液体修饰碳纳米管的方法。
一种利用功能化离子液体修饰碳纳米管的方法，其中，具体步骤如下（该方法的原理图见附图1a）：
（1）用2.6mol/L的硝酸纯化多壁碳纳米管；
（2） 利用含硫酸和硝酸的混酸羧基化处理多壁碳纳米管
（3）分离获得步骤（2）得到的多壁碳纳米管，加入1-（3-氨基丙基）咪唑进行酰氯化反应；
（4）加入卤代烷烃、含羧基的卤代烷烃、含羟基的卤代烷烃或含氨基的卤代烷烃与步骤（3）得到的固体进行反应；
（5）将步骤（4）得到的固体与NaBF4或KPF6进行阴离子交换获得利用功能化离子液体修饰碳纳米管；
（6）将步骤（5）获得固体进行洗涤提纯。
一种利用功能化离子液体修饰碳纳米管的方法，其中，具体步骤如下（该方法的原理图见附图1b）：
（1）用2.6mol/L的硝酸纯化多壁碳纳米管；
（2）利用含硫酸和硝酸的混酸羧基化处理多壁碳纳米管；
（3）利用烷基咪唑类化合物与3-溴丙胺氢溴酸盐反应，纯化得氨基官能化离子液体即IL-NH2；
（4）将步骤（2）得到的多壁碳纳米管与步骤（3）得到的IL-NH2进行反应；
（5）将步骤（4）得到的固体与NaBF4或KPF6进行阴离子交换获得利用功能化离子液体修饰碳纳米管；
（6）将步骤（5）获得固体进行洗涤提纯。
利用上述任一功能化离子液体修饰的碳纳米管固定化脂肪酶的方法，其中，具体的步骤为：将脂肪酶与碳纳米管加入pH=7.0的PBS缓冲液中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤，得固定化酶。
本发明所述的方法，其中，所述脂肪酶与碳纳米管的质量比为1: 2.5。
本发明中，所述的脂肪酶为Lipozyme CALB L、猪胰脂肪酶或褶皱假丝酵母脂肪酶。
在本发明的有益效果在于：
1. 该碳纳米管改善了脂肪酶在固定化载体上的酶学性质，解决了当前固定化酶领域普遍存在的载体负载量效率低、扩散限制作用、固定化酶活性不够高，而且当表面修饰基团与酶以化学键共价结合时，往往由于酶的三维构像及其柔性受到限制而影响酶活等问题。
2. 本发明使用的载体多壁碳纳米管价格便宜，容易获取。
3. 本发明将功能性离子液体修饰碳纳米管用于脂肪酶的固定化，丰富了固定化脂肪酶的方法。
4. 本发明提供的功能化离子液体修饰的碳纳米管，其表面存在着能与酶氨基酸残基间产生静电、氢键、疏水、共价结合等作用的离子液体有机官能团，既能与酶有效结合改善酶学性质，又不会对酶结构造成大的破坏。
5. 本发明制备的固定化酶粒径较小，长度>5um，直径10-20 nm，在进一步用于各类酶反应器中进行酶催化反应是具备优势。
6. 本发明提供的功能化离子液体修饰的碳纳米管固定化的酶可以通过简单过滤与产物分离并回收且固定化酶表观活性和重复使用效果良好。
附图说明
图1 为功能化离子液体合成以及嫁接在碳纳米管表面的原理图；
其中，图（a）为功能化离子液体合成以及嫁接在碳纳米管表面的过程图，其中R为烷基、羧基、羟基或氨基的有机官能团；图（b）为有机官能团为烷基的功能化离子液体修饰的碳纳米管的制备过程图，其中R为甲基、乙基或丁基等烷基。
图2 实施案例1制备的功能化离子液体修饰碳纳米管热重图谱。
图3 温度对实施例1的固定化酶活力的影响图。
图4 实施例1和实施例 4固定化酶的操作稳定性图。
其中，图（a）为实施案例1功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶的操作稳定性图；图（b）为实施案例4功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶的操作稳定性。
具体实施方式
实施例1
(1) 碳纳米管纯化及氧化：取1g原始碳纳米管于2.6M硝酸溶液中回流搅拌24h，静置后，除去上清液，过滤并洗涤，在真空干燥箱中干燥过夜，研磨备用。将10mg纯化碳纳米管加入到40ml浓硝酸和浓硫酸混合液中，超声3h，加水稀释后过滤洗涤至中性，真空干燥过夜，研磨备用，得羧基化碳纳米管（MWCNTs-COOH）。
(2) 功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶载体的制备：将一定摩尔比的1-甲基咪唑和3-溴丙胺氢溴酸盐于无水乙醇溶剂中，回流反应24h。反应产物除去溶剂及挥发性的未反应物后用少量水溶解，加入氢氧化钾调节pH至8.0。所得溶液减压蒸馏除去大部分水后真空干燥至恒重，用乙醇—四氢呋喃混合溶剂提取产物，收集滤液减压蒸馏回收溶剂后再真空干燥至恒重，得到黄色粘稠状液体1-（1-氨基丙基）-3-甲基咪唑溴盐（IL-NH2）。将MWCNTs-COOH、IL-NH2、DCC溶于200ml DMF中，超声15min后，在45-60℃油浴中搅拌24-36h，过滤洗涤后真空干燥得MWCNTs-IL。
(3) 酶固定化：取50ml pH=7.0的PBS缓冲液加入锥形瓶中，再加入0.5g碳纳米管，取0.2g PPL加入锥形瓶中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤洗涤，得固定化酶。
（4）酶活测定：载体固定化酶水解三乙酸甘油酯乳化液为探针反应。在温度40℃，pH为7.0时，采用酸碱滴定法测定该固定化酶的活力。在100 ml的锥形瓶中加入50 ml的去离子水、2 g三乙酸甘油脂和10 ml的pH值为7.0的磷酸缓冲液，磁力搅拌器强力搅拌10 min使其成为乳浊液。通过pH仪对乳浊液的pH值进行记录，当乳浊液的pH值稳定后，记录为初始pH值。加入0.1 g的多壁碳纳米管固定化脂肪酶，环境温度为40℃。平稳搅拌反应30 min后立即加入4.5 ml的丙酮终止反应。测定溶液pH值记录为终了值，然后用0.05 mol/L的氢氧化钠溶液缓慢将溶液终了值滴定回归pH初始值，记录消耗的氢氧化钠量。
其中，酶活力单位1U定义为在环境温度为40℃时，每分钟催化三乙酸甘油脂释放1µmol乙酸所需要的酶量。计算公式为：
U=V*50/(30*0.1)=16.67V
其中：V—耗用的NaOH溶液的体积，ml；
50—每毫升NaOH溶液含有的NaOH的微摩尔数；
30—反应时间，min；
0.1—游离酶或固定化酶量，g。
经测定以离子液体修饰的多壁碳纳米管为载体的固定化酶的酶活是261U/g，每克多壁碳纳米管固定化脂肪酶酶蛋白负载量是0.198g，比未用离子液体修饰载体固定化酶的酶活提高了20%，酶蛋白负载量提高了15%。其中，图2为制备的本实施例制备的功能化离子液体修饰碳纳米管热重图谱。
按照本领域考察温度稳定性的常规方法考察了该固定化酶在40-60℃范围内的温度稳定性，结果如图3。未经修饰的碳纳米管固定化酶的最佳反应温度在60℃，本发明所制备的功能化离子液体修饰碳纳米管固定化对的PPL的最佳反应温度在65℃，而游离酶的最佳反应温度在45℃，可见本发明所制备的固定化载体固定酶，其温度稳定性较之游离酶明显提高。
按照本领域考察酶操作稳定性的常规方法考察了该功能化离子液体修饰的碳纳米管和未经修饰的碳纳米管所固定的PPL，结果如图4(a)。由图4(a)可知本发明提供的经功能化离子液体修饰的碳纳米管所固定化的PPL较之未修饰的碳纳米管所固定化的PPL具有优越的操作稳定性，在5次重复使用之后，前者仍保持其初始酶活的49.6%，比后者高了近20%。
实施例2
1) 碳纳米管纯化及氧化：同实施案例1所述。
2)功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶载体的制备：将一定摩尔比的1-乙基咪唑和3-溴丙胺氢溴酸盐于无水乙醇溶剂中，回流反应24h。反应产物除去溶剂及挥发性的未反应物后用少量水溶解，加入氢氧化钾调节pH至8.0。所得溶液减压蒸馏除去大部分水后真空干燥至恒重，用乙醇—四氢呋喃混合溶剂提取产物，收集滤液减压蒸馏回收溶剂后再真空干燥至恒重，得到黄色粘稠状液体1-（1-氨基丙基）-3-乙基咪唑溴盐（IL-NH2）。将MWCNTs-COOH、IL-NH2、DCC溶于200ml DMF中，超声15min后，在45-60℃油浴中搅拌24-36h，过滤洗涤后真空干燥得MWCNT-IL。
3) 酶的固定化：取50ml pH=7.0的PBS缓冲液加入锥形瓶中，再加入0.5g修饰后的碳纳米管，取0.2g PPL加入锥形瓶中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤洗涤得固定化酶。
4)酶活测定：酶活测定方法同实施例1。经测定以离子液体修饰的多壁碳纳米管为载体的固定化酶的酶活是213U/g，每克多壁碳纳米管固定化酶酶蛋白负载量是0.160g，比未用离子液体修饰载体固定化酶的酶活提高了16%，酶蛋白负载量提高了13%。
实施例3
1)碳纳米管纯化及氧化：同实施案例1所述。
2)功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶载体的制备：将一定摩尔比的1-丁基咪唑和3-溴丙胺氢溴酸盐于无水乙醇溶剂中，回流反应24h。反应产物除去溶剂及挥发性的未反应物后用少量水溶解，加入氢氧化钾调节pH至8.0。所得溶液减压蒸馏除去大部分水后真空干燥至恒重，用乙醇—四氢呋喃混合溶剂提取产物，收集滤液减压蒸馏回收溶剂后再真空干燥至恒重，得到黄色粘稠状液体1-（1-氨基丙基）-3-丁基咪唑溴盐（IL-NH2）。将MWCNTs-COOH、IL-NH2、DCC溶于200ml DMF中，超声15min后，在45-60℃油浴中搅拌24-36h，洗涤过滤后60-80℃真空干燥得产物，将得到的产物与NaBF4在水中搅拌48h，过滤洗涤后真空干燥得MWCNT-IL。
3)酶固定化：取50ml pH=7.0的PBS缓冲液加入锥形瓶中，再加入0.1g碳纳米管，取3ml Lipozyme CALB L 加入锥形瓶中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤洗涤得固定化酶。
4)酶活测定：酶活测定方法同实施例1。经测定以离子液体修饰的多壁碳纳米管为载体的固定化Lipozyme CALB L的酶活是4268U/g，每克多壁碳纳米管固定化脂肪酶酶蛋白负载量是0.06g，比未用离子液体修饰载体固定化酶的酶活提高了16%，酶蛋白负载量提高了15%。
实施例4
1)碳纳米管纯化及氧化：同实施案例1所述。
2)功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶载体的制备：取500mg MWCNTs-COOH于150ml氯化亚砜中搅拌回流24-30h，用无水THF洗涤过滤，真空干燥得MWCNTs-COCl。将MWCNTs-COCl与过量1-（3-氨基丙基）咪唑在120℃反应24-30h，用无水THF、1N HCl、饱和NaHCO3、水和乙醇洗涤过滤，真空干燥得产物。接着引入官能团物质氯乙酸，然后加入NaBF4进行离子交换，用水洗涤过滤，干燥得MWCNTs-IL。
3)酶的固定化：取50ml pH=7.0的PBS缓冲液加入锥形瓶中，再加入0.1g碳纳米管，取3ml Lipozyme CALB L 加入锥形瓶中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤洗涤得固定化酶。
4) 酶活测定：酶活测定方法同实施例1。经测定以离子液体修饰的多壁碳纳米管为载体的固定化酶的酶活是5038U/g，每克多壁碳纳米管固定化脂肪酶酶蛋白负载量是0.083g，比未用离子液体修饰载体固定化酶的酶活提高了55%，酶蛋白负载量提高了18%。
按照本领域考察酶操作稳定性的常规方法考察了该功能化离子液体修饰的碳纳米管和未经修饰的碳纳米管所固定的Lipozyme CALB L，结果如图4(b)。由图4(b)可知本发明提供的经功能化离子液体修饰的碳纳米管所固定化的PPL较之未修饰的碳纳米管所固定化的PPL具有优越的操作稳定性，在5次重复使用之后，前者仍保持其初始酶活的84%，而后者仅保持其初始酶活的50%。
实施例5
1)碳纳米管纯化及氧化：同实施案例1所述。
2)功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶载体的制备：取500mg MWCNTs-COOH于150ml氯化亚砜中搅拌回流24-30h，用无水THF洗涤过滤，真空干燥得MWCNTs-COCl。将MWCNTs-COCl与过量1-（3-氨基丙基）咪唑在120℃反应24-30h，用无水THF、1N HCl、饱和NaHCO3、水和乙醇洗涤过滤，真空干燥得产物。接着引入官能团物质溴乙醇，然后加入KPF6进行离子交换，得到MWCNTs-IL。
3)酶的固定化：取50ml pH=7.0的PBS缓冲液加入锥形瓶中，再加入0.5g碳纳米管，取0.2g CRL加入锥形瓶中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤洗涤得固定化酶。
4)酶活测定：酶活测定方法同实施例1。经测定以离子液体修饰的多壁碳纳米管为载体的固定化酶的酶活是30U/mg，每克多壁碳纳米管固定化脂肪酶酶蛋白负载量是0.052g，比未用离子液体修饰载体固定化酶的酶活提高了20%，酶蛋白负载量提高了8%。
实施例6
1）碳纳米管纯化及氧化：同实施案例1所述。
2）功能化离子液体修饰碳纳米管固定化酶载体的制备：取500mg MWCNTs-COOH于150ml氯化亚砜中搅拌回流24-30h，用无水THF洗涤过滤，真空干燥得MWCNTs-COCl。将MWCNTs-COCl与过量1-（3-氨基丙基）咪唑在120℃反应24-30h，用无水THF、1N HCl、饱和NaHCO3、水和乙醇洗涤过滤，真空干燥得产物。接着引入官能团物质氯乙胺，然后加入KPF6进行离子交换，得到MWCNTs-IL。
3）酶的固定化：取50ml pH=7.0的PBS缓冲液加入锥形瓶中，再加入0.5g碳纳米管，取0.2g CRL加入锥形瓶中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤洗涤得固定化酶。
4）酶活测定：酶活测定方法同实施例1。经测定以离子液体修饰的多壁碳纳米管为载体的固定化酶的酶活是62U/mg，每克多壁碳纳米管固定化脂肪酶酶蛋白负载量是0.095g，比未用离子液体修饰载体固定化酶的酶活提高了39%，酶蛋白负载量提高了17%。
Claims (10)
1.一种功能化离子液体修饰的碳纳米管，其特征在于，纳米管表面存在能与酶氨基酸残基作用结合的来自于功能化离子液体的有机官能团。
2.根据权利要求1所述功能化离子液体修饰的碳纳米管，其特征在于，所述功能化离子液体的阳离子为含不同官能团的咪唑类离子。
3.根据权利要求2所述功能化离子液体修饰的碳纳米管，其特征在于所述官能团为烷基、羧基、羟基或氨基。
4.根据权利要求1所述功能化离子液体修饰的碳纳米管，其特征在于，所述的功能化离子液体的阴离子是卤素离子、四氟硼酸根亲水阴离子或六氟磷酸根疏水阴离子。
5.根据权利要求1所述所述功能化离子液体修饰的碳纳米管，其特征在于，所述碳纳米管长度>5um，直径10-20 nm。
6.根据权利要求5所述功能化离子液体修饰的碳纳米管，其特征在于，还包括利用含硝酸和硫酸的混酸羧基化处理多壁碳纳米管的步骤。
7.一种利用功能化离子液体修饰碳纳米管的方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）用2.6mol/L的硝酸纯化多壁碳纳米管；
（2） 利用含硫酸和硝酸的混酸羧基化处理多壁碳纳米管；
（3）分离获得步骤（2）得到的多壁碳纳米管，加入1-（3-氨基丙基）咪唑进行酰氯化反应；
（4）加入卤代烷烃、含羧基的卤代烷烃、含羟基的卤代烷烃或含氨基的卤代烷烃与步骤（3）得到的固体进行反应；
（5）将步骤（4）得到的固体与NaBF4或KPF6进行阴离子交换获得利用功能化离子液体修饰碳纳米管；
（6）将步骤（5）获得固体进行洗涤提纯。
8.一种利用功能化离子液体修饰碳纳米管的方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）用2.6mol/L的硝酸纯化多壁碳纳米管；
（2）利用含硫酸和硝酸的混酸羧基化处理多壁碳纳米管；
（3）利用烷基咪唑类化合物与3-溴丙胺氢溴酸盐反应，纯化得氨基官能化离子液体即IL-NH2；
（4）将步骤（2）得到的多壁碳纳米管与步骤（3）得到的IL-NH2进行反应；
（5）将步骤（4）得到的固体与NaBF4或KPF6进行阴离子交换获得利用功能化离子液体修饰碳纳米管；
（6）将步骤（5）获得固体进行洗涤提纯。
9.利用上述任一功能化离子液体修饰的碳纳米管固定化脂肪酶的方法，其特征在于，具体的步骤为：将脂肪酶与碳纳米管加入pH=7.0的PBS缓冲液中，在温度30℃的振荡器中震荡5h，抽滤，得固定化酶。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶与碳纳米管的质量比为1:2.5。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610310527.3A CN105836731A (zh) | 2016-05-11 | 2016-05-11 | 一种功能化离子液体修饰的碳纳米管及其固定化脂肪酶的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610310527.3A CN105836731A (zh) | 2016-05-11 | 2016-05-11 | 一种功能化离子液体修饰的碳纳米管及其固定化脂肪酶的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105836731A true CN105836731A (zh) | 2016-08-10 |
Family
ID=56591666
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610310527.3A Pending CN105836731A (zh) | 2016-05-11 | 2016-05-11 | 一种功能化离子液体修饰的碳纳米管及其固定化脂肪酶的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105836731A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108034651A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-05-15 | 天津现代职业技术学院 | 一种协同固载l-阿拉伯糖异构酶和离子液体的方法 |
| CN108585215A (zh) * | 2018-03-21 | 2018-09-28 | 孙祥章 | 一种高效复合酶污水处理装置及工艺 |
| CN108685714A (zh) * | 2018-07-12 | 2018-10-23 | 高昕文 | 一种除油面膜基材的制备方法 |
| CN110335761A (zh) * | 2019-06-04 | 2019-10-15 | 广东工业大学 | 一种碳基聚苯胺复合材料及其制备方法和应用 |
| KR20200095418A (ko) * | 2019-01-31 | 2020-08-10 | 고려대학교 산학협력단 | 효소-담체 복합체 |
| US11254925B2 (en) | 2019-01-31 | 2022-02-22 | Korea Universitv Research And Business Foundation | Enzyme-porous carbon composite |
| CN114480344A (zh) * | 2022-03-15 | 2022-05-13 | 扬州大学 | 阴离子调控的功能化介孔聚离子固定化脂肪酶催化剂的制备方法及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101724619A (zh) * | 2009-12-24 | 2010-06-09 | 南京工业大学 | 一种功能化离子液体修饰的介孔分子筛在酶固定化中的应用 |
| CN102507694A (zh) * | 2011-11-14 | 2012-06-20 | 西北师范大学 | 一种MWNTs-IL/Cyt c/GCE的H2O2生物传感器的制备方法 |
-
2016
- 2016-05-11 CN CN201610310527.3A patent/CN105836731A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101724619A (zh) * | 2009-12-24 | 2010-06-09 | 南京工业大学 | 一种功能化离子液体修饰的介孔分子筛在酶固定化中的应用 |
| CN102507694A (zh) * | 2011-11-14 | 2012-06-20 | 西北师范大学 | 一种MWNTs-IL/Cyt c/GCE的H2O2生物传感器的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| XIUHUI LIU ET AL.: ""Enzymes immobilized on amine-terminated ionic liquid-functionalized carbon nanotube for hydrogen peroxide determination"", 《TALANTA》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108034651A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-05-15 | 天津现代职业技术学院 | 一种协同固载l-阿拉伯糖异构酶和离子液体的方法 |
| CN108585215A (zh) * | 2018-03-21 | 2018-09-28 | 孙祥章 | 一种高效复合酶污水处理装置及工艺 |
| CN108685714A (zh) * | 2018-07-12 | 2018-10-23 | 高昕文 | 一种除油面膜基材的制备方法 |
| KR20200095418A (ko) * | 2019-01-31 | 2020-08-10 | 고려대학교 산학협력단 | 효소-담체 복합체 |
| KR102276595B1 (ko) * | 2019-01-31 | 2021-07-13 | 고려대학교 산학협력단 | 효소-담체 복합체 |
| US11254925B2 (en) | 2019-01-31 | 2022-02-22 | Korea Universitv Research And Business Foundation | Enzyme-porous carbon composite |
| US11441143B2 (en) | 2019-01-31 | 2022-09-13 | Korea Univercity Research and Business Foundation | Enzyme-carrier complex |
| CN110335761A (zh) * | 2019-06-04 | 2019-10-15 | 广东工业大学 | 一种碳基聚苯胺复合材料及其制备方法和应用 |
| CN110335761B (zh) * | 2019-06-04 | 2021-10-19 | 广东工业大学 | 一种碳基聚苯胺复合材料及其制备方法和应用 |
| CN114480344A (zh) * | 2022-03-15 | 2022-05-13 | 扬州大学 | 阴离子调控的功能化介孔聚离子固定化脂肪酶催化剂的制备方法及其应用 |
| CN114480344B (zh) * | 2022-03-15 | 2023-10-20 | 扬州大学 | 阴离子调控的功能化介孔聚离子固定化脂肪酶催化剂的制备方法及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105836731A (zh) | 一种功能化离子液体修饰的碳纳米管及其固定化脂肪酶的方法 | |
| Han et al. | Preparation and characterization of Fe3O4-NH2@ 4-arm-PEG-NH2, a novel magnetic four-arm polymer-nanoparticle composite for cellulase immobilization | |
| Zhang et al. | Interactions of graphene and graphene oxide with proteins and peptides | |
| Zhang et al. | Cerium oxide–graphene as the matrix for cholesterol sensor | |
| Liu et al. | Electrospun nanofibrous membranes containing epoxy groups and hydrophilic polyethylene oxide chain for highly active and stable covalent immobilization of lipase | |
| CN101724619B (zh) | 一种功能化离子液体修饰的介孔分子筛在酶固定化中的应用 | |
| CN103466595B (zh) | 一种制备二茂铁功能化碳纳米管复合材料的方法 | |
| CN101329296B (zh) | 一种基于磁性碳纳米管的葡萄糖氧化酶电极及其制备方法 | |
| Bai et al. | Immobilization of lipase on aminopropyl-grafted mesoporous silica nanotubes for the resolution of (R, S)-1-phenylethanol | |
| Mei et al. | One-pot fabrication of chitin-shellac composite microspheres for efficient enzyme immobilization | |
| CN101177261B (zh) | 生物相容性的纤维素功能化碳纳米管的制备方法 | |
| CN109266639B (zh) | 一种双重固定化酶及其制备方法和应用 | |
| Li et al. | Nano-sized mesoporous hydrogen-bonded organic frameworks for in situ enzyme immobilization | |
| Raza et al. | Immobilizing cellulase on multi-layered magnetic hollow particles: preparation, bio-catalysis and adsorption performances | |
| Quan et al. | Fabrication of glycopolymer/MWCNTs composite nanofibers and its enzyme immobilization applications | |
| CN106582810A (zh) | 一种石墨烯固定酶催化剂的制备方法 | |
| Das et al. | Comparative characterization of peanut β-amylase immobilization onto graphene oxide and graphene oxide carbon nanotubes by solid-state NMR | |
| Tan et al. | Lipase-polydopamine magnetic hydrogel microspheres for the synthesis of octenyl succinic anhydride starch | |
| CN101185852A (zh) | 含反应性基团磷脂改性腈纶超细纤维膜的制备方法和应用 | |
| CN106400466A (zh) | 一种碳纤维改性方法制备固定化载体材料 | |
| Luan et al. | Microporous regenerated cellulose-based macrogels for covalent immobilization of enzymes | |
| CN108866037A (zh) | 一种以多孔纳米金为载体固定脂肪酶的制备方法和应用 | |
| CN101353654B (zh) | 一种脂肪酶凝胶颗粒及其制备方法 | |
| CN110343693B (zh) | 一种磁性固定化酶载体及其制备方法 | |
| WO2024066402A1 (zh) | 酶固定化载体及其制备方法、固定化酶及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160810 |