CN105806840A - 定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒及检测方法 - Google Patents

Abstract

一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其组成为：反应管，所述的反应管内装有由聚丙烯筛板固定的硅胶粉；试剂管A，所述的试剂管A内装有试剂A氢氧化钠；试剂管B，所述试剂管B内装有试剂B连二亚硫酸钠；连接管；注射器；蒸馏水；百草枯标准色谱卡；包装盒子及泡沫板；本发明还涉及应用该试剂盒进行检测的方法。与现有技术相比，本发明可以实现对血清或尿液中的百草枯的富集，同时消除样品中其他显色物质的干扰；使用时，可以根据实际情况对取样量进行合理选择；通过与标准色谱卡进行比对，可以快速半定量检测出百草枯的含量。本发明试剂盒灵敏度高，操作方法简便、检测快速、重现性好，所需试剂量极少，便于推广应用。

Description

定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒及检测方法

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，特别是一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒。本发明还涉及应用前述试剂盒进行检测的方法。

背景技术

百草枯又名对草快，化学名为1,1'-二甲基-4,4'-二氯二吡啶阳离子盐，为有机杂环类接触性脱叶剂及除草剂。人体误服或直接接触百草枯后，其可通过胃肠道、呼吸道及皮肤粘膜吸收，引起致死性的肺纤维化、肝肾功能损伤，致死率高达80%，因此建立一种能够快速准确测定百草枯中毒体液患者体液内百草枯残留量，不仅可以准确的预测哪些患者有希望救治，节省无效，或是可能给患者带来潜在不适的治疗方案，还可以根据血药水平指标，判断患者的存活率，指导临床治疗，同时，也可以对新的治疗方法进行测定与评估。

目前，百草枯浓度的检测主要应用于环境卫生、公共卫生和司法鉴定等方面，检测方法多为高度灵敏的分析化学方法，如高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法、免疫测定法、毛细管电泳法等。这些方法虽然具有较高的灵敏度，但是仪器昂贵，检测成本高，测定时间长。而百草枯中毒病人起病急，进展快，几乎全部来自于农村，绝大多数在县级或地市级医院就诊，因此上述方法在中小医院检验科不便开展，也不适用于中毒急诊病人。

现有技术中，已有部分研究者开发出基于分光光度法的试剂盒用于检测体液中的百草枯。但在实际应用时，此类试剂盒会受到样品本身颜色的影响，灵敏度较低，容易造成较大的误差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种操作简便，灵敏度高，能够快速定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供了一种应用前述试剂盒定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特点是，它由以下物品构成：

（1）反应管，2个；

所述反应管呈两端开口，反应管的下端呈漏斗状；所述反应管内装有由聚丙烯筛板固定的硅胶粉；

（2）试剂管A，1个；

所述试剂管A内装有试剂A氢氧化钠0.1g；

（3）试剂管B，1个；

所述试剂管B内装有试剂B连二亚硫酸钠0.1g；

（4）连接管，1根；

（5）注射器A，规格2mL，1支；

（6）注射器B，规格2mL，1支；

（7）蒸馏水，1支；

（8）百草枯标准色谱卡，1张；

（9）包装盒子1个，泡沫板1块，其大小与包装盒子的底面相同，装于盒子中；泡沫板上有不少于上述物品数量的凹槽，上述各物品分别对应放置于这些凹槽中。

进一步地，所述的试剂A还可以是0.1g的碳酸钠。

进一步地，所述的反应管是由聚丙烯材料制成的透明管。

进一步地，所述的硅胶粉的目数为100~200目。

进一步地，所述的反应管、试剂管A及试剂管B均设有刻度线。

进一步地，所述的连接管为硅胶连接管。

进一步地，所述的百草枯标准色谱卡指示的是使用蒸馏水配制的浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL、10.0μg/mL的百草枯标准溶液所对应的色谱。

本发明还提供了一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的方法，其特点是：该方法应用了以上技术方案所述的试剂盒；每次检测其中一种样品；其检测步骤如下：

（1）配制试剂：用注射器A吸取蒸馏水将试剂管A与试剂管B中的试剂溶解并定容至刻度线；

（2）润洗：用注射器A吸取1ml蒸馏水注入反应管中，取下针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远离该注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，使蒸馏水通过反应管；

（3）注入样品：用注射器B抽取1mL血清或尿液样品，注入反应管中，取下针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远该离注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，使样品通过反应管；再按照步骤（2）的操作，使蒸馏水通过反应管，用以去除血清或尿液样品中的废物；

（4）反应：用注射器A吸取蒸馏水将注射器B清洗2~3次；用注射器B吸取0.5mL试剂管A中溶液注入反应管中，然后取下该注射器针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远离该注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，待反应管中溶液下降至反应管刻度线处，停止拉动，取下该注射器针筒；再次用注射器A吸取蒸馏水将注射器B清洗2~3次；用注射器B吸取0.2mL试剂管B中溶液注入反应管中，静置5分钟，观察结果；

（5）检测：若反应管中显蓝色，则说明血清或尿液中含有百草枯，颜色越深含量越高；若反应管中无颜色变化，则样品中不含百草枯或百草枯浓度低于0.5μg/mL，此时可以更换新的反应管，将样品注入量增加至2～20mL，继续重复上述步骤（2）~（4），若反应管中仍然无颜色变化，则表明样品中不含百草枯；

（6）比对：将步骤（5）得到的反应管中的颜色与百草枯标准色谱卡进行比对，即可大致判断样品中百草枯的含量。

本发明所述的百草枯标准色谱卡是应用以上技术方案所述的试剂盒（试剂盒内含有除百草枯标准色谱卡以外的其他物品）制作出来的。在制作过程中，本发明的发明人经过多次试验，将健康人血清、健康人尿液和蒸馏水配制的相同梯度浓度的百草枯标准溶液所对应的色谱做了对比，发现血清和尿液样品中的其他组分不会对百草枯的含量造成干扰，使用健康人血清和健康人尿液配制的某一浓度的百草枯标准溶液与使用蒸馏水配制的同一浓度的百草枯标准溶液在反应管中呈现的颜色是等同的。因此，选择使用无污染、更容易获得的蒸馏水配制百草枯标准溶液来制作百草枯标准色谱卡。

本发明所述的百草枯标准色谱卡的制作方法：用蒸馏水配制浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL、10.0μg/mL的百草枯标准溶液；分别准确移取各浓度的百草枯标准溶液1.0mL，用以代替样品，使用以上技术方案所述的试剂盒（试剂盒内含有除百草枯标准色谱卡以外的其他物品），按照上述一种快速定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的方法中的步骤（1）~（5），制备不同浓度下的显色管，各管所对应的颜色即为标准色谱；再通过印刷技术将标准色谱制成百草枯标准色谱卡。

本发明所述的一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的方法中，若仅需要定性检测血清或尿液中的百草枯，则可以应用以上技术方案所述的试剂盒，按照上述一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的方法所述的步骤（1）~（5）进行操作即可。

与现有技术相比，本发明将适量的硅胶粉填充于反应管中，制作成小型的硅胶柱，当含有百草枯的血清或尿液样品通过反应管时，可以实现对血清或尿液样品中的百草枯的富集，同时消除样品中其他显色物质的干扰；被吸附的百草枯无需洗脱，显色反应直接于反应管中进行。本发明能够定性检测1mL血清或尿液样品中含量大于0.5μg的百草枯，当样品中百草枯的浓度低于0.5μg/mL时，可以通过加大样品的注入量实现低浓度百草枯的定性检测；若被检测样品的反应管中显蓝色，将该颜色与标准色谱卡进行比对，可以快速半定量检测出百草枯的含量，特别适合现场快速检测血清或尿液中百草枯的含量，但又对结果准确度要求不太高的场所使用。本发明试剂盒携带方便，使用时，可以根据样品中百草枯的含量高低对取样量进行合理选择，操作简便，检测快速，重现性好，灵敏度高，所需试剂量较少，减少了对环境的二次污染，便于推广应用。

具体实施方式

以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。

实施例1，一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，它由以下物品构成：

（1）反应管，2个；

所述反应管呈两端开口，反应管的下端呈漏斗状；所述反应管内装有由聚丙烯筛板固定的硅胶粉；

（2）试剂管A，1个；

所述试剂管A内装有试剂A氢氧化钠0.1g；

（3）试剂管B，1个；

所述试剂管B内装有试剂B连二亚硫酸钠0.1g；

（4）连接管，1根；

（5）注射器A，规格2mL，1支；

（6）注射器B，规格2mL，1支；

（7）蒸馏水，1支；

（8）百草枯标准色谱卡，1张；

（9）包装盒子1个，泡沫板1块，其大小与包装盒子的底面相同，装于盒子中；泡沫板上有不少于上述物品数量的凹槽，上述各物品分别对应放置于这些凹槽中。

实施例2，一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，它由以下物品构成：

（1）反应管，2个；

所述反应管呈两端开口，反应管的下端呈漏斗状；所述反应管内装有由聚丙烯筛板固定的硅胶粉；

（2）试剂管A，1个；

所述试剂管A内装有试剂A碳酸钠0.1g；

（3）试剂管B，1个；

所述试剂管B内装有试剂B连二亚硫酸钠0.1g；

（4）连接管，1根；

（5）注射器A，规格2mL，1支；

（6）注射器B，规格2mL，1支；

（7）蒸馏水，1支；

（8）百草枯标准色谱卡，1张；

（9）包装盒子1个，泡沫板1块，其大小与包装盒子的底面相同，装于盒子中；泡沫板上有不少于上述物品数量的凹槽，上述各物品分别对应放置于这些凹槽中。

实施例3，实施例1或2所述的试剂盒，所述的反应管是由聚丙烯材料制成的透明管。

实施例4，实施例1—3任何一项所述的试剂盒，所述的硅胶粉的目数为100~200目。

实施例5，实施例1—4任何一项所述的试剂盒，所述的反应管、试剂管A及试剂管B均设有刻度线。

实施例6，实施例1—5任何一项所述的试剂盒，所述的连接管为硅胶连接管。

实施例7，实施例1—6任何一项所述的试剂盒，所述的百草枯标准色谱卡指示的是使用蒸馏水配制的浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL、10.0μg/mL的百草枯标准溶液所对应的色谱。

实施例8，利用实施例1—7任何一项所述的试剂盒进行定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的方法；每次检测其中一种样品；检测步骤如下：

（1）配制试剂：用注射器A吸取蒸馏水将试剂管A与试剂管B中的试剂溶解并定容至刻度线；

（2）润洗：用注射器A吸取1ml蒸馏水注入反应管中，取下针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远离该注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，使蒸馏水通过反应管；

（3）注入样品：用注射器B抽取1mL血清或尿液样品，注入反应管中，取下针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远该离注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，使样品通过反应管；再按照步骤（2）的操作，使蒸馏水通过反应管，用以去除血清或尿液样品中的废物；

（4）反应：用注射器A吸取蒸馏水将注射器B清洗2~3次；用注射器B吸取0.5mL试剂管A中溶液注入反应管中，然后取下该注射器针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远离该注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，待反应管中溶液下降至反应管刻度线处，停止拉动，取下该注射器针筒；再次用注射器A吸取蒸馏水将注射器B清洗2~3次；用注射器B吸取0.2mL试剂管B中溶液注入反应管中，静置5分钟，观察结果；

（5）检测：若反应管中显蓝色，则说明血清或尿液中含有百草枯，颜色越深含量越高；若反应管中无颜色变化，则样品中不含百草枯或百草枯浓度低于0.5μg/mL，此时可以更换新的反应管，将样品注入量增加至2～20mL，继续重复上述步骤（2）~（4），若反应管中仍然无颜色变化，则表明样品中不含百草枯；

（6）比对：将步骤（5）得到的反应管中的颜色与百草枯标准色谱卡进行比对，即可大致判断样品中百草枯的含量。

实施例9，采用实施例7所述的试剂盒进行定性检测百草枯中毒病人血清及尿液中百草枯的实验。

1、实验样品

实验用血清及尿液样品取自经血液检测为百草枯中毒的病人，采用高效液相色谱法测得其血液与尿液中百草枯的浓度分别为1.3μg/mL与12.3μg/mL。

2、检测方法

分别取上述病人的血清和尿液1mL，按照上述实施例8所述的方法的步骤（1）~（5）分别对两种样品进行检测，观察结果。

3、实验结果

（1）血清样品的反应管中呈淡蓝色，说明血液中含有百草枯，且浓度较低；

（2）尿液样品的反应管中呈深蓝色，说明尿液中含有百草枯，且浓度较高。

实施例10，采用实施例7所述的试剂盒进行定性检测百草枯中毒病人血清中百草枯的实验。

1、实验样品

实验用血清样品取自经血液检测为百草枯中毒的病人，采用高效液相色谱法测得其血液中百草枯的浓度分别为0.4μg/mL。

2、一次检测方法及结果

（1）检测方法：取上述病人的血清1mL，按照上述实施例8所述的方法的步骤（1）~（5）进行操作，对血清样品进行检测，观察结果。

（2）实验结果：反应管中无颜色变化，说明血液中百草枯浓度较低或不含百草枯。

3、二次检测方法及结果

（1）检测方法：更换新的反应管，取上述病人的血清5mL，按照上述实施例8所述的方法的步骤（2）~（4）对血清样品进行检测，观察结果。

（2）实验结果：反应管中呈淡蓝色，说明血清中含百草枯。

实施例11，采用实施例7所述的试剂盒进行定性及半定量检测百草枯中毒病人血清中百草枯的实验。

1、实验样品

实验用血清样品取自经血液检测为百草枯中毒的病人，采用高效液相色谱法测得其血液中百草枯的浓度为8.6μg/mL。

2、检测方法

取上述病人的血清1mL，按照上述实施例8所述的方法对血清样品进行检测，观察结果。

3、实验结果

反应管中呈蓝色，说明样品中存在百草枯；通过与百草枯标准色谱卡进行比对，反应管中的颜色介于8.0μg/mL和10.0μg/mL对应的相邻颜色之间，因此该1mL血清样品中百草枯的含量在8.0μg/mL～10.0μg/mL。

实施例12，采用实施例7所述的试剂盒进行定性及半定量检测非百草枯中毒病人的血清及尿液中百草枯的实验。

1、实验样品

实验用血清及尿液样品取自经血液检测为草甘膦、有机磷、除虫菊酯类的若干中毒的病人。

2、检测方法

分别取上述病人的血清和尿液1mL，按照上述实施例8所述的方法分别对两种样品进行检测，观察结果。

3、实验结果

血清和尿液样品的反应管中均无颜色变化。

实施例13，采用实施例7所述的试剂盒进行定性及半定量检测健康人的血清及尿液中百草枯的实验，作为对照。

1、实验样品

实验用血清及尿液样品取自经血液检测为身体健康的人。

2、检测方法

取上述健康人的血清3mL和尿液10mL，按照上述实施例8所述的方法分别对两种样品进行检测，观察结果。

3、实验结果

血清和尿液样品的反应管中均无颜色变化。

Claims (8)

1.一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特征在于，它由以下物品构成：

（1）反应管，2个；

所述反应管呈两端开口，反应管的下端呈漏斗状；所述反应管内装有由聚丙烯筛板固定的硅胶粉；

（2）试剂管A，1个；

所述试剂管A内装有试剂A氢氧化钠0.1g；

（3）试剂管B，1个；

所述试剂管B内装有试剂B连二亚硫酸钠0.1g；

（4）连接管，1根；

（5）注射器A，规格2mL，1支；

（6）注射器B，规格2mL，1支；

（7）蒸馏水，1支；

（8）百草枯标准色谱卡，1张；

（9）包装盒子1个，泡沫板1块，其大小与包装盒子的底面相同，装于盒子中；泡沫板上有不少于上述物品数量的凹槽，上述各物品分别对应放置于这些凹槽中。

2.根据权利要求1所述的一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特征在于，所述的试剂A还可以是0.1g的碳酸钠。

3.根据权利要求1所述的一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特征在于，所述的反应管为是由聚丙烯材料制成的透明管。

4.根据权利要求1所述的一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特征在于，所述的硅胶粉的目数为100~200目。

5.根据权利要求1所述的一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特征在于，所述的反应管、试剂管A及试剂管B均设有刻度线。

6.根据权利要求1所述的一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特征在于，所述的连接管为硅胶连接管。

7.根据权利要求1所述的一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒，其特征在于，所述的百草枯标准色谱卡指示的是使用蒸馏水配制的浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL、10.0μg/mL的百草枯标准溶液所对应的色谱。

8.一种定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的方法，其特征在于：应用权利要求1所述试剂盒；每次检测其中一种样品；检测步骤如下：

（1）配制试剂：用注射器A吸取蒸馏水将试剂管A与试剂管B中的试剂溶解并定容至刻度线；

（2）润洗：用注射器A吸取1ml蒸馏水注入反应管中，取下针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远离该注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，使蒸馏水通过反应管；

（3）注入样品：用注射器B抽取1mL血清或尿液样品，注入反应管中，取下针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远该离注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，使样品通过反应管；再按照步骤（2）的操作，使蒸馏水通过反应管，用以去除血清或尿液样品中的废物；

（4）反应：用注射器A吸取蒸馏水将注射器B清洗2~3次；用注射器B吸取0.5mL试剂管A中溶液注入反应管中，然后取下该注射器针头，用连接管将该注射器针筒的下端口与反应管的下端口连接，沿远离该注射器针筒下端口的方向拉动该注射器推杆，待反应管中溶液下降至反应管刻度线处，停止拉动，取下该注射器针筒；再次用注射器A吸取蒸馏水将注射器B清洗2~3次；用注射器B吸取0.2mL试剂管B中溶液注入反应管中，静置5分钟，观察结果；

（5）检测：若反应管中显蓝色，则说明血清或尿液中含有百草枯，颜色越深含量越高；若反应管中无颜色变化，则样品中不含百草枯或百草枯浓度低于0.5μg/mL，此时可以更换新的反应管，将样品注入量增加至2～20mL，继续重复上述步骤（2）~（4），若反应管中仍然无颜色变化，则表明样品中不含百草枯；

（6）比对：将步骤（5）得到的反应管中的颜色与百草枯标准色谱卡进行比对，即可大致判断样品中百草枯的含量。