CN105803113A - 一种同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种免疫捕获双重RT‑PCR同步检测百合隐症病毒和百合斑驳病毒的方法，其步骤包括在同一个PCR反应管中用LSV和LMoV的多克隆抗体特异性捕获LSV和LMoV粒子、利用LSV和LMoV的特异性引物进行双重反转录聚合酶链式反应RT‑PCR、琼脂糖凝胶电泳检测目的片段；该方法将ELISA和RT‑PCR结合，对现有的免疫捕获RT‑PCR进行了改进，实现了用免疫捕获RT‑PCR同步检测两种百合病毒LSV和LMoV，从而完善了免疫捕获RT‑PCR技术。

Description

一种同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法
技术领域
本发明涉及一种同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法，更进一步涉及一种用免疫捕获双重RT-PCR技术同步检测百合隐症病毒和百合斑驳病毒的方法。
背景技术
百合病毒自20世纪40年代被发现以来，已成为危害百合种球生产和鲜切花品质的世界性病害；至今被发现侵染百合病毒有20多种，其中百合隐症病毒(Lily symptomlessvirus，LSV)和百合斑驳病毒 (Lily mottle virus，LMoV)是发生较普遍、危害严重的2种病毒。
LSV属于香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)，是正义单链 RNA 病毒；LSV 基因组为不分段 RNA，全长为 8394 bp，5′端含帽子结构，3′端有polyA 尾巴，共有 6 个开放阅读框(ORF)，编码 4 个蛋白，依 5′至 3′分别编码：RNA 依赖的 RNA 聚合酶(RdRp)，三基因连锁结构(TGBp1-3)，外壳蛋白(CP)和核酸结合蛋白；LSV的ORF1为RdRp，编码一个蛋白(220kD)，与病毒在植物体内复制有关；ORF2、ORF3 和 ORF4 分别编码 TGBp1、TGBp2 和 TGBp3(25 kD，12 kD，7 kD)，是病毒在宿主体内运动的 3 个基因序列互相重叠的运动蛋白(MP)；ORF5为CP，编码唯一参与病毒颗粒形态构成的蛋白质(32kD)；ORF6推测是核酸结合蛋白(16kD)，该蛋白含有一个CysZ-CysZ结构的锌指结构域。
LMoV属于马铃薯Y病毒科、马铃薯Y病毒属（Potyvirus），病毒粒子为弯曲线状且呈螺旋对称，大小（650～900）nm ×（11～15）nm；病毒基因组为单分子正链RNA，约9.4kb，具有potyvirus属成员的典型基因组结构特征，包括一个Poly（A）尾巴，编码一个由3095个氨基酸组成的分子量为351.0 kDa的多聚蛋白；多聚蛋白通过自我剪切后形成外壳蛋白（CP）等10个不同大小的功能蛋白；LMoV CP亚基由274 aa组成，大小为30kDa左右，组装成外壳包裹病毒RNA。
防治百合病毒病较有效的手段是采用无毒繁殖材料或进行脱毒快繁，而这有赖于灵敏、快速和可靠的检测技术；基于病毒外壳蛋白抗原抗体反应的酶联免疫吸附法（ELISA）和基于病毒核酸的RT-PCR检测是目前较为广泛的检测病毒的方法；然而，ELISA检测一个反应体系只能完成一种病毒的检测，不能实现同步检测两种或多种病毒；RT-PCR虽然可以对两种或多种病毒实现同步检测，但是检测必须提取高质量的RNA，百合以及水仙、郁金香等球茎花卉种球富含多酚和多糖，提取的RNA中残留多酚和多糖会严重影响检测的灵敏性和特异性；免疫捕获RT-PCR或IC-RT-PCR结合了ELISA和RT-PCR另种方法的优点，具有较高的灵敏度，且更加简便高效，更重要的是不用提取RNA，检测成本低，不受多糖多酚的影响，非常适合百合、水仙、郁金香种球的病毒检测；关于免疫捕获RT-PCR，目前已有用该方法检测多种植物病毒的相关报道，但是已建立的检测体系都仅能完成一种单一病毒的检测，至今未见用该方法同步检测两种或多种病毒的相关报道。
为了进一步提高检测效率，降低试验成本，本发明对现有的免疫捕获RT-PCR反应进行了改进，实现了用该方法同步检测百合隐症病毒和百合斑驳病毒；具体是在免疫捕获RT-PCR反应的第一部分将通常单一的免疫反应改进为复合的免疫反应，即PCR管壁上同时捕获LSV和LMoV粒子；第二部分将第一链cDNA的合成改进为第一链cDNAs混合物的合成；第三部分将单一的PCR反应改进为了双重PCR检测。
发明内容
本发明的目的在于克服现有方法的不足，提供一种快速、准确、简便地用免疫捕获双重RT-PCR同时检测LSV和LMoV的方法。
整个检测方法省略了RNA提取过程，利用两种病毒抗体的特异性，迅速捕获两种目的病毒，从而高效快速的获得目的片段，为球茎类作物病毒的准确检测提供了快捷特异的方法，从而完善了免疫捕获RT-PCR技术。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种同步检测LSV和LMoV的方法，其特征在于包括以下步骤：
①LSV和LMoV的多克隆抗体被包被在同一个PCR反应管中，高效特异捕获LSV和LMoV粒子；
②利用LSV和LMoV的特异性引物进行双重反转录聚合酶链式反应RT-PCR；
③琼脂糖凝胶电泳检测目的片段。
上述进行双重RT-PCR的引物为LSV和LMoV的特异性引物。
采用琼脂糖凝胶电泳检测步骤②获得的反应产物，LSV和LMoV的目标电泳条带分别出现在198和395碱基对(bp)处。
本发明是将免疫学检测技术和分子生物学检测技术有机的结合起来，吸附在PCR管壁上的LSV和LMoV多克隆抗体能特异性捕获检测样品中的LSV和LMoV粒子，起到浓缩和纯化病毒的作用，又利用PCR技术放大了检测的灵敏度，可用于感病样品低浓度病毒的检测；该发明省去了普通RT-PCR中提取总RNA的繁琐步骤，大大降低了检测成本；另一方面由于抗原与抗体的结合，提高了检测的特异性；利用免疫捕获PCR还可以避免球根类花卉种球中富含的多糖和多酚对RT-PCR的干扰，因而该技术尤其适合对百合种球鳞茎LSV和LMoV进行准确的检测，从而从种源上严格控制LSV和LMoV对百合产业的危害，减少经济损失。
附图说明
图1为本发明实施例百合隐症病毒和斑驳病毒的电泳检测图
图中：
M, 600bp Marker；
1，阴性对照；
2，LSV+LMoV感病组织；
3，阳性对照。
具体实施方式
本发明的实施例技术方案如下：
1.引物设计
根据LSV和LMoV的CP基因序列，设计了LSV和LMoV的特异性正向和反向引物，引物序列为：LSV-F（5’- TATGGGCTTCCAATACAAC-3’）/ LSV-R（5’-TATTCGGTTTCCAGGTTC-3’），LMoV-F（5’- TGGCACCTCACCAAATGTA -3’）/ LMoV-R（5’-CATCATCTGCTGTATGCCTCT-3’），扩增产物的大小分别为198bp和395bp;
2.免疫捕获
1）取100mg复合感染LSV+LMoV的组织，加1mL PBST研磨后将研磨液转入1.5mL灭菌离心管中，4000rpm离心2min，上清液即感病组织粗提液；
2）用pH9.6的碳酸盐缓冲液将LMoV和LSV多克隆抗体稀释后混合，使LMoV和LSV两种抗体的终浓度分别为1μg/mL和10μg/mL；取200μL上述稀释的混合抗体加入PCR管，37℃孵育2h；
3）弃去包被液，用PBST洗3次，每次3min; 加入200μL感病组织粗提液，37℃孵育3h；
4）弃去抗原液，用 PBST洗3次，ddH2O洗1次，短暂离心，吸去残液；
3. 双重RT-PCR
1) 在包被过的PCR管中加入浓度均为10 μmol/L的LSV和LMoV特异性反向引物LSV-R和LMoV-R各2μL, 8μL ddH2O，混合后于70℃保温10min，之后迅速冰浴2 min；
2）双重RT：向上述PCR管中按以下体系加入试剂，混合均匀后，42℃水浴1h，70℃保温15min，得到cDNAs混合物；
M-MLV buffer （5×） 4μL
dNTP混合物 （各10mmol/L ） 2μL
RNase抑制剂（30U/μL） 0.68μL
M-MLV反转录酶（200U /μL） 0.70μL
DEPC-H2O 0.62μL
3）双重PCR：取一新的PCR管，按以下体系加入各试剂进行双重PCR：.
上述cDNAs混合物 2.0μL
10×PCR buffer 2.5μL
MgCl2（25 mmol/L） 2.5μL
dNTP混合物（各2.5mmol/L ） 2.5μL
LSV-F(10μmol/L） 0.5μL
LSV-R(10μmol/L） 0.5μL
LMoV-F(10μmol/L） 0.5μL
LMoV-R(10μmol/L） 0.5μL
Taq DNA聚合酶（5U/μL） 0.3μL
ddH2O 13.2μL
双重PCR的反应条件为: 94℃预变性4min，94℃变性30s，50℃～58℃退火45s，72℃延伸1min，扩增30～35个循环，72℃延伸7min，降至常温;
4. 电泳检测
PCR反应结束后取10μL反应产物进行2.0%琼脂糖凝胶电泳，在1×TBE缓冲液环境中，100V稳压电泳40min，然后用凝胶成像系统并观察并记录结果;
5. 结果分析
根据电泳胶上扩增条带的有无及其大小判定所检测的样品是否感染LSV或LMoV：
若凝胶中仅存在198bp的核酸片段则说明样品中含有LSV；
若凝胶中仅存在395bp的核酸片段则说明样品中含有LMoV；
若凝胶中同时存在198bp和395bp的核酸片段，则说明样品中同时含有LSV和LMoV。
依据上述方法，经检测兰州地区食用百合和切花百合样品上的LSV和LMoV，电泳检测结果中如含有198bp的片段，说明样品中含有百合隐症病毒；如含有395bp的片段，说明样品中含有百合斑驳病毒。

Claims (3)

1.一种同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
①LSV和LMoV的多克隆抗体被包被在同一个PCR反应管中，捕获LSV和LMoV粒子，具体是用pH9.6的碳酸盐缓冲液将兔抗LMoV和LSV多克隆抗体稀释后混合，使LMoV和LSV两种抗体的终浓度分别为1μg/mL和10μg/mL，取200μL上述稀释的混合抗体加入PCR管；
②捕获的LSV和LMoV粒子作为模板，利用LSV 和LMoV 的特异性反向引物LSV-R和LMoV-R以及M-MLV反转录酶进行双重RT，合成LSV和LMoV 两种病毒的cDNAs第一链混合物；
③利用②获得的cDNAs为模板，在TaqDNA聚合酶的作用下进行双重PCR；
④采用琼脂糖凝胶电泳检测步骤③获得的双重PCR反应产物，LSV和LMoV两种病毒核酸片段的电泳条带分别出现在198bp和395bp处;
⑤根据电泳胶上扩增条带的有无及其大小判定所检测的样品是否感染LSV或LMoV，若凝胶中仅存在198bp的核酸片段则说明样品中含有LSV；若凝胶中仅存在395bp的核酸片段则说明样品中含有LMoV；若凝胶中同时存在198bp和395bp的核酸片段，则说明样品中同时含有LSV和LMoV。
2.根据权利要求1 所述的同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法，其特征是所述进行双重RT-PCR的引物为LSV和LMoV的特异性引物。
3.根据权利要求2所述的同步检测百合隐症病毒和斑驳病毒的方法，所述 LSV和LMoV分别为百合隐症病毒和百合斑驳病毒。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107164566A (zh) * 2017-07-19 2017-09-15 上海市农业科学院 一种检测百合斑驳病毒的lamp引物组、试剂盒及检测方法
CN108754025A (zh) * 2018-06-21 2018-11-06 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 一种特异性检测百合隐症病毒的试剂盒及其检测方法
CN108796127A (zh) * 2018-06-21 2018-11-13 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 一种特异性检测百合斑驳病毒的试剂盒及其检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1793858A (zh) * 2005-12-22 2006-06-28 云南农业大学 同步检测百合斑驳病毒、百合无症病毒和黄瓜花叶病毒的方法
CN1873019A (zh) * 2005-06-03 2006-12-06 云南省农业科学院 百合病毒的多重逆转录聚合酶链式反应快速检测方法
KR20150145771A (ko) * 2014-06-19 2015-12-31 대한민국(농촌진흥청장) 나리 바이러스 다중 진단용 프라이머 세트 및 이를 이용한 진단 방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1873019A (zh) * 2005-06-03 2006-12-06 云南省农业科学院 百合病毒的多重逆转录聚合酶链式反应快速检测方法
CN1793858A (zh) * 2005-12-22 2006-06-28 云南农业大学 同步检测百合斑驳病毒、百合无症病毒和黄瓜花叶病毒的方法
KR20150145771A (ko) * 2014-06-19 2015-12-31 대한민국(농촌진흥청장) 나리 바이러스 다중 진단용 프라이머 세트 및 이를 이용한 진단 방법

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIM ET AL.: "Development of an Indirect ELISA and Immunocapture RT-PCR for Lily Virus Detection", 《J. MICROBIOL. BIOTECHNOL.》 *
YUN ZHENG等: "Specific and Rapid Detection of Lily symptomless virus and Arabis mosaic virus in Lily by Dual IC-RT-PCR", 《J PHYTOPATHOL》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107164566A (zh) * 2017-07-19 2017-09-15 上海市农业科学院 一种检测百合斑驳病毒的lamp引物组、试剂盒及检测方法
CN108754025A (zh) * 2018-06-21 2018-11-06 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 一种特异性检测百合隐症病毒的试剂盒及其检测方法
CN108796127A (zh) * 2018-06-21 2018-11-13 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 一种特异性检测百合斑驳病毒的试剂盒及其检测方法

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