CN105779221A - 一种稳定性强的蜂虫保健酒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种稳定性强的蜂虫保健酒，以蜂王胎或雄蜂蛹为唯一原料，全程采用冷冻、真空脱气、复合酶生物酶解、真空离心、生物破乳、超声处理、高压脉冲电场处理等低温加工技术，有效提高了蜂王胎或雄蜂蛹的利用率，降低了营养及保健物质的损失。将超声波和过氧乙酸有机结合催陈基酒，与蜂王胎或雄蜂蛹水解液科学复配，再次采用高压脉冲催陈，既防止了过氧乙酸对蜂王胎水解液生物活性成分的氧化，又提高了蜂产品酒的陈华效果，提高了蜂产品酒的口感、稳定性和澄清度。最终制得一种无虫腥味、稳定性强、口感协调、醇厚、柔和、绵长，风味适宜、生物活性物质和营养价值高、保健功效好的澄清透明的蜂虫保健酒。

Description

一种稳定性强的蜂虫保健酒及其制备方法

技术领域

本发明涉及保健酒的制备，具体涉及一种稳定性强的蜂虫保健酒及其制备方法。

背景技术

“蜂王胎”也叫蜂王幼虫，在中国古典医学著作中称“蜂子”，是蜂王浆生产过程中的必然产物。蜂农将1日龄左右的工蜂幼虫移入人造蜂王台里，工蜂将其当作蜂王不断喂食蜂皇浆，使其在120个小时里体积增加千倍！蜂王浆滋润其成长，由于处在幼虫状态，所以完整地保留了各种营养物质，按遗传学分析，蜂王胎秉承了蜂王的长寿及其客观存在原因，处于胚胎状态更完整地保留了各种营养物质，古时为宫廷贡品，其营养和药用价值均优于“蜂王浆”，是大自然赐予人类的神奇高能营养珍品。中国第一部药典《神农本草经》中，将蜂王胎列为上品，“味平、微寒无毒补虚赢伤中，久服令人光泽，颜色不老，轻身益气”。《本草拾遗》称“蜂子主治丹毒，风疹，腹内滞热，利大小便，丰乳汁，壮精血，盈体液……《名医别录》称“蜂子轻身益气，治面色萎黄，经血不畅，女体干涩，产后、病后虚弱……”《本草纲目》认为“蜂王胎”具有“柔肝养血、益肾生精、悦颜润肤、解毒疗疮、通经下乳、补虚滋阴”等功效。蜂王胎的主要成分有人体所需要的50多中营养素，丰富的蛋白质，18种氨基酸，多种维生素，如B族维生素,特别是维生素D的含量超过鱼肝油的10倍，还含钙、锌、铁、铜、硒、锰、镁等近20种矿物质和微量元素，超氧化物歧化酶(SOD)，牛黄酸等。现代医学证明，蜂王幼虫有以下作用：1、改善神经系统功能：能消除失眠多梦、神经衰弱、神疲健忘、气短心悸等症状；2、调节内分泌：蜂王胎营养丰富，能够调节女性内分泌系统通过滋养女性青春美丽的源泉卵巢，给卵巢提供充足养份，延缓卵巢过早萎缩，维护其正常功能，使卵巢达到旺盛状态，从而解决女性内分泌失调引起的疲乏无力，腰酸腿软，月经不调，阴道干涩，性功能减退等诸多症状；3、对男子精子数少、活动力差、液化时间延长的患者有明显改善作用，因而可用于防治男性不育；4、能抗衰、美容、养颜，对皮肤粗糙、皱纹增多、黄褐斑、气色晦暗、脱发、断发有明显改善；5、促进生长发育：蜂王胎促进新陈代谢，激发细胞活力，增进食欲，增加营养，对成年人体虚体弱，身体消瘦等皆有巨大作用；6、丰富的乙酰胆碱对营养不良、发育迟缓、益智健脑、恢复体质，都有明显的作用；7、增强免疫力：蜂王胎中含有丰富的天然牛磺酸，对持续调节人体生理机能、激发细胞活力，提高机体免疫力有着显著功效；8、消化系统：蜂王胎中含有丰富的蛋白质，氨基酸、维生素B₁等可促进对胃液的合成与正常分泌，活跃了消化系统，对治疗慢性胃炎、胃十二指肠溃疡有显著辅助治疗作用。

雄蜂蛹是蜂工在雄蜂房产的未受精卵，孵化成幼虫，进入蛹期，在此期采收的蜜蜂躯体为雄蜂蛹，它是以吸食蜂王浆、蜂蜜和花粉等发育而成的，具有很高的营养价值，是一种亟待开发的天然食品。据科学分析，雄蜂蛹中蛋白质的含量高于蜂王浆，是花粉、牛乳的2倍以上，达33.4％，其中，赖氨酸含量4.45mg/100g，是鸡蛋的5倍，异亮氨酸含量为2.7％，超过其他食物。粗脂肪的含量16.08％，其中必需脂肪酸含量达19.71％，是花粉的2倍以上，牛肉、鸡蛋的3倍以上，牛乳的10倍以上。维生素的含量超过了牛肉、鸡蛋，比鱼肝油高10倍。此外，雄蜂蛹还含有丰富的矿物元素，其中锌的含量是蜂王浆的2倍，是花粉的10倍以上；硒的含量高达2.4-2.8μg/100g。可见，雄蜂蛹是一个营养宝库。雄蜂蛹不仅有很好的营养价值，而且有很好的医药价值。早在《图经本草》、《礼记.内则》等古籍中就有详实的记录，在《神农本草经》中将“蜂仔”视为上品，记载有“蜂仔气味甘平，微寒无毒，主治头痛，除毒，补虚赢”的药效；《名医别录》中记载，蜂仔能主治丹毒、风疹、腹内留热、利大小便、去浮血、下乳汁的作用，对孕妇、产妇有滋补和治疗作用。在亚洲、非洲热带地区、澳大利亚和南美一些民族也早有食用雄蜂蛹的习惯。随着科技的发展，人们对雄蜂蛹的认识有更深的了解。人们发现，雄蜂蛹对生物机体具有多方面的功能，其中在促进机体新陈代谢、生长发育及精力减退、体力虚弱、营养不良、青春发育迟缓、更年期、未老先衰的康复方面较为突出，在调节中枢神经、内分泌紊乱、消化系统、血液系统等疾病方面也显示其独特的疗效。

以蜂王胎或雄蜂蛹为原料制备保健酒的较多，有直接将完整蜂王胎与基酒泡制的，比如：中国专利CN102618423A公开了一种蜂王养生酒，属保健品领域。该养生酒配方如下，米酒∶蜂王幼虫∶生姜∶蜂蜜∶香精＝100∶1∶1∶2.5∶0.025，各组份以重量比计。该养生酒适宜于成年人饮用，具有驱寒、开胃、养颜，舒筋活血等保健养生作用。中国专利CN101899377A公开了一种蜂王酒及其泡制方法。其中含有蜂以及白酒，白酒的度数在50度以上。所述的蜂可以是蜜蜂，最好是雄蜂蛹，也可以是蜂类产品，如蜂王浆。其中各种成份的比例为蜂和/或蜂类产品∶酒＝1∶2～1∶10，较好的为1∶3～1∶7。以本发明方法泡制的蜂王酒色度更纯，口感更好。中国专利(ZL93100883.2)公开了一种蜂王胎高效保健滋补酒，它是以86.00％(重量)酒基中掺入2.00％(重量)蜂王胎并加入19种中草药经特定工艺配制而成。该酒具有提高机体自身免疫，抵抗疾病和抗衰老等有一定的功效。该酒中含中草药成份过高、中药味口感重，消费者难于接受，不利于推广应用。中国专利CN102787058B公开了一种雄蜂蛹酒，其中，所述雄蜂蛹酒按照重量份数计，由以下成分炮制而成：米香型白酒65-75；蜂蛹20-30；巴戟天2-6；肉苁蓉2-6；枸杞1-3；山药0.5-1.5；肉桂0.5-1.5；山茱萸0.5-1.5；菟丝子0.5-1.5；蜂蜜3-7。本发明所提供的雄蜂蛹酒，以米香型白酒为酒基，以食用动植物作为呈香、呈味物质，按一定的生产加工工艺制成饮料酒。利用雄蜂蛹的滋补强壮，轻身益气之功效，配伍补益精血，强筋壮骨的中成药，加入超声波催陈技术，使该酒呈深琥珀色泽、清亮透明、入口绵甜、不暴不辣、回味悠长等优点，且功效显著。上述公开的专利蜂王胎或雄蜂蛹的有效成份利用率低、泡制时间长、生物活性成分损失大、外观浑浊，有沉淀，有整粒蜂王胎在里面，影响食欲。

也有将蜂王胎或雄蜂蛹研磨、破碎的，比如：中国专利CN1376774A公开了一种蜂王胎酒及其生产工艺，该酒是把从蜂群中的蜂王胎提取即用超低温急冻后，再经研磨，将蜂王胎10-20％(重量)与基酒80-90％(重量)高效混合均匀后，再经陈化处理后配置而成。该酒保存蜂王胎的活性成分突出，增强免疫力，强精壮体，延年益寿，效果显著。中国专利CN102776102B公开了一种含有蜂产品的保健酒，其原料及原料的重量份为：雄蜂蛹为1.0～1.5重量份、蜂王幼虫为2.0重量份、蜂王浆为0.02～0.04重量份、西洋参为0.05～0.08重量份和50～70重量份的白酒；该含有蜂产品的保健品的制备步骤如下：1)将该雄蜂蛹用绞碎机或粉碎机打碎；2)将该蜂王幼虫用绞碎机或粉碎机打碎；3)将该西洋参用绞碎机或粉碎机打碎；4)将该打碎的雄蜂蛹、该打碎的蜂王幼虫、该打碎的西洋参和该蜂王浆放入储罐内，同时将该白酒加入该储罐，然后将该储罐的开口用盖子密封，每日晃动该储罐几下，一个月后进行过滤，所得清液即为本发明的含有蜂产品的保健酒。上述公开的专利虽然提高了蜂王胎的利用率，也缩短了陈花时间，但酒液仍浑浊，伴有沉淀，生物活性成分仍然损失较大。

为了提高蜂王胎或雄蜂蛹保健酒的外观澄清度，有的进行了过滤、超滤、冷冻等处理方法，比如：中国专利CN103710237B公开了一种蜂产品酒的制备方法，包括以下步骤：将微细粉沫状原料分别按蜂花粉1％、蜂王浆粉沫0.5％、雄蜂蛹粉沫0.5％、蜂王胎粉沫0.5％、⑤其他0.2％(重量)与94％～98％(重量)的优质浓香型特曲酒按比例进行充分搅拌混合，进行冷浸提。经过15天～20天后，分别进行粗滤、精滤、冷冻后精滤(或超滤)、窖藏陈化处理、成品。本发明将配方所使用的蜂产品进行超微粉碎后再进行精确计量配制，确保了对产品的定性、定量控制，规避了传统方法中使用鲜活产品时必须使用大量保鲜剂，造成对原料的质量、定量不易准确掌。上述公开的专利虽然澄清度有所提高，但其蜂产品及其辅料中含有大量脂肪和蛋白质，是造成浑浊和沉淀的根本原因，短时间内酒液会由浑浊氧化产生沉淀，没有从根本上解决外观澄明度问题。

中国专利CN103725742A公开了一种酶解法制备蜂王胚胎肽的方法，包括：样品预处理、蜂王幼虫粉末脱脂、蜂王幼虫粉样品液配制、超声波处理蜂王幼虫粉样品液、蜂王幼虫粉样品液酶解反应、将酶解液置于沸水浴中加热20分钟灭酶，冷却至常温，将酶解液pH值调至7.0，离心后取上清液、干燥上述上清液获得水解的蜂王胚胎肽粉。本发明制得的蜂王胚胎多肽能够用于制作改善人体机能的保健品，且更重要的是从水解的蜂王胚胎多肽中筛选得到对人体真正有效的生物活性多肽。按照上述公开专利中蜂王胎的处理方法，有望得到澄清、透明的蜂王胎保健酒，但蜂王胎要经过冻干、超临界脱脂才可酶解，工序繁杂，生物活性成分容易氧化，同时脱脂效果不太理想，且引入萃取有机溶剂存在食品安全隐患。

中国专利CN103005466B公开了一种雄蜂蛹多肽提取物的应用，包括所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品中的应用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品中的应用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的药品中的应用。该雄蜂蛹多肽提取物明显的改善记忆的功能以及较好的抗氧化作用，可用于作为或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的产品。上述公开的专利采用丙酮进行脱脂，存在食品安全隐患，且酶解前采用加热方式，原料利用率低，成本高。

综上，以蜂王胎或雄蜂蛹为唯一原料制备一种口感协调、醇厚、柔和、绵长，风味适宜、生物活性物质和营养价值高、保健功效好的澄清透明的蜂虫保健酒具有广阔的市场前景，也是本领域技术人员的长期追求。

发明内容

本发明所解决的技术问题是克服现有蜂虫保健酒的缺陷，以蜂王胎或雄蜂蛹为原料，首先将其冷冻、破碎、真空脱气脱腥、酶解得到酶解液，经多次真空离心分离、破乳得到不含脂肪和蛋白的水解液，水解液与基酒混合、陈化、过滤得到具有原始蜂王胎或雄蜂蛹生物活性成分和风味的一种口感协调、醇厚、柔和、绵长，风味适宜、生物活性物质和营养价值高、保健功效好的澄清透明的无虫腥味的蜂虫保健酒。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，包括以下步骤：

1)将新鲜蜂王胎或雄蜂蛹与离子溶液按质量比1:1.6-2.2混合，于-18--22℃冷冻20-30min，破碎，破碎率为98-100％，破碎物粒径200-300μm，用乳酸调节破碎物pH值为5-7，升温至40-50℃，向其中加入新鲜蜂王胎或雄蜂蛹质量0.10-0.18％的复合酶，混合均匀，于真空度-0.07--0.09MPa脱气脱腥10-15min，静置，继续酶解10-15min得到酶解液；

进一步地，所述离子溶液为含有钠离子25-30mg/L、锌离子17-22mg/L、钾离子15-20mg/L、钙离子12-14mg/L和镁离子9-11mg/L的水溶液；

进一步地，所述复合酶质量组成为：风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶＝2-4:1-3:0.3-0.5；

2)将酶解液置真空离心机中5000-7000r/min真空离心8-10min，自上而下分离得到游离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为45-55℃，添加乳状液质量0.08-0.12％的生物破乳剂破乳20-40min,破乳后于4000-6000r/min真空离心2次，间隔时间1-3h，每次离心10-15min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.2-0.4％的蛋清，放入搅拌机中于转速800-1000r/min搅拌10-12min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸5-8min,降至室温，于5000-7000r/min真空离心8-10min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的蜂王胎或雄蜂蛹水解液；

进一步地，所述真空离心条件为温度6-10℃、真空度-0.02--0.04MPa；

进一步地，所述生物破乳剂为糖脂类、脂肽类、胞壁结合类生物破乳剂中的一种或几种组合；

优选地，所述生物破乳剂的质量组成为：糖脂类:脂肽类:胞壁结合类＝5-7:4-6:2-4；

优选地，所述糖脂类生物破乳剂为鼠李糖脂、烷基糖苷中的一种或两种组合；

更优选地，所述糖脂类生物破乳剂的质量组成为：鼠李糖脂:烷基糖苷＝3-5:1-2；

3)取蜂王胎或雄蜂蛹水解液质量1.5-2.5倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸浓度为300-380ppm,均匀混合，于功率200-400W,频率30-40KHz条件下进行超声波处理5-10min,经处理的基酒与蜂王胎或雄蜂蛹水解液均匀混合，控制混合料液温度为25-35℃，然后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得稳定性强的蜂虫保健酒；

进一步地，所述基酒为40-60度白酒；

进一步地，所述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为10-30％；

进一步地，所述高压脉冲电场处理条件为电场强度25-30kV/cm、脉冲数40-50。

本发明另一目的是提供经上述方法制备的稳定性强的蜂虫保健酒。

有益效果：

本发明以蜂王胎或雄蜂蛹为唯一原料，全程采用冷冻、真空脱气、复合酶生物酶解、真空离心、生物破乳、超声处理、高压脉冲电场处理等低温加工技术，有效提高了蜂王胎或雄蜂蛹的利用率，降低了营养及保健物质的损失，最大限度地保留了蜂王胎的生物活性成分和营养成物质含量。将真空脱气与复合酶生物酶解有机结合，不仅降低了酶解液的溶解氧含量，有效防止生物活性成分氧化变质，而且除去了酶解液中蜂王幼虫或雄蜂蛹的虫腥味，提升了保健酒的口感，增加了食欲，离子溶液与蜂王胎和复合酶的科学复配，使得复合酶活力发挥最大，催化能力更加彻底，进而使得蜂王胎中的蛋白质和脂肪充分降解，提高了蜂王胎酒的稳定性和澄明度，其中产生脂肪酸和阳离子还可显著促进保健酒的陈华；将生物破乳剂破乳和真空离心有机结合，可使酶解液中的游离脂肪和水解液充分分离，得到营养和生物活性物质含量丰富、澄清透明的水解液，再加上蛋清泡沫加入和煮沸灭酶，蜂王胎或雄蜂蛹水解液更加稳定、透明；将超声波和催陈助剂(过氧乙酸)有机结合催陈基酒，与蜂王胎或雄蜂蛹水解液科学复配，再次采用高压脉冲催陈，既防止了过氧乙酸对蜂王胎水解液生物活性成分的氧化，又提高了蜂王胎酒的陈华效果，提高了蜂王胎或雄蜂蛹酒的口感、稳定性和澄清度。通过上述各项技术方案的有序结合和共同协同，最终制得一种无虫腥味、稳定性强、口感协调、醇厚、柔和、绵长，风味适宜、生物活性物质和营养价值高、保健功效好的澄清透明的蜂虫保健酒。具体试验效果见实施例六至七。

需要说明的是本发明稳定性强的蜂虫保健酒的保健效果是各步骤技术特征相互协同、相互作用的结果，并非简单的步骤延续和技术特征叠加，各步骤技术特征的有机结合和协同产生的效果远远超过各单一技术特征功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

实施例一：

一种稳定性强的蜂王胎保健酒，其制备方法包括以下步骤：

1)将新鲜蜂王胎与离子溶液按质量比1:1.8混合，于-20℃冷冻25min，破碎，破碎率为99％，破碎物粒径250μm，用乳酸调节破碎物pH值为6，升温至45℃，向其中加入新鲜蜂王胎质量0.14％的复合酶，混合均匀，于真空度-0.08MPa脱气脱腥13min，静置，继续酶解13min得到酶解液；

上述离子溶液为含有钠离子28mg/L、锌离子20mg/L、钾离子18mg/L、钙离子13mg/L和镁离子10mg/L的水溶液；

上述复合酶质量组成为：风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶＝3:2:0.4；

2)将酶解液置真空离心机中,6000r/min真空离心9min，自上而下分离得到游离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为50℃，添加乳状液质量0.10％的生物破乳剂破乳30min,破乳后于5000r/min真空离心2次，间隔时间2h，每次离心13min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.3％的蛋清，放入搅拌机中于转速900r/min搅拌11min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸7min,降至室温，于6000r/min真空离心9min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的蜂王胎水解液；

上述真空离心条件为温度8℃、真空度-0.03MPa；

上述生物破乳剂的质量组成为：糖脂类:脂肽类:胞壁结合类＝6:5:3

上述糖脂类生物破乳剂质量组成为：鼠李糖脂:烷基糖苷＝4:1.5；

3)取蜂王胎水解液质量2倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸浓度为340ppm,均匀混合，于功率300W,频率35KHz条件下进行超声波处理8min,经处理的基酒与蜂王胎水解液均匀混合，控制混合料液温度为30℃，然后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得稳定性强的蜂王胎保健酒；

上述基酒为50度白酒；

上述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为20％；

上述高压脉冲电场处理条件为电场强度28kV/cm、脉冲数45。

实施例二：

一种稳定性强的蜂王胎保健酒，其制备方法包括以下步骤：

1)将新鲜蜂王胎与离子溶液按质量比1:1.6混合，于-18℃冷冻20min，破碎，破碎率为98％，破碎物粒径200μm，用乳酸调节破碎物pH值为5，升温至40℃，向其中加入新鲜蜂王胎质量0.10％的复合酶，混合均匀，于真空度-0.07MPa脱气脱腥10min，静置，继续酶解10min得到酶解液；

上述离子溶液为含有钠离子25mg/L、锌离子17mg/L、钾离子15mg/L、钙离子12mg/L和镁离子9mg/L的水溶液；

上述复合酶质量组成为：风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶＝2:1:0.3；

2)将酶解液置真空离心机中5000r/min真空离心8min，自上而下分离得到游离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为45℃，添加乳状液质量0.08％的生物破乳剂破乳20min,破乳后于4000r/min真空离心2次，间隔时间1h，每次离心10min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.2％的蛋清，放入搅拌机中于转速800r/min搅拌10min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸5min,降至室温，于5000r/min真空离心8min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的蜂王胎水解液；

上述真空离心条件为温度6℃、真空度-0.02MPa；

上述生物破乳剂为糖脂类生物破乳剂，其具体为鼠李糖脂；

3)取蜂王胎水解液质量1.5倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸浓度为300ppm,均匀混合，于功率200W,频率30KHz条件下进行超声波处理5min,经处理的基酒与蜂王胎水解液均匀混合，控制混合料液温度为25℃，然后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得稳定性强的蜂王胎保健酒；

上述基酒为40度白酒；

上述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为10％；

上述高压脉冲电场处理条件为电场强度25kV/cm、脉冲数40。

实施例三：

一种稳定性强的蜂王胎保健酒，其制备方法包括以下步骤：

1)将新鲜蜂王胎与离子溶液按质量比1：2.2混合，于-22℃冷冻30min，破碎，破碎率为100％，破碎物粒径300μm，用乳酸调节破碎物pH值为7，升温至50℃，向其中加入新鲜蜂王胎质量0.18％的复合酶，混合均匀，于真空度-0.09MPa脱气脱腥15min，静置，继续酶解15min得到酶解液；

上述离子溶液为含有钠离子30mg/L、锌离子22mg/L、钾离子20mg/L、钙离子14mg/L和镁离子11mg/L的水溶液；

上述复合酶质量组成为：风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶＝4：3：0.5；

2)将酶解液置真空离心机中7000r/min真空离心10min，自上而下分离得到游离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为55℃，添加乳状液质量0.12％的生物破乳剂破乳40min,破乳后于6000r/min真空离心2次，间隔时间3h，每次离心15min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.4％的蛋清，放入搅拌机中于转速1000r/min搅拌12min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸8min,降至室温，于7000r/min真空离心10min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的蜂王胎水解液；

上述真空离心条件为温度10℃、真空度-0.04MPa；

上述生物破乳剂的质量组成为：糖脂类:脂肽类:胞壁结合类＝6:5:3；

3)取蜂王胎水解液质量2.5倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸浓度为380ppm,均匀混合，于功率400W,频率40KHz条件下进行超声波处理10min,经处理的基酒与蜂王胎水解液均匀混合，控制混合料液温度为35℃，然后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得稳定性强的蜂王胎保健酒；

上述基酒为60度白酒；

上述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为30％；

上述高压脉冲电场处理条件为电场强度30kV/cm、脉冲数50。

实施例四：

一种稳定性强的雄蜂蛹保健酒，其制备方法包括以下步骤：

1)将新鲜雄蜂蛹与离子溶液按质量比1:2.0混合，于-19℃冷冻23min，破碎，破碎率为98％，破碎物粒径230μm，用乳酸调节破碎物pH值为5.5，升温至43℃，向其中加入新鲜雄蜂蛹质量0.12％的复合酶，混合均匀，于真空度-0.07MPa脱气脱腥12min，静置，继续酶解12min得到酶解液；

上述离子溶液为含有钠离子27mg/L、锌离子19mg/L、钾离子17mg/L、钙离子12mg/L和镁离子9mg/L的水溶液；

上述复合酶质量组成为：风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶＝2:1:0.3；

2)将酶解液置真空离心机中5500r/min真空离心8min，自上而下分离得到游离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为48℃，添加乳状液质量0.09％的生物破乳剂破乳25min,破乳后于4500r/min真空离心2次，间隔时间1.5h，每次离心12min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.2％的蛋清，放入搅拌机中于转速850r/min搅拌10min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸6min,降至室温，于5500r/min真空离心8min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的雄蜂蛹水解液；

上真空离心条件为温度8℃、真空度-0.02MPa；

上述生物破乳剂为脂肽类生物破乳剂；

3)取雄蜂蛹水解液质量1.5倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸浓度为320ppm,均匀混合，于功率250W,频率30KHz条件下进行超声波处理7min,经处理的基酒与雄蜂蛹水解液均匀混合，控制混合料液温度为28℃，然后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得稳定性强的雄蜂蛹保健酒；

上述基酒为45度白酒；

上述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为15％；

上述高压脉冲电场处理条件为电场强度27kV/cm、脉冲数43。

实施例五：

一种稳定性强的雄蜂蛹保健酒，其制备方法包括以下步骤：

1)将新鲜雄蜂蛹与离子溶液按质量比1:1.7混合，于-21℃冷冻28min，破碎，破碎率为99％，破碎物粒径280μm，用乳酸调节破碎物pH值为6.5，升温至48℃，向其中加入新鲜雄蜂蛹质量0.16％的复合酶，混合均匀，于真空度-0.09MPa脱气脱腥14min，静置，继续酶解14min得到酶解液；

上述离子溶液为含有钠离子29mg/L、锌离子21mg/L、钾离子19mg/L、钙离子14mg/L和镁离子11mg/L的水溶液；

上述复合酶质量组成为：风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶＝3.5:2.5:0.4；

2)将酶解液置真空离心机中6500r/min真空离心10min，自上而下分离得到游离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为53℃，添加乳状液质量0.11％的生物破乳剂破乳35min,破乳后于5500r/min真空离心2次，间隔时间2.5h，每次离心14min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.4％的蛋清，放入搅拌机中于转速950r/min搅拌12min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸7min,降至室温，于6500r/min真空离心10min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的雄蜂蛹水解液；

上述真空离心条件为温度9℃、真空度-0.04MPa；

上述生物破乳剂为胞壁结合类生物破乳剂；

3)取雄蜂蛹水解液质量2.5倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸浓度为360ppm,均匀混合，于功率350W,频率40KHz条件下进行超声波处理9min,经处理的基酒与雄蜂蛹水解液均匀混合，控制混合料液温度为33℃，然后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得稳定性强的雄蜂蛹保健酒；

上述基酒为55度白酒；

上述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为25％；

上述高压脉冲电场处理条件为电场强度29kV/cm、脉冲数48。

实施例六本发明蜂王胎保健酒的感官品评试验

邀请24名人员对本发明实施例1制备的蜂王胎保健酒与市售两种同类相同生产日期的蜂王胎保健酒进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各12名，专业人员青年、中年、老年各4名，男女各半，非专业人员少年、青年、中年、老年各3名，男女各半；打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表1：

表1：感官品评统计结果

注：同一行内标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，标不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。

以上结果表明，本发明制备的蜂王胎保健酒从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售蜂王胎保健酒，特别是外观澄明度、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。

需要说明的是：本发明实施例2-3制备的蜂王胎保健酒同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例七本发明蜂王胎保健酒对机体免疫力的影响

1实验目的

通过运动耐力测试(小鼠游泳试验)，验证本发明蜂王胎保健酒的提高免疫力、抗疲劳作用。

2实验材料与试剂

2.1供试药物：

市售蜂王胎保健酒(G1)；市售蜂王胎保健酒(G2)；本发明实施例1-3制备的蜂王胎保健酒(G3-G5)。

2.2试剂：

肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研究所；浓硫酸(AR)，南京化学试剂有限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。

3.实验动物

ICR小鼠，♂，清洁级，体重18-22g，由宁夏医科大学比较医学中心提供，实验期间小鼠自由饮食。

4.主要仪器

铝制游泳箱(50cm×50cm×40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius公司；秒表，温度计

5.实验分组

5.1剂量分组及受试样品给予时间随机将小鼠分为6组，每组10只，第1组至第5组分别给G1～G5的药物，第6组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1次，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给予受试样品30天。

5.2样品配制第1组至第7组：称取2.25g药物样品，用蒸馏水配至150ml；空白对照组：双蒸水150ml。

6.实验方法

6.1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温25±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。

6.2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后摘眼球采血0.5mL(不加抗凝剂),置4℃冰箱3h,血凝固后2000r/min离心15min,取血清送宁夏医科大学附属医院检验科检测。

6.3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min，颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏100mg，肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。

6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20μL加入40μL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。(血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后20min的血乳酸值)

7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值

8.统计方法实验数据用表示，采用t检验进行组间比较

9.实验结果

9.1本发明蜂王胎保健酒对小鼠体重的影响

各组小鼠在给予G1～G5药物后，前、中，后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)，表明G1～G5药物均无明显的毒性。实验结果详见表2。

表2负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重

9.2本发明蜂王胎保健酒对小鼠负重游泳时间的影响

经口给予小鼠G1～G5药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小鼠负重游泳时间，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明蜂王胎保健酒G3～G5药物与空白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表3。

表3蜂王胎保健酒对小鼠负重游泳时间的影响

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

9.3本发明蜂王胎保健酒对小鼠运动前后血乳酸的影响

经口给予小鼠本发明的蜂王胎保健酒后，本发明蜂王胎保健酒G3～G5药物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)，G1～G2药物组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异(P＞0.05)。结果见表4。

表4本发明蜂王胎保健酒对小鼠运动前后血乳酸水平的影响

“*”p<0.05vs空白对照；

9.4本发明蜂王胎保健酒对小鼠肝糖原的影响

经口给予小鼠G1～G5药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明蜂王胎保健酒G3～G5药物与与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表5。

表5本发明蜂王胎保健酒对小鼠肝糖原含量的影响

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

9.5本发明蜂王胎保健酒对小鼠血清尿素的影响

经口给予小鼠G1～G5药物后，G1～G2药物组与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明蜂王胎保健酒G3～G5药物与与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表6。

表6本发明蜂王胎保健酒对小鼠血清尿素含量的影响

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

10.实验结论

本实验主要通过小鼠负重游泳实验，同时检测小鼠肝糖原的储备来观察本发明蜂王胎保健酒提高免疫力、抗疲劳的效果。初步研究结果显示如下：

1、本发明G3～G5蜂王胎保健酒均能延长小鼠负重游泳时间(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2的蜂王胎保健酒。

2、生化检测方面显示，本发明G3～G5蜂王胎保健酒各剂量组均能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，而其它G1～G2的蜂王胎保健酒虽然也能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量，但与对照组比较，无统计学差异(P＞0.05)；

3、本发明G3～G5蜂王胎保健酒各剂量组均能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2的蜂王胎保健酒；

4、高尿酸模型发现，本发明G3～G5蜂王胎保健酒能显著降低小鼠游泳后血清中尿素的含量(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2蜂王胎保健酒；

11.结论

上述实验证明本发明蜂王胎保健酒能显著提高机体免疫力，提高小鼠的体力和耐力，降低小鼠运动后血清中尿素及乳酸的含量，且能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备，有助于缓解运动负荷引起的疲劳；能延长小鼠负重游泳至力竭的时间。

Claims (10)

1.一种稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将新鲜蜂王胎或雄蜂蛹与离子溶液按质量比1:1.6-2.2混合，于-18--22℃冷冻20-30min，破碎，破碎率为98-100％，破碎物粒径200-300μm，用乳酸调节破碎物pH值为5-7，升温至40-50℃，向其中加入新鲜蜂王胎或雄蜂蛹质量0.10-0.18％的复合酶，混合均匀，于真空度-0.07--0.09MPa脱气脱腥10-15min，静置，继续酶解10-15min得到酶解液；

所述复合酶质量组成为：风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶＝2-4:1-3:0.3-0.5；

2)将酶解液置真空离心机中5000-7000r/min真空离心8-10min，自上而下分离得到游离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为45-55℃，添加乳状液质量0.08-0.12％的生物破乳剂破乳20-40min,破乳后于4000-6000r/min真空离心2次，间隔时间1-3h，每次离心10-15min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.2-0.4％的蛋清，放入搅拌机中于转速800-1000r/min搅拌10-12min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸5-8min,降至室温，于5000-7000r/min真空离心8-10min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的蜂王胎或雄蜂蛹水解液；

3)取蜂王胎或雄蜂蛹水解液质量1.5-2.5倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸浓度为300-380ppm,均匀混合，于功率200-400W,频率30-40KHz条件下进行超声波处理5-10min,经处理的基酒与蜂王胎或雄蜂蛹水解液均匀混合，控制混合料液温度为25-35℃，然后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得稳定性强的蜂虫保健酒。

2.如权利要求1所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤1)所述离子溶液为含有钠离子25-30mg/L、锌离子17-22mg/L、钾离子15-20mg/L、钙离子12-14mg/L和镁离子9-11mg/L的水溶液。

3.如权利要求1所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤2)所述真空离心条件为温度6-10℃、真空度-0.02--0.04MPa。

4.如权利要求1所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤2)所述生物破乳剂为糖脂类、脂肽类、胞壁结合类生物破乳剂中的一种或几种组合。

5.如权利要求4所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，所述生物破乳剂的质量组成为：糖脂类:脂肽类:胞壁结合类＝5-7:4-6:2-4。

6.如权利要求5所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，所述糖脂类生物破乳剂为鼠李糖脂、烷基糖苷中的一种或两种组合；所述糖脂类生物破乳剂的质量组成为：鼠李糖脂:烷基糖苷＝3-5:1-2。

7.如权利要求1所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤3)所述基酒为40-60度白酒。

8.如权利要求1所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤3)所述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为10-30％。

9.如权利要求1所述的稳定性强的蜂虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤3)所述高压脉冲电场处理条件为电场强度25-30kV/cm、脉冲数40-50。

10.如权利要求1-9任一制备方法制得的稳定性强的蜂虫保健酒。