CN105748615A - 一种三黄片的制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药制剂领域，具体提供一种三黄片的制备方法，由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用。

Description

一种三黄片的制备方法及应用
技术领域
本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种三黄片的制备方法及应用。
背景技术
三黄片记载于药典标准，处方为大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g，以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1～2，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至5～7，烘干，粉碎成细粉。取大黄150g，粉碎成细粉，剩余大黄粉碎成粗粉，用30％乙醇回流提取三次，滤过，合并滤液，回收乙酵并减压浓缩成稠裔，加人大黄细粉、盐酸小檗碱细粉、黄芩浸膏细粉及适量辅料，混匀，制成颗粒，干燥,压制成1000片，包糖衣或薄膜衣；或压制成500片，包薄膜衣，即得。清热解毒、泻火通便。用于三焦热盛所致的目赤肿痛、口鼻生疮、咽喉肿痛、牙龈肿痛、心烦口渴、尿黄便秘。口服，一次4片，一日2次，每粒装0.3g。
现有技术中，尚未有三黄片在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用打粉等方法，工艺粗糙、复杂、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种三黄片的制备方法及三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种三黄片的制备方法，由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1～2，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至5～7，烘干，粉碎成细粉，取黄芩浸膏21g，另取大黄300g，粉碎成细粉，与黄芩浸膏细粉合并，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，添加盐酸小檗碱5g，制粒，压片，每片重0.3g。
所述三黄片的制备方法中CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。
所述三黄片的制备方法中CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
所述三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用，三黄片由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1～2，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至5～7，烘干，粉碎成细粉，取黄芩浸膏21g，另取大黄300g，粉碎成细粉，与黄芩浸膏细粉合并，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，添加盐酸小檗碱5g，制粒，压片，每片重0.3g。
所述三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用，制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。
所述三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用，制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
现有技术中，三黄片一次3片，一日3次，每片0.3g，采用本发明制备成的三黄片每片0.3g，但含有的药材量比原来多，在同样服用量的情况下具有更多活性成分。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1：取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g，以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至7，烘干，粉碎成细粉，取黄芩浸膏21g，另取大黄300g，粉碎成细粉，与黄芩浸膏细粉合并，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4％，萃取压力30MPa，温度30℃，CO2流量3m1/g生药·min，萃取时间150min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，添加盐酸小檗碱5g，制粒，压片，每片重0.3g。
实施例2：取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g，以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至2，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至5，烘干，粉碎成细粉，取黄芩浸膏21g，另取大黄300g，粉碎成细粉，与黄芩浸膏细粉合并，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6％，萃取压力15MPa，温度50℃，CO2流量1m1/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，添加盐酸小檗碱5g，制粒，压片，每片重0.3g。
实施例3：取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g，以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.5，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至6，烘干，粉碎成细粉，取黄芩浸膏21g，另取大黄300g，粉碎成细粉，与黄芩浸膏细粉合并，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，添加盐酸小檗碱5g，制粒，压片，每片重0.3g。
实施例4：三黄片抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株：小鼠软骨ATDC5细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10％FBS常规培养。
1.2实验药物：研究药物：本发明三黄片：按实施例3方法制备。药液储液：称取100mg三黄片内容物，混悬于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂：DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419)；NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin(AMRESCO公司批号：2010/04)；EDTA(AMRESCO公司批号：2009/10)；PenicillinGSodiumSalt(AMRESCO公司批号：2010242)；StreptomycinSulfate(AMRESCO公司批号：2010382)；无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号：080310182)；MTT(Biosharp批号：0793)；PBS(实验室自配)；
1.4实验器材：莱卡倒置显微镜(德国Leica型号：DM1L)；可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号：SPECTRAMAX190)；CO2培养箱(FORMA型号：3111)；超净台(苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD)；纯水仪(美国Spring公司型号：S/N020579)；精密移液器(法国吉尔森公司型号：P2)；电子天平(德国赛多利斯有限公司型号：BT323S)；全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号：MLS-3020)；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐(CBS型号：2001)；低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000)；0.2μm滤器(MILLIPORE型号：SLGP033RB)；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法：1)小鼠软骨ATDC5细胞用DMEM+10％FBS于37℃、5％CO2进行常规培养(10cm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25％胰蛋白酶-0.04％EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中(37℃，5％CO2)常规培养。3)根据细胞生长情况，一般长至50％-70％，加入三黄片溶液，继续培养24h。4)24h后加入20μlMTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h。5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率(％)＝(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值×100％。实验重复3次。
3实验结果：MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对小鼠软骨ATDC5细胞增殖抑制有差异(P<0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。
表1三黄片对小鼠软骨ATDC5细胞增殖抑制影响研究
注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001
4实验结论：三黄片可以抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖，减少小鼠软骨ATDC5细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。

Claims (6)

1.一种三黄片的制备方法，由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1～2，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至5～7，烘干，粉碎成细粉，取黄芩浸膏21g，另取大黄300g，粉碎成细粉，与黄芩浸膏细粉合并，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，添加盐酸小檗碱5g，制粒，压片，每片重0.3g。
2.根据权利要求1所述三黄片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。
3.根据权利要求1所述三黄片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
4.三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用，其特征在于三黄片由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏21g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1～2，静置1小时，取沉淀，用水洗涤使pH值至5～7，烘干，粉碎成细粉，取黄芩浸膏21g，另取大黄300g，粉碎成细粉，与黄芩浸膏细粉合并，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，添加盐酸小檗碱5g，制粒，压片，每片重0.3g。
5.根据权利要求4所述三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用，其特征在于三黄片的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。
6.根据权利要求4所述三黄片在制备抑制小鼠软骨ATDC5细胞增殖药物中的应用，其特征在于三黄片的制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
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