CN103655972B - 白带片在制备抑制人肺腺癌glc-82细胞增殖药物中的应用 - Google Patents

白带片在制备抑制人肺腺癌glc-82细胞增殖药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种白带片的制备方法，由麸炒白术182g、泽泻121g茯苓121g、车前子121g、椿皮121g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，服用量减少，本发明还提供了白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用。

Description

白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用
技术领域
本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种白带片的制备方法及应用。
背景技术
白带片记载于卫生部标准药典WS3-B-0251-90，处方为麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g，以上五味，取白术120g粉碎成细粉，过筛；茯苓、车前子椿皮加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过。其余白术及泽泻照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法以85％乙醇作溶剂，进行渗漉，漉液回收乙醇；合并以上各药液，减压浓缩成膏。加入白术细粉及辅料适量，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。能健脾燥湿。用于白浊带下，大便溏泻。。
现有技术中，尚未有白带片在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用打粉和水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种白带片的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种白带片的制备方法，由麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
上述一种白带片的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
上述一种白带片的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
上述一种白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用，白带片由麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
上述一种白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用，白带片制备方中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
上述一种白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用，白带片制备方中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
现有技术中，白带片每片0.5g，每次6片，一日3次，采用本发明制备成的白带片每片0.5g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需3片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1m1/g生药·min，萃取时间150min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
实施例2
取麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50℃，CO2流量3m1/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
实施例3
取麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
实施例4：白带片抑制GLC-82细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株
人肺腺癌GLC-82细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明白带片：按实施例3方法制备。
药液储液：称取100mg白带片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司批号：2010/04）；EDTA（AMRESCO公司批号：2009/10）；PenicillinGSodiumSalt（AMRESCO公司批号：2010242）；StreptomycinSulfate（AMRESCO公司批号：2010382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司批号：080310182）；MTT(Biosharp批号：0793);PBS（实验室自配）；1.4实验器材
莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司型号：S/N020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号：DHG9123A）；冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法
1）GLC-82细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%CO2）常规培养。
3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入白带片溶液，继续培养24h。
4）24h后加入20μlMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
7）结果以药物对细胞的抑制率表示：
细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值×100%。实验重复3次。
3统计处理
采用MicrosoftExcel2003软件中的相关分析和Studentt检验，数据以mean±S.D.表示。
4实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对GLC-82细胞增殖抑制有差异（P<0.05），剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P<0.01），当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0.001）。
表1白带片对GLC-82细胞增殖抑制影响研究(±SD)
注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001
5实验结论
白带片可以抑制GLC-82细胞增殖，减少GLC-82细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。

Claims (3)

1.一种白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用，其特征在于白带片由麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取麸炒白术182g、泽泻121g、茯苓121g、车前子121g、椿皮121g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
2.根据权利要求1所述一种白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用，其特征在于白带片制备方中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。
3.根据权利要求1所述一种白带片在制备抑制人肺腺癌GLC-82细胞增殖药物中的应用，其特征在于白带片制备方中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
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《更年安颗粒CO_2超临界流体萃取工艺与水蒸气蒸馏提取工艺的比较研究》;肖花艳等;《中华临床医师杂志》;20110731;第5卷(第14期);4261-4263 *

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