CN105726693A - 桃仁油在制备降血脂药物及保健产品方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了桃仁油在制备降血脂药物及保健产品以及治疗动脉粥样硬化药物方面的应用。体内和体外实验结果显示，桃仁油可以降低高脂饲养ApoE基因敲除小鼠血浆TC、TG、LDL?C值，升高HDL?C水平，显著减少主动脉粥样硬化病变面积，还可抑制小鼠动脉粥样硬化斑块内TF蛋白的表达，达到稳定动脉粥样硬化斑块的作用，抑制动脉粥样硬化病变的形成。同时，本发明为探讨桃仁油对动脉粥样硬化的影响及作用机制方面提供了宝贵的经验。

Description

桃仁油在制备降血脂药物及保健产品方面的应用
技术领域
本发明属于桃仁油技术领域，尤其涉及桃仁油在制备降血脂药物及保健产品方面的应用。
背景技术
动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种进展性的慢性炎症性的疾病，是许多心、脑血管缺血性疾病的病理基础和主要病因。血管内皮细胞(vascular endothelialcell，VEC)是血液和血管平滑肌间的屏障，在维持血管渗透性、分泌血管活性物质和传递血管信息等方面起关键作用，它既有止血功能，也有抗凝、抗栓功能。内皮细胞功能失调对于动脉粥样硬化的发生发展有着重要的作用。肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为一种强效的促炎症性因子，能诱导血管内皮细胞表达TF(tissue factor，组织因子)，激活凝血反应，降低内皮细胞抗血栓的功能，深度参与动脉粥样硬化的形成和发展。组织因子TF是外源性凝血的启动因子，TF在AS的形成中发挥了重要作用，粥样斑块破裂后，斑块及VEC中TF暴露于血浆，启动外源性凝血过程，导致AS的发生。
桃仁为活血化瘀药，具有活血化瘀的作用，主要用于瘀血病证，临床功效显著。相关研究发现桃仁对瘀热互结和寒凝血瘀证动物模型在改善血液流变学、微循环等方面均表现出较强的药效作用。桃仁中的脂溶性成分约占桃仁干重的50％，桃仁油也能明显改善正常小鼠耳廓微循环及血瘀大鼠的血液流变学指标，桃仁油可能是桃仁活血化瘀功效的主要有效部位。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种桃仁油在制备降血脂药物及保健产品方面的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
桃仁油在制备降血脂药物及保健产品方面的应用。
桃仁油在制备治疗动脉粥样硬化药物方面的应用。
桃仁油以石油醚为溶剂，经加热回流提取而得。
桃仁油按以下操作制备：桃仁打碎，加6.5倍石油醚，提取温度65℃，水浴锅加热回流提取2.5小时，抽滤，37℃水浴锅挥去有机溶剂，即得。
为开发桃仁在医药领域的价值，发明人对桃仁油进行了细致深入地研究，体内和体外实验结果显示，桃仁油可以降低高脂饲养ApoE基因敲除小鼠血浆TC、TG、LDL-C值，升高HDL-C水平，显著减少主动脉粥样硬化病变面积，还可抑制小鼠动脉粥样硬化斑块内TF蛋白的表达，达到稳定动脉粥样硬化斑块的作用，抑制动脉粥样硬化病变的形成。因此，本发明预示桃仁油在制备降血脂药物及保健产品以及治疗动脉粥样硬化药物方面具有良好的应用前景。同时，本发明为探讨桃仁油对动脉粥样硬化的影响及作用机制方面提供了宝贵的经验。
附图说明
图1是桃仁油脂肪酸成分及含量分析图。
图2是小鼠主动脉HE染色(×400倍)结果图，图中：A正常组；B模型组；C阳性组；D桃仁油高剂量组；E桃仁油低剂量组。
图3是小鼠主动脉免疫组化(×400倍)结果图，图中：A正常组；B模型组；C阳性组；D桃仁油高剂量组；E桃仁油低剂量组。
具体实施方式
1.材料
桃仁产自河北，批号为13110814，购自广西老百姓大药房有限公司。8周龄雄性ApoE基因敲除和正常雄性小鼠，体重18～21g，购自北京大学医学部实验动物中心。方法
2.1桃仁油的提取与脂肪酸成分分析
2.1.1桃仁油的提取
桃仁打碎，加6.5倍石油醚，提取温度65℃，水浴锅加热回流提取2.5小时，抽滤，37℃水浴锅挥去有机溶剂。称重，计算得油率。
提油率＝实际提油量(g)/原料质量(g)×100％。
2.1.2桃仁油脂肪酸成分分析
桃仁油甲酯化后采用GC-MS对提取的桃仁油进行脂肪酸组成分析。GC-MS色谱条件：DB-1毛细管色谱柱30m×0.25mm×0.25μm，载气流速0.7mL/min，分流比50∶1，汽化室温度240℃，柱温180℃，进样量1μL。EI离子源，离子源温度230℃，电子能量70eV，倍增器电压0.9kV，扫描范围40～600amu。
2.2动物实验分组及小鼠动脉粥样硬化模型的制备
8周龄的32只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组、阳性组、桃仁油高剂量组、桃仁油低剂量组，并以8只正常雄性小鼠为正常组，共5组，每组8只。除正常组外，各组小鼠均给予高脂饲养8周，造成ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型。在高脂饲养的后4周，阳性组灌胃给予辛伐他汀5mg.kg-1.d-1，桃仁油高、低剂量组分别给予桃仁油2g.kg-1.d-1，0.5g.kg-1.d-1，正常组和模型组给予相当剂量的生理盐水。
2.3小鼠实验标本的采集与处理
小鼠处死前禁食12h以上，20％乌拉坦生理盐水溶液0.2～0.3mL腹腔注射麻醉，固定四肢，剪开朐腹正中皮肤，分离皮下组织及肌肉，剪开朐骨，暴露心脏，生理盐水及4％多聚甲醛PBS灌注固定主动脉15min，完全分离心脏及主动脉，将心脏和主动脉根部至髂动脉分叉段离断取出。取全部小鼠主动脉根部1.0cm主动脉，4％多聚甲醛固定，然后以中性福尔马林再固定，制备石蜡切片。
2.4血脂四项
利用全自动生化分析仪，氧化酶法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。
2.5苏木精-伊红(HE)染色观察桃仁油对小鼠主动脉动脉粥样硬化影响
将4％多聚甲醛固定的主动脉标本，常规石蜡包埋、切片(4μm厚)进行HE染色，利用计算机辅助图像分析软件(Image Pro Plus 6.0)以血细胞计数板刻度为标尺，直接测量小鼠动脉粥样斑块面积，血管管壁面积等于动脉外弹力层包围面积减去内弹力层包围面积。
采用SPSS17.0软件进行统计学处理，实验数据的结果以均数±标准差表示，各组均数之间比较采用One-way ANOVA和组间多重比较，P＜0.05说明差异有统计学意义。
3.结果
3.1桃仁油的提取与脂肪酸成分分析
桃仁油的提取率为41.2％，采用GC-MS对提取的桃仁油进行脂肪酸组成分析，桃仁油脂肪酸甲酯的总离子色谱图见图1。桃仁油中不饱和脂肪酸含量很高，占总脂肪含量的86％，其主要的不饱和脂肪酸为油酸(55.2％)和亚油酸(30.8％)，而饱和脂肪酸主要是棕榈酸(7.97％)和硬脂酸(2.37％)，还有少量的a-亚麻酸(0.11％)(见表1)。
表1 桃仁油脂肪酸成分及含量分析
3.2各组血清TC、TG、HDL-C及LDL-C水平比较(表2)
高脂饮食喂养8周后，与正常组比较，模型组TC、TG、LDL-C值均升高，差异有统计学意义(P＜0.01)；HDL-C值低，差异有统计学意义(P＜0.01)；与模型组比较，阳性组、桃仁油高、低剂量组TC、TG、LDL-C值均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；HDL-C值均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
表2 高脂饮食喂养8周各组小鼠血脂水平(n＝8，)
注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01
3.3HE染色观察桃仁油对小鼠主动脉动脉粥样硬化影响
(1)小鼠主动脉粥样硬化病理形态学比较(图2)
模型组的小鼠主动脉粥样硬化病变程度已达到粥样病变，管腔堵塞，平滑肌紊乱，大量泡沫细胞形成和堆积，并有大量的炎症细胞、粥样板块-胆固醇结晶。与模型组相比，阳性组、桃仁油高、低剂量组的小鼠主动脉粥样硬化病变程度轻，管腔堵塞，平滑肌紊乱，仍有少量的泡沫细胞和炎症细胞形成。正常组小鼠主动脉尚未形成动脉粥样硬化病变。
(2)小鼠主动脉动脉粥样硬化病变面积比较
与模型组相比，阳性组、桃仁油高、低剂量组的小鼠主动脉粥样硬化病变面积明显减少，主动脉粥样硬化病变面积/血管壁横截面积也显著减少(见表3)。
表3 各组小鼠主动脉粥样硬化病变面积比较(n＝8)
(注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01)
3.4免疫组化法检测桃仁油对小鼠动脉粥样硬化斑块中TF表达影响(图3)
与正常组相比，模型组小鼠主动脉中TF表达量明显增多，在斑块内膜纤维结缔组织中广泛表达，在内皮细胞、巨噬细胞、泡沫细胞和平滑肌细胞中均有表达，在脂质池附近表达量最高。与模型组相比，阳性组、桃仁油高、低剂量组的小鼠主动脉中TF在内皮细胞、巨噬细胞、泡沫细胞、平滑肌细胞和斑块中的表达量均减少。正常组小鼠的主动脉血管组织均未见TF表达，仅外膜可见TF表达。
4.讨论
动脉粥样硬化(AS)是引发冠心病、脑梗死、心肌梗塞等心血管疾病的重要因素，已成为严重威胁人类健康的常见病和多发病。载脂蛋白E敲除小鼠是AS模型之一。通过基因打靶技术制备的ApoE基因缺失小鼠，在正常饮食下血浆总胆固醇水平比正常对照小鼠高出5倍和8倍，可自发形成AS。本实验HE结果显示，高脂饲养8周的ApoE基因敲除小鼠在16周龄时出现较严重的高脂血症，主动脉根部形成动脉粥样硬化的初期改变，说明其造模是成功的。且发现桃仁油各剂量组既能改善ApoE基因敲除小鼠血脂水平异常，改善小鼠主动脉粥样硬化病变程度和面积，提示桃仁油有抑制动脉粥样硬化发展的作用。

Claims (4)

1.桃仁油在制备降血脂药物及保健产品方面的应用。
2.桃仁油在制备治疗动脉粥样硬化药物方面的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述桃仁油以石油醚为溶剂，经加热回流提取而得。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述桃仁油按以下操作制备：桃仁打碎，加6.5倍石油醚，提取温度65℃，水浴锅加热回流提取2.5小时，抽滤，37℃水浴锅挥去有机溶剂，即得。
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