CN105687350B - 一种用于改善缺血性脑中风的中药组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于改善缺血性脑中风的中药组合物，包括如下以下按重量份数计的组分组成：大黄总蒽醌10~30；人参总皂苷2~10；葛根总黄酮30~55；川芎有效部位1~10；川芎油2~20；所述川芎有效部位的制备方法为：称取川芎，使用6~10倍量50~70%的乙醇提取2~4次，每次提取1.5h，合并滤液，减压回收后制备成样品水溶液，将所述样品水溶液使用吸附树脂柱进行吸附，除杂，洗脱后，即得所述川芎有效部位。本发明提供的中药组合物采用活性成分进行配伍，排除由于中药各成分含量受生长周期、采收期、种植地等因素影响，确保临床用药质量安全可靠，并保证中药临床用药剂量准确，疗效稳定，且所述组合物能够明显改善缺血性脑中风症状。

Description

一种用于改善缺血性脑中风的中药组合物及其应用
技术领域
本发明属于中药技术领域，更具体地，涉及一种用于改善缺血性脑中风的中药组合物及其应用。
背景技术
脑脉通是河南中医学院李建生教授治疗脑梗死的经验方，由大黄、人参、葛根、川芎（9:9:6:6）组成，方中大黄具有降浊通腑、解毒化瘀之功，为方中君药。川芎为“血中气药”，活血兼行气，可引诸药上达巅顶，旁通四肢，襄助大黄祛瘀之功，为方中臣药。人参能大补元气、益阴生津、补益脾肺。既可扶助正气，令气旺则帅血行有力，又防大黄祛邪伤正，同为方中佐药。葛根生津通络，引药上行，为方中使药。葛根与大黄相配，一升一降，调畅气机，其气升，则引诸药上行而化脑脉之瘀、并使脑窍得养；其气降，则浊气下行而瘀毒得以下排出。全方中大黄、川芎相配，降浊解毒化瘀，辅以人参、葛根，既加强大黄、川芎解毒化瘀作用，又引诸药直达病所，标本兼顾，攻补兼施，动静结合，升降相因，祛邪而不伤正，补虚而不留邪。
脑脉通方目前主要是以饮片的形式应用于临床，其成分的复杂性和多样性，正是其多靶点、功效多样性的基础，但过多的成分也使药物质量难以控制，疗效不稳定，给该方的现代化研究和使用带来一定的局限性。
发明内容
本发明根据现有制剂服用量大、活性成分不清、含量难以控制等不足，提供一种药效物质基础基本明确、含量稳定可靠、疗效确切、服用剂量显著降低的中药提取物组合物。
本发明的另一目的在于提供上述组合物的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明提供了一种用于改善缺血性脑中风的中药组合物，包括如下以下按重量份数计的组分组成：
大黄总蒽醌 10~30
人参总皂苷 2~10
葛根总黄酮 30~55
川芎有效部位 1~10
川芎油 2~20
所述川芎有效部位的制备方法为：称取川芎，使用6~10倍量50~70%的乙醇提取2~4次，每次提取1.5h，合并滤液，减压回收后制备成样品水溶液，将所述样品水溶液使用吸附树脂柱进行吸附，除杂，洗脱后，即得所述川芎有效部位。
优选地，包括如下按重量份数计的组分组成：
大黄总蒽醌 15~25
人参总皂苷 5~10
葛根总黄酮 40~50
川芎有效部位 1~5
川芎油 5~15。
优选地，包括如下按重量份数计的组分组成：
大黄总蒽醌 18
人参总皂苷 7
葛根总黄酮 45
川芎有效部位 2.7
川芎油 11。
优选地，所述川芎有效部位的制备方法为：称取川芎，使用8倍量65%的乙醇提取3次，每次提取1.5h，合并滤液，减压回收后制备成样品水溶液，将所述样品水溶液使用HPD826大孔吸附树脂柱进行吸附，上样量5BV，静置吸附3h后，用3BV蒸馏水洗脱除杂，再用60%乙醇洗脱，减压回收乙醇，低温干燥成粉末，即得所述川芎有效部位；
所述样品水溶液的浓度为0.25mg/ml。
优选地，所述大黄总蒽醌的制备方法为：称取大黄，使用5倍量的75%的乙醇和1倍量的混合酸溶液，回流2次，每次2h，合并滤液，减压回收后，干法上样，使用的色谱柱为聚酰胺色谱柱，控制流速为10.0ml/min，3倍量的水和8倍量的40%的乙醇进行除杂，然后用10倍柱体积的95%的乙醇进行洗脱，回收，减压后即得所述大黄总蒽醌；
所述混合酸溶液为体积比为1:1的盐酸和冰乙酸。
优选地，所述人参总皂苷的制备方法为：称取人参，使用8~12倍量60~80%乙醇回流2~4次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25g/ml的水溶液，使用大孔吸附树脂柱进行吸附，然后使用蒸馏水进行除杂，乙醇进行洗脱，回收，干燥后即得所述人参总皂苷。
优选地，所述人参总皂苷的制备方法为：称取人参，使用10倍量70%乙醇回流3次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25g/ml的水溶液，使用D101大孔吸附树脂柱进行吸附，上样量为4BV，然后使用4BV蒸馏水进行除杂，再使用50%的5BV乙醇进行洗脱，回收，干燥后即得所述人参总皂苷。
优选地，所述葛根总黄酮的制备方法为：称取葛根，使用8~12倍量60~80%的乙醇进行回流提取1~3次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25mg/ml的样品溶液，使用大孔吸附树脂柱进行吸附，蒸馏水进行除杂，乙醇进行洗脱，干燥后即得所述葛根总黄酮。
优选地，所述葛根总黄酮的制备方法为：称取葛根，使用10倍量70%的乙醇进行回流提取2次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25mg/ml的样品溶液，使用AB-8大孔吸附树脂柱进行吸附，上样量为4BV，然后使用4BV蒸馏水进行除杂，再使用50%的5BV乙醇进行洗脱，回收，干燥后即得所述葛根总黄酮。
通过对本发明提供的组合物应用于对脑缺血大鼠模型的影响实验，发现其能够显著改善小鼠脑缺血症状，且效果显著优于现有的脑脉通配方，显示出其良好的应用前景。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
本发明提供的中药组合物采用活性成分进行配伍，排除由于中药各成分含量受生长周期、采收期、种植地等因素影响，确保临床用药质量安全可靠，并保证中药临床用药剂量准确，疗效稳定，减少患者用药量，且所述组合物能够明显改善缺血性脑中风症状。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。
本发明配方中各组分的制备方法如下：
大黄总蒽醌的制备
取大黄药材适量，精密称定，5倍量75%乙醇和1倍量的盐酸和冰乙酸（1：1）的混合酸溶液，回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压回收溶剂至无醇味，与适量聚酰胺均匀分散，60度烘干，干法上样于聚酰胺色谱柱，径高比为1：7，再铺一层树脂做保护，设流速为10.0ml/min，3倍量纯水和8倍量40%乙醇冲洗除杂，然后用10倍柱体积的95%乙醇洗脱，得95%乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
人参总皂苷的制备
取人参药材适量，精密称定，10倍70%乙醇回流提取3次，每次1.5h，合并滤液，减压回收至无醇味，用蒸馏水分散成浓度为0.25g/ml的样品溶液，加至D101大孔吸附树脂柱，树脂柱的径高比为1：8，上样量为4BV。静置2h后，用5BV蒸馏水洗脱除杂，再用5BV60%乙醇洗脱，减压回收乙醇，低温干燥成粉末，即得。
葛根总黄酮的制备
取葛根药材适量，精密称定，10倍70%乙醇加热回流提取2次，每次1.5h，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，用蒸馏水分散成浓度为0.25mg/ml的样品溶液，加至AB-8大孔吸附树脂柱，径高比为1：10，上样量为4BV，静置吸附3h后，用4BV蒸馏水洗脱除杂，再用50%乙醇5BV洗脱，减压回收乙醇，低温干燥成粉末，即得。
川芎有效部位的制备
取川芎药材适量，精密称定，8倍65%乙醇回流提取3次，每次1.5h，合并滤液，减压回收至无醇味，用蒸馏水分散成浓度为0.25mg/ml的样品溶液，加至HPD826大孔吸附树脂柱，树脂柱的径高比为1：9，上样量5BV，静置吸附3h后，用3BV蒸馏水洗脱除杂，再用60%乙醇洗脱，减压回收乙醇，低温干燥成粉末，即得。
实施例1：脑脉通复方组分配伍对脑缺血大鼠模型的影响实验
将雄性wistar大鼠随机分成模型组、假手术组、阳性对照组（尼莫地平组）、11个配伍组、脑脉通组和脑脉通各有效部位原方比例组，共16组，见表1。
其中，脑脉通组配方为采用现有配方：即：按大黄：人参：川芎：葛根（9：9：6：6）处方量称取各药，加入60%乙醇，加热回流提取2次（10倍，1h；8倍，1h），过滤，合并滤液，减压回收溶剂，即得。
脑脉通各有效部位原方比例组为在脑脉通组配方基础上，根据具体用量和其中有效成分推算而来：人参总皂苷43mg/kg/d，大黄总蒽醌42mg/kg.d，葛根总黄酮103mg/kg/d，川芎有效部位27mg/kg/d，川芎油10μl/kg/d。
模型组和假手术组以0.5%CMC-Na溶液灌胃，阳性组灌尼莫地平溶液，其他组用相应的药物溶液灌胃，剂量为1ml/kg/d。各组动物灌胃4天，于第5天手术，手术前1小时追加灌胃一次。手术造模操作步骤：末次给药1h后，大鼠用10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉后，仰卧手术台上，用棉绳固定四肢和头，消毒后，颈正中切开。分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)。结扎颈外动脉远心端和颈总动脉，阻断颈内动脉，于颈总动脉和颈外动脉分叉处近心端剪0.2mm小口，将线栓插入颈内动脉，向上深入至分叉以上18mm左右，直至有阻力，即阻断大脑中动脉入口处，结扎颈内动脉近心端，缝合伤口，置于铺有干净垫料的鼠笼中。手术过程中维持环境温度23±1℃。2h后轻轻抽出栓线，使其圆球端拉至颈外动脉，即可恢复供血。假手术组不做插线处理，其余步骤均与上述一致。术后24小时，进行神经功能评分，评分标准为：0分，无神经损伤症状；1分，不能完全伸展对侧前爪；2分，向对侧转圈；3分，向对侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失，结果见表2。神经功能评分后断头取脑，去除小脑、嗅球。置于-20℃低温冰箱中，待鼠脑变硬后取出，置于冰袋上。将鼠脑沿冠状面切成3片，切口在视神经和视神经后2mm处。第二片用于TTC染色，测定脑梗死面积，操作步骤为：取第2片脑片，置于2%TTC染液中，水浴锅中37℃恒温避光育孵30min，育孵过程中要翻面，使脑片染色均匀。取出脑片，置生理盐水中冲洗后，固定于10%甲醛溶液中，24h后拍照。把照片导入计算机测量脑切片的梗死区面积占切面总面积的百分比，来表示脑组织梗死程度。结果见表2。
其中，
第三片投入10%甲醛中固定2个星期后，做HE染色，制作病理切片，光镜下观察脑组织病理变化，测定坏死区体密度，操作步骤为：将第三片脑片，使用HE染色法，制备病理切片，光镜下观察脑组织病理变化，并计算坏死区的体密度。采用国际通用的立体计量学的点分析法，对坏死区脑组织进行立体计量学的定量测定计算其体密度（Vv），坏死区体密度为每组动物的脑组织坏死区的体密度定与参照系百分比。结果见表2。
其中，
表1
试验号 大黄总蒽醌 人参总皂苷 葛根总黄酮 川芎有效部位 川芎油
1 0 13 103 45 560
2 22 33 253 90 120
3 42 53 403 36 890
4 62 73 0 81 450
5 82 93 153 27 10
6 102 0 303 72 780
7 122 23 453 18 340
8 142 43 53 63 0
9 162 63 203 0 670
10 182 83 353 54 230
11 180 70 450 27 110
注：表中除川芎油的单位是μl/kg/d外，其余均为mg/kg/d。
表2
注：**为与模型组比较P<0.01，*为与模型组比较P<0.05，△△为与假手术组比较P<0.01，△为与假手术组比较P<0.05，#为与尼莫地平组比较P＜0.05。
结果显示，本发明实施例11的配方与模型组比较，其梗死面积、坏死区体密度均有尤其显著的改善（P＜0.01），与阳性对照组比较，其作用有显著的改善（P＜0.05），而与配方1~10进行比较，本发明所述配方效果更为显著，表明上述各组分配伍合理、有效，并能显著改善缺血性脑中风症状。

Claims (4)

1.一种用于改善缺血性脑中风的中药组合物，其特征在于，由如下以下按重量份数计的组分组成：
大黄总蒽醌18
人参总皂苷7
葛根总黄酮45
川芎有效部位2.7
川芎油11；
所述川芎有效部位的制备方法为：称取川芎，使用8倍量65％的乙醇提取3次，每次提取1.5h，合并滤液，减压回收后制备成样品水溶液，将所述样品水溶液使用HPD826大孔吸附树脂柱进行吸附，上样量5BV，静置吸附3h后，用3BV蒸馏水洗脱除杂，再用60％乙醇洗脱，减压回收乙醇，低温干燥成粉末，即得所述川芎有效部位；其中所述样品水溶液的浓度为0.25mg/mL；
所述大黄总蒽醌的制备方法为：称取大黄，使用5倍量的75％的乙醇和1倍量的混合酸溶液，回流2次，每次2h，合并滤液，减压回收后，干法上样，使用的色谱柱为聚酰胺色谱柱，控制流速为10.0mL/min，3倍量的水和8倍量的40％的乙醇进行除杂，然后用10倍柱体积的95％的乙醇进行洗脱，回收，减压后即得所述大黄总蒽醌；所述混合酸溶液为体积比为1:1的盐酸和冰乙酸；
所述人参总皂苷的制备方法为：称取人参，使用8～12倍量60～80％乙醇回流2～4次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25g/mL的水溶液，使用大孔吸附树脂柱进行吸附，然后使用蒸馏水进行除杂，乙醇进行洗脱，回收，干燥后即得所述人参总皂苷。
所述葛根总黄酮的制备方法为：称取葛根，使用8～12倍量60～80％的乙醇进行回流提取1～3次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25mg/mL的样品溶液，使用大孔吸附树脂柱进行吸附，蒸馏水进行除杂，乙醇进行洗脱，干燥后即得所述葛根总黄酮。
2.根据权利要求1所述的用于改善缺血性脑中风的中药组合物，其特征在于，所述人参总皂苷的制备方法为：称取人参，使用10倍量70％乙醇回流3次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25g/mL的水溶液，使用D101大孔吸附树脂柱进行吸附，上样量为4BV，然后使用4BV蒸馏水进行除杂，再使用50％的5BV乙醇进行洗脱，回收，干燥后即得所述人参总皂苷。
3.根据权利要求1所述的用于改善缺血性脑中风的中药组合物，其特征在于，所述葛根总黄酮的制备方法为：称取葛根，使用10倍量70％的乙醇进行回流提取2次，每次1.5h，合并滤液，制备成0.25mg/mL的样品溶液，使用AB-8大孔吸附树脂柱进行吸附，上样量为4BV，然后使用4BV蒸馏水进行除杂，再使用50％的5BV乙醇进行洗脱，回收，干燥后即得所述葛根总黄酮。
4.权利要求1至3任意一项权利要求所述的中药组合物在制备改善缺血性脑中风药物中的应用。
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