CN105640885A - 一种壳交联的双载药胶束及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种壳交联的双载药胶束及其制备方法和应用。本发明通过开环聚合和ATRP聚合得到两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)，并以此为药物载体，通过非共价键方式包埋DOX于胶束疏水核中，而Pt(Ⅳ)则以交联剂被共价交联到胶束亲水壳中，制备了一种新型的壳交联双载药胶束，实现了两种药物的同时负载，具有复合治疗的功能。制备得到的壳交联双载药胶束大小均一，药物负载量大，稳定性好，可防止药物突释且累积释放百分率很高，抗癌效果和协同作用十分显著，取得了预料不到的技术效果。

Description

一种壳交联的双载药胶束及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药材料技术领域，具体地说，涉及一种壳交联的双载药胶束及其制备方法和应用。
背景技术
目前，在众多的药物载体中，聚合物胶束因其核-壳的纳米结构、优良的生物相容性、生物可降解性及可进一步功能修饰等优点而受到人们广泛的关注。此外，为了克服肿瘤细胞对化疗药物的耐药性，提高化疗效果，基于纳米材料为载体的多药传递系统的概念被提了出来，其一方面可降低毒性提高疗效，另一方面可克服临床化疗中的耐药性问题。
目前，聚合物胶束主要以非共价键方式载药，虽然此方法制备时较为简单，但是聚合物与药物分子之间的相互作用力较弱且结合可逆，所以较低的药物包封率和较差的胶束稳定性是不可避免的。为了克服上述问题，以共价键载药的方式被开发出来。但是涉及到多种药物负载时体系的合成很复杂繁琐，具有相当大的难度。
中国专利文献CN201210199661.2，公开日2012.10.24，公开了一种温度和pH敏感性的壳交联聚合物胶束的制备方法，其通过可逆-加成断裂链转移聚合法合成一种具有温度和pH敏感性的两嵌段共聚物，再利用小分子二醛或二酸对自组装形成的聚合物胶束的壳层结构进行部分交联，该方法所制备的两嵌段共聚物具有功能性强、分子量分布窄的优点，其利用小分子交联剂对胶束壳层结构进行部分交联，在保证聚合物胶束稳定的前提下，制备方法具有可行性强、操作简便、可使胶束重复利用等特点。中国专利文献CN201410162228.0，公开日2015.10.28，公开了一种治疗肿瘤的包载紫杉醇的聚合物胶束及其制备方法，该发明采用薄膜分散法制备紫杉醇PEG-PLA/VitaminE-TPGS混合胶束，以PEG-PLA和VitaminE-TPGS两种高分子材料组成的混合胶束为载体，将紫杉醇包载在混合胶束的疏水内核中，制得的紫杉醇PEG-PLA/VitaminE-TPGS混合胶束能有效地增加紫杉醇的溶解度，显著提高胶束系统对紫杉醇的载药量，最高可达到35％(w/w)，混合胶束体系中VitaminE-TPGS具有的抑制P-gp外排的生物功能，起到高效逆转肿瘤多药耐药以提高对肿瘤的治疗作用。
然而目前关于使用非共价键方式包埋DOX于胶束疏水核中，以Pt(Ⅳ)抗癌药物为交联剂共价交联胶束亲水壳所构建的壳交联双载药胶束还未见报道。而该种双载药胶束在恶性肿瘤的复合化疗中具备广阔的应用前景。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种壳交联的双载药胶束。
本发明的再一的目的是，提供所述壳交联的双载药胶束的制备方法。
本发明的另一的目的是，提供所述壳交联的双载药胶束的用途。
为实现上述第一目的，本发明采取的技术方案是：
一种壳交联的双载药胶束，其是由以下方法制备得到的：
(1)以带有羟基和溴基团的双官能团分子HBMP(2-溴异丁酸乙二醇酯)为引发剂，CL单体为底物，采用开环聚合法，制备得到分子量分布≤1.3的PCL(聚己内酯)链段材料，其一端带有溴基团；
(2)以步骤(1)所得的PCL为大分子引发剂，通过ATRP聚合AzPMA(甲基丙烯酸叠氮丙醇酯)和OEGMA单体，得到分子量分布≤1.3的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)；
(3)将步骤(2)所得的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)和DOX溶于DMSO/DMF(二甲基亚砜/二甲基甲酰胺)的混合溶剂中，再在剧烈搅拌下以0.08-0.10mL/s滴加去离子水，自组装形成胶束并实现对DOX的负载，其中DMSO和DMF体积比为1:1；
(4)在步骤(3)所得的溶液中加入Pt(Ⅳ)前药分子、硫酸铜、维C钠，在氮气保护下室温反应，负载上第二种药物并将胶束的亲水壳层交联，未负载的药物分子通过透析除去。
作为本发明的一个优选例，步骤(1)中以辛酸亚锡为催化剂，用量为CL单体质量的0.5-1.5％，聚合温度125-135℃，反应时间4-7小时。更优选地，所述辛酸亚锡用量为CL单体质量的0.9-1.2％，聚合温度130℃，反应时间5小时。
作为本发明的另一优选例，步骤(3)中所述去离子水滴加量为有机溶剂量的0.9-1.2倍。更优选地，步骤(3)中所述去离子水滴加量与有机溶剂量相同。
作为本发明的一种具体实施方式，步骤(2)中ATRP聚合反应温度为65-75℃，反应时间为10-14h。
作为本发明的一种具体实施方式，步骤(4)反应时间为22-25h。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
一种壳交联的双载药胶束的制备方法，包括以下步骤：
(1)以带有羟基和溴基团的双官能团分子HBMP(2-溴异丁酸乙二醇酯)为引发剂，CL单体为底物，采用开环聚合法，制备得到分子量分布≤1.3的PCL(聚己内酯)链段材料，其一端带有溴基团；
(2)以步骤(1)所得的PCL为大分子引发剂，通过ATRP聚合AzPMA(甲基丙烯酸叠氮丙醇酯)和OEGMA单体，得到分子量分布≤1.3的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)；
(3)将步骤(2)所得的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)和DOX溶于DMSO/DMF(二甲基亚砜/二甲基甲酰胺)的混合溶剂中，再在剧烈搅拌下以0.08-0.10mL/s滴加去离子水，自组装形成胶束并实现对DOX的负载，其中DMSO和DMF体积比为1:1；
(4)在步骤(3)所得的溶液中加入Pt(Ⅳ)前药分子、硫酸铜、维C钠，在氮气保护下室温反应，负载上第二种药物并将胶束的亲水壳层交联，未负载的药物分子通过透析除去。
作为本发明的一个优选例，步骤(1)中以辛酸亚锡为催化剂，用量为CL单体质量的0.5-1.5％，聚合温度125-135℃，反应时间4-7小时。更优选地，所述辛酸亚锡用量为CL单体质量的0.9-1.2％，聚合温度130℃，反应时间5小时。
作为本发明的另一优选例，步骤(3)中所述去离子水滴加量为有机溶剂量的0.9-1.2倍。更优选地，步骤(3)中所述去离子水滴加量与有机溶剂量相同。
作为本发明的一种具体实施方式，步骤(2)中ATRP聚合反应温度为65-75℃，反应时间为10-14h。
作为本发明的一种具体实施方式，步骤(4)反应时间为22-25h。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
如上任一所述壳交联的双载药胶束在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明优点在于：
1、本发明通过开环聚合和ATRP聚合得到两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)，并以此为药物载体，通过非共价键方式包埋DOX于胶束疏水核中，而Pt(Ⅳ)则以交联剂被共价交联到胶束亲水壳中，制备了一种新型的壳交联双载药胶束，实现了两种药物的同时负载，具有复合治疗的功能。
2、本发明选用了合适的引发剂、催化剂等，且用量、反应温度和时间等参数设置恰当，制备得到的聚合物收率高，分子量分布窄，且在胶束的形成过程中，选用了合适的有机溶剂，水的滴加速度和用量等参数设置恰当，确保了纳米胶束能够成功自组装，且胶束大小均一，药物负载量大，稳定性好，可防止药物突释，累积释放百分率很高，抗癌效果和协同作用十分显著，取得了预料不到的技术效果。
附图说明
附图1是本发明壳交联的双载药胶束的制备流程图。
附图2是PCL凝胶渗透图谱。
附图3是PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)凝胶渗透图谱。
附图4是壳交联的双载药胶束的红外图谱。
附图5是壳交联的双载药胶束的透射电镜图。
附图6是壳交联的双载药胶束的动态光散射图谱。
附图7是壳交联的双载药胶束的热失重分析图。
附图8是壳交联的双载药胶束的体外药物释放图。A)铂类药物和B)阿霉素在不同体外模拟条件下的药物释放曲线。(■)pH7.4，(●)pH5.5，(▲)pH7.4，VcNa的浓度为5mM，(▼)pH5.5，VcNa的浓度为5mM。
附图9是纯阿霉素、纯顺铂、单载药和壳交联双载药胶束在不同药物浓度和作用时间下对A357和HeLa癌细胞的毒性实验结果。每一簇立体柱从左至右依次代表Pt、DOX、Diblock-Pt、Diblock-DOX、Diblock-DOX-Pt。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1本发明壳交联的双载药胶束制备(一)
(1)PCL的制备：将HBMP(0.15mL,0.8mmol)、CL单体(5mL,47mmol)和无水甲苯(10mL)加入到50mL反应管中(使用前先真空火烤除水)。在氮气保护下再加入0.45mL的辛酸亚锡甲苯溶液，其中辛酸亚锡用量为CL单体质量的1.0％。在130℃油浴下反应5h后，撤去加热装置冷却到室温，加入THF稀释，并沉于大量冷乙醚中。沉淀用THF溶解后再滴入冷乙醚进行沉淀，如此反复纯化三次，得到4.3g白色固体产物PCL，产率为81.1％。
开环聚合后所得到的PCL凝胶渗透图谱见图2，可以看到数均分子量为7190，分子量分布为1.09，表明聚合成功，且分子量分布窄。
(2)PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)的制备：将PCL(1.25g,0.2mmol)、CuBr(28.6mg,0.2mmol)、OEGMA(5.3mL,12mmol)和AzPMA(0.5g,3mmol)单体、溶剂DMF(15mL)和配位剂PMDETA(0.08mL,0.4mmol)依次加入到事先以真空火烤除水的50mL反应管中。经过三次冷冻-抽真空-解冻通氮气循环除去反应体系中的氧气。70℃下反应12h后，用液氮终止反应。后处理纯化：加入适量THF稀释后，滴入冷正己烷中沉淀出聚合物。如此溶解、沉淀纯化三次。最后得到微黄色蜡状固体产物4.2g，产率为67.2％。
ATRP聚合后所得到的PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)凝胶渗透图谱见图3，可以看到数均分子量为31000，分子量分布为1.19，表明聚合成功。
(3)胶束形成和DOX的负载：先将聚合物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)(20mg)和DOX(4mg)溶于50mLDMSO/DMF(V:V＝1:1)的混合溶剂中，再在剧烈搅拌下以0.10mL/s滴加等量去离子水，自组装形成胶束，持续搅拌4h。
(4)壳层交联和Pt(Ⅳ)的负载：在步骤(3)制备的溶液中加入Pt(Ⅳ)前药分子(20mg,0.03mmol)、硫酸铜(5.3mg,0.03mmol)和VcNa(5.94mg,0.03mmol)，在氮气保护下室温反应24h。结束后，将溶液转移到透析袋中，透析3天，每隔6h换一次水。
壳交联的双载药胶束的红外图谱见图4，从图中可以看出，壳交联后，聚合物2100cm-1处的叠氮振动峰完全消失，在3440，1634和1560cm-1处则出现了Pt(Ⅳ)前药分子的-NH3振动峰和酰胺振动峰，这说明胶束亲水壳层的叠氮基团成功地与Pt(Ⅳ)前药分子的炔基发生了反应。
壳交联的双载药胶束的透射电镜图见图5，从图中可以看出，胶束呈球形，尺寸大小在几十纳米左右。
壳交联的双载药胶束的动态光散射图谱见图6，从图中可以看到，胶束在有机溶剂DMF中依然保持着纳米胶束结构，说明胶束的壳被交联了。
实施例2本发明壳交联的双载药胶束制备(二)
(1)PCL的制备：将HBMP(0.15mL,0.8mmol)、CL单体(5mL,47mmol)和无水甲苯(10mL)加入到50mL反应管中(使用前先真空火烤除水)。在氮气保护下再加入0.45mL的辛酸亚锡甲苯溶液，其中辛酸亚锡用量为CL单体质量的1.5％。在135℃油浴下反应4h后，撤去加热装置冷却到室温，加入THF稀释，并沉于大量冷乙醚中。沉淀用THF溶解后再滴入冷乙醚进行沉淀，如此反复纯化三次，得到4.2g白色固体产物PCL，分子量分布为1.12。
(2)PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)的制备：将PCL(1.25g,0.2mmol)、CuBr(28.6mg,0.2mmol)、OEGMA(5.3mL,12mmol)和AzPMA(0.5g,3mmol)单体、溶剂DMF(15mL)和配位剂PMDETA(0.08mL,0.4mmol)依次加入到事先以真空火烤除水的50mL反应管中。经过三次冷冻-抽真空-解冻通氮气循环除去反应体系中的氧气。65℃下反应14h后，用液氮终止反应。后处理纯化：加入适量THF稀释后，滴入冷正己烷中沉淀出聚合物。如此溶解、沉淀纯化三次。最后得到微黄色蜡状固体产物4.0g，分子量分布为1.25。
(3)胶束形成和DOX的负载：先将聚合物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)(20mg)和DOX(4mg)溶于50mLDMSO/DMF(V:V＝1:1)的混合溶剂中，再在剧烈搅拌下以0.10mL/s滴加0.9倍有机溶剂体积的去离子水，自组装形成胶束，持续搅拌5h。
(4)壳层交联和Pt(Ⅳ)的负载：在步骤(3)制备的溶液中加入Pt(Ⅳ)前药分子(20mg,0.03mmol)、硫酸铜(5.3mg,0.03mmol)和VcNa(5.94mg,0.03mmol)，在氮气保护下室温反应22h。结束后，将溶液转移到透析袋中，透析3天，每隔6h换一次水。
其红外图谱、透射电镜图和动态光散射图谱显示成功制备了壳交联的双载药胶束。
实施例3本发明壳交联的双载药胶束制备(三)
(1)PCL的制备：将HBMP(0.15mL,0.8mmol)、CL单体(5mL,47mmol)和无水甲苯(10mL)加入到50mL反应管中(使用前先真空火烤除水)。在氮气保护下再加入0.45mL的辛酸亚锡甲苯溶液，其中辛酸亚锡用量为CL单体质量的0.5％。在125℃油浴下反应7h后，撤去加热装置冷却到室温，加入THF稀释，并沉于大量冷乙醚中。沉淀用THF溶解后再滴入冷乙醚进行沉淀，如此反复纯化三次，得到4.25g白色固体产物PCL，分子量分布为1.17。
(2)PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)的制备：将PCL(1.25g,0.2mmol)、CuBr(28.6mg,0.2mmol)、OEGMA(5.3mL,12mmol)和AzPMA(0.5g,3mmol)单体、溶剂DMF(15mL)和配位剂PMDETA(0.08mL,0.4mmol)依次加入到事先以真空火烤除水的50mL反应管中。经过三次冷冻-抽真空-解冻通氮气循环除去反应体系中的氧气。75℃下反应10h后，用液氮终止反应。后处理纯化：加入适量THF稀释后，滴入冷正己烷中沉淀出聚合物。如此溶解、沉淀纯化三次。最后得到微黄色蜡状固体产物4.0g，分子量分布为1.22。
(3)胶束形成和DOX的负载：先将聚合物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)(20mg)和DOX(4mg)溶于50mLDMSO/DMF(V:V＝1:1)的混合溶剂中，再在剧烈搅拌下以0.08mL/s滴加1.2倍有机溶剂体积的去离子水，自组装形成胶束，持续搅拌5h。
(4)壳层交联和Pt(Ⅳ)的负载：在步骤(3)制备的溶液中加入Pt(Ⅳ)前药分子(20mg,0.03mmol)、硫酸铜(5.3mg,0.03mmol)和VcNa(5.94mg,0.03mmol)，在氮气保护下室温反应25h。结束后，将溶液转移到透析袋中，透析3天，每隔6h换一次水。
其红外图谱、透射电镜图和动态光散射图谱显示成功制备了壳交联的双载药胶束。
实施例4本发明壳交联的双载药胶束的体外药物释放实验
实施例1制备的壳交联的双载药胶束的体外药物释放实验分别在四个不同溶液中进行：(a)pH7.4的PBS缓冲液，(b)pH7.4，VcNa浓度为5mM的PBS缓冲液，(c)pH5.5的PBS缓冲液，(d)pH5.5，VcNa浓度为5mM的PBS缓冲液。过程如下：先将20mg的壳交联的双载药胶束分散于4mL去离子水中，再将其转移到截留分子量为3500的透析袋中。透析袋的外部溶液分别为40mL上述四种不同溶液，置于37℃摇床上。每间隔一段时间从外部缓冲液中取出10mL，同时补上相等体积的同种PBS缓冲液。铂的浓度由电感耦合等离子质谱(ICP-MS)得到，而DOX的浓度则由紫外吸收光谱测得。壳交联的双载药胶束的Pt(Ⅳ)载药量通过热失重分析(TGA)计算得到。为了确定DOX的载药量，要先将5mg双载药胶束分散于VcNa浓度为5mM的1MHCl溶液中，37℃下反应三天，彻底破坏胶束的外壳交联层。冻干后，加入一定量的DMSO，由紫外确定浓度，最后计算得到DOX的负载量。
通过紫外光谱测得浓度，再计算得到DOX载药量为8.5wt％。Pt(Ⅳ)的载药量则由TGA得到，见图7。铂类药物中的铂元素不会被高温氧化和气化，而其它元素则会被完全气化。而且聚合物在空气气氛中700℃高温下几乎完全失重。因此，载药胶束5.5wt％的残留量为铂元素，相对应的Pt(Ⅳ)载药量为8.5wt％。
我们所制备的壳交联的双载药胶束中，DOX是通过物理包埋被负载到胶束的疏水核中，而Pt(Ⅳ)前药分子是以叠氮-炔基的点击反应共价交联到胶束的亲水壳中。由于载药方式的不同，药物释放也会呈现出显著的差异性。由于Pt(Ⅳ)交联层的酰胺键可被酸解，同时研究也发现Pt(Ⅳ)可被还原性物质(如VcNa、谷胱甘肽等)还原释放出Pt(Ⅱ)，使胶束交联层被破坏释放出DOX。因此，我们在不同pH和VcNa浓度下对体外药物释放进行了评估，结果见图8，可见本发明制备的壳交联的双载药胶束可缓慢释放药物，且累积释放百分率很高。
实施例5本发明壳交联的双载药胶束的体外细胞实验
采用CCK-8法，选用人宫颈癌细胞(cervicalcarcinomacells,HeLa细胞)、人恶性黑色素瘤细胞A357为例，评估实施例1制备的壳交联的双载药胶束的抗癌效果和协同作用。先将上述两种细胞以10000细胞/孔的密度接种到96孔板上，并在37℃、5％CO2的培养箱中培养24小时后，吸走培养液，加入不同浓度共聚物的培养液，设三组复孔。培养48或72小时后，吸去培养液，加入100μLCCK-8检测液(V培养液:VCCK-8＝10:1)，在培养箱孵育2小时后，用酶标仪测得每个孔在450nm处的吸光度值(I)。细胞存活率按以下公式计算：
C e l l v i a b i l i t y ( % ) = I s a m b l e - I b l a n k I c o n t r o l - I b l a n k × 100 % .
其中，Isample,Icontrol和Iblank分别表示样品孔、对照孔(未加样品的细胞孔)和空白孔(只有CCK-8检测液的孔)在450nm处的吸光度值。
在体外细胞上，我们对实施例1制备的壳交联的双载药胶束的抗癌效果和协同作用进行了评估。我们选择A357和HeLa为细胞系，同时以纯DOX、纯顺铂(Pt)、单DOX负载胶束、单Pt(Ⅳ)胶束为对照组，实施例1制备的壳交联的双载药胶束为实验组，作用时间为48和72小时。从图9中的A357和HeLa细胞存活率结果中可以看出，所有样品对癌细胞均有一定的杀伤效果，且随着药物浓度的增大，杀伤效果越明显。对比各个样品可以发现，纯药和单载药胶束具有相似的细胞毒性效果。但是相比纯药和单载药胶束而言，本发明制备的壳交联的双载药胶束对A357和HeLa细胞显示出更强的细胞毒性，尤其在低药物浓度时则更加的显著。如药物浓度为1.0μM时，A357和HeLa细胞的48小时存活率分别仅为6.4％和21.0％，显著低于其它四个对照组的存活率。同样在药物浓度为0.1μM时也具有类似的结果，表明本发明制备的壳交联的双载药胶束具有很好的协同作用，显示出优异的抗癌效果。随着作用时间延长到72小时，更多的药物从双载药胶束中释放出来，因而A357和HeLa细胞的存活率进一步下降。表1是各个样品对两种细胞的IC50值。可以看到，在48小时下，本发明制备的壳交联的双载药胶束对A357和HeLa细胞的IC50分别为0.08和0.24μM，当延长到72小时后，IC50则分别下降到0.02和0.09μM。与四个对照组相比，本发明制备的壳交联的双载药胶束的IC50值显然要低得多。从上面的一系列结果可以反应出本发明制备的壳交联的双载药胶束在药物浓度很低的情况下就能显示出很强的细胞毒性，在杀死癌细胞的效果上明显优于纯药和单载药胶束。这可为肿瘤的协同复合化疗提供有效的策略和实验依据。
表1纯阿霉素、纯顺铂、单载药和壳交联双载药胶束在不同作用时间下对A357和HeLa癌细胞的IC50值
对比例1
按照实施例1的方法制备壳交联的双载药胶束，不同之处仅在于步骤(3)使用的有机溶剂为纯DMSO。
实施例6实施例2-3和对比例1制备的壳交联双载药胶束的体外药物释放实验
按照实施例4的方法检测实施例2-3和对比例1制备的壳交联双载药胶束在溶液(c)中的药物释放性能。结果见表2。
表2实施例2-3和对比例1制备的壳交联双载药胶束在溶液(c)中的药物释放性能
实施例7实施例2-3和对比例1制备的壳交联双载药胶束的体外细胞实验
按照实施例5的方法检测实施例2-3和对比例1制备的壳交联双载药胶束在孵育48h时对A357和HeLa癌细胞的IC50值。结果见表3。
表3实施例2-3和对比例1制备的壳交联双载药胶束在孵育48h时对A357和HeLa癌细胞的IC50值(μM)
A357 HeLa
实施例2 0.12 0.29
实施例3 0.17 0.32
对比例1 0.75 1.02
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种壳交联的双载药胶束，其特征在于，其是由以下方法制备得到的：
(1)以HBMP为引发剂，CL单体为底物，采用开环聚合法，制备得到分子量分布≤1.3的PCL链段材料；
(2)以步骤(1)所得的PCL为大分子引发剂，通过ATRP聚合AzPMA和OEGMA单体，得到分子量分布≤1.3的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)；
(3)将步骤(2)所得的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)和DOX溶于DMSO/DMF的混合溶剂中，再在剧烈搅拌下以0.08-0.10mL/s滴加去离子水，自组装形成胶束并实现对DOX的负载，其中DMSO和DMF体积比为1:1；
(4)在步骤(3)所得的溶液中加入Pt(Ⅳ)前药分子、硫酸铜、维C钠，在氮气保护下反应，负载上第二种药物并将胶束的亲水壳层交联，未负载的药物分子通过透析除去。
2.根据权利要求1所述的壳交联的双载药胶束，其特征在于，步骤(1)中以辛酸亚锡为催化剂，用量为CL单体质量的0.5-1.5％，聚合温度125-135℃，反应时间4-7小时。
3.根据权利要求2所述的壳交联的双载药胶束，其特征在于，所述辛酸亚锡用量为CL单体质量的0.9-1.2％，聚合温度130℃，反应时间5小时。
4.根据权利要求1所述的壳交联的双载药胶束，其特征在于，步骤(3)中所述去离子水滴加量为有机溶剂量的0.9-1.2倍。
5.根据权利要求4所述的壳交联的双载药胶束，其特征在于，步骤(3)中所述去离子水滴加量与有机溶剂量相同。
6.一种壳交联的双载药胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以HBMP为引发剂，CL单体为底物，采用开环聚合法，制备得到分子量分布≤1.3的PCL链段材料；
(2)以步骤(1)所得的PCL为大分子引发剂，通过ATRP聚合AzPMA和OEGMA单体，得到分子量分布≤1.3的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)；
(3)将步骤(2)所得的两亲性嵌段共聚物PCL-b-P(OEGMA-co-AzPMA)和DOX溶于DMSO/DMF的混合溶剂中，再在剧烈搅拌下以0.08-0.10mL/s滴加去离子水，自组装形成胶束并实现对DOX的负载，其中DMSO和DMF体积比为1:1；
(4)在步骤(3)所得的溶液中加入Pt(Ⅳ)前药分子、硫酸铜、维C钠，在氮气保护下反应，负载上第二种药物并将胶束的亲水壳层交联，未负载的药物分子通过透析除去。
7.根据权利要求6所述的壳交联的双载药胶束，其特征在于，步骤(1)中以辛酸亚锡为催化剂，用量为CL单体质量的0.5-1.5％，聚合温度125-135℃，反应时间4-7小时。
8.根据权利要求7所述的壳交联的双载药胶束，其特征在于，所述辛酸亚锡用量为CL单体质量的0.9-1.2％，聚合温度130℃，反应时间5小时。
9.根据权利要求6所述的壳交联的双载药胶束，其特征在于，步骤(3)中所述去离子水滴加量为有机溶剂量的0.9-1.2倍。
10.如权利要求1-5任一所述壳交联的双载药胶束在制备抗肿瘤药物中的应用。
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