CN105636611A - 对抗肺炎链球菌3型的不含蛋白质和肽的合成疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明提供不含蛋白质和肽的缀合物，包含合成的碳水化合物和载体分子，其中所述合成的碳水化合物是与肺炎链球菌3型荚膜多糖有关的碳水化合物而所述载体分子是鞘糖脂。所述缀合物及其药物组合物可用于免疫与肺炎链球菌有关的疾病，和更特别地与肺炎链球菌3型有关的疾病。

Description

对抗肺炎链球菌3型的不含蛋白质和肽的合成疫苗
发明领域
本发明提供不含蛋白质和肽的缀合物，其包含合成的碳水化合物和载体分子，其中所述合成的碳水化合物是与肺炎链球菌3型荚膜多糖有关的碳水化合物而所述载体分子是鞘糖脂。所述缀合物及其药物组合物可用于预防和/或治疗与肺炎链球菌有关的疾病，和更特别地与肺炎链球菌3型有关的疾病。
发明背景
接种是改善人类健康有力工具。通过帮助免疫系统的训练，接种引领了对由病原体比如细菌引起的传染病的斗争。
肺炎链球菌是革兰氏阳性细菌以及导致侵入性疾病的主要病原体之一。90种血清型的肺炎链球菌已基于它们核心荚膜多糖(CPS)结构的差异而鉴定出来，所述结构由重复低聚糖单元的聚合物组成，其是细菌的毒力因子。肺炎链球菌3型(SP3)是目前的肺炎球菌疫苗的一部分，由分离的CPS(PPV-23价和PCV-13价)组成。SP3的荚膜多糖(CPS)由[→3)-β-D-GlcpA-(1→4)-β-D-Glcp-(1→]重复单元组成。可商购23-价肺炎球菌多糖疫苗(PPV)含有23种血清型的纯化荚膜多糖(CPS)抗原。然而，该疫苗在婴儿和幼儿的情况下并没有效果。PCV-13含有免疫原性缀合物，包含13种不同肺炎链球菌血清型的纯化多糖，其共价连接至蛋白质比如CRM197。
目前已市场化的疫苗在北美和欧洲有效用于特定年龄的个体。这些疫苗的制备方法是复杂的并且造成较高的价格。因此，在绝大多数发展中国家中疫苗是无法承受的昂贵。
鞘糖脂α-半乳糖基神经酰胺，也称为KRN7000，是海绵中存在的糖脂的合成衍生物，并且确认为降低小鼠肿瘤负担的免疫激活剂。已知的是，该鞘糖脂由抗原呈递细胞(APCs)通过将其加载至蛋白质CD1d上而呈递。在加载糖脂之后，CD1d将与非变异的天然杀伤T细胞(iNKT细胞)的非变异T-细胞受体(TCR)相互作用，引起iNKT细胞的激活，其群体的扩大，和非常多细胞因子的分泌。能够刺激iNKT细胞的各种α-半乳糖基神经酰胺类似物描述于文献中(X.Lietal.PNAS2010,107,29,13010-13015)。另外，αGalCer或类似物在许多情况下被研究充当疫苗佐剂(US7771726B2；WO2006027685A2)。L.Baietal.PNAS,2013,110,40,16097-16102公开的是，对SP14肺炎球菌荚膜多糖的升高的IgM和IgG滴定度通过用脂质体免疫小鼠而提高，所述脂质体共表达肺炎链球菌荚膜多糖血清型14的四糖重复单元，其连接至二酰基甘油和NKT配体PBS57。WO2007/051004A2提供缀合物，包含α-半乳糖基神经酰胺，其在半乳糖部分C-2位置经由连接体缀合至对-羟基-间-硝基苯基抗原(NP-α-GalCer)。用所述缀合物免疫小鼠刺激对NP特异的强烈抗体应答。就我们尽可能所知，并无工作关注将鞘糖脂共价连接至限定长度的糖抗原。
本发明的目的是提供通式(I)的不含肽和不含蛋白质的完全合成缀合物及其药物组合物，所述缀合物包含与肺炎链球菌3型荚膜多糖有关的限定长度的碳水化合物，所述碳水化合物共价连接至鞘糖脂；其用于预防和/或治疗与肺炎链球菌有关的疾病，和更特别地与肺炎链球菌3型有关的疾病。所述缀合物及其组合物是耐热的或热稳定的。用所述缀合物免疫能够引起抗体对SP3肺炎球菌荚膜多糖的高滴定度。抗体呈现调理吞噬活性和杀菌活性。
本发明的目的通过独立权利要求的教导来解决。本发明的其它有利特征、方面和细节通过本申请的从属权利要求、说明书、附图和实施例变得明显。
发明详述
本发明提供通式I的完全合成缀合物
其中
A是
B是
R1选自
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R3和R4选自-H和-OH并且不能同时是-H或-OH；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
Z代表-O-CH2-，-S-CH2-，-CH2-CH2-，-O-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-，或-CH2-CH＝CH-；
X4代表：-H，-iPr，-tBu，-sBu，
Y4选自：-H，-iPr，-tBu，-Ph，sBu，
X1，X2，X3，Y1，Y2和Y3相互独立地选自：
-CH2-，-CH(OH)-，-CH(CH3)-，-CH(C2H5)-，-CH(C3H7)-，-CH(C4H9)-,
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L代表-L1-NH-L2-NH-L3-；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″和L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-，-CR9R10-，-CR11R12-，-CR13R14-，-CR15R16-，-CR17R18-，-CR19R20-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-CH2-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-，-邻-C6H4-，-间-C6H4-，-对-C6H4-，-CH2-S-CH2-，-CH2-O-CH2-；
L2选自：
E选自
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-C3H7，-C4H9，-C5H11，-Ph，-F，-Cl，-Br，-I，-OCH3，-OCF3，-CF3；
R9至R20相互独立地代表-H，-OCH3，-OC2H5，-OC3H7,环-C3H5，环-C4H7，环-C5H9，环-C6H11，环-C7H13，环-C8H15,-Ph，-CH2-Ph，-CPh3，-CH3，-C2H5，-C3H7，-CH(CH3)2，-C4H9,-CH2-CH(CH3)2，-CH(CH3)-C2H5，-C(CH3)3，-C5H11，-CH(CH3)-C3H7,-CH2-CH(CH3)-C2H5，-CH(CH3)-CH(CH3)2，-C(CH3)2-C2H5，-CH2-C(CH3)3,-CH(C2H5)2，-C2H4-CH(CH3)2，-C6H13，-C3H6-CH(CH3)2,-C2H4-CH(CH3)-C2H5，-CH(CH3)-C4H9，-CH2-CH(CH3)-C3H7,-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)2，-CH(CH3)-CH(CH3)-C2H5，-CH2-CH(CH3)-CH(CH3)2,-CH2-C(CH3)2-C2H5，-C(CH3)2-C3H7，-C(CH3)2-CH(CH3)2，-C2H4-C(CH3)3,-CH(CH3)-C(CH3)3，-C7H15，-C8H17，-C6H4-OCH3，-CH2-CH2-OCH3,-CH2-OCH3，-CH2-C6H4-OCH3；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数；
m，n，o和p相互独立地代表1至10的整数；
和上述化合物的对映体，立体异构形式，对映体的混合物，端基异构体，非对映体，非对映体的混合物，互变异构体，水合物，溶剂化物和外消旋体及其药学上可接受的盐。
本发明化合物携带酸性取代基并且它们可以与有机或无机碱形成盐。适宜无机或有机碱的实例是例如NaOH，KOH，NH4OH，四烷基氢氧化铵，赖氨酸或精氨酸等。盐可以以常规方式用本领域熟知方法来制备，例如通过用选自上述组的碱溶液处理通式I缀合物的溶液。
碳水化合物化学领域的技术人员清楚的是，通式(I)的缀合物不含-O-O-键和/或经由其异头碳或C-1碳相互连接或结合的糖片段(A，B)。
令人惊讶地发现，通式(I)缀合物能够提供对人和/或动物宿主SP3细菌的保护性免疫应答；所述通式(I)缀合物代表在鞘糖脂的糖部分C-6位的限定长度的与SP3荚膜多糖有关的碳水化合物。所述对SP3细菌的保护性免疫应答并不能通过用这样的缀合物免疫而引起，所述缀合物代表在鞘糖脂糖部分2、3或4位的与SP3荚膜多糖有关的碳水化合物。
额外地，通式(I)缀合物能够引起小鼠中的血清IgG应答，其在动力学和IgG2a和IgG3产生两方面都优异于相应CRM197缀合物，所述CRM197缀合物代表与相同SP3荚膜多糖有关的碳水化合物。通式(I)缀合物引起的抗体与天然SP3多糖交叉反应，从而指出这些抗体结合至肺炎链球菌血清型3细菌并且赋予对肺炎球菌感染的保护作用的能力。
通式(I)缀合物是完全合成的，也即与肺炎链球菌3型荚膜多糖有关的限定长度的碳水化合物和鞘糖脂都是合成获得的。完全合成的与SP3荚膜多糖有关的碳水化合物使得可以鉴定最具免疫原性的表位和各批次间的抗体应答重现性。这些成果不能通过采用从天然来源分离的SP3荚膜多糖来完成，原因在于细微异质性问题。
根据本发明的优选实施方式涉及通式I缀合物，其中n1是0而n3是1。从而，通式IV缀合物
其中
A是
B是
R1，R2，R3，R4，Z，L和n2具有本文所定义的含义，是特别优选的。
本发明的又一实施方式涉及通式I缀合物，其中n1是1而n3是0或1。于是，通式V和VI的缀合物，其中A，B，R1，R2，R3，R4，Z和n2具有本文所定义的含义，也是优选的。
甚至更优选的本发明缀合物是通式I缀合物，其中n1和n3是0。因此，本发明的特别优选实施方式涉及通式VII缀合物，其中A，B，R1，R2，R3，R4，Z和n2具有本文所定义的含义。
根据本发明的缀合物包含缀合或连接至鞘糖脂的与肺炎链球菌3型荚膜多糖有关的碳水化合物。优选，本发明鞘糖脂含有作为糖部分的α-半乳糖苷。因此，本发明的又一实施方式涉及通式VIII的缀合物，
其中A，B，R1，R2，Z，n1，n2和n3具有本文所定义的含义。
通式I缀合物V，V，VI和VII，其中R3是-H而R4是-OH，是特别优选的。
又一实施方式涉及通式I、IV、V、VI和VII缀合物，其中R3是-OH而R4是-H；换言之，鞘糖脂代表α-糖苷作为糖部分。
优选，Z残基选自-O-CH2-或-O-CH2-CH2-；和
R1残基代表其中
R5具有如本文所定义的含义。
在又一优选的实施方式中，残基Z代表-CH2-CH2-CH2-，
或-CH2-CH＝CH-。
根据本发明的其它特别优选的缀合物是通式IX缀合物，
其中A，B，R2，R3，R4，R5，Z，n1，n2和n3具有本文所定义的含义。
与肺炎链球菌3型荚膜多糖有关的碳水化合物经由连接体L连接至鞘糖脂，所述连接体具有通式-L1-NH-L2-NH-L3-，其中L2残基优选选自：
和m和n相互独立地代表1至10的整数。
优选，X4残基选自：
-H,-iPr,-tBu,
Y4选自：-H，-iPr，-tBu，或-Ph；和X1，X2，X3，Y1，Y2，Y3残基相互独立地选自：-CH2-，-CH(OH)-，-CH(CH3)-，-CH(C2H5)-，-CH(C3H7)-，-CH(C4H9)-,
其中取代基R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-C3H7，-C4H9，-C5H11，-Ph，-F，-Cl，-Br，-I。
更优选，取代基R6，R7和R8相互独立地选自-H，-F，-Cl，-Br，和-I。
优选，通式(I)中R2的链-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-含有最大25个碳原子。从而，通式(I)中R2的链-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-含有优选5至25个碳原子，更优选7至25个碳原子和甚至更优选9至25个碳原子。
优选，通式(I)中R5的链-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-含有最大14个碳原子。
本发明实施方式涉及通式(I-A)缀合物
其中
A是
B是
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R3和R4选自-H和-OH并且不能同时是-H或-OH；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
Z代表：-O-CH2-，-S-CH2-或-CH2-CH2-；
X4代表：-H或
Y4代表：-H或-Ph；
X1，X2，X3，Y1，Y2，和Y3相互独立地选自：-CH2-，
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L代表-L1-NH-L2-NH-L3-；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″和L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-CH2-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-；
L2选自：-C(O)-，
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-F，-Cl，-Br，-OCH3和-CF3；
n和o相互独立地代表选自1、2、3、4、5和6的整数；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数。
优选，通式(I-A)中R2的链-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-含有最大25个碳原子和通式(I)中R5的链-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-含有最大14个碳原子。
通式(I-B)的缀合物
其中
A是
B是
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R3和R4选自-H和-OH并且不能同时是-H或-OH；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
X4代表：-H或
Y4代表：-H或-Ph；
X1，X2，X3，Y1，Y2，和Y3相互独立地选自：
-CH2-，和
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L代表-L1-NH-L2-NH-L3-；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″和L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-；
L2选自：-C(O)-，
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-F，-Cl，-Br，-OCH3和-CF3；
n代表选自1、2、3、4、5和6的整数；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数；也是优选的。
优选，残基R3代表-H和残基R4代表-OH。从而，通式(VIII)缀合物是优选的。也优选的是通式(I-A)或(I-B)缀合物，其中R3代表-H和残基R4代表-OH。
根据本发明的又一优选缀合物是通式(I-C)缀合物
其中
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
X4代表：-H，-iPr，-tBu，-sBu，
Y4选自：-H，-iPr，-tBu，-Ph，-sBu；
X1，X2，X3，Y1，Y2，和Y3相互独立地选自：
-CH2-，-CH(OH)-，-CH(CH3)-，-CH(C2H5)-，-CH(C3H7)-，-CH(C4H9)-,
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″和L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-，-CR9R10-，-CR11R12-，-CR13R14-，-CR15R16-，-CR17R18-，-CR19R20-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-CH2-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-，-邻-C6H4-，-间-C6H4-，-对-C6H4-，-CH2-S-CH2-，-CH2-O-CH2-；
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-F，-Cl，-Br，-OCH3和-CF3；
R9至R20相互独立地代表-H，-CH3，-C2H5，-C3H7；
o代表选自1、2、3、4、5和6的整数；
n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数。
优选，通式(I)，(I-A)，(I-B)，(I-C)，(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)中R2的链-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-含有最大25个碳原子。从而，通式(I)，(I-A)，(I-B)，(I-C)，(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)中R2的链-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-含有优选5至25个碳原子，更优选7至25个碳原子和甚至更优选9至25个碳原子。
优选，通式(I)，(I-A)，(I-B)，(I-C)，(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)中R5的链-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-含有最大14个碳原子。
优选，残基R2选自-(CH2)24-CH3，-(CH2)23-CH3，-(CH2)22-CH3，-(CH2)21-CH3，-(CH2)20-CH3，-(CH2)19-CH3，-(CH2)18-CH3，-(CH2)17-CH3，-(CH2)16-CH3，-(CH2)15-CH3，-(CH2)14-CH3，-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3,
R6选自：-H，-CH3，-F，-Cl，-OCH3和-CF3。
因此，通式(I)，(I-A)，(I-B)，(I-C)，(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)的缀合物，其中残基R2选自-(CH2)24-CH3，-(CH2)23-CH3，-(CH2)22-CH3，-(CH2)21-CH3，-(CH2)20-CH3，-(CH2)19-CH3，-(CH2)18-CH3，-(CH2)17-CH3，-(CH2)16-CH3，-(CH2)15-CH3，-(CH2)14-CH3，-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3,
R6选自：-H，-CH3，-F，-Cl，-OCH3和-CF3；
是特别优选的。
还优选的是，残基R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3，-(CH2)2-Ph，-(CH2)3-Ph，-(CH2)4-Ph，-(CH2)5-Ph，-(CH2)6-Ph，-(CH2)7-Ph，-(CH2)8-Ph，-(CH2)9-Ph.
因此，通式(I)，(I-A)，(I-B)，(I-C)，(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)缀合物，其中残基R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3，-(CH2)2-Ph，-(CH2)3-Ph，-(CH2)4-Ph，-(CH2)5-Ph，-(CH2)6-Ph，-(CH2)7-Ph，-(CH2)8-Ph，-(CH2)9-Ph，也是优选的。
特别优选的是通式(I)，(I-A)，(I-B)，(I-C)，(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)缀合物，其中残基R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3，-(CH2)2-Ph，-(CH2)3-Ph，-(CH2)4-Ph，-(CH2)5-Ph，-(CH2)6-Ph，-(CH2)7-Ph，-(CH2)8-Ph，-(CH2)9-Ph；
和残基R2选自-(CH2)24-CH3，-(CH2)23-CH3，-(CH2)22-CH3，-(CH2)21-CH3，-(CH2)20-CH3，-(CH2)19-CH3，-(CH2)18-CH3，-(CH2)17-CH3，-(CH2)16-CH3，-(CH2)15-CH3，-(CH2)14-CH3，-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3,
其中R6选自：-H，-CH3，-F，-Cl，-OCH3和-CF3。
本发明特别优选的缀合物具有片段-L1-和-L3-，其相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-和-C6H12-。从而，通式(I)，(I-A)，(I-B)，(I-C)，(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)缀合物，其中片段-L1-和-L3-相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-和-C6H12-，是特别优选的。
特别优选的缀合物是通式(I-D)的缀合物
其中
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
R2选自-(CH2)24-CH3，-(CH2)23-CH3，-(CH2)22-CH3，-(CH2)21-CH3，-(CH2)20-CH3，-(CH2)19-CH3，-(CH2)18-CH3，-(CH2)17-CH3，-(CH2)16-CH3，-(CH2)15-CH3，-(CH2)14-CH3，-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3,
R6选自：-H，-CH3，-F，-Cl，-OCH3和-CF3；
R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3，-(CH2)2-Ph，-(CH2)3-Ph，-(CH2)4-Ph，-(CH2)5-Ph，-(CH2)6-Ph，-(CH2)7-Ph，-(CH2)8-Ph，-(CH2)9-Ph；
-L1-和-L3-相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-和-C6H12-。
还选的是通式(I-E)缀合物
其中
n2是选自1、2、3和4的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
R2选自-(CH2)24-CH3，-(CH2)23-CH3，-(CH2)22-CH3，-(CH2)21-CH3，-(CH2)20-CH3，-(CH2)19-CH3，-(CH2)18-CH3，-(CH2)17-CH3，-(CH2)16-CH3，-(CH2)15-CH3，-(CH2)14-CH3，-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3,
R6选自：-H，-CH3，-F，-Cl，-OCH3和-CF3；
R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3，-(CH2)2-Ph，-(CH2)3-Ph，-(CH2)4-Ph，-(CH2)5-Ph，-(CH2)6-Ph，-(CH2)7-Ph，-(CH2)8-Ph，-(CH2)9-Ph；
-L1-和-L3-相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-和-C6H12-。
在通式(I-E)中，优选n2代表2，
R2选自-(CH2)24-CH3，-(CH2)23-CH3，-(CH2)22-CH3，-(CH2)21-CH3，-(CH2)20-CH3，-(CH2)19-CH3，-(CH2)18-CH3，-(CH2)17-CH3，-(CH2)16-CH3，-(CH2)15-CH3，-(CH2)14-CH3，-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3；
R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3；
-L1-选自：-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-；
-L3-选自：-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-和-C6H12-。
还优选的是在通式(I-E)中
R2选自：
R6选自：-H，-CH3，-F，-Cl，-OCH3和-CF3；和
R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3，
通式(I-E)缀合物，其中R5选自-(CH2)2-Ph，-(CH2)3-Ph，-(CH2)4-Ph，-(CH2)5-Ph，-(CH2)6-Ph，-(CH2)7-Ph，-(CH2)8-Ph，-(CH2)9-Ph，也是优选的。
本发明的又一方面涉及本发明缀合物用作药物、也即用作医药中可行的药学活性试剂的用途。
令人惊讶地发现，本发明的新缀合物也适于提高人类和/或动物宿主中的保护性免疫应答和因此适于防范与肺炎链球菌有关的疾病、特别是肺炎链球菌3型。从而，本文公开的本发明缀合物可用于预防或治疗与肺炎链球菌3型有关的疾病。所述疾病包括但不限于肺炎，脑膜炎，中耳炎，菌血症和慢性支气管炎的急性恶化，鼻窦炎，关节炎和结膜炎。此外还发现，用本发明新缀合物治疗动物导致免疫球蛋白IgG-同种型的形成，其证明记忆B-细胞在活有机体中的发展。记忆B-细胞的存在展示免疫记忆。从而已显示的是，本发明缀合物能够诱导动物宿主中对肺炎链球菌3型的长期防范。此外，所描述的接种不依赖其它佐剂,不需要任意蛋白质-载体和疫苗冷藏。
因此，根据本发明的缀合物适于用作医药中可行的药学活性试剂，特别用于对肺炎链球菌3型导致的或与其有关的疾病的接种。
本发明的又一方面涉及药物组合物，包含至少一种本发明缀合物作为活性成分，以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。本发明药物组合物能够用已知方式、以适宜的剂量水平制备于常规的固体或液体载体或稀释剂当中。优选的制剂适于口服施用。这些给药形式包括例如丸剂，片剂，膜片剂，包衣片剂，胶囊，粉末剂和沉积剂。
另外，本发明也包括用于肠胃外施用的药物制剂，包括皮肤、真皮内、胃内、皮内、脉管内、静脉内、肌内、腹腔内、鼻内、阴道内、颊内、经皮、直肠、皮下、舌下、局部或透皮施用；该制剂除了典型的媒介物和/或稀释剂之外，还包含根据本发明的至少一种化合物和/或其药物可接受的盐作为活性成分。
根据本发明的含有至少一种根据本发明的化合物和/或其药物可接受的盐作为活性成分的药物组合物一般地与适宜载体物质一起给予，所述载体物质按照期望的给药形式且与常规药物实践相符地来选择，也即用于以片剂，胶囊(固体填充的、半固体填充或液体填充的)，构造粉末，挤出物，沉积剂，凝胶，酏剂，可分散粒剂，糖浆剂，悬浮液等形式来口服给药。例如，对于以片剂或胶囊形式口服给药，活性药物组分可以与任何口服非毒性药学上可接受的载体相组合，优选惰性载体如乳糖，淀粉，蔗糖，纤维素，硬脂酸镁，磷酸氢钙，硫酸钙，滑石，甘露醇，乙醇(液体填充的胶囊)等。此外，适宜的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂还可以掺入片剂或胶囊。粉末和片剂可以含有约5至约95重量％的苯并噻吩-1,1-二氧化物衍生的化合物和/或各自的药学上活性盐作为活性成分。
适宜的粘合剂包括淀粉，明胶，天然碳水化合物，玉米甜味剂，天然胶和合成胶比如阿拉伯胶，藻酸钠，羧甲纤维素，聚乙二醇和蜡。在适宜的润滑剂中，可以提及的是硼酸，苯甲酸钠，乙酸钠，氯化钠等。适宜的崩解剂包括淀粉，甲基纤维素，瓜耳胶等。还可以酌情包括甜味剂和矫味剂以及防腐剂。崩解剂，稀释剂，润滑剂，粘合剂等在下文中有更加详细的讨论。
此外，本发明药物组合物可以配制为持续释放形式，以提供各组分或活性成分中任意一种或多种的速率受控释放，以优化治疗效果例如抗组胺活性等。用于持续释放的适宜剂型包括具有不同崩解速率的层的片剂、或浸渍有活性组分且构造为片剂形式的受控释放聚合物基质、或含有所述浸渍或包衣的多孔聚合物基质的胶囊。
液体形式制剂包括溶液，悬浮液和乳液。例如，可以提及的是水或水/丙二醇溶液，用于肠胃外注射剂；或加入甜味剂和遮光剂，用于口服溶液、悬浮液和乳液。液体形式制剂还可以包括用于鼻内给药的溶液。适于吸入的气雾剂制剂可以包括粉末形式的溶液和固体，其可以与药学上可接受的载体比如惰性压缩气体例如氮组合存在。为了制备栓剂，首先熔化低熔点脂肪或蜡，比如脂肪酸甘油酯的混合物如可可油，然后例如通过搅拌将活性成分均匀地分散于其中。然后，将熔化的均质混合物倾至方便控制大小的模具中，让其冷却，和由此固化。
还包括固体形式制剂，其期望在临使用前转化为用于口服或肠胃外给药的液体形式制剂。所述液体形式包括溶液，悬浮液和乳液。
根据本发明的缀合物还可以经皮递送。透皮组合物可以具有霜剂、洗剂、气雾剂和/或乳液形式，并且可以包括在基质或储库类型的透皮贴剂中，如本领域用于该意图所已知。
术语胶囊如本文所用是指特定器皿或容器，其由例如甲基纤维素、聚乙烯醇、或变性明胶或淀粉制成，用于容纳或包含含有活性成分的组合物。硬壳胶囊一般地由共混的来自骨骼或猪皮的相对高凝胶强度的明胶制成。胶囊本身可以含有少量染料，遮光剂，增塑剂和/或防腐剂。片剂被理解为压缩或模塑的固体剂型，其包含活性成分和适宜稀释剂。片剂可以如本领域技术人员所熟知地通过压缩混合物或颗粒来制备，所述混合物或颗粒是通过湿法造粒、干法造粒或压实获得的。
口服凝胶是指在亲水半固体基质中分散的或溶剂化的活性成分。用于构造的粉末是指含有活性成分和适宜稀释剂的粉末共混物，其能够悬浮于例如水或汁中。
适宜稀释剂是通常构成组合物或剂型的主要部分的物质。适宜的稀释剂包括碳水化合物比如乳糖，蔗糖，甘露醇和山梨醇，衍生自小麦、玉米稻和马铃薯的淀粉，和纤维素比如微晶纤维素。组合物中稀释剂的量能够是总组合物的约5至约95％重量，优选约25至约75重量％，和更优选约30至约60重量％。
术语崩解剂是指加至组合物以促进破开(崩解)和释放药物的药学活性成分的物质。适宜的崩解剂包括淀粉，"冷水可溶的"改性淀粉比如羧甲基淀粉钠，天然和合成胶比如槐豆胶，刺梧桐树胶，瓜耳胶，黄蓍胶和琼脂，纤维素衍生物比如甲基纤维素和羧甲纤维素钠，微晶纤维素，和交联微晶纤维素比如交联羧甲基纤维素钠，藻酸盐比如藻酸和藻酸钠，粘土比如斑脱土，和泡腾剂混合物。组合物中崩解剂的量可以是组合物的约2至约20重量％，更优选约5至约10重量％。
粘合剂是这样的物质，其将粉末微粒结合或"胶粘"在一起并且通过形成颗粒使它们粘合，从而充当配制剂中的"粘合剂"。粘合剂增加稀释剂或填充剂中已经存在的粘着强度。适宜的粘合剂包括碳水化合物比如蔗糖，衍生自小麦玉米稻和马铃薯的淀粉，天然胶比如阿拉伯胶、明胶和黄蓍胶，海藻的衍生物比如藻酸、藻酸钠和藻酸钙铵，纤维素物质比如甲基纤维素、羧甲纤维素钠和羟丙基甲基纤维素，聚乙烯基吡咯烷酮，和无机化合物比如硅酸镁铝。组合物中粘合剂的量可以是组合物的约2至约20重量％，优选约3至约10重量％，和更优选约3至约6重量％。
润滑剂是指一类物质，其加至剂型、通过降低摩擦或磨损使得片剂颗粒等可以在压缩之后从模具或铸模中释放出来。适宜的润滑剂包括金属硬脂酸盐比如硬脂酸镁，硬脂酸钙，或硬脂酸钾，硬脂酸，高熔点蜡，和其它水可溶的润滑剂比如氯化钠，苯甲酸钠，乙酸钠，油酸钠，聚乙二醇和D,L-亮氨酸。润滑剂通常在压缩之前于最后一步加入，原因在于必须存在于颗粒的表面。组合物中润滑剂的量可以是组合物的约0.2至约5重量％，优选约0.5至约2重量％，和更优选约0.3至约1.5重量％。
助流剂是这样的物质，其预防药物组合物的组分结块和改善颗粒的流动特征使得流动平滑且均匀。适宜的助流剂包括二氧化硅和滑石。组合物中助流剂的量可以是最终组合物的约0.1至约5重量％，优选约0.5至约2重量％。
着色剂是向组合物或剂型提供着色的赋形剂。所述赋形剂能够包括吸附在适宜吸附剂比如粘土或氧化铝上的食品级染料。着色剂的量可以是组合物的约0.1至约5重量％，优选约0.1至约1重量％。
所提及的药物配制剂或更特别的疫苗的特征在于，它们包含通式I的完全定义的合成缀合物。
通式I的本发明缀合物以10至1000μg/g的范围存在于所述疫苗配制剂中。在本发明的优选实施方式中，通式I缀合物以10至1000ng/g的范围存在于所述疫苗配制剂中。在本发明的更优选实施方式中，通式I缀合物以100至1000pg/g的范围存在于所述疫苗配制剂。
由于本发明化合物的模块构造，所提及的疫苗配制剂显示在室温下异乎寻常的稳定性，其中所述疫苗配制剂可以于重构之前在至少25℃的温度保持至少3个月的时间段。本文所描述的疫苗配制剂的温度-稳定性构成本发明相对至今描述的针对肺炎链球菌3型的疫苗的特别优势。在本发明的优选实施方式中，所述时间段包括6个月或至少12个月。
在体内施用的情况下发现本发明缀合物能够有效且连续地免疫肺炎链球菌3型。这是相当有利的，原因在于由此本发明缀合物能够刺激高滴定度的和体内条件下的长持续抗性的抗体的产生，并且此外它们展示在室温下的长期稳定性。因此，本发明缀合物是特别热稳定的和从而不需要冷藏。
经证实，通式(I)的本发明缀合物有效地形成脂质体，如图1和实施例D1.1中所示。为了形成脂质体，通式(I)化合物优选与添加剂比如DSPC(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱)混合。在本发明中，本发明通式(I)化合物经证实具有两亲特性，从而使得可以形成纳米尺度的脂质体。所述脂质体的直径是200nm至250nm。所述纳米尺度的脂质体在含水介质中形成是有利的，原因在于药物组合物随时间稳定并且通常显示更佳的生物利用度。所述脂质体形成是用于疫苗配制剂的技术优势。
本发明的又一方面是在人类和/或动物宿主诱导对肺炎链球菌3型的免疫应答的方法，包括向人类和/或动物宿主给药治疗有效量的通式(I)缀合物。
化学合成
通式I缀合物能够起始自碳水化合物II和鞘糖脂III产生，所述碳水化合物II代表具有末端氨基的连接体L1；所述鞘糖脂III代表糖苷部分的C-6位的具有末端氨基的连接体L3。
方案2：通式II碳水化合物的逆合成方案：n1＝0或1；n2＝1至10的整数；n3＝0或1。
本发明中所用的通式II合成碳水化合物在还原端用具有末端氨基的连接体L1官能化，这使得可以缀合至鞘糖脂。硫糖苷2具有参与C-2位保护基团的苯甲酰基，以确保β-糖苷连接和C-4和C-6位亚苄基缩醛的形成，其能够被区域选择性地打开以释放C-4羟基用于随后的糖基化。葡萄糖亚氨酸酯3配有C-3位置的叔丁基(二甲基)甲硅烷基醚和C-2位的苯甲酸酯，以利于β-糖苷连接的形成。氨基醇4中的氨基用苄基和苄氧羰基保护基团掩蔽，从而不作为亲核物质在糖基化反应期间造成干扰。
然而，本领域技术人员能将其它适宜保护基团用于胺保护，只要所述保护基团与随后组装和脱保护程序期间所用的条件相容。
从而，起始自氨基醇4，能够如方案3中所示地组装完全保护的糖类8，9，10和11，其是通式II碳水化合物的前体。更确切地，完全保护的糖类8能够按照合成途径A来组装，所述糖类8能够以数步转化为通式II的碳水化合物，其中n1等于1，n2如上文定义且n3等于0。首先，用TMSOTf作为活化剂来偶联氨基醇4和葡萄糖亚氨酸酯3，提供单糖中间体(步骤a)，其进一步通过用HF/吡啶处理来进行脱保护反应，提供化合物7(步骤b)，其代表用于下述偶联反应的亲核物质。偶联反应(步骤a)能由本领域技术人员已知的其它活化剂所介导，包括BF3.OEt2，PPTS，LiClO4和Cu(OTf)2。此外，叔丁基(二甲基甲硅烷基)醚在脱保护反应期间的选择性裂解(步骤b)能用TBAF、HF.吡啶、(Me2N)3S+F2SiMe3 -和许多其它试剂来实现。在将第一单糖附着至连接体之后，靶标分子8能够通过简单重复包括步骤c和b的反应序列来构建。为了加速合成程序，在组装期间用作延伸单元的二糖构造单元5按方案4的描述来制备。
通过在TFA存在下用TES处理使第一硫糖苷2经受区域选择性还原性开环，提供醇6，在TMSOTf存在下将其进一步偶联至亚氨酸酯3，提供延伸单元5。
方案4：合成延伸单元5：a.3，TMSOTf。
在获得二糖5的情况下，重复包括步骤c和b的反应序列直至实现希望长度的完全保护的碳水化合物8(n2次)。各反应序列由偶联反应、随后脱保护反应组成，从而在生长中的糖的非还原端引入[→3-β-D-Glcp-(1→4)-β-D-Glcp-(1→]重复单元，在n2次重复之后获得完全保护的糖类8。偶联反应(步骤c)牵涉在NIS/TfOH存在下用延伸单元5处理生长中的糖。其它活化系统包括IDPC、NBS-LiClO4、Ph2SO/Tf2O、BSP-Tf2O能够用作NIS/TfOH的备择，用于介导糖苷偶联。
以相似方式，完全保护的糖9能够按照途径B获得，其是通式II合成碳水化合物的前体，其中n1和n3等于0和n2如前文所定义。特别地，在NIS/TfOH存在下将构造单元2与氨基醇4反应(步骤e)，提供相应的β-(葡)糖苷，其上的亚苄基缩醛被区域选择性地打开(步骤f)，提供用于后续糖基化反应的亲核物质。使所述亲核物质经受糖基化反应(步骤a)，随后除去TBS保护基团(步骤b)，提供二糖9′。通过对二糖9′进行n2-1次重复的包括步骤c和b的反应序列，能够获得靶标碳水化合物9。
通式II的碳水化合物前体，其中n3等于1，起始自完全保护的碳水化合物8和9而获得。在此范围内，构造单元12根据方案5制备，提供碳水化合物10和11非还原端的糖部分。
方案5：合成葡萄糖构造单元12。
最终，完全保护的碳水化合物8和9在NIS/TfOH存在下用硫糖苷12处理，提供完全保护的碳水化合物11和10。
在将羧酸基团装置于与SP3荚膜多糖有关的碳水化合物上所必需的氧化反应之前，糖类8和9非还原端的葡萄糖部分上的游离羟基通过在吡啶存在下用苯甲酰氯处理而被保护为苯甲酸酯。
为了完成合成，将如上文所述获得的完全保护的糖转化为通式II的碳水化合物(参见方案6)。首先，亚苄基缩醛通过用对-TSA和乙硫醇处理而裂解，以释放伯羟基，随后氧化为相应羧酸。然后，进行用BAIB和TEMPO作为氧化剂的氧化反应。氧化的碳水化合物上的苯甲酸酯通过应用Zemplèn条件而进一步裂解，并对所得中间体进行酯化和在Pd/C上氢解，提供通式II的合成碳水化合物。
方案6：合成通式II的碳水化合物：n1＝0或1；n2＝1至10的整数；n3＝0或1。
合成鞘糖脂III
适于获得通式I缀合物的通式III鞘糖脂能够各种合成途径获得(US7771726B2；WO2006027685A2；X.Li等人PNAS2010，107，29，13010-13015)。
例如，根据本发明的鞘糖脂，其中Z是-OCH2-和R1是
能够根据下述合成途径合成。
选择可商购的L-Boc丝氨酸作为原料并以3步转化为醛13(参见方案7)。通过应用Wittig反应将残基R5引至分子上。于是，将制备自相应溴化物R5CH2Br的三苯基鏻叶立德14与醛13在正丁基锂存在下反应，专门地提供Z-烯烃15。方便地，通式R5CH2Br的各种溴化物是可商购的或能够由本领域技术人员容易地获得的。用对-TSA裂解亚异丙基部分，随后进行Sharpless二羟基化和随后在三氟乙酸存在下除去叔丁氧羰基保护基团，提供三醇16。在该水平，残基R1完全地引入分子之上。在后续步骤，通过简单的酰胺键形成来附着残基R2。用胺16处理活化的酯17提供酰胺18，以2步将其转化为神经酰胺19，其即用于与葡萄糖或半乳糖糖部分缀合。
方案7：合成即用于缀合的神经酰胺19。
即用于与神经酰胺19缀合的葡萄糖构造单元29和半乳糖构造单元30分别起始自D-葡萄糖20和D-半乳糖21合成。方案8描述的标准保护基团化学提供适宜保护的葡萄糖24和半乳糖25，在C6位具有游离醇。在C6位引入连接体L3在此水平经由用通式TsO-L3-N3的叠氮化物26进行Williamson′s醚化来实现。通式TsO-L3-N3的各种叠氮化物能够按照描述于文献中的和本领域技术人员已知的途径来制备。方案9描述上述合成路线，其起始自二醇31以3步提供叠氮化物26，所述二醇31能够是可商购的或经由可商购物质的修饰而获得的。
方案8：合成糖基亚氨酸酯29和30。
对在C6配备具有末端叠氮基的连接体L3的构造单元27和29进行异头烯丙基保护基团的异构化并水解以提供中间体乳醇，通过在碳酸铯存在下与2,2,2-三氟-N-苯基亚氨代乙酰氯反应将其转化为糖基亚氨酸酯29和30。
方案10：合成鞘糖脂34和35。
在获得神经酰胺19和糖基供体29和30的情况下，在催化量TMSOTf存在下进行糖基化，产生具有完全α-选择性的鞘糖脂32和33(参见方案10)。用TBAF除去甲硅烷基醚保护基团、随后用Pearlman’s催化剂氢解，提供靶标鞘糖脂34和35。
合成缀合物
一旦合成了通式II的碳水化合物和通式III的鞘糖脂，能够采用各种方法来缀合以提供通式I缀合物。肽键形成方法基于用胺处理用活化剂比如CDI、DCC、DIC或EDC预活化的羧酸，所述胺能够成功地用于将通式II碳水化合物和通式III鞘糖脂缀合。额外地，方案11和12总结了其它缀合方法；然而能够用于连接碳水化合物II和鞘糖脂III、或者用于将碳水化合物II缀合至鞘糖脂III的方法并不受限于下文公开的方法。
例如，方案11描述碳水化合物II如何能够经由通式-C(O)-W-C(O)-的对称连接体L2而连接至鞘糖脂III。首先，将在半乳糖或葡萄糖糖部分C6用具有末端氨基的连接体L3官能化的鞘糖脂III与活化的二酯36反应，提供活化的单酯37。在该情况下，二酯代表4-硝基酚活化部分。然而，其它活化部分比如2,4,5-三氯苯基，五氯苯基，五氟苯基，琥珀酰亚氨基，4-氧代-3,4-二氢苯并-三嗪-3-基及其硫酸化部分也能够视为4-硝基酚活化部分的备择。在含有5-10％水可溶的溶剂比如DMF、吡啶或DMSO的溶剂的混合物，在稍碱性的条件(pH为7.2至9)下进行反应。一旦获得活化的单酯37，后续步骤是在吡啶存在下发生与通式II碳水化合物的偶联，提供靶标缀合物38。
其中
能够加以选择，但不受限于下述片段之一
方案11：合成缀合物38。
在连接体L2是不对称的情况下，能够进行合成途径比如方案12展示的那种。首先，将鞘糖脂III与N-琥珀酰亚胺活化的酯39反应，在碱存在下提供配有掩蔽硫醇基团的酰胺40。以相似方式，用活化酯41处理碳水化合物II，导致具有末端马来酰亚胺的酰胺42。在氢氧化铵存在下裂解乙酸酯基团释放了化合物40上的伯硫醇，提供中间体，其与化合物42上的末端马来酰亚胺反应，提供缀合物43。
方案12：合成缀合物43。
明显地，末端马来酰亚胺能装置在通式III鞘糖脂上并且末端硫醇基团能装置在通式II碳水化合物上，以产生缀合物44。
从中间体40产生的末端硫醇能够还牵涉于与适当烯烃伴侣的硫醇-烯反应中，提供通式I缀合物
具有对称连接体L2比如
或不对称连接体
附图说明
图1.含有根据本发明的缀合物43*的脂质体的示意图。
图2.SP3四糖-CRM197缀合物44*的表征：(a)SDS-PAGE；(b)MALDI-TOF-MS。
图3.在小鼠中，对含有缀合物43*的脂质体和SP3四糖-CRM197缀合物44*的主要抗体应答：
(a)用符号代表打印的糖；
(b)微阵列打印图谱；
(c)用含缀合物43*的脂质体免疫的小鼠的免疫应答(时间范围：第0天至第2周)；
(d)、(e)、(f)对含缀合物43*的脂质体和SP3四糖-CRM197缀合物44*的主要抗体应答比较(两组6只小鼠的平均数据)。
包括下述实施例以展示本发明的优选实施方式。本领域技术人员应认识到，下述实施例中公开的技术遵循发明人发现的技术良好地在本发明实践中起作用，并且从而能够视为构成其实施的优选模式。然而，鉴于本公开，本领域技术人员应理解在已公开的特定实施方式中能够进行许多变化，并且仍然获得相同或相似的结果而不背离本发明的主旨和范围。
鉴于本申请的描述，本发明的进一步变型和各方面的备择实施方式对本领域技术人员来说是明显的。相应地，本说明书仅解释为示例性的并且用于教导本领域技术人员进行本发明的一般方式的意图。应理解，本文显示和描述的本发明的形式是实施方式的实例。要素和物质可以取代本文说明和描述的那些，部分和过程可以颠倒，并且本发明的某些特征可以独立地使用，在获益于本发明的描述之后这全部对本领域技术人员来说是明显的。可以对本文描述的要素进行可以而不背离权利要求中描述的本发明主旨和范围。
实施例
化学合成
缩写：
NIS：N-碘琥珀酰亚胺；
TfOH：三氟甲磺酸；
hr：小时；
DCM：二氯甲烷；
TLC：薄层色谱法；
MW：微波
rt：室温；
RM：反应混合物；
EtOAc：乙酸乙酯；
MS：分子筛；
TMS：三甲基甲硅烷基；
Tempo：2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧基，自由基；
BAIB：二(乙酰氧基)碘苯；
HOBt：1-羟基苯并三唑。
化学合成的一般信息
商业试剂不加进一步纯化使用，除了注明的以外。溶剂在使用前以通常方式干燥和再蒸馏。全部反应在炉干燥的玻璃仪器中于惰性气氛下进行，除非另有说明。分析薄层色谱法(TLC)在预涂层0.25mm厚硅胶的硅胶60F254铝板上进行。TLC板用紫外光并用Hanessian溶液(含水硫酸中的硫酸铈和钼酸铵)或硫酸-乙醇溶液染色来可视化。柱色谱法在Fluka硅胶60(230-400目)进行。旋光(OR)用Schmidt&HaenschUniPolL1000旋光仪于g/100mL表示的浓度(c)测量。1H和13CNMR谱图用Varian400-MR或Varian600光谱仪测量，用Me4Si充当内标。NMR化学位移(δ)以ppm记录和偶联常数(J)以Hz报告。在FreieBerlin，质谱核心设施，用Agilent6210ESI-TOF质谱记录高-分辨率质谱(HRMS)。
A.合成与肺炎链球菌3型荚膜多糖有关的碳水化合物
实施例A.1：合成(2R,4aR,6R,7R,8S,8aR)-6-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己二烯-7,8-二基二苯甲酸酯(1*)
将(2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-6-(乙硫基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己二烯-7,8-二基二苯甲酸酯(6.0g，11.53mmol)和在旋转式蒸发仪中用甲苯共沸干燥的苄基(2-羟基乙基)氨基甲酸苄酯(3.93g，13.83mmol)带入干燥DCM(100mL)中，向其加入5g的微波干燥的在rt搅拌15分钟，然后冷却至-10℃。在加入NIS(3.83g，17.29mmol)和TfOH(0.15mL，1.73mmol)之后，反应混合物在搅拌下在1小时期间从-10℃温热至-5℃。然后，将RM用10％Na2S2O3水溶液(50mL)淬灭，然后用EtOAc(25mlX3)萃取。然后，将合并的有机层用盐水(10ml)洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，获得淡黄色油状化合物。粗制产品在硅胶柱色谱上用20-30％EtOAc/己烷纯化，提供希望产品1*，是淡黄色透明胶状液体(7.60g，89％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.97(dd，J＝8.4，1.2Hz，4H)，7.59-6.90(m，21H)，5.91-5.71(m，1H)，5.62-5.41(m，2H)，5.22-4.95(m，2H)，4.80(d，J＝7.7Hz，0.5H)，4.67(d，J＝7.7Hz，0.5H)，4.56-4.22(m，3H)，4.10-3.52(m，5H)，3.50-3.33(m，2H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ165.7，165.4，156.35，156.2，137.9，136.9，133.4，133.2，129.9，129.5，129.3，129.1，128.7，128.5，128.4，128.3，128.1，127.8，127.4，127.2，126.2，101.9，101.6，78.9，72.6，72.1，69.1，68.7，67.4，67.2，66.7，51.7，46.9，45.8。
实施例A.2：合成(2R,3R,4S,5R,6R)-2-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-6-((苄氧基)甲基)-5-羟基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(2*)
在氩下，将葡萄糖1*(7.50g，10.08mmol)带入DCM(75mL)中，加入活化的持续10分钟，随后冷却至0℃。滴加三乙基硅烷(12.88mL，81.0mmol)，随后TFA(4.66mL，60.5mmol)，和RM在rt搅拌16小时，随后用水(100mL)猝灭。RM用DCM(30mLX3)萃取，和合并的有机层用水(20mLX3)、盐水(20mL)彻底洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，减压蒸发，获得无色胶状固体。粗制产品通过二氧化硅柱色谱用30％-100％EtOAc/己烷纯化，在减压蒸发之后提供靶标化合物，是无色油状物(6.1g，81％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.04-7.84(m，4H)，7.60-6.87(m，21H)，5.55-5.36(m，2H)，5.22-4.90(m，2H)，4.77-4.53(m，3H)，4.51-4.30(m，2H)，4.06-3.93(m，2H)，3.87-3.53(m，4H)，3.46-3.20(m，3H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ167.3，165.5，138.0，137.7，133.6，130.1，129.9，128.6，128.5，128.1，127.9，127.8，127.4，101.3，101.2，76.7，74.7，73.9，71.6，71.5，71.2，70.0，69.0，67.4，67.2，51.7，46.8，45.8。
实施例A.3：合成(2R,3R,4S,5R,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-2-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(3*)
将(2R,3R,4S,5R,6R)-2-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-6-((苄氧基)甲基)-5-羟基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(2.0g，2.68mmol)带入DCM(30mL)中，加入活化的酸洗MS，在rt搅拌30分钟，随意冷却至0℃。然后，加入TMSOTf(0.49μL，0.27mmol)，随后在5分钟内加入DCM(5mL)中的(2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基-6-(2,2,2-三氯-1-亚氨基乙氧基)六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-7-基苯甲酸酯(2.20g，3.89mmol)，于0℃搅拌反应混合物30分钟。RM用Et3N(1mL)淬灭，过滤和减压除去溶剂。粗制产品通过快速色谱法用EtOAc/己烷纯化，获得产品3*(3.2g，98％)。
1HNMR(400MHz，cdcl3)δ8.13-6.88(m，35H)，5.67-5.52(m，1H)，5.46-5.31(m，1H)，5.20(s，1H)，5.16-4.89(m，3H)，4.68(t，J＝11.2Hz，1H)，4.55(d，J＝8.1Hz，1.5H)，4.47-4.24(m，3.5H)，4.20-3.89(m，1.5H)，3.89-3.19(m，9.5H)，3.13(td，J＝9.7，4.9Hz，1H)，2.63(t，J＝10.2Hz，1H)，0.63(s，9H)，-0.12(s，3H)，-0.19(s，3H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ165.4，165.36，164.7，138.2，137.1，133.4，133.2，129.94，129.9，129.2，128.7，128.6，128.5，128.4，128.2，128.0，127.8，127.3，126.4，101.7，101.2，101.1，81.2，75.5，75.1，74.6，73.7，73.4，73.0，68.9，68.0，67.3，66.1，51.7，46.9，25.6，18.0，-4.1，-4.8。
实施例A.4：合成(2R,3R,4S,5R,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aS)-7-(苯甲酰基氧基)-8-羟基-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-2-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(4*)
在0℃，将(2R,3R,4S,5R,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-2-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(1.6g，1.317mmol)带入吡啶(10mL)中，用HF-吡啶(3.56mL，39.5mmol)处理。混合物在rt搅拌24小时。RM用水洗涤，用DCM(20mLX3)萃取。合并的有机层，然后用稀HCl(50mLX2)、饱和NaHCO3溶液(50mL)、盐水(10mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，获得粗制产品，在用二氧化硅柱色谱法用35-40％EtOAc/己烷纯化之后，其产生靶标化合物，是白色沫状物(1.3g，90％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.15-6.92(m，1H)，5.65-5.51(m，1H)，5.44-5.30(m，1H)，5.23(s，1H)，5.11-5.04(m，3H)，4.77-4.49(m，3H)，4.49-4.24(m，4H)，4.25-3.91(m，2H)，3.91-3.59(m，4H)，3.57-3.00(m，7H)，2.68(t，J＝10.3Hz,1H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ165.4，165.3，156.4，156.2，138.2，136.9，133.6，133.2，130.3，130.0，129.9，129.4，128.7，128.7，128.5，128.5，128.4，128.1，128.1，127.8，127.4，126.4，101.8，101.2，101.1，80.6，75.9，74.9，74.7，73.7，73.5，72.6，72.0，71.9，68.9，67.9，67.4，67.2，66.0，51.7，46.9，45.9。
实施例A.5：合成(2S,3R,4S,5R,6R)-2-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-6-(((2R,3R,4S,5R,6R)-4,5-二(苯甲酰基氧基)-6-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-8-基)氧基)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(5*)
将受体4*(1.0g，0.91mmol)，(2S,3R,4S,5R,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)-2-(乙硫基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(12*)(1.08g，1.091mmol)和20g干燥带入DCM(30mL)中，在rt搅拌15分钟，然后冷却至-10℃。然后加入NIS(0.245g，1.09mmol)和TfOH(0.016mL，0.18mmol)，反应混合物在-5℃搅拌1小时。将(2S,3R,4S,5R,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)-2-(乙硫基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(0.45g，0.454mmol，0.5当量)和NIS(0.102mg，0.454mmol，0.5当量)再次加至反应混合物，在-5℃搅拌1小时，然后温热至5℃。在过滤通过C床之后，RM用10％Na2S2O3溶液(25mL)淬灭，然后用DCM(15mlX3)萃取。然后，合并的有机层用饱和NaHCO3溶液(15mL)、盐水(10ml)洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，获得白色蓬松固体化合物。粗制产品通过二氧化硅柱色谱用30-35％EtOAc/己烷纯化，获得靶标5*，是蓬松白色固体(1.0g，54％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.05-6.87(m，60H)，5.57-5.40(m，1H)，5.39-5.24(m，2H)，5.21-4.86(m，7H)，4.60(d，J＝7.9Hz，1H)，4.54-4.15(m，9H)，4.07-3.85(m，3H)，3.81-3.70(m，3H)，3.60(dd，J＝10.6，4.8Hz，1H)，3.52(dd，J＝10.6，4.9Hz，1H)，3.47-3.14(m，9H)，3.13-2.96(m，3H)，2.64(t，J＝10.4Hz，1H)，2.55(t，J＝10.3Hz，1H)，0.58(s，9H)，-0.18(s，3H)，-0.26(s，3H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ165.4，165.1，164.9，164.5，164.0，156.4，156.2，138.4，138.1，137.1，137.0，133.2，133.0，132.6，130.3，130.1，130.0，129.96，129.9，129.8，129.4，129.1，128.6，128.5，128.51，128.4，128.3，128.2，128.15，128.1，128.06，128.0，127.8，127.3，126.4，126.1，101.7，101.5，101.2，101.18，101.0，100.2，81.1，79.5，77.4，75.9，75.6，75.1，74.4，73.7，73.5，73.4，73.2，72.4，68.8，67.9，67.3，66.2，66.0，51.7，46.9，45.9，21.2，17.9，-4.1，-4.9。
实施例A.6：合成(2S,3R,4S,5R,6R)-2-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-6-(((2R,3R,4S,5R,6R)-4,5-二(苯甲酰基氧基)-6-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-8-基)氧基)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aS)-7-(苯甲酰基氧基)-8-羟基-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(6*)
在0℃，将四糖5*(1.0g，0.493mmol)带入吡啶(10mL)，向其加入HF-吡啶(1.33mL，14.78mmol)，在rt搅拌36小时。RM用水洗涤，用DCM(20mLX3)萃取。然后，合并的有机层用冷稀HCl(50mLX2)、饱和NaHCO3溶液(50mL)、盐水(10mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，获得粗制产品，在二氧化硅柱色谱上用50％EtOAc/己烷纯化之后，其产生靶标化合物，是白色沫状物(0.71g，75％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.07-6.94(m，60H)，5.56-5.41(m，1H)，5.37-5.23(m，2H)，5.22-5.14(m，2H)，5.13-5.02(m，2H)，5.02-4.91(m，3H)，4.60(dd，J＝7.9，3.5Hz，2H)，4.56-4.48(m，1H)，4.46(d，J＝7.9Hz，1H)，4.43-4.24(m，4H)，4.20(d，J＝12.1Hz，2H)，4.09-3.88(m，3H)，3.85-3.70(m，3H)，3.61(dd，J＝10.6，4.7Hz，1H)，3.54-3.31(m，5H)，3.31-3.15(m，5H)，3.16-2.97(m，3H)，2.65(t，J＝10.4Hz，1H)，2.56(t，J＝10.4Hz，1H)，2.38(d，J＝3.5Hz，1H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ165.3，165.2，165.0，164.9，164.7，163.9，138.2，137.9，136.8，136.8，133.4，133.0，132.5，130.0，129.9，129.8，129.7，129.6，129.5，129.2，129.0，128.5，128.4，128.35，128.3，128.1，128.0，127.97，127.9，127.8，127.7，127.2，126.2，126.0，101.6，101.3，101.0，100.9，100.8，100.0，80.4，79.3，78.3，77.2，76.6，76.0，75.5，74.8，74.3，73.6，73.2，72.3，72.1，68.7，67.6，67.2，66.1，65.7，51.5，46.7，45.7。
实施例A.7：合成(2S,3R,4S,5R,6R)-2-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-6-(((2R,3R,4S,5R,6R)-4,5-二(苯甲酰基氧基)-6-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-8-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)-5-(((2R,4aR,6S,7R,8S,8aR)-7,8-二(苯甲酰基氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(7*)
将四糖6*(0.65g，0.339mmol)带入吡啶(5mL)中，用BzCl(0.79mL，0.679mmol)处理，在rt搅拌16小时。RM用水稀释，用DCM(20mLX3)萃取。合并的有机物用冷稀HCl(10mLX2)、饱和NaHCO3(10mLX2)、水(10mL)、盐水(20mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩，获得粗制产品，然后将其用冷MeOH(5mLX3)研磨，获得靶标7*，是白色固体(0.65g，95％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.10-6.92(m，65H)，5.55-5.41(m，2H)，5.40-5.15(m，4H)，5.13-4.96(m，4H)，4.93(s，1H)，4.67(d，J＝7.9Hz，1H)，4.61(d，J＝7.9Hz，1H)，4.55-4.47(m，1H)，4.45(d，J＝7.9Hz，1H)，4.43-4.16(m，6H)，4.10-3.86(m，3H)，3.84-3.72(m，1H)，3.65-3.34(m，6H)，3.33-3.15(m，6H)，3.11-3.06(m，3H)，2.67-2.59(m，2H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ165.6，165.4，165.2，165.1，164.8，164.0，156.3，156.2，138.1，138.1，138.0，137.0，136.8，133.4，133.1，132.7，130.2，129.9，129.9，129.8，129.8，129.7，129.5，129.3，129.3，129.2，129.1，128.6，128.6，128.6，128.5，128.4，128.35，128.3，128.2，128.16，128.1，127.8，127.3，126.2，126.1，125.4，101.5，101.3，101.2，101.0，100.1，79.5，78.4，77.4，76.3，75.6，74.3，73.7，73.5，73.4，73.1，72.3，72.3，72.3，68.8，68.0，67.8，67.1，66.24，66.2，51.7，46.9，45.8。
实施例A.8：合成(2S,3R,4S,5R,6R)-2-(((2S,3R,4S,5R,6R)-3-(苯甲酰基氧基)-2-(((2R,3R,4S,5R,6R)-4,5-二(苯甲酰基氧基)-6-(2-(苄基((苄氧基羰基)氨基)乙氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)-5-(((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4-二(苯甲酰基氧基)-5-羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(8*)
在rt将四糖7*(0.54g，0.267mmol)带入DCM(5mL)中，用PTSA(10mg，0.053mmol)和EtSH(0.297mL，4.01mmol)处理，和搅拌4小时。RM用Et3N(1mL)淬灭，减压蒸发，用60％EtOAc/己烷纯化，获得靶标8*，是白色固体产品(0.46g，93％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.02-7.81(m，10H)，7.59-6.91(m，45H)，5.52(t，J＝9.2Hz，1H)，5.47-5.15(m，5H)，5.12-4.90(m，3H)，4.62(d，J＝7.6Hz，1H)，4.61-4.57(m，1H)，4.52(d，J＝7.7Hz，1H)，4.47-4.36(m，3H)，4.34-4.18(m，4H)，4.13-3.99(m，2H)，3.95-3.73(m，2H)，3.69(td，J＝9.1，4.3Hz，1H)，3.61-3.50(m，3H)，3.27(m，1H)，3.11-2.95(m，3H)，2.89(d，J＝4.3Hz，1H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ167.4，165.36，165.23，165.2，165.2，164.9，163.8，156.3，156.2，138.1，137.3，133.7，133.6，133.3，133.0，132.7，130.1，130.0，129.9，129.8，129.7，129.6，129.51，129.5，129.2，129.0，128.9，128.8，128.7，128.69，128.6，128.5，128.4，128.3，128.13，128.1，127.8，127.3，127.2，101.3，101.1，100.8，100.3，85.1，77.4，77.0，76.0，75.8，74.8，74.7，74.4，73.8，73.6，73.3，72.2，71.7，71.7，69.4，69.3，68.9，67.6，67.1，62.5，61.6，51.7，46.9，45.9。MALDI-TOF：C104H99NNaO30[M+H]+，计算值1864.61，实测值1864.77。
实施例A.9：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-4,5-二(苯甲酰基氧基)-6-(((2R,3R,4S,5R,6S)-4,5-二(苯甲酰基氧基)-6-(((2R,3R,4S,5S,6S)-3-(苯甲酰基氧基)-2-(((2R,3R,4S,5R,6R)-4,5-二(苯甲酰基氧基)-6-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-6-羧基-5-羟基四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-3-羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸(9*)
将四糖8*(0.125g，0.068mmol)带入DCM/水混合物(7ml，5:2)中，冷却至0℃。在加入tempo(2,1mg，0.014mmol)、随后BAIB(0.109g，0.339mmol)之后，RM在0℃搅拌20分钟，缓慢地温热多至rt，在rt再搅拌2小时(总共3h)。RM用DCM(5mL)和水(5mL)稀释，分层。水层用DCM(5mLX4)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩，提供粗制产品，然后将其在二氧化硅柱上用10-15％丙酮/DCM+1-2％AcOH纯化，在蒸发之后产生希望产品9*，是淡黄色固体(0.09g，71％)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.00-6.52(m，55H)，5.61-5.29(m，3H)，5.27-5.05(m，3H)，4.99(d，J＝9.8Hz，1H)，4.94(d，J＝8.0Hz，1H)，4.88-4.83(m，2H)，4.76(d，J＝7.9Hz，1H)，4.53(d，J＝8.0Hz，1.5H)，4.43(dd，J＝12.1，4.8Hz，1H)，4.37(d，J＝7.8Hz，0.5H)，4.33-4.02(m，7H)，3.87-3.39(m，11H)，3.26-3.03(m，4H)。13CNMR(101MHz，CD3OD)δ170.4，170.35，167.2，167.18，166.9，166.7，166.5，166.4，165.7，158.0，157.7，139.2，138.8，138.6，134.8，134.5，134.4，134.1，134.0，131.4，130.8，130.8，130.7，130.6，130.5，130.3，130.1，129.8，129.7，129.53，129.5，129.4，129.3，129.2，129.1，128.8，128.6，128.2，102.2，101.9，101.8，101.7，84.2，77.6，76.7，76.4，75.4，74.6，74.4，73.7，73.5，73.3，71.5，71.1，69.5，69.4，68.5，68.31，68.3，52.6，52.5，47.10。MALDI-TOF：C104H95NO32[M+H]+，计算值1892.57，实测值1892.71。
实施例A.10：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-2-((苄氧基)甲基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-6-((苄氧基)甲基)-5-(((2R,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,4-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸(10*)
将四糖9*(0.09g，0.48mmol)带入MeOH(5mL)中，用0.5MNaOMe/甲醇溶液(4.81mL，2.405mmol)处理，在rt搅拌24小时。然后，将RM用120H+树脂中和，提供透明溶液，将其过滤通过棉花塞，用MeOH彻底洗涤，减压蒸发，提供淡黄色胶状物。将淡黄色胶状物带入二乙基Et2O，研磨，提供淡黄色固体。然后倾析醚层(3X3ml)。将淡黄色固体与DCM研磨，提供白色固体，然后将其减压干燥，产生靶标10*，是白色粉末(0.05g，91％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ7.49-7.06(m，20H)，5.14(d，J＝9.5Hz，2H)，4.68-4.51(m，6H)，4.47-4.37(m，3H)，4.27-4.17(m，1H)，3.96-3.34(m，23H)，3.30-3.19(m，2H)。LCMS(ESI)：C55H66NO25[M-H]+，计算值1140.39，实测值1140.2。
实施例A.11：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(2-氨基乙氧基)-4,5-二羟基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,4-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸(11*)
在氢下，将四糖10*(50mg)和10％Pd/C(100mg)在MeOH(2mL)中的混合物在rt搅拌18小时。然后，将RM过滤通过PTFE疏水过滤器，用甲醇、水-甲醇、和随后用NH4OH/甲醇彻底洗涤。蒸发滤液和减压干燥提供靶标11*，是白色玻璃状膜(23mg，71％)。
1HNMR(400MHz，D2O)δ4.84(d，J＝8.0Hz，1H)，4.56(d，J＝8.0Hz，2H)，4.53(d，J＝7.9Hz，1H)，4.14(dt，J＝11.5，4.9Hz，1H)，4.04-3.92(m，3H)，3.89-3.75(m，5H)，3.72-3.49(m，10H)，3.43-3.34(m，3H)，3.29(t，J＝5.1Hz，2H)。13CNMR(101MHz，D2O)δ175.4，175.2，102.3，102.2，102.0，101.8，82.7，78.9，78.6，75.7，75.2，74.8，74.7，74.1，73.1，72.9，72.7，71.6，70.1，65.7，60.039.3。HRMS(ESI)：C26H44NO23[M+H]+，计算值738.23，实测值738.27。
通过应用描述于实施例A.1至A.11的程序，将四糖11*a-11*c合成至苄基(3-羟基丙基)氨基甲酸苄酯，苄基(4-羟基丁基)氨基甲酸苄酯和苄基(5-羟基戊基)氨基甲酸苄酯。
HRMS(ESI)：C27H45NO23[M+H]+，计算值752.23，实测值752.21。
HRMS(ESI)：C28H47NO23[M+H]+，计算值766.25，实测值766.21。
HRMS(ESI)：C29H49NO23[M+H]+，计算值780.26，实测值780.24。
实施例A.12：合成(2S,3R,5R,6R)-5-(((4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)-2-(乙硫基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(12*)
在Ar气氛下，将(2S,3R,4S,5R,6R)-6-((苄氧基)甲基)-2-(乙硫基)-5-羟基四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯(4.00g，7.654mmol，1.0当量)和(4aR,6R,7R,8aR)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基-6-(2,2,2-三氯-1-亚氨基乙氧基)六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-7-基苯甲酸酯(6.28g，9.95mmol，1.3当量)在DCM(140mL)中的混合物搅拌30分钟。将反应混合物冷却(-20℃)和加入TMSOTf(0.16mL，0.880mmol，0.115当量)。在搅拌45分钟之后，加入Et3N(1.0mL)猝灭反应混合物。减压浓缩有机溶液。所得深黄色油状物通过快速色谱法在硅胶(EtOAc/己烷，1/3，v/v)上纯化，提供(2S,3R,5R,6R)-5-(((4aR,6S,7R,8S,8aR)-7-(苯甲酰基氧基)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂环己烯-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)-2-(乙硫基)四氢-2H-吡喃-3,4-二基二苯甲酸酯12*(6g，79％)，是无色固体：
Rf＝0.5(EtOAc/己烷，3/7，v/v)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-0.19(s，3H)，-0.11(s，3H)，0.63(s，9H)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H)，2.67(m，2H)，3.15(td，J＝9.7Hz，4.9Hz，2H)，3.28(t，J＝9.2Hz，1H)，3.53-3.37(m，1H)，3.74-3.55(m，1H)，3.79(t，J＝9.0Hz，1H)，4.19(t，J＝9.5Hz，1H)，4.37(d，J＝12.2Hz，1H)，4.57(d，J＝10.0Hz，1H)，4.59(dd，J＝15.1，9.0Hz，2H)，4.67(d，J＝12.2Hz，1H)，5.12(dd，J＝8.9，8.2Hz，1H)，5.21(s，1H)，5.41(t，J＝9.8Hz，1H)，5.63(t，J＝9.3Hz，1H)，7.29-7.72(m，19H)，7.88-8.03(m，6H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ165.27，165.07，164.45，138.16，137.00，133.14，133.10，132.97，130.21，129.79，129.77，129.75，129.34，128.99，128.51，128.38，128.28，128.22，128.05，128.02，127.99，126.21，101.57，101.06，83.39，81.05，78.70，77.43，77.11，76.80，75.41，74.93，74.52，73.49，72.90，70.59，67.86，67.45，65.97，25.43，24.08，17.80，14.85，-4.20，-4.97。
B.合成鞘糖脂
实施例B.1：合成(S)-3-(叔丁氧基羰基)-N-甲氧基-2,2，N-三甲基噁唑烷-4-甲酰胺(13*)
在0℃，向L-Boc-丝氨酸(12.33g，60.1mmol)的DCM(240mL)溶液加入N,O-二甲基盐酸羟胺(6.04g，61.9mmol)和N-甲基吗啉(6.8mL，61.9mmol)。在20分钟期间内，向该溶液分批加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(11.86g，61.9mmol)。将溶液再搅拌1小时。然后，加入HCl水溶液(1.0M，30mL)，水层用CH2Cl2(2x100mL)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(30mL)洗涤，水层再次用CH2Cl2(100mL)萃取。合并的有机层在MgSO4上干燥，减压除去溶剂，获得相应的Weinreb酰胺(14.07g，94％)，是白色固体。
Rf＝0.3(EtOAc)；
1HNMR(250MHz，CDCl3)δ5.60(d，J＝6.0Hz，1H)，4.77(brs，1H)，1.42(s，9H)，3.80(d，J＝3.3Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.21(s，3H)，2.66(brs，1H)。
将粗制产品溶于丙酮(180mL)，向其加入2,2-二甲氧基丙烷(57mL)和BF3·Et2O(0.5mL)。在r.t.搅拌橙色溶液90分钟，然后用Et3N(1.2mL)淬灭，减压溶剂除去。粗制产品通过快速柱色谱在硅胶上纯化(梯度EtOAc/环己烷＝1:2→1:1)，产生亚异丙基-保护的Weinreb酰胺13*(15.32g，2步89％)，是白色固体。NMR谱图包括由于旋转异构体存在而产生的两组信号。
[α]D r.t.＝-30.9(c＝1，CHCl3)；Rf＝0.45(己烷/EtOAc＝1:1)；IR(膜)νmax2976，2938，1702，1682，1364，1167，1098，998，848，768，716；1HNMR(250MHz，CDCl3)δ4.77(dd，J＝9.8，2.8Hz，1H)，4.70(dd，7.5，3.8，Hz，1H)，4.18(dd，J＝7.5，4.0Hz，1H)，4.15(dd，J＝7.8，3.8Hz，1H)，3.95(dd，J＝9.3，3.0Hz，1H)，3.91(dd，J＝9.0，3.5Hz)，3.72(s，3H)，3.68(s，3H)，3.19(s，6H)，1.68(s，3H)，1.66(s，3H)，1.54(s，3H)，1.50(s，3H)，1.47(s，9H)，1.39(s，9H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ171.4，170.7，152.2，151.4，95.1，94.5，80.6，80.0，66.2，66.0，61.3，61.3，57.9，57.8，28.5，28.4，25.8，25.5，24.8，24.6；HRESIC13H24N2O5[M+Na+]：计算值311.1577，实测值311.1582。
实施例B.2：合成(S)-4-甲酰基-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(14*)
在0℃，向Weinreb酰胺13*(8.00g，27.7mmol)的THF(100mL)溶液滴加LiAlH4(1.0M，在THF中，13.9mL，13.9mmol)，在0℃搅拌溶液1小时。在1小时之后，将溶液冷却至-10℃，将KHSO4(1M，70mL)仔细加入，溶液用Et2O(170mL)稀释。让混合物温热至r.t.和搅拌30分钟。分开有机层，在MgSO4上干燥，过滤，减压除去溶剂，产生Garner醛14*，是淡黄色油状物(6.24g，1HNMR纯度>95％)。NMR谱图包括由于旋转异构体存在而产生的两组信号。1HNMR(250MHz，CDCl3)δ9.58(d，J＝0.8Hz，1H)，9.52(d，J＝2.5Hz，1H)，4.32(m，1H)，4.16(m，1H)，4.06(m，4H)，1.53-1.63(m，12H)，1.49(s，9H)，1.40(s，9H)。全部光谱数据良好地符合已报告的数据(Synthesis1998，1707)。粗制产品用于后续反应，不加进一步纯化。
实施例B.3：合成(4R,1’Z)-3-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-4-(1’-十六烯基)噁唑烷(15*)
在-78℃，将正-BuLi(1.6M，在己烷中，25.2mL，40.3mmol)滴加至无水THF(220mL)中的十五烷基-三苯基鏻溴化物16*(24.03g，43.4mmol)。让所得橙色溶液温热至0℃和再搅拌30分钟。然后，将溶液冷却至-78℃，缓慢加入无水THF(30mL)中的Garner醛14*(6.23g，27.2mmol)。在r.t.搅拌2小时之后，反应用饱和NH4Cl水溶液(35mL)稀释，分层。水层用CH2Cl2(3x35mL)萃取，经合并的有机萃取物用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，在MgSO4上干燥，减压浓缩。通过快速柱色谱在二氧化硅(EtOAc/己烷＝1:2)凝胶上纯化，提供(Z)-烯烃15*，是淡黄色油状物(11.27g，78％)。
[α]D r.t＝+45.2(c＝1，CHCl3)；Rf＝0.40(EtOAc/己烷＝1:2)；IR(膜)νmax2923，2854，1699，1457，1382，1251，1175，1093，1056，850，768cm-1；1HNMR(250MHz，CDCl3)δ5.27-5.40(m，2H)，4.58(brs，1H)，4.02(dd，J＝6.3，8.8Hz，1H)，3.61(dd，J＝3.3，8.5Hz，1H)，1.96(brs，2H)，1.23-1.56(m，39H)，0.85(t，J＝7Hz，3H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ152.1，130.9，130.4，94.1，79.8，69.2，54.7，32.1，29.9，29.8，29.8，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，28.6，28.6，27.6，22.8，14.2；HRESIC26H49NO3[M+Na+]：计算值446.3605，实测值446.3614。全部光谱数据良好地符合已报告的数据(Synthesis2004，847)。
在考虑1HNMR光谱中烯式质子的情况下，所希望的(Z)-烯烃能够容易地区别于不希望的(E)-烯烃副产物：Z-15*1HNMR(250MHz，CDCl3)δ4.05(dd，J＝6.3，8.6Hz，lH)，3.64(dd，J＝3.3，8.6Hz，1H)cf.E-15*1HNMR(250MHz，CDCl3)δ4.01(dd，J＝6.1，8.7Hz，1H)，3.71(dd，J＝2.1，8.7Hz，1H)。
实施例B.4：合成十五烷基三苯基鏻溴化物(16*)
将1-溴十五烷(30.0g，103mmol)和三苯基膦(27.02g，103mmol)的MeCN(200mL)溶液在80℃回流5天。在减压除去溶剂之后，加入Et2O(30mL)，滤出所得白色沉淀，用Et2O洗涤，高真空干燥24小时，提供十五烷基三苯基鏻溴化物(16*)(49.66g，87％)，是白色粉末。
实施例B.5：合成(2R,3Z)-2-(叔丁氧基羰基)氨基-3-十八烯-1-醇(17*)
将对甲苯磺酸(371mg，1.95mmol)加入搅拌的(Z)-烯烃15*(5.00g，12.2mmol)的MeOH/水(共50mL，比率＝9:1v/v)溶液，搅拌混合物68小时。减压浓缩反应混合物，产生白色固体，将其再溶于CH2Cl2(100mL)。溶液用盐水(30mL)洗涤，在MgSO4上干燥，减压除去溶剂。通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(梯度环己烷/EtOAc＝4:1→2:1)，提供醇17*，是白色固体(2.71g，59％)。全部光谱数据良好地符合已报告的数据(Synthesis2004，847)。
实施例B.6：合成(2S,3S,4R)-2-(叔丁氧基羰基)氨基-1,3,4-十八烷三醇(18*)
将醇17*(1.50g，3.91mmol)溶于叔-BuOH/水(共38mL，比率1:1)，加入甲烷磺酰胺(371mg，3.91mmol)。将反应混合物冷却至0℃，加入AD-mix-β(5.48g)。在0℃搅拌所得混合物41小时，在r.t.再搅拌7小时，然后加入固体Na2SO3(6.0g)并搅拌30分钟将其猝灭。随后用EtOAc(3x40mL)萃取。有机萃取物用NaOH(1M，20mL)、水(20mL)和饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤，在MgSO4上干燥，减压除去溶剂。通过快速柱色谱法在硅胶纯化(梯度EtOAc/环己烷＝1:1→2:1)提供三醇18*，是白色固体(1.05g，64％)。全部光谱数据良好地符合已报告的数据(Synthesis2004，847)。
实施例B.7：合成(2S,3S,4R)-2-氨基十八烷-1,3,4-三醇(19*)
将三醇18*(60mg，0.14mmol)溶于TFA/H2O(20:1，0.6mL)和在r.t.搅拌30分钟。溶液用CH2Cl2(1.5mL)稀释，然后用饱和NaHCO3水溶液(10mL)仔细中和(至pH～8)，此时发生白色固体沉淀。通过过滤除去白色固体，用水(3x10mL)洗涤，减压干燥。从MeCN重结晶产生植物鞘氨醇19*，是白色粉末(38mg，82％)。全部光谱数据良好地符合已报告的数据(Synthesis2004，847)。
实施例B.8：合成二十六烷酸N-羟基琥珀酰亚胺基酯(20*)
向二十六酸(121mg，0.304mmol)的CH2Cl2(4mL)溶液加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(0.058mL，0.33mmol)和N-羟基琥珀酰亚胺(42mg，0.37mmol)。将反应混合物加热至40℃，搅拌3小时，然后用水(4mL)淬灭。溶液用Et2O(8mL)稀释，两层分开。水相用Et2O(8mL)萃取和合并的有机层用饱和NaCl水溶液(5mL)洗涤，在MgSO4上干燥，过滤。在减压除去溶剂之后，获得N-羟基琥珀酰亚胺基酯20*，是白色固体(85mg，57％)。
实施例B.9：合成N-((2S,3S,4R)-1,3,4-三羟基十八烷-2-基)二十七烷酰胺(21*)
向植物鞘氨醇19*(15mg，0.047mmol)的无水THF(1mL)溶液加入琥珀酰亚胺基酯20*(34mg，0.071mmol)和Et3N(24μL，0.14mmol)。将溶液加热至50℃和搅拌20小时。加入EtOAc(5mL)，离心所得悬浮液(30分钟，3000rpm)。过滤除去白色沉淀，干燥减压，产生酰胺21*(29mg，88％)。
实施例B.10：合成(2S,3S,4R)-1,3,4-三-叔丁基-二甲基甲硅烷基氧基-2-二十六酰基氨基-1-十八烷(22*)
在0℃，向搅拌的酰胺21*(25mg，0.036mmol)的CH2Cl2(1.2mL)悬浮液加入TBSOTf(43μL，0.18mmol)和2,6-卢剔啶(65μL，0.054mmol)。在r.t.搅拌反应混合物2小时。反应用MeOH(0.2mL)淬灭。混合物用Et2O(2mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(1mL)和饱和NaCl水溶液(1mL)洗涤。有机层在MgSO4上干燥，过滤，减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(环己烷/Et2O＝15:1)，提供TBS保护的神经酰胺22*，是无色油状物(27mg，71％)。全部光谱数据良好地符合已报告的数据(Synthesis2004，847)。
实施例B.11：合成(2S,3S,4R)-3,4-二-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基-2-二十六酰基氨基-4-十八烷醇(23*)
在-10℃，向神经酰胺22*(90mg，0,087mmol)的THF(2mL)溶液加入TFA(40μL，0.519mmol)/水(0.5mL，27.8mmol)。在2小时期间内，将反应混合物温热至10℃。然后，加入饱和NaHCO3水溶液直至达到中性pH猝灭反应混合物。所得混合物用Et2O(10mL)稀释，用水(10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)、饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤，在MgSO4上干燥。减压除去溶剂，粗制产品通过快速柱色谱在硅胶上纯化(梯度EtOAc/环己烷＝10:1→5:1)，产生醇23*(68mg，85％)，是无色油状物。
[α]D r.t.＝-11.6(c＝1，CHCl3)；Rf＝0.3(环己烷/EtOAc＝4:1)；IR(膜)νmax3285，2920，2851，1645，1465，1253，1034，835，776，721，680cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ6.27(d，J＝7.8Hz，1H)，4.21(dd，J＝11.3，3.0Hz，1H)，4.06(td，J＝6.5，3.2Hz，1H)，3.91(t，J＝2.8Hz，1H)，3.76(td，J＝6.4，2.6Hz，1H)，3.59(dd，J＝11.3，3.7Hz，1H)，3.15(dd，J＝9.0，3.3Hz，1H)，2.20-2.16(m，2H)，1.67-1.47(m，6H)，1.45-1.16(m，68H)，0.92(s，9H)，0.90(s，9H)，0.87(t，J＝6.9Hz，6H)，0.11(s，6H)，0.08(s，6H)；13CNMR(126MHz，CDCl3)δ172.62，77.42，76.36，63.62，51.3，36.93，34.42，31.92，29.80，29.70，29.63，29.53，29.48，29.37，26.00，25.94，25.81，25.60，22.69，18.14，18.12，14.13，-3.76，-4.08，-4.53，-4.91；HRESIC56H117NO4Si2[M+Na+]：计算值924.8594，实测值924.8604。
醇23*a-23*o根据实施例15-23描述的程序合成，起始自共同的醛14*：
实施例B.12：合成6-羟基己基4-甲基苯磺酸酯(24*)
于5℃，在15分钟内向己烷-1,6-二醇(10.0g，85mmol)的DCM(200mL)溶液滴加溶于吡啶(100mL)的4-甲基苯-1-磺酰氯(17.8g，93mmol)。在5小时的时间段内，将反应混合物温热至r.t.。减压除去溶剂，粗制品通过二氧化硅快速柱色谱法(梯度己烷/EtOAc＝1:0→1:1)纯化，提供一甲苯磺酸酯化的己二醇24*(6.5g，28％)，是无色油状物。
Rf＝0.55(己烷/EtOAc＝1:1)；IR(膜)νmax3381，2935，2862，1598，1461，1352，1172，959，921，813，661cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.76-7.71(m，2H)，7.29(dt，J＝4.3，1.2Hz，2H)，3.97(t，J＝6.5Hz，2H)，3.55(t，J＝6.5Hz，2H)，2.40(s，3H)，1.65-1.56(m，2H)，1.55(s，1H)，1.52-1.41(m，2H)，1.36-1.18(m，4H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ144.7，133.1，129.8，127.8，70.5，62.6，32.4，28.7，25.1，25.0，21.6；HRESIC13H20O4S[M+Na+]：计算值295.0975，实测值295.0968。
实施例B.13：合成6-叠氮基己烷-1-醇(25*)
将6-羟基己基4-甲基苯磺酸酯24*(4.3g，15.79mmol)溶于DMF(23mL)，加入叠氮化钠(1.75g，26.8mmol)。将混合物加热至55℃，在16小时之后将其冷却至r.t.，用水稀释(150mL)。混合物用CH2Cl2萃取三次，用饱和NaCl水溶液洗涤。有机层在MgSO4上干燥，减压除去溶剂。粗制产品通过二氧化硅快速柱色谱法在硅胶上纯化(梯度己烷/EtOAc＝1:0→1:1)，提供6-叠氮基己烷-1-醇25*(2.2g，97％)，是无色油状物。
Rf＝0.50(己烷/EtOAc＝2:1)；IR(膜)νmax3329，2935，2891，2090，1256，1349，1258，1055，910，731cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ3.63(t，J＝6.5Hz，2H)，3.25(t，J＝6.9Hz，2H)，1.64-1.51(m，4H)，1.43-1.32(m，4H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ62.8，51.5，32.6，28.9，26.6，25.4；HRESIC6H13N3O[M+Na+]：计算值166.0951，实测值166.0945。
实施例B.14：合成6-叠氮基己基4-甲基苯磺酸酯(26*)
向6-叠氮基己烷-1-醇25*(2.7g，18.9mmol)的吡啶(70mL)溶液加入4-甲基苯-1-磺酰氯(4.0g，21.0mmol)。让反应混合物在r.t.搅拌5小时，此后减压除去溶剂，将粗制产品溶于CH2Cl2，用水洗涤，在MgSO4上干燥。减压除去溶剂，粗制产品通过二氧化硅快速柱色谱法在硅胶上纯化(梯度己烷/EtOAc＝1:0→1:1)，提供叠氮化物26*(5.0g，89％)，是无色油状物。
Rf＝0.50(己烷/EtOAc＝3:1)；IR(膜)νmax2938，2863，2092，1598，1455，1356，1258，1174，1097，956，919，813，724，662cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ；7.85-7.67(m，2H)，7.33(dd，J＝8.5，0.6Hz，2H)，4.01(t，J＝6.4Hz，2H)，3.21(t，J＝6.9Hz，2H)，2.43(s，3H)，1.71-1.57(m，2H)，1.52(dd，J＝9.1，4.9Hz，2H)，1.38-1.12(m，4H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ144.8，133.2，129.9，127.9，70.4，51.3，28.7，28.7，26.1，25.0，21.7；HRESIC13H19N3O3S[M+Na+]：计算值320.1045，实测值320.1057。
叠氮化物26*a-26*f按照描述于实施例24-26的程序合成，起始自相应的可商购二元醇。
实施例B.15：合成烯丙基6-O-三苯甲基-α-D-半乳吡喃糖苷(27*)
将1-O-烯丙基-半乳糖苷(Org.Lett.2002，4，489)(4g，18.2mmol)溶于吡啶(18mL)。向溶液加入三苯甲基氯(6.58g，23.6mmol)，将混合物在r.t.搅拌18小时，此后减压除去溶剂。粗制产品通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(CH2Cl2/MeOH＝10:1)，产生吡喃糖苷27*(7.0g，83％)，是无色油状物。
[α]D r.t.＝+60.0(c＝1，CHCl3)；Rf＝0.8(CH2Cl2/MeOH＝5:1)；IR(膜)νmax3402，2929，1491，1449，1218，1152，1070，1032，746，703cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.51-7.18(m，15H)，5.99-5.88(m，1H)，5.25(ddq，J＝35.9，10.4，1.4Hz，2H)，4.95(d，J＝3.8Hz，1H)，4.25(ddt，J＝12.8，5.4，1.4Hz，1H)，4.05(ddt，J＝12.8，6.3，1.3Hz，1H)，3.96(s，1H)，3.89(t，J＝5.8Hz，1H)，3.81(d，J＝5.7Hz，1H)，3.75(d，J＝9.8Hz，1H)，3.47(s，1H)，3.43(dd，J＝9.8，6.1Hz，1H)，3.32(dd，J＝9.8，5.3Hz，1H)，2.86(d，J＝2.1Hz，1H)，2.71(d，J＝8.1Hz，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ143.8，133.7，128.6，127.8，127.1，117.8，97.5，86.9，71.2，69.8，69.5，69.5，68.5，63.3；HRESIC25H25O5[M+Na+]：计算值485.1935，实测值485.1941。
实施例B.16：合成烯丙基2,3,4-三-O-苄基-6-O-三苯甲基-α-D-半乳吡喃糖苷(28*)
在r.t.，向烯丙基6-O-三苯甲基-α/β-D-半乳吡喃糖苷27*(3.7g，8.0mmol)的DMF(32mL)溶液分批加入氢化钠(60％，在矿物油中，1.50g，36.0mmol)。在1小时之后加入苄基溴(4.2mL，35.2mmol)。将反应混合物搅拌48小时，此后加入MeOH(5mL)将其猝灭。混合物用Et2O稀释，从饱和NaHCO3水溶液萃取两次。合并的有机层用水(3x100mL)和饱和NaCl水溶液洗涤，在MgSO4上干燥。减压除去溶剂，粗制产品在硅胶塞上纯化(己烷/EtOAc＝2:1，硅胶用1％NEt3中和)，产生苄基醚28*(5.5g)，是淡黄色油状物，将其用于后续步骤，不加进一步纯化。
实施例B.17：合成烯丙基6-(6’-叠氮基己基)-2,3,4-三-O-苄基-α-D-半乳吡喃糖苷(29*)
将烯丙基2,3,4-三-O-苄基-6-O-三苯甲基-α-D-半乳吡喃糖苷28*(5.00g，6.82mmol)和三乙基硅烷(5.45mL，34.1mmol)的CH2Cl2(68mL)溶液冷却至0℃。向搅拌的溶液滴加三氟乙酸(2.6mL，34.1mmol)。在15分钟之后用饱和NaHCO3水溶液猝灭混合物，用CH2Cl2萃取。粗制产品在硅胶塞上过滤。用10:1己烷/EtOAc除去全部硅烷和三苯甲基残余物，产品用EtOAc洗脱，产生烯丙基2,3,4-三-O-苄基-α-D-半乳吡喃糖苷(3.0g)，是淡黄色油状物，将其不加进一步纯化地用于后续反应。
在0℃，向烯丙基2,3,4-三-O-苄基-α-D-半乳吡喃糖苷(1.0g，2.04mmol)的DMF(10mL)溶液加入氢化钠(60％，在矿物油中，0.12g，3.1mmol)。在15分钟之后，将混合物温热至r.t.，再搅拌1小时。然后，加入6-叠氮基己基4-甲基苯磺酸酯26*(0.9g，3.1mmol)，在r.t.再搅拌反应混合物8小时，此后加入MeOH(2mL)猝灭混合物。在用DCM稀释之后，加入饱和NH4Cl水溶液，混合物用DCM萃取。合并的有机层用水和饱和NaCl水溶液洗涤。有机层在MgSO4上干燥，减压除去溶剂，粗制产品通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(梯度己烷/EtOAc＝1:0→1:1)，产生叠氮化物29*(1.0g，3步共68％)，是无色油状物。[α]D r.t.＝+25.4(c＝1，CHCl3)；Rf＝0.65(己烷/EtOAc＝4:1)；IR(膜)νmax2933，2863，2094，1497，1454，1358，1177，1098，1059，926，816，736，697cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.94-7.16(m，15H)，5.95(dddd，J＝17.1，10.3，6.6，5.2Hz，1H)，5.31(dq，J＝17.2，1.6Hz，1H)，5.21(ddd，J＝10.3，2.8，1.1Hz，1H)，5.01-4.58(m，7H)，4.17(ddt，J＝13.0，5.2，1.4Hz，1H)，4.09-3.99(m，3H)，3.98-3.90(m，2H)，3.50-3.18(m，6H)，1.72-1.47(m，4H)，1.44-1.30(m，4H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ138.9，138.8，138.6，134.0，129.8，128.3，128.3，128.2，128.1，128.0，127.9，127.6，127.5，127.4，117.9，96.3，79.1，76.5，75.3，74.7，73.3，73.3，71.3，70.3，69.5，69.4，68.2，51.4，51.2，29.6，28.8，28.7，28.6，26.6，26.1，25.7，25.0，21.6。HRESIC36H45N3O6[M+Na+]：计算值638.3201，实测值638.3229。
叠氮化物29*a-29*f起始自烯丙基2,3,4-三-O-苄基-α-D-半乳吡喃糖苷和中间体26*a-26*f获得。
实施例B.18：合成6-(6’-叠氮基己基)-2,3,4-三-O-苄基-α/β-D-半乳吡喃糖(30*)
将烯丙基6-(6’-叠氮基己基)-2,3,4-三-O-苄基-α-D-半乳吡喃糖苷29*(1.4g，2.3mmol)溶于MeOH(16mL)，在r.t.将PdCl2(0.21g，1.17mmol)加至溶液。混合物在4小时搅拌，此后混合物过滤通过C盐，减压除去溶剂。粗制产品通过快速柱色谱法(梯度己烷/EtOAc＝1:0→1:1)纯化，产生乳醇30*(1.2g，88％)，是无色油状物。
Rf＝0.50(己烷/EtOAc＝2:1)；IR(膜)νmax3414，2933，2862，2093，1454，1255，1060，910，733，696cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.45-7.20(m，30H)，5.33-5.27(m，1H)，5.01-4.90(m，3H)，4.85-4.71(m，7H)，4.66(ddd，J＝16.7，11.5，6.0Hz，3H)，4.18-4.09(m，1H)，4.05(dd，J＝9.2，3.6Hz，1H)，3.96(s，2H)，3.93(d，J＝2.8Hz，1H)，3.88(d，J＝2.8Hz，1H)，3.78(dd，J＝9.6，7.5Hz，1H)，3.63-3.52(m，3H)，3.52-3.37(m，5H)，3.37-3.28(m，2H)，3.28-3.21(m，5H)，1.65-1.49(m，8H)，1.42-1.24(m，8H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ138.8，138.7，138.5，138.4，128.5，128.5，128.4，128.3，128.3，128.3，128.3，128.1，127.9，127.7，127.7，127.7，127.6，127.6，97.9，92.0，82.3，80.9，78.8，76.7，75.2，74.9，74.8，74.7，73.8，73.7，73.6，73.1，73.1，71.5，71.4，69.6，69.6，69.5，51.5，29.5，28.9，26.6，25.8；
HRESIC33H41N3O6[M+Na+]：计算值598.2883，实测值598.2869。
实施例B.19：合成6-(6’-叠氮基己基)-2,3,4-三-O-苄基-β-D-半乳吡喃糖基N-苯基三氟乙酰亚氨酸酯(31*)
向6-(6’-叠氮基己基)-2,3,4-三-O-苄基-α/β-D-半乳吡喃糖30*(400mg，0.70mmol)的DCM(7mL)溶液加入碳酸铯(340mg，1.04mmol)。向混合物加入2,2,2-三氟-N-苯基亚氨代乙酰氯(216mg，1.04mmol)，在r.t.搅拌反应混合物3.5小时，此后将其过滤通过C盐，用DCM洗涤。减压除去溶剂，粗制产品通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(梯度己烷/EtOAc＝10:1→1:1)，产生亚氨酸酯31*(490mg，94％)，是无色油状物。
[α]D r.t.＝+60.8(c＝0.4，CHCl3)；Rf＝0.80(己烷/EtOAc＝2:1)；IR(膜)νmax3064，2934，2865，2094，1717，1598，1454，1321，1207，1099，1027，910，734，696cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.45-6.60(m，20H)，5.56(s，1H)，4.90(d，J＝11.5Hz，1H)，4.75(s，J＝1.5Hz，2H)，4.68(s，J＝12.4Hz，2H)，4.58(d，J＝11.6Hz，1H)，4.00(t，J＝8.7Hz，1H)，3.84(d，J＝2.4Hz，1H)，3.58-3.39(m，4H)，3.34(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，3.23(dt，J＝9.3，6.5Hz，1H)，3.14(t，J＝6.9Hz，2H)，1.52-1.38(m，4H)，1.32-1.16(m，4H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ138.6，138.3，138.2，128.8，128.6，128.5，128.4，128.4，128.3，128.0，127.9，127.8，127.7，124.3，119.4，82.3，78.3，77.4，77.2，76.8，75.7，74.9，74.6，73.4，73.2，71.4，68.7，51.5，29.7，28.9，26.7，25.8；HRESIC41H45F3N4O6[M+Na+]：计算值769.3183，实测值769.3239。
根据描述于实施例30和31的程序，起始自半缩醛29*a-29*f，合成亚氨酸酯供体31*a-31*f。
以相似方式，葡萄糖系列的亚氨酸酯供体31**a-31**f起始自相应半缩醛29**a-29**f获得。
实施例B.20：合成(2S,3S,4R)-3,4-二-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基-2-二十六酰基氨基-1-(6-(6’-叠氮基己基)-2,3,4-三-O-苄基)-α-D-半乳吡喃糖基)十八烷(32*)
亲核物质23*(156mg，0.169mmol)和糖基化剂31*(189mg，0.253mmol)与甲苯共蒸三次，在高真空下干燥3小时，此后将其溶于Et2O(2mL)和THF(0.4mL)，冷却至-40℃。向混合物加入TMSOTf(9.0μL，0.051mmol)，在3小时时间段内将溶液温热至-10℃。加入NEt3(0.05mL)猝灭反应，减压除去溶剂，将粗制产品通过二氧化硅快速柱色谱法(梯度己烷/EtOAc＝10:1→4:1)纯化，提供糖苷32*(180mg，72％α-端基异构体)，是白色沫状物。
[α]D r.t.＝+18.9(c＝1，CHCl3)；Rf＝0.46(己烷/EtOAc＝6.5:1)；IR(膜)νmax3328，2925，2854，2096，1731，1656，1452，1348，1246，1156，1099，1058，835，777，696cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.39-7.27(m，15H)，5.99(d，J＝7.07Hz，1H)，4.95(d，J＝11.5Hz，1H)，4.83(d，J＝3.7Hz，1H)，4.81-4.59(m，6H)，4.11-4.08(m，1H)，4.04(dd，J＝10.1，3.6Hz，1H)，3.96-3.82(m，6H)，3.65(ddd，J＝7.0，5.1，1.85Hz，1H)，3.50-3.45(m，1H)，3.40(dq，J＝6.7，4.0Hz，1H)，3.33-3.27(m，1H)，3.25(t，J＝6.9Hz，2H)，2.02-1.98(m，2H)，1.62-1.49(m，8H)，1.30-1.23(m，72H)，0.91-0.87(m，24H)，0.07(s，3H)，0.06(s，3H)，0.03(s，6H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ173.1，138.8，138.7，138.6，128.33，128.30，128.2，128.1，127.8，127.6，127.50，127.46，127.3，100.2，79.1，77.20，76.57，75.7，75.6，74.9，74.8，73.4，72.9，71.4，69.7，69.4，69.0，51.8，51.4，36.8，33.2，31.9，29.9，29.74，29.71，29.66，29.60，29.5，29.4，28.8，26.6，26.14，26.09，25.7，25.6，22.7，18.3，18.2，14.1，-3.7，-3.9，-4.6，-4.9；HRESIC89H156N4O9Si2[M+Na+]：计算值1505.1333，实测值1505.1388。
实施例B.21：合成(2S,3S,4R)-2-二十六酰基氨基-1-(6-(6’-叠氮基己基)-2,3,4-三-O-苄基-α-D-半乳吡喃糖基)十八烷-3,4-二醇(33*)
向二-TBS醚32*(16.0mg，10.8μmol)的THF(1mL)溶液缓慢加入TBAF(1M，在THF中，0.150mL，0.15mmol)溶液。在3.5小时之后，反应混合物用CH2Cl2(10mL)稀释。减压除去溶剂，粗制产品通过二氧化硅快速柱色谱法(梯度己烷/EtOAc＝1:0→1:1)纯化，提供二醇33*(10.5mg，78％)，是透明油状物。
[α]D r.t.＝+121.9(c＝0.2，CHCl3)；Rf＝0.40(己烷/EtOAc＝2:1)；IR(膜)νmax3329，2919，2851，2096，1640，1543，1467，1455，1350，1094，1046，907，730，696cm-1；
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.32-7.18(m，15H)，6.34(d，J＝7.91Hz，1H)，4.88-4.51(m，7H)，4.15(m，1H)，3.98-3.96(m，1H)，3.88-3.74(m，5H)，3.41-3.21(m，6H)，3.17(t，J＝6.5Hz，2H)，2.19-2.08(t，J＝7.05Hz，2H)，1.53-1.35(m，8H)，1.31-1.18(m，72H)，0.81(m，6H)；13CNMR(101MHz，CDCl3)δ173.0，138.5，138.3，137.8，128.44，128.39，128.2，128.1，128.1，127.9，127.62，127.60，127.4，99.1，79.3，76.2，76.0，74.7，74.5，74.2，73.2，72.7，71.4，69.8，51.3，49.5，36.7，31.9，29.7，29.5，29.4，29.4，29.3，28.8，26.5，25.9，25.7，25.7，22.7，14.1；HRESIC77H128N4O9[M+Na+]：计算值1275.9574，实测值1275.9536。
实施例B.22：合成(2S,3S,4R)-1-(6-(6’-氨基己基)-α-D-半乳吡喃糖基)-2-二十六酰基氨基十八烷-3,4-二醇(34*)
向二醇33*(55mg，0.044mmol)的EtOH(0.5mL)和氯仿(0.15mL)溶液加入Pd(OH)2/炭(10％w/w，湿重38mg)。溶液在r.t.在Ar气氛下搅拌15分钟。此后将H2气插入悬浮液中，氢化混合物12小时。混合物过滤通过C盐，用CH2Cl2、THF和MeOH彻底洗涤。减压除去溶剂，粗制品通过二氧化硅快速柱色谱法在硅胶上纯化(CH2Cl2/MeOH＝4:1)，提供配备了连接体的鞘糖脂34*(38mg，90％)，是淡黄色粉末。
[α]D r.t.＝+66.1(c＝1.0，吡啶)；Rf＝0.44(CH2Cl2/MeOH＝4:1)；
IR(膜)νmax3292，2918，2850，1640，1539，1468，1304，1073，1038，970，721cm-1；1HNMR(400MHz，d-pyr)δ8.88(d，J＝8.5Hz，1H)，5.54(d，J＝2.5Hz，1H)，5.24-5.21(m，1H)，4.62-4.55(m，3H)，4.44-4.32(m，5H)，4.00-3.92(m，2H)，3.31-3.26(m，2H)，2.56(t，J＝7.4Hz，2H)，2.22-2.18(m，1H)，2.00-1.90(m，2H)，1.90-1.78(m，4H)，1.73-1.60(m，1H)，1.55-1.47(m，2H)，1.44-1.20(m，70H)，0.87(m，6H)；13CNMR(101MHz，d-pyr)δ173.2，100.4(JCH＝169Hz)，76.0，72.2，71.0，70.9，70.7，70.6，70.3，69.6，67.5，50.4，39.6，36.5，33.9，31.8，30.1，29.9，29.7，29.68，29.65，29.62，29.59，29.5，29.48，29.28，27.8，26.3，26.19，26.17，25.6，22.6，14.0；HRESIC56H112N2O9[M+H+]：计算值957.8441，实测值957.8468。
下述鞘糖脂以相似方式制备。
C.合成缀合物
实施例C.1：合成2,5-二氧代吡咯烷-1-基5-((6-(((2R,3R,4S,5R,6S)-6-(((2S,3S,4R)-2-二十六烷酰胺基-3,4-二羟基十八烷基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)己基)氨基)-5-氧代戊酸酯(35*)
向CHCl3:MeOH:Et3N混合物(1:1:0.1，7ml)中的鞘糖脂34*(10mg，10.44μmol)一批加入过量的戊二酸酐(14.9mg，131μmol)，在r.t.搅拌。在3天之后，原料质量在LCMS上的消失指出反应完成，将反应混合物蒸发至干，将所得残余物与二氯甲烷研磨，提供中间体羧酸(8mg，71.5％)，是白色粉末。
IR(膜)νmax3300，2918，2850，1718，1637，1539，1466，1304，1073，1038，970，719cm-1；1HNMR(400MHz，吡啶-d5)δ8.45-8.33(m，2H)，5.53(d，J＝3.8Hz，1H)，5.29-5.18(m，1H)，4.63(ddd，J＝13.0，9.9，4.5Hz，2H)，4.46(t，J＝6.1Hz，1H)，4.44-4.25(m，5H)，4.02(ddd，J＝39.8，9.9，6.0Hz，2H)，3.46(dq，J＝13.3，6.6Hz，4H)，2.66(t，J＝7.3Hz，2H)，2.57(t，J＝7.3Hz，2H)，2.44(t，J＝7.5Hz，2H)，2.37-2.21(m，3H)，1.97-1.74(m，4H)，1.75-1.62(m，1H)，1.61-1.50(m，4H)，1.47-1.06(m，65H)，0.86(t，J＝6.6Hz，6H)；13CNMR(101MHz，吡啶)δ172.78，101.07，76.28，72.14，71.08，70.59，70.44，70.36，69.79，68.33，50.90，39.26，36.43，35.49，33.94，31.76，30.03，29.80，29.74，29.68，29.64，29.55，29.47，29.42，29.25，26.80，26.14，26.04，25.83，22.57，21.73，13.91；MALDI-TOF(THAP，RN)[M-H]-计算值1069.861，实测值1069.642。
向中间体羧酸(1.45mg，1.36μmol)的DMSO：THF(1:1，500μL)溶液一批加入N-羟基琥珀酰亚胺(0.18mg，1.61μmol)，随后是1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的溶液(1.3mg，6.78μmol)。在5天之后，LCMS中原料质量的消失指出反应完成。然后，将2-巯基乙醇(20μL)加入反应混合物以猝灭1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐。NHS酯活化的羧酸35*不加任何纯化地用于和与SP-3荚膜多糖有关的糖偶联：
HRMS(ESI)C35H122N3O14[M+H]+计算值1167.8921，实测值1168.8931。
实施例C.2：合成4-硝基苯基(6-(((2R,3R,4S,5R,6S)-6-(((2S,3S,4R)-2-二十六烷酰胺基-3,4-二羟基十八烷基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)己基)氨基甲酸酯(36*)
将鞘糖脂34*(3.9mg，4.1μmol)溶于0.5mL无水吡啶，然后向其加入二(4-硝基苯基)碳酸盐(6.1mg，20μmol)、随后是Et3N(25μl，0.179mmol)。所得黄色溶液在rt下搅拌过夜，然后减压浓缩，通过柱色谱法在硅胶上纯化，用0-5-10-20％MeOH/DCM的梯度，产生3.6mg(3.2μmol，79％收率)鞘糖脂36*，是淡黄色油状物。1HNMR(400MHz，吡啶)δ9.02(t，J＝5.6Hz，1H)，8.49(d，J＝8.7Hz，1H)，8.26(d，J＝9.2Hz，2H)，7.54(d，J＝9.2Hz，2H)，5.56(d，J＝3.8Hz，1H)，5.26(s，2H)，4.67(ddd，J＝13.1，10.0，4.5Hz，2H)，4.51(t，J＝6.0Hz，1H)，4.41(dd，J＝9.0，5.6Hz，2H)，4.35(s，2H)，4.10(dd，J＝9.8，5.7Hz，1H)，4.02(dd，J＝9.8，6.5Hz，1H)，3.52(td，J＝9.2，2.7Hz，2H)，3.45(dd，J＝13.0，6.9Hz，2H)，2.46(t，J＝7.2Hz，2H)，2.36-2.23(m，1H)，1.97-1.79(m，4H)，1.74-1.65(m，3H)，1.64-1.54(m，2H)，1.41(d，J＝7.1Hz，5H)，1.34-1.22(m，65H)，0.87(t，J＝6.7Hz，6H)。13CNMR(101MHz，吡啶)δ171.70，155.90，152.65，143.22，123.92，121.09，100.02，75.15，71.05，70.01，69.98，69.62，69.41，69.35，68.71，67.28，49.83，40.13，35.35，32.84，30.69，30.68，28.95，28.73，28.62，28.59，28.57，28.55，28.50，28.48，28.46，28.41，28.34，28.19，28.18，25.59，25.08，24.98，24.75，21.51，12.85。
HRMS：期望的[M+Na]+＝1144.8322，实测值：1444.8373。
实施例C.3：合成N-((2S,3S,4R)-1-(((2S,3R,4S,5R,6R)-6-(((6-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)己基)氧基)甲基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,4-二羟基十八烷-2-基)二十六烷酰胺(37*)
在室温下，向搅拌的鞘糖脂34*(11.4mg，12μmol)和DIPEA(5.3μL，30μmol)的CHCl3(1.2mL)和MeOH(0.4mL)溶液加入N-琥珀酰亚胺基-3-马来酰亚胺基丙酸酯(7.9mg，30μmol)。混合物在该温度搅拌2小时，浓缩。残余物通过与EtOAc(3mL)和MeOH(3mL)研磨而纯化，提供马来酰亚胺37*(8.2mg，7.4μmol)，是白色固体。
1HNMR(400MHz，CD3OD/CDCl31:3)δ6.70(s，2H)，4.86(d，J＝3.8Hz，1H)，4.16-4.10(m，1H)，3.92-3.80(m，3H)，3.79-3.72(m，3H)，3.71-3.57(m，4H)，3.46(m，4H)，3.09(t，J＝7.1Hz，2H)，2.43(t，J＝7.2Hz，2H)，2.20-2.11(m，2H)，1.66-1.15(m，82H)，0.83(t，J＝6.8Hz，6H)。
实施例C.4：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-甲基6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(2-(苄基((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)-2-((苄氧基)甲基)-4,5-二羟基四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-6-((苄氧基)甲基)-3,4-二羟基-5-(((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三羟基-6-(甲氧羰基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸酯(38*)
将四糖10*(30.0mg，0.026mmol)带入甲醇(5mL)中，用120H+(5mg)处理，将其加热至回流24小时。冷却反应混合物，过滤通过棉花塞，用MeOH(3mLX4)彻底洗涤。减压蒸发合并的有机物，获得淡黄色固体(30mg，98％)，相应于靶标化合物38*。
1HNMR(400MHz，cd3od)δ7.56-6.86(m，20H)，5.14(d，J＝9.7Hz，2H)，4.70-4.33(m，9H)，4.22(dd，J＝32.2，7.4Hz，1H)，3.99-3.72(m，11H)，3.70-3.40(m，15H)，3.39-3.32(m，2H)，3.29-3.15(m，2H)。
实施例C.5：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-甲基6-(2-氨基乙氧基)-4,5-二羟基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4-二羟基-6-(羟基甲基)-5-(((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三羟基-6-(甲氧羰基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸酯(39*)
将四糖38*(30.0mg)带入甲醇(5mL)，向其加入10％Pd/C(30mg)，于50psi搅拌24小时。将反应混合物过滤通过PTFE过滤器，用甲醇(3mLx3)和用10％甲醇水溶液(3mLx3)彻底洗涤。减压蒸发合并的滤液。1H，HSQCnmr显示仍余留一个苄基。因此，使其再经受相同反应条件，其中将～10mgPd/C加至甲醇中的物质，于60psi氢化16小时。RM过滤通过PTFE过滤器，用甲醇(3mLx3)和用10％甲醇水溶液(3mLx3)彻底洗涤。减压蒸发合并的滤液，获得白色固体(18mg，89％)，相应于靶标四糖39*。
1HNMR(600MHz，cd3od)δ4.65(d，J＝7.9Hz，1H)，4.56(d，J＝7.9Hz，1H)，4.47(d，J＝7.9Hz，1H)，4.38(d，J＝7.8Hz，1H)，4.05(dt，J＝11.5，4.7Hz，1H)，4.02-3.98(m，1H)，3.96(d，J＝9.8Hz，1H)，3.94-3.84(m，4H)，3.84-3.76(m，5H)，3.65(dd，J＝5.9，3.3Hz，2H)，3.58-3.44(m，8H)，3.41(t，J＝9.1Hz，1H)，3.38-3.32(m，3H)，3.30-3.24(m，2H)，3.17(t，J＝5.0Hz，2H)。
实施例C.5：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-甲基6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-4,5-二羟基-2-(羟基甲基)-6-(2-(6-(4-硝基苯氧基)-6-氧代己烷酰胺基)乙氧基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4-二羟基-6-(羟基甲基)-5-(((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三羟基-6-(甲氧羰基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸酯(40*)
将四糖39*(3.0mg，3.92μmol)和二(4-硝基苯基)己二酸酯(9.89mg，0.025mmol)带入吡啶(1mL)和DCM(1mL)的混合物中，搅拌5分钟，然后用5μLEt3N处理，搅拌20分钟。减压除去溶剂。用DCM(3X1mL)洗涤以除去过量己二酸酯，干燥剩余的白色固体，获得产品40*(3.9mg，98％)。1HNMR(400MHz，cd3od)δ8.31(d，J＝8.8Hz，2H)，7.39(d，J＝8.9Hz，2H)，4.65(d，J＝7.8Hz，1H)，4.54(d，J＝7.8Hz，1H)，4.47(d，J＝7.8Hz，1H)，4.31(d，J＝7.7Hz，1H)，4.04-3.74(m，13H)，3.70-3.37(m，17H)，3.28-3.19(m，3H)，2.69(t，J＝10.0Hz，2H)，2.28(t，J＝5.9Hz，2H)，1.86-1.66(m，4H)。
实施例C.6：合成4-硝基苯基6-((6-(((2R,3R,4S,5R,6S)-6-(((2S,3S,4R)-2-二十六烷酰胺基-3,4-二羟基十八烷基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)己基)氨基)-6-氧代己酸酯(41*)
在rt，将鞘糖脂34*(13.0mg，0.014mmol)和二(4-硝基苯基)己二酸酯(26.0mg，0.068mmol)带入吡啶(1mL)和DCM(1mL)的溶剂混合物，搅拌1h，然后用5μLEt3N处理，搅拌15分钟。减压除去溶剂，获得黄色固体。粗制产品通过快速色谱法用DCM和MeOH作为洗脱液纯化，获得化合物41*，是白色固体(8.5mg，52％)。
1HNMR(400MHz，cd3od)δ8.23(d，J＝8.9Hz，2H)，7.25(d，J＝8.9Hz，2H)，4.85(d，J＝3.4Hz，1H)，4.12(s，1H)，3.94-3.79(m，3H)，3.78-3.53(m，4H)，3.51-3.39(m，4H)，3.13(t，J＝6.6Hz，2H)，2.60(t，J＝6.5Hz，2H)，2.16(dt，J＝15.1，7.3Hz，4H)，1.82-1.10(m，84H)，0.82(t，J＝6.5Hz，6H)。
实施例C.7：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-甲基4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4-二羟基-6-(羟基甲基)-5-(((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三羟基-6-(甲氧羰基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(2-(6-((6-(((2R,3R,4S,5R,6S)-6-(((2S,3S,4R)-2-二十六烷酰胺基-3,4-二羟基十八烷基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)己基)氨基)-6-氧代己烷酰胺基)乙氧基)-4,5-二羟基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-3,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸酯(42*)
将四糖39*(4.6mg，6.01μmol)和鞘糖脂41*(4.8mg，3.98μmol)溶于吡啶(1mL)-DMSO(0.5mL)溶剂混合物，搅拌15分钟。加入HOBt(0.92mg，5.97μmol)和三乙胺(30μL)，继续搅拌18小时。减压干燥反应混合物，通过C18Sep-Pak柱用水-MeOH-CHCl3溶剂组合纯化，获得靶标产品42*，是白色固体(3.0mg，41％)。
1HNMR(600MHz，cd3od)δ4.86(d，J＝3.7Hz，1H)，4.52(d，J＝7.9Hz，1H)，4.49(d，J＝7.8Hz，1H)，4.40(d，J＝8.0Hz，1H)，4.26(d，J＝7.8Hz，1H)，4.18-4.08(m，1H)，3.98-3.74(m，12H)，3.74-3.36(m，21H)，3.29-3.25(m，1H)，3.20-3.07(m，2H)，2.23-2.08(m，6H)，1.66-1.08(m，92H)，0.84(t，J＝7.0Hz，6H)。MALDI-TOF：C90H165N3NaO34[M+Na]+，计算值1856，实测值1857。
实施例C.8：合成(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3,4-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-(2-(6-((6-(((2R,3R,4S,5R,6S)-6-(((2S,3S,4R)-2-二十六烷酰胺基-3,4-二羟基十八烷基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)己基)氨基)-6-氧代己烷酰胺基)乙氧基)-4,5-二羟基-2-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-3,5-二羟基四氢-2H-吡喃-2-羧酸(43*)
在rt，将缀合物42*(0.55mg，0.296mmol)带入甲醇(0.5mL)-THF(0.25mL)，用30μL新制备的0.05MNaOH水溶液处理，在rt搅拌1.5小时。反应混合物用120H+中和，然后过滤通过滤器注射器，用甲醇-CHCl3溶剂混合物(2mLX3)彻底洗涤，减压蒸发滤液，获得白色固体，将其用CHCl3洗涤并倾析两次。减压干燥剩余的白色固体，获得希望产品43*(0.41mg，77％)。
1HNMR(400MHz，cd3od)δ4.86(d，J＝3.3Hz，1H)，4.60(d，J＝8.0Hz，1H)，4.49(d，J＝8.0Hz，1H)，4.41(d，J＝7.9Hz，1H)，4.28(d，J＝7.9Hz，1H)，4.19-4.11(m，1H)，3.96-3.76(m，9H)，3.73-3.37(m，19H)，3.14(d，J＝6.6Hz，2H)，2.28-2.09(m，6H)，1.79-1.06(m，92H)，0.85(t，J＝6.7Hz，6H)。MALDI-TOF：C88H160N3NaO34[M+Na-2H]+，计算值1826，实测值1827。
D.生物学评价
实施例D.1：合成脂质体(参见图1)
脂质和贮藏的混合。脂质体前体的溶液制备如下：将缀合物43*(0.2mg，0.111μmol)，1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)(3.36mg，4.25μmol)和胆固醇(1.1mg，2.85μmol)混合于2.2mL的1:4氯仿:甲醇溶液中。然后，45倍剂量的该储备溶液均匀分配在5个5cc体积的玻璃小瓶中，将各溶液真空蒸发为玻璃上的薄膜，并在氩下、在-20℃储存。各小瓶意在包含9倍剂量的脂质体配制剂，通过将脂质体在900μL磷酸缓冲盐水(PBS)中水化而重构，从而每1剂是100μL的溶液。1剂量＝4.4μg(2.5nmol)的缀合物43*，其等于1.7μg的SP3四糖抗原(不包括连接体)。
脂质膜的再水化。在各次免疫的前1天，将1个冷冻小瓶解冻。脂质膜再水化如下：将900μL无菌磷酸缓冲盐水(PBS)加入玻璃贮藏小瓶，在60℃(DSPC的Tm＝55℃)搅拌1个30分钟(用旋蒸仪来搅动烧瓶和热浴来控制温度)，产生包括大多层囊泡(LMV)的淡乳白色溶液。
挤出脂质形成经定义的脂质体。在脂质膜再水化之后，将所得乳白色溶液分散在玻璃注射器中，通过预热(至60℃)脂质微型挤出机系统来缓慢挤出，所述系统配有在两个注射器之间的适当轨道蚀刻(track-etch)聚碳酸酯膜(400μm)。各溶液通过膜最少31次。
微型挤出机：AvantiPolarLipids，inc。
http://avantilipids.com/index.php？option＝com_content&view＝article&id＝185&Itemid＝193
膜：Whatman，Nucleopore，产品#800282(0.4μm)。
脂质体分析。将脂质体溶液的等分试样加载入塑料UV池中，并用动态光散射(Malvern设备，ZetasizerμV)分析。分析确认各脂质体配制剂的尺寸和群体分布。观察到具有观察直径200至250nm的均匀群体。
实施例D.2：合成CRM197缀合物(44*)
将溶于100μL无水二甲亚砜(DMSO)中的四糖11*(2mg，2.8nmol)滴加至搅拌的10-倍摩尔浓度过量的二-N-羟基-琥珀酰亚胺基己二酸酯的200μL无水DMSO/10μL三乙胺(Et3N)溶液，在室温下反应2小时。然后，加入0.4ml100mMNa-磷酸缓冲剂，pH7.4，用氯仿萃取两次未反应的二-N-羟基-琥珀酰亚胺基己二酸酯。回收水相，与溶于1mL100mMNa-磷酸缓冲剂(pH7.4)的1mgCRM197(PfénexInc.，SanDiego，CA，USA)在室温下反应12小时。将反应产品脱盐，用10kDa离心过滤器(Millipore)浓缩。蛋白质浓度用MicroBCA蛋白质测试试剂盒(Pierce)根据生产商推荐来测定。
SDS-PAGE
将样品溶于缓冲剂(0.125MTris，20％(v/v)甘油，4％(w/v)SDS，5％(v/v)β-巯基乙醇，溴酚蓝色，pH6.8)，在95℃沸腾10分钟。在10％聚丙烯酰胺凝胶中操作样品，并用0.025％CoomassieBrilliant蓝色R-250水溶液染色，所述水溶液含有40％(v/v)甲醇和7％(v/v)乙酸。缀合物44*的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征揭示，与未缀合的CRM197载体蛋白质相比，复合糖向更高质量的期望位移和条带展宽(参见图2a)。
MALDI-TOF质谱
CRM197和SP3四糖CRM197缀合物44*的MALDI-TOF质谱用AutoflexSpeed设备(BrukerDaltonics，不莱梅，德国)获得。质谱以正线性模式操作。在m/z范围30,000至210,000获得谱图，用随设备提供的FlexAnalysis软件分析数据。2’,4’-二羟基苯乙酮(DHAP)用作基质，样品用干微滴技术点样。MALDI-TOF-MS测量揭示的是，缀合物44*展示～6.5个SP3四糖分子/1个CRM197分子的平均抗原负载(参见图2b)。
实施例D.3：免疫法
用实施例D.1获得的SP3四糖脂质体(1.7μgSP3四糖抗原/小鼠)或者用实施例D.2制备的SP3四糖-CRM197缀合物44*(相应于1.7μgSP3四糖抗原/小鼠)和明矾佐剂来经皮下(s.c.)免疫两组(各6只小鼠)六至八周龄雌性C57BL/6小鼠(购自CharlesRiver，德国)。在免疫之前，将缀合物44*与Alhydrogel(Brenntag)混合(1μLAlhydrogel/μg蛋白质)，在4℃温育至少12小时。以1周的间隔经由尾部静脉收集血液。通过离心将血清与红细胞分离。
实施例D.4：制备微阵列
将携带胺连接体的低聚糖或蛋白质固定化在CodeLinkN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯活化的玻璃载玻片(SurModicsInc.，EdenPrairie，MN，USA)上，其配有压电点样装置(S3；Scienion，柏林，德国)。将微阵列载玻片在潮湿室中温育以完成24小时的反应，在50℃用50mM氨基乙醇溶液(pH9)淬灭1小时，用去离子水洗涤3次，干燥储存直至使用。
实施例D.5：微阵列结合测试
在室温下将载玻片用磷酸缓冲盐水(PBS)(w/v)中的1％牛血清白蛋白(BSA)封闭1小时，用PBS洗涤3次，离心干燥(300xg，5分钟)。将FlexWell64(GraceBio-Labs，Bend，OR，USA)栅极应用至微阵列载玻片。将所得的64个孔用于64个单独的实验。在室温下在潮湿室中，将载玻片用PBS(w/v)中的1％BSA稀释1:200的血清温育1小时，用PBS中的0.1％吐温-20(v/v)洗涤3次，离心干燥(300xg，5分钟)。在室温下在潮湿室中，将载玻片用在1％BSA/PBS(w/v)中稀释的荧光标记二抗温育1小时，用0.1％吐温-20/PBS(v/v)洗涤3次，用去离子水冲洗1次，离心干燥(300xg，5分钟)，随后用GenePix4300A微阵列扫描仪(MolecularDevices，Sunnyvale，CA，USA)扫描。图像分析用GenePixPro7软件进行(MolecularDevices)。调节光电倍增管(PMT)电压使得扫描不包括饱和信号。将扣除背景的平均荧光强度(MFI)值输出至MicrosoftExcel以进行后续分析。所用二抗是：稀释1:400的Alexa594山羊抗-小鼠IgG1(γ1)(LifeTechnologies)，稀释1:200的Alexa647山羊抗-小鼠IgG2a(γ2a)(LifeTechnologies)，稀释1:200的Alexa488山羊抗-小鼠IgG3(γ3)(LifeTechnologies)。
通过聚糖微阵列筛选在第0、1和2周取回的血清样品来评价主要免疫应答。SP3低聚糖、天然SP3多糖以及肺炎链球菌细胞壁多糖(CWPS)作为阴性对照打印在NHS酯-活化的微阵列载玻片上(参见图3b)。用SP3脂质体免疫的1只小鼠的代表性微阵列扫描示于图3c，其指出对免疫原即SP3四糖以及较小子结构和天然SP3多糖引发IgG3抗体。在任何小鼠中均未检测到对CWPS的抗体，这展示对SP3-相关性抗原的抗体应答的特异性。与天然SP3多糖的交叉反应性给出的初步指示是，抗体能够结合至肺炎链球菌表面以促进保护。在用含缀合物43*的SP3脂质体免疫之后，在全部免疫小鼠中检测到对SP3四糖以及对天然SP3多糖的抗体IgG1、IgG2a和IgG3亚型(图3d、3e、3f显示2组6只小鼠的平均数据)。IgG2a和IgG3抗体仅在用含缀合物43*的SP3脂质体免疫的小鼠中检测到，而并未在用SP3-CRM197缀合物44*免疫的那些当中检测到。SP3-CRM197缀合物44*仅在免疫之后2周引发IgG1抗体。在用含缀合物43*的SP3脂质体免疫之后的抗体应答更快且在免疫之后1周就已可检测。
这些数据展示配制为脂质体的缀合物43*的免疫原性。在动力学和IgG2a和IgG3产生方面，小鼠中的血清IgG应答优于SP3-CRM197缀合物44*。同种型交换指出T细胞依赖性的抗体应答。在用配制为脂质体的缀合物43*首次免疫之后1周，就可检测血清IgG抗体。与天然SP3多糖的抗体交叉反应指出这些抗体结合至肺炎链球菌并赋予对肺炎球菌感染的防范的能力。

Claims (13)

1.通式(I)的缀合物
其中
A是
B是
R1选自
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R3和R4选自-H和-OH并且不能同时是-H或-OH；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
Z代表-O-CH2-，-S-CH2-，-CH2-CH2-，-O-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-，或-CH2-CH＝CH-；
X4代表：-H，-iPr，-tBu，-sBu，
Y4选自：-H，-iPr，-tBu，-Ph，sBu，
X1，X2，X3，Y1，Y2，Y3相互独立地选自：
-CH2-，-CH(OH)-，-CH(CH3)-，-CH(C2H5)-，-CH(C3H7)-，-CH(C4H9)-,
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L代表-L1-NH-L2-NH-L3-；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″和L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-，-CR9R10-，-CR11R12-，-CR13R14-，-CR15R16-，-CR17R18-，-CR19R20-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-CH2-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-，-邻-C6H4-，-间-C6H4-，-对-C6H4-，-CH2-S-CH2-，-CH2-O-CH2-；
L2选自：
-C(O)-，-E-，-C(O)-NH-NH-C(O)-，
E选自
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-C3H7，-C4H9，-C5H11，-Ph，-F，-Cl，-Br，-I，-OCH3，-OCF3和-CF3；
R9至R20相互独立地代表-H，-OCH3，-OC2H5，-OC3H7,环-C3H5，环-C4H7，环-C5H9，环-C6H11，环-C7H13，环-C8H15,-Ph，-CH2-Ph，-CPh3，-CH3，-C2H5，-C3H7，-CH(CH3)2，-C4H9,-CH2-CH(CH3)2，-CH(CH3)-C2H5，-C(CH3)3，-C5H11，-CH(CH3)-C3H7,-CH2-CH(CH3)-C2H5，-CH(CH3)-CH(CH3)2，-C(CH3)2-C2H5，-CH2-C(CH3)3,-CH(C2H5)2，-C2H4-CH(CH3)2，-C6H13，-C3H6-CH(CH3)2,-C2H4-CH(CH3)-C2H5，-CH(CH3)-C4H9，-CH2-CH(CH3)-C3H7,-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)2，-CH(CH3)-CH(CH3)-C2H5，-CH2-CH(CH3)-CH(CH3)2,-CH2-C(CH3)2-C2H5，-C(CH3)2-C3H7，-C(CH3)2-CH(CH3)2，-C2H4-C(CH3)3,-CH(CH3)-C(CH3)3，-C7H15，-C8H17，-C6H4-OCH3，-CH2-CH2-OCH3,-CH2-OCH3，-CH2-C6H4-OCH3；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数；
m，n，o和p相互独立地代表1至10的整数；
和上述化合物的对映体，立体异构形式，对映体的混合物，端基异构体，非对映体，非对映体的混合物，互变异构体，水合物，溶剂化物和外消旋体及其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1的缀合物，其具有通式(I-A)
其中
A是
B是
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R3和R4选自-H和-OH并且不能同时是-H或-OH；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
Z代表-O-CH2-，-S-CH2-或-CH2-CH2-；
X4代表：-H或
Y4代表：-H或-Ph；
X1，X2，X3，Y1，Y2，Y3相互独立地选自：-CH2-，
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1，n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L代表-L1-NH-L2-NH-L3-；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″，L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-CH2-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-；
L2选自：-C(O)-，
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-F，-Cl，-Br，-OCH3和-CF3；
n和o相互独立地代表选自1、2、3、4、5和6的整数；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数。
3.根据权利要求1或2的缀合物，其具有通式(I-B)
其中
A是
B是
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R3和R4选自-H和-OH并且不能同时是-H或-OH；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
X4代表：-H或
Y4代表：-H或-Ph；
X1，X2，X3，Y1，Y2和Y3相互独立地选自：
-CH2-，和
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1和n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L代表-L1-NH-L2-NH-L3-；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″，L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-；
L2选自：-C(O)-，
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-F，-Cl，-Br，-OCH3和-CF3；
n代表选自1、2、3、4、5和6的整数；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数。
4.根据权利要求1–3中任一项的缀合物，其中R3是-H和R4是-OH。
5.根据权利要求1的缀合物，其具有通式(I-C)
其中
R2是-(X1)p1-(X2)p2-(X3)p3-X4；
R5是-(Y1)m1-(Y2)m2-(Y3)m3-Y4；
X4代表：-H，-iPr，-tBu或-sBu，
Y4选自：-H，-iPr，-tBu，-Ph，sBu；
X1，X2，X3，Y1，Y2，Y3相互独立地选自：
-CH2-，-CH(OH)-，-CH(CH3)-，-CH(C2H5)-，-CH(C3H7)-，-CH(C4H9)-,
n2是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
n1，n3相互独立地代表选自0和1的整数；
L1代表-L1′-L1″-L1″′-或-L1′-L1″′-或-L1′-；和
L3代表-L3′-L3″-L3″′-或-L3′-L3″′-或-L3′-；和
L1′，L1″，L1″′，L3′，L3″，L3″′相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-，-C6H12-，-C7H14-，-C8H16-，-C9H18-，-C10H20-，-CR9R10-，-CR11R12-，-CR13R14-，-CR15R16-，-CR17R18-，-CR19R20-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-CH2-，-(CH2-CH2-O)o-CH2-，-邻-C6H4-，-间-C6H4-，-对-C6H4-，-CH2-S-CH2-，-CH2-O-CH2-；
R6，R7和R8相互独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-F，-Cl，-Br，-OCH3和-CF3；
R9至R20相互独立地代表-H，-CH3，-C2H5，-C3H7；
o代表选自1、2、3、4、5和6的整数；
n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的整数；
p1，p2，p3，m1，m2和m3相互独立地代表0至10的整数。
6.根据权利要求1–5中任一项的缀合物，其中R2选自-(CH2)24-CH3，-(CH2)23-CH3，-(CH2)22-CH3，-(CH2)21-CH3，-(CH2)20-CH3，-(CH2)19-CH3，-(CH2)18-CH3，-(CH2)17-CH3，-(CH2)16-CH3，-(CH2)15-CH3，-(CH2)14-CH3，-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3,
和R6选自：-H，-CH3，-F，-Cl，-OCH3和-CF3。
7.根据权利要求1–6中任一项的缀合物，其中R5选自-(CH2)13-CH3，-(CH2)12-CH3，-(CH2)11-CH3，-(CH2)10-CH3，-(CH2)9-CH3，-(CH2)8-CH3，-(CH2)7-CH3，-(CH2)6-CH3，-(CH2)5-CH3，-(CH2)4-CH3，-(CH2)2-Ph，-(CH2)3-Ph，-(CH2)4-Ph，-(CH2)5-Ph，-(CH2)6-Ph，-(CH2)7-Ph，-(CH2)8-Ph，-(CH2)9-Ph。
8.根据权利要求1–7中任一项的缀合物，其中-L1-和-L3-相互独立地选自：-CH2-，-C2H4-，-C3H6-，-C4H8-，-C5H10-和-C6H12-。
9.根据权利要求1–8中任一项的缀合物，用作医药中的药学活性试剂。
10.根据权利要求1–8中任一项的缀合物，用于提高人和/或动物宿主中的保护性免疫应答。
11.根据权利要求1–8中任一项的缀合物，用于预防和/或治疗与肺炎链球菌3型有关的疾病。
12.根据权利要求11的用途的缀合物，其中所述与肺炎链球菌3型有关的疾病选自肺炎，脑膜炎，中耳炎，菌血症和慢性支气管炎的急性恶化，鼻窦炎，关节炎和结膜炎。
13.药物组合物，包含根据前述权利要求中任一项的缀合物，以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。
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