CN105624288A - 毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物及制备方法和系统 - Google Patents

毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物及制备方法和系统 Download PDF

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Abstract

本发明公开了毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物及制备方法及其系统。本发明提供的制备方法及系统包括六步步骤：样本DNA的获取；联合基因型风险等级的建立；个体基因检测获得对应基因型；根据检测结果所属的风险等级确定组合物配方；根据配方制作相应的组合物；样本使用组合物后获得减肥效果。本发明可根据肥胖个体的联合基因型制备针对性的减肥组合物，具有更好的减肥效果；采用联合检测技术通过一次检测程序获得个体的联合基因型；采用个体化干预组合物系统，实现了从获得样本DNA到样本获得减肥效果的一体化过程；本发明制备的个体化干预组合物具有良好的效果。

Description

毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物及制备方法和系统
技术领域
本发明涉及一种肥胖基因个体化干预的组合物，尤其涉及一种毒素堆积肥胖基因个体化干预配合物的制备方法及其系统落。
背景技术
肥胖作为一种疾病，正严重威胁人类的健康。世界卫生组织专家委员会提出以体质指数（Body-MassIndex，BMI）作为身体超重或肥胖的标准，即BMI在25~28之间为超重，28~32为肥胖，高于32为非常肥胖。肥胖症是一种与遗传因素及生活方式密切相关的慢性疾病，它会引发血脂升高，容易造成脂肪肝、动脉血管病变、心脏病、糖尿病，肥胖的儿童还会引发性功能发育不良并导致成人期各种疾病发病率和死亡率上升。
目前肥胖症的临床治疗方法主要是饮食和运动疗法，但存在着碳水化合物、脂肪以及蛋白质摄入量控制“一刀切”和盲目采用减肥药物的非个体化治疗方式。由于至少有40%躯体脂肪量的差异是由遗传因素引起的，其中就包括了排毒相关基因多样性造成的肥胖，而由此造成的肥胖就定义为毒素堆积型肥胖。故而遗传体质不同的人在患肥胖症时应采取不同的减肥策略，利用现代科学研究成果，开发一项基于分子遗传基础的体重管理分子检测产品并制备相应的减肥食品以提供个性化的体重管理建议，具有较强的社会意义和市场前景。经国内外文献研究证实，与毒素堆积型肥胖相关的基因主要与谷胱甘肽S转移酶相关。
谷胱甘肽S转移酶(GST)是一种重要的Ⅱ相药物代谢酶，可与Ⅰ相药物代谢酶一起催化药物形成高水溶性终产物，参与解毒过程。所以，GST不仅能够抵御内源性和外源性亲电子物质的损害，在抗肿瘤过程中发挥重要作用，而且还会对由毒素堆积造成的肥胖和相关基因型肥胖者产生不同的减肥效果。目前广泛研究的GSTs的4种基因，即GSTM1、GSTM3、GSTT1 和GSTP1具有多态性，可引起酶活性的改变，对致癌物的代谢能力不同，高风险基因者会导致更高的肿瘤易感率和毒素堆积型肥胖。
GSTM1 (glutathione S-transferase M1)，即谷胱甘肽硫转移酶M1，是一类负责多种致癌物质代谢的酶类家族GSTs中的一员。GSTM1属于其中的MU类，其功能是使各类亲电子化合物，如致癌物质、药物、环境毒素、氧化链产物等，与谷胱甘肽结合并进入下一步的代谢步骤。GSTM1具有的一种多态型是null基因型，即丢失GSTM1基因。国内外的众多研究表明GSTM1基因的这种多态现象与很多类型的癌症发病相关。GSTM1基因的缺陷会大大提高罹患各种癌症的风险度。赵君慧等人探讨了青海地区藏族人群谷胱甘肽-S-转移酶GSTM1基因多态性与原发性肝癌(PHC)易感性的关系，结果显示GSTM1 null 空白基因型在病例组和对照组的分布频率分别为60.8％和44.1％，组间差异有统计学意义(x2=5.680,P=0.017)；携带GSTM1空白基因型者患病风险是携带GSTM1非空白基因型者的1.963倍(95％CI为1.124～3.428)。黄雪等人探讨了代谢酶基因GSTM1多态性与广西人群胃癌遗传易感性之间的相关性，结果显示胃癌组GSTM1(-)基因型频率(54.5％)显著高于对照组(39.1％)(x2=6.140,P=0.013)；携带GSTM1(-)基因型的个体患胃癌的风险是携带GSTM1(+)基因型个体的2.13倍(95％CI=1.079～1.831,P=0.013)。与同时携带GSTM1(+)和CYP 1A1 MSP1 m1/m1的个体比较，同时携带GSTM1(-)和CYP 1A1 MSP1突变m2基因型的个体患胃癌的OR为2.327(95％CI=1.110～4.280)，差异具有统计学意义(P=0.030)。结果说明，GSTM1(-)基因型增加广西人群患胃癌的风险，GSTM1(-)基因型显著增加广西人群的胃癌易感性。2015年Liu X等人探讨了GSTM1多态性与喉癌的关系，结果显示GSTM1(-)基因型增加了中国人群患胃癌的风险 (OR= 1.34; 95% CI, 1.09-1.63)。2012年Malakar M等人探讨了吸烟和GSTM1对印度人群肺癌的影响，结果显示GSTM1基因多态性与患肺癌不直接相关，但是吸烟者并且携带有GSTM1(-)基因型显著增加了患肺癌的风险。2013年Fortes C等研究了饮用咖啡对于GSTM1和GSTT1基因多态性人群的不同影响，结果显示每天喝2杯或者2倍以上的黑咖啡与预防皮肤黑色素瘤有着显著相关性 (OR 0.46; 95 % CI 0.31-0.68)，尤其是对于GSTM1和GSTT1基因都携带的人群，咖啡的预防效果更好。
细胞色素P450酶（CYP450）是细胞内重要的Ⅰ相代谢酶，在致癌物的活化和解毒过程中起着重要的作用。P4501A1(CYP1A1)是活化多环芳烃类致癌物的主要酶类。CYP1A1作为一种微神经元体细胞酶与一些致癌物质的生物激活有关，例如benzo[a]pyrene。同时，CYP1A1易于被TCDD和多环的芳香族化合物所诱变, 包括3-甲基胆蒽等实验室用致癌物质。目前的动物实验表明，CYP1A1的表达与芳基碳氢化合物受体（AhR）和Arnt（AhR NuclearTranslocator）的激动剂，以及USF1（Upstream Stimulatory Factor）的拮抗剂有关。同时，CYP1A1通过C2羟基化作用参与雌激素的代谢活动。
GSTT1 (GLUTATHIONE S-TRANSFERASE, THETA-1)，即谷胱甘肽硫转移酶T1，是一类负责多种致癌物质代谢的酶类家族GSTs中的一员。GSTT1属于其中的THETA类，其功能是使各类亲电子化合物，如致癌物质、药物、环境毒素、氧化链产物等等，与谷胱甘肽结合并进入下一步的代谢步骤。GSTT，包括2个不同的亚家族，即GSTT1和GSTT2，编码基因位于22号染色体上。编码这2个亚家族蛋白的基因均存在多态性，且包括一个无效表型GSTT1(-)基因型，表现为催化活性降低且与头颈部肿瘤和口腔肿瘤发病风险增加有关。慢性髓细胞性白血病的发病率亦与GSTT1存在较强的相关性。GSTT1(-)基因型在高加索人中的发生频率约20%，在亚洲人中更为常见，发生频率为47%~64%。2014年刘宁等系统评价中国人群谷胱甘肽转移酶T1（GSTT1）基因多态性与胃癌易感性的关系，结果显示，CSTT1 基因缺失型者胃癌的危险性较CSTT1 基因存在型者明显增高，固定效应模型和随机效应模型的合并OR 值分别为0.84（95% CI=0.76~0.93）与0.83（95% CI=0.71~0.96）。2013年刘磊等探讨了GSTT1基因多态性与宁夏汉族食管癌易感性的关系，结果显示GSTT1(-)基因型（P<0.05）在食管癌组及对照组间的分布频率差异存在统计学显著性，结果说明GSTT1(-)基因型可能与宁夏汉族食管癌的发生相关。2015年Liu RR等人运用大数据分析了GSTT1基因多态性与鼻炎癌之间的关系，结果显示鼻咽癌与GSTT1(-)基因型显著相关 (OR=1.38, 95% CI: 1.18-1.62; P<0.001)，并且在中国人群中相关度更高(OR=1.41, 95% CI: 0.97-2.04; P=0.07)。
GSTP1，即GST的Pi家族，由位于11号染色体上的长约3kb的单基因编码，目前已发现4种有活性且功能各异的多态性，其中rs1138272和rs1695是研究最为广泛和深入的。GSTP1的基因型与化疗反应和肿瘤易感性的差异有关，在包括卵巢、乳腺、结肠、胰腺和淋巴瘤等在内的多种肿瘤中均过量表达。Dang等研究表明，GSTP1对人类结肠癌细胞的生存和增殖非常重要，在防止细胞周期停滞、保护生长受限条件下的氧化反应中发挥重要作用。虽然GSTP1在大量实体肿瘤中过量表达，但仍有一个例外，即在前列腺癌中，GSTP1的表达缺失或减少与肿瘤的发生相关。GSTP1在正常的前列腺组织中广泛表达，但在恶性细胞中却检测不到。
GSTP1rs1138272 C341T，导致氨基酸改变Ala(113)Val。GSTP1 rs1695引起GSTP1基因编码的蛋白第105位氨基酸由Ile变为Val，目前研究表明这种氨基酸的变化，影响到了GSTP1多肽晶体结构中，亲电子结合位点氨基酸的空间距离和结构。国内外的众多研究表明GSTP1基因的这2种多态现象与很多类型的癌症发病相关。2013年刘磊研究了GSTP1基因多态性与宁夏汉族食管癌易感性的关系，结果显示GSTP1 GG联合基因型(P=0.000<0.05,OR=7.327,95%CI=2.301-22.764)在食管癌组及对照组间的分布频率差异存在统计学显著性，结果表明GSTP1 GG基因型的个体患食管癌的风险较高。2013年吕晓丽等探讨了谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)Ile105Val基因多态性与内蒙古地区汉族人群肺癌易感性关系，携带GSTP1 Ile105Val突变杂合型和纯合型的个体患肺癌的风险均降低(OR值分别为0.970和0.602)；CYP1A1 Exon7和GSTP1 Ile105Val基因在肺癌易感性方面无协同作用；GSTP1Ile105Val与吸烟无协同作用。这一结果表明GSTP1 Ile105Val突变基因型可降低肺癌易感性。 此外，GSTP1多态性会对相同饮食干预的人起到不同的作用。Wang J等研究了GSTP1、高温烹煮红肉与得直肠癌的关系，结果显示GSTP1 Ile105Val多态性、高温烹煮方法与直肠癌具有显著相关性(p = 0.0035)，说明烹煮时间过长的红色肉对于GSTP1高风险人群会产生更不利的影响。
近来的许多研究都证实了利用天然食物、植物等及其提取物可以有助于排毒、通便、瘦身。2015年王震等人探讨荷叶、绞股蓝及紫苏叶提取物制成复方制的预防性减肥降脂作用，结果显示复方制剂不同剂量均对便秘、肥胖症、高血脂症具有良好的预防和治疗的作用，并且剂量越大效果越好。2014年瑞典学者研究了菠菜提取物对于减肥效果的影响，结果显示多摄取菠菜能有效降低食欲,有利于减肥，原因是菠菜里的天然化合物类囊体（thylakoid），可以让大脑释放让人感到饱腹感的荷尔蒙，从而降低饥饿的不适感，以致于可以有助于减肥。2013年黄麟嫒等研究了洋葱对不同便秘型肠运动的影响，结果显示在燥结型便秘的情况下，洋葱提取物可提高黑便粒数、粪便总粒数、粪便重量和小肠推进率; 在脾虚型便秘的情况下，洋葱提取物可以提高排便潜伏期、粪便总粒数及粪便重量，结论洋葱具有通便排毒作用，但对不同类型便秘影响不同; 洋葱的通便作用可能与肠管上的乙酰胆碱受体有关。2013年许海生等研究了苦丁茶提取物对机体通便作用的影响，给予三个剂量苦丁茶提取物7天，观察苦丁茶提取物对机体质量、小肠推进运动。结果显示苦丁茶提取物高、中剂量组能促进便秘人体的小肠推进率、缩短首次排便时间、增加6 h 内的排便总数，表明苦丁茶提取物具有能促进人体的排便的作用。2012年等检测了小麦提取物的组成成分并且评价了其抗便秘及抗氧化作用，结果显示小麦戊聚糖提取物具有良好的润肠通便效果，并且润肠通便效果与受试物剂量呈一定的剂量效应关系。此外，小麦戊聚糖对机体抗氧化功能有一定的改善作用，表现为肝脏抗氧化力提高、脂质过氧化水平下降以及抗氧化酶的火星升高，并且结果都具有统计学差异（P<0.05)。2012年曾珂等研究了苦瓜提取物对减肥作用和可能机制，结果苦瓜提取物能够在不影响摄食量的基础上抑制体质量增长速度,降低体质量和附睾下脂肪量,升高血清中HDL水平,降低血清中AST水平,抑制肝细胞脂肪变性；而对Lee＇s指数、肠系膜和肾周脂肪量、血清中LDL和ALT水平无明显影响。结论说明苦瓜提取物具有一定减肥和保肝作用,该作用可能与升高血清HDL水平和降低血清AST水平以及抑制肝细胞脂肪变性有关。美国印地安那州Purdue大学进行了一项研究，该研究分两组，每组20名肥胖妇女，其中一组每天食用两次杏仁，并且每天摄入热量300卡路里，试验时间为10周，另一组则不食用杏仁。结果表明，食用杏仁的一组成员体重并没有增加，另一组体重增加明显。研究人员称，食用杏仁以后，人通常会有一种饱胀感，对控制食量有一定帮助，从而达到控制肥胖病的目的。
薏米是禾本科植物薏苡的种仁。薏苡属多年生植物，茎直立，叶披针形，它的子实卵形，白色或灰白色。薏米的营养价值很高，被誉为“世界禾本科植物之王”，在欧洲，它被称为“生命健康之友”。薏米治病的成份薏苡仁酯，不仅具有滋补作用，而且还是一种抗癌剂，能抑制艾氏腹水癌细胞，可用于胃癌及子宫颈癌。薏米的根中所含的薏米醇，除具有上述的薏苡仁酯的作用外，还有降压、利尿、解热和驱蛔虫的效果，适用于高血压、尿路结石、尿路感染、蛔虫病等。
绿豆又名青小豆，因其颜色青绿而得名，在我国已有两千余年的栽培史。由于它营养丰富，用途较多，李时珍称其为“菜中佳品”。绿豆具有粮食、蔬菜、绿肥和医药等用途，种子和茎被广泛食用，是我国人民的传统豆类食物。《中国药典》记录绿豆具有清热；消暑；利水；解毒的作用。可帮助体内毒物的排泄，促进机体的正常代谢。绿豆可解酒毒、野菌毒、砒霜毒、有机磷农药毒、铅毒、丹石毒、鼠药毒等。
糯米又叫江米，是大米的一种，常被用来包粽子或熬粥。中医认为，其味甘、性温，能够补养人体正气，吃了后会周身发热，起到御寒、滋补的作用，最适合在冬天食用。糯米的主要功能是温补脾胃。所以一些脾胃气虚、常常腹泻的人吃了，能起到很好的治疗效果。此外，它还能够缓解气虚所导致的盗汗、妊娠后腰腹坠胀、劳动损伤后气短乏力等症状。中医典籍《本草经疏论》里对糯米的养生保健作用做了充分的说明，说糯米是“补脾胃、益肺气之谷。脾胃得利，则中（指人体胃部）自温，力便亦坚实；温能养气，气顺则身自多热，脾肺虚寒者宜之。”
燕麦每天摄取3~4克β-葡聚糖，可降低“坏胆固醇”8%，其心脏病发作危险可降低10%~12%。100克燕麦，至少可摄取到6~8克β-葡聚糖。所以，燕麦当仁不让地成了人体获取β-葡聚糖的最佳来源。
杏仁取代其膳食中的低营养密度食品，达到降低血液胆固醇并保持心脏健康。杏仁等坚果含有丰富的Ω-3脂肪酸，能让人更长时间地保持饱肚感。普度大学博士RichardMattes试验得出结论，每天食用大杏仁的妇女不会轻易感到饥饿，因此很自然地在当天的其他时间减少热量摄入。结果表明，大杏仁不仅营养丰富，还产生饱腹感，是其他缺少营养并缺少填充感的食品。
葛根粉，也称葛粉，葛根淀粉。葛粉香嫩滑爽，美味营养，男女老少皆宜，长期食用，无任何毒副作用，有益身体健康，被誉为“长寿粉”。葛根总黄酮和葛根素能改善心肌的氧代谢，对心肌代谢产生有益作用，同时能扩张血管，改善微循环，降低血管阻力，使血流量增加，故可用防治心肌缺血，心肌梗死，心律失常，高血压，动脉硬化等病症。葛根素有明显的降低血糖的作用，葛根所含的黄酮类化合物有降血脂作用，能降低血清胆固醇，降低油三酯，用于治疗高血糖，高血脂病症，有显著疗效。葛根能解乙醇毒性，并能解酒后迅速排泄。可解酒后头痛脑涨，脸红等症状。缓解酒精在胃内吸收，保护胃粘膜。
山药肉质细嫩，含有极丰富的营养保健物质。《神农本草经》谓之“主健中补虚、除寒热邪气、补中益气力、长肌肉、久服耳目聪明”《日华子本草》说其“助五脏、活筋骨、长志安神、主治泄精健忘”；《本草纲目》认为山药能“益肾气、健脾胃、止泻痢、化瘫涎、润毛皮”。近些年来的研究表明，山药具有诱导产生干扰素，增强人体免疫功能的作用。其所含胆碱和卵磷脂有助于提高人的记忆力，常食之可健身强体、延缓衰老，是人们所喜爱的保健佳品。
黑木耳是一种营养丰富的食用菌，又是我国传统的保健食品和出口商品。它的别名很多，因生长于腐木之上，其形似人的耳朵，故名木耳。黑木耳不但肉质细腻，脆滑爽口而且营养丰富，含有蛋白质、脂肪、碳水化合物和多种维生素与无机盐，黑木耳所含的营养物质，有的明显高于其它食物，它的蛋白质的含量相当于肉类，它的维生素B2含量超过米、面、蔬菜和肉类，铁的含量比肉类高100倍，钙的含量是肉类的30-70倍，它还含有磷和硫等构成人体细胞原生质的主要成份。由于黑木耳所含各种营养完善而丰富，被誉为“素中之荤”。黑木耳具有一定吸附能力；对人体有清涤胃肠和消化纤维素的作用。《本草纲目》中记载：“木耳生于朽木之上，性甘干，主治益气不饥，轻身强志”，并有治疗痔疮、血痢下血等作用。据国外报道，黑木耳能减低血液凝块，缓和冠状动脉粥样硬化，对预防和治疗冠心病有特殊的效益。黑木耳所含的多糖类物质，具有一定抗肿瘤作用，据报道对小白鼠肉瘤180的抑制率为42.6%。我国民间也有用黑木耳加水煎服，来治疗妇女子宫颈癌和阴道癌。研究发现，黑木耳具有化解体内结石的功效。这主要是因为黑木耳中所含有的发酵素和植物碱，能够有效的促进消化道和泌尿道内各种腺体的分泌，并催化体内结石、润滑管道、促使结石排出。此外，黑木耳中所含有的多种矿物质元素还能使体内的各种结石产生化学反应，剥脱，瓦解，不断脱屑缩小，然后再经管道排出。另外，黑木耳中还含有较多量的具有清洁血液和解毒功效的生物化学物质，有利于人体健康。
金针菇学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、构菌、朴菇、冬菇、朴菰、冻菌、金菇、智力菇等，是一种菌藻地衣类，具有很高的药用食疗作用。金针菇氨基酸的含量非常丰富，高于一般菇类，尤其是赖氨酸的含量特别高，赖氨酸具有促进儿童智力发育的功能。金针菇干品中含蛋白质8.87%，碳水化合物60.2%，粗纤维达7.4%，经常食用可防治溃疡病。 金针菇中还含有一种叫朴菇素的物质，有增强机体对癌细胞的抗御能力，常食金针菇还能降胆固醇，预防肝脏疾病和肠胃道溃疡，增强机体正气，防病健身。
胡萝卜是一种质脆味美、营养丰富的家常蔬菜。中医认为它可以补中气、健胃消食、壮元阳、安五脏，治疗消化不良、久痢、咳嗽、夜盲症等有较好疗效，故被誉为“东方小人参”。美国科学家研究证实每天吃两根胡萝卜，可使血中胆固醇降低10%～20%；每天吃三根胡萝卜，有助于预防心脏疾病和肿瘤。中医认为胡萝卜味甘，性平，有健脾和胃、补肝明目、清热解毒、壮阳补肾、透疹、降气止咳等功效，可用于肠胃不适、便秘、夜盲症（维生素A的作用）、性功能低下、麻疹、百日咳、小儿营养不良等症状。胡萝卜富含维生素，并有轻微而持续发汗的作用，可刺激皮肤的新陈代谢，增进血液循环，从而使皮肤细嫩光滑，肤色红润，对美容健肤有独到的作用。此外，还是有效的解毒食物，与体内的汞离子结合之后，能有效降低血液中汞离子的浓度，加速体内汞离子的排出。Gervasubu G等人在2010年研究了西班牙人的饮食、吸烟习惯与肺癌的关系，结果显示，在多摄入富含胡萝卜素的红色和黄色蔬菜的情况下，携带有GSTM1基因型和GSTT1基因型的人比起GSTM1(-)基因型和GSTT1（-）基因型的人得肺癌的机率更低，说明GSTM1基因型和GSTT1基因型的人更容易通过饮食干预使得人体更加健康。
西兰花营养丰富，含蛋白质、糖、脂肪、维生素和胡萝卜素，营养成份位居同类蔬菜之首，被誉为“蔬菜皇冠”。西兰花具有防癌抗癌的功效，菜花含维生素C较多，尤其是在防治胃癌、乳腺癌方面效果尤佳。研究表明，患胃癌时人体血清硒的水平明显下降，胃液中的维C浓度也显著低于正常人，而菜花不但能给人补充一定量的硒和维C，同时也能供给丰富的胡萝卜素，起到阻止癌前病变细胞形成的作用，抑制癌肿生长。据美国营养学家研究，菜花内还有多种吲哚衍生物，此化合物有降低人体内雌激素水平的作用，可预防乳腺癌的发生。此外，研究表明，西兰花中预防癌症最重要的成分是“萝卜硫素”，这种物质有提高致癌物解毒酶活性的作用，并帮助癌变细胞修复为正常细胞。除了抗癌以外，西兰花还含有丰富的抗坏血酸，能增强肝脏的解毒能力，提高机体免疫力。而其中一定量的类黄酮物质，则对高血压、心脏病有调节和预防的功用。同时，西兰花属于高纤维蔬菜，能有效降低肠胃对葡萄糖的吸收，进而降低血糖，有效控制糖尿病的病情。2014年Tse G等大数据分析了十字花科蔬菜摄入量与患结肠癌风险之间的关系，结果表明十字花科蔬菜的输入与结肠癌风险呈逆相关性（P<0.01)。其中，西兰花表现出很强的降低结直结肠癌的风险 (OR = 0.80; 95% CI:0.65-0.99; P = 0.02)。GSTT1（-）基因携带者可以降低患结肠癌的风险 (OR = 0.78; 95%CI: 0.64-0.95; P value heterogeneity = 0.32)。结果说明，多食用十字花科蔬菜，尤其是西兰花可以显著降低患直肠癌的风险。2008年Lee SA等对3035名上海患乳腺癌的女性和3037名健康女性进行了研究，结果表明携带GSTP1 Val / Val基因型，并且每日摄入少量的十字花科蔬菜，这些女性患乳腺癌的风险是携带有低风险基因Ile/Ile or Ile/Val基因型的1.74倍 (95% CI: 1.13, 2.67) 。说明高风险的基因可通过多食用十字花科蔬菜降低得乳腺癌的风险。
酵素广泛存在于自然界的生命体中，所有的生命活动与酵素密不可分，因此有“酵素是生命的起源”的说法。酵素中含有功能性低聚糖、氨基酸、有机酸等丰富的营养成分，具有改善人体内微生态环境，提高机体免疫力，延缓衰老、降低血清胆固醇等功效。
大量的研究表明益生菌以及益生元可以调节肠道菌群以及改善体内弱炎症反应症状，益生菌益生元可能为防治由肠道菌群失调以及弱炎症反应引起的肥胖提供一种新的治疗方法。很多实验研究证明，高脂肪或者是高碳水化合物进食容易改变肠道内的微生物组成，大量的Bifidobacterium减少。很多的研究中都证明在肥胖受试者肠道中Bifidobacterium的数量都低于正常体重受试者，Bifidobacterium有益于控制体重。目前乳杆菌在控制肥胖中的作用的研究不多，乳杆菌对控制肥胖的作用的研究主要是减少脂肪的吸收，增强脂解作用；免疫调节；产生功能性物质。另外，通过益生元可以改变肠道微生物。服用益生元调节动物的激素分泌功被证明是对肥胖控制以及相关的疾病有效的一种途径。通过使用益生菌以及益生元改变肠道菌群以及改善肥胖者肠道内的慢性炎症反应，从而改善肥胖症状以及一些代谢综合征具有一定的可行性。
目前，我国正面临着营养过剩的全面挑战。营养过剩导致的肥胖以及与肥胖相关的慢性疾病的患病率也迅速上升，严重威胁着国民健康。科学减肥关系到全民健康，应受到普遍关注。
随着分子生物学技术和方法日新月异的进步和发展，营养学也进入了“分子营养学”时代。尽管分子营养学方兴未艾，但是分子生物学技术及基因工程的发展，正在对人类食物及减肥方式产生深刻的影响。
传统的膳食推荐减肥模式假定了一个正常分布和均一的人群，但实际上不同人群或同一人群不同个体间的基因都存在差异，从而影响了个体或者特定人群的减肥效果。人类基因有140万～200万个单核苷酸多态性(SNPs)，其中6万多个存在于外显子中，这可能是人体对营养素需求及响应差异的重要分子基础。因此需要加强个体化设定，即通过对基因类型和表达的鉴定，安排个体化的营养素需求，列出每个人的最佳减肥食谱，从而使个体的健康状况通过调整达到最佳。
然而现有技术仍受限于理论基础，而缺乏实际可应用执行的技术，本发明利用基因检测结合饮食干预，调控营养摄取，而达到真正提供个体化干预减肥的目的。
发明内容
本发明的目的是提供毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物及制备方法和系统，针对个人不同的基因体质制作不同的减肥组合物，从而达到更好的减肥效果。
为实现上述目的，本发明提供了一种毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备方法，所述方法是通过对个体与毒素堆积型肥胖相关的多个基因多态性进行联合检测，并根据检测结果确定其发生毒素堆积型肥胖的风险等级，然后针对个体联合基因型发生毒素堆积型肥胖的风险等级制备针对性的干预饮品，所述方法包括以下步骤：
步骤一、样本DNA的获取
使用口腔粘膜上皮细胞的采样方法，避免了传统检测以血样为样本而带来的多种问题和不便，如易感染、有创痛感等。使用专用采样拭收集口腔中自然脱落的上皮细胞，具有卫生、无创伤、操作简便等优点，是目前国际遗传检测行业的通行采样方法。
①撕开采样拭的外包装，取出采样拭。
②采样拭在口腔中左腮上下刮40次以上。
③推动采样拭的推杆，将刮取了口腔上皮细胞的采样拭棉头送入采样管。
④重复上述操作，在口腔的右腮取样，棉头送入另一只采样管。
采取的样本DNA收集并编号，建立样本档案后进行下一步基因检测。
步骤二、联合基因型风险等级的建立
（1）选择与毒素堆积型肥胖相关的基因多态性位点，根据文献给出的数据或自行采样研究确定各遗传风险因素相关多态性位点的不同基因型的单基因风险度；
（2）将采用的所有多态性位点的各基因型排列组合，然后根据各单基因风险度乘积建立联合基因型风险等级。
其中，步骤（1）中自行采样研究确定各遗传风险因素相关多态性位点的不同基因型的单基因风险度的具体方法为：
A．利用病例-对照关联分析方法，采用卡方检验或Fisher精确概率法，可信区间CI取95%，显著性差异取p<0.05，对毒素堆积型肥胖在特定人群中的遗传风险因素的相关位点进行筛选；
B．利用网上SPSS统计学软件计算相对风险度OR，CI取95%，p<0.05，作为各相关多态性位点不同基因型的单基因风险度。
优选地，步骤（1）中选择与毒素堆积型肥胖相关的基因多态性位点可根据文献资料查找中国人群中毒素堆积型肥胖常见的遗传风险因素进行选择。
优选地，与毒素堆积型肥胖相关的基因多态位性点选自于下表1中的至少两个：
表1
在本发明的一种优选实施方式中，根据大规模中国人群中的分子流行病学相关研究成果查阅，采纳的上表中各相关多态性位点的风险度如下表2所示：
表2
进一步地，步骤（2）的具体方法为：
每个与毒素堆积型肥胖相关的基因多态性位点分别有三种亚型，将所选位点所有亚型出现的可能进行排列组合；然后将这些亚型的风险度相乘获得不同排列组合的风险度乘积；将获得的风险度乘积从小到大或从大到小排列，合并风险度乘积相等的组；最终按风险度乘积的大小确定各组风险度的高低。
上述方法是将各位点作为独立因素进行加权处理的，风险度乘积越大，评估风险越大；用上述方法计算得出的联合基因型遗传高风险个体可表述为其自身引发毒素堆积型肥胖的遗传风险因素较多或结果确定性较强。
进一步地，将不同的相关多态性位点标记为a、b、c……，将不同的亚型标记为1、2、3，即携带位点1亚型1+位点2亚型1+位点3亚型1的单倍型表示为a1b1c1；在本发明的一个优选实施例中，选取的相关多态性位点为GSTM1++/+-/--、CYP1A1AA/AG/GG和GSTT1++/+-/--，将它们分别标记为a、b、c，根据上述表格中所列的单基因风险度计算风险度乘积结果如表3所示：
表3
优选地，风险度乘积采用PHP编制程序，然后在计算机中输入各单基因风险度值后进行计算。
然后将上表3中的单倍型按风险度乘积从低到高排列并分组，如表4所示；风险等级越高，风险度乘积越大，即个体自身引发毒素堆积型肥胖的遗传风险越高。
表4
步骤三、个体基因检测
对从个体中获得的DNA进行步骤一中所选的基因多态性位点的联合基因型检测。
优选地，所述联合基因型检测采用TaqMan®-MCB技术和凝胶电泳进行；进一步优选地，对不同的风险位点采用同样的扩增程序，在不同的反应孔中，同时进行联合检测。荧光定量PCR反应后，将每个反应孔中的样品在荧光定量PCR仪上读取荧光量数据，对于每个个体的样本可得到对应不同风险位点的图，将其组合获得该个体的联合基因型。
优选地，联合检测的风险位点为CYP1A1 rs1048943、GSTP1rs1695和GSTP1rs1138272；进一步优选地，联合检测的风险位点还包括GSTM1++/+-/--和GSTT1++/+-/--中的一个或多个；
优选地，上述基因多态性位点联合检测采用的引物和探针设计如下表5所示：
表5
优选地，荧光定量PCR反应的扩增条件为，先预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟。
在本发明的另一较佳实施方式中，联合基因型检测的手段也可以采用基因芯片测序技术。
步骤四、根据检测结果所属的风险等级确定组合物配方
根据联合基因型检测的结果确定个体的风险等级，并按不同风险等级的营养素需求及干预方式，确定组合物不同营养素的添加量。
优选地，本发明所述组合物用于毒素堆积型肥胖基因个体化干预过程中的使用方法为：每周二和周六为节食日，每个节食日使用本发明制备的组合物6包，服用方法为每包用300ML热水冲服，时间为08:00-20:00，每隔2小时服用一包，每6-8周为一个干预疗程。
优选地，对于高风险等级（如表4中的V-VIII级）的个体节食日各营养素的每日建议摄入量如下表6所示：
表6
对于低风险等级（如表4中的I-IV级）的个体节食日各营养素的每日建议摄入量如下表7所示：
表7
热量 418.36KJ 硫胺素 0.03mg 钙 28.77mg
蛋白质 3.84g 核黄素 0mg 镁 30.74mg
脂肪 1.34g 烟酸 0.49mg 铁 2.14mg
碳水化合物 19.31g 维生素C 1.94mg 锰 0.51mg
膳食纤维 1.34g 维生素E 1.08mg 锌 0.52mg
维生素A 40.69ug 胆固醇 0mg 铜 0.08mg
胡罗卜素 244.12ug 钾 90.23mg 磷 62.6mg
视黄醇 0ug 钠 6.82mg 硒 1.08mg
在本发明的一个优选实施例中，将两位点联合基因型风险等级III和IV定义为毒素堆积型肥胖基因类型，风险等级I和II定义为非毒素堆积型肥胖基因类型；在本发明的另一优选实施例中，将三位点联合基因型风险等级V-VIII定义为毒素堆积型肥胖基因类型，风险等级I-IV定义为非脂毒素堆积型肥胖基因类型；在本发明的又一优选实施例中，将四位点联合基因型风险等级IX-XVI定义为毒素堆积型肥胖基因类型，风险等级I-VIII定义为非毒素堆积型肥胖基因类型；在本发明的另一优选实施例中，将五位点联合基因型风险等级高于XVI的定义为毒素堆积型肥胖基因类型，风险等级I-XVI定义为非毒素堆积型肥胖基因类型。
本发明的一种实施方式是根据上述节食日的营养素需求和节食日的饮食规则设计对应的组合物配方。
果蔬、谷物及坚果富含维生素和各种营养素，制成粉后营养更易吸收，美味且容易制备，本发明的一种优选实施方式为：采用液氮低温冷冻粉碎的方式制备符合配方中营养素要求的组合物。
在本发明的一个优选实施例中，将个体分为毒素堆积型肥胖基因类型和非毒素堆积型肥胖基因类型，针对能量失衡型肥胖基因类型的个体制作的饮品的配方如下：
每份组合物中含有含有薏米8~10重量份、绿豆3~5重量份、糯米3~5重量份、燕麦8~10重量份、杏仁0.5~1重量份、葛根粉1~2重量份、山药粉3~5重量份、黑木耳1~3重量份、金针菇1~2重量份、胡萝卜3~5重量份、西兰花粉1~2重量份、酵素1~5重量份、益生元5～15重量份。
优选的，酵素为苹果酵素、糙米酵素中的至少一种。
优选的，益生元为菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖中的至少一种。
步骤五、根据步骤四中确定的配方制作组合物采用上述配方制作组合物，可通过自动化磨粉机装置来完成。
本发明还提供了一种毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备系统，该系统包括样本获取单元、联合基因型风险等级单元、确定干预组合物配方单元、确定样本联合基因型单元和组合物制作单元，其中确定干预组合物配方单元分别与联合基因型检测单元、组合物制作单元电连接；所述控制单元内预设有毒素堆积型肥胖基因风险因素中多个相关多态性位点的单基因风险度值，且可根据用户选择的多态性位点自动建立风险等级；所述联合基因型检测单元用于检测个体DNA样本的联合基因型，同时将检测结果输出至所述控制单元，所述确定干预组合物配方单元可根据联合基因型检测单元的检测结果输出该样本的对应风险等级，然后根据风险等级或风险度乘积值确定组合物配方输出至组合物制作单元，最后组合物制作单元根据确定干预组合物配方单元的指令制作个体化干预组合物。
优选地，所述组合物制作单元包括进料口1、微波灭菌组件2、冷冻粉碎组件3、真空低温干燥组件6、储存分离组件8、可移动混合组件9。将组合物各组分原料分批投入进料口1后，各组分原料经微波灭菌组件1灭菌；灭菌后各组分原料经过液氮罐3中的液氮冷冻后进入粉碎组件5，液氮罐3通过管道4与粉碎组件5相连；粉碎后的原料进入低温干燥组件6进行干燥；干燥后的细粉原料经过筛分管道7后进入分离储存组件8；安装在储存分离组件的重力传感器控制不同组分原料的质量配比；分离后的各组分进入可移动混合组件9充分混匀，上述过程均通过控制面板10进行控制。收集所述混合物，真空封装，即为本发明所述能量失衡型肥胖基因个体化干预组合物。本发明的个体化干预组合物粉末可以用于制成冲剂、片剂、胶囊等产品。具体制作方法如下：
(1)精选新鲜果蔬、优质原料；
(2)将各组分原料分批放入投料口，经微波灭菌，灭菌功率为750W，持续90s；
(3)灭菌后各组分原料经液氮冷冻，用粉碎组件实施粉碎，粉碎物料与液氮的重量体积比为1:5，温度控制在-80至-20℃，冷冻时间为15分钟；
(4)将上步的粘稠糊状膏体置于低温真空干燥箱内进行真空干燥，真空度为-0.08MPa以下，温度不超过4℃，时间约为6小时；
(5)将上步各组分原料通过80-100目筛分，即得各组分原粉；
(6)上述储存在不同的位置的各组分原粉经过重力传感器，传感器控制不同组分的质量配比；
(7)经配比好的混合物在转速为60r/min～100r/min的混料组件内充分混匀，时间为15～20s；
(8)收集上述混合物即得本发明所述能量失衡型肥胖基因个体化干预组合物。
本发明具有以下技术效果：
1、国内外目前还没出现过针对毒素堆积型肥胖进行干预的减肥瘦身产品。此外，本发明可根据毒素堆积型肥胖个体的联合基因型制备针对性的减肥组合物，比现有的“一刀切”减肥产品具有更好的减肥效果。除此之外，国内还没有根据个人基因型存在的减肥干预产品，但是大量相关研究表明遗传因素在个人减肥的过程中起到巨大的作用。
2、本发明采用联合检测技术可通过一次荧光定量PCR程序获得联合基因型，可更全面、快速地确定个体的基因型。这是目前国内外最新的获得联合基因型的方法。
3、本发明采用个体化干预组合物的制备系统，实现了从样品检测到配合物制备的一体化过程。
4、本发明制备的粉末组合物采用市售果蔬、坚果为原料，制备过程简单，此外，粉末制剂不仅使得果蔬坚果中减肥等有益成分得到了浓缩提取，效果更佳，并且粉末制剂口感上没有异味，故而会成为一种很受大众欢迎且具有良好减肥效果的产品。
附图说明
图1是本发明毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备系统的工作流程图；
图2是本发明的一个优选实施例中组合物制备系统示意图，其中：1.进料口 2微波灭菌组件 3.液氮罐 4.连接管道 5.粉碎组件 6.低温干燥组件 7.带筛分装置管道 8.分离储存组件 9.可移动混合组件 10.控制面板。
具体实施方式
本实施例所用药材均符合中华人民共和国药典2015版标准。
实施例1 个体样本DNA的采集
本实施例采用的DNA样本收集物为唾液样本，具体实施方法为：
①撕开采样拭的外包装，取出采样拭。
②采样拭在口腔中左腮上下刮40次以上。
③推动采样拭的推杆，将刮取了口腔上皮细胞的采样拭棉头送入采样管。
④重复上述操作，在口腔的右腮取样，棉头送入另一只采样管。
采取的样本DNA收集并编号，建立样本档案后进行下一步基因检测。
实施例2 联合基因型风险等级的建立一
本实施例中检测的多态性位点为：GSTM1 ++/+-/--、CYP1A1 rs1048943和GSTT1 ++/+-/--，将它们分别标记为a、b、c，它们的亚型风险度如下表8所示：
根据表8所列单基因风险度计算获得的风险度等级如上述的表4所示。
实施例3 联合基因型风险等级的建立二
本实施例中检测的多态性位点为：GSTM1++/+-/--、CYP1A1 rs1048943、GSTT1++/+-/--和GSTP1rs1695，将它们分别标记为a、b、c、d，它们的亚型风险度如下表9所示：
根据上表所列单基因风险度计算获得的风险度等级如下表10所示：
实施例4 个体基因检测一
采用实施例2中的3个多态位点进行个体基因检测。
采集个体口腔上皮细胞样本，用硅胶吸附法抽提基因组DNA，经电泳检测验证后进行荧光定量PCR反应。
将个体样本分别放入3个反应孔中，同时检测3个位点，即GSTM1 ++/+-/--、CYP1A1rs1048943、GSTT1 ++/+-/--和GSTP1rs1695，另外根据实验需要增设不含DNA模板的NTC空白对照孔；
在每个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μL，即浓度为20ng/μL的DNA模板2μL、10×荧光定量PCR反应缓冲液ABITaqman®MGB1μL、25mMdNTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物0.1μL、25mMMgCl2溶液0.5μL、（5units/μL）TaqDNA聚合酶0.02μL、去离子水4.98μL、3个位点分别采用不同的正向引物（20μM，0.225μL）、反向引物（20μM，0.225μL）、VIC荧光探针（10μM，0.25μL）和FAM荧光探针（10μM，0.25μL）；3个位点使用引物和探针如上文表5所示。
将反应孔和空白对照在PCR扩增仪上进行反应，先预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟，反应结束后取出反应体系再放入荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，得到三个基因的三张图。
将荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的图与NTC空白对照比较，每个位点可能出现三种不同的信号中的一种，即纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型。
实施例5 个体基因检测二
采用实施例3中的4个多态位点进行个体基因检测。采用荧光定量和凝胶电泳的方法进行检测，在4个反应孔中检测样本，引物和探针采用上文表5所示的引物和探针，最后得到四个基因的四张图，与空白对照作比较，分别获得四个基因多态位点的基因型。
实施例6 风险等级与组合物配方
采用实施例3中建立的风险等级，其中将风险等级V-VIII定义为毒素堆积型肥胖基因类型，风险等级I-IV定义为非毒素堆积型肥胖基因类型。
或采用实施例3中建立的风险等级，其中将风险等级IX-XVI定义为非毒素堆积型肥胖基因类型，风险等级I-VIII定义为非毒素堆积型肥胖基因类型。
对于毒素堆积型肥胖基因类型个体的配方：
每50g组合物中含有薏米8~10g、绿豆3~5g、糯米3~5g、燕麦8~10g、杏仁0.5~1g、葛根粉1~2g、山药粉3~5g、黑木耳1~3g、金针菇1~2g、胡萝卜3~5g、西兰花粉1~2g、酵素1~5g、益生元5～15g 。
实施例7 个体化干预组合物制备系统
本实施例中的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物制备系统的工作流程如图1所示，该系统包括样本获取单元、联合基因型风险等级单元、确定干预组合物配方单元、确定样本联合基因型单元和组合物制作单元，其中确定干预组合物配方单元分别与联合基因型检测单元、组合物制作单元电连接；所述控制单元内预设有毒素堆积型肥胖基因风险因素中多个相关多态性位点的单基因风险度值，且可根据用户选择的多态性位点自动建立风险等级；所述联合基因型检测单元用于检测个体DNA样本的联合基因型，同时将检测结果输出至所述控制单元，所述确定干预组合物配方单元可根据联合基因型检测单元的检测结果输出该样本的对应风险等级，然后根据风险等级或风险度乘积值确定组合物配方输出至组合物制作单元，最后组合物制作单元根据确定干预组合物配方单元的指令制作个体化干预组合物。
所述联合基因型检测单元包括荧光定量PCR仪，采用TaqMan®-MCB技术对个体的DNA样本进行检测。
优选地，所述组合物制作单元包括进料口1、微波灭菌组件2、冷冻粉碎组件3、真空低温干燥组件6、储存分离组件8、可移动混合组件9、控制面板10。将组合物各组分原料分批投入进料口1后，各组分原料经微波灭菌组件1灭菌；灭菌后各组分原料经过液氮罐3中的液氮冷冻后进入粉碎组件5，液氮罐3通过管道4与粉碎组件5相连；粉碎后的原料进入低温干燥组件6进行干燥；干燥后的细粉原料经过筛分管道7后进入分离储存组件8；安装在储存分离组件的重力传感器控制不同组分原料的质量配比；分离后的各组分进入可移动混合组件9充分混匀，上述过程均通过控制面板10进行控制。收集所述混合物，真空封装，即为本发明所述能量失衡型肥胖基因个体化干预组合物。本发明的个体化干预组合物粉末可以用于制成冲剂、片剂、胶囊等产品。
实施例8 个体化干预组合物1的制备
(1) 精选下述原料备用：薏米、绿豆、糯米、燕麦、杏仁、葛根粉、山药粉、黑木耳、金针菇、胡萝卜、西兰花粉、酵素、益生元；
(2) 将各组分原料分批放入投料口，经微波灭菌，灭菌功率为750W，持续90s；
(3) 灭菌后各组分原料经液氮冷冻，用粉碎机实施粉碎，粉碎物料与液氮的重量体积比为1:5，温度控制在-80至-20℃，冷冻时间为15分钟；
(4) 将上步的粘稠糊状膏体置于低温真空干燥箱内进行真空干燥，真空度为-0.08MPa以下，温度不超过4℃，时间约为6小时；
(5) 将上步各组分原料通过80-100目筛分，即得各组分原粉；
(6) 上述储存在不同的位置的各组分原粉经过重力传感器，传感器控制不同组分的质量配比为：薏米10g、绿豆5g、糯米5g、燕麦10g、杏仁1g、葛根粉2g、山药粉5g、黑木耳3g、金针菇2g、胡萝卜5g、西兰花粉2g、酵素5g、益生元15g；
(7) 经配比好的混合物在转速为60r/min～100r/min的混料组件内充分混匀，时间为15～20s。
(8) 收集上述混合物即得本发明所述毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物1。
实施例9 个体化干预组合物2的制备
(1) 精选下述原料备用：薏米、绿豆、糯米、燕麦、杏仁、葛根粉、山药粉、黑木耳、金针菇、胡萝卜、西兰花粉、酵素、益生元；
(2) 将各组分原料分批放入投料口，经微波灭菌，灭菌功率为750W，持续90s；
(3) 灭菌后各组分原料经液氮冷冻，用粉碎机实施粉碎，粉碎物料与液氮的重量体积比为1:5，温度控制在-80至-20℃，冷冻时间为15分钟；
(4) 将上步的粘稠糊状膏体置于低温真空干燥箱内进行真空干燥，真空度为-0.08MPa以下，温度不超过4℃，时间约为6小时；
(5) 将上步各组分原料通过80-100目筛分，即得各组分原粉；
(6) 上述储存在不同的位置的各组分原粉经过重力传感器，传感器控制不同组分的质量配比为：薏米9g、绿豆4g、糯米4g、燕麦9g、杏仁0.8g、葛根粉1.5g、山药粉4g、黑木耳2g、金针菇1.5g、胡萝卜4g、西兰花粉1.5g、酵素3g、益生元10g；
(7) 经配比好的混合物在转速为60r/min～100r/min的混料组件内充分混匀，时间为15～20s。
(8) 收集上述混合物即得本发明所述毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物2。
实施例10 个体化干预组合物3的制备
(1) 精选下述原料备用：薏米、绿豆、糯米、燕麦、杏仁、葛根粉、山药粉、黑木耳、金针菇、胡萝卜、西兰花粉、酵素、益生元；
(2) 将各组分原料分批放入投料口，经微波灭菌，灭菌功率为750W，持续90s；
(3) 灭菌后各组分原料经液氮冷冻，用粉碎机实施粉碎，粉碎物料与液氮的重量体积比为1:5，温度控制在-80至-20℃，冷冻时间为15分钟；
(4) 将上步的粘稠糊状膏体置于低温真空干燥箱内进行真空干燥，真空度为-0.08MPa以下，温度不超过4℃，时间约为6小时；
(5) 将上步各组分原料通过80-100目筛分，即得各组分原粉；
(6) 上述储存在不同的位置的各组分原粉经过重力传感器，传感器控制不同组分的质量配比为：薏米8g、绿豆3g、糯米3g、燕麦8g、杏仁0.5g、葛根粉1g、山药粉3g、黑木耳1g、金针菇1g、胡萝卜3g、西兰花粉1g、酵素1g、益生元5g ；
(7) 经配比好的混合物在转速为60r/min～100r/min的混料组件内充分混匀，时间为15～20s。
(8) 收集上述混合物即得本发明所述毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物3。
实施例11 临床干预试验
1临床资料
1.1诊断标准根据1992年国际中西医结合联合会制定的肥胖病疗效评定标准。显效：体重减少>5kg或平均腹围减少>10cm；有效：体重减少>2～5kg或平均腹围减少3-10cm；无效：体重减少<2kg或平均腹围减少<3cm。
1.2根据实施例3中建立的风险等级，其中将风险等级V-XIV定义为毒素堆积型肥胖基因类型，风险等级I-IV定义为非毒素堆积型肥胖基因类型。选取200例BMI指数≥28，且风险等级被判定为能量失衡型肥胖基因的个体进行肥胖干预试验，试验个体的年龄均在25~45岁之间。其中46例（24男，22女）为试验组A，采用实施例8中的毒素堆积型肥胖基因类型个体化组合物1；其中51例（25男，36女）为试验组B，采用实施例9中的毒素堆积型肥胖基因型个体化组合2；其中50例（25男，25女）为试验组C，采用实施例10中的毒素堆积型肥胖基因类型个体化组合物3；53例（26男，27女）为对照组，采用提供的代餐食物。
2干预方法
试验中能量失衡型肥胖受试者每周二和周六为节食日，从早上8点开始将个体化组合物50g溶于300ml热水中饮用，每隔2小时饮用一次，一天共计6次。并不再摄取其它食物；非节食日正常饮食，且食物由试验组织者统一配给，分配量按个体差异稍有调整，以所有受试者均不产生异常饥饿感为准。对照组食用符合生产标准的代餐，分别计算个体能量需求，要求每天摄入能量不超过个体所需最低能量，试验周期共计八周。
3干预结果
3.1 共200例患者在疗程结束后进行疗效观察，其中A组显效43例，有效2例，无效1例，总有效率97.8%；B组显效35例，有效5例，无效11例，总有效率78.4%；C组显效10例，有效21例，无效19例，总有效率62.0%；对照组显效0例，有效2例，无效51例，总有效率3.77%。
治疗组和对照组治疗效果比较，差异有非常显著性意义(P<0.01)，治疗组明显优于对照组。
3.2干预前，试验组和对照组的BW（体重）和BMI（体重指数）、WC（腰围）、HC（臀围）、WHR（腰臀比）、TG（总胆固醇）、TC（甘油三酯）、HDL（高密度脂蛋白）、LDL（低密度脂蛋白）均没有显著差异（P值>0.1）；干预后，受试者的上述指标均得到明显改善，其体重指数和腰臀比的差异具有统计学意义（P值均﹤0.05），见表12和13。
表12干预前后体重等各项指标的变化与比较（男性组）
*表示P<0.05
表13干预前后体重等各项指标的变化与比较（女性组）
*表示P<0.05。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (10)

1.毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物及制备方法和系统，其特征在于所述制备方法包括：
步骤一 个体样本DNA的获取：
步骤二 联合基因型风险等级的建立：
（1）选择与毒素堆积型肥胖相关的基因多态性位点，根据文献给出的数据或自行采样研究确定各遗传风险因素相关多态性位点的不同基因型的单基因风险度；
（2）将采用的所有多态性位点的各基因型排列组合，然后根据各单基因风险度乘积建立联合基因型风险等级；
步骤三 个体基因检测：
对从个体中获得的DNA进行步骤二中所选的基因多态性位点的联合基因型检测；
步骤四 根据检测结果所属的风险等级确定组合物配方：
根据联合基因型检测的结果确定个体的风险等级，并按不同风险等级的营养素需求及干预方式，确定组合物中不同营养素的添加量；
步骤五 根据步骤三中确定的配方制作组合物。
2.如权利要求1所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述自行采样研究确定各遗传风险因素相关多态性位点的不同基因型的单基因风险度的具体方法为：
A．利用病例-对照关联分析方法，采用卡方检验或Fisher精确概率法，可信区间CI取95%，显著性差异取p<0.05，对毒素堆积型肥胖在特定人群中的遗传风险因素的相关位点进行筛选；
B．利用SPSS统计学软件计算相对风险度OR，CI取95%，p<0.05，作为各相关多态性位点不同基因型的单基因风险度。
3.如权利要求1所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述选择与毒素堆积型肥胖相关的基因多态性位点的具体方法为：根据文献资料查找中国人群中毒素堆积型肥胖常见的遗传风险因素进行选择。
4.如权利要求1所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备方法，其特征在于所述与毒素堆积型肥胖相关的基因多态位性点选自于下述位点：rs1048943、rs1695。
5.如权利要求1所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备方法，其特征在于步骤（2）的具体方法为：每个与毒素堆积型肥胖相关的基因多态性位点分别有三种亚型，将所选位点所有亚型出现的可能进行排列组合；然后将这些亚型的风险度相乘获得不同排列组合的风险度乘积；将获得的风险度乘积从小到大或从大到小排列，合并风险度乘积相等的组；最终按风险度乘积的大小确定各组风险度的高低。
6.如权利要求1所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备方法，其特征在于步骤三中的所述联合基因型检测采用TaqMan®-MCB技术进行同时检测。
7.如权利要求1所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备方法，其特征在于步骤四中对于高风险等级的个体采用低温液氮粉碎的方式制作组合物，其配方如下：组合物中含有薏米8~10重量份、绿豆3~5重量份、糯米3~5重量份、燕麦8~10重量份、杏仁0.5~1重量份、葛根粉1~2重量份、山药粉3~5重量份、黑木耳1~3重量份、金针菇1~2重量份、胡萝卜3~5重量份、西兰花粉1~2重量份、酵素1~5重量份、益生元5～15重量份。
8.一种毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备系统，其特征在于包括样本获取单元、联合基因型风险等级单元、确定干预组合物配方单元、确定样本联合基因型单元和组合物制作单元，其中确定干预组合物配方单元分别与联合基因型检测单元、组合物制作单元电连接；所述控制单元内预设有毒素堆积型肥胖基因风险因素中多个相关多态性位点的单基因风险度值，且可根据用户选择的多态性位点自动建立风险等级；所述联合基因型检测单元用于检测个体DNA样本的联合基因型，同时将检测结果输出至所述控制单元，所述确定干预组合物配方单元可根据联合基因型检测单元的检测结果输出该样本的对应风险等级，然后根据风险等级或风险度乘积值确定组合物配方输出至组合物制作单元，最后组合物制作单元根据确定干预组合物配方单元的指令制作个体化干预组合物。
9.如权利要求8所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备系统，其特征在于所述组合物制作单元包括进料口、微波灭菌组件、冷冻粉碎组件、真空低温干燥组件、储存分离组件、可移动混合组件，将组合物各组分原料分批投入进料口后，各组分原料经微波灭菌组件灭菌；灭菌后各组分原料经过液氮罐中的液氮冷冻后进入粉碎组件，液氮罐通过管道与粉碎组件相连；粉碎后的原料进入低温干燥组件进行干燥；干燥后的细粉原料经过筛分管道后进入分离储存组件；安装在储存分离组件的重力传感器控制不同组分原料的质量配比；分离后的各组分进入可移动混合组件充分混匀，通过控制面板控制上述操作，收集所述混合物真空封装，收集所述混合物，真空封装，即为本发明所述能量失衡型肥胖基因个体化干预组合物。
10.如权利要求8所述的毒素堆积型肥胖基因个体化干预组合物的制备系统，其特征在于所述根据用户选择的多态性位点自动建立风险等级的具体方法为：将所选位点所有亚型出现的可能进行排列组合；然后将这些亚型的风险度相乘获得不同排列组合的风险度乘积；将获得的风险度乘积从大到小排列，合并风险度乘积相等的组；最终按风险度乘积的大小确定各组风险度的高低。
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