CN105616395A - 一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法 - Google Patents

一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105616395A
CN105616395A CN201610184015.7A CN201610184015A CN105616395A CN 105616395 A CN105616395 A CN 105616395A CN 201610184015 A CN201610184015 A CN 201610184015A CN 105616395 A CN105616395 A CN 105616395A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pregnant
animal model
days
congenital
microtia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610184015.7A
Other languages
English (en)
Inventor
刘磊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Second Hospital of Shandong University
Original Assignee
Second Hospital of Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Second Hospital of Shandong University filed Critical Second Hospital of Shandong University
Priority to CN201610184015.7A priority Critical patent/CN105616395A/zh
Publication of CN105616395A publication Critical patent/CN105616395A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/203Retinoic acids ; Salts thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于动物模型制备技术领域,特别涉及一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法。该先天性小耳畸形动物模型的制备方法包括如下操作步骤:(1)大鼠饲养及合笼;(2)挑选怀孕雌鼠,随机分笼饲养;(3)于孕8-13.5天,按30-60㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射;(4)常规饲养至孕20天,将孕鼠脱颈处死,将胚胎自蜕膜上取下,即得先天性小耳畸形动物模型。该先天性小耳畸形动物模型的制备方法操作简单、成本低、便于复制、可重复性强,成功率高、相对于转基因或基因敲除制备的先天性小耳畸形动物模型更贴近于疾病发生的自然过程。

Description

一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法
(一)技术领域
本发明属于动物模型制备技术领域,特别涉及一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法。
(二)背景技术
先天性小耳畸形是由于胚胎时期第一、二鳃弓及其第一鳃沟的发育异常引起的外、中耳畸形,许多患者还同时伴有同侧下颌骨和面部软组织的发育不良。先天性小耳畸形是继唇、腭裂之后最为常见的面部畸形,也是导致面部不对称最常见的先天性畸形。
动物模型是研究致畸物发病机制的重要手段,可靠、稳定、便于获得的动物模型有助于研究先天畸形的发病机制、组织学改变及分子水平的研究,为临床预防、诊断及治疗提供实验证据。目前文献报道的利用啮齿类动物为实验动物的先天性小耳畸形动物模型大部分为基因敲除或转基因模型,如Rowe等对PACT敲除的小鼠模型的研究,Cousley等对Hfm转基因小鼠的研究,这些模型虽稳定可靠,但均存在费用高、技术手段相对复杂、一般实验应用不便等缺点。关于耳廓胚胎发育的实验研究已经有很多年的历史,但目前机制仍不明确。建立先天性小耳畸形动物模型已成为研究先天性小耳畸形发病机制及早期预防、早期诊断的关键,但是现有的先天性小耳畸形动物模型操作复杂,成功率极低,为动物模型的建立带来诸多困难,严重影响后续实验研究工作。
(三)发明内容
为了弥补现有技术的不足,本发明提供了一种操作简单、成本低、便于复制、可重复性强,成功率高、相对于转基因或基因敲除制备的先天性小耳畸形动物模型更贴近于疾病发生的自然过程的先天性小耳畸形动物模型的制备方法,解决了现有技术中存在的问题。
本发明是通过如下技术方案实现的:
一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,包括如下操作步骤:
(1)大鼠饲养及合笼:采用颗粒饲料喂养SD大鼠,喂养期间自由饮水,将SD大鼠按雌雄比2:1合笼过夜,于次日早检查雌鼠阴道,发现阴栓定为孕0天,于次日中午定位孕0.5天;
(2)挑选步骤(1)怀孕雌鼠中皮毛光滑、精神状态良好、无流产迹象的雌鼠,随机分笼饲养;
(3)维甲酸干预:于孕8-13.5天,按30-60㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射。
步骤(3)维甲酸干预时间在孕9天,干预剂量采用40㎎/㎏体重注射剂量。
本发明制备方法以SD大鼠为实验对象,来源方便易得、成本低;通过维甲酸干预,并采用皮下注射的方式,注射后经局部血液循环进入体内,对大鼠母体的刺激性小,系统毒性较少,相对于转基因或基因敲除制备的先天性小耳畸形动物模型的建立操作简单,相对于胃管灌注避开了肝脏的首关效应,避免了肝脏代谢对维甲酸的分解以及维甲酸吸收过快短期内大量进入母体循环对母体造成的系统毒性,相对于腹腔注射则不直接作用于子宫,对子宫及胚胎发育的直接扰动小,获得的胚胎数量多,便于重复及测量,相对于现有先天性小耳畸形动物模型造模成功率几乎为0的结果,成功率大大提升。该种制备方法更贴近疾病发生、发展的自然过程,保证后续实验更有效的研究发病机制并进行相关检测。
(四)说明书附图
图1为本发明方法制备所得单侧无耳大鼠胚胎;
图2为正常胚胎与本发明方法制备所得的异常胚胎头部CT扫描对比。
从图1可见,胚胎右侧耳壳存在但较正常明显缩小(箭头所示),左侧未见耳壳及其掩盖的外耳道;从图2可见,与图片中上方一行的正常胚胎头部相比,下方本发明方法制备所得的异常胚胎头部狭小,外形异常,骨骼发育明显不良。
(五)具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明,但本发明并不局限于此。
实施例1:
一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,采用如下操作步骤:
(1)大鼠饲养及合笼:采用颗粒饲料喂养3月龄SD大鼠,喂养期间自由饮水,将SD大鼠按雌雄比2:1合笼过夜,于次日早检查雌鼠阴道,发现阴栓定为孕0天,于次日中午定位孕0.5天;
(2)挑选步骤(1)怀孕雌鼠中皮毛光滑、精神状态良好、无流产迹象的雌鼠,随机分笼饲养;
(3)维甲酸干预:将维甲酸用橄榄油溶解,配制成40㎎/毫升维甲酸溶液,于孕9天,按40㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射;
(4)继续常规饲养至孕20天,将孕鼠脱颈处死,固定于操作台,于腹部做大十字切口,暴露子宫,剪开子宫壁,分离蜕膜团,将胚胎自蜕膜上取下,即得先天性小耳畸形动物模型,具体体征指标检测如下表1:
表1
由上表1可以看出,孕9天(G9天)干预组与对照组相比,体长及体重不存在明显统计学差异(P>0.05),但其他指标存在明显统计学差异(P<0.05),从测量指标可以看出,G9天干预组对胚胎整体发育影响较小,但对耳廓发育影响较大,相对于正常耳廓为小耳畸形。
该剂量在孕9天皮下注射的10只孕鼠全部存活,共获得畸形胚胎72只,成功率高。
实施例2:
一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,采用如下操作步骤:
(1)大鼠饲养及合笼:采用颗粒饲料喂养2月龄SD大鼠,喂养期间自由饮水,将SD大鼠按雌雄比2:1合笼过夜,于次日早检查雌鼠阴道,发现阴栓定为孕0天,于次日中午定位孕0.5天;
(2)挑选步骤(1)怀孕雌鼠中皮毛光滑、精神状态良好、无流产迹象的雌鼠,随机分笼饲养;
(3)维甲酸干预:将维甲酸用橄榄油溶解,配制成30㎎/毫升维甲酸溶液,于孕8天,按30㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射;
(4)继续常规饲养至孕20天,将孕鼠脱颈处死,固定于操作台,于腹部做大十字切口,暴露子宫,剪开子宫壁,分离蜕膜团,将胚胎自蜕膜上取下,即得先天性小耳畸形动物模型,具体体征指标检测如下表2:
表2
由上表2可以看出,孕8天(G8天)干预组与对照组相比,各指标均存在明显统计学差异(P<0.001),从测量指标可以看出,G8天干预组对胚胎整体发育及耳廓发育影响均较大,相对于正常耳廓为小耳畸形。
该剂量在孕8天皮下注射的10只孕鼠,9只存活,共获得畸形胚胎56只。
实施例3:
一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,采用如下操作步骤:
(1)大鼠饲养及合笼:采用颗粒饲料喂养5月龄SD大鼠,喂养期间自由饮水,将SD大鼠按雌雄比2:1合笼过夜,于次日早检查雌鼠阴道,发现阴栓定为孕0天,于次日中午定位孕0.5天;
(2)挑选步骤(1)怀孕雌鼠中皮毛光滑、精神状态良好、无流产迹象的雌鼠,随机分笼饲养;
(3)维甲酸干预:将维甲酸用橄榄油溶解,配制成40㎎/毫升维甲酸溶液,于孕12天,按40㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射;
(4)继续常规饲养至孕20天,将孕鼠脱颈处死,固定于操作台,于腹部做大十字切口,暴露子宫,剪开子宫壁,分离蜕膜团,将胚胎自蜕膜上取下,即得先天性小耳畸形动物模型,具体体征指标检测如下表3:
表3
由上表3可以看出,孕12天(G12天)干预组与对照组相比,各指标均存在明显统计学差异(P<0.001),从测量指标可以看出,G12天干预组对胚胎整体发育及耳廓发育影响均较大,相对于正常耳廓为小耳畸形,相对于正常耳廓为小耳畸形。
该剂量在孕12天皮下注射的10只孕鼠9只存活,共获得畸形胚胎52只。
实施例4
一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,采用如下操作步骤:
(1)大鼠饲养及合笼:采用颗粒饲料喂养3月龄SD大鼠,喂养期间自由饮水,将SD大鼠按雌雄比2:1合笼过夜,于次日早检查雌鼠阴道,发现阴栓定为孕0天,于次日中午定位孕0.5天;
(2)挑选步骤(1)怀孕雌鼠中皮毛光滑、精神状态良好、无流产迹象的雌鼠,随机分笼饲养;
(3)维甲酸干预:将维甲酸用橄榄油溶解,配制成60㎎/毫升维甲酸溶液,于孕10天,按60㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射;
(4)继续常规饲养至孕20天,将孕鼠脱颈处死,固定于操作台,于腹部做大十字切口,暴露子宫,剪开子宫壁,分离蜕膜团,将胚胎自蜕膜上取下,即得先天性小耳畸形动物模型,具体体征指标检测如下表4:
表4
由上表4可以看出,孕10天(G10天)干预组与对照组相比,与对照组相比各指标均存在明显统计学差异(P<0.05),从测量指标可以看出,G10天干预组对胚胎整体发育及耳廓发育均有影响,相对于正常耳廓为小耳畸形。
该剂量在孕10天皮下注射的10只孕鼠8只存活,共获得畸形胚胎48只。
实施例5
一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,采用如下操作步骤:
(1)大鼠饲养及合笼:采用颗粒饲料喂养4月龄SD大鼠,喂养期间自由饮水,将SD大鼠按雌雄比2:1合笼过夜,于次日早检查雌鼠阴道,发现阴栓定为孕0天,于次日中午定位孕0.5天;
(2)挑选步骤(1)怀孕雌鼠中皮毛光滑、精神状态良好、无流产迹象的雌鼠,随机分笼饲养;
(3)维甲酸干预:将维甲酸用橄榄油溶解,配制成60㎎/毫升维甲酸溶液,于孕13.5天,按60㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射;
(4)继续常规饲养至孕20天,将孕鼠脱颈处死,固定于操作台,于腹部做大十字切口,暴露子宫,剪开子宫壁,分离蜕膜团,将胚胎自蜕膜上取下,即得先天性小耳畸形动物模型,具体体征指标检测如下表5:
表5
由上表5可以看出,孕13.5天(G13.5天)干预组与对照组相比,与对照组相比各指标均存在明显统计学差异(P<0.05),从测量指标可以看出,G13.5天干预组对胚胎整体发育及耳廓发育均有影响,相对于正常耳廓为小耳畸形。
该剂量在孕13.5天皮下注射的10只孕鼠9只存活,共获得畸形胚胎61只。
本发明一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法获山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2012YY010)和国家自然科学基金(81401608)项目资助。

Claims (2)

1.一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,其特征是:包括如下操作步骤:
(1)大鼠饲养及合笼:采用颗粒饲料喂养SD大鼠,喂养期间自由饮水,将SD大鼠按雌雄比2:1合笼过夜,于次日早检查雌鼠阴道,发现阴栓定为孕0天,于次日中午定位孕0.5天;
(2)挑选步骤(1)怀孕雌鼠中皮毛光滑、精神状态良好、无流产迹象的雌鼠,随机分笼饲养;
(3)维甲酸干预:于孕8-13.5天,按30-60㎎/㎏体重的维甲酸剂量,对孕雌鼠进行皮下注射;
(4)常规饲养至孕20天,将孕鼠脱颈处死,固定于操作台,于腹部做大十字切口,暴露子宫,剪开子宫壁,分离蜕膜团,将胚胎自蜕膜上取下,即得先天性小耳畸形动物模型。
2.根据权利要求1所述的一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法,其特征是:步骤(3)维甲酸干预时间在孕9天,干预剂量采用40㎎/㎏体重注射剂量。
CN201610184015.7A 2016-03-28 2016-03-28 一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法 Pending CN105616395A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610184015.7A CN105616395A (zh) 2016-03-28 2016-03-28 一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610184015.7A CN105616395A (zh) 2016-03-28 2016-03-28 一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105616395A true CN105616395A (zh) 2016-06-01

Family

ID=56032024

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610184015.7A Pending CN105616395A (zh) 2016-03-28 2016-03-28 一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105616395A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107361020A (zh) * 2017-08-28 2017-11-21 山西医科大学 NTDs鼠胚动物模型及其构建方法
CN108606968A (zh) * 2018-06-13 2018-10-02 四川大学 一种制备先天性腭裂动物模型的方法
CN110237063A (zh) * 2019-06-10 2019-09-17 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 全反式维甲酸用于制备预防轴前多指病的药物中的用途
CN112662754A (zh) * 2021-01-27 2021-04-16 北京航空航天大学 用于预测小耳畸形发生概率的组合物的应用方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GÖSTA GRANSTRÖM: "Malformations of the maxillofacial region incluced by retinoids in an experimental system", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF ORAL AND MAXILLOFACIAL SURGERY》 *
GÖSTA GRANSTRÖM等: "Experimental Craniofacial Malformations Induced by Retinoids and Resembling Branchial Arch Syndromes", 《SCAND J PLAST RECONSTR HAND SURG》 *
刘磊: "维甲酸导致先天性小耳畸形发病机制研究", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑(月刊)》 *
芦志红: "维甲酸受体与维甲酸致金黄地鼠神经管畸形的相关性研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士) 医药卫生科技辑(月刊)》 *
蒋文杰等: "小耳畸形综合征病因的初步调查", 《生殖医学杂志》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107361020A (zh) * 2017-08-28 2017-11-21 山西医科大学 NTDs鼠胚动物模型及其构建方法
CN108606968A (zh) * 2018-06-13 2018-10-02 四川大学 一种制备先天性腭裂动物模型的方法
CN110237063A (zh) * 2019-06-10 2019-09-17 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 全反式维甲酸用于制备预防轴前多指病的药物中的用途
CN112662754A (zh) * 2021-01-27 2021-04-16 北京航空航天大学 用于预测小耳畸形发生概率的组合物的应用方法
CN112662754B (zh) * 2021-01-27 2024-05-14 北京航空航天大学 用于预测小耳畸形发生概率的组合物的应用方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105616395A (zh) 一种先天性小耳畸形动物模型的制备方法
Ward et al. Are larger litters a concern for piglet survival or an effectively manageable trait?
Sargison Pregnancy toxaemia
CN104542389B (zh) 一种非酒精性脂肪肝斑马鱼的制备方法
US9433195B2 (en) Methods for increasing genetic progress in a line or breed of swine using sex-selected sperm cells
Abba et al. Biochemical and pathological findings of pregnancy toxemia in Saanen doe: A case report
Wang et al. Effects of parity, litter size and lamb sex on maternal behavior of small Tail Han sheep and their neuroendocrine mechanisms
Quirino et al. Reproductive performance of fixed-time artificial insemination in swine and factors for the technology success
Cosentino et al. Fixed timed artificial insemination and early resynchronization of ovulation in different categories of ewes in grazing system: response of multiparous, nulliparous, and lactating ewes during the breeding season
CN105557623A (zh) 一种非酒精性脂肪性肝炎转化成肝癌的实验动物模型
CN105638505A (zh) 一种母牛生理状态预警器
Yama et al. In vivo follicular and uterine arterial indices as an indicator of successful hormonal stimulation for inactive ovaries in repeat-breeder crossbred dairy cows using a short-term progesterone-based programme
Narver Oxytocin in the treatment of dystocia in mice
Ramírez-González et al. Ultrasonography of pregnancy in Murciano-Granadina goat breed: fetal growth indices and umbilical artery doppler parameters
CN205431521U (zh) 一种母牛发情智能监测器
CN107982269A (zh) 西红花酸在制备防治多囊卵巢综合征的药物或保健品中的应用
Yilma Study on reproductive performance of breeding sows and ultrasound monitoring of ovarian follicle activity and ovulation of post-weaning sows in a commercial pig farm of central Ethiopia
Marcet-Rius et al. Clinical experiences and mechanism of action with the use of oxytocin injection at parturition in domestic animals: Effect on the myometrium and fetuses
CN106390134A (zh) 一种中华鳖生物药饵的制备方法及应用
Cui et al. Large animal models in the study of gynecological diseases
Matera et al. Influence of days after calving and thermal stress on the efficacy of a progesterone-based treatment in acyclic Italian Mediterranean Buffalo
Chang et al. Unusual occurrence of extrapontine myelinolysis associated with acute severe hypernatraemia caused by central diabetes insipidus
CN103027007A (zh) 妊娠后期营养受限绵羊iugr实验模型
CN104224404B (zh) 母牛分娩监测器
CN204158520U (zh) 母牛分娩监测器

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160601