CN105606830A - 一种止血抗菌中草药的筛选方法及牙膏配方 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种止血抗菌中草药的筛选方法及牙膏配方，属于中草药牙膏制备技术领域。所述中草药的筛选方法包括以下步骤：S1：评价指标体系的构建；S2：各评价指标权重的确定及一致性检验；S3：用模糊综合评判进行定量化处理，筛选得到止血抗菌中草药。所述牙膏配方，包括以下原料：中草药1％～3.2％、助剂64.8％～66.1％、余量为去离子水，中草药、助剂、去离子水三者重量百分数之和为100％。本发明的中草药牙膏能够在牙龈上形成保护膜，长期保护牙龈，提高牙龈的抗敏感性；本发明的中草药牙膏，与普通化学牙膏相比，气味佳，长期使用可显著缓解、减轻和预防龋齿、牙龈出血等口腔问题。

Description

一种止血抗菌中草药的筛选方法及牙膏配方

【技术领域】

本发明涉及一种辅助治疗口腔炎症的牙膏，特别涉及一种止血抗菌中草药的筛选方法及牙膏配方。

【背景技术】

口腔疾病中，牙周病和龋齿病是人类口腔内的常见病和多发病，其中，口腔细菌的滋生是引起该类疾病的主要的因素。通常，通过在牙膏中添加功效成分，使牙膏具有辅助预防、防止和减轻口腔问题的功能或对牙齿状况具有一定的改善作用。

影响牙龈出血的因素有很多，而很大一部分原因是由口腔厌氧菌引发的炎症所导致的，口腔中细菌种类繁多，最主要的要数链球菌及产黑色素类杆菌，其中，变异链球菌与牙龈卟啉单胞菌分别为两类细菌在口腔细菌中的代表性细菌。变异链球菌(Streptococcusmutans)是口腔主要的致龋齿菌之一，常见于牙菌斑中，可通过代谢产生的酸性物质导致龋齿的发生；牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis)是一种非酵解糖的革兰氏阴性厌氧球杆菌，是重要牙周致病菌之一。因此，保持良好的口腔卫生，控制口腔细菌的生长，在某些日用品(如牙膏)或食物中使用有效的药物是防治口腔疾病的第一步。

在牙膏中添加有效的药物能防止和治疗细菌或病毒引起的各种口腔疾病。虽然抗生素能有效抗菌，但由于副作用较大，市场上的主流还是中药牙膏。但中药牙膏普遍存在以下的问题：(1)有效成分在牙膏中的添加具有随意性，有的是根据中医药人士的建议，有的是根据民间验方，有的是依据某些中草药在民间的知名程度等等，极少经过实验对比。(2)某些中药牙膏所含中药处方味数太多，导致成分组成复杂，使牙膏中本来含量就有限的有效成分含量更低。(3)所使用的抗菌有效成分针对性不好，大多具有广谱抗菌性，对口腔内的各种细菌均有抑制作用，包括了口腔内非致病性的常驻菌。常驻菌是维持口腔微生态平衡的重要菌落，若长期受抑制，容易降低口腔各组织对损伤的自愈能力。例如专利申请文献“一种中药牙膏及其制备方法(公开号：CN104434675A)”公开了一种中药牙膏，包括以下重量份数的组分：白茅根0.01～0.08份、磷酸钙20～40份、氯化镧3～6份、胶态二氧化硅3～6份、羟乙基纤维素0.5～2份、槐枝2～7份、糖精0.05～0.2份、水30～60份、薄丁香2～10份、防腐剂0.01～0.08份。所述中药牙膏中药味淡，能避免牙龈发炎，但是没有经过试验对比或其他试验数据支撑。又如专利申请文献“一种中药牙膏及其制备方法(公开号：CN104688630A)”公开了一种中药牙膏，包括以下原料：白茅根15～30份、三七10～20份、金银花5～13份、薄荷草12～25份、白菊花3～8份、白芷4～7份、鱼腥草2～4份、大蓟4～10份、太阳花4～9份、丹皮3～8份、水300～1200份、皂角2～5份、枯矾5～9份和青盐3～7份，所述中药牙膏能有效缓解牙齿和牙龈出现的口腔问题，但所述中药牙膏所含中药处方味数太多，导致成分组成复杂，使在牙膏中本来含量就有限的有效成分含量更低。再如专利申请文献“一种消炎除口臭的中草药牙膏(公开号：CN104940086A)”公开了一种消炎除口臭的中草药牙膏，含有中草药浓液15～20份、山梨醇40～48份、羧甲基纤维素0.5～1.2份、糖精0.18～0.3份、丙二醇5～10份、十二醇硫酸钠为1.5～2.8份、二氧化硅(MIC型)8～13份、二氧化硅(H型)5～8份、杰马B为0.1～0.5份、余量为去离子水；其制取中草药浓液的原料为：藿香叶10份、佩兰10份、金银花15份、甘草5份、薄荷5份、桑叶10份、蒲公英10份、白芷12份、仙鹤草13份、生地10份，所述中草药牙膏具有杀菌消炎、止痛和消除口臭、口腔异味等效果，但所述中草药牙膏存在以下问题：一是抗菌有效成分针对性不好，对口腔内的各种细菌均有抑制作用，包括了口腔内非致病性的常驻菌，若长期使用，很大可能降低口腔各组织对损伤的自愈能力；二是没有经过试验对比或其他试验数据支撑。

此外，现有的技术有的只是简单的说明了药理作用，然后给出了牙膏配方，有的并附带实验说明了这个配方相应的实验数据支撑的效果，然而并未说明为什么选择这个配方，缺乏实质有效的理论支撑和数据支持。

因此，找出一种实质有效的理论支撑和数据支持，开发一种含中药处方味数少，成分组成简单，有效成分含量高，抗菌有效成分针对性强，长期使用，对口腔各组织无损伤的牙膏配方成为了新的研究方向。

【发明内容】

本发明提供一种止血抗菌中草药的筛选方法及牙膏配方，以解决现有技术缺乏实质有效的理论支撑和数据支持；中药牙膏所含中药处方味数多，成分组成复杂，致使有效成分含量低；抗菌有效成分针对性差，长期使用，容易降低口腔各组织对损伤的自愈能力等问题。本发明的中草药牙膏添加了侧柏叶、三七、艾叶、当归的提取物，不仅具有止血的作用，而且还具有杀菌、消炎、镇痛等功效，能够在牙龈上形成保护膜，长期保护牙龈，提高牙龈的抗敏感性，从而从根本上治疗和防治龈炎症；本发明的中草药牙膏，与普通化学牙膏相比，气味佳，长期使用可显著缓解、减轻和预防龋齿、牙龈出血等口腔问题。

为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种止血抗菌中草药的筛选方法，包括以下步骤：

S1：评价指标体系的构建；

S2：各评价指标权重的确定及一致性检验；

S3：用模糊综合评判进行定量化处理，筛选得到止血抗菌中草药。

优选地，步骤S1中所述评价指标体系是选取变异链球菌的最低抑菌浓度U₁₁、变异链球菌的最低杀菌浓度U₁₂、变异链球菌的最低抑菌浓度U₁₃、变异链球菌的最低杀菌浓度U₁₄、凝血酶时间U₂₁、血小板黏附率U₂₂、血小板聚集率U₂₃、血浆复钙时间U₂₄、抗凝血酶Ⅲ活性U₂₅九个参数作为评价指标构建评价因素集确定的，其中U＝{U₁₁,U₁₂,U₁₃,U₁₄,U₂₁,U₂₂,U₂₃,U₂₄,U₂₅}，如表1所示。

表1评价指标体系表

优选地，步骤S2中所述各评价指标权重是对层次单排序进行加权组合得到的，如表2所示。

表2止血效果评价指标权重集

优选地，步骤S2中所述一致性检验包括以下步骤：

S21：对递阶层次结构中的各层上的要素可以依次相对于与之有关的上一层要素表述的性质，进行两两比较，从而建立一系列的判断矩阵，所述判断矩阵采用1～9比例标度法对重要性进行赋值，构建出表1所述一级指标层相对于目标层的比较判断矩阵，所述比较判断矩阵的比较值为每个判定值的几何平均值；

S22：求出判断矩阵最大特征值所对应的特征向量，然后归一化法求得权重值；

S23：计算一致性指标C.I.及一致性比例C.R.，当C.R.＜0.1时，认为判断矩阵满足一致性要求；当C.R.≥0.1时，应该对判断矩阵做适当修正；

其中，C.I.由式(1)计算，

C.I.＝(λ_max-m)/(m-1)(1)

式中，m为判断矩阵的阶数，

C.R.由式(2)计算，

C.R.＝(C.I.)/(R.I.)(2)

R.I.＝1.3450，经计算C.I.＝0，C.R.＝0＜0.1，说明断矩阵满足一致性要求。

优选地，步骤S3中所述用模糊综合评判进行定量化处理包括以下步骤：

S31：按照5级评分法，将评价等级分为优、良、一般、较差、很差5个等级，别赋值5分、4分、3分、2分、1分，其中，具体分级标准如表3所示；

表3各评价因子的分级标准

S32：在明确评价因子的权重后，各评价因子根据分级标准表3，确定其水平值，由式(3)计算综合止血效果，

Y＝∑UijWij(i，j＝1，2，3，…，n))(3)

式中，Y为综合止血效果，Uij为评价因子的权重值，Wij为中草药评价因子的得分值；

S33：计算止血效果综合评价指数，

Y_o＝∑5×Uij(i，j＝1，2，3，…，n)(4)

式中，Y_o为止血效果理想值，各参评因子理想水平值均为5分，由式(4)计算中草药的综合止血理想值，再由式(5)计算综合止血评价指数，

CEI＝Y/Y_o(5)

式中，CEI为综合止血评价指数，Y为综合止血效果，Y_o为综合止血效果理想值；

S34：以CEI为分级依据，按照差值百分比分级法划分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级，筛选得到止血抗菌中草药，其中，Ⅰ级表示止血效果好，等级在60％～100％；Ⅱ级表示止血效果较好，等级在40％～60％；Ⅲ级表示止血效果一般，等级在30％～40％；Ⅳ级表示止血效果差，等级在0％～30％。

优选地，步骤S3中所述用模糊综合评判进行定量化处理的中草药包括侧柏叶、三七、艾叶、当归、丹参、云南白药、白芨、小蓟、紫珠草、黄芪、银杏叶、止血环酸、金银花、赤芍、大蓟、大黄、白茅根、茜草、仙鹤草、蒲黄。

一种包含根据权利要求1～6所述的止血抗菌中草药的筛选方法所得的中草药的牙膏配方，包括以下重量百分数的原料：中草药1％～3.2％、助剂64.8％～66.1％、余量为去离子水，中草药、助剂、去离子水三者重量百分数之和为100％。

优选地，所述中草药由侧柏叶、三七、艾叶、当归按重量比为1～2:3～8:1～3:3～5组成。

优选地，所述助剂包括摩擦剂、润湿剂、粘合剂、发泡剂、防腐剂、甜味剂和芳香剂。

更优选地，所述摩擦剂为碳酸钙、磷酸二氢钙、水合二氧化硅中的一种或多种；

所述润湿剂为甘油或山梨醇中的一种；

所述粘合剂为梭甲基纤维素钠、卡拉胶或海藻酸钠中的一种；

所述发泡剂为十二烷基硫酸钠或月桂醇磺酸钠中的一种；

所述防腐剂为尼泊尔金甲酯；

所述甜味剂为木糖醇或甜菊糖中的一种；

所述芳香剂为留兰香精。

本发明各成分作用以下：

侧柏叶含挥发油，油中主要为茴香酮(fenchone)、樟脑、乙酸龙脑酯、萜醇；并含桧酸(junipericacid)槲皮素、杨黄黄素(myricetin)、山柰素、扁柏双黄酮(hinokiflavone)、蜡质等。侧柏叶中含挥发油0.26％，油中主要成分为α-侧柏酮、侧柏烯、小茴香酮等；其它尚含黄酮类成分，如香橙素、槲皮素、杨梅树皮素、扁柏双黄酮等；叶中还含钾、钠、氮、磷、钙、镁、锰和锌等微量元素。侧柏叶煎剂能明显缩短出血时间及凝血时间，其止血有效成分为槲皮素和鞣质。此外，具有有抗菌、抗炎、抗氧化、降血脂、保护神经、镇静等多种药理作用。体外试验表明，该品对金黄色葡萄球菌、卡他球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、白喉杆菌等均有抑制作用。

三七富含三七皂苷、三七多糖、三七素、黄酮有效成分，具有止血、活血化瘀、消肿定痛、滋补强壮、抗疲劳、耐缺氧、抗衰老、降血脂、降血糖、提高机体免疫功能等作用。可用于治疗外伤出血、瘀血、胃出血、尿血等各种内、外出血症；扩张血管，溶解血栓，改善微循环，预防和治疗高血脂、胆固醇增高、冠心病、心绞痛、脑溢血后遗症等心脑血管疾病；脂肪肝、肝纤维化等肝病以及失血、产后、久病等原因导致的体虚症。

艾叶含有艾草素(sieversin)，4-羟基-8-乙酰氧基-8-乙酰氧基-1(2)，9(10)-愈创木二烯-6，12-内酯[4-hydroxy-8-acetoxyguaia-1(2)，9(10)-dien-6，12-olede]，洋艾内酯(artabsin)，洋艾内酯(artabsin)，洋艾素(sbsinthin)，艾草宁(siev-ersinin)等。具有止血、平喘、保肝、利胆、抗菌、抗过敏等多种药理作用。在体外对炭疽杆菌、α-溶血链球菌、B-溶血链球菌、白喉杆菌、假白喉杆菌、肺类双球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、白色葡葡球菌、枯草杆菌等10种革兰氏阳性嗜气菌皆有抗菌作用。

当归含有亚丁基苯酞(Butylidenephthalide)、β-蒎烯(β-Pinene)、α-蒎烯、莰烯(Camphene)、对聚伞花素(p-Cymene)、β-水手柑内酯(Bergapten)等；尚含其他成分，如：豆甾醇(Stigmasterol)、谷甾醇(Sitosterol)、豆甾醇-D-葡萄糖甙(Stigma-sterol-D-glucoside)、十四醇-1(Tetradecanol-1)、钩吻萤光素(Scopletin)等；此外，还含有蔗糖(Sucrose)、果糖(Fructose)、葡萄糖(Glucose)；维生素A、维生素B12、维生素E；17种氨基酸以及钠、钾、钙、镁等20余种无机元素。具有补血、和血、造血、镇痛等作用。可治血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、经闭痛经、虚寒腹痛、肠燥便秘、风湿痹痛、跌扑损伤、痈疽疮疡等症状。

摩擦剂是牙膏的主要成分，使牙菌斑、软垢和食物残渣比较容易被刷下来，摩擦剂要有一定的摩擦作用，但是不能损伤牙面及牙周组织。本发明选择碳酸钙、磷酸二氢钙、水合二氧化硅作为摩擦剂，当刷牙时，摩擦剂悬浮在泡沫之中，充满了口腔，与牙垢有广泛的接触，在牙刷的摩擦作用下使牙垢容易被刷洗下来，有效避免环境污染，使用氧化铝作为摩擦剂，会造成残留，而且富集铝化合物对人身体健康不利。

采用甘油或山梨醇作为湿润剂，可防止牙膏在软管中固化变硬，并使膏体具有光泽等作用。

采用梭甲基纤维素钠、卡拉胶或海藻酸钠作为粘合剂，增稠能力强，可使牙膏中配料分散均匀，其它触变性、稳定性明显改善。

采用十二烷基硫酸钠或月桂醇磺酸钠作为发泡剂，能够降低液体表面张力、具有良好的润湿、发泡、乳化、去垢作用，同时由于具有低刺激性，使用起来倍感舒适。

采用尼泊尔金甲酯作为防腐剂，能够有效延迟微生物生长或化学变化引起的腐败，延长牙膏的保质期。

口腔中存在的变形链球菌和乳酸杆菌是造成龋齿的主要细菌，采用木糖醇或甜菊糖能够抑制导致龋齿生长的细菌滋生，从而达到良好的抗龋效果，同时能掩盖其它成分的味道，例如中草药的苦味。

留兰香精油的主要化学成分为松萜或蒎烯、香芹酮、桉树脑、芳樟醇、柠檬油精、月桂(香叶)烯、石竹(萜)烯和薄荷酮。采用留兰香精作为芳香剂，具有清凉爽肤、醒脑提神、祛风健胃、抑制神经、安神静心、止咳脱敏、芳香润喉驱风、防腐的功效。

本发明具有以下有益效果：

(1)本发明的中草药牙膏所用中草药均取自大自然，来源丰富，且属于可再生资源，绿色环保。

(2)本发明的中草药牙膏的综合止血评价为Ⅰ等级，能够缩短血浆覆钙时间和凝血酶时间、促进血小板粘附与聚集、抑制抗凝血酶Ⅲ活性，对变异链球菌(25175)、牙龈卟啉单胞菌(33277)均存在很好的抑制作用。

(3)本发明的中草药牙膏添加有中草药有效成分，即侧柏叶、三七、艾叶、当归的提取物，与现有技术的防止牙龈出血的牙膏相比，这几种物质协同效果好，提取物的添加赋予牙膏止血、杀菌、消炎、镇痛的功能，能够在牙龈上形成保护膜，长期保护牙龈，提高牙龈的抗敏感性，从而从根本上治疗和防治龈炎症。

(4)本发明的中草药牙膏，与普通化学牙膏相比，气味佳，长期使用可显著缓解、减轻和预防牙龈炎、龋齿、牙龈出血等口腔问题。

(5)本发明的中草药牙膏所含中草药处方味数少，成分组成简单，有效成分含量高，抗菌有效成分针对性强，长期使用，对口腔各组织无损伤。

(6)本发明的中草药牙膏配方的有效成分是通过一个止血模型筛选出来的，为中草药牙膏配方的有效成分的筛选提供了强有力的、实质有效的理论支撑和数据支持。

【具体实施方式】

(一)体外抗菌实验

材料与方法

1.1实验细菌：选择2种常见口腔致病菌：变异链球菌(25175)、牙龈卟啉单胞菌(33277)，广东省微生物菌种保藏中心。培养基：BHI液体培养基，CDC厌氧琼脂培养基。

1.2采用二倍稀释法，测定检测样品对细菌的最低抑菌浓度MIC和最低杀菌浓度MBC。菌悬液制备：将变异链球菌与牙龈卟啉单胞菌复苏48h后，接种于BHI液体培养基中，37℃在85％N₂、10％H₂、5％CO₂的条件下于厌氧培养箱中培养24h后，此时细菌生长达到对数期，涂片镜检为纯培养后，收集菌液，调节菌浓度为1.0×10⁵～1.0×10⁶CFU/mL，备用。

1.3样品液配制

分别配制一系列浓度的生理盐水、侧柏叶、三七、艾叶、当归、丹参、云南白药、白芨、小蓟、紫珠草、黄芪、银杏叶、止血环酸、金银花、赤芍、大蓟、大黄、白茅根、茜草、仙鹤草、蒲黄样品液。

1.4最低抑菌浓度MIC的测定

取各样品液100μL加入每孔各有100μL菌悬液的无菌96孔板中，作为实验组，取各样品液100μL加入每孔各有100μL的BHI液体培养基的无菌96孔板中作为实验组队空白对照组；另取菌液100μL、BHI液体培养基100μL作为阳性对照，取BHI培养基200μL，作为阳性对照组的空白对照组。将96孔板于厌氧培养箱中37℃培养24h，取出，肉眼观察无菌生长的浓度作为最低抑菌浓度(MIC)。

1.5最低杀菌浓度MBC的测定

经体外抑菌实验得出样品液对菌株相应MIC值后，将MIC值以上浓度的样品液与实验菌株于CDC厌氧琼脂培养基上划线培养，观察，无细菌生长的最低样品液浓度为最低杀菌浓度MBC。

(二)体外止血实验

材料与方法

2.1抗凝血液的制备：从兔子耳缘静脉取血，并与质量分数为3.8％的柠檬酸钠溶液按9:1的体积比，轻轻混匀即得。将抗凝血液，1000r/min离心10min，以制备富血小板血浆，3000r/min离心10min，制备贫血小板血浆。

2.2样品液配制

中草药提取液获得：分别称取侧柏叶、三七、艾叶、当归、丹参、云南白药、白芨、小蓟、紫珠草、黄芪、银杏叶、止血环酸、金银花、赤芍、大蓟、大黄、白茅根、茜草、仙鹤草、蒲黄中草药样品适量，与去离子水按1:10的比例室温浸泡2h，回流提取2次，每次2h，滤渣超声提取40min，合并滤液，旋蒸浓缩，冷冻干燥。

然后配制3.3mg/mL的生理盐水及各中草药提取液。

2.3血浆覆钙时间(RT)的测定

0.1mL生理盐水和0.1mL富血小板血浆于离心管中混合，在37℃水浴下加入0.1mL质量分数为0.2775％的CaCl₂溶液混匀并开始计时，在有白色丝状物产生时停止计时。实验重复3次，取平均值。将生理盐水换成等量的样品液，按相同方法测出血浆复钙时间。生理盐水做对照。

2.4凝血酶时间(TT)的测定

按照半自动凝血仪推荐的样品用量，100μL的贫血小板血浆与100μL的生理盐水混匀后，取100μL的混合样品及测试珠加入塑料测试杯中，在预温区预温3min，将预温后的TT试剂100μL加入上述测试杯中，立即测试。测试完毕后，将生理盐水换成等量的样品液，相同方法测定，平行3次。

2.5血小板聚集(PAgT)测试

在塑料测试杯中，精确加入300μL的贫血小板血浆，放入测试通道，按PPP键进行基底测量。

按照半自动凝血仪器推荐的样品用量，在另一侧测试杯中，使用加珠器在测试杯中加入1粒测试珠，在该测试杯中精确加入300μL的富血小板血浆和50μL的生理盐水，然后将该测试杯放在37℃的预温通道中，预温6min，将预温后的测试杯放入测试通道，再加入10μL的ADP(室温)，测定聚集率时间为5min，测定完毕后，将生理盐水换成等量的样品液，相同方法测定，平行3次。

2.6血小板粘附(PAdR)测试

将富血小板血浆，加入分别在装有0.1mL的样品液的硅化离心管中，在每个离心管中加入3个大小相等的直径为3.0mm的玻璃珠，振荡10min，在显微镜下用血球计数板计数。按照公式1进行计算。生理盐水做空白对照，实验重复3次，取平均值。

$PAdR=\frac{N_0-Nf}{N_0}\×100\%$

式中：PAdR为血小板黏附率％。

2.7抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性测试

将贫血小板血浆与肝素缓冲液按1:30混合，再加入100μL生理盐水，分别取100μL加入100μL纤维蛋白原溶液，37℃温育5min，各管再加入100μL凝血酶试剂，同时开始计时，记录各管凝固时间，测定凝固时间，带入标准曲线Y＝0.0403X-0.01841，R²＝0.9996，求得凝血活酶Ⅲ活性。把生理盐水换成等体积样品液，测定样品液对抗凝血酶Ⅲ的活性影响。

(三)体外止血效果综合评价模型的建立

3.1评价指标体系的构建

3.1.1基本原则

(1)科学性原则：指标体系结构要科学、合理，能够规范、科学地反映观赏美感的本质内涵，指标涵义明确，简便易测；

(2)代表性原则：在反映止血效果这一基本内涵的前提下，尽量减少指标的数目，要求指标相互独立，避免重复、包含、大同小异；

(3)层次性原则：要求体系层次分明，逻辑关系明确；

(4)可操作性和可比性原则：指标要选择在实际工作中容易操作、实施、理解的。

凝血酶时间能反映药物对凝血酶活性和纤维蛋白原的作用。血小板黏附和聚集表现了血小板的两种止血形态。血浆复钙时间是判断测定内源凝血系统缺陷的一种实验检查，抗凝血酶Ⅲ活性测试反映的是血液本身的抗凝血酶Ⅲ的活性。牙龈卟啉单胞菌与变异链球菌是主要的口腔致病菌，与牙龈出血有关。对变异链球菌及牙龈卟啉单胞菌的抗菌能反映药物的抗菌能力，这7种指标均能独立代表某一特定的止血效果，且能进行体外实验测定

3.1.2总体框架

3.1.2.1一级指标的确定：止血效果的评价是对药物体外凝血及抗菌实验的综合评价。影响止血最重要的因素是血液凝固，凝血酶的形成是血液凝固的核心，凝血酶是促凝系统的终端酶，生成增多会导致血栓，生成过少则会导致出血。血浆复钙时间所代表的的内源性凝血系统最终是生成凝血酶达到凝血效果；凝血酶时间根据凝血酶活性变化反映凝血效果；抗凝血酶Ⅲ能够抑制凝血酶的活性来起到抗凝的作用，根据本课题研究出的测定方法，设定它们对止血效果的影响是相等的。血小板的黏附和聚集发生在血管受损处，因黏着和聚集而产生血栓，对止血效果的影响重要程度相比于影响血液凝固的因素要低，故设定凝血酶时间、血浆复钙时间和抗凝血酶Ⅲ活性对影响止血效果的重要程度是血小板黏附和聚集的2倍。又该模型主要针对牙龈出血的止血效果评价，增加两株口腔致病菌的抗菌效果也作为评价指标。因此，结合专家意见，将其止血效果评价目标层的一级指标概括为抗菌作用、体外凝血效果。

3.1.2.2二级指标确定：深入了口腔主要致病菌及凝血相关指标，通过征询专家意见，选择9个主要性状为二级指标。(1)抗菌作用：选择中草药对变异链球菌的最低抑菌与杀菌浓度，对牙龈卟啉单胞菌的最低抑菌及杀菌浓度作为中草药抗菌作用的二级指标；(2)体外凝血效果：选择中草药的凝血酶时间TT、血小板聚集率PAgT、血小板粘附率PAdR、血浆覆钙时间RT、抗凝血酶Ⅲ活性AT-Ⅲ作为体外凝血效果的二级指标。

3.1.2.3专家征询：选择从事生物研究、动物临床实验和药理研究的专业人员，共计27名，对初步确定的止血评价指标进行专家征询。

3.1.3止血评价指标体系的确定

评价指标体系是选取变异链球菌的最低抑菌浓度U₁₁、变异链球菌的最低杀菌浓度U₁₂、变异链球菌的最低抑菌浓度U₁₃、变异链球菌的最低杀菌浓度U₁₄、凝血酶时间U₂₁、血小板黏附率U₂₂、血小板聚集率U₂₃、血浆复钙时间U₂₄、抗凝血酶Ⅲ活性U₂₅九个参数作为评价指标构建评价因素集确定的，其中U＝{U₁₁,U₁₂,U₁₃,U₁₄,U₂₁,U₂₂,U₂₃,U₂₄,U₂₅}，如表1所示。

表1评价指标体系表

3.2各评价指标权重的确定及一致性检验

3.2.1各评价指标权重是对层次单排序进行加权组合得到的，如表2所示。

表2止血效果评价指标权重集

3.2.2一致性检验包括以下步骤：

(1)对递阶层次结构中的各层上的要素可以依次相对于与之有关的上一层要素表述的性质，进行两两比较，从而建立一系列的判断矩阵，判断矩阵采用1～9比例标度法对重要性进行赋值，构建出表1所述一级指标层相对于目标层的比较判断矩阵，本次征询专家27人，最终认为一对比较值为每个判定值的几何平均值；

(2)求出判断矩阵最大特征值所对应的特征向量，然后归一化法求得权重值；

(3)计算一致性指标C.I.及一致性比例C.R.，当C.R.＜0.1时，认为判断矩阵满足一致性要求；当C.R.≥0.1时，应该对判断矩阵做适当修正；

其中，C.I.由式(1)计算，

C.I.＝(λ_max-m)/(m-1)(1)

式中，m为判断矩阵的阶数，

C.R.由式(2)计算，

C.R.＝(C.I.)/(R.I.)(2)

R.I.＝1.3450，经计算总排序的C.I.＝0，C.R.＝0＜0.1，说明总排序断矩阵满足一致性要求。

3.3用模糊综合评判进行定量化处理，包括以下步骤：

(1)按照5级评分法，将评价等级分为优、良、一般、较差、很差5个等级，别赋值5分、4分、3分、2分、1分，其中，具体分级标准如表3所示；

表3各评价因子的分级标准

(2)在明确评价因子的权重后，各评价因子根据分级标准表3，确定其水平值，由式(3)计算综合止血效果，

Y＝∑UijWij(i，j＝1，2，3，…，n))(3)

式中，Y为综合止血效果，Uij为评价因子的权重值，Wij为中草药评价因子的得分值；

(3)计算止血效果综合评价指数，

Y_o＝∑5×Uij(i，j＝1，2，3，…，n)(4)

式中，Y_o为止血效果理想值，各参评因子理想水平值均为5分，由式(4)计算中草药的综合止血理想值，再由式(5)计算综合止血评价指数，

CEI＝Y/Y_o(5)

式中，CEI为综合止血评价指数，Y为综合止血效果，Y_o为综合止血效果理想值；

(4)以CEI为分级依据，按照差值百分比分级法划分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级，筛选得到止血抗菌中草药，其中，Ⅰ级表示止血效果好，等级在60％～100％；Ⅱ级表示止血效果较好，等级在40％～60％；Ⅲ级表示止血效果一般，等级在30％～40％；Ⅳ级表示止血效果差，等级在0％～30％。

(四)应用

根据体外抗菌实验和体外止血实验的方法分别测定生理盐水、侧柏叶、三七、艾叶、当归、丹参、云南白药、白芨、小蓟、紫珠草、黄芪、银杏叶、止血环酸、金银花、赤芍、大蓟、大黄、白茅根、茜草、仙鹤草、蒲黄变异链球菌的最低抑菌浓度MIC、变异链球菌的最低杀菌浓度MBC、变异链球菌的最低抑菌浓度MIC、变异链球菌的最低杀菌浓度MBC、凝血酶时间TT、血小板黏附率PAgT、血小板聚集率PAdR、血浆复钙时间RT、抗凝血酶Ⅲ活性A-Ⅲ，测定结果如表4所示。

表4各评价指标参数测定结果

按照5级评分法将表4各评价指标参数测定结果进行优、良、一般、较差、很差5个等级评价划分，别赋值5分、4分、3分、2分、1分，评分法结果如表5所示。

表5评分法结果

以CEI为分级依据，按照差值百分比分级法划分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级，筛选得到止血抗菌中草药，其中，Ⅰ级表示止血效果好，等级在60％～100％；Ⅱ级表示止血效果较好，等级在40％～60％；Ⅲ级表示止血效果一般，等级在30％～40％；Ⅳ级表示止血效果差，等级在0％～30％。以此方法划分生理盐水、侧柏叶、三七、艾叶、当归、丹参、云南白药、白芨、小蓟、紫珠草、黄芪、银杏叶、止血环酸、金银花、赤芍、大蓟、大黄、白茅根、茜草、仙鹤草、蒲黄止血效果等级，结果如表6所示。

表6综合止血评价结果

下面结合更具体实施例进行具体说明。

选取止血模型给出的效果好的4种中草药，进行复配，做为具有止血效果的中草药牙膏有效成分提取原料。实施例1～3中的中草药牙膏组成原料及重量百分比含量以下表1所示。中草药牙膏的制备方法以下：将各实施例的中草药原料粉碎后过40目筛，采用水作为溶剂进行提取，将提取液浓缩、冷冻干燥，即制得中草药提取物；再将其按比例与中草药牙膏所需的助剂按常规方法混匀，均匀地分散，再补齐余量的去离子水，搅拌均匀后，即制得中草药牙膏，中草药牙膏采用常规方法灌装，常温保存即可。

中草药牙膏样品液配制：3.3mg/mL的实施例1～3中的中草药牙膏样品液1～3、空白膏体液、云南白药牙膏液、两面针养龈护齿牙膏液。

表7实施例1～3中的中草药牙膏组成原料及重量百分比含量

实施例4体外止血实验

实验方法步骤参考以上体外止血实验，结果如表8所示。

表85项凝血指标测试结果

实施例5体外抗菌实验

实验方法步骤参考以上体外止血实验，其中，样品液配制如下：

分别取中草药牙膏样品1～3、空白膏体、云南白药牙膏、两面针养龈护齿牙膏2g去离子水定容于1mL容量瓶中，即为2g/mL的中草药牙膏样品液。将样品液用BHI液体培养基进行二倍稀释，稀释后，药物浓度依次为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156、0.0078、0.0039、0.00195g/mL。

不同样品液对实验菌的抗菌活性，结果如表9所示。

表9样品液对两株口腔致病菌的抗菌结果

把表8和表9数据带入模型，得到各样品液的综合止血评价结果，如表10所示。

表10样品液的综合止血评价结果

由表10可知，样品液1～3的综合止血评价均为Ⅰ等级，说明均存在较好的抑菌和止血作用。

以上内容不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。

Claims (10)

1.一种止血抗菌中草药的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：评价指标体系的构建；

S2：各评价指标权重的确定及一致性检验；

S3：用模糊综合评判进行定量化处理，筛选得到止血抗菌中草药。

2.根据权利要求1所述的止血抗菌中草药的筛选方法，其特征在于，步骤S1中所述评价指标体系是选取变异链球菌的最低抑菌浓度U₁₁、变异链球菌的最低杀菌浓度U₁₂、变异链球菌的最低抑菌浓度U₁₃、变异链球菌的最低杀菌浓度U₁₄、凝血酶时间U₂₁、血小板黏附率U₂₂、血小板聚集率U₂₃、血浆复钙时间U₂₄、抗凝血酶Ⅲ活性U₂₅九个参数作为评价指标构建评价因素集确定的，其中U＝{U₁₁,U₁₂,U₁₃,U₁₄,U_21,U₂₂,U₂₃,U₂₄,U₂₅}，如表1所示。

表1评价指标体系表

3.根据权利要求1所述的止血抗菌中草药的筛选方法，其特征在于，步骤S2中所述各评价指标权重是对层次单排序进行加权组合得到的，如表2所示。

表2止血效果评价指标权重集

4.根据权利要求1所述的止血抗菌中草药的筛选方法，其特征在于，步骤S2中所述一致性检验包括以下步骤：

S21：对递阶层次结构中的各层上的要素可以依次相对于与之有关的上一层要素表述的性质，进行两两比较，从而建立一系列的判断矩阵，所述判断矩阵采用1～9比例标度法对重要性进行赋值，构建出表1所述一级指标层相对于目标层的比较判断矩阵，所述比较判断矩阵的比较值为每个判定值的几何平均值；

S22：求出判断矩阵最大特征值所对应的特征向量，然后归一化法求得权重值；

S23：计算一致性指标C.I.及一致性比例C.R.，当C.R.＜0.1时，认为判断矩阵满足一致性要求；当C.R.≥0.1时，应该对判断矩阵做适当修正；

其中，C.I.由式(1)计算，

C.I.＝(λ_max-m)/(m-1)(1)

式中，m为判断矩阵的阶数，

C.R.由式(2)计算，

C.R.＝(C.I.)/(R.I.)(2)

R.I.＝1.3450，经计算C.I.＝0，C.R.＝0＜0.1，说明断矩阵满足一致性要求。

5.根据权利要求1所述的止血抗菌中草药的筛选方法，其特征在于，步骤S3中所述用模糊综合评判进行定量化处理包括以下步骤：

S31：按照5级评分法，将评价等级分为优、良、一般、较差、很差5个等级，别赋值5分、4分、3分、2分、1分，其中，具体分级标准如表3所示；

表3各评价因子的分级标准

S32：在明确评价因子的权重后，各评价因子根据分级标准表3，确定其水平值，由式(3)计算综合止血效果，

Y＝∑UijWij(i，j＝1，2，3，…，n))(3)

式中，Y为综合止血效果，Uij为评价因子的权重值，Wij为中草药评价因子的得分值；

S33：计算止血效果综合评价指数，

Y_o＝∑5×Uij(i，j＝1，2，3，…，n)(4)

式中，Y_o为止血效果理想值，各参评因子理想水平值均为5分，由式(4)计算中草药的综合止血理想值，再由式(5)计算综合止血评价指数，

CEI＝Y/Y_o(5)

式中，CEI为综合止血评价指数，Y为综合止血效果，Y_o为综合止血效果理想值；

S34：以CEI为分级依据，按照差值百分比分级法划分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级，筛选得到止血抗菌中草药，其中，Ⅰ级表示止血效果好，等级在60％～100％；Ⅱ级表示止血效果较好，等级在40％～60％；Ⅲ级表示止血效果一般，等级在30％～40％；Ⅳ级表示止血效果差，等级在0％～30％。

6.根据权利要求1所述的止血抗菌中草药的筛选方法，其特征在于，步骤S3中所述用模糊综合评判进行定量化处理的中草药包括侧柏叶、三七、艾叶、当归、丹参、云南白药、白芨、小蓟、紫珠草、黄芪、银杏叶、止血环酸、金银花、赤芍、大蓟、大黄、白茅根、茜草、仙鹤草、蒲黄。

7.一种包含根据权利要求1～6所述的止血抗菌中草药的筛选方法所得的中草药的牙膏配方，包括以下重量百分数的原料：中草药1％～3.2％、助剂64.8％～66.1％、余量为去离子水，中草药、助剂、去离子水三者重量百分数之和为100％。

8.根据权利要求7所述的中草药牙膏配方，其特征在于，所述中草药由侧柏叶、三七、艾叶、当归按重量比为1～2:3～8:1～3:3～5组成。

9.根据权利要求7所述的中草药牙膏配方，其特征在于，所述助剂包括摩擦剂、润湿剂、粘合剂、发泡剂、防腐剂、甜味剂和芳香剂。

10.根据权利要求9所述的中草药牙膏配方，其特征在于，所述摩擦剂为碳酸钙、磷酸二氢钙、水合二氧化硅中的一种或多种；

所述润湿剂为甘油或山梨醇中的一种；

所述粘合剂为梭甲基纤维素钠、卡拉胶或海藻酸钠中的一种；

所述发泡剂为十二烷基硫酸钠或月桂醇磺酸钠中的一种；

所述防腐剂为尼泊尔金甲酯；

所述甜味剂为木糖醇或甜菊糖中的一种；

所述芳香剂为留兰香精。