CN105596253A - 利用橄榄提取物制备的不含氟可食性牙膏及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及利用橄榄提取物制备的不含氟可食性牙膏，其功效成分橄榄提取物的制备方法如下：1)用浓度为50％～80％的乙醇溶液浸提；2)用0.1～0.3mol/L的盐酸酸解；3)中和，浓缩；4)用乙酸乙酯萃取，浓缩干燥。该橄榄提取物具有良好的抑菌性，对哺乳动物细胞无毒害作用。本发明将该提取物与牙膏体系结合制成牙膏，具有抑菌作用的橄榄提取物可充当防龋齿剂，可无需添加氟化物，还具有普通牙膏所没有的消炎止血作用，可用于辅助防治口腔溃荡、牙龈肿痛、牙龈出血、龋齿、口腔异味等口腔和牙科疾病，符合消费者对于牙膏安全、绿色、天然的要求。

Description

利用橄榄提取物制备的不含氟可食性牙膏及其制备方法

技术领域

本发明属于日化产品领域，涉及一种牙膏，尤其是一种利用橄榄提取物制备的不含氟可食性牙膏及其制备方法。

背景技术

人的口腔是一个微生物群，正常人体口腔菌群保持平衡，当这种平衡被破坏时就会产生口腔疾病。口腔中的微生物包括细菌、真菌、螺旋体、支原体、口腔毛滴虫、病毒等。龋病的发生与感染细菌密切相关。当口腔菌群失调，变形链球菌、嗜酸乳杆菌等大量存在时就会造成龋病的发生；细菌降解产生葡聚糖，吸附于牙齿表面，通过长时间的聚集，形成菌斑，菌斑的出现导致牙齿中锡成分流失，最终形成龋病。据研究，牙周病人口腔中嗜酸乳杆菌，奈瑟干燥球菌，金黄色葡萄球菌等数量显著増加，出现菌群失调。

目前口腔疾病己经成为影响人们身体健康和生活质量的一大疾病。牙膏作为人们保持口腔清洁，预防蛀牙、牙结石等口腔问题的日常口腔清洁剂，成为人们必不可少的日常用品之一。牙膏工业在日化工业中占据着较大的份额，具有广阔的发展前景。

随着人们对口腔健康问题的关注，功能性牙膏越来越受消费者的喜爱，占市场份额日渐增多。目前，我国功能型牙膏产量已占牙膏总量的60％以上，其中中草药牙膏占50％的市场份额，己发展成国内牙膏市场上的主要产品，对维护和促进国人的口腔健康卫生做出了巨大的贡献。

20世纪70年代末蓝天集团研究制备的"脱敏"牙膏成为了我国首支中草药牙膏,随后三七膏上市，80年代初两面针药物牙膏、草珊瑚牙膏、田七牙膏、芳草牙膏等研制上市，推向市场。2005年云南白药牙膏上市销售代表我国医药产业进入牙膏市场,逐步形成了一个中草药功效牙膏阵营，并不断的发展壮大，成为最受国内消费者青睐的中草药品牌。中草药牙膏将中草药与牙膏体系结合，对于中草药的发展具有强大的促进作用，并且能够顺应人们对天然牙膏的需求。借鉴祖先留下的许多有关治疗口腔疾病的宝贵经验，运用现代科学技术提取，精制中药中的有效成分加入到牙膏中,使其能够更好地发挥预防口腔疾病的作用。

橄榄属橄榄科橄榄属常绿乔木，又名青果、青子、青橄榄等，生长于低海拔的杂木林中或山坡上以及沿海低丘陵地区，原产中国南方，是我国南方部分地区种植的一种经济果树。橄榄自古就是我国常用中药材，我国多部中药典籍均有记载。例如，明代李时珍《本草纲目》记载：“橄榄果实生食、煮饮，消酒毒；嚼汁咽之，治鱼鲠；生啖、煮汁能解诸毒、开胃下气、止泻、生津液、止烦渴、治咽喉痛；咀嚼咽汁，能解一切鱼、鳖毒。橄榄仁研烂傅之，治唇吻燥痛。橄榄核磨汁服，治诸鱼骨鲠，又治小儿痘疮倒魇；烧研服之，治下血”。其产量巨大，营养价值丰富，属卫生部批准的既是食品又是药物的69种物品之一。

橄榄的化学成分，国内外都有大量的文献报导。据研究，橄榄果实中含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素C、碳水化合物、膳食纤维、胡萝卜素、视黄醇、维生素Bl、维生素B2、尼克酸等营养成分和多种微量元素。此外，从橄榄和橄揽叶中分离到的化学成分还有黄酮类、裂环烯醚萜类、简单酚类、木酚素类、咖啡酞苯乙醇苷类等等。

从油橄榄分离的黄酮类化合物有20多种，其中主要是从橄榄叶和果中分离得到的，从橄榄叶中分离得到的黄酮类化合物主要有芹菜素、芦丁、杨梅黄酮、槲皮素、山萘酚、橘皮素及以它们为母体结构的糖苷，其中黄酮苷元的含量约占总黄酮35％～40％。还从橄榄果中检测到其它一些黄酮醇类糖苷，如：木犀草素-7-葡萄糖苷，以及花色苷类，如矢牟菊苷、飞燕草苷等。

橄榄中存在少量木酚素类，己鉴定的有两种，即乙酰基松脂醇和松脂醇，还有它们的糖苷化合物。木酚素在橄榄油的含量较为丰富，几乎是所有简单酚类化合物的总和。

咖啡酞苯乙醇苷类，从油橄揽叶中分离得到2个此类化合物，分别是verbascoside和oleoaceoside。

裂环烯醚萜是环戊烷单萜衍生物中的一类化合物，是由环稀醚萜类化合物在C7、C8处裂环而成，只占环稀醚萜类的很小一部分。到1991年为止，从植物中分离并鉴定的裂环烯醚萜约有120个。

除上所述，油橄榄中还有大量简单酚类化合物、有机酸类等，包括有生育酚、绿原酸、香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、橄榄内酯原儿茶酸、酪醇、羟基酪醇等。

发明内容

本发明的目的在于采用特定的提取方法从橄榄果和/或橄榄叶中提取具有抗菌消炎作用的有效成分，并研究其与牙膏基质的配伍稳定性，利用橄榄提取物制备出不含氟的可食性牙膏。

本发明目的通过以下方案实现：

一种不含氟牙膏，其特征在于，所述牙膏包括按重量份数计的以下组分：

所述橄榄提取物的制备方法如下：

(1)将去壳橄榄果和/或橄榄叶粉碎，加入浓度为50％～80％的乙醇溶液，液料比为20：1～60：1，在20～50℃下水解3～6小时，获得第一提取液；

(2)在所述第一提取液中加入盐酸，使盐酸的终浓度为0.1～0.3mol/L，在50～90℃下水解5～9小时，获得第二提取液；

(3)在所述第二提取液中加入氢氧化钠中和，直至pH为5～6，对溶液进行浓缩；

(4)在所得的浓缩液中加入等量的乙酸乙酯萃取三次，去除水相，将合并的乙酸乙酯相浓缩干燥，得到淡黄色粉末状的所述橄榄提取物。

经液相色谱初步检测，本发明的牙膏中的橄榄提取物含有羟基酪醇、酪醇、橄榄苦苷、女贞甙、毛蕊花苷、黄酮类、萜类等多种化合物。本发明橄榄提取物的抗菌能力可能是多种化合物的共同结果。因此，其抑菌机理需要进一步的研究与论证。

牙膏膏体是由多相组成，除固相颗粒外还有胶体粒子、乳化粒子。水溶性组成成分既有离子状态又有分子状态，水以结合水、吸附水、包附水形式存在于牙膏膏体中，还存在大小不一的气泡，由于组成物的复杂，也形成了复杂的结构体。在添加了橄榄提取物的基础上，要保持牙膏的良好外观和良好性能，必须对牙膏的组分和组分含量进行优化和调整。例如，增稠剂的用量对于牙膏的拉丝现象具有至关重要的影响，其加入量应合理,过少膏体疏松松散，不成形，过多则膏体过于黏稠。在确定了增稠剂的用量的情况下，通过调节保湿剂和水、磨擦剂的用量化可对膏体的粘度进行调整。另外，实验发现，当橄榄提取物添加量小于约5wt％时，对体系膏体的稳定性影响较小；功效成分检测表明，当添加量大于约0.05wt％时，牙膏中功效成分可检出。但随着添加量继续增加，膏体外观颜色逐渐加深。另外，从配方稳定性和生产成本上考虑，橄榄提取物并非加得越多越好。功效成分加入量在约0.1～1wt％为宜，功效成分加入量太少则牙膏抗菌消炎效果不明显，加入量过多功效无明显提升，且对膏体外观、口感和体系稳定性均有不良影响。

作为对上述技术方案的进一步改进，其中所述橄榄提取物的所述制备方法的步骤(1)中，乙醇溶液为60～70％，液料比为30：1，水解温度为20～30℃，水解时间为4小时，提取次数为两次。

溶剂提取主要是利用被提取物与溶剂的相似相溶原理，只有当提取溶剂的极性与橄榄中功效化合物的极性相近时，功效成分才能充分溶于溶剂中从而更好地被提取出来。不同极性溶剂对功效物质的提取得率有显著的影响。溶剂对提取速率的影响是溶剂的溶解度、亲和力、粘度、分子大小等各因素的综合影响，同时还应考虑溶剂容易回收、适当的密度、表面张力、安全性及化学稳定性等问题。本发明人实验了多种不同的溶剂，发现水和纯溶剂提取橄榄功效物时提取得率都较低，这可能是由于功效类化合物在植物体内通常与蛋白质、多糖以氢键和疏水键形式形成稳定的分子复合物，纯的有机溶剂和水都不能有效断裂样品中功效类物质与蛋白质或其它物质的连接作用。因此，有机溶剂与水的混合体系更适合功效类物质的提取，但当提取溶剂中水的比例过高时，糖类等水溶性杂质的浸出率也增大。本发明人经多次实验发现在50％～80％(V/V)的浓度范围内乙醇、溶液所得的功效物质的提取得率较高，尤其是，当乙醇溶剂浓度在60％～70％(V/V)时提取效果达到最佳。且乙醇具有廉价、无毒且安全性好等优点，因此，本实验优选选择60～70％(V/V)的乙醇溶液为橄榄功效成分的提取溶剂。

通常情况下，温度越高，传质扩散速度越快，将更有利于有效成分的浸出，但是，若温度过高，热不稳定性的成分或挥发性成分就容易受到破坏或挥发损失。本发明人在长期的试验中发现低温条件有利于橄榄功效成分的提取，温度升高，功效成分提取得率呈下降趋势。因此，本发明优先选用在室温条件下(20～30℃)进行提取。

功效物质从物料内扩散渗透到溶剂中需要一定时间，浸提时间受功效物质在物料与溶剂间传质速度的影响，时间过短提取不完全，若浸提时间过长，将使功效物质发生氧化损失。本发明人发现在最初的0.5～4h内，橄榄功效类物质不断地扩散溶解于溶剂中，提取得率显著上升，但超过4h后，功效类物质提取得率逐渐下降，表明功效类物质已发生氧化损失。因此，本实验选取4h为最佳提取时间。

固液提取中，物料与溶剂间的浓度差是提取过程中的一个推动力。在提取过程中，保持良好的浓度差，将得到好的浸提效果。一般情况下，用的溶剂越多，能被浸提出来的物质就越多，当物质扩散达到平衡时，再增加溶剂量也不会使浸出物质增加。同时，提取溶剂用量的增大，对后面的过滤、浓缩以及溶剂的回收将带来成本的增加。另外，固液比与提取次数之间存在相互影响关系，在同等提取效果下，使用的溶剂量越大提取次数必然可以减少，反之将增加提取次数，提取成本也会相应增加，所以要选择适当的固液比以及相应的提取次数，以取得较好的提取效果和花费尽可能少的溶剂。随溶剂量的增大和提取次数的增加，功效类的提取得率逐步增大，当固液比达到30：1后，得率提高不明显。因此，综合考虑提取溶剂消耗量和提取效果，选择固液比为30：1并且提取次数为两次比较适宜。

作为对上述技术方案的进一步改进，其中所述橄榄提取物的所述制备方法的步骤(2)中，盐酸的终浓度为0.2mol/L，水解温度为80℃，水解时间为6小时。本发明人经过多次正交试验优化，发现盐酸的终浓度为0.2mol/L，水解温度为80℃，水解时间为6小时时，功效类物质提取得率最佳，具体原因尚不明确。

作为对上述技术方案的进一步改进，所述的不含氟牙膏还包括：0.5～5.0重量份的甜味剂；0.5～2.0重量份的矫味剂。甜味剂包括天然的或人造甜味剂。该甜味剂可来自很多物质，包括天然水溶性甜味剂、人造水溶性甜味剂或从天然水溶性甜味剂改良的水溶性甜味剂。天然水溶性甜味剂包括但不局限于乙醇糖，例如，70％的山梨醇溶液、甘露醇、木糖醇、麦芽醇、氢化淀粉水解物及其混合物。总之，应用有效量的甜味剂可使木发明牙膏组合物的任一实例产生所需甜度。发明所用的矫味剂包括牙膏领域熟知的天然或人造矫味剂。适宜的矫味剂包括但不局限于诸如欧薄荷的薄荷，诸如橘子和柠檬的柑类矫味剂，人造香草、桂皮、各种水果型矫味剂等，以用于掩盖橄榄提取物的涩味。

作为对上述技术方案的进一步改进，其中所述摩擦剂为二氧化硅、磷酸氢钙、碳酸钙、羟基磷灰石中的一种或几种的混合物。优选地，所述摩擦剂为二氧化硅或羟基磷灰石。二氧化珪是一种化学性质稳定的物质，呈酸性。由于其物理、化学性质稳定，能够与牙膏其他组分作用稳定，特别适用于制备功效型牙青，与牙膏中功效成分配伍性良好。羟基磷灰石安全性高、生物相容性好，性能温和，不会对牙釉质造成磨损。研究证明其在保护牙釉质不被破坏，修复牙釉质方面具有良好的作用，可有效防治牙出血，减少蛀牙的发生。

作为对上述技术方案的进一步改进，其中所述保湿剂为山梨醇、甘油或聚乙二醇中的一种或几种的混合物。保湿剂在保持牙膏中的水分相对稳定，防止牙膏硬结，起到保湿、赋形、抗冻等起着重要作用。合理选用保湿剂对牙膏的质量、稳定性及降低成本都是非常重要的。本发明更优选为山梨醇，山梨醇的保湿性，稳定性，制出膏体光泽、细腻、口感等优于其它保湿剂，且不存在安全性的问题。而且，山梨醇还可加重味道，去除/减轻橄榄提取物的涩味，它还可防止牙膏的凝块。

作为对上述技术方案的进一步改进，其中所述表面活性剂为月桂醇硫酸钠、月桂醇肌氨酸钠、可可脂钠、椰油酰胺丙基甜菜碱中的一种或几种的混合物。表面活性剂能降低水的表面张力，起润湿、乳化、起泡、洗涤和去污等作用，从而使牙膏在口腔中达到迅速扩散，可渗透、疏松牙齿表面的污垢和食物残渣，使之被丰富的泡沫乳化而悬浮，在漱口时被冲洗除去，达到清洁口腔的目的。本发明更优选的表面活性剂为月桂醇肌氨酸钠，其发泡作用强，能够产生丰富的泡珠，使得制备的牙膏膏体细腻，且对黏膜刺激性小，安全性较高。

作为对上述技术方案的进一步改进，其中所述增稠剂为羧甲基纤维素、卡拉胶、黄原胶、瓜尔胶中的一种或几种的混合物。增稠剂与牙膏中的各种组份"捏合"在一起，使膏体保持稳定，并赋予牙膏膏体一定的成条性和触变性，使牙膏外观呈现细腻光亮，刷牙时具有良好的分散性。由于本发明的牙膏添加了橄榄提取物等物质，若仅选择一种增稠剂，无法使膏体达到所需质量要求。本发明优选为采用复配增稠剂，以保持膏体的稳定。

作为对上述技术方案的进一步改进，其中所述甜味剂为食品级甜菊苷、木糖醇、甜蜜素中的一种或几种的混合物，所述矫味剂为食品级草莓型、甜橙型、苹果型、薄荷型矫味剂中的一种或几种混合物。出于安全因素考虑，本发明的甜味剂优选为食品级甜菊苷、木糖醇、甜蜜素。薄荷类的矫味剂可能会降低胶粒结合水的能力，使膏体出现分水，本发明的矫味剂更优选为草莓型、甜橙型或苹果型。

本发明的另一目的在于提供上述不含氟牙膏的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)称量去离子水、甜味剂、橄榄提取物；

2)称量保湿剂；

3)将1)中的物料溶解搅拌均匀，形成澄清透明的液体；

4)将3)中的液体与2)中的保湿成分一起加入真空制膏机中，搅拌约5分钟；

5)称取摩擦剂、增稠剂、表面活性剂，预搅拌均匀；

6)将5)中搅拌好的粉料加入4)分散完全的液体混合物中，真空高速搅拌15分钟；

7)称取矫味剂，加入制膏机中，搅拌10分钟；

8)关闭高速搅拌，真空刮壁搅拌脱气10分钟；

9)出料、检验；

10)灌装、封尾。

本发明采用了特定提取方法提取出的橄榄提取物具有良好的抑菌性，对哺乳动物细胞无毒害作用。本发明研究了该提取物与牙膏基质的配伍稳定性，制备出具有良好性能且具有消炎抗菌作用的牙膏，具有抑菌作用的橄榄提取物可充当防龋齿剂，可无需添加氟化物，可用于辅助防治口腔溃荡、牙龈肿痛、牙龈出血、龋齿、口腔异味等口腔和牙科疾病，无毒，无副作用，在使用时因不注意而吞咽了牙膏，也不会引起任何毒副作用。

附图说明

图1为本发明橄榄提取物牙膏研究制备工艺流程图

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未详细注明的实验条件和操作，通常按照本领域常规的实验条件和操作进行。

本发明橄榄提取物牙膏研究制备工艺流程图如图1所示。

实施例1：制备橄榄提取物

将收集的去核橄榄果和/或橄榄叶用清水冲洗，除去泥土、尘埃等杂质，然后滤干，置于38℃干燥箱中干燥。干燥后立即取出进行粉碎，粉末过筛，储存于干燥、避光的环境中备用。

为系统探讨提取工艺条件对功效成分得率(由吸光度测定，在300-900nm波长范围)的影响，本发明人通过多次的单因素试验和正交优化实验，分别和综合考察各步骤中溶剂种类、溶剂浓度、固液比、时间、温度等因素对功效成分得率的影响。当乙醇在50％～80％范围内，液料比在20：1～60：1范围内，步骤1的水解温度在20～50℃内，水解时间在3～6小时内；盐酸的终浓度在0.1～0.3mol/L范围内，酸解温度在50～90℃下，酸解时间在5～9小时内；以及萃取前的pH为5～7内，最后功效成分的得率均在10％以上，采用本发明范围之外的实验条件提取的功效成分的得率小于10％。

示例的最佳工艺条件如下：

称取100g橄榄粉末于容器中，加入3L浓度为60％的乙醇溶剂，在室温下(25℃)震荡4小时，重复两次，合并提取液，过滤，离心，取上清液，即得第一提取液；

取1L第一提取液中加入高纯盐酸，盐酸的终浓度为0.2mol/L，在80℃下水解6小时，获得第二提取液；

在第二提取液中加入固体氢氧化钠中和，直至pH为6，将溶液浓缩至400ml；

在所得的浓缩液中加入400ml乙酸乙酯，萃取三次，去除水相，将合并的乙酸乙酯相浓缩干燥，得到淡黄色粉末状的所述橄榄提取物。

实施例2：牙膏配制

配方1：橄榄粉末0.05g；二氧化硅20g；甘油20g；月桂醇肌氨酸钠1g；瓜尔胶1g；卡拉胶1g；木糖醇1g；草莓型矫味剂1g。

配方2：橄榄粉末1.1g；二氧化硅60g；山梨醇40g；月桂醇肌氨酸钠3g；黄原胶1g；卡拉胶1g；草莓型矫味剂2g。

配方3：橄榄粉末1.8g；羟基磷灰石20g；聚乙二醇-40030g；椰油酰胺丙基甜菜碱2g；瓜尔胶1g；羧甲基纤维素1g；草莓型矫味剂2g。

配方4：橄榄粉末0.5g；二氧化硅60g；甘油40g；月桂醇肌氨酸钠1g；瓜尔胶0.5g；木糖醇0.5g；橙型矫味剂0.5g。

配方5：橄榄粉末2.5g；二氧化硅20g；山梨醇20g；月桂醇肌氨酸钠2g；瓜尔胶1g；卡拉胶1g；草莓型矫味剂2g。

配方6：橄榄粉末2g；羟基磷灰石25g；聚乙二醇-40020g；椰油酰胺丙基甜菜碱1g；瓜尔胶2g；羧甲基纤维素1g；草莓型矫味剂2g；苯甲酸钠0.5g。

具体制备方法如下：

1)称量去离子水、甜味剂、橄榄提取物；

2)称量保湿剂；

3)将1)中的物料溶解搅拌均匀，形成澄清透明的液体；

4)将3)中的液体与2)中的保湿成分一起加入真空制膏机中，搅拌约5分钟；

5)称取摩擦剂、增稠剂、表面活性剂，预搅拌均匀；

6)将5)中搅拌好的粉料加入4)分散完全的液体混合物中，真空高速搅拌15分钟；

7)称取矫味剂，加入制膏机中，搅拌10分钟；

8)关闭高速搅拌，真空刮壁搅拌脱气10分钟；

9)出料、检验；

10)灌装、封尾。

根据牙膏GB8372-2014标准，采用感官评价法进行评价，以外观性状、拉丝现象为评价指标。结果发现，牙膏的拉丝现象受增稠剂诸如瓜尔胶、羧甲基纤维素用量的影响最大，其次二氧化珪、甘油、山梨醇等的用量对其也有一定的影响；保湿剂甘油和山梨醇等的用量对膏体的光滑细腻程度影响最大。而上述配方1～6所得的橄榄提取物牙膏效均良好，制备牙膏膏体细腻光亮，气味清凉，粘稠度适中，拉丝现象不明显。

实施例3：二甲苯致小鼠耳肿胀实验

取小鼠50只，随机分成5组，每组10只，分别为模型组、牙膏空白基质组、阳性组(云南白药牙膏)、橄榄提取物牙膏组、橄榄提取物组。在小鼠右耳两面涂上二甲苯，致炎，左耳不加处理作为空白对照。

1小时后，将牙膏空白基质组、阳性组、橄榄提取物牙膏组(配方2)分别涂在小鼠上，每只1g；同时将橄榄提取物组涂在小鼠右耳上，每只约为0.01g(该量与配方2中橄榄提取物牙膏组中的橄榄提取物的量相当)。模型组致炎2小时后处死，其他组涂药1小时后处死。擦净耳部所涂药物，沿耳廓基线剪下两耳，用6.5mm打孔器冲下左右两耳同一部位的圆片，于分析天平称重，精确到化0.001g。用右耳片重量减去左耳片重量为肿胀度，比较药物的抗炎作用，计算肿胀抑制率。

肿胀抑制率＝(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度

由表1可知，橄榄提取物牙膏组、云南白药牙膏组、橄榄提取物组与模型组相比，均能抑制二甲苯引起的肿胀作用，其中橄榄提取物牙膏组、橄榄提取物组的抗炎效果优于云南白药牙青组；牙膏空白基质组与模型组相比，无显著性差异；橄榄提取物牙膏组与牙膏空白基质组相比,具有显著的差异。

表1：各组对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

组别	剂量	肿胀度/mg	抑制率％
				模型组	——	9.26±1.65	——
牙膏空白基质组	1g	8.94±2.55	3.5
				阳性组	1g	5.34±2.37	42.3
橄榄提取物牙膏组	1g	4.48±1.85	51.6
				橄榄提取物组	0.01g	3.76±2.34	59.3

二甲苯致小鼠耳肿胀抗炎实验结果表明，所研制的橄榄提取物牙膏具有良好的抗炎作用。橄榄提取物牙膏与橄榄提取物对比两组的抗炎作用没有统计学差异，而橄榄提取物牙膏与牙膏基质对比抗炎作用具有显著的差异，说明所添加的橄榄提取物功效成分与牙膏体系具有良好的配伍性，牙膏基质不会对橄榄提取物的功效成分产生影响。对橄榄提取物牙膏抗炎作用的初步研究表明，该橄榄提取物具有良好的抗炎作用，制成牙膏不影响其抗炎作用的发挥，对临床口腔辅助防治牙银炎、牙周炎具有重要的意义。对该橄榄提取物的抗炎作用的机理还不清楚，需进一步研究，推测其中的多种黄酮类、萜类等物质具有共同作用。

实施例4：抑菌作用

牙膏抑菌环试验

菌株：变形链球菌，嗜酸乳杆菌，具核梭杆菌，牙龈卟啉单胞菌

培养基：营养琼脂、胰蛋白胨大豆琼脂和沙包琼脂培养基

抑菌样品的制备：分别称取基质空白牙膏、含有不同浓度的橄榄提取物牙膏1.0g(配方1，2，4的牙膏)，加入3mL去离子水搅拌均匀，无菌条件下用微量加样器在无菌滤纸上滴加20μl，待液体干燥后，置于冰箱保存备用。

抑菌试验：采用纸片扩散法。溶化培养基倒入平皿中，待冷却凝固后，加入0.1mL菌悬液(浓度为5*10⁵cfu/mL～5*10⁶cfu/mL)，用无菌玻棒均匀涂抹于琼脂表面。用无菌镊子取含有不同浓度的橄榄提取物的纸片放于琼脂表面，各纸片间间距相等。置于37℃恒温箱培养24h，测量纸片周围抑菌环的大小。抑菌试验重复3次。实验结果见表2。

表2：不同橄榄提取物添加量牙膏的抑菌试验结果

本研究所选取的4种口腔常见致病菌，变形链球菌为龋齿发病的主要致病菌，嗜酸乳杆菌也常在中重度龋病中发现，具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌则为牙龈、牙周、牙髓等疾病的高发可疑菌。由表2可以看出，橄榄提取物对这4种菌种都有较强的抑制作用，则相信其应用于口腔产品中也能发挥相似的抗菌能力，能更好地指导功能性产品的开发。

实施例5：毒理性实验

试验采用小鼠急性经口毒性试验，试验依据为”食品安全标准GB15193”。试验材料为加入橄榄提取物的膏体与纯净水配制成浓度为250mg/mL受试物。

SPF级健康昆明种小鼠10只，体重18.0～20.0g，雌雄各半。采用一次最大限度实验法，剂量为5000mg/kg体重，取样前摇匀。动物染毒前隔夜停食，不禁水，称重后一次灌胃染毒，染毒后继续停食2小时，观察记录14天内受试动物中毒症状及死亡数。

试验结果显示，给予受试物后14天观察期内未见动物出现明显中毒症状，试验结束时大体解剖观察未见明显的病理改变。试验动物体重变化及死亡情况见表3。表3数据表明:该受试物半致死量LD50大于5000mg/kg，即加入橄榄提取物的牙膏为实际无毒级。

表3：试验动物体重变化和死亡情况

实施例6：临床验证

临床试验验证添加有橄榄提取物的牙膏对测试人群是否有改善牙龈炎症(包括牙龈炎症、肿痛等)、牙龈出血、口腔溃疡等功效。

筛选了70名受试者为试验对象，其中A组35人，B组35人；男性32人，女性38人。选择标准:①身体健康，无系统性疾病，同意接受使用实验牙膏且同意按时配合检查者；②患有单纯性牙龈炎；③承诺在实验期间使用提供的口腔卫生措施，不使用其它牙膏；④血常规、血小板、出凝血时间为正常者。排除标准:①对口腔卫生保健产品有过敏史。②炎症、妊娠期龈炎、牙龈增生。③在参加研究之前一个月使用抗生素。

采用双盲、随机试验设计，以70名有单纯性牙龈炎问题的受试者为试验对象，采用口腔流行病学调查的方法检测受试者各自使用2种牙膏(代号分别为A、B；其中A为添加有橄榄提取物的牙膏，B为空白基质牙膏)前后12周时间全口所有牙齿，每颗牙4个位点(颊侧近中、中央、远中3各位点和舌侧中央)牙龈指数(GI)、探测后有出血的位点占全口总位点的百分数(BOP％)的变化情况。

将两组受试者的牙龈炎症出血指标GI、BOP％对比，当满足(对照-实验)/对照≥15％时，产品具有减轻牙龈炎症、改善牙龈出血功效。试验结果为两组受试者使用牙膏前后GI、BOP％的比较。

将A、B两组数据比较，使用A牙膏组较使用B牙膏组受试者的牙均GI、BOP％在12周后分别多改善10.1％、21％。

通过双盲随机试验，使用A、B两种牙膏均无不良反应。将A、B两组数据比较，使用A牙膏组较使用B牙膏组受试者的BOP％即牙龈炎症出血指标多改善21.7％，提示A牙膏有较明显的改善牙龈炎症功效。

以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (10)

1.一种不含氟牙膏，其特征在于，所述牙膏包括按重量份数计的以下组分：

所述橄榄提取物的制备方法如下：

(1)将去壳橄榄果和/或橄榄叶粉碎，加入浓度为50％～80％的乙醇溶液，液料比为20：1～60：1，在20～50℃下水解3～6小时，获得第一提取液；

(2)在所述第一提取液中加入盐酸，使盐酸的终浓度为0.1～0.3mol/L，在50～90℃下水解5～9小时，获得第二提取液；

(3)在所述第二提取液中加入氢氧化钠中和，直至pH为4～6，对溶液进行浓缩；

(4)在所得的浓缩液中加入等量的乙酸乙酯萃取三次，去除水相，将合并的乙酸乙酯相浓缩干燥，得到淡黄色粉末状的所述橄榄提取物。

2.如权利要求1所述的不含氟牙膏，其中所述橄榄提取物的所述制备方法的步骤(1)中，乙醇溶液为60～70％，液料比为30：1，水解温度为20～30℃，水解时间为4小时，提取次数为两次。

3.如权利要求1所述的不含氟牙膏，其中所述橄榄提取物的所述制备方法的步骤(2)中，盐酸的终浓度为0.2mol/L，水解温度为80℃，水解时间为6小时。

4.如权利要求1所述的不含氟牙膏，其特征在于，还包括：0.5～5.0重量份的甜味剂；0.5～2.0重量份的矫味剂。

5.如权利要求1所述的不含氟牙膏，其中所述摩擦剂为二氧化硅、磷酸氢钙、碳酸钙、羟基磷灰石中的一种或几种的混合物。

6.如权利要求1所述的不含氟牙膏，其中所述保湿剂为山梨醇、甘油或聚乙二醇中的一种或几种的混合物。

7.如权利要求1所述的不含氟牙膏，其中所述表面活性剂为月桂醇硫酸钠、月桂醇肌氨酸钠、可可脂钠、椰油酰胺丙基甜菜碱中的一种或几种的混合物。

8.如权利要求1所述的不含氟牙膏，其中所述增稠剂为羧甲基纤维素、卡拉胶、黄原胶、瓜尔胶中的一种或几种的混合物。

9.如权利要求4所述的不含氟牙膏，其中所述甜味剂为食品级甜菊苷、木糖醇、甜蜜素中的一种或几种的混合物，所述矫味剂为食品级草莓型、甜橙型、薄荷型矫味剂中的一种或几种混合物。

10.如权利要求4所述的不含氟牙膏的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)称量去离子水、甜味剂、橄榄提取物；

2)称量保湿剂；

3)将1)中的物料溶解搅拌均匀，形成澄清透明的液体；

4)将3)中的液体与2)中的保湿成分一起加入真空制膏机中，搅拌约5分钟；

5)称取摩擦剂、增稠剂、表面活性剂，预搅拌均匀；

6)将5)中搅拌好的粉料加入4)分散完全的液体混合物中，真空高速搅拌15分钟；

7)称取矫味剂，加入制膏机中，搅拌10分钟；

8)关闭高速搅拌，真空刮壁搅拌脱气10分钟；

9)出料、检验；

10)灌装、封尾。