CN105585616A - 核因子－κB多肽抑制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制核因子－κB，能预防和治疗类风湿性关节炎的多肽。其序列为KPARGDGFPAAM是全新的序列，本发明的有益效益是可用于治疗类风湿性关节炎，具有潜在的新药开发价值。

Description

核因子－κB多肽抑制剂及其应用

技术领域：

本发明涉及药物领域，具体涉及用于预防和治疗或预防类风湿性关节炎的核因子－κB多肽抑制剂。

背景技术：

类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是临床最常见的炎性关节病和主要致残因素之一。在全世界约为0.5％-1.0％，RA的发病在我国约为0.4％。RA可发生于任何年龄，随着年龄的增长，发病率也随之增高。女性高发年龄为45-55岁，性别与RA发病关系密切，男女之比约1:3。RA是一种病因尚未明了的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，属于自身免疫炎性疾病。患者常以手部或腕部疼痛及肿胀(特别是腕背部的肿胀)为首发症状，症状持续不缓解，普通的对症治疗虽可以缓解症状，但常常由于用药不规则或不足量而导致症状反复。病情进展时可以出现明显的晨僵，通常可达1小时以上，并不断加重；同时出现一定的关节功能障碍。

类风湿关节炎的病因和发病机制尚未完全明了，其基本病理特点是血管炎和滑膜炎。关节内滑膜血管增生，形成血管翳，导致滑膜增厚，渗出增多，分泌多种细胞因子，侵犯软骨并引起骨质损害。对其周围的肌腔、韧带、腱鞘以及肌肉等组织也均可侵蚀，从而影响关节的稳定，容易发生关节畸形而出现功能障碍。血管炎亦可侵犯周身各脏器组织，形成系统性疾病。

目前治疗RA的药物分为两大类：控制症状药和控制疾病药。由于RA病因不明，故当今并无堪称控制疾病的药。控制症状的抗风湿药分为四类：一、非甾体类抗炎药，通常称为一线药，这类药物种类繁多，国内市场已多达数十种。二、类固醇激素，激素是一个非常好的止痛抗炎药，但长期单独使用不能改善病情，反而带来许多副作用，激素作为二线慢作用药起效前的过渡性用是可以的，但用量要小，时间不宜过长。在病情较重，伴有关节外表现的患者，短期治疗冲击，并联合二线药治疗时必须的。三、慢作用抗风湿药，通常称为二线药，所谓慢作用药包括抗疟药、金盐、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它们治疗RA起效慢，长期作用对RA病情有一定缓解作用，故也称病情改善药。四、免疫抑制剂：常用有甲氨喋呤、环磷酰胺、硫唑嘌呤、雷公藤、青风藤等。

核因子-κB是一种广泛存在于细胞内的核转录因子，与关节炎中炎症的发生，软骨损伤，细胞迁移以及血管翳的形成都有重要的关系。以核因子-κB为作用靶点，可能成为治疗关节炎等疾病的新途径。非甾体类抗炎药，糖皮质激素、糖胺聚糖以及新型蛋白酶体抑制剂等发现都可抑制核因子-κB的激活。另外，核因子-κB诱骗性寡脱氧核苷酸和siRNA干扰治疗也取得了可喜的成就。尽管如此，并没有成熟开发的核因子－κB多肽抑制剂问世，用于治疗RA。

发明内容：

本发明目的是针对现有核因子-κB拮抗剂的特点，设计一种分子量小的核因子-κB多肽拮抗剂，可以避免产生抗原反应，更加适用于临床的应用。

本发明技术方案是提供一种核因子－κB多肽抑制剂1，其序列为KPARGDGFPAAM，及在治疗或预防类风湿性关节炎药物中的应用。

有益结果：

本发明中的核因子－κB多肽抑制剂1序列KPARGDGFPAAM，可以靶向抑制核因子－KB，抑制核因子－κB受体产生的生理或病理的效应，达到预防或治疗类风湿性关节炎的效果。

发明人经过大量实验获知核因子－κB多肽抑制剂能够抑制胶原型大鼠类风湿关节炎和DBA/1小鼠胶原型类风湿性关节炎的发展，体内实验证明具有显著的治疗类风湿型关节炎的效果，并且副作用少，用量少成本降低。说明本发明设计的核因子－κB多肽抑制剂1科学、合理、可行有效，能作为治疗或预防类风湿性关节炎药物。

具体实施方式

本发明多肽由上海吉尔合成。

实施例1

多肽在胶原诱导小鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用

构建胶原型小鼠关节炎动物模型，研究多肽对小鼠胶原诱导性关节炎(collageninducedarthritis,CIA)的治疗作用。采用小鼠作为受试动物，SPF级DBA/1小鼠90只(由上海西普尔-必凯实验动物有限公司(Sino-BritishSIPPRLab.AnimalLtd)提供，动物生产许可证号码：SCXK(沪)2008-0016)，雄性，7-8周龄，体重为18-22g，随机分成9组，分别是正常对照组，模型对照组，多肽低中高3个剂量组(0.2，0.4，0.8mg/kg)和阳性药对照组(甲氨蝶呤1mg/kg)。除正常组外，第0天各实验组建立小鼠CIA模型，方法是鸡软骨Ⅱ型胶原(cⅡ)用0.1mol/l醋酸溶解成4mg/ml的溶液，于4℃冰箱过夜。实验当天用Ⅱ型胶原与含4mg/mlMyeobaeteriumtuberculosisstrainH37Rv的完全弗氏胶原(CFA)等体积充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮内每只注射乳化剂50μl进行致敏，21d后用4mg/ml的Ⅱ型胶原(cⅡ)与不完全弗氏胶原(IFA)等体积充分乳化后以相同剂量的乳化剂于尾部进行再次免疫。造模第30d起皮下注射给药：多肽3个剂量组(0.2，0.4，0.8mg/kg)：每日两次，连续10天；阳性药对照组(甲氨蝶呤1mg/kg)：每五天一次，连续3次；正常对照组和模型对照组(生理盐水)：连续10天。分别于造模后第21天至第70天每3天称量体重、关节评分、分别检测左右后足足踝直径来观察药物对小鼠胶原型关节炎的影响。在第70d，脱臼处死小鼠。

关节炎评价指标如下：

1)关节评分

四肢:按0—4五级评分：0＝无红斑或红肿；1＝轻微的红斑或肿胀，其中的一个前/后趾关节有红斑或肿胀；2＝多于一只趾出现红斑或肿胀；3＝踝或腕关节下的足爪肿胀；4＝包括踝关节在内的全部足爪肿胀。小鼠四只足分别评分，最高评分为16分。

分别于造模后第21天至第70天每3天进行关节评分，并记录结果。

2)测量足踝直径

分别于造模前和造模后第21天至第70天每3天用游标卡尺测量小鼠左、右足踝内侧到外侧的直径和足踝厚度，并记录结果。

试验结果的计量资料以数学平均数加减标准差(mean±SD)表示,用SPSS11.0软件进行各给药组与对照组之间进行t检验,表中*表示p<0.05，**表示p<0.01。

结果：造模后小鼠与正常小鼠相比较，在小鼠尾部皮内注射含灭活的结核分枝杆菌完全弗氏胶原和胶原等体积混合的乳化剂，21天后尾部皮内注射不完全弗氏胶原和胶原等体积混合的乳化剂左后，免疫后第27天，CIA小鼠足爪红肿，关节炎指数评分增高，模型组第45-60天为肿胀高峰，模型组自第35天开始体重几乎不增加，后期还略微有下降。多肽在胶原诱导小鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用见表1。由表可知，多肽在胶原诱导小鼠关节炎动物模型都能发挥体内免疫保护作用，具体结果如下：

多肽对小鼠胶原型关节炎足爪肿胀度的影响，阳性对照组、多肽高、中、低剂量组足爪肿胀度与模型组比较，均有极显著性差异(p<0.01)实验结果具有统计学意义。多肽对小鼠胶原型关节炎关节肿胀度的影响，阳性对照组、多肽高、中、低剂量组关节肿胀度与模型组比较，均有极显著性差异(p<0.01)，实验结果具有统计学意义。多肽对胶原型关节炎小鼠临床评分的影响，多肽低、中、高剂量组四肢评分显著低于模型对照组(p<0.01)，与模型对照组比较极显著性差异，实验结果具有统计学意义。

表1多肽对胶原型类小鼠关节炎动物模型体内免疫保护作用

*表示p<0.05，**表示p<0.01.

结论：多肽对小鼠胶原型关节炎具有治疗作用。

SEQUENCELISTING

<110>苏州普罗达生物科技有限公司

<120>核因子－κB多肽抑制剂及其应用

<130>

<160>1

<170>PatentInversion3.3

<210>1

<211>12

<212>PRT

<213>人工序列

<400>1

LysProAlaArgGlyAspGlyPheProAlaAlaMet

1510

Claims (2)

1.核因子－κB多肽抑制剂，其特征在于其序列为KPARGDGFPAAM。

2.根据权利要求1所述的核因子－κB多肽抑制剂在制备治疗或预防类风湿性关节炎药物中的应用。