CN105572117A - 一种适合全自动生化分析仪的尿总蛋白检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及尿总蛋白染料结合法(邻苯三酚红)检测技术领域,特别涉及一种尿总蛋白检测试剂,试剂R中含有邻苯三酚红、甲醇、钼酸钠、琥珀酸、草酸钠、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠和牛血清白蛋白,该试剂适合与各种全自动生化分析仪配套使用。
Description
技术领域
本发明涉及尿总蛋白检测技术领域,特别涉及一种适合全自动生化分析仪的尿总蛋白检测试剂。
背景技术
血液中常会有定量的对人类生命活动不可或缺的蛋白存在。一部分的蛋白会在肾脏的丝球体中过滤进入尿液中,但又会在肾小管被吸收而回到血液中。 因此,若肾脏的机能正常,在尿液中出现的蛋白量只有极少量(每日排出量小于150 mg),但是当肾脏与尿管出现障碍时就会漏出多量的蛋白变成蛋白尿。正常人尿中有微量蛋白,正常范围内定性为阴性,记为(-)。尿中蛋白质含量多达0.15g/24h以上时,称蛋白尿,尿常规定性可出现阳性。分型 1.肾小球性蛋白尿 这是最常见的一种蛋白尿。由于肾小球滤过膜因炎症、免疫、代谢等因素损伤后滤过膜孔径增大、断裂和(或)静电屏障作用减弱,血浆蛋白质特别是清蛋白滤出,超出近端肾小管重吸收能力而形成的蛋白尿。若肾小球损害较重,球蛋白及其他大相对分子质量蛋白滤出也可增加。
糖尿病肾病早期,肾小球基底膜受损较轻,故只有微量白蛋白漏出。早期糖尿病肾病uAE为 15~200微克/分,临床糖尿病肾病>200微克/分。
临床上常用的尿总蛋白检测方法有比浊法、染料结合法和双缩脲比色法。
1. 比浊法
比浊法是通过加入磺基水杨酸(SSA)、三氯乙酸(TCA)、钨酸于尿液中,使蛋白质沉淀形成一定的浊度,然后通过比浊的方法检测蛋白质含量。该方法准确度较差,抗干扰能力差。
2. 染料结合法
染料结合法分为直接法和沉淀法两类。直接法是通过染料与蛋白质结合时,其最大吸收峰的漂移来检测的。该方法所用的染料有考马斯亮蓝G-250、邻苯三酚红和苯甲紫等,这类方法具有蛋白质与染料结合迅速,呈色稳定和灵敏度高等优点。
3. 双缩脲比色法
蛋白质在碱性溶液中可与CU2+形成紫色化合物,在一定浓度范围内,蛋白质浓度与紫色化合物颜色的深浅成正比。双缩脲反应的灵敏度低,抗干扰能力差。
染料结合法相对于其他两种方法具有稳定性好,灵敏度高的特点。邻苯三酚红(PR)与钼酸(Movi)形成的红色化合物(最大吸收波长470nm),在酸性条件下能与蛋白质结合成蓝紫色复合物(PR-Mo-Protein)(最大吸收波长604nm),反应所形成的蓝紫色跟样品中蛋白质含量成正比。该方法简单实用,检测结果准确,检测范围广,适合全自动生化分析仪。
鉴于此,本发明在邻苯三酚红法的基础上,优化反应体系,添加多种抗干扰物质和稳定剂,显著改善了试剂的抗干扰能力。
发明内容
针对于尿总蛋白检测,本发明提供了一种适合与全自动生化分析仪配套使用的尿总蛋白检测试剂盒,该试剂盒与常规的试剂盒相比,使用简单、方便,具有很好的准确度、重复性及良好的检测范围,有利于试剂在临床上的推广应用。
基本原理
邻苯三酚红(PR)与钼酸(Movi)形成的红色化合物(最大吸收波长470nm),在酸性条件下能与蛋白质结合成蓝紫色复合物(PR-Mo-Protein)(最大吸收波长604nm),反应所形成的蓝紫色跟样品中蛋白质含量成正比。
本发明是通过以下步骤得到的:
一种尿总蛋白检测试剂,包括试剂R,所述试剂R的组成如下:
1.一种适合全自动生化分析仪的尿总蛋白检测试剂盒,由R单试剂组成。其特征在于:
R: 邻苯三酚红 60μmol/L
甲醇 4.0%
钼酸钠 40μmol/L
琥珀酸 5.9g/L
草酸钠 0.14g/L
苯甲酸钠 0.5 g/L
十二烷基硫酸钠 20mg/L
牛血清白蛋白 1.5g/L
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂R在使用时的用量为R= 300μL。
本发明的有益效果是:
本发明选择染料结合法(邻苯三酚红)设计试剂配方用于检测尿总蛋白,该试剂适用于多种全自动生化分析仪。
附图说明
图1为两种试剂的相关性曲线图;
图2为本发明试剂开瓶稳定性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明:
(1)实施例1
R: 邻苯三酚红 60μmol/L
甲醇 4.0%
钼酸钠 40μmol/L
琥珀酸 5.9g/L
草酸钠 0.14g/L
苯甲酸钠 0.5 g/L
十二烷基硫酸钠 20mg/L
牛血清白蛋白 1.5g/L
本实施例试剂的使用方法:
本实施例描述的尿总蛋白检测试剂,在使用时采用全自动生化分析仪,如日立7180全自动分析仪等,利用一点终点法进行测定。将样本和试剂R的比例设定为5:300,在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本,操作如表1:
表1实施例1试剂检测方法
尿总蛋白的含量(mg/dL)=(∆A测定÷∆A标准)×C标准。
实施例2
干扰性试验:取新鲜混合尿液,分成2等份,然后将每等份再分成5等份,加入不同的干扰物质,使其在尿液中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例1所得试剂,与市场常见并认可的尿总蛋白试剂同时对比测定尿总蛋白的含量,对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见表2。相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值-对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%;
表2实施例试剂抗干扰性能比较
由表2可以看出,实施例1试剂在尿酸≤2250mg/L、胆红素≤100mg/L、血红蛋白≤200mg/L、甘油三酯≤22.6mmol/L对测试结果没有明显干扰。与对照试剂检测结果一致,说明实施例1的试剂在准确度和抗干扰能力上达标。
实施例3
相关性实验:利用实施例1配方配制试剂,与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的尿总蛋白试剂盒进行对照检测,同时检测了20个临床血清样本,检测结果如表3所示。并获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示),通过检测结果显示,两个试剂盒的相关系数为0.999,说明了两者有极大的相关性。
表3实施例1试剂与市场常见并得到认可的血清铜测定试剂盒对比检测结果
试验所用校准品和质控品分别为:
校准品:尿总蛋白的含量为19.2 mg/dL。
质控品:尿总蛋白的靶值为15.8mg/dL,靶值范围:12.6-19.0mg/dL。
实施例4
试剂稳定性验证试验的具体操作方法:
将本发明实施例1~3中所得检测试剂作为试验组,取一种市售尿总蛋白检测试剂盒作为对照组,试验组与对照组试剂每组各自取相同的两份,一份做15天开瓶稳定性试验,将试剂开瓶放置在仪器的2-8℃冷藏箱中(15天不取出),作为15天开瓶稳定性检测;另一份做37℃热稳定性检测试验,封闭放置在37℃恒温水浴锅中(每天仅在检测的时候取出,检测完毕后,依然封口放回37℃水浴锅中,连续7天),作为7天37℃热稳定性验证。将试剂同时在日立7180全自动生化分析仪器上,按照如下表1方法进行检测,并在仪器上建立标准曲线。取冻干粉质控品,溶解均匀后,平均分成15份,-20℃储存,每天质控一个,并且跟踪检测结果,其开瓶跟踪监测趋势如图2。
Claims (2)
1.一种适合全自动生化分析仪的尿总蛋白检测试剂盒,由R单试剂组成,其特征在于:
R: 邻苯三酚红 60μmol/L
甲醇 4.0%
钼酸钠 40μmol/L
琥珀酸 5.9g/L
草酸钠 0.14g/L
苯甲酸钠 0.5 g/L
十二烷基硫酸钠 20mg/L
牛血清白蛋白 1.5g/L。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂R在使用时的用量为R= 300μL。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106990102A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-07-28 | 山东大学齐鲁医院 | 一种全自动生化分析仪用尿液脑脊液总蛋白检测试剂 |
CN112924418A (zh) * | 2019-12-05 | 2021-06-08 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 特定蛋白分析系统 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5908787A (en) * | 1997-09-23 | 1999-06-01 | Bayer Corporation | Total protein detection method |
US20080145948A1 (en) * | 2006-12-18 | 2008-06-19 | 3M Innovative Properties Company | Chemical indicator test strip |
-
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5908787A (en) * | 1997-09-23 | 1999-06-01 | Bayer Corporation | Total protein detection method |
US20080145948A1 (en) * | 2006-12-18 | 2008-06-19 | 3M Innovative Properties Company | Chemical indicator test strip |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
刘预等: "微量蛋白质邻苯三酚红-钼酸钠比色测定法", 《临床检验杂志》 * |
李岱容等: "邻苯三酚红法定定量测定尿蛋白", 《江西医学检验》 * |
胡望平等: "用邻苯三酚红钼络合法测定尿液及脑脊液蛋白", 《上海医学检验杂志》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106990102A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-07-28 | 山东大学齐鲁医院 | 一种全自动生化分析仪用尿液脑脊液总蛋白检测试剂 |
CN112924418A (zh) * | 2019-12-05 | 2021-06-08 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 特定蛋白分析系统 |
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