CN105572109B - 肿瘤检查用组合物及肿瘤检查用试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及肿瘤检查用组合物及肿瘤检查用试纸。本发明的目的在于提供一种新颖恶性肿瘤检查方法,其并非有损身体的血液检查,对受检者来说没有压力,而且简便且伪阳性率低。本发明涉及一种包含芳香族醛、特别是肉桂醛的肿瘤检查用组合物、及使该肿瘤检查用组合物含有于滤纸中并进行干燥而获得的肿瘤检查用试纸。
Description
技术领域
本发明涉及一种肿瘤、特别是恶性肿瘤的检查用组合物及检查用试纸。
背景技术
以往已知在人类癌组织中存在总称为聚胺的癌相关物质。聚胺是低分子的非蛋白性氮化合物,并且是如果细胞的增生或分化变活跃就会增加的物质。认为如果存在恶性肿瘤,那么该聚胺向尿排泄。另外,已知特别是作为聚胺的一种的二乙酰精胺(Diacetylspermine)和癌的相关性高于其它聚胺。因此,能够通过对尿中的聚胺、特别是二乙酰精胺进行测定来进行恶性肿瘤检查。
然而,在仅测定尿中的聚胺来判定恶性肿瘤时,伪阳性率高而缺乏准确性。因此,现状是将聚胺的测定和其它肿瘤标记物进行组合来利用尿检查实施恶性肿瘤检查。
根据这样的状况,期待除血液检查以外代替聚胺检查的新颖恶性肿瘤检查方法。
作为和聚胺并列的癌组织特异性产生的物质,可以列举吲哚乙酸(IAA)。关于IAA,已知从作为重要的必需氨基酸的色氨酸经色胺(血清素)、然后经吲哚乙醛而获得IAA的生成合成路径。认为该吲哚乙酸也有用作肿瘤标记物的可能性(非专利文献1)。
[现有技术文献]
[非专利文献]
[非专利文献1]J UOEH(产业医科大学杂志),5(2):213-220,1983年
发明内容
[发明要解决的问题]
本发明的目的在于提供一种新颖恶性肿瘤检查方法,其并非有损身体的血液检查,对受检者来说没有压力,而且简便且伪阳性率低。
[解决问题的技术手段]
本发明者为解决所述课题而反复进行努力研究,结果发现特定的组合物和从癌细胞产生的尿中的IAA进行显色反应,利用其确立了简便的恶性肿瘤检查方法。另外,发现如果应用使用该特定的组合物所获得的试纸,那么能够以非常低的伪阳性率检查出恶性肿瘤。
即,本发明涉及一种肿瘤检查用组合物,其包含芳香族醛;一种肿瘤检查用试纸,其是使滤纸吸收包含芳香族醛的肿瘤检查用组合物,其后进行干燥而获得;一种肿瘤检查方法,其包括使所述肿瘤检查用组合物和尿进行接触;及一种肿瘤检查方法,其包括使所述肿瘤检查用试纸和尿进行接触的步骤。
[发明效果]
[1]一种肿瘤检查用组合物,其包含芳香族醛;该组合物和尿中的IAA进行反应而变色。因为IAA从癌组织排出的可能性极高,因此能够通过观察有无变色而使癌检查简便且以低伪阳性率检查出恶性肿瘤。
[2]根据所述[1]所述的肿瘤检查用组合物,其还包含羟基二羧酸;在该情况下,能够提高显色的强度,颜色的变化变明确,进一步使伪阳性率降低。另外,通过增强显色的强度,还能够发现仅产出少量IAA的初期恶性肿瘤,能够期待癌的早期发现。
[3]根据所述[1]或[2]所述的肿瘤检查用组合物,其中所述芳香族醛为选自由苯甲醛、萘甲醛、蒽甲醛、菲甲醛、水杨醛、苯乙醛、3-苯丙醛、甲苯甲醛、(N,N-二甲氨基)苯甲醛、乙酰氧基苯甲醛、肉桂醛、乙烯基苯甲醛、甲基肉桂醛、乙基肉桂醛、及苄甲醛所组成的群中的至少一种;在该情况下,明确表现出由反应引起的显色,因此能够防止误认等。
[4]根据所述[2]或[3]所述的肿瘤检查用组合物,其中所述芳香族醛为苯甲醛及肉桂醛的至少一种,且所述羟基二羧酸为L-酒石酸;在该情况下,进一步清楚地表现出由反应引起的显色,因此能够防止误检查等。
[5]在根据所述[4]所述的肿瘤检查用组合物,其中所述苯甲醛为来自无花果的种子的苯甲醛,所述肉桂醛为来自肉桂油的肉桂醛的情况下,能够以极低的价格提供肿瘤检查用组合物。
[6]一种肿瘤检查用试纸,其是使滤纸吸收根据所述[1]至[5]中任一项所述的肿瘤检查用组合物,其后使所述滤纸干燥而获得;通过使该试纸和包含IAA的尿进行接触,试纸在数秒钟~数分钟左右内变色。另一方面,在不含IAA的尿、或包含极少量的IAA的尿的情况下,试纸不变色。因此,肿瘤检查用试纸对癌检查来说非常简便且有用。
[7]一种肿瘤检查方法,其包括使根据所述[1]至[5]中任一项所述的肿瘤检查用组合物和尿进行接触的步骤;该方法能够仅通过使作为液体的肿瘤检查用组合物和尿进行接触并确认显色反应便判断恶性肿瘤,因此非常简便。
[8]一种肿瘤检查方法,其包括使根据所述[6]所述的肿瘤检查用试纸和尿进行接触的步骤;该方法能够将肿瘤检查用组合物的使用量抑制得较低,且能够明确地确认显色反应,因此非常简便。
[9]根据[8]所述的肿瘤检查方法,其还包括:使已和尿接触过的所述肿瘤检查用试纸和三氯乙酸溶液进行接触的步骤、及将通过和三氯乙酸进行接触而在所述试纸上显色的色调和事先准备的比色表进行比对的步骤;如果为该方法,那么能够更明确地确认变色,因此能够简易而且更准确地进行检查。
附图说明
图1是针对肿瘤检查组合物中含有L-酒石酸的情况(实线)、及不含L-酒石酸的情况(虚线),表示使用各组合物获得的试纸的吸光度的差异的图。
具体实施方式
以下对本发明详细地进行说明。
本发明涉及一种能够用于简易而且准确地判定恶性肿瘤的肿瘤检查用组合物、及利用其的肿瘤检查用方法、及肿瘤检查用试纸。
在下述表1中,表示各种慢性疾病患者的尿中的IAA浓度(μg/mg)。根据该结果可知,如果存在恶性肿瘤,那么尿中的IAA浓度高于正常人。因此,如果尿中的IAA浓度为一定值以上,那么应怀疑存在恶性肿瘤。根据这样的试验结果,应将尿中存在的IAA看作和癌相关的“癌相关物质”,能够用于作为癌的标记物有用的筛查物的检查。另外,在慢性疾病患者的试验成绩中,在胃溃疡、胃息肉的例中伪阳性率不高,因此也可以说尿中的IAA特别是对胃癌的筛查或胃癌治疗的监测有效。
尿中的IAA的测定方法是利用IAA和肉桂醛(3-苯基丙烯醛)等芳香族醛的显色反应。利用该反应能够检测出尿中的一定浓度以上的IAA。使尿和组合物进行接触,如果确认到显色反应,那么意味着在尿中含有特定量的IAA,而提示出癌的可能性。该显色反应的详细内容并不明确,推测IAA的一部分使肉桂醛等芳香族醛的醛基氧化,形成共轭双键,吸收可见光而显色。
[肿瘤检查用组合物]
本发明的肿瘤检查用组合物是包含芳香族醛的组合物,并且是能够用于发现肿瘤、特别是恶性肿瘤的液体组合物。通过使本发明的肿瘤检查用组合物和包含一定浓度以上的IAA的尿进行接触,液体显色为红色~红褐色。
在本说明书中,芳香族醛是具有苯核的醛。本发明中,芳香族醛没有特别限定,例如可以列举:苯甲醛、萘甲醛、蒽甲醛、菲甲醛、水杨醛、苯乙醛、甲苯甲醛、(N,N-二甲氨基)苯甲醛、乙酰氧基苯甲醛、肉桂醛、乙烯基苯甲醛、甲基肉桂醛、乙基肉桂醛、苄甲醛等,其中,就反应性方面来说,优选苯甲醛、肉桂醛,如果还考虑到经济性,那么进而优选肉桂醛。
肉桂醛可以使用从肉桂油萃取及/或浓缩而成的肉桂醛。例如所述液体组合物可以将向肉桂油添加盐酸分离油分,从而提高了作为上清液的主要成分的肉桂醛的浓度的组合物设为所述液体组合物。另外,苯甲醛可以使用从无花果的种子萃取及/或浓缩而成的苯甲醛。
本发明的肿瘤检查用组合物中的芳香族醛的含量通常为30重量%以上,优选50重量%以上,更优选70重量%以上,进而优选80重量%以上,例如为85重量%~90重量%。如果含有30重量%以上的芳香族醛,那么能够确认明确的显色反应。
本发明的肿瘤检查用组合物可以还包含羟基二羧酸类。羟基二羧酸在分子中包含1个以上的羟基和2个羧基,例如可以列举:苹果酸、酒石酸,优选L-酒石酸。如果在肿瘤检查用组合物中包含羟基二羧酸类,那么显色反应变强5~20%左右,能够明确表现出显色反应而防止误检查。
羟基二羧酸能够以10%以下含有于本发明的肿瘤检查用组合物中,优选5%以下,更优选1%以下,例如能够含有0.01重量%以上且1重量%以下。如果过多地包含羟基二羧酸类,那么检查能力反而会降低。
本发明的肿瘤检查用组合物可以还包含其它化合物。关于所述其它化合物,例如可以列举:乙醇等醇类、盐酸等无机酸类、乙酸等有机酸类、此外亚硝酸钠等。
关于所述其它化合物的含量,各化合物每种能够以10%以下含有于本发明的肿瘤检查用组合物中,优选5%以下,更优选1%以下,例如能够含有0.01重量%以上且1重量%以下。
作为本发明的肿瘤检查用组合物的使用方法,可以列举在常温、常压下使本发明的肿瘤检查用组合物和尿进行接触的方法。具体来说,将肿瘤检查用组合物和尿以按重量计1:1~1:10000、优选1:10~1:1000的比率进行混合。
如果向该混合液添加作为蛋白去除剂的三氯乙酸溶液,那么在尿中包含一定浓度以上的IAA的情况下,混合液迅速地显色为红色~红褐色。由此,能够判断在尿中是否包含一定浓度以上的IAA。
[肿瘤检查用试纸]
作为本发明中的肿瘤检查方法,有已说明的使肿瘤检查用组合物和尿进行接触的方法,作为其它方法,还可以列举:制作肿瘤检查用试纸,使肿瘤检查用试纸和尿进行接触,观察肿瘤检查用试纸的颜色变化的方法。
作为本发明的肿瘤检查用试纸的制造方法,可以列举以下方法。即,该方法包括如下步骤:使滤纸浸渍于包含芳香族醛的肿瘤检查用组合物中并进行干燥。其次,向已干燥的滤纸喷雾亚硝酸钠水溶液,再次进行干燥。然后,向滤纸的单面贴附双面胶带并切割为特定的尺寸,制作IAA测定用片(肿瘤检查用试纸)。
制造肿瘤检查用试纸所使用的肿瘤检查用组合物和已说明的肿瘤检查用组合物相同。所使用的亚硝酸钠水溶液的浓度为2重量%~15重量%。
本发明的肿瘤检查用试纸的使用方法是使所制作的肿瘤检查用试纸和测定对象的尿进行接触,然后使其和作为蛋白去除剂的三氯乙酸溶液进行接触。如果在尿中含有一定浓度以上的IAA,那么肿瘤检查用试纸变色为红色~红褐色。由此,能够检查在尿中是否含有IAA。通过将在所述试纸上显色的色调和事先准备的比色表任意选择性地进行比对,能够进一步容易地得出检查结果。
本发明的肿瘤检查用试纸具有如下特征:和作为液体的本发明的肿瘤检查用组合物相比,操作极为容易,而且变色非常清楚,因此能够防止误检查。
如果使试纸吸收尿,那么尿中的IAA的反应产物以吸光系数ε=1.7×105L-1·cm-1在波长495nm下吸光。即便为IAA量少的初期恶性肿瘤癌症患者的尿,本发明的肿瘤检查用试纸仍变色,因此能够期待癌的早期发现。
[实施例]
以下,通过实施例对本发明详细地进行说明,但这些实施例只不过为用以适当说明本发明的例示,本发明并不受任何限定。
[实施例1]
各种癌症患者和健康正常人的尿中吲哚乙酸的关系
向各种癌症患者及非癌症患者的尿液1ml添加内部标准液吲哚乙酸(IAA)0.1ml,并在其中添加0.01ml的乙酸乙酯及0.01ml的L-酒石酸,以4000rpm离心10分钟后,将上清液注入到HPLC(High Performance Liquid Chromatograph,高效液相色谱仪)中而定量尿中的IAA。获得各种癌症患者及健康正常人的尿中的IAA量的信息(参照表1、表2)。
[肿瘤检查组合物的制备]
另外,制备向肉桂油(symarom Pte Ltd制造制造编号cassia 0-3031)100ml添加盐酸0.5ml而分离油分,从而提高了作为上清液的主要成分的肉桂醛的浓度的组合物(浓度95%)作为检查试剂(肿瘤检查用组合物),将所获得的检查试剂1ml添加到已采集到试管中的新鲜尿液15ml中,进而投下三氯乙酸0.5ml。
在含有特定量的IAA的情况下,瞬间发生显色反应,将发生显色反应(红色)的情况设为阳性,将发现微弱的显色反应(粉红色)的情况设为阳阴性,将未发现变色的情况设为阴性,并将结果记载于表1、表2中。
此外,实施例中用作试样的尿都是在检查的5分钟前采集的未服用其它药物者的新鲜尿液。
[表1]
表1各种癌症患者的IAA产生量和健康正常人的IAA产生量(μg/mg)
[表2]
表2各种慢性疾病患者的IAA产生量(μg/mg)
如表1、表2所示,可知在包含约15μg/mg左右的IAA量的尿的情况下,表现出显色反应,对发现恶性肿瘤具有效果。另外,虽然还存在癌以外的患者也为阳性反应的情况,但在正常尿中为阴性反应,明确地表现出差异。
[实施例2]
[肿瘤检查用试纸的制作及利用其的筛查]
使滤纸(ADVANTEC公司101285)浸渍于市售的肉桂醛100ml、盐酸1.5ml、乙酸0.3ml、乙醇1.0mL、及L-酒石酸0.5mL的混合液中,在常温下进行干燥。向干燥后的滤纸喷雾亚硝酸钠的水溶液(利用10ml的蒸馏水对98%亚硝酸水溶液1ml进行稀释而成的溶液),再次进行干燥。然后向滤纸的单面贴附双面胶带并沿长度方向进行切割,而制作0.5cm×2cm尺寸的IAA测定用试纸片。使该试纸浸渍于尿中,在约5秒钟后取出,将其浸渍在三氯乙酸溶液中后取出,确认试纸的变色状况。
表3是基于胃癌的进展的IAA量及对由试纸产生的变色状况进行确认而获得的结果。另外,表4是利用该试纸进行筛查试验的结果。
[表3]
表3Borrmann4型(进展期胃癌)的IAA产生量(μg/mg)
[表4]
表41200人的普通尿的癌筛查结果(μg/mg)
如表3所示,不管癌的进展如何,都通过试纸表现出阳性反应。另外,如表4所示,发现了早期的恶性肿瘤的癌。
具体来说,在以1200人的普通尿液为对象的显色反应的检查试验中发现了6名癌症患者。其详细情况为肝癌2人、胃癌2人、食道癌1人,尿中吲哚乙酸(IAA)量的平均值都为20μg/mL。另一方面,还存在对大肠癌或肝炎、肝硬化也观察到弱阳性反应的情况。没有观察到其他成人病患者及慢性型患者的阳性反应。根据该试验结果,明确显示表现出检查试剂的阳性反应的μg值。即,作为阳性反应值,如果为20μg/1mL(20ppm)以上,那么癌的可能性极高,如果为15μg~19μg/1mL(15ppm)范围内,那么提示出早期癌的可能性和肝病的可能性。
图1是实施例2中针对L-酒石酸的有无,对吸光度进行测定的图。可知最大吸光波长下的吸光度也增加了15%。
[比较例]
表5是实施例1中使用作为二羧酸的邻苯二甲酸代替L-酒石酸所获得的结果。在HPLC测定中,测定到比实际的IAA值高的IAA值。这大概是还测定到由邻苯二甲酸的反应产生的5-HIAA的结果。即,表示如果使用邻苯二甲酸,那么有成为伪阳性的情况。
[表5]
表5使用邻苯二甲酸的情况的结果
[产业上的可利用性]
本发明的肿瘤检查用组合物作为检测IAA的试剂有用。IAA是从癌细胞产生的化合物,因此混入到癌症患者的尿中。因此,能够通过使用本发明的肿瘤检查用组合物对尿中的IAA进行检测来实施癌检查。另外,如果使用发明的肿瘤检查用试纸,那么能够更简易地实施癌检查。
目前的癌诊查是对存在于血液中的癌的特异性蛋白质或特定酶等进行检测来进行癌的诊断,但本发明的癌检查的特征在于:其是利用以肉桂醛作为显色试剂的尿定性试纸的胃癌的体外诊断用医药品;并且作为癌的目标标记物,以尿中IAA(吲哚乙酸)为指标。
使用试纸进行癌检查是以往没有的划时代的发明。另外,通过在肿瘤检查用组合物、肿瘤检查用试纸中包含酒石酸,而获得尿中IAA的显色强度,对早期癌的发现有效。进而本检查试纸因为检体为尿,所以除检查不伴有刺激或痛苦的优点外,检查也迅速且简易,能够在家中容易地进行检查。
和被认为是癌的肿瘤标记物的尿中聚胺的测定检查相比,尿中IAA的测定检查显示高12%的阳性率。这表示作为胃癌的指标,IAA最具效果。
Claims (5)
1.一种肿瘤检查用试纸,其是使滤纸吸收包含芳香族醛和羟基二羧酸的肿瘤检查用组合物,其后使所述滤纸干燥而获得;其中所述芳香族醛为肉桂醛,所述羟基二羧酸为L-酒石酸。
2.根据权利要求1所述的肿瘤检查用试纸,其中所述肉桂醛是来自肉桂油的肉桂醛。
3.一种芳香族醛和羟基二羧酸用于制造肿瘤检查用组合物的用途,该组合物是和尿进行接触而检查肿瘤的,且所述芳香族醛为肉桂醛,所述羟基二羧酸为L-酒石酸。
4.一种芳香族醛和羟基二羧酸用于制造肿瘤检查用组合物的用途,该组合物包含于和尿进行接触而检查肿瘤的肿瘤检查用试纸中,且所述芳香族醛为肉桂醛,所述羟基二羧酸为L-酒石酸。
5.根据权利要求4所述的用途,其使已和尿接触过的所述肿瘤检查用试纸和三氯乙酸溶液进行接触,且
将通过和三氯乙酸溶液进行接触而在所述试纸上显色的色调和事先准备的比色表进行比对。
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