TWI551862B - 腫瘤檢查用組合物及腫瘤檢查用試紙 - Google Patents
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Description
本發明係關於一種腫瘤、特別是惡性腫瘤之檢查用組合物及檢查用試紙。
先前已知於人類癌組織中存在總稱為聚胺之癌相關物質。聚胺為低分子之非蛋白性氮化合物,並且係若細胞之增生或分化變活躍則會增加之物質。認為若存在惡性腫瘤,則該聚胺向尿排泄。又,已知特別是作為聚胺之一種的二乙醯精胺(Diacetylspermine)與癌之相關性高於其他聚胺。因此,能夠藉由對尿中之聚胺、特別是二乙醯精胺進行測定來進行惡性腫瘤檢查。
然而,於僅測定尿中之聚胺來判定惡性腫瘤時,偽陽性率較高而缺乏準確性。因此,現狀為將聚胺之測定與其他腫瘤標記物進行組合來利用尿檢查實施惡性腫瘤檢查。
根據此種狀況,期待除血液檢查以外代替聚胺檢查之新穎惡性腫瘤檢查方法。
作為與聚胺並列之癌組織特異性產生之物質,可列舉吲哚乙酸(IAA)。關於IAA,已知自作為重要之必需胺基酸的色胺酸經色胺(血清素)、繼而經吲哚乙醛而獲得IAA之生成合成路徑。認為該吲哚乙酸亦有用作腫瘤標記物之可能性(非專利文獻1)。
[非專利文獻1]J UOEH(產業醫科大學雜誌),5 (2):213-220, 1983年
本發明之目的在於提供一種新穎惡性腫瘤檢查方法,其並非有損身體之血液檢查,對受檢者而言無壓力,而且簡便且偽陽性率較低。
本發明者為解決上述課題而反覆進行努力研究,結果發現特定之組合物與自癌細胞產生之尿中之IAA進行顯色反應,利用其確立了簡便之惡性腫瘤檢查方法。又,發現若應用使用該特定之組合物所獲得之試紙,則能夠以非常低之偽陽性率檢查出惡性腫瘤。
即,本發明係關於一種腫瘤檢查用組合物,其包含芳香族醛;一種腫瘤檢查用試紙,其係使濾紙吸收包含芳香族醛之腫瘤檢查用組合物,其後進行乾燥而獲得;一種腫瘤檢查方法,其包括使上述腫瘤檢查用組合物與尿進行接觸;及一種腫瘤檢查方法,其包括使上述腫瘤檢查用試紙與尿進行接觸之步驟。
[1]一種腫瘤檢查用組合物,其包含芳香族醛;該組合物與尿中之IAA進行反應而變色。由於IAA自癌組織排出之可能性極高,因此可藉由觀察有無變色而使癌檢查簡便且以低偽陽性率檢查出惡性腫瘤。
[2]如上述[1]記載之腫瘤檢查用組合物,其進而包含羥基二羧酸;於該情形時,能夠提高顯色之強度,顏色之變化變明確,進一步
使偽陽性率降低。又,藉由增強顯色之強度,亦能夠發現僅產出少量IAA之初期惡性腫瘤,能夠期待癌之早期發現。
[3]如上述[1]或[2]記載之腫瘤檢查用組合物,其中上述芳香族醛為選自由苯甲醛、萘甲醛、蒽甲醛、菲甲醛、水楊醛、苯乙醛、3-苯丙醛、甲苯甲醛、(N,N-二甲胺基)苯甲醛、乙醯氧基苯甲醛、肉桂醛、乙烯基苯甲醛、甲基肉桂醛、乙基肉桂醛、及苄甲醛所組成之群中之至少一種;於該情形時,明確表現出由反應引起之顯色,因此能夠防止誤認等。
[4]如上述[2]或[3]記載之腫瘤檢查用組合物,其中上述芳香族醛為苯甲醛及肉桂醛之至少一種,且上述羥基二羧酸為L-酒石酸;於該情形時,進一步清楚地表現出由反應引起之顯色,因此能夠防止誤檢查等。
[5]如上述[4]記載之腫瘤檢查用組合物,其中上述苯甲醛為源自無花果之種子者,上述肉桂醛為源自肉桂油者,於該情形時,能夠以極低之價格提供腫瘤檢查用組合物。
[6]一種腫瘤檢查用試紙,其係使濾紙吸收如上述[1]至[5]中任一項記載之腫瘤檢查用組合物,其後使上述濾紙乾燥而獲得;藉由使該試紙與包含IAA之尿進行接觸,試紙於數秒鐘~數分鐘左右內變色。另一方面,於不含IAA之尿、或包含極少量之IAA之尿之情形時,試紙不變色。因此,腫瘤檢查用試紙對癌檢查而言非常簡便且有用。
[7]一種腫瘤檢查方法,其包括使如上述[1]至[5]中任一項記載之腫瘤檢查用組合物與尿進行接觸之步驟;該方法能夠僅藉由使作為液體之腫瘤檢查用組合物與尿進行接觸並確認顯色反應而判斷惡性腫瘤,因此非常簡便。
[8]一種腫瘤檢查方法,其包括使如上述[6]記載之腫瘤檢查用試紙與尿進行接觸之步驟;該方法能夠將腫瘤檢查用組合物之使用量抑
制得較低,且能夠明確地確認顯色反應,因此非常簡便。
[9]如[8]記載之腫瘤檢查方法,其進而包括:使已與尿接觸過之上述腫瘤檢查用試紙與三氯乙酸溶液進行接觸之步驟、及將藉由與三氯乙酸進行接觸而於上述試紙上顯色之色調與事先準備之比色表進行比對之步驟;若為該方法,則能夠更明確地確認變色,因此能夠簡易而且更準確地進行檢查。
圖1係針對腫瘤檢查組合物中含有L-酒石酸之情形(實線)、及不含L-酒石酸之情形(虛線),表示使用各組合物獲得之試紙之吸光度之差異的圖。
以下對本發明詳細地進行說明。
本發明係關於一種能夠用於簡易而且準確地判定惡性腫瘤之腫瘤檢查用組合物、及利用其之腫瘤檢查用方法、及腫瘤檢查用試紙。
於下述表1中,表示各種慢性疾病患者之尿中之IAA濃度(μg/mg)。根據該結果可知,若存在惡性腫瘤,則尿中之IAA濃度高於正常人。因此,若尿中之IAA濃度為一定值以上,則應懷疑存在惡性腫瘤。根據此種試驗結果,應將尿中存在之IAA視為與癌相關之「癌相關物質」,能夠用於作為癌之標記物有用之篩檢。又,於慢性疾病患者之試驗成績中,於胃潰瘍、胃息肉之例方面,偽陽性率不高,因此亦可謂尿中之IAA特別是對胃癌之篩檢或胃癌治療之監測有效。
尿中之IAA之測定方法係利用IAA與肉桂醛(3-苯基丙烯醛)等芳香族醛之顯色反應。利用該反應能夠檢測出尿中之一定濃度以上之IAA。使尿與組合物進行接觸,若確認到顯色反應,則意味著於尿中含有特定量之IAA,而提示癌之可能性。該顯色反應之詳細內容並不明確,推測IAA之一部分使肉桂醛等芳香族醛之醛基氧化,形成共軛
雙鍵,吸收可見光而顯色。
[腫瘤檢查用組合物]
本發明之腫瘤檢查用組合物係包含芳香族醛、並且能夠用於發現腫瘤、特別是惡性腫瘤之液體組合物。藉由使本發明之腫瘤檢查用組合物與包含一定濃度以上之IAA之尿進行接觸,液體顯色為紅色~紅褐色。
於本說明書中,芳香族醛為具有苯核之醛。本發明中,芳香族醛並無特別限定,例如可列舉:苯甲醛、萘甲醛、蒽甲醛、菲甲醛、水楊醛、苯乙醛、甲苯甲醛、(N,N-二甲胺基)苯甲醛、乙醯氧基苯甲醛、肉桂醛、乙烯基苯甲醛、甲基肉桂醛、乙基肉桂醛、苄甲醛等,其中,就反應性方面而言,較佳為苯甲醛、肉桂醛,若亦考慮到經濟性,則進而較佳為肉桂醛。
肉桂醛可使用自肉桂油萃取及/或濃縮而成之肉桂醛。例如上述液體組合物可將向肉桂油添加鹽酸並分離油分而提高了作為上清液之主要成分之肉桂醛之濃度者設為上述液體組合物。又,苯甲醛可使用自無花果之種子萃取及/或濃縮而成者。
本發明之腫瘤檢查用組合物中之芳香族醛之含量通常為30重量%以上,較佳為50重量%以上,更佳為70重量%以上,進而較佳為80重量%以上,例如為85重量%~90重量%。若含有30重量%以上之芳香族醛,則能夠確認明確之顯色反應。
本發明之腫瘤檢查用組合物可進而包含羥基二羧酸類。羥基二羧酸係於分子中包含1個以上之羥基與2個羧基者,例如可列舉:蘋果酸、酒石酸,較佳為L-酒石酸。若於腫瘤檢查用組合物中包含羥基二羧酸類,則顯色反應變強5~20%左右,能夠明確表現出顯色反應而防止誤檢查。
羥基二羧酸能夠以10%以下含於本發明之腫瘤檢查用組合物中,
較佳為5%以下,更佳為1%以下,例如能夠含有0.01重量%以上且1重量%以下。若過多地包含羥基二羧酸類,則檢查能力反而會降低。
本發明之腫瘤檢查用組合物可進而包含其他化合物。關於上述其他化合物,例如可列舉:乙醇等醇類、鹽酸等無機酸類、乙酸等有機酸類、此外還有亞硝酸鈉等。
關於上述其他化合物之含量,各化合物每種能夠以10%以下含有於本發明之腫瘤檢查用組合物中,較佳為5%以下,更佳為1%以下,例如能夠含有0.01重量%以上且1重量%以下。
作為本發明之腫瘤檢查用組合物之使用方法,可列舉於常溫、常壓下使本發明之腫瘤檢查用組合物與尿進行接觸之方法。具體而言,將腫瘤檢查用組合物與尿以按重量計1:1~1:10000、較佳為1:10~1:1000之比率進行混合。
若向該混合液添加作為蛋白去除劑之三氯乙酸溶液,則於尿中包含一定濃度以上之IAA之情形時,混合液迅速地顯色為紅色~紅褐色。藉此,能夠判斷於尿中是否包含一定濃度以上之IAA。
[腫瘤檢查用試紙]
作為本發明中之腫瘤檢查方法,有已說明之使腫瘤檢查用組合物與尿進行接觸之方法,作為其他方法,亦可列舉:製作腫瘤檢查用試紙,使腫瘤檢查用試紙與尿進行接觸,而觀察腫瘤檢查用試紙之顏色變化之方法。
作為本發明之腫瘤檢查用試紙之製造方法,可列舉以下方法。即,該方法包括如下步驟:使濾紙浸漬於包含芳香族醛之腫瘤檢查用組合物中並進行乾燥。其次,向已乾燥之濾紙噴霧亞硝酸鈉水溶液,再次進行乾燥。繼而,向濾紙之單面貼附雙面膠帶並切割為特定之尺寸,製作IAA測定用片(腫瘤檢查用試紙)。
製造腫瘤檢查用試紙所使用之腫瘤檢查用組合物與已說明之腫
瘤檢查用組合物相同。所使用之亞硝酸鈉水溶液之濃度為2重量%~15重量%。
本發明之腫瘤檢查用試紙之使用方法係使所製作之腫瘤檢查用試紙與測定對象之尿進行接觸,繼而使其與作為蛋白去除劑之三氯乙酸溶液進行接觸。若於尿中含有一定濃度以上之IAA,則腫瘤檢查用試紙變色為紅色~紅褐色。藉此,能夠檢查於尿中是否含有IAA。藉由將於上述試紙上顯色之色調與事先準備之比色表任意選擇性地進行比對,能夠進一步容易地得出檢查結果。
本發明之腫瘤檢查用試紙具有如下特徵:與作為液體之本發明之腫瘤檢查用組合物相比,操作極為容易,而且變色非常容易知悉,因此能夠防止誤檢查。
若使試紙吸收尿,則尿中之IAA之反應產物以吸光係數ε=1.7×105L-1.cm-1於波長495nm下吸光。即便為IAA量較少之初期惡性腫瘤癌症患者之尿,本發明之腫瘤檢查用試紙仍變色,因此能夠期待癌之早期發現。
以下,藉由實施例對本發明詳細地進行說明,但該等實施例僅為用以適當說明本發明之例示,本發明並不受任何限定。
[實施例1]
各種癌症患者與健康正常人之尿中吲哚乙酸之關係
向各種癌症患者及非癌症患者之尿液1ml添加內部標準液吲哚乙酸(IAA)0.1ml,並於其中添加0.01ml之乙酸乙酯及0.01ml之L-酒石酸,以4000rpm離心10分鐘後,將上清液注入至HPLC(High Performance Liquid Chromatograph,高效液相層析儀)中而定量尿中之IAA。獲得各種癌症患者及健康正常人之尿中之IAA量之資訊(參照表1、表2)。
[腫瘤檢查組合物之製備]
又,製備向肉桂油(symarom Pte Ltd製造,製造編號cassia 0-3031)100ml添加鹽酸0.5ml分離油分而提高了作為上清液之主要成分之肉桂醛之濃度者(濃度95%)作為檢查試劑(腫瘤檢查用組合物),將所獲得之檢查試劑1ml添加於已採集至試管中之新鮮尿液15ml中,進而投下三氯乙酸0.5ml。
於含有特定量之IAA之情形時,瞬間發生顯色反應,將發生顯色反應(紅色)者設為陽性,將發現微弱之顯色反應(粉紅色)者設為陽陰性,將未發現變色者設為陰性,並將結果記載於表1、表2中。
再者,實施例中用作試樣之尿均為於檢查之5分鐘前採集之未服用其他藥物者之新鮮尿液。
如表1、表2所示,可知於包含約15μg/mg左右之IAA量之尿之情形時,表現出顯色反應,對發現惡性腫瘤具有效果。又,雖然亦存在癌以外之患者亦為陽性反應之情形,但於正常尿中為陰性反應,明確地表現出差異。
[實施例2]
[腫瘤檢查用試紙之製作及利用其之篩檢]
使濾紙(ADVANTEC公司,101 285)浸漬於市售之肉桂醛100ml、鹽酸1.5ml、乙酸0.3ml、乙醇1.0mL、及L-酒石酸0.5mL之混合液中,於常溫下進行乾燥。向乾燥後之濾紙噴霧亞硝酸鈉之水溶液(利用10ml之蒸餾水對98%亞硝酸水溶液1ml進行稀釋而成者),再次進行乾燥。繼而向濾紙之單面貼附雙面膠帶並沿長度方向進行切割,而製作0.5cm×2cm尺寸之IAA測定用試紙片。使該試紙浸漬於尿中,於約5秒鐘後取出,將其浸漬於三氯乙酸溶液中後取出,確認試紙之變色狀況。
表3係基於胃癌之進展之IAA量及對由試紙產生之變色狀況進行
確認而獲得之結果。又,表4係利用該試紙進行篩檢試驗之結果。
如表3所示,無論癌之進展如何,均藉由試紙表現出陽性反應。又,如表4所示,發現了早期之惡性腫瘤之癌。
具體而言,於以1200人之普通尿液為對象之顯色反應之檢查試驗中發現了6名癌症患者。其詳細情況為肝癌2人、胃癌2人、食道癌1人,尿中吲哚乙酸(IAA)量之平均值均為20μg/mL。另一方面,亦存在對大腸癌或肝炎、肝硬化亦觀察到較弱之陽性反應者。未觀察到其
他成人病患者及慢性型患者之陽性反應。根據該試驗結果,明確顯示表現出檢查試劑之陽性反應之μg值。即,作為陽性反應值,若為20μg/1mL(20ppm)以上,則癌之可能性極高,若為15μg~19μg/1mL(15ppm)範圍內,則提示出早期癌之可能性與肝病之可能性。
圖1對實施例2中針對L-酒石酸之有無對吸光度進行了測定。可知極大吸光波長下之吸光度亦增加了15%。
[比較例]
表5係實施例1中使用作為二羧酸之鄰苯二甲酸代替L-酒石酸所獲得之結果。於HPLC測定中,測定到比實際之IAA值高之IAA值。其或係亦測定到由鄰苯二甲酸之反應產生之5-HIAA之結果。即,表示若使用鄰苯二甲酸,則有成為偽陽性之情況。
本發明之腫瘤檢查用組合物作為檢測IAA之試劑有用。IAA係自癌細胞產生之化合物,因此混入至癌症患者之尿中。因此,能夠藉由使用本發明之腫瘤檢查用組合物對尿中之IAA進行檢測來實施癌檢
查。又,若使用發明之腫瘤檢查用試紙,則能夠更簡易地實施癌檢查。
目前之癌診查係對存在於血液中之癌之特異性蛋白質或特定酶等進行檢測來進行癌之診斷,但本發明之癌檢查之特徵在於:其係利用以肉桂醛作為顯色試劑之尿定性試紙的胃癌之體外診斷用醫藥品;並且作為癌之目標標記物,以尿中IAA(吲哚乙酸)為指標。
使用試紙進行癌檢查係先前所不具有之劃時代之發明。又,藉由於腫瘤檢查用組合物、腫瘤檢查用試紙中包含酒石酸,而獲得尿中IAA之顯色強度,對早期癌之發現有效。進而,本檢查試紙由於檢體為尿,故而除檢查不伴有刺激或痛苦之優點外,檢查亦迅速且簡易,能夠於家中容易地進行檢查。
與被認為係癌之腫瘤標記物之尿中聚胺之測定檢查相比,尿中IAA之測定檢查顯示高12%之陽性率。此表示作為胃癌之指標,IAA最具效果。
Claims (6)
- 一種腫瘤檢查用組合物,其係包含芳香族醛與羥基二羧酸者,且上述芳香族醛為肉桂醛,上述羥基二羧酸為L-酒石酸。
- 如請求項1之腫瘤檢查用組合物,其中上述肉桂醛為源自肉桂油者。
- 一種腫瘤檢查用試紙,其係使濾紙吸收如請求項1或2之腫瘤檢查用組合物,其後使上述濾紙乾燥而獲得。
- 一種腫瘤檢查方法,其包括使如請求項1或2之腫瘤檢查用組合物與尿進行接觸之步驟。
- 一種腫瘤檢查方法,其包括使如請求項3之腫瘤檢查用試紙與尿進行接觸之步驟。
- 如請求項5之腫瘤檢查方法,其進而包括:使已與尿接觸過之上述腫瘤檢查用試紙與三氯乙酸溶液進行接觸之步驟;及將藉由與三氯乙酸溶液進行接觸而於上述試紙上顯色之色調與事先準備之比色表進行比對之步驟。
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