CN1054262C - 用啤酒厂废料生产淡紫拟青霉菌剂的方法 - Google Patents
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Abstract
一种用啤酒厂废料生产杀虫剂的方法，将纯化后的淡紫拟青霉菌种接种在真菌培养基料斜面上，经培养后再接种到由麦芽糟，废啤酒酵母及麦芽糟榨出汁配成的培养液中，经振荡培养再吸附到麦芽糟与废酵母膏组成的固体培养基上，在15～30℃下培养5～15天。制成的淡紫拟青霉菌剂作为一种杀虫剂，可用于许多农作物的线虫防治，能有效降低虫口密度，提高作物产量。且用啤酒厂的废料制造该菌剂，既可使废料资源化，又减少环境污染。
Description
本发明涉及一种利用微生物真菌生产杀虫剂的方法。
植物线虫使农作物减产，按最保守的估算，全国农作物种植业每年约损失233亿元。目前对线虫病的防治主要以化学杀线虫药为主。虽然有一定效果，但易造成环境污染，且污染农产品，造成食用农产品后中毒的事件时有发生。鉴于此，人们开始从生态角度另觅新法，采用生物防治法取代化学防治成了必然趋势。线虫天敌种类很多，主要有真菌、细菌、病毒等，在真菌中有一种可破坏线虫的内寄生真菌—淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus)，该菌能感染根结线虫(Meloidogyne SPP.)和胞囊线虫(Glo-bodera SPP.与Heterodera SPP.)等重要植物线虫的卵并吸收其卵内物质，使卵的孵化率降低，根部虫瘿和卵块的数量减少，因此应用它来对于有害线虫进行防治具有巨大潜力。
本发明的目的旨在提供一种以啤酒厂的废液废渣生产能防治经济作物寄生线虫的淡紫拟青霉菌剂的方法，该方法既可提供高效无毒的杀线虫药物，又可解决啤酒厂的排污问题。
本发明的技术方案如下：
步骤一：一级培养，将普通真菌培养基分装成斜面，接种淡紫拟青霉菌种，在20～30℃温度下培养5～15天，以28℃培养7天为佳。
步骤二：二级培养，也叫液体振荡培养，按重量比(以下同)，将2％～10％，最佳5％麦芽糟，2％～10％，最佳5％废啤酒酵母；88％～96％，最佳90％麦芽糟榨出汁混合，经高压灭菌后接种一级培养物，在25～30℃温度下振荡培养5～10天，最好条件是28℃，振荡培养7天。二级培养液中也可加入少量废羽毛或其他动物毛发。
步骤三：三级培养，其培养基的组份为90％～98％，最佳95％麦芽糟和2％～10％，最佳5％的废酵母膏，将麦芽糟去水掺入废酵母膏，成挤捏不滴水的粉团，经湿热灭菌后将二级培养液吸附上去，在25～30℃温度下再培养5～15天，一般以28℃培养10天最佳，风干后成饼块状，淡紫色，以块状保存最方便。
用此法生产的淡紫拟青霉菌剂，每克样品含2.6×106～3.4×106个孢子。按4g/Kg土壤的剂量在作物移栽之前将菌剂粉碎拌入土中，可有效降低虫口密度(盆栽番茄试验，试验组的虫瘿，卵块和雌虫均比对照组减少90％以上)。淡紫拟青霉菌剂作为一种新型的生物杀线虫剂，可用于大豆、甜菜、马铃薯、麦类、玉米、棉花、花生、香蕉、柑桔、菠萝、茶苗、甘蔗、甘薯、烟草、杨梅、罗汉果、猕猴桃、桃、番茄、辣椒、茄子、柿、胡萝卜、葡萄、草莓、无花果、黄瓜、南瓜、甜瓜、西瓜、苦瓜、菜豆等许多作物的线虫防治，不但提高产量，而且避免使用化学杀线虫药。用啤酒厂的废液废渣制造该菌剂，可以使废料资源化，既降低工业成本，又减少环境污染。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：将纯化的淡紫拟青霉菌种接种到马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(PDA)斜面上，在28℃下培养7天；用5g麦芽糟、5g废啤酒酵母和90g麦芽糟汁配制成培养液，高压灭菌后接种等量的上述一级培养物，在28℃下振荡培养7天；取榨干的麦芽糟95g，再掺入5g酵母膏，制成挤捏不滴水的固体培养物料，经湿热灭菌后，将等量的二级培养液接入，于28℃下再培养10天，风干后成饼块状。称取1g菌剂，置于高速组织捣碎机内加水搅散，然后倾出并用清水洗出定容500ml，吸取少量滴于血球计数板上，镜检计数，经计算每g菌剂含3.4×106个孢子。
取小花盆12个，每盆装沃土1600ml，经湿热灭菌后分别接种上述菌剂，剂量分别为1g、2g、4g和8g，3天后每盆各埋入根结线虫卵块3个，各植入番茄苗2株，在15～25℃温室中培育50、56和65天后分别称重冠部和根部，并洗净解剖虫体，结果见下表：
| 培育时间(天) | 菌剂用量(g) | 冠部重(g) | 根部重(g) | 根冠比 | 虫瘿(个) | 卵块(个) | 雌虫(只) | 幼虫(只) |
| 50 | 1248 | 48.746.831.129.0 | 10.910.710.38.6 | 4.54.43.03.4 | 2142023624 | 691591621 | 2181983423 | 13861 |
| 56 | 1248 | 24.931.229.850.0 | 13.37.512.813.9 | 1.94.22.33.6 | 28627235521 | 23820322120 | 45531227321 | 1121160 |
| 65 | 1248 | 42.531.637.553.2 | 16.217.215.516.9 | 2.61.82.43.2 | 25614503300 | 373293750 | 3914422060 | 2410781320 |
| 合计 | 1248 | 116.1109.698.4132.2 | 40.435.438.639.4 | 2.93.12.53.4 | 756192472145 | 68065531241 | 106495251344 | 4810882541 |
根据上表，从三组实验的统计结果可以看出，用啤酒厂废液制造的菌剂，在1-8g的范围内，随着施用剂量的增加，虫口密度有较大幅度的减少，每1600ml土壤施8g与施1g相比，雌虫减少95.89％，卵块减少94.0％，虫瘿减少94.0，根冠比增加17.2％。如果从50 56和65天解剖的结果分别来看，雌虫、卵块和虫瘿减少的水平不相上下，虫口密度减少的趋势也与统计结果基本一致。根据不同剂量使虫口减少的幅度，以每1600ml土壤施用8g效果最佳(虫瘿、卵块和雌虫分别减少94％、94％和95.9％)。
实施例2：淡紫拟青霉菌的一级二级培养与实施例1相同，在三级培养中取98g榨干的麦芽糟，掺入2g酵母膏制成挤捏不滴水的固体培养物料，经湿热灭菌后，接入二级培养液，于28℃下再培养10天，风干后成饼块状。经测定每克菌剂含2.6×106个孢子。
实施例3：与实施例1不同的是三级培养物的配比(重量比)为麦芽糟∶酵母膏＝9∶1，其它条件不变，经测定每克菌剂含2.9×106个孢子。
实施例4：在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(PDA)斜面上接种淡紫拟青霉菌菌种，在20℃下培养15天；用2g麦芽糟、10g啤酒酵母，88g麦芽糟汁配制成液体培养液，经高压灭菌后接种一级培养物，在25℃温度下振荡培养10天；在由95g麦芽糟和5g酵母膏组成的固体培养物上接种上述菌种，在25℃下培养15天，风干后成饼块状。
实施例5：在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(PDA)斜面上接种淡紫拟青霉菌菌种，在30℃下培养5天，用10g麦芽糟、2g啤酒酵母，88g麦芽糟汁配制成液体培养液，经高压灭菌后接种一级培养物，在30℃下振荡培养5天；用95g麦芽糟和5g酵母膏制成固体培养物，经湿热灭菌后接种二级培养物，在30℃下培养5天。
实施例6：与实施例1不同的是二级培养物的配比为2g麦芽糟，2g啤酒酵母和96g麦芽槽汁，其余条件及培养条件同实施例1。
Claims (2)
1.一种用啤酒厂废料生产淡紫拟青霉菌剂的方法，其特征在于：
步骤一：一级培养，用普通真菌培养基装成斜面，接种淡紫拟青霉菌种，在20～30℃温度下培养5～15天；
步骤二：二级培养，将2％～10％麦芽糟，2％～10％废啤酒酵母和88％～96％麦芽糟榨出汁按配比混合，经高压灭菌后接种一级培养物，在25～30℃温度下振荡培养5～10天；
步骤三：三级培养，其培养基的组份为90％～98％麦芽糟、2％～10％废酵母膏，将麦芽糟去水掺入废酵母膏，成挤捏不滴水的粉团，经湿热灭菌后将二级培养液吸附上去，在25～30℃温度下再培养5～15天，风干后成饼块状。
2.如权利要求1所述的用啤酒厂废料生产淡紫拟青霉菌剂的方法，其特征在于一级培养以28℃培养7天；二级培养的培养液以麦芽糟∶废啤酒酵母∶麦芽糟榨出汁为5％∶5％∶90％，培养条件为28℃，振荡培养7天；三级培养以95％麦芽糟和5％废酵母膏，以28℃培养7天。
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