CN105424659B - 利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及该检测体系 - Google Patents

利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及该检测体系 Download PDF

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Abstract

本发明公开了利用氧化石墨烯‑罗丹明‑尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，该方法以氧化石墨烯‑罗丹明‑尿酸酶混合溶液为基液，利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量，其中氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为20:1:1.5。本发明检测灵敏度高，大幅提高了检测的可靠度。

Description

利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及 该检测体系
技术领域
本发明涉及化学物质定量检测领域，具体涉及测量尿酸含量的方法，特别涉及利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及该检测体系。
背景技术
目前已报道的尿酸检测方法主要分成两大类，即色谱分析方法和化学分析方法。色谱法选择性高，可靠性好，但不适合常规检测，尤其不适合定期随时检测。化学分析方法又分两种，一是利用尿酸的还原性反应进行检测，其选择性低而很少使用；另一种是利用尿酸酶高专一性反应进行检测，其选择性显著优于利用尿酸还原反应的方法，尿酸在尿酸酶作用下生成尿囊素、H2O2和CO2。酶法分因此分为直接法和间接法，直接法是直接跟踪尿酸酶作用下尿酸紫外吸收下降的测定方法，间接法是测定尿酸氧化产物H2O2的含量。
然而，普通尿酸检测方法存在灵敏度较低，测量过程复杂的缺陷，有必要进行改性。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及该检测体系。
利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法。
优选的，以氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液为基液，利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量。
优选的，氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为18～22:0.9～1.1:1.4～1.6。
优选的，将待测试样加入氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液并放置10分钟以上，然后利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量。
优选的，激发波长为480-500nm。
本发明还提供尿酸检测体系，该体系为含有氧化石墨烯、罗丹明和尿酸酶的混合溶液。
进一步，所述混合溶液中氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为18～22:0.9～1.1:1.4～1.6。
特别的，所述混合溶液中氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的浓度分别为18-22mg/L、0.9-1.1mg/L、1.4-1.6mg/L。
本发明的有益效果在于：
本发明检测灵敏度高，大幅提高了检测的可靠度，另外本发明检测体系较为便宜，有助于降低检测成本。氧化石墨烯对罗丹明123有荧光猝灭作用，在一定范围内，氧化石墨烯浓度增加，罗丹明123的荧光猝灭强度线性下降，但随着氧化石墨烯浓度增加，猝灭强度趋于不变。分别测定T＝283、298、310K下，测定Stern-Volmer曲线。每个温度下Stern-Volmer曲线是一条直线，说明氧化石墨烯与罗丹明123形成复合物，其猝灭机制属于静态猝灭，即氧化石墨烯与罗丹明123形成新的复合物而导致罗丹明123的荧光猝灭。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述，其中：
图1为实施例1不同浓度尿酸500～600nm波长下的荧光强度；
图2为实施例1不同浓度尿酸最大发射的荧光强度；
图3为实施例2光吸收随时间变化图；
图4为实施例3最大发射峰荧光强度强度随时间变化图。
具体实施方式
以下将参照附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1：
本实施例的尿酸检测体系含为含有氧化石墨烯、罗丹明123和尿酸酶的混合溶液，其中氧化石墨烯终浓度为20mg/L，罗丹明123终浓度为3nM，尿酸酶终浓度为1.5mg/L。
本实施例检测尿酸的方法，首先将尿酸加入混合溶液中(尿酸的中浓度分别为0.07mM，0.10mM，0.15mM，0.20mM，0.24mM)，然后在500nm激发，扫描500～600nm波长下的体系的荧光强度。结果如图1所示，由图1可见，最大发射峰为520nm。以尿酸浓度为横轴，最大发射峰520nm波长下的荧光强度为纵轴得图2，由图2可知，随着体系中尿酸浓度增加，体系的荧光强度线性降低。
实施例2：
本实施例的尿酸检测体系中氧化石墨烯终浓度为20mg/L，罗丹明123终浓度为3nM，尿酸酶终浓度为1.5mg/L。
检测时，首先向检测体系加入尿酸(终浓度为1.5mg/L)，然后在293nm激发，每间隔2.0min测定一次光吸收变化得图3，由图3可知2～12min内的吸光度与时间为线性相关。据此据算酶活性(每分钟消耗1mM/μM尿酸的酶量为1单位)为0.21单位，在15min后，尿酸基本被尿酸酶氧化，因此在荧光体系中加入尿酸后，放置15min后检测。采用初速度法测定酶活性，在25℃用0.075mmol/L尿酸在pH 9.2硼酸盐缓沖液中在全自动酶标仪上测定293nm光吸收变化的初速度表示尿酸酶活性，按其摩尔消光系数11.5(mmol/L)-1·cm-1校正尿酸储备液的浓度[10]。尿酸溶液每天配制，使用前在(25±0.5)℃下预热20min。尿酸酶反应体系共150μL，含尿酸溶液50μL，加入用50.0mmol/L的硼酸缓冲液(pH 9.2)稀释的裂解液100μL启动反应，间隔2.0或5.0min测定293nm光吸收变化，每份样品测定3次。用各突变体酶活性与其总蛋白浓度之比表示比活性。每分钟消耗1微摩尔尿酸的酶量为1单位。
实施例3
本实施例的尿酸检测体系中氧化石墨烯终浓度为20mg/L，罗丹明123终浓度为3nM，尿酸酶终浓度为1.5mg/L。
检测时，首先向检测体系加入尿酸(终浓度为1.5mg/L)，然后在500nm激发，扫描500～600nm波长下的体系的荧光强度，以体系在520nm的荧光强度为纵轴，反应时间为横轴得图4，由图4可知，结果表明随着时间增加，该波长下的荧光强度逐渐增强，但在15min后，该波长下的荧光强度变化较小。因此，在氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶检测体系中，加入尿酸，放置15min后检测。
由此可见，本发明检测灵敏度高，大幅提高了检测的可靠度。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。

Claims (5)

1.利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，以氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液为基液，利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量，其中氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为18～22:0.9～1.1:1.4～1.6。
2.根据权利要求1所述利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，其特征在于：将待测试样加入氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液并放置10分钟以上，然后利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量。
3.根据权利要求1所述利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，其特征在于：激发波长为480-500nm。
4.氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶尿酸检测体系，其特征在于：氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为18～22:0.9～1.1:1.4～1.6。
5.根据权利要求4所述氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶尿酸检测体系，其特征在于：所述氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的浓度分别为18-22mg/L、0.9-1.1mg/L、1.4-1.6mg/L。
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