CN105424455A - 一种双水相体系及其分离葵花籽中维生素b6的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种双水相体系及其分离葵花籽中维生素B6的应用，包括N-乙基吡啶硝酸盐离子液体、柠檬酸铵和水，按质量百分比计，双水相体系中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体为30％～40％，柠檬酸铵为20％～30％，其余为水，三者的质量百分比之和为100％。具有线性范围宽，检出限低，相对偏差较小，对样品的测定回收率高的特点。既能满足国家对于残留维生素B6的检出要求，同时操作较为简单，适用于葵花籽中维生素B6的定量分析。

Description

一种双水相体系及其分离葵花籽中维生素B6的应用

技术领域

本发明属于食品和分析化学的技术领域，具体涉及一种双水相体系及其分离葵花籽中维生素B6的应用。

背景技术

维生素B6(VitaminB6)又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，其彼此之间有密切的关系和相互作用。它在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，遇光或碱易破坏，不耐高温，是人体这座化工厂里进行各种化学反应不可或缺的参与者。维生素B6为人体内某些辅酶的组成成分，参与多种代谢反应，尤其是和氨基酸代谢有密切关系，其主要作用在人体的血液、肌肉、神经、皮肤等。

近十几年来维生素B6分析方法的研究已经取得了较大的进展，其中微生物法灵敏度比其他仪器法、化学法都高，在食品中维生素B6的测定时目前无法取代的，但是其对样品的处理方法比较复杂，且试验周期长。其他的维生素检验方法主要有紫外光谱法和高效液相色谱法，还有微生物法、两点电位滴定法、荧光分析法、流动注射化学发光法、修饰电极、极谱法等。这些方法步骤复杂、仪器操作繁琐，难以普及。基于有时检测样品中含量低、检出困难等特点，在维生素B6的检测和分析过程中，样品的预处理发挥着很重要的作用。

同时因为我国在VB6检测领域的探索在分析仪器、检测方法、分离测定、和数据处理和质量监控等方面都存在很多问题，现在HPLC成了为维生素B6检测的主流，但是天然的维生素B6多以吡哆醛和吡哆胺及它们的磷酸化结合形式存在，因为维生素B6在稀溶液中对光敏感,样品提取液中相对含量较少的吡哆醛和吡哆胺分解速度极快,给检测带来一定的麻烦，产生了较大的弊端，以至于寻找一种新型实用的检测维生素B6方法非常必要。

离子液体双水相作为近几年来出现的一种新型绿色分离体系，因其具有分相时间短、粘度低、萃取过程不易乳化且离子液体可以回收利用等优点而受到越来越多的关注。其中，离子液体具有不挥发性、毒性小、不易燃易爆、不易氧化，以及较高的热稳定性等特征，被认为是传统萃取工艺中发挥有机溶剂的理想绿色替代品。此外，离子液体双水相体系两相的主要成分都是水，使得其具有生物活性分子所需要的温和环境，在萃取分离生物物质上具有广阔的应用前景。但是到目前为止，关于离子液体双水相体系作为萃取体系分离生物物质的数据资料还十分缺乏，同时，关于吡啶类离子液体双水相体系萃取维生素的研究还未见报道，因而对该类体系的研究讨论具有理论和现实意义。

葵花籽作为日常食物，其中含有丰富的维生素B6。在葵花籽中含有酒石酸，酒石酸易溶于水，具有抗氧化性，在维生素B6萃取过程中与N-乙基吡啶硝酸盐离子液体发生络合反应，使萃取率大大提高。同时，离子液体双水相萃取能够避免脂肪、糖类对维生素B6检测的干扰。这为葵花籽中维生素B6的检测提供了新的方向和途径。

发明内容

针对现有的维生素B6检测方法中所存在的方法步骤复杂、仪器操作繁琐、成本高、稳定性差等缺陷，本发明的目的在于提供一种双水相体系及其分离葵花籽中维生素B6的应用，可以提高残留维生素B6测定的准确性，缩短检测周期，同时具有操作简便，不使用大型仪器，减少使用传统的有机挥发型溶剂以避免带来二次污染的特点。

为了实现以上任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种双水相体系，包括N-乙基吡啶硝酸盐离子液体、柠檬酸铵和水。

具体的，按质量百分比计，双水相体系中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体为30％～40％，柠檬酸铵为20％～30％，其余为水，三者的质量百分比之和为100％。

优选的，按质量百分比计，双水相体系中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体为35％，柠檬酸铵为25％，其余为水，三者的质量百分比之和为100％。

所述的双水相体系分离葵花籽中维生素B6的应用。

分离葵花籽中维生素B6的步骤包括：

步骤一：将葵花籽研磨后配制成浓度为0.1g/mL的葵花籽待分离水溶液；

步骤二：按质量比5:1，将权利要求1、2或3所述的双水相体系加入步骤一制备的葵花籽待分离水溶液中进行萃取，萃取温度为25～35℃，萃取pH值为5～6。

分离葵花籽中维生素B6的步骤包括：

步骤一：将葵花籽研磨后配制成浓度为0.1g/mL的葵花籽待分离水溶液；

步骤二：按质量比5:1，将权利要求1、2或3所述的双水相体系加入步骤一制备的葵花籽待分离水溶液中进行萃取，萃取温度为30℃，萃取pH值为5。

本发明的优点如下：

(1)本发明的方法综合了离子液体和双水相体系的优点，作为一种高效而温和的新型绿色分离体系,与传统的亲水性聚合物-无机盐双水相体系相比,离子液体双水相体系具有分相时间短、黏度低、萃取过程不易乳化且离子液体可以回收利用等优点,这些优点刚好克服了传统双水相体系的缺点,为维生素B6的分离提供了一种可行的新途径。

(2)该试验方法对维生素B6萃取率能够达到99.0％，具有线性范围宽，检出限低、相对标准偏差较小，对样品的测定回收率高的特点。不但能够满足国家对维生素B6的检出要求，同时操作较为简单，适用于葵花籽中的维生素B6的定量分析。

(3)在葵花籽中含有酒石酸，酒石酸易溶于水，并且具有抗氧化性，在维生素B6萃取过程与N-乙基吡啶硝酸盐离子液体发络合反应，从而使萃取率大大提高。

(4)本发明为为临床医学等多个领域的研究而获得大量高纯度的维生素B6提供新途径。

(5)离子液体双水相萃取能够避免脂肪、糖类对维生素B6检测的干扰。这为葵花籽中维生素B6的富集检测提供了新的方向和途径。

(6)天然的维生素B6多以吡哆醛和吡哆胺及它们的磷酸化结合形式存在，因为维生素B6在稀溶液中对光敏感,HPLC检测时样品提取液中相对含量较少的吡哆醛和吡哆胺分解速度极快,而离子液体双水相萃取能避免这种情况的发生。

附图说明

图1是N-乙基吡啶硝酸盐离子液体浓度对萃取率的影响关系图；

图2是柠檬酸铵浓度对萃取率的影响关系图；

图3是温度对萃取率的影响关系图；

图4是时间对萃取率的影响关系图；

图5是PH对萃取率的影响关系图；

以下结合附图和具体实施方式对本发明进一步解释说明。

具体实施方式

本发明的双水相体系分离葵花籽中维生素B6的过程包括：将N-乙基吡啶硝酸盐离子液体，柠檬酸铵和蒸馏水混合均匀，得到双水相萃取体系。其中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体的质量分数为30％-40％，柠檬酸铵的质量分数是20％-30％，其余组分是蒸馏水，三者总的质量分数是100％，按质量比为5:1向上述双水相体系中加入待测维生素B6溶液，然后在25～35℃温度，pH值为5～6的条件下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取18h。该方法对维生素B6的萃取率可达99.0％。

本发明的N-乙基吡啶硝酸盐离子液体购自上海成捷化学有限公司，纯度为0.99。

在对现有维生素B6预处理方法研究基础之上，本发明通过一系列的实验，采用以N-乙基吡啶硝酸盐离子液体与柠檬酸铵形成的双水相体系作为萃取溶剂，萃取葵花籽中维生素B6。为了实现高萃取率，本发明设计了一系列实验以得到较优的工艺参数：

1、葵花籽待分离溶液的制备方法：将一定量葵花籽研磨成粉，取10g葵花籽研磨粉加入二次蒸馏水搅拌，将溶液加热到60℃增加维生素B6的溶解度，避光快速过滤，移入100mL的棕色容量瓶中并定容，配制成葵花籽待分离溶液备用。用同样的方法处理榛子、杏仁、核桃、花生样品分别制成榛子待分离溶液、杏仁待分离溶液、核桃待分离溶液和花生待分离溶液。

2、分别取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐、碘化1,3-二甲基咪唑、溴化N-乙基吡啶、碘化N-乙基吡啶、N-乙基吡啶四氟硼酸盐离子液体于离心管中，再各加入2.5g柠檬酸铵，4g蒸馏水和2g葵花籽待分离溶液，充分混匀。于30℃和pH5.0下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取24小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后葵花籽待分离溶液中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

表1是离子液体种类对萃取率的影响关系表。能看出碘化1,3-二甲基咪唑、溴化N-乙基吡啶、碘化N-乙基吡啶、N-乙基吡啶四氟硼酸盐离子液体的萃取率均低于80％，而N-乙基吡啶硝酸盐离子液体的萃取率高达99％，可见N-乙基吡啶硝酸盐离子液体萃取率十分高，更适用于构建用于维生素B6萃取的双水相体系。

表1

3、取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐离子液体于离心管中,分别加入2.5g柠檬酸铵、芳磺酰胺、磷酸二氢钠、乙酸钠、三甲基硅醇，4g蒸馏水和2g葵花籽待分离溶液，充分混匀。于30℃和pH5.0下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取24小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后葵花籽待分离溶液中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

表2是盐种类对萃取率的影响关系图。加入有机物芳磺酰胺、三甲基硅醇时萃取率均低于70％；加入磷酸二氢钠、乙酸钠盐时萃取率有所升高，但仍低于90％；加入柠檬酸铵时萃取率最高，可达到99.0％。可见在柠檬酸铵更适用于构建用于维生素B6萃取的双水相体系。

表2

4、分别取2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0gN-乙基吡啶硝酸盐离子液体于离心管中，加入2.5g柠檬酸铵及适量蒸馏水使溶液总质量为10g,再加2g葵花籽待分离溶液，充分混匀。于30℃和PH5.0下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取24小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

图1是N-乙基吡啶硝酸盐离子液体浓度对萃取率的影响关系图，其中横坐标表示加入待测液之前的双水相体系中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体浓度，纵坐标表示萃取率。随着体系中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体浓度的增加，维生素B6的萃取率呈先增大后减小的趋势。在离子液体双水相体系中，N-乙基吡啶硝酸盐离子液体的浓度在20％～35％时，维生素B6的萃取率随N-乙基吡啶硝酸盐离子液体浓度的增加而增加，在离子液体质量分数为35％时，萃取率最大可达到99.0％。当N-乙基吡啶硝酸盐离子液体浓度超过35％时维生素B6的萃取率有所下降。从图中可以看出，N-乙基吡啶硝酸盐离子液体加入量为3.0～4.0g时，萃取率均不低于90％，所以，本专利所述双水相萃取体系中(加入待测溶液前)N-乙基吡啶硝酸盐离子液体的最优浓度为30％～40％。

5、取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐离子液体于离心管中，分别加入1.0g、1.5g、2.0、2.5、3.0g、3.5、4.0、4.5g的柠檬酸铵及适量蒸馏水使溶液总质量为10g,再加葵花籽待分离溶液2g充分混匀，于30℃和PH5.0下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取24小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后葵花籽待分离溶液中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

图2是柠檬酸铵浓度对萃取率的影响关系图，其中横坐标表示加入待测液之前的双水相体系中柠檬酸铵浓度，纵坐标表示萃取率。随着体系中柠檬酸铵浓度的增加，维生素B6的萃取率呈先增大后减小的趋势。在离子液体双水相体系中，柠檬酸铵的浓度在10％～25％时，维生素B6的萃取率随柠檬酸铵的增加而增加；柠檬酸铵浓度在25％时，萃取率最大可达到99.0％；当柠檬酸铵浓度超过25％时维生素B6的萃取率又迅速下降。从图中可以看出，柠檬酸铵加入量为2.0～3.0g时，萃取率均不低于90％，所以，本专利所述双水相萃取体系中(加入待测溶液前)柠檬酸铵盐的最优浓度为20％～30％。

6、取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐于离心管中，加入2.5g柠檬酸铵和4g蒸馏水。再分别加入2g由葵花籽、榛子、杏仁、核桃、花生制备的待分离溶液，充分混匀。于30℃和PH5.0下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取24小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

表3是体系对不同来源的维生素B6的萃取率。从表中可以看出在加入2g由榛子、杏仁、核桃、花生制备的维生素B6溶液时，萃取率均低于70％，而在加入2g由葵花籽待分离溶液时萃取率高达99.0％。这是由于葵花籽中含有酒石酸，酒石酸是一种具有抗氧化性的物质，能和离子液体发生络合反应，从而使得萃取率得到提高。

表三：维生素B6的来源对萃取率的影响

7、取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐离子液体于离心管中，加入2.5g柠檬酸铵、4g蒸馏水和2g葵花籽待分离溶液，充分混匀。分别于15、20、25、30、35、40、45℃和PH5.0下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取24小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

图3是温度对萃取率的影响关系图，其中横坐标表示温度，纵坐标表示萃取率。随着体系中温度的增加，维生素B6的萃取率呈先增大后减小的趋势。在此离子液体双水相体系中，温度在15℃-30℃时，维生素B6的萃取率随温度的增加而增加，萃取率在30℃最大，可达到99.0％。当温度超过30℃时维生素B6的萃取率迅速下降。从图中可以看出，温度在25～35℃时萃取效果较好，萃取率均在90％以上，所以，离子液体双水相萃取体系萃取的最佳温度为25～35℃。

8、取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐离子液体于离心管中，加入2.5g柠檬酸铵、4g蒸馏水和2g葵花籽待分离溶液，充分混匀。于30℃和PH5.0下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后分别静置萃取6、12、18、24、30、36小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

图4是时间对萃取率的影响关系图，其中横坐标表示时间，纵坐标表示萃取率。随着体系中时间的增加，维生素B6的萃取率呈先增大后趋于平缓的趋势。离子液体双水相体系中，时间在6～18小时时，维生素B6的萃取率随时间的增加而增加；18h时萃取率可达到99.0％；超过18小时后萃取率几乎没有变化。考虑到生产实际，此离子液体双水相萃取体系最佳萃取时间为18小时。

9、取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐离子液体于离心管中，加入2.5g柠檬酸铵、4g蒸馏水和2g葵花籽待分离溶液,充分混匀。分别于pH为3、4、5、6、7、8、9和30℃下，在恒温振荡器中震荡30min，分相后静置萃取24小时。测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率。

图5是PH对萃取率的影响关系图，其中横坐标表示pH，纵坐标表示萃取率。随着体系中pH的增加，维生素B6的萃取率呈先增大后迅速减小的趋势。离子液体双水相体系中，pH在3～5时，维生素B6的萃取率随pH的增加而增加；当pH为5时萃取率最大可达到99.0％；当pH超过5时维生素B6的萃取率迅速下降。从图中可以看出，pH在5～6范围内，萃取率均大于90％。因此，离子液体双水相萃取体系萃取的最佳pH为5～6。

以下是发明人给出的具体实施案例。

实施例1:

取3.5gN-乙基吡啶硝酸盐离子液体，置于离心管中，加入2.5g柠檬酸铵、4g蒸馏水和2g葵花籽待分离溶液，充分混匀。于30℃和PH5.0下恒温萃取24小时。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为99.0％。表明此发明对维生素B6有良好的萃取效果。

实施例2:

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将柠檬酸铵换做芳磺酰胺，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为74.2％。表明此发明对维生素B6的萃取效果一般。

实施例3：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将离子液体的种类换做碘化N-乙基吡啶，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为64.2％。表明此发明对维生素B6的萃取效果较差。

实施例4：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将N-乙基吡啶硝酸盐离子液体的加入量变为2g，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为80.1％。表明此发明对维生素B6的萃取效果一般。

实施例5：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将N-乙基吡啶硝酸盐离子液体的加入量变为5g，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为78.1％。表明此发明对维生素B6的萃取效果一般。

实施例6：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将柠檬酸铵的加入量变为1g，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为84.2％。表明此发明对维生素B6的萃取效果一般。

实施例7：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将柠檬酸铵的加入量变为4.5g，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为82.6％。表明此发明对维生素B6的萃取效果一般。

实施例8：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将柠檬酸铵的加入量变为3.0g，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为92.5％。表明此发明对维生素B6的萃取效果较好。

实施例9：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中将葵花籽待分离溶液替换为由花生制备的花生待分离溶液，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为57.9％。表明所述萃取体系对花生中维生素B6的萃取效果很差。这是由于葵花籽中含有酒石酸，在维生素B6萃取过程中会与N-乙基吡啶硝酸盐离子液体发络合反应，从而使萃取率大大提高，而花生中不含酒石酸，并不具备此类性质。

实施例10：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中温度为15℃，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为72.1％。表明此发明对维生素B6的萃取效果差。

实施例11：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中温度为45℃，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为74.1％。表明此发明对维生素B6的萃取效果较差。

实施例12：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中温度为25℃，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为91.5％。表明此发明对维生素B6的萃取效果较好。

实施例13：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中时间为6小时，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为74.0％。表明此发明对维生素B6的萃取效果较差。

实施例14：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中时间为36小时，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为99.3％。表明此发明对维生素B6的萃取效果很好。

实施例15：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中pH为3，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为74.0％。表明此发明对维生素B6的萃取效果一般。

实施例16：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中pH为9，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为59.2％。表明此发明对维生素B6的萃取效果很差。

实施例17：

本实施例中的制备方法与实施例1相同，区别仅在于制备过程中的条件不同，本实施例中pH为6，其余条件不变。

测定水相中剩余维生素B6的浓度，由萃取前后水相中维生素B6的含量计算维生素B6的萃取率为92.6％。表明此发明对维生素B6的萃取效果较好。

Claims (6)

1.一种双水相体系，其特征在于，包括N-乙基吡啶硝酸盐离子液体、柠檬酸铵和水。

2.如权利要求1所述的双水相体系，其特征在于，按质量百分比计，双水相体系中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体为30％～40％，柠檬酸铵为20％～30％，其余为水，三者的质量百分比之和为100％。

3.如权利要求1所述的双水相体系，其特征在于，按质量百分比计，双水相体系中N-乙基吡啶硝酸盐离子液体为35％，柠檬酸铵为25％，其余为水，三者的质量百分比之和为100％。

4.权利要求1、2或3所述的双水相体系分离葵花籽中维生素B6的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，分离葵花籽中维生素B6的步骤包括：

步骤一：将葵花籽研磨后配制成浓度为0.1g/mL的葵花籽待分离水溶液；

步骤二：按质量比5:1，将所述的双水相体系加入步骤一制备的葵花籽待分离水溶液中进行萃取，萃取温度为25～35℃，萃取pH值为5～6。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，分离葵花籽中维生素B6的步骤包括：

步骤一：将葵花籽研磨后配制成浓度为0.1g/mL的葵花籽待分离水溶液；

步骤二：按质量比5:1，将所述的双水相体系加入步骤一制备的葵花籽待分离水溶液中进行萃取，萃取温度为30℃，萃取pH值为5。