CN105400692B - 等温核酸扩增装置及等温核酸扩增实验方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种等温核酸扩增装置及实验方法，包括平板原位核酸扩增芯片，该芯片由相互贴合、可滑动的上、下层载体构成，上、下层载体为同等大小的长方形，当下层固定时，上层载体可相对摩擦滑动。在下层载体的上贴合面上开设各种开口向下的凹槽流道、微腔，在上层载体的下贴合面上开设各种开口向上的凹槽流孔、微腔，以及一些进、出口通孔，通过定量加样及不同模式的检测，可同时对不同样品进行有效操作，并且降低了实验成本。所述芯片可应用于法医学检测、环境检测、食品检测等。

Description

等温核酸扩增装置及等温核酸扩增实验方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种平板原位等温核酸扩增实验装置和实验方法。

背景技术

微流控技术是现今国际高新科技前沿领域之一，在核酸提取、扩增、检测研究中的应用取得了快速发展，已逐渐成为核酸研究最有潜力的发展方向之一。它采用微机电技术加工出具有微米尺度通道网络结构的芯片,通过对芯片中皮升至纳升级微流体的操纵和控制,实现生物医学和化学实验室的集成化分析检测功能。滑动芯片(SlipChip)技术就是微流控技术的一种，由具有微结构的上下两块基片组成,由上层基片加入引物预混合液、酶预混合液、DNA，通过滑动上层基片实现液体在上下层基片交互转移从而于反应腔混合所有反应试剂原位扩增。

环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种恒温核酸扩增方法。该技术利用4种特异性引物依靠一种高活性链置换DNA聚合酶在DNA处于动态平衡时(65℃左右)使得链置换DNA合成在不停地自我循环。整个反应无需反复的热循环，而且特异性强、灵敏度高、快速高效、鉴定简便，为法医学、生态环境、食品等领域的实时诊断检测应用创造了条件。

但是国内外现有的LAMP滑动芯片尚不成熟，不易固定和操作，且未有滑动芯片提及可以实现原位扩增的系统装置。因此，本发明基于上述研究背景，发展了一种平板原位等温核酸扩增芯片。

发明内容

本发明的目的是提供了平板原位等温核酸扩增芯片，该芯片操作简便，可实现同时扩增不同的样品，降低了试验操作强度，而且节约了样品和试剂的消耗量，降低了实验成本。

为了实现以上目的，本发明提供了一种平板原位核酸扩增芯片，包括相互贴合的上层载体和下层载体；上层载体能够在下层载体上水平滑动；

上层载体上设有样品进样口组、聚合酶进样口组、引物进样口组、第一出口通孔、第二出口通孔、第一凹槽流孔组、第二凹槽流孔组、第一流道；

下层载体上设有进样槽、第二流道组、反应腔组、梳齿形通道、第三凹槽流孔组；反应腔组设于梳齿形通道齿端之间或一侧，且反应腔组的流入端与梳齿形通道的齿端位于同一直线上；

上层载体和下层载体位于初始位置时，样品进样口组与反应腔组的位置相流通；聚合酶进样口组与梳齿形通道、第三凹槽流孔组、第二出口通孔相流通；引物进样口组与进样槽、第二流道组、第一凹槽流孔组、第一流道、第一出口通孔相流通；

向反应腔组添加引物时，平移上层载体，使第一凹槽流孔组与反应腔组相流通，引物从第一凹槽流孔流入反应腔组内；

向反应腔组添加聚合酶时，平移上层载体，使反应腔组与第二凹槽流孔组相流通，聚合酶从第二凹槽流孔组流入反应腔组内。

作为优选的，上层载体和下层载体为长方形载体。

作为优选的，第一凹槽流孔组包括第一凹槽流孔，第二凹槽流孔组包括第二凹槽流孔，第三凹槽流孔组包括第三凹槽流孔；反应腔组包括反应腔；样品进样口组包括样品进样口；

样品进样口均匀地排列在同一条直线上；第一凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，引物进样口与第一凹槽流孔排列在同一条直线上，第二凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，样品进样口与第一凹槽流孔的位置相对应，第二凹槽流孔与样品进样口交错排列；第三凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，反应腔均匀地排列在同一条直线上；第二流道组包括位于一条直线上的第二流道和与第三凹槽流孔组位于同一条直线上的第二流道；

样品进样口、第一凹槽流孔、第二凹槽流孔与上层载体的中央水平轴相平行；反应腔、第三凹槽流孔与下层载体的中央水平轴相平行。

作为优选的，上层载体上设有两组样品进样口组、聚合酶进样口组、引物进样口组、第一出口通孔、第二出口通孔、第一凹槽流孔组、第二凹槽流孔组、第一流道；

两组样品进样口组、聚合酶进样口组、引物进样口组、第一出口通孔、第二出口通孔、第一凹槽流孔组、第二凹槽流孔组、第一流道相对于上层载体的中央水平轴轴对称；

下层载体上设有两组进样槽、第二流道组、反应腔组、梳齿形通道、第三凹槽流孔组；

两组进样槽、第二流道组、反应腔组、梳齿形通道、第三凹槽流孔组相对于下层载体的中央水平轴轴对称。

作为优选的，引物进样口与第一凹槽流孔排列在上层载体的中央水平轴上，进样槽位于下层载体的中央水平轴上。

作为优选的，俯视第一凹槽流孔、第二凹槽流孔、第三凹槽流孔时，第一凹槽流孔为十字形；第二凹槽流孔、第三凹槽流孔为长方形。

作为优选的，每一个第一凹槽流孔的容积相同；每一个第二凹槽流孔的容积相同；每一个反应腔的容积相同。

作为优选的，反应腔、第一凹槽流孔、第二凹槽流孔之间的容积比为10：6：3。

作为优选的，样品进样口组、聚合酶进样口组、引物进样口组、第一出口通孔、第二出口通孔的直径为1mm。

作为优选的，第一流道为T字形流道。

本发明还提供了一种等温核酸扩增装置，包括方形的传热平台和上述任意一项的平板原位等温核酸扩增芯片；传热平台设有加热装置；下层载体固定在传热平台上，加热装置对下层载体均匀加热。

作为优选的，传热平台包括相邻的至少2个活动块、限位组件和底架；限位组件包括滑动轴部和限位部；

下层载体固定在底架上，滑动轴部的一端贯穿活动块与底架固定连接；活动块能够在滑动轴部水平滑动；限位部设于滑动轴部的另一端，且横截面积大于滑动轴部的横截面积。

作为优选的，每个活动块上设有至少2个限位组件。

作为优选的，限位组件为铁钉。一种等温核酸扩增方法，利用了上述任意一项的等温核酸扩增装置，包括以下步骤：

S0、将上层载体移动到预设位置；

S1、从引物进样口组加入引物，并使引物充满第一凹槽流孔组；

S2、平移上层载体，使第一凹槽流孔组与反应腔组相流通，引物从第一凹槽流孔流入反应腔组内；

S3、将上层载体移动回预设位置；

S4、从聚合酶进样口组加入聚合酶，并使聚合酶充满第二凹槽流孔组；

S5、平移上层载体，使反应腔组与第二凹槽流孔组相流通，聚合酶从第二凹槽流孔组流入反应腔组内；

S6、将上层载体移动回预设位置；

S7、从样品进样口组加入样品；

S8、控制加热装置使反应液保持在反应温度下。

作为优选的，在两组样品进样口组、聚合酶进样口组、引物进样口组、第一出口通孔、第二出口通孔、第一凹槽流孔组、第二凹槽流孔组、第一流道相对于上层载体的中央水平轴轴对称；且两组进样槽、第二流道组、反应腔组、梳齿形通道、第三凹槽流孔组相对于下层载体的中央水平轴轴对称时，在步骤S3后，重新从引物进样口组加入引物，并平移上层载体，使第一凹槽流孔组与另一侧的反应腔组相流通，引物从第一凹槽流孔流入另一侧的反应腔组内。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明的平板原位等温核酸扩增芯片可进行多个样品同时进行扩增操作，大大节约反应时间，节约了样品和试剂的消耗量，降低了实验成本。

2、本发明的平板原位等温核酸扩增芯片可借助简易加热装置实现平稳滑动和精确温控，可有效对核酸进行原位扩增。

3、本芯片反应腔、流孔、流道的体积大小按一定比例设计，可以有效控制反应体系，提高了扩增效率。

4、对于部分实验，通过本芯片可用肉眼观察反应。

附图说明

图1为本发明第一种实施方式的芯片结构俯视图。

图2为本发明第二种实施方式的芯片结构俯视图。

图3为本发明第三种实施方式中传热平台的活动块位于初始位置时的结构示意图。

图4为本发明第三种实施方式中传热平台的活动块滑动后的结构示意图。

图5为本发明中上层载体位于初始位置的芯片结构俯视图。

图6为本发明中添加引物时的芯片结构俯视图。

图7为本发明中添加聚合酶时的芯片结构俯视图。

图8为利用本发明芯片进行对照试验时添加聚合酶时的芯片结构俯视图。

附图标记：1、上层载体；11、样品进样口组；12、聚合酶进样口组；13、引物进样口组；14、第二凹槽流孔组；15、第一凹槽流孔组；16、第一流道；17、第一出口通孔；18、第二出口通孔；2、下层载体；21、反应腔组；22、梳齿形通道；23、进样槽；24、第二流道组；25、第三凹槽流孔组；3、传热平台；31、限位组件；32、底架；33、活动块。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的各实施方式进行详细的阐述。

为解决上述技术问题，本发明的第一实施方式提供了一种平板原位核酸扩增芯片，如图1所示，包括相互贴合的上层载体1和下层载体2；上层载体1能够在下层载体2上水平滑动；

上层载体1上设有样品进样口组11、聚合酶进样口组12、引物进样口组13、第一出口通孔17、第二出口通孔18、第一凹槽流孔组15、第二凹槽流孔组14、第一流道16；

下层载体2上设有进样槽23、第二流道组24、反应腔组21、梳齿形通道22、第三凹槽流孔组25；反应腔组21设于梳齿形通道22齿端之间或一侧，且反应腔组21的流入端与梳齿形通道22的齿端位于同一直线上；

上层载体1和下层载体2位于初始位置时，样品进样口组11与反应腔组21的位置相流通；聚合酶进样口组12与梳齿形通道22、第三凹槽流孔组25、第二出口通孔18相流通；引物进样口组13与进样槽23、第二流道组24、第一凹槽流孔组15、第一流道16、第一出口通孔17相流通；

向反应腔组21添加引物时，平移上层载体1，使第一凹槽流孔组15与反应腔组21相流通，引物从第一凹槽流孔组15流入反应腔组21内；

向反应腔组21添加聚合酶时，平移上层载体1，使反应腔组21与第二凹槽流孔组14相流通，聚合酶从第二凹槽流孔组14流入反应腔组21内。

在本实施例中，第二流道组24包括6段流道，第一凹槽流孔组15包括5个第一凹槽流孔，第二凹槽流孔组14包括5个第二凹槽流孔；第三凹槽流孔组25包括10个第三凹槽流孔；反应腔组21包括5个反应腔，反应腔设置为灯泡形；每一个第一凹槽流孔的容积相同；每一个第二凹槽流孔的容积相同；每一个反应腔的容积相同，且反应腔、第一凹槽流孔、第二凹槽流孔之间的容积比为10：6：3。

在本实施例中，俯视第一凹槽流孔、第二凹槽流孔、第三凹槽流孔时，第一凹槽流孔为十字形；第二凹槽流孔、第三凹槽流孔为长方形。其中，将第一凹槽流孔设计成十字形，具有以下技术效果：

1、在向第一凹槽流孔内添加引物时，第一凹槽流孔与第二流道组24流通，而移动上层玻璃时，第一凹槽流孔与第二流道组24之间能够更快地隔离。

2、在向反应腔内添加聚合酶时，第一凹槽流孔与反应腔、第三凹槽流孔流通，而移动上层玻璃时，如果出现偏移，聚合酶也不容易流入相邻第三凹槽流孔中。

在本实施例中，样品进样口组11、聚合酶进样口组12、引物进样口组13、第一出口通孔17、第二出口通孔18的直径为1mm。

在本实施例中，上层载体1、下层载体2选用玻璃板，当然也可以选择其他能够用于进行生物实验的载体板。位于载体上的凹槽流道、流孔和微腔可由激光雕刻方式开设。对于玻璃板的形状、大小没有特殊限制，然而为了便于操作和固定，在本实施例中，选用尺寸相同的长方形的玻璃板。

在本实施例中，第一凹槽流孔组15包括若干个第一凹槽流孔，第二凹槽流孔组14包括若干个第二凹槽流孔，第三凹槽流孔组25包括若干个第三凹槽流孔；反应腔组21包括若干个反应腔；样品进样口组11包括若干个样品进样口；

样品进样口均匀地排列在同一条直线上；第一凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，引物进样口组13与第一凹槽流孔排列在同一条直线上，第二凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，样品进样口与第一凹槽流孔的位置相对应，第二凹槽流孔与样品进样口交错排列；第三凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，反应腔均匀地排列在同一条直线上；第二流道组24包括位于一条直线上的第二流道和与第三凹槽流孔组25位于同一条直线上的第二流道；

样品进样口、第一凹槽流孔、第二凹槽流孔与上层载体1的中央水平轴相平行；反应腔、第三凹槽流孔与下层载体2的中央水平轴相平行。

在本实施例中，将样品进样口、第一凹槽流孔、第二凹槽流孔与上层载体1的设置为与中央水平轴相平行；同时反应腔、第三凹槽流孔与下层载体2的中央水平轴相平行，使得本发明提供的平板原位核酸扩增芯片外观看起来更加整齐。

本发明的第二实施方式涉及一种平板原位核酸扩增芯片，第二种实施方式是第一种实施方式的改进，如图2所示，其改进之处在于，上层载体1上设有两组样品进样口组11、聚合酶进样口组12、第一出口通孔17、第二出口通孔18、第二凹槽流孔组14；每一组样品进样口组11、聚合酶进样口组12、第一出口通孔17、第二出口通孔18、第二凹槽流孔组14位于上层载体1的中央水平轴的一侧；

两组样品进样口组11、聚合酶进样口组12、第一出口通孔17、第二出口通孔18、第二凹槽流孔组14相对于上层载体1的中央水平轴轴对称；

下层载体2上设有两组反应腔组21、梳齿形通道22、第三凹槽流孔组25；每一组反应腔组21、梳齿形通道22、第三凹槽流孔组25位于下层载体2的中央水平轴的一侧；

两组反应腔组21、梳齿形通道22、第三凹槽流孔组25相对于下层载体2的中央水平轴轴对称。

在本实施方式中，通过将凹槽、反应腔、流道设置成相对于上、下层玻璃中央水平轴轴对称的方式，使得本实施例提供的平板原位核酸扩增芯片具备更多的反应腔组，使得能够同时进行更多组反应实验，节约时间。较佳的，可以将进样槽、第二流道组、第一凹槽流孔组、引物进样口组设置在中央水平轴上，这样能够减少凹槽加工的数量。

本发明的第三种实施方式涉及一种等温核酸扩增装置，包括方形的传热平台3和上述任意一项的平板原位等温核酸扩增芯片；传热平台3设有加热装置；下层载体2固定在传热平台3上，加热装置对下层载体2均匀加热。

在本实施例中，下层玻璃的底部被固定在金属固定传热平台上，传热平台3包括相邻的至少2个活动块33、限位组件31和底架32；限位组件31包括滑动轴部和限位部；下层载体2固定在底架32上，滑动轴部的一端贯穿活动块33与底架32固定连接；活动块33能够在滑动轴部水平滑动；限位部设于滑动轴部的另一端，且横截面积大于滑动轴部的横截面积。在本实施例中，最佳的，该活动块33设有四个，如图3和图4所示。活动块能够滑动的距离即决定上层玻璃能够滑动的距离。在本实施方式中，限位组件可以是铁钉。图4中，给出了上层玻璃向其中一个方向滑动的状态，当上层玻璃向右滑动时，上层玻璃推动活动块33向外侧移动，活动块33到达钉帽位置时，活动块33无法继续向外滑动，进而限制了上层玻璃的移动范围，能够防止过度移动上层玻璃的时候出现液体渗漏到反应腔中，使反应腔中引物或聚合酶的量发生改变，影响实验效果。较佳的，每一个活动块由两根铁钉固定在底架上，使活动块在移动时能够与底架边缘保持平行。

同时，在本实施方式中，通过将下层玻璃设置在能够均匀传热的传热平台3上，实现加热装置对该下层载体2进行均匀加热，使每一个反应腔内的温度相同，实现实验环境的等同化。

利用上述的等温核酸扩增装置，还能够实现一种等温核酸扩增方法，包括以下步骤：

S0、将上层载体1移动到预设位置。

在实验开始之前，需要将实验需要用到的玻璃板放置到初始位置，此时，上层玻璃和下层玻璃的位置如图4所示，为后续添加引物做准备。

S1、从引物进样口组13加入引物，并使引物充满第一凹槽流孔组15。

在添加引物预混合液时，从引物进样口组13加入，引物预混合液依次通过引物进样口组13、进样槽23、第二流道组24、第一凹槽流孔组15、第一流道16，流道内的空气以及多余的引物预混合液从第一出口通孔17排出。为了确保添加入反应腔内的引物预混合液量相同，在添加时，需要确保引物预混合液充满每一个第一凹槽流孔。

S2、向反应腔组21添加引物预混合液时，平移上层载体1，使第一凹槽流孔组15与反应腔组21相流通，此时，引物预混合液从第一凹槽流孔组15流入反应腔组21和第三凹槽流孔组25内。

S3、将上层载体1移动回预设位置，准备添加聚合酶预混合液。

S4、从聚合酶进样口组12加入聚合酶，并使聚合酶充满第二凹槽流孔组14。

从聚合酶进样口组12加入聚合酶预混合液，通过梳齿形通道22流入第三凹槽流孔组25中。梳齿形通道22中的空气以及多余的聚合酶预混合液从第二出口通孔18中流出。为了确保聚合酶预混合液添加量相同，要确保第三凹槽流孔组内充满聚合酶混合液。所述聚合酶预混合液包括聚合酶、dNTP、Mg2+、反应缓冲液。

S5、向反应腔组21中添加聚合酶时，平移上层载体1，使反应腔组21与第二凹槽流孔组14相流通，如图5所示，聚合酶从第二凹槽流孔组14流入反应腔组21和第三凹槽流孔组25内。

S6、将上层载体1移动回预设位置。

S7、从样品进样口组11加入样品，使样品直接进入反应腔中。

S8、控制加热装置使反应液保持在反应温度下。在本实施例中，一般反应温度在60℃～65℃。

进行阴性、阳性对照实验时，移动上层玻璃至图8的位置，此时，位于梳齿形通道22一侧的反应腔组内便不会加入聚合酶预混合液。将芯片移动回初始位置，添加阳性DNA样品，经过反应时间后，在未加入聚合酶预混合液的反应腔中形成无聚合酶的阴性对照组，在与第三凹槽流孔组25位于同一条直线上的第二流道组24中形成无DNA的阴性对照组，添加阳性DNA样品的反应腔即为阳性对照组。

此外，若在上层玻璃、下层玻璃上分别设置轴对称的通孔、凹槽或流道，在步骤S3后，重新从引物进样口组13加入引物，并平移上层载体1，使第一凹槽流孔组15与另一侧的反应腔组21相流通，引物从第一凹槽流孔组15流入另一侧的反应腔组21内。

经过40分钟的反应时间之后，观察每个反应腔的浊度，可直接定性反应结果。本实例中对8个不同DNA样品进行了等温扩增，避免了繁琐的温度循环，大大缩短了反应时间，降低了试验操作强度。

上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，本领域的普通技术人员可以理解，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。

Claims (9)

1.一种等温核酸扩增装置，其特征在于，包括方形的传热平台和平板原位核酸扩增芯片；

所述平板原位核酸扩增芯片包括相互贴合的方形上层载体(1)和下层载体(2)；所述上层载体(1)能够在所述下层载体(2)上水平滑动；

所述上层载体(1)上设有样品进样口组(11)、聚合酶进样口组(12)、引物进样口组(13)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第一凹槽流孔组(15)、第二凹槽流孔组(14)、第一流道(16)；

所述下层载体(2)上设有进样槽(23)、第二流道组(24)、反应腔组(21)、梳齿型通道(22)、第三凹槽流孔组(25)；所述反应腔组(21)设于所述梳齿型通道(22)齿端之间或一侧，且所述反应腔组(21)的流入端与所述梳齿型通道(22)的齿端位于同一直线上；

所述上层载体(1)和下层载体(2)位于初始位置时，所述样品进样口组(11)与所述反应腔组(21)的位置相流通；所述聚合酶进样口组(12)与所述梳齿型通道(22)、第三凹槽流孔组(25)、第二出口通孔(18)相流通；所述引物进样口组(13)与所述进样槽(23)、第二流道组(24)、第一凹槽流孔组(15)、第一流道(16)、第一出口通孔(17)相流通；

向所述反应腔组(21)添加引物时，平移所述上层载体(1)，使所述第一凹槽流孔组(15)与所述反应腔组(21)相流通，引物从所述第一凹槽流孔组(15)流入所述反应腔组(21)内；

向所述反应腔组(21)添加聚合酶时，平移所述上层载体(1)，使所述反应腔组(21)与所述第二凹槽流孔组(14)相流通，聚合酶从所述第二凹槽流孔组(14)流入所述反应腔组(21)内；

所述传热平台设有加热装置；所述下层载体(2)固定在所述传热平台上，所述加热装置对所述下层载体(2)均匀加热。

2.根据权利要求1所述的等温核酸扩增装置，其特征在于，所述第一凹槽流孔组(15)包括若干个第一凹槽流孔，所述第二凹槽流孔组(14)包括若干个第二凹槽流孔，所述第三凹槽流孔组(25)包括若干个第三凹槽流孔；所述反应腔组(21)包括若干个反应腔；所述样品进样口组(11)包括若干个样品进样口；

所述样品进样口均匀地排列在同一条直线上；所述第一凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，所述引物进样口组(13)与所述第一凹槽流孔排列在同一条直线上，所述第二凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，所述样品进样口与所述第一凹槽流孔的位置相对应，所述第二凹槽流孔与所述样品进样口交错排列；所述第三凹槽流孔均匀地排列在同一条直线上，所述反应腔均匀地排列在同一条直线上；所述第二流道组(24)包括位于一条直线上的第二流道和与所述第三凹槽流孔组(25)位于同一条直线上的第二流道；

所述样品进样口所在的直线、第二凹槽流孔所在的直线与所述上层载体(1)的中央水平轴相平行；所述反应腔所在的直线、第三凹槽流孔所在的直线与所述下层载体(2)的中央水平轴相平行；

所述引物进样口(13)与所述第一凹槽流孔排列在所述上层载体(1)的中央水平轴上，所述进样槽位于所述下层载体(2)的中央水平轴上。

3.根据权利要求2所述的等温核酸扩增装置，其特征在于，所述上层载体(1)上设有两组所述样品进样口组(11)、聚合酶进样口组(12)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第二凹槽流孔组(14)；每一组样品进样口组(11)、聚合酶进样口组(12)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第二凹槽流孔组(14)位于所述上层载体(1)的中央水平轴的一侧；

两组所述样品进样口组(11)、聚合酶进样口组(12)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第二凹槽流孔组(14)相对于所述上层载体(1)的中央水平轴轴对称；

所述下层载体(2)上设有两组所述反应腔组(21)、梳齿型通道(22)、第三凹槽流孔组(25)；每一组所述反应腔组(21)、梳齿型通道(22)、第三凹槽流孔组(25)位于所述下层载体(2)的中央水平轴的一侧；

两组所述反应腔组(21)、梳齿型通道(22)、第三凹槽流孔组(25)相对于所述下层载体(2)的中央水平轴轴对称。

4.根据权利要求2所述的等温核酸扩增装置，其特征在于，俯视所述第一凹槽流孔、第二凹槽流孔、第三凹槽流孔时，所述第一凹槽流孔为十字形；所述第二凹槽流孔、第三凹槽流孔为长方形。

5.根据权利要求1所述的等温核酸扩增装置，其特征在于，所述传热平台包括相邻的至少2个活动块(33)、限位组件(31)和底架(32)；所述限位组件(31)包括滑动轴部和限位部；

所述下层载体(2)固定在所述底架(32)上，所述滑动轴部的一端贯穿所述活动块(33)与所述底架(32)固定连接；所述活动块(33)能够在所述滑动轴部水平滑动；所述限位部设于所述滑动轴部的另一端，且横截面积大于所述滑动轴部的横截面积。

6.根据权利要求5所述的等温核酸扩增装置，其特征在于，每个所述活动块上设有至少2个所述限位组件(31)。

7.根据权利要求5所述的等温核酸扩增装置，其特征在于，所述限位组件(31)为铁钉。

8.一种等温核酸扩增方法，其特征在于，利用了权利要求1至7中任意一项所述的等温核酸扩增装置，包括以下步骤：

S0、将上层载体(1)移动到预设位置；

S1、从引物进样口组(13)加入引物，并使引物充满第一凹槽流孔组(15)；

S2、平移所述上层载体(1)，使所述第一凹槽流孔组(15)与反应腔组(21)相流通，引物从所述第一凹槽流孔组(15)流入所述反应腔组(21)内；

S3、将上层载体(1)移动回预设位置；

S4、从聚合酶进样口组(12)加入聚合酶，并使聚合酶充满第二凹槽流孔组(14)；

S5、平移所述上层载体(1)，使所述反应腔组(21)与所述第二凹槽流孔组(14)相流通，聚合酶从所述第二凹槽流孔组(14)流入所述反应腔组(21)内；

S6、将上层载体(1)移动回预设位置；

S7、从样品进样口组(11)加入样品；

S8、控制加热装置使反应液保持在反应温度下。

9.根据权利要求8所述的等温核酸扩增方法，其特征在于，在两组所述样品进样口组(11)、聚合酶进样口组(12)、第一出口通孔(17)、第二出口通孔(18)、第二凹槽流孔组(14)、第一流道(16)相对于所述上层载体(1)的中央水平轴轴对称；且两组所述第二流道组(24)、反应腔组(21)、梳齿型通道(22)、第三凹槽流孔组(25)相对于所述下层载体(2)的中央水平轴轴对称时，在所述步骤S3后，重新从引物进样口组(13)加入引物，并平移所述上层载体(1)，使所述第一凹槽流孔组(15)与另一侧的反应腔组(21)相流通，引物从所述第一凹槽流孔组(15)流入另一侧的所述反应腔组(21)内。