CN105399734A

CN105399734A - 新型egfr抑制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN105399734A
Application number: CN201510973929.7A
Authority: CN
Inventors: 曹凤君
Original assignee: CHANGYUAN PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd JILIN PROV
Current assignee: CHANGYUAN PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd JILIN PROV
Priority date: 2015-12-23
Filing date: 2015-12-23
Publication date: 2016-03-16

Abstract

本发明公开了一种新型EGFR抑制剂及其制备方法，本发明系关于式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

Description

新型EGFR抑制剂及其制备方法

发明详述

本发明涉及某喹唑啉类衍生物及其药学上可接受的盐，这些化合物或其盐特别在作用于某些突变形式的表皮生长因子受体(例如L858R激活突变体、Exon19缺失激活突变体、和T790M抗性突变体)的功能方面是有用的抗癌剂。本发明还涉及包含所述化合物及其盐特别是有用的这些化合物和盐的多晶型的药物组合物、可用于制造所述化合物的中间体、以及利用所述化合物及其盐治疗过度增生性疾病或症状如各种癌症和良性前列腺增生的方法。

EGFR是erbB受体家族的跨膜蛋白酶氨酸激酶成员。当与生长因子配体(例如表皮生长因子(EGF))结合时，受体可以与附加的EGFR分子发生同源二聚，或者与另一家族成员(例如erbB2(HER2)、erbB3(HER3)、或者erbB4(HER4))发生异源二聚。

erbB家族信号传导的失调促进增殖、侵入、转移、血管生成、和肿瘤细胞生存，并且己在许多(包括肺癌、头颈部癌和乳腺癌的那些)人类癌症中得到描述。因此，erbB家族代表抗癌药物开发的合理靶点，靶向EGFR或erbB2的许多药剂现在是临床上可用的，包括吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼。

2004年有报道(Science[2004J第304期，1497-500和NewEnglandJournalofmedicine[2004J第350期，2129-39)在非小细胞肺癌(NSCLC)中EGFR的激活突变与对吉非替尼治疗的反应有关。最普遍的EGFR激活突变(L858R和delE746_A750)导致相对于野生型(WT)EGFR而言，对小分子酷氨酸激酶抑制剂(例如吉非替尼和厄洛替尼)的亲和力增加、以及对三磷酸腺昔(ATP)亲和力下降。最后，产生对吉非替尼或厄洛替尼泊疗的获得性抗性，例如由于看门残基T790M的突变，据报道在50％的临床耐药性患者中检测到该突变。该突变不被认为是在空间上阻碍吉非替尼或厄洛替尼与EGFR的结合，仅将对ATP的亲和力改变到相当于WTEGFR的水平。

然而，在大于60％用于吉非替尼或埃罗替尼治疗的NSCLC患者中，报道有认为与正常皮肤及肠细胞中与野生型EGFR信号传导通路被抑制有关的不良反应。另外，吉非替尼及埃罗替尼二者对存在NSCLC肿瘤细胞脑转移情况的病人中，仅显示有限的治疗效果。因为这些药物不能有效的通过血脑屏障。当癌症扩散至脑膜时会出现软脑膜转移，转移可借助血液扩散至脑膜或流经脑脊髓液。若肿瘤细胞进入脑脊髓液并存活下来，则可遍及中枢神经系统，从而引起神经问题。

本发明化合物或其药学上可接受的盐，与其他临床上用与EGFR抑制剂相比，呈现很多改良的地方。如较高的血脑屏障通透性，对肺癌脑转移的病人有较好的疗效。对于激活突变体形式的EGFR(例如L858REGFR突变体、或者delE746A750突变体或Exon19缺失EGFR突变体)和/或抗性突变体形式的EGFR(例如T790MEGFR突变体)具有改良的活性，对于野生型EGFR的也表现出有利的效能特性。因此该化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及EGFR等活化突变的疾病，如癌症。

因此，本发明提供式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐。

所述的化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐或者溶剂化物，其中所述药学上可接受的盐，酸根包括无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、二硫化氢，以及有机酸如对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、酒石氢酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、柠檬酸、苯甲酸、苹果酸、乙酸和相关的无机与有机酸；优选甲磺酸。

所述的化学式(I)的化合物或者其药学上可接受的盐用于治疗癌症的药物生产的用途，所述癌症可以选自卵巢癌、宫颈癌、结肠直肠癌、乳腺癌、膜腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤，黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道问质瘤(GIST)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(AML)、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、间皮瘤；优选肺癌，进一步优选肿瘤细胞脑转移的肺癌。

实施例

本发明中的某些优选实施例方案在以下非限制性实施例中说明性示出。

4-[(3，4-二氟苯基)胺基]-6-((2R)2-甲基-4-丙烯酰哌嗪基)-7-((S)-呋喃-3-氧基)喹唑啉

20g中间体2和7.5g2，4-二甲基哌嗪，12gDIPEA，溶于40mlDMA，加热到85℃，维持该温度反应3hr，点板检测。加水50ml，冷却过滤，滤饼甲醇洗一次，水洗一次.干燥。固体溶于二氯甲烷，柱层析得产品，收率59％.ESI+：496.3(M+1)

¹H-NMR(DMSO-d₆)：1.6(3H，d)，2.5(2H，m)，2.9-3.5(6H，m)，3.7(2H，t)，3.9(2H，t)，4.23(1H，m)，5.8(1H，d)，6.3(1H，d)，6.7(1H，dd)，7.0-7.6(5H，m)，8.2(1H，s).

中间体1：4-[(3，4-二氟苯基)胺基]-6-氯-7溴喹唑啉

10g4-羟基-6-氯-7溴喹唑啉悬浮于40ml乙腈中，滴加9g三氯氧磷。控制温度小于50℃，缓慢加入6g三乙胺，加毕升温至内温80℃，搅拌反应。5hr后，TLC检测，检测反应。

7g3，4-二氟苯胺溶解在50ml二氧六环，滴加到上述反应中，反应1小时TLC检测反应。反应液冷却至室温，缓慢加入40ml水，氢氧化钾水溶液缓慢调溶液PH至8-9，固体析出。过滤，所得固体水洗，乙醇洗，50℃真空干燥，得中间体1，收率91％.ESI+：372.6(M+2)

中间体2

4-[(3，4-二氟苯基)胺基]-6-氯-7-((S)-呋喃-3-氧基)喹唑啉

10g中间体1和7.5g苯甲酸钠盐，室温下加入30mlDMF，加热到90℃，维持该温度反应6hr，点板检测。冷却过滤，滤饼甲醇洗一次，水洗一次.干燥。固体与2.5gS-呋喃醇溶于2mlDMF和8ml叔丁醇中，搅拌降温在10℃一下，加入9g叔丁醇钠的THF溶液，滴完后，升温至35℃反应3小时。加入40ml水，减压蒸去溶剂。加入甲醇，冷却至20℃，打浆过滤，滤饼溶于二氯甲烷，柱层析得中间体2，收率66％.ESI+：379.2(M+2)

测试1：Exon19缺失EGFR(激活单突变体)细胸磷酸化测试

将人肺细胞系PC9(Exon19缺失EGFR)维持在含有10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI1640中。使细胞在有5％CO₂的加湿培养箱中于37度生长。将40uL细胞播种(10000细胞/孔)于Corning黑色透明底384孔板中的生长培养基中，于37度下在5％CO₂中培养过夜。使用Echo555声波定剂量Cacousticallydosed)，将100％DMSO中连续稀释的化合物加至细胞。将培养板再培养2小时，轻柔混合培养基之后，将40uL裂解缓冲液添加到各孔中。将Greiner黑色高结合力384孔板用捕捉抗体覆盖，然后用3％BSA进行封闭。接着去除封闭液，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高结合力384孔板中，培养2小时。轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20uL检测抗体，培养2小时。轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20uLQuantaBlu荧光过氧化物酶底物，培养1小时。将20uLQuantaBlu终止溶液添加到培养板中，在采用352nm激发波长和460nm发射波长的Envision微孔板检测仪读出荧光。将各化合物获得的数据输入合适的软件包以执行曲线拟合分析。基于此数据并通过计算获得50％效果所需的化合物浓度来确定IC50值。

测试2：L858R/T790MEGFR(双突变体)细胸磷酸化测试

将人肺细胞系NCI-H1975维持在含有10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI1640中。使细胞在有5％CO₂的加湿培养箱中于37度生长。将40uL细胞播种(10000细胞/孔)于Corning黑色透明底384孔板中的生长培养基中，于37度下在5％CO₂中培养过夜。使用Echo555声波定剂量Cacousticallydosed)，将100％DMSO中连续稀释的化合物加至细胞。将培养板再培养2小时，轻柔混合培养基之后，将40uL裂解缓冲液添加到各孔中。将Greiner黑色高结合力384孔板用捕捉抗体覆盖，然后用3％BSA进行封闭。接着去除封闭液，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高结合力384孔板中，培养2小时。轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20uL检测抗体，培养2小时。轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20uLQuantaBlu荧光过氧化物酶底物，培养1小时。将20uLQuantaBlu终止溶液添加到培养板中，在采用352nm激发波长和460nm发射波长的Envision微孔板检测仪读出荧光。将各化合物获得的数据输入合适的软件包以执行曲线拟合分析。基于此数据并通过计算获得50％效果所需的化合物浓度来确定IC50值。

测试3：野生型EGFR细胞磷酸化试验

将人结肠细胞系LoVo保存在含有3％剥离的Cstripped)胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI1640中。使细胞在有5％CO₂的加湿培养箱中于37度生长。将40uL细胞播种(10000细胞/孔)于Corning黑色透明底384孔板中的生长培养基中，于37度下在5％CO₂中培养过夜。使用Echo555声波定剂量Cacousticallydosed)，将100％DMSO中连续稀释的化合物加至细胞。将培养板再培养2小时，轻柔混合培养基之后，将40uL裂解缓冲液添加到各孔中。将Greiner黑色高结合力384孔板用捕捉抗体覆盖，然后用3％BSA进行封闭。接着去除封闭液，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高结合力384孔板中，培养2小时。轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20uL检测抗体，培养2小时。轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20uLQuantaBlu荧光过氧化物酶底物，培养1小时。将20uLQuantaBlu终止溶液添加到培养板中，在采用352nm激发波长和460nm发射波长的Envision微孔板检测仪读出荧光。将各化合物获得的数据输入合适的软件包以执行曲线拟合分析。基于此数据并通过计算获得50％效果所需的化合物浓度来确定IC50值。

将本专利申请实施例中的检测数据(μM)显示于下表中，虽然用一定数量的有效数字来陈述检测数据，但不应该认为表示数据己确定精确为有效数字的数。

实施例编号	测试1	测试2	测试3
				实施化合物	0.009**	0.0005**	100.256
吉非替尼	3.894	8.364	0.045**

实施例组与对照组比较，*P＜0.05有显著性差异；**P＜0.01有极显著性差异。

结果显示，实施例化合物与对照药吉非替尼针对于单突变和双突变体细胞有更优的活性；对野生型EGF细胞具有更好的选择性，与现有技术相比较有显著性进步。

本发明化合物用于各种癌症的治疗，所述各种癌症包括且不局限于非小细胞肺癌、乳腺癌、脑瘤、膜腺癌、肝癌、结肠直肠癌、甲状腺髓样癌、成神经胶质瘤、成神经细胞瘤、肾脏肿瘤、卵巢癌和前列腺癌。

本发明公开的化合物能单独使用或者与其它药剂组合用于各种癌症的治疗，所述各种癌症包括且不局限于肺癌、膜腺癌、星细胞瘤、肾癌、头颈癌、乳腺癌、膀肮癌、卵巢癌、结肠直肠癌、前列腺癌、子宫颈癌、胸腺癌、肝癌和胃癌。

对于本领域技术人员，本公开不只局限于前述说明性实施例，在不脱离其必要属性的情况下能以其它特定形式体现。因此期望认为，所有方面均作为说明性而不是限制性、对所附权利要求进行参考的实施例而不是前述实施例，引用文献只是针对附加的权利要求而不是上述的实例，以及落入权利要求等效性的含义和范围之内的所有变化因此预期包含于此。

本说明书中列举的所有专利、专利申请和文献参考均在此以其全部内容引入作为参考。在不一致的情况下，包括定义的本公开将是有说服力的。

Claims

1.一种式(I)化合物，

或其药学上可接受的盐。

2.如权利要求1式(I)化合物，其系4-[(3，4-二氟苯基)胺基]-6-((2R)2-甲基-4-丙烯酰哌嗪基)-7-((S)-呋喃-3-氧基)喹唑啉。

3.一种药用组合物，其包括如权利要求1-2中任一项式(I)化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的稀释剂。

4.一种药用组合物，其包括如权利要求1-2中任一项式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗非小细胞肺癌。

5.一种药用组合物，其包括如权利要求1-2中任一项式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗脑转移的非小细胞肺癌。