CN105377251A - 动员剂及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的动员剂在将造血干细胞和祖细胞从骨髓中移动到外周血液中的方法和组合物中的用途。所述组合物和方法对干细胞移植和治疗或预防免疫缺陷特别有用。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e),要求于2013年3月1日提交的美国临时申请61/771,373的权益,并据此通过引用将其整体并入。
发明领域
本发明总体涉及HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的动员剂在将造血干细胞和祖细胞从骨髓中移动到外周血液中的方法和组合物中的用途。本发明与干细胞移植以及治疗或预防免疫缺陷特别相关。
在发明详述的最后收集了在本说明书中按数字方式引用的某些出版物的著录详情。
发明背景
自体造血干细胞(HSC)移植对于各种血液恶性肿瘤,包括白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤是治愈性治疗。在过去十年间,骨髓穿刺(marrowaspiration)逐渐被作为可移植HSC的来源的移动的外周血液所替代。细胞因子粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是临床上使用的主要动员剂(mobilizingagent)。以每日10μg/kg的剂量皮下给药,其促进了造血干细胞和祖细胞(HSPC)从骨髓中被迫出并进入循环中。在大多数健康同种异体供体中,CD34+HSPC在G-CSF治疗4-5天之后稳健地移动并且来自第5天的血液置换(bloodaphaeresis)足以达到2×106CD34+细胞/kg体重的最低阈值以确保快速再造。然后,在自体环境下,高达30-60%的以化学疗法治疗的患者没有响应G-CSF达到该最低阈值,从而排除移植(1)。大多数处于风险中的是已经经历超过三个化学治疗周期以嘌呤类似物如氟达拉滨进行化学治疗的患者(2)。趋化因子CXCL12与其受体CXCR4之间的趋化相互作用对于HSPC在骨髓内的潴留(3-4)和响应G-CSF的移动(5-6)是关键的。因此,用特定的小合成抑制剂如普乐沙福(AMD3100)对CXCL12和CXCR4之间的趋化相互作用进行额外抑制协同地增强了人类和小鼠中的响应G-CSF的HSPC移动(7)。已经在至少两大3期临床试验中证实了普乐沙福的协同作用,所述3期临床试验中的患者为适合自体HSC移植的多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤患者,所述患者以前单独应答G-CSF时,不能充分移动。自G-CSF给药的第4天起,在血液置换之前1小时每日注射的普乐沙福能使大约60%先前未响应单独G-CSF移动的患者达到2×106个CD34+细胞/kg的最低阈值(8-9)。然而,剩余40%先前未响应单独G-CSF移动的患者,使用G-CSF和普乐沙福仍旧没有充分移动(8-9)。
因此迫切需要更有效地将HSPC从骨髓中移动到外周血液中的方法。
发明概述
本发明部分涉及以下发现:通过增加低氧诱导因子α(HIF-α)(在本文中也称为“HIF-α增效剂”)活性的药剂的共同给药显著增强HSPC通过动员剂(在本文中也称为“动员剂(mobilizer)”或造血干细胞和/或祖细胞的“动员剂(mobilizer)”)如G-CSF或普乐沙福,或其组合的移动。与干细胞动员剂单独给药相比,这反过来导致在外周血液中更高数量的造血干细胞和/或祖细胞,包括粒细胞/巨噬细胞祖细胞和/或巨核细胞/红细胞祖细胞。HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞动员剂的共同给药在用于刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞移动或用于刺激或增强血细胞生成,或用于干细胞移植的组合物和方法中是有用的,如以下所描述的。
因此,一方面,本发明提供了以下组合物,所述组合物包含增强剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂,由其组成或基本上由其组成。另一方面,本发明提供了包含HIF-α增效剂的组合物在移动造血干细胞和/或祖细胞中的应用。HIF-α增效剂选自而不限于,稳定HIF-α的药剂、刺激或增强HIF-α、HIF-α多肽或编码序列表达的药剂,以及它们的组合。在一些实施方案中,HIF-α增效剂抑制HIF羟化酶,例如HIF脯氨酰羟化酶(PHD)(例如,PHD1、PHD2和/或PHD3)的活性。这样的药剂在本文中也称为“PHD抑制剂”或“PHI”。在具体实施方案中,PHD抑制剂是HIF-αPHD的选择性抑制剂。在一些实施方案中,PHD抑制剂是两种或更多种PHD酶的抑制剂。在一些实施方案中,至少一种动员剂选自生长因子、细胞因子、趋化因子或多糖。适合的是,至少一种动员剂的特征为其能降低或阻遏CXCL12的表达、合成或功能,或特征为其能阻遏或拮抗CXCR4。在具体实施方案中,动员剂选自集落刺激因子,如G-CSF或其变体、衍生物或类似物,CXCR4拮抗剂,如普乐沙福,或它们的组合。在一些实施方案中,所述组合物进一步包含药学上可接受的载体。
本发明的组合物对刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞移动,或对刺激或增强血细胞生成,或对干细胞移植是有用的。因此,在相关方面,本发明提供了HIF-α增效剂用于刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞移动,或用于刺激或增强血细胞生成,或用于干细胞移植,或用于治疗或预防免疫低下病症(例如,中性粒细胞减少症、粒细胞缺乏症、血小板减少症或贫血)的用途。在这方面,所述用途在已经给予、正在给予或将要给予造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂的主题中。在一些实施方案中,HIF-α增效剂和至少一种动员剂被制备或制造为用于那些应用的药物。
本发明的另一方面提供了用于增强受试者中造血干细胞和/或祖细胞的动员剂的造血功能的方法。这些方法通常包括、由或基本上由以下组成:给予受试者有效增强动员剂的造血功能(例如,增加外周血液中的造血干细胞和/或祖细胞的数量,包括粒细胞/巨噬细胞祖细胞和/或巨核细胞/红细胞祖细胞的数量)的量的HIF-α增效剂。
本发明的再一方面提供了用于将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到供体受试者的外周血液中的方法。这些方法通常包括、由或基本上由以下组成:给予受试者有效将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到受试者的外周血液中的量的HIF-α增效剂。在这些实施方案中的供体受试者选自已经给予、正在给予或将要给予造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂的受试者。相关的方法通常包括、由或基本上由以下组成:同时给予供体受试者有效将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到受试者的外周血液中的量的HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂。适合地,以有效增强至少一种动员剂的造血功能的量给予HIF-α增效剂。在具体实施方案中,以协同有效量给予HIF-α增效剂和至少一种动员剂。在一些实施方案中,受试者患有免疫低下病症或处于获得免疫低下病症的风险中(例如,受试者将暴露于引起或很可能引起免疫低下病症的药剂或治疗中)。在该类型的说明性实例中,受试者患有高增生性细胞紊乱(例如癌症或自身免疫性疾病,所述癌症可以是原发性癌症或转移性癌症),并且已经、正在或将要经历医学治疗。在具体实施方案中,所述高增生性细胞紊乱是癌症(例如,白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤等)。适合地,所述医学治疗靶向快速分裂的细胞或使细胞周期或细胞分裂中断(例如,化学治疗和/或放射治疗)。适合的是,免疫低下病症选自中性粒细胞减少症、粒细胞缺乏症、血小板减少症和贫血。
在一些实施方案中,所述方法进一步包括从供体受试者(例如,从受试者的外周循环)收集或收获移动的造血干细胞和/或祖细胞。在其中一实施方案中,所述方法进一步包括培养和/或储存收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞(例如,以保持或扩增收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞)。在一些实施方案中,所述方法进一步包括将任选地已经培养或储存的所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞输注或移植到受体受试者中。供体受试者和受体受试者可以是相同的受试者或可以是不同的受试者。在一些实施方案中,受试者既是收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞的供体也是受体,所述造血干细胞和/或祖细胞可任选为已被培养或储存,且所述受试者适合需要干细胞移植。干细胞的移植在这些实施方案中相对于受体而言是自体的。适合的是,受试者患有免疫低下病症或已经暴露于导致免疫低下病症的医学治疗中。
在其它实施方案中,所述方法进一步包括将任选地已经培养或储存的所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞输注或移植到另一位受试者中。在这些实施方案中,供体受试者和受体受试者是不同的受试者。在这些实施方案中,从其收集或收获到的移动的造血干细胞和/或祖细胞的受试者是供体,而其它受试者是适合地需要干细胞移植的供体。在这些实施方案中,干细胞移植对于受体而言是同种异体的或异种的。适合地,其它(受体)受试者患有免疫低下病症或已经暴露于导致免疫低下病症的医学治疗中。
在一些实施方案中,所述方法进一步包括,在干细胞移植之前、与干细胞移植同时或在干细胞移植之后给予受体有效将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到受试者的外周血液中的量的HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的动员剂。
根据本发明,HIF-α增效剂对于增强造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂的造血功能(例如,增加外周血液中的造血干细胞和/或祖细胞的数量,包括粒细胞/巨噬细胞祖细胞和/或巨核细胞/红细胞祖细胞的数量)是有用的。HIF-α增效剂可以是已知的,或可以是使用任何适合的筛选分析鉴别的。因此,在相关的方面,本发明提供了用于鉴别对增强动员剂的造血功能的药剂的筛选方法。这些方法通常包括测试受试药剂是否增强HIF-α(例如,增加HIF-α的累积或稳定性;直接提供HIF-α活性或增加HIF-1的表达)和基于受试药剂对增强测试为阳性来确定该受试药剂是否刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞的移动。
在另一个相关的方面,本发明提供了制备增强造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂的造血功能的药剂的方法。这些方法通常包括:通过如以上概括地描述的筛选化验鉴别HIF-α增效剂;和合成基于针对增强动员剂的造血功能测试为阳性的药剂。适合的是,所述方法进一步包括衍生所述药剂和任选地使用药学上可接受的载体配制所述衍生的药剂以改进所述药剂在增强动员剂的造血功能的功效。
动员剂(或多种动员剂)和HIF-α增效剂适合地以一种或多种各自包含药学上可接受的载体的组合物形式给药。该组合物(或多种组合物)可以在一定时间内以有效增加外周血液中的造血干细胞和/或祖细胞的数量,包括粒细胞/巨噬细胞祖细胞和/或巨核细胞/红细胞祖细胞的数量的量,并通过注射、通过局部应用或通过包括缓释给药方式的口服途径给药。
在一些实施方案中,将动员剂(或多种动员剂)和HIF-α增效剂同时给予受试者。在其它实施方案中,在动员剂给药之前将HIF-α增效剂给予受试者。在其它实施方案中,在动员剂给药之后将HIF-α增效剂给予受试者。
在相关的方面,所述方法对于治疗或预防受试者的免疫低下病症是有用的(例如由于受试者暴露于医学治疗中而引起的病症)。在这些实施方案中,动员剂(或多种动员剂)和HIF-α增效剂以有效治疗或预防免疫低下病症(例如,中性粒细胞减少症、粒细胞缺乏症、血小板减少症或贫血)的量同时给药。在其中一些实施方案中,所述方法进一步包括鉴别患有免疫低下病症或处于获得免疫低下病症的风险中的受试者。适合的是,可以将HIF-α增效剂和动员剂(或多种动员剂)与医学治疗同时、顺序或分别给予受试者。在一些实施方案中,HIF-α增效剂和动员剂(或多种动员剂)的同时给药是预防性治疗(例如,受试者准备经历化学治疗或放射治疗)。在其他实施方案中,其是治疗性治疗(例如受试者已经接受至少一剂化学治疗或至少一次放射治疗)。
在一些实施方案中,所述方法进一步包括将受试者暴露于治疗或预防免疫低下病症的辅助治疗。在该类型的说明性实例中,免疫低下病症是贫血,并且辅助治疗可以包括给予受试者贫血药物,所述贫血药物选自重组促红细胞生成素(EPO)、二价铁离子、三价铁离子、维生素B12、维生素B6、维生素C、维生素D、钙三醇、阿尔法骨化醇、叶酸、雄性激素和肉毒碱。在其它说明性实例中,免疫低下病症是血小板减少症,并且辅助治疗可以包括给予受试者血小板减少症药物,所述血小板减少症药物选自糖皮质激素、重组促血小板生成素(TPO)、重组巨核细胞生长和发育因子(MGDF)、PEG化重组MGDF(聚乙二醇化重组MGDF)和利索茶碱(lisophylline)。在其它说明性实例中,所述免疫低下病症是中性粒细胞减少症,并且所述辅助治疗适合地包括给予受试者中性粒细胞减少症药物,所述中性粒细胞减少症药物选自糖皮质激素、免疫球蛋白、雄性激素、重组IFN-γ和子宫转铁蛋白。在一些实施方案中,将所述辅助治疗与HIF-α增效剂和/或动员剂(或多种动员剂)同时、顺序或分别给予受试者。
在一些实施方案中,所述医学治疗很可能使受试者暴露于更高的感染风险中。因此,在这些实施方案中,所述方法进一步包括同时、顺序或分别给予HIF-α增效剂和/或动员剂(或多种动员剂)与至少一种抗感染剂,所述抗感染剂针对由免疫低下病症发展而来的或有高危险从免疫低下病症发展而来的感染有效。,其中所述抗感染剂选自抗微生物剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、驱肠虫剂、抗原虫剂和杀线虫剂。
通常,按照常规时间表给予HIF-α增效剂和至少一种动员剂中的其中一种或两者,例如每天、一周至少两次、一周至少三次、一周至少四次、一周至少五次、一周至少六次、每周、每隔一周、每隔两周、每隔三周、每月、每两个月、每三个月、每四个月和每六个月。
在一些有利的实施方案中,HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂的同时给药,对于治疗或预防造血功能障碍如中性粒细胞减少症、粒细胞缺乏症、血小板减少症、和贫血是有用的,所述造血功能障碍可以例如由靶向快速分裂的细胞或使细胞周期或细胞分裂中断的骨髓抑制性、脊髓抑制性或细胞减少性治疗(例如,化学治疗或放射治疗)引起。因此,在又一个方面,本发明提供了用于治疗受试者的高增生性细胞紊乱(例如,癌症或自身免疫性紊乱)的方法。这些方法通常包括同时给予受试者针对所述紊乱的医学治疗(例如化学治疗剂或放射),以及有效刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞移动或有效刺激或增强血细胞生成的量的造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂和HIF-α增效剂,所述医学治疗靶向快速分裂的细胞或使细胞周期或细胞分裂中断。
由于给予本发明的联合治疗会降低患有或发展作为脊髓抑制性、骨髓抑制性或细胞减少性治疗的副作用的造血功能障碍的风险,因此可能给予受试者更高治疗剂量的化学治疗剂或放射,以便杀伤肿瘤或抑制肿瘤的生长或增殖,或治疗或预防受试者的自身免疫性疾病。因此,在又一个方面,本发明提供了在受试者中用于增加治疗高增生性细胞紊乱(例如,癌症或自身免疫性疾病)的药物的剂量的方法,其中所述药物导致发展免疫低下病症或增加发展免疫低下病症的风险。这些方法通常包括将所述药物以通常诱导副作用(例如,发展免疫低下病症)的剂量,与有效抑制或预防那些副作用的诱导的量(例如,有效增加外周血液中的造血干细胞和/或祖细胞的数量,包括粒细胞/巨噬细胞祖细胞和/或巨核细胞/红细胞祖细胞的数量的量)的造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂和HIF-α增效剂一起同时给予受试者。
在又一个方面,本发明提供了用于治疗或预防高增生性细胞紊乱(例如,癌症或自身免疫性疾病)的药物组合物,所述高增生性细胞紊乱通过靶向快速分裂的细胞或使细胞周期或细胞分裂中断的医学治疗(例如,化学治疗或放射治疗)是可治疗或可预防的。这些组合物通常包含,由或基本由下列组成:HIF-α增效剂、造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂和至少一种其它药剂。所述其它药剂选自化学治疗剂,(例如,细胞毒性剂)、放射增敏剂、贫血药物、血小板减少症药物、中性粒细胞减少症药物、粒细胞缺乏症药物和抗感染剂,以及任选地药学上可接受的载体。
附图的简要说明
图1A、1B、1C和1D是显示化合物X和G-CSF对HIF-1α蛋白和CFC移动的影响的图示。(1A)针对HIF-1α和β-肌动蛋白的存在,来自使用盐水(Saline)处理、使用化合物X处理3天(X3)、使用G-CSF处理2天(G2)或使用化合物X和G-CSF两者处理(G2X3)的小鼠的骨髓(BM)细胞裂解液的蛋白质印迹分析。每个泳道表示不同的小鼠。(1B)曲线图显示了使用G-CSF处理(空心菱形),或使用化合物X处理3天和使用G-CSF(填充菱形)处理指定天数的小鼠的每mL血液和每个脾脏的CFC数量。(1C)曲线图显示了使用G-CSF处理2天和使用化合物X处理0至4天的小鼠的每mL血液和每个脾脏的CFC数量。(1D)在有或没有化合物X的情况下使用普乐沙福处理的小鼠的每mL血液和每个脾脏的CFC时间过程数量。小鼠使用普乐沙福处理1小时(P1)以及使用化合物X处理1、2、3或4天(P1X1-P1X4)。数据为每种情况的6只小鼠的平均值±SD,*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图2A、2B、2C和2D呈现了显示化合物X与G-CSF,或与G-CSF和普乐沙福组合的协同作用的图示。(2A)使用的处理组。(2B)曲线图显示了仅GCSF(实心圆);GCSF和化合物X(空心正方形);GCSF和普乐沙福(实心三角形);以及GCSF、普乐沙福和化合物X(实心菱形)的组合处理的小鼠的每mL血液和每个脾脏的CFC数量。(2C)在使用如2A中的G-CSF、普乐沙福和化合物X的组合,仅GCSF(实心圆);GCSF和化合物X(空心正方形);GCSF和普乐沙福(实心三角形);以及GCSF、普乐沙福和化合物X(实心菱形)的组合处理之后,每mL血液和每个脾脏的Lin-Sca1+Kit+HSPC和(2D)Lin-Sca1+Kit+CD48-CD150+HSC的数量的时间过程。数据为每个处理组的每个时间点的6只小鼠的平均值±SD。*:p<0.05;**0.001<p<0.01;***p<0.001。
图3A和3B是显示化合物X与G-CSF和普乐沙福协同以增强竞争性再植(repopulating)HSC的图示。CD45.2+小鼠使用G-CSF移动2天或单独使用G-CSF移动4天(实心圆),使用G-CSF与普乐沙福的组合移动1小时(实心三角形),使用化合物X移动3天(实心正方形)或使用普乐沙福移动1小时和化合物X移动3天两者(实心倒三角形)。在致死剂量照射的受体中移植血液(20μL)以及来自CD45.1+小鼠的200,000个竞争性BM细胞。在移植后16周时血液CD45.2+白细胞的比例和在从(3A)使用G-CSF处理2天和(3B)使用G-CSF处理4天开始的移植后16周由供体嵌合计算的每mL移动血液的再植单位数。每个圆点是来自一只受体小鼠的结果,条是平均数。*:p<0.05;**0.001<p<0.01;***p<0.001。
图4A、4B、4C和4D是显示HSPC中Hif1a基因的缺失损害响应G-CSF的HSPC移动的图示。在敲除(floxed)两个Hif1a等位基因以使Hif1a基因缺失的突变小鼠中激活CreER,并使用G-CSF移动小鼠3天。(4A)Lin-Sca1+Kit+CD48-CD150+HSCs、Lin-Sca1+Kit+HSPCs、Lin-Sca1-Kit+骨髓性祖细胞和Lin+白细胞的比例,其中在对Hif1afl/flR26RYFP/YFPSclCreER小鼠进行3天的三苯氧胺处理之后,CreER诱导黄色荧光蛋白(YFP)。在Hif1afl/flR26RYFP/YFPSclCreER小鼠(实心圆或正方形)和对照Hif1aWT/WTR26RYFP/YFPSclCreER小鼠(空心圆或正方形)的血液和脾脏中移动的(4B)CFC和(4C)Lin-Sca1+Kit+CD48-CD150+HSCs、Lin-Sca1+Kit+HSPC的数量。4B中的每个圆点表示单独的小鼠。*p<0.05;**0.001<p<0.01;***p<0.001。(4D)在使用三苯氧胺进行CreER诱导和3天G-CSF处理之后,从骨髓中移动到血液或脾脏的YFP-(Hif1afl/fl未缺失的)和YFP+(Hif1aΔ/Δ缺失的)HSC与保留在骨髓中的YFP-或YFP+HSC的比例。圆点的对数显示了在相同移动的Hif1afl/flR26RYFP/YFPSclCreER小鼠中YFP-和YFP+HSC的结果。使用配对t检验计算显著性。
图5A、5B和5C是显示在骨祖细胞中Hif1a基因的缺失延迟了响应G-CSF的HSPC移动的图示。(5A)CD45-Lin-CD31-Sca1-51+成骨细胞和CD45-Lin-CD31+内皮细胞的比例,其中在Hif1afl/flR26RYFP/YFPOsxCreER小鼠中通过CreER诱导YFP。(5B)在Hif1afl/flR26RYFP/YFPOsxCreER小鼠中每个股骨的CFCs和Lin-Sca1+Kit+CD48-HSCs、Lin-Sca1+Kit+HSPCs的数量,(HIF1awt、空心圆、HIF1afl/fl、实心圆)。(5C)在使用G-CSF处理2-4天之后的Hif1afl/flR26RYFP/YFPOsxCreER小鼠的血液和脾脏中移动的CFCs的数量(HIF1awt、空心圆、HIF1afl/fl、实心圆)。
图6A和6B是展示使用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF组合处理对骨髓中的造血干细胞和祖细胞的数量和表型分布的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照(vehiclecontrol)处理。(6A)骨髓性祖细胞(LKS-)-上部图,造血干细胞和祖细胞(LKS+)-中间图,和LKS+CD48+谱系限制的祖细胞-下部图。(6B)LKS+CD48-CD150-专能祖细胞(multipotentprogenitor)-上部图和LSK+CD48-CD150+造血干细胞-下部图。
图7A和7B是展示使用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF组合处理对造血干细胞和祖细胞向血液移动的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。(7A)表型骨髓性祖细胞(LKS-)-上部图、造血干细胞和祖细胞(LKS+)-中间图,和LKS+CD48+谱系限制的祖细胞-下部图。(7B)LKS+CD48-CD150-专能祖细胞-上部图,和LKS+CD48-CD150+造血干细胞-下部图。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图8A和8B是展示化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF组合处理对造血干细胞和祖细胞向脾脏移动的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。(8A)表型骨髓性祖细胞(LKS-)-上部图、造血干细胞和祖细胞(LKS+)-中间图和LKS+CD48+谱系限制的祖细胞-下部图。(8B)LKS+CD48-CD150-专能祖细胞-上部图和LKS+CD48-CD150+造血干细胞-下部图。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图9A和9B是展示化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF组合处理对每只小鼠造血干细胞和祖细胞的总移动(血液和脾脏)的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。(9A)表型骨髓性祖细胞(LKS-)-上部图、造血干细胞和祖细胞(LKS+)-中间图和LKS+CD48+谱系限制的祖细胞-下部图。(9B)LKS+CD48-CD150-专能祖细胞-上部图,和LKS+CD48-CD150+造血干细胞-下部图。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图10是展示化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF组合处理对集落形成单位(CFU)向血液移动-上部图,向脾脏移动-中间图和组合的总移动(血液和脾脏)-下部图的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图11是展示化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF组合处理对每ml血液的白细胞(WBC)数量上部图和脾脏重量-下部图的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图12A和12B是展示化合物D、化合物E或化合物F与G-CSF组合处理对造血干细胞和祖细胞向血液和脾脏的总移动的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。(12A)表型骨髓性祖细胞(LKS-)-上部图、造血干细胞和祖细胞(LKS+)-中间图和LKS+CD48+谱系限制的祖细胞-下部图。(12B)LKS+CD48-CD150-专能祖细胞-上部图,和LKS+CD48-CD150+造血干细胞-下部图。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图13是展示化合物D、化合物E或化合物F与G-CSF组合处理对集落形成单位(CFU)向血液移动-上部图,向脾脏移动-中间图,和组合(血液和脾脏)的总移动-下部图的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图14A和14B是展示使用化合物H、化合物J或化合物K与G-CSF组合处理对造血干细胞和祖细胞向血液和脾脏的总移动的影响的图示。使用G-CSF和充当对照的载体对照处理。(14A)表型骨髓性祖细胞(LKS-)-上部图、造血干细胞和祖细胞(LKS+)-中间图,和LKS+CD48+谱系限制的祖细胞-下部图。(14B)LKS+CD48-CD150-专能祖细胞-上部图,和LKS+CD48-CD150+造血干细胞-下部图。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
图15是展示使用化合物H、化合物J或化合物K与G-CSF组合处理对集落形成单位(CFU)向血液移动-上部图、向脾脏移动-中间图和组合(血液和脾脏)的总移动-下部图的影响的图示。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。
发明详述
1.定义
除非另外定义,在本文中使用的所有科技术语具有与本发明所属领域中的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文所描述的那些类似或等价的任何方法和材料,但优选的方法和材料已被描述。为了本发明的目的,下文中定义了下列术语。
冠词“一个(a)”和“一个(an)”在本文中用于指一个或超过一个(即至少一个)的冠词的语法对象。举例来说,“一种造血干细胞和/或祖细胞的动员剂”是指一种造血干细胞和/或祖细胞的动员剂或超过一种造血干细胞和/或祖细胞的动员剂。
所谓“约”指的是量、水平、数值、数目、频率、百分比、维度、尺寸、数量、重量或长度相对于其涉及的参考含量、水平、数值、数量、频率、百分比、维度、尺寸、量、重量或长度变化最多10%。
术语“同时给药(administeredconcurrently)”或“同时给药(administeringconcurrently)”或“共同给药(co-administering)”等是指包含两种或更多种活性剂的单一组分的给药,或每种活性剂作为单独的组分给药,和/或通过单独途径在足够短的时间内同期、同时或顺序递送,有效结果等价于所有这样的活性剂作为单一组分给药所获得的结果,或获得的结果是药剂的组合效应。例如,HIF-α增效剂可以与造血干细胞和/或祖细胞的动员剂一起给药,以便增加外周血液中造血干细胞、祖细胞和/或其分化细胞的数量。在另一个实例中,HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的动员剂与另一种药剂一起给药以增强其作用或改善引起免疫低下病症或有助于免疫低下病症的医学治疗的作用。在另一个实例中,HIF-α增效剂在晚于造血干细胞和/或祖细胞的动员剂的时间点但在造血干细胞和/或祖细胞的动员剂仍旧发挥作用的期间内给药。所谓“顺序”给药指的是在两种类型的分子或活性剂的给药之间的秒、分钟、小时或天的时间差异。这些分子或活性剂可以以任何顺序给药。所谓“同时地”指的是活性剂在大体上相同的时间给药并且最好一起在相同的制剂中给药。所谓“同期地”指的是活性剂在时间上接近地给药,例如,一种药剂在另一种药剂之前或之后的约一分钟内至约一天内给药。任何同期时间是有用的。然而,情况通常是这样的,当不同时给药时,药剂将在约一分钟内至约八小时内,并且优选地在小于约一至约四小时内给药。在某些实施方案中,在彼此的约60分钟、约50分钟、约40分钟、约30分钟、约20分钟、约10分钟、约5分钟或约1分钟内,或间隔约1小时,约2小时、约4小时、约6小时、约10小时、约12小时、约24小时、约36小时、或约72小时、或更多的时间给予HIF-α增效剂和动员剂。当同期给药时,药剂可以适合地在受试者的相同部位给药。术语“相同部位”包括准确的位置,但可以在约0.5厘米至约15厘米内,通常在约0.5厘米至约5厘米内。如本文中所使用的术语“单独地”意思是以一定的间隔给予药剂,例如以约一天至数周或月的间隔给药。活性剂可以以任一顺序给药。如本文中所使用的术语“顺序地”意思是按顺序给予药剂,例如以一定间隔或以分钟、小时、天或周的间隔给予药剂。如果合适的话活性剂可以在定期重复周期中给药。
术语“药剂”包括诱导希望的药理和/或生理效应的化合物、组合物或分子。该术语该涵盖本文具体提及的那些化合物的药学上可接受的和药理活性成分,所述药学上可接受的和药理活性成分包括但不限于盐、酯、酰胺、前药、活性代谢物、类似物等。当使用以上术语时,则要理解的是其包括活性剂本身以及药学上可接受的、药理活性的盐、酯、酰胺、前药、代谢物、类似物等。术语“药剂”不必狭窄地解释而是延伸至小分子,蛋白质分子如肽、多肽和蛋白质以及包含其的组合物和遗传分子如RNA、DNA及其模拟物和化学类似物以及细胞药剂。术语“药剂”包括能够产生和分泌本文提及的多肽的细胞以及包含编码该多肽的核苷酸序列的多核苷酸。因此,术语“药剂”延伸至核酸构建物,该核酸构建物包括在一系列细胞中表达和分泌的载体如病毒或非病毒载体、表达载体和质粒。
术语“酰基”表示包含C=O部分(并且不是羧酸、酯或酰胺或硫代酸酯)的基团。优选的酰基包括C(O)-R,其中R是氢或烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环基、芳基烷基、环烷基烷基或杂环基烷基残基,适合地C1-20残基。酰基的非限制性实例包括甲酰基;直链或支链的烷酰基如乙酰基、丙酰基、丁酰基、2-甲基丙酰基、戊酰基、2,2-二甲基丙酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬酰基、癸酰基、十一酰基、十二酰基、十三酰基、十四酰基、十五酰基、十六酰基、十七酰基、十八酰基、十九酰基和二十酰基;苯基羰基;环烷基羰基如环丙基甲基(或乙基)羰基、环丁基甲基(或乙基)羰基、环戊基甲基(或乙基)羰基和环己基甲基(或乙基)羰基;烷酰基如苯基烷酰基(例如,苯基乙酰基,即,苯甲酰基、苯基丙酰基、苯基丁酰基、苯基戊酰基、苯基己酰基)和萘基烷酰基(例如,萘基乙酰基、萘基丙酰基和萘基丁酰基),和苯基链烯酰基(例如,苯基己-4-烯-酰基、苯基己-3-烯-酰基、苯基庚酰基、苯基庚-4-烯-酰基、苯基庚-3-烯-酰基)。
如本文中所使用的“粒细胞缺乏症药物”是指减少与粒细胞缺乏症相关的症状、预防粒细胞缺乏症的发展或治疗现有的粒细胞缺乏症的物质的组合物。
如本文中所使用的“链烯基”表示由包含一个碳-碳双键的直链或支链烃残基形成的基团,所述碳-碳双键包括如本文所定义的烯属单-、二-或多-不饱和的烷基基团,适合地C1-20链烯基(例如,C1-10或C1-6)。链烯基的实例包括乙烯基、烯丙基、1-甲基乙烯基、丁烯基、异-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、环戊烯基、1-甲基-环戊烯基、1-己烯基、3-己烯基、环己烯基、1-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、5-庚烯基、3-己烯基、4-己烯基、1-辛烯基、环辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、3-癸烯基、1,3-丁二烯基、1-4,戊二烯基、1,3-环戊二烯基、1,3-己二烯基,和1,4-己二烯基。链烯基基团可以任选地被如本文所定义的一个或多个任选取代基取代。因此,如本文中所使用的“链烯基”取其指任选取代的链烯基。
如本文中所使用,术语“烷基”当单独使用或在词语如“芳基烷基”、“杂环基烷基”和“环烷基烷基”中使用时表示直链或支链烃残基,适合地C1-20烷基,例如,C1-10或C1-6。直链和支链烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、1,2-二甲基丙基、1,1-二甲基-丙基、己基、4-甲基戊基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、l,l-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、1,2,2,-三甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、庚基、5-甲氧基己基、1-甲基己基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、4,4-二甲基戊基、1,2-二甲基戊基、1,3-二甲基戊基、1,4-二甲基-戊基、1,2,3-三甲基丁基、1,1,2-三甲基丁基、1,1,3-三甲基丁基、辛基、6-甲基庚基、1-甲基庚基、1,1,3,3-四甲基丁基、壬基,1-、2-、3-、4-、5-、6-或7-甲基-辛基,1-、2-、3-、4-或5-乙基庚基,1-、2-或3-丙基己基、癸基,1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-和8-甲基壬基,1-、2-、3-、4-、5-或6-乙基辛基,1-、2-、3-或4-丙基庚基、十一烷基,1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-甲基癸基,1-、2-、3-、4-、5-、6-或7-乙基壬基,1-、2-、3-、4-或5-丙基辛基,1-、2-或3-丁基庚基、1-戊基己基、十二烷基,1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-甲基十一烷基,1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-乙基癸基,1-、2-、3-、4-、5-或6-丙基壬基,1-、2-、3-或4-丁基辛基、1-2-戊基庚基等。烷基基团可以任选地被如本文所定义的一个或多个任选取代基取代。因此,如本文中所使用的“烷基”取其指任选取代的烷基。
术语“炔基”表示由包含至少一个碳-碳三键的直链或支链烃残基形成的基团,所述碳-碳三键包括如本文所定义的炔属(ethynyically)单-、二-或多-不饱和的烷基或环烷基,适合地C1-20炔基(例如,C1-10或C1-6)。实例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基。炔基基团可以任选地被如本文所定义的一个或多个任选取代基取代。因此,如本文中所使用的“炔基”取其指任选取代的炔基。
术语“芳基”单独使用或在化合物词语如“芳基烷基”和“芳氧基”中使用表示芳族烃的单核、多核、共轭或稠合残基。芳基的实例包括苯基、二苯基和萘基。在具体实施方案中、芳基包括苯基和萘基。芳基基团可以任选地被如本文所定义的一个或多个任选取代基取代。因此,如本文中所使用的“芳基”取其指可以被任选取代的芳基,如任选取代的苯基和任选取代的萘基。
术语“芳基烷基”、“环烷基烷基”和“杂环基烷基”是分别指被芳基、环烷基或杂环基取代的(适合地在末端)烷基。
术语“芳氧基”、“环烷氧基”和“杂环氧基”分别表示由氧原子连接的芳基、环烷基和杂环基。
如本文中所使用的“贫血药物”是指减少与贫血相关的症状、预防贫血的发展或治疗现有的贫血的物质的组合物。
所谓“抗原结合分子”指的是对靶抗原具有结合亲和力的分子。应当理解的是,该术语延伸至免疫球蛋白、免疫球蛋白片段和表现出抗原结合活性的非免疫球蛋白衍生的蛋白质框架。
“抗原性或免疫原性活性”是指本发明的多肽、片段、变体或衍生物在其给药的动物,适合地哺乳动物中产生抗原性或免疫原性应答的能力,其中所述应答包括产生特异性结合多肽或其片段的元件。
本文中提到“细菌”或“细菌感染”包括任何细菌性病原体,包括脊椎动物出现的细菌性病原体。代表性的细菌性病原体包括但不限于以下属的种类:不动杆菌属(Acinetobacter)、放线杆菌属(Actinobacillus)、放线菌(Actinomycetes)、放线菌属(Actinomyces)、气单胞菌属(Aeromonas)、杆菌属(Bacillus)、拟杆菌属(Bacteroides)、博德特菌属(Bordetella)、包柔氏螺旋体属(Borrelia)、布鲁氏菌属(Brucella)(布鲁氏菌)、伯克氏菌属(Burkholderia)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、梭菌属(Clostridium)、棒状杆菌属(Coryne细菌)、肠杆菌属(Enterobacter)、肠球菌属(Enterococcus)、丹毒丝菌属(Erysipelothrix)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、弗朗西菌属(Francisella)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、螺杆菌属(Helicobacter)、克雷伯菌属(Klebsiella)、军团菌属(Legionella)、钩端螺旋体属(Leptospira)、李斯特菌属(Listeria)、微球菌属(Micrococcus)、莫拉克菌属(Moraxella)、摩根氏菌属(Morganella)、分枝杆菌属(Myco细菌)(肺结核)、诺卡菌属(Nocardia)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、巴氏杆菌属(Pasteurella)、邻单胞菌属(Plesiomonas)、丙酸杆菌属(Propioni细菌)、变形杆菌属(Proteus)、普罗维登斯菌属(Providencia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、红球菌属(Rhodococcus)、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、志贺氏菌属(Shigella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、链球菌属(Streptococcus)、密螺旋体属(Treponema)、弧菌属(Vibrio)(霍乱)和耶尔森氏菌属(Yersinia)(瘟疫)。
除非在上下文中另外要求,在本说明书通篇中,词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应被理解为暗示包含所述步骤或要素或步骤或要素的组但不排除包含其它步骤或要素或步骤或要素的组。因此,术语“包含(comprising)”等的使用表明所列出的要素是需要的或强制的,但其它要素是任选的并且可以存在或不存在。所谓“由……组成”指的是包括并且限于不论在短语“由……组成”之后是什么。因此,短语“由……组成”表明所列出的要素是需要的或强制的,并且其它要素不可以存在。所谓“基本上由……组成”指的是包括在该短语之后列出的任何要素并且限于不干扰或有助于在所列出的要素的公开内容中指定的活性或作用的其它要素。因此,短语“基本上由……组成”表面所列出的要素是需要的或强制的,但其它要素是任选的并且根据其是否影响所列出的要素的活性或作用其它要素可以存在或不存在。
所谓“编码序列”是指有助于编码基因的多肽产物的任何核酸序列。相比之下,术语“非编码序列”是指对编码基因的多肽产物无助的任何核酸序列。
术语“集落刺激因子”是指结合造血细胞表面上的受体蛋白的分泌性糖蛋白,所述受体蛋白激活引起细胞增殖并分化为不同类型的血液细胞的细胞内信号传导途径。CSF-1(巨噬细胞集落刺激因子)、CSF-2(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子;GM-CSF;沙格司亭)和CSF-3(粒细胞集落刺激因子;G-CSF;非格司亭)和promegapoietin是集落刺激因子的实例。
所谓“对应于(correspondsto)”或“对应于(correspondingto)”是指显示与参考核酸序列具有基本序列同一性的核酸序列(例如,与所有或一部分参考核酸序列具有至少约50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、97、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%或甚至高达100%的序列同一性)或显示与参考氨基酸序列具有基本序列相似性或同一性的氨基酸序列(例如,与所有或一部分参考氨基酸序列具有至少50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、97、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%或甚至高达100%序列相似性或同一性)。
“环烷基”当单独使用或在化合物词语如“环烷氧基”中使用时是指环烃残基,包括单-或多环烷基。示例性的环烷基是C4-7烷基。“环烷基”基团可以包含一个或多个双键或三键以形成环链烯基或环炔基,因此“环烷基”也指非芳香族不饱和的以及饱和的环烃残基。“环烷基”的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、1,3-环庚二烯基、1,3,5-环庚三烯基和1,3,5,7-环辛四烯基。环烷基基团可以任选地被如本文所定义的一个或多个任选取代基取代。因此,如本文中所使用的“环烷基”取其指任选取代的环烷基。
术语“衍生化(derivatize)”、“衍生化(derivatizing)”等是指通过化学反应,例如通过使化合物与官能团加入试剂反应而将一个或多个反应性基团加入该化合物等,由另一种物质产生或获得化合物。
在多肽衍生物的上下文中,术语“衍生物”是指已经通过修饰,例如通过与其它化学部分缀合或络合或通过如本领域将理解的翻译后修饰技术从基序列衍生的多肽。术语“衍生物”在其范围内还包括已经对母体序列进行的改变,包括提供功能等价分子的添加或缺失。
如在本文中所使用,术语造血干细胞和/或造血祖细胞的“分化”是指,造血干细胞转变为造血祖细胞和造血祖细胞转变为单能造血祖细胞和/或具有特征功能的细胞,即成熟细胞,包括红细胞、白细胞(例如,嗜中性粒细胞)和巨核细胞。造血干细胞分化为多种血液细胞类型涉及几组基因的连续活化或沉默。造血干细胞在分化的早期阶段通常选择淋巴或骨髓谱系路径。
在治疗或预防病症的上下文中,所谓“有效量”是指以单次剂量或作为系列的部分给予需要这样的治疗或预防的个体的药剂或组合物的量,所述量有效预防遭受所述病症的症状,保持抑制这样的症状和/或治疗现有的症状。有效量将根据以下改变:要治疗的个体的健康状况和身体状况、要治疗的个体的分类组、组合物的配制、医疗状况的评估和其它相关因素。预期所述量将落入可以通过常规试验确定的相对宽的范围内。
关于基因序列,术语“表达”是指基因的转录和适当时,所产生的mRNA转录物到蛋白质的翻译。因此,如从上下文中清楚的是,编码序列的表达由编码序列的转录和翻译产生。相反地,非编码序列的表达由非编码序列的转录产生。
如本文所用术语“功能”是指生物功能、酶功能或治疗功能。
如在本文中所使用,术语“基因”是指细胞基因组的任何和所有离散的编码区以及相关的非编码区和调节区。该术语旨在指编码具体多肽的可读框、内含子和在表达调节中涉及的邻近的5'和3'非编码核苷酸序列。在这一点上,基因可以进一步包含与给定基因天然相关的控制信号如启动子、增强子、终止信号和/或聚腺苷酸化信号,或异源控制信号。DNA序列可以是cDNA或基因组DNA或其片段。基因可以被引入到适当的载体中,用于染色体外维持或用于整合到宿主中。
术语“基团”当应用于化学物质时,是指形成一部分分子的一组原子。在一些情况下,基团可以包括彼此结合以形成一部分分子的两个或更多个原子。基团可以是单价或多价的(例如,二价的)以允许结合分子的一个或多个基团。例如,单价基团可以被设想为其一个氢原子被去除以允许结合分子的另一个基团的分子。基团可以带正电荷或负电荷。例如,带正电荷的基团可以被设想为加入一个或多个质子(即,H+)的中性基团,而带负电荷的基团可以被设想为去除一个或多个质子的中性基团。基团的非限制性实例包括但不限于烷基基团、亚烃基基团、链烯基基团、亚链烯基基团、炔基基团、亚炔基基团、芳基基团、亚芳基基团、亚胺基(iminyl)基团、亚氨基(iminylene)基团、氢化物基团、卤素基团、羟基基团、烷氧基基团、羧基基团、含硫基团、烷硫基基团、二硫化物基团、氰基基团、硝基基团、氨基基团、烷基氨基基团、二烷基氨基基团、甲硅烷基基团和甲硅烷氧基基团。基团如烷基、链烯基、炔基、芳基、和杂环基无论是单独使用还是在化合物词语中使用或在基团的定义中使用,可以任选地被一个或多个取代基取代。如本文中所使用,“任选取代的”是指基团可以被或可以不被一个或多个选自以下的基团进一步取代:烷基、链烯基、炔基、芳基、卤素、卤代烷基、卤代链烯基、卤代炔基、卤代芳基、羟基、烷氧基、烯氧基、芳氧基、苄氧基、卤代烷氧基、卤代烯氧基、卤代芳氧基、硝基、硝基烷基、硝基链烯基、硝基炔基、硝基芳基、硝基杂环基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、链烯基氨基、炔基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、苯氨基、二苯氨基、苄基氨基、二苄基氨基、肼基、酰基、酰胺基、二酰氨基、酰氧基、杂环基、杂环氧基、杂环氨基、卤代杂环基、羧基酯、羧基、羧酰胺、巯基、烷硫基、苄硫基、酰硫基和含磷基团。如本文中所使用,术语“任选取代的”还可以指用羰基(C=O)基团取代CH2基团。任选取代基的非限制性实例包括烷基,优选地C1-8烷基(例如,C1-6烷基如甲基、乙基、丙基、丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基),羟基C1-8烷基(例如,羟甲基、羟乙基、羟丙基),烷氧基烷基(例如,甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、乙氧基丙基等)C1-8烷氧基(例如,C1-6烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基),卤素(氟、氯、溴、碘),三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基、羟基、苯基(其自身可以被如本文所述的任选取代基进一步取代,所述任选取代基例如,羟基、卤素、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、乙酰氧基、氨基),苄基(其中,CH2和/或苯基基团可以如本文所述被进一步取代),苯氧基(其中,CH2和/或苯基基团可以如本文所述被进一步取代),苄氧基(其中,CH2和/或苯基基团可以如本文所述被进一步取代)、氨基、C1-8烷基氨基(例如,C1-6烷基,如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基)、二C1-8烷基氨基(例如,C1-6烷基,如二甲氨基、二乙氨基、二丙氨基),酰胺基(例如,NHC(O)CH3)、苯氨基(其中,苯基自身可以如本文所述被进一步取代),硝基、甲酰基、-C(O)-C1-8烷基(例如,C1-6烷基,如乙酰基),O-C(O)-烷基(例如,C1-6烷基,如乙酰氧基),苯甲酰基(其中,CH2和/或苯基基团自身可以被进一步取代),用C=O、CO2H、CO2C1-8烷基取代CH2(例如,C1-6烷基如甲酯、乙酯、丙酯、丁酯)、CO2苯基(其中,苯基自身可以被进一步取代),CONH2、CONH苯基(其中,苯基自身可以如本文所述被进一步取代)、CONH苄基(其中,CH2和/或苯基基团可以如本文所述被进一步取代),CONHC1-8烷基(例如,C1-6烷基如甲酰胺、乙酰胺、丙酰胺、丁酰胺),CONH二C1-8烷基(例如,C1-6烷基)。
“血细胞生成”是指血液细胞发育和体内稳态的高度协调的过程。出生以前,血细胞生成发生在卵黄囊中,然后是肝脏,最后是骨髓。在正常的成人中,其发生在骨髓和淋巴组织中。所有的血液细胞由多能干细胞(pluripotentstemcell)发育而来。多能细胞分化为致力于三个、两个或一个造血分化途径的干细胞。然而,这些干细胞中没有一个可在形态上辨别。
如本文中所使用的术语“造血干细胞”或“HSC”是指能够分化为所有血液细胞的专能干细胞(multipotentstemcell),包括红细胞、白细胞和血小板。例如,术语“造血干细胞”包括并涵盖不仅在骨髓中而且也在脐带血衍生的细胞中包含的那些。
与术语“造血祖细胞”可交换使用的术语“造血祖细胞(hematopoieticprogenitor)”或“造血祖细胞(hematopoieticprogenitorcell)”是指比造血干细胞进一步分化但尚未分化为各自血细胞谱系的祖细胞或前体的那些祖细胞或前体细胞(单能前体细胞)。因此,“祖细胞(或多个祖细胞)”或“前体细胞(或多个前体细胞)”被定义为谱系定向的细胞,即单个细胞可以引起限于单独谱系如骨髓系或淋巴系谱系的后代。它们不具有自我更新的特性。其也可以受到谱系特异性生长因子的刺激而增殖。如果被激活而增殖,则祖细胞在编程细胞衰老和死亡发生之前具有限于50-70细胞倍增的寿命。例如,如本文中所使用的“造血祖细胞”包括粒细胞/巨噬细胞相关的祖细胞(集落形成单位粒细胞、巨噬细胞、CFU-GM)、红细胞类相关的祖细胞(爆发集落形成单位红细胞类,BFU-E)、巨核细胞相关的祖细胞(集落形成单位巨核细胞、CFU-Mk),和骨髓样相关的干细胞(混合的集落形成单位、CFU-Mix)。造血祖细胞具有直接或间接通过特定的发育谱系分化为最终细胞类型的能力。未指定为任何谱系的未分化的多能祖细胞在本文中称为“干细胞”。理论上,所有的造血细胞均可以衍生自单个干细胞,随和子细胞分化,所述单个干细胞也能够保持干细胞谱系。已经报道了在多能干细胞上富集至更大或更小的程度的哺乳动物骨髓细胞群的群分离(参见例如,C.Verfaillieetal.,J.Exp.Med.,172,509(1990))。
如本文中所使用的“HSPC”是指造血祖细胞和造血干细胞两者。
如本文中所使用,“HIF-α增效剂”包括增加HIF-α的累积或稳定性;直接提供HIF-α活性;或增加HIF-1表达的药剂。这样的药剂在本领域中是已知的,或可以通过本领域公认的筛选方法鉴别。HIF-α增效剂包括通过抑制一种或多种HIF羟化酶,例如,一种或多种HIF脯氨酰羟化酶,增加HIF-α的累积和/或稳定性的化合物。HIF羟化酶活性的抑制剂是众所周知的、容易地鉴别并在本文中有进一步描述。
本文中使用的“同系物”表示与正派地来自(bydecentfrom)共同祖先DNA序列的另一个基因或产物相关的基于或其产物。
如本文中所使用,术语“高增生性细胞紊乱”是指其中细胞高增生引起或有助于病理状态或紊乱的症状。说明性高增生性细胞紊乱包括但不限于赘生物、良性肿瘤、恶性肿瘤、癌前病症、原位肿瘤、有包膜的肿瘤(encapsulatedtumor)、转移性肿瘤、液体肿瘤、实体肿瘤、免疫肿瘤、血液肿瘤、癌症、癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤和快速分裂的细胞。本文所用的术语“快速分裂的细胞”定义为在相同组织内,以超过或大于在邻近或并列的细胞中预期或观察到的速率分裂的任何细胞。示例性的高增生性细胞紊乱包括癌症;血管增生性紊乱如再狭窄、动脉粥样硬化、支架内狭窄、血管移植狭窄等;纤维化紊乱;银屑病;炎症性疾病,例如关节炎等;肾小球肾炎;子宫内膜异位;黄斑退行性紊乱;良性生长紊乱如前列腺肥大和脂肪瘤;自身免疫性紊乱;和疤痕障碍如手术后疤痕形成、肥厚性疤痕、疤痕疙瘩疤痕和神经胶质疤痕。在一些实施方案中,高增生性细胞紊乱是初癌或癌症前期病症。“初癌细胞”或“癌前细胞”是显示为初癌或癌前病症的高增生性细胞紊乱的细胞。在其它实施方案中,高增生性细胞紊乱是癌症。术语“癌症”包括原发癌症和转移性癌症并且在本文中可与术语“赘生的”交换使用,指包含转移到远端部位或具有转移到远端部位的潜力并且显示不同于非赘生细胞的表型特征的细胞的疾病或病症,所述表型特征例如在三维基质如软琼脂中形成菌落或在三维基膜或细胞外基质制剂如MatrigelTM中形成管状网络或网样基质。非赘生性细胞在软琼脂中不形成菌落,而是在三维基膜或细胞外基质制剂中形成明显的球样结构。虽然通过各种机制,但赘生性细胞在其发育过程中获得一组特征性的功能能力。这样的能力包括逃避细胞凋亡、生长信号的自给自足、对于抗生长信号的不敏感性、组织入侵/转移、无限复制潜力和持续的血管生成。因此,“非赘生性”是指病症、疾病或紊乱不涉及癌细胞。示例性的癌症包括实体肿瘤以及血液肿瘤和/或恶性肿瘤。“癌细胞”、“癌性细胞”或“赘生性细胞”是表现出为癌症的高增生性细胞紊乱的细胞。可以使用任何可重生的测量方式鉴别癌细胞或癌前细胞。癌细胞或癌前细胞可以通过组织样品(例如活检样品)的组织学分型或分级来鉴别。癌细胞或癌前细胞可以通过使用适当的分子标记物来鉴别。在一些实施方案中,高增生性细胞紊乱是非赘生性紊乱,其中细胞高增生引起或有助于紊乱的病理学状态或症状。
本文所用的“杂交”表示使互补核苷酸序列配对以产生DNA-DNA杂合体或DNA-RNA杂合体。互补碱基序列是通过碱基配对规则相关的那些序列。在DNA中,A与T配对,C与G配对。在RNA中,U与A配对,C与G配对。在这一点上,本文所用的术语“配对”和“错配”是指在互补核酸链中配对的核苷酸的杂交潜力。配对的核苷酸有效地杂交,如以上提及的经典A-T和G-C碱基对。错配是未有效杂交的核苷酸的其它组合。在本发明中,优选的配对机制涉及氢键,氢键可以是在低聚化合物的链的互补核苷或核苷酸碱基(核酸碱基)之间的沃森-克里克(Watson-Crick)、胡斯坦(Hoogsteen)或反向胡斯坦氢键。例如,腺嘌呤和胸腺密度是通过形成氢键配对的互补核酸碱基。杂交可以发生于如本领域技术人员已知的各种环境下。
短语“特异性杂交于”等是指当特定核苷酸序列存在于复杂混合物(例如总细胞)DNA或RNA中时,在严格条件下仅分子仅与所述特定核苷酸序列结合、成双或杂交。
“低氧诱导因子α”或“HIF-α”是氧依赖性转录活化剂低氧诱导因子(HIF)的亚基,其在肿瘤的血管生成和哺乳动物发育中发挥关键作用。HIF是由组成性表达的HIF-1β亚基和三个亚基HIF-α(HIF-1α、HIF-2α或HIF-3α)之一组成的异源二聚体蛋白。最广泛研究和看起来主要的HIF同种型是HIF-1同种型。HIF-α亚基的稳定性和活性通过多种翻译后修饰调节,所述翻译后修饰包括羟基化、乙酰化和磷酸化。在常氧下,HIF-α亚基通过vonHippel-Lindau肿瘤抑制基因产物(vHL)介导的泛素-蛋白酶体途径快速降解。通过在称为氧依赖性降解区域(ODDD)的多肽段内的脯氨酸的羟基化和赖氨酸的乙酰化来触发vHL和HIF-α在常氧条件下的结合。在ODDD内的脯氨酸残基(例如,具体地在人HIF-1α多肽中的第402和564位脯氨酸)的羟基化在铁、氧和2-氧代戊二酸盐的存在下通过特异性HIF-脯氨酰羟化酶(HPH1-3,也称为PHD1-3)进行。在低氧条件下HIF-α亚基变得稳定并与助激活剂如p300/CBP相互作用以调节其转录活性。HIF-1在低氧条件下充当多个低氧诱导基因的主要调节剂。异源二聚体HIF-1结合靶基因调节序列的低氧应答元件(HRE),导致涉及在细胞增殖/生存、葡萄糖/铁代谢和血管生成,以及细胞凋亡和细胞应激控制下的基因转录。这些直接靶基因中的一些包括葡萄糖转移蛋白、糖分解酶、促红细胞生成素和血管生成因子血管内皮细胞生长因子(VEGF)。“HIF-α”是HIF-1的氧应答性组分并且可以指任何哺乳动物或非哺乳动物HIF-α多肽或其片段,例如HIF-1α、HIF-2α或HIF-3α。在具体实施方案中,该术语是指人形式的HIF-1α,例如在GenPept登记号AAC50152、NP_001521、NP_851397和NP_001230013中所阐明的。还涵盖HIF-α编码序列或基因序列,例如以下所讨论的。感兴趣的HIF-α片段是保留HIF-α的至少一个功能或结构特征的任何片段。HIF-1α的非限制性片段适合地包括被PHD多肽羟基化的第402和/或564位脯氨酸残基(如在GenPept登记号AAC50152中所阐明的)。适合的片段可以包括第344-698位残基、特别是第364-678位残基、更特别是第364-638位或第384-638位残基以及仍旧更特别是第364-598位或394-598位残基或由其组成。其它适合的片段可以包括第549-652位残基和甚至更特别是与vHL蛋白相互作用的其N端区域或由其组成。C端片段可以包括第549-582位残基,特别是第556-574位残基。其它适合的片段包括第344-417位残基,更适合地第380-417位残基或由其组成。在其它HIF-α亚基蛋白质中的这样的区域或其等价物有利地存在于在用于筛选PHD抑制剂的分析中使用的HIF-α底物中。示例性的HIF-α片段通常包括人HIF-1α序列的第549-582位残基。
如本文中所使用的术语“免疫低下的(immunocompromised)”是指具有先天、获得或诱导的不能发展正常的免疫应答的受试者。因此,一个免疫低下的受试者相对于一个正常受试者具有减弱的或损害的免疫系统。具有减弱的或损害的免疫系统的受试者具有与在正常免疫防御系统的元件中的一个或多个中的诱导或非诱导性的原发或继发缺陷相关的“免疫缺陷”或“免疫低下病症”。免疫低下病症通常是由于医学治疗,特别是与癌症治疗或移植排斥的治疗或预防相关的医学治疗而引起的,所述医学治疗例如放射治疗、化学治疗或其它免疫抑制治疗,如通过使用类固醇、环磷酰胺、咪唑硫嘌呤、氨甲喋呤、环孢霉素或雷帕霉素诱导的免疫抑制治疗。然而,应当理解的是,短语“由于医学治疗获得免疫低下病症的风险”仅指导致或给予免疫低下病症的医学治疗,尤其是化学治疗,或其它免疫抑制治疗,如通过使用放射、类固醇、环磷酰胺、咪唑硫嘌呤、氨甲喋呤、环孢霉素或雷帕霉素诱导的免疫抑制治疗。免疫低下病症在受试者中的存在可以通过本领域人员已知的任何适合的技术诊断。当发生罕见病或受试者由通常不引起疾病的生物体生病,尤其是如果受试者重复感染,是可能存在免疫低下病症的重要指标。通常考虑了其它可能性,如最近获得的感染-例如,HIV、肝炎、肺结核等。然而,通常确定性诊断是给予确定免疫低下病症的确切性质的实验室测试。大多数测试针对血液样品进行。血液包含抗体、淋巴细胞、吞噬细胞和补体成分-可能引起免疫缺陷的所有的主要免疫成分。血细胞计数会确定吞噬细胞或淋巴细胞的数量是否低于正常。这两种细胞类型中的任一种低于正常计数与免疫低下病症相关。还检查血细胞的外观。偶然地,受试者可能具有正常细胞计数,但细胞在结构上有缺陷。如果淋巴细胞的细胞计数低,通常进行进一步的测试来确定任何特定类型的淋巴细胞是否低于正常。可以进行淋巴细胞增殖测试以确定淋巴细胞是否可以对刺激物作出响应。未对刺激物作出响应与免疫低下病症相关。也可以确定抗体水平和补体水平,用于诊断免疫低下病症的存在。然而,应当理解的是,在要治疗的受试者中不存在诊断免疫低下病症时,没有预测本发明的方法。
本文提到“免疫相互作用的”包括提到在分子之间的任何相互作用、反应或其它结合形式,特别是在分子之一是免疫系统的组分或模仿免疫系统的组分的情况下。
本文提到的“感染性介质”、“感染性生物体”、“微生物”或“病原体”包括以下中的任意一个或多个物种或亚种:细菌、真菌、病毒、藻类、寄生物(包括外寄生物或内寄生物)、朊病毒、卵菌、粘液、霉菌、线虫、支原体等。本发明特别适于治疗或预防超过一种微生物的混合感染。致病性藻类包括无绿藻属(Prototheca)和费氏藻属(Pfiesteria)。在这些术语范围内还包括引起病症如克雅氏病的朊病毒蛋白。正如技术人员会领会到的,典型的非致病性介质感染受试者并且引起病理的致病性或能力可以随感染介质的基因型和表达谱、宿主和环境变化。真菌病原体包括但不限于以下属的种类:犁头霉属(Absidia)、支顶孢属(Acremonium)、曲霉属(Aspergillus)、蛙粪霉属(Basidiobolus)、双极霉属(Bipolaris)、芽生菌属(Blastomyces)、念珠菌属(Candida)(酵母)、支孢瓶霉属(Cladophialophora)、球孢子菌属(Coccidioides)、隐球菌属(Cryptococcus)、小克银汉霉属(Cunninghamella)、弯孢属(Curvularia)、表皮癣菌属(Epidermophyton)、外瓶霉属(Exophiala)、突脐蠕孢属(Exserohilum)、着色真菌属(Fonsecaea)、镰刀菌属(Fusarium)、地丝菌属(Geotrichum)、组织胞浆菌属(Histoplasma)、外瓶霉属(Hortaea)、罗伯罗伯菌属(Lacazia)、毛双孢属(Lasiodiplodia)、小球腔菌属(Leptosphaeria)、马杜拉分枝菌属(Madurella)、马拉色氏霉菌属(Malassezia)、小孢霉属(Microsporum)、毛霉属(Mucor)、新龟甲属(Neotestudina)、Onychocola、拟青霉属(Paecilomyces)、副球孢子菌属(Paracoccidioides)、青霉菌属(Penicillium)、瓶霉菌属(Phialophora)、毛孢子菌属(Piedraia)、毛孢子菌病(Piedra)、糠疹(Pityriasis)、肺囊虫属(Pneumocystis)、假霉样真菌属(Pseudallescheria)、棘壳孢属(Pyrenochaeta)、毛霉属(Rhizomucor)、根霉属(Rhizopus)、红酵母属(Rhodotorula)、丝孢菌属(Scedosporium)、帚霉属(Scopulariopsis)、柱霉属(Scytalidium)、孢子丝菌属(Sporothrix)、毛癣菌属(Trichophyton)、毛孢子菌属(Trichosporon)和接合菌纲。致病性病症包括由于感染了感染性生物体而发展的任何有害病症。
如本文中所使用,术语“相互作用”包括导致可测量作用的分子之间的密切接触,例如一个分子与另一个分子的结合或联合或一个分子与另一个分子的反应。
所谓“分离的”是指实质上或基本上不含通常在其天然状态下相伴的组分的物质。
术语“低级烷基”是指具有1-6个碳原子的直链和支链烷基基团,如甲基、乙基、正丙基、异-丙基、正丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、正己基、2-甲基戊基等。在一些实施方案中,低级烷基是甲基或乙基。
术语“低级烷氧基”是指1-6个碳原子的直链和支链烷氧基基团,如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、2-甲基-戊氧基等。通常低级烷氧基基团是甲氧基或乙氧基。
如本文中所使用,“造血干细胞和/或祖细胞的动员剂”、“动员剂(mobilizingagent)”或“动员剂(mobilizer)”可交换使用,指任何化合物,不论其是小的有机分子,合成或天然衍生的化合物,还是多肽,如生长因子或集落刺激因子或其活性片段或模拟物,核酸、糖类、抗体或作用是增强干细胞从骨髓移动到外周血液中的任何其它药剂。这样的“动员剂”可以增加外周血液中造血干细胞或造血祖细胞/前体细胞的数量。
所谓“调节”指的是直接或间接提高或降低靶分子的水平或功能活性。例如药剂可以通过与除了靶分子以外的分子相互作用来间接地调节水平/活性。在这一点上,编码靶多肽的基因的间接调节在其范围内包括调节第一核酸分子的表达,其中第一核酸分子的表达产物调节编码靶多肽的核酸分子的表达。
如本文中所使用的“中性粒细胞减少症药物”是指减少与嗜中性粒细胞减少症相关的症状,预防中性粒细胞减少症的发展或治疗现有的中性粒细胞减少症的物质的组合物。
如本文中所使用的术语“寡核苷酸”是指由通过磷酸二酯键(或其相关的结构性变体或合成类似物)连接的许多核苷酸残基(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其相关的结构性变体或合成类似物)构成的聚合物。因此,虽然术语“寡核苷酸”通常指核苷酸聚合物,在该核苷酸聚合物中核苷酸残基及其之间的键是天然发生的,但应当理解的是该术语该在其范围内还包括各种类似物,所述类似物包括但不限于,肽核酸(PNAs)、磷酰胺酯、硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核酸等。分子的确切大小可以根据特定的应用变化。寡核苷酸的长度通常相当短,一般约10-30个核苷酸残基,但该术语可以指任何长度的分子,尽管术语“多核苷酸”或“核酸”通常用于大的寡核苷酸。
如本文中所使用的术语“可操作地连接的(operablyconnected)”或“可操作地连接的(operablylinked)”是指并列,其中如此描述的组分处于允许它们以其预期的方式发挥作用的关系。例如,“可操作地连接”到编码序列或非编码序列的转录控制序列是指转录控制序列相对于编码或非编码序列的定位和/或取向,以允许编码或非编码序列在与转录控制序列相容的条件下表达。
如本文中所使用的术语“药学上可接受的”是指在,不会将人类或动物受体的生理机能损害至危及所述受体的活力的程度的化合物或化合物的组合。适合的是,给予的化合物或化合物的组合对人类或动物受体的健康至多引起暂时性有害作用。
所谓“药学上可接受的载体”指的是由不是生物学上不可取的或其它方面不可取的材料构成的药物载体或溶剂,即所述材料可以与选择的活性剂一起给予受试者而不引起任何或显著的不良反应。载体可以包括赋形剂和其它添加剂如稀释剂、洗涤剂、着色剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、防腐剂等。示例性的载体或溶剂包括而不限于,水、盐水、生理盐水、软膏剂、霜剂、油水乳剂、凝胶或任何其它载体/溶剂,或对人类或动物受体而言在药学和生理学上可接受的载体/溶剂以及本领域技术人员已知的化合物的组合。
类似地,本文提供的化合物的“药学上可接受的”盐、酯、酰胺、前药或衍生物是这样的盐、酯、酰胺、前药或衍生物,即其不是生物学上不希望的或其它方面不可取的。
致病性“原生动物”包括而不限于,锥虫属(Trypanosoma)、利士曼原虫属(Leishmania)、贾第虫属(Giardia)、毛滴虫属(Trichomonas)、内阿米巴属(Entamoeba)、纳氏虫属(Naegleria)、棘阿米巴属(Acanthamoeba)、疟原虫属(Plasmodium)、弓形虫属(Toxoplasma)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、等孢子球虫属(Isospora)和肠袋虫属(Balantidium)。
更大的致病性“寄生物”包括那些来自以下门类的:绦虫纲(绦虫)、线虫纲和吸虫纲(吸虫)。致病性吸虫是,例如以下属的物种:裂体吸虫属(Schistosoma)、棘口吸虫属(Echinostoma)、姜片虫属(Fasciolopsis)、支睾吸虫属(Clonorchis)、片形属(Fasciola)、后睾吸虫属(Opisthorchis)和并殖吸虫属(Paragonimus)。绦虫病原体包括而不限于来自以下物种:假叶目(Pseudophyllidea)(例如,裂头属(Diphyllobothrium))和圆叶目(Cyclophyllidea)(例如,绦虫属(Taenia))。致病线虫包括来自以下物种:小杆目(Rhabditida)(例如,类圆线虫属(Strongyloides))、圆线虫目(Strongylida)(例如,钩虫属(Ancylostoma))、蛔虫目(Ascaridia)(例如,蛔虫属(Ascaris)、弓蛔虫属(Toxocara))、旋尾目(Spirurida)(例如,龙线属(Dracunculus)、布鲁格丝虫属(Brugia)、盘尾属(Onchocerca)、吴策线虫属(Wucheria))和有腺纲(Adenophorea)(例如,鞭虫属(Trichuris)和毛线虫属(Trichinella))。
术语“多核苷酸”、“遗传物质”、“遗传形式”、“核酸”和“核苷酸序列”包括RNA、cDNA、基因组DNA、合成形式和混合的聚合物,有义和无义链两者,并且可以在化学上或生物化学上被修饰,或可以包含非天然或衍生的核苷酸碱基,本领域技术人员会容易地领会的。
术语“多核苷酸变体”和“变体”是指显示出与参考多核苷酸序列具有基本序列同一性的多核苷酸,或与参考序列在本领域已知的严格条件下(参见例如Sambrooketal.,MolecularCloning.ALaboratoryManual(分子克隆实验室指南),ColdSpringHarborPress,1989)杂交的多核苷酸。这些术语还涵盖其中已经插入或缺失或使用不同核苷酸替代一个或多个核苷酸的多核苷酸。在这一点上,在本领域完全理解的是,可以对参考多核苷酸进行某些改变,包括变、插入、缺失和取代,据此改变的多核苷酸保留参考多核苷酸的生物学功能或活性。术语“多核苷酸变体”和“变体”还包括天然发生的等位基因变体。
术语“多肽”、“蛋白质分子”、“肽”和“蛋白质”可交换使用,其指氨基酸残基的聚合物以及其变体和合成类似物。因此,这些术语适用于氨基酸聚合物,其中一个或多个氨基酸残基是合成的非天然存在的氨基酸,如相应天然存在的氨基酸的化学类似物,以及适用于天然存在的氨基酸聚合物。这些术语不排除修饰,例如糖基化、乙酰化、磷酸化等。适合形式的主题蛋白质分子是特别有用的。包括在该定义内的是例如含有一个或多个氨基酸类似物例如非天然氨基酸的多肽,或具有取代的连接的多肽。
术语“多肽变体”是指一个或多个氨基酸已经被不同氨基酸取代的多肽。在本领域中很好地理解的是,可以将一些氨基酸改变成具有广泛类似特性而不改变多肽的活性性质(保守取代)的其它氨基酸,如下文中描述的。这些术语还涵盖其中已经插入或缺失或使用不同氨基酸取代一个或多个氨基酸的多肽。
在本文中所使用,针对免疫低下病症(例如,贫血、血小板减少症、粒细胞缺乏症或中性粒细胞减少症)所的用术语“预防(prevent)”、“预防(prevented)”或“预防(preventing)”,是指增加受试者对发展免疫低下病症的耐受性,或换言之降低受试者将发展免疫低下病症的可能性的预防性治疗,以及在免疫低下病症开始之后用于使其降低或完全消除或预防其恶化的治疗。
术语“前药”以其最广泛的意义使用并且涵盖在体内转化成本发明的化合物的那些衍生物。本领域技术人员很容易想到这样的衍生物,并且其包括例如游离羟基转化成酯衍生物的化合物。
如本文中所使用,“消旋物”是指对映体的混合物。
如本文中所使用,“报道基因”是指通过光谱、光化学、生物化学、酶、免疫化学、电、光学或化学方式表达可检测的产物的任何基因或DNA。启动子元件连的优选的报道基因是荧光素酶。出于该目的使用的其它报道基因包括,例如-半乳糖苷酶基因(β-gal)和氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)。与这些报道基因元件中的每一个一起产生的用于表达的测定对于本领域技术人员而言是众所周知的。
术语“盐”、“衍生物”和“前药”包括任何药学上可接受的盐、酯、水合物或给予受体后能够提供(直接或间接地)本发明的化合物或其活性代谢物或残基的任何其它化合物。适合的药学上可接受的盐包括药学上可接受的无机酸的盐,如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸的盐,或药学上可接受的有机酸的盐,如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、反丁烯二酸、柠檬酸、乳酸、粘液酸、葡萄糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸(edeticacid)、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗坏血酸和戊酸的盐。碱式盐包括但不限于,使用那些以药学上可接受的阳离子形成的,所述药学上可接受的阳离子如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵。另外,碱性含氮基团可以使用试剂季铵化,所述试剂诸如低级烷基卤化物,如甲基氯、乙基氯、丙基氯和丁基氯,甲基溴、乙基溴、丙基溴和丁基溴,以及甲基碘、乙基碘、丙基碘和丁基碘;二烷基硫酸酯,如硫酸二甲酯和硫酸二乙基酯;以及其它试剂。然而,应能认识到,非药学上可接受的盐也可落入本发明的范围内,原因是其可以用于制备药学上可接受的盐。盐、前药和衍生物的制备可以通过本领域已知的方法进行。例如,金属盐可以通过本发明的化合物与金属氢氧化物的反应来制备。酸盐可以通过使适当的酸与本发明的化合物反应来制备。
术语“选择性”是指抑制一种PHD(例如,PHD1、PHD2或PHD3)(例如,脯氨酰-4-羟化酶)或对其表现出拮抗而对另一种PHD不表现出实质性抑制或拮抗的化合物。因此,对一种特定PHD(例如,脯氨酰-4-羟化酶)具有选择性的化合物表现出,对该PHD的抑制或拮抗比对另一种PHD的抑制或拮抗高约2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或高约100倍。在一些实施方案中,选择性化合物表现出,对一种特定PHD(例如,脯氨酰-4-羟化酶)的抑制或拮抗比对另一种PHD的抑制或拮抗高至少50倍。在仍旧其它实施方案中,选择性化合物表现出对一种特定PHD(例如,脯氨酰-4-羟化酶)的抑制或拮抗比对另一种PHD的抑制或拮抗高至少100倍。在仍旧其它实施方案中,选择性化合物表现出,对一种特定PHD(例如,脯氨酰-4-羟化酶)的抑制或拮抗比对另一种PHD的抑制或拮抗高至少500倍。在仍旧其它实施方案中,选择性化合物表现出,对一种特定PHD(例如,脯氨酰-4-羟化酶)的抑制或拮抗比对另一种PHD的抑制或拮抗高至少1000倍。
如本文中所使用,术语“序列同一性”是指在一个比较窗口内,基于核苷酸与核苷酸,或基于氨基酸与氨基酸的序列相同程度。因此,“序列同一性的百分比”通过以下方式计算,即在比较窗口比较两个最佳比对的序列,确定在两个序列中出现相同核酸碱基(例如,A、T、C、G、I)或相同氨基酸残基(例如,Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的数量以得到匹配的位置的数量,将匹配的位置的数量除以在比较窗口中的位置的总数(即窗口尺寸)并将结果乘以100以得到序列同一性的百分比。为了本发明的目的,“序列同一性”应被理解为指通过适当方式计算的“匹配百分比”。例如,可以使用DNASIS计算机程序(Version2.5forwindows;可得自HitachiSoftwareengineeringCo.,Ltd.,SouthSanFrancisco,California,USA),使用如在所附软件的参考手册中使用的标准默认值进行序列同一性分析。
“相似性”是指下表1中定义的相同的或组成性保守取代的氨基酸百分数。
表1
原始残基 | 示例性取代 |
Ala | Ser |
Arg | Lys |
Asn | Gln、His |
Asp | Glu |
Cys | Ser |
Gln | Asn |
Glu | Asp |
Gly | Pro |
His | Asn、Gln |
Ile | Leu、Val |
Leu | Ile、Val |
Lys | Arg、Gln、Glu |
Met | Leu、Ile |
Phe | Met、Leu、Tyr |
Ser | Thr |
Thr | Ser |
Trp | Tyr |
Tyr | Trp、Phe |
Val | Ile、Leu |
相似性可以使用序列比较程序如GAP(Deverauxetal.1984,NucleicAcidsResearch12,387-395)确定。用这种方法,与本文引用的那些类似或基本上不同长度的序列可能通过向比对中插入缺口来比较,这样的缺口例如通过GAP使用的比较算法确定。用于描述两个或更多个多核苷酸或多肽之间的序列关系的术语包括“参考序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“基本同一性”。“参考序列”是长度为至少12个,但经常地15-18个和通常至少25个单体单元,包括核苷酸和氨基酸残基在内。由于两个多核苷酸可以各自包含(1)在两个多核苷酸之间类似的序列(即,仅完整多核苷酸序列的一部分),和(2)在两个多核苷酸之间不同的序列,两个(或更多个)多核苷酸之间的序列比较通常通过在“比较窗口”比较两个多核苷酸的序列进行,以鉴别和比较序列相似性的局部区域。“比较窗口”是指至少6个连续位置,通常地约50至约100个,更通常地约100至约150个连续位置的概念段,其中在最佳地比对两个序列之后,与相同数量的连续位置的参考序列比较的序列的。为了两个序列的最佳比较,相对于参考序列(其不包含插入或缺失),比较窗口可以包含约20%或更少的插入或缺失(即,缺口)。用于对齐比较窗口的序列的最佳比对通过算法的电脑化执行(GAP,BESTFIT,FASTA,andTFASTAintheWisconsinGeneticsSoftwarePackageRelease7.0,GeneticsComputerGroup,575ScienceDriveMadison,WI,USA)或通过由选择的任意多种方法产生的检查和最佳比对(即,在比较窗口产生最高百分比的同源性)进行。也可以参考BLAST程序家族,例如Altschuletal.,1997,Nucl.AcidsRes.25:3389公开的。序列分析的详细讨论可见于Ausubeletal.,“CurrentProtocolsinMolecularBiology(现代分子生物学实验技术)”,JohnWiley&SonsInc,1994-1998,Chapter15(15章)的第19.3单元。
如本文中所使用,“小分子”是指分子量小于3千道尔顿(kDa),通常小于1.5千道尔顿,更优选地小于约1千道尔顿的成分。小分子可以是核酸、肽、多肽、模拟肽、碳水化合物、脂质或其它有机(含碳)或无机分子。如本领域技术人员基于本描述会认识到,可以使用本发明的任何测定筛选化学和/或生物混合物的文库,通常是真菌、细菌或藻类提取物的大量文库,来鉴别调节生物活性的化合物。“有机小分子”是分子量小于3千道尔顿、小于1.5千道尔顿或甚至小于约1kDa的有机化合物(或与无机化合物(例如,金属)络合的有机化合物)。
“干细胞”是指不是最终分化,因此能够产生其它类型的细胞的细胞。干细胞一般分裂成三种类型,包括全能(titipotent)、多能(pluripotent)和专能(titipotent)。“全能干细胞”可以在体内生长并分化成任何细胞,因此可以生长为整个生物体。这些细胞不能够自我更新。在哺乳动物中,仅受精卵和早期胚胎细胞是全能的。“多能干细胞”是真正的干细胞,具有在体内制备任何分化细胞的潜力,但不能有助于制备胚胎外膜(其衍生自滋养层)。“专能干细胞”是自我更新一集分化以再生成人组织的克隆细胞。“专能干细胞”也称为“单能的”并且仅可以变成特定类型的细胞,如血液细胞或骨细胞。如本文中所使用,术语“干细胞”是指能够自我更新的多能干细胞。
如本文中所使用的“严格性”是指在杂交过程中的温度和离子强度条件,和是否存在某些有机溶剂。严格性越高,在序列之间观察到的互补性程度会越高。本文中所用的“严格条件”是指仅具有高比例的互补碱基,优选具有准确互补性的多核苷酸会杂交的温度和离子条件。要求的严格性是核苷酸序列依赖性并且依赖于杂交过程中存在的各种组分,并且当使用核苷酸类似物时发生较大改变。一般,在确定的离子强度和pH下,针对具体序列将严格条件选择为比热力学熔点(Tm)小约10℃至20℃。Tm是50%的靶序列与互补探针杂交的温度(在确定的离子强度和pH下)。应当理解的是,多核苷酸在至少低严格条件下,优选地在至少严格条件下和更优选地在高严格条件下会与靶序列杂交。本文参考到低严格条件包括并涵盖,针对在42℃下的杂交,至少约1%v/v到至少约15%v/v甲酰胺和至少约1M到至少约2M盐,以及针对在42℃下的洗涤,至少约1M到至少约2M的盐。低严格条件也可以包括,针对在65℃下的杂交,1%牛血清白蛋白(BSA)、1mMEDTA、0.5MNaHPO4(pH7.2)、7%SDS,以及针对在室温下的洗涤,(i)2xSSC、0.1%SDS;或(ii)0.5%BSA、1mMEDTA、40mMNaHPO4(pH7.2)、5%SDS。中严格条件包括并涵盖,针对在42℃下的杂交,至少约16%v/v到至少约30%v/v甲酰胺和至少约0.5M到至少约0.9M盐,以及针对在42℃下的洗涤,至少约0.5M到至少约0.9M盐。中严格条件也可以包括针对在65℃下的杂交,1%牛血清白蛋白(BSA)、1mMEDTA、0.5MNaHPO4(pH7.2)、7%SDS,以及针对在42℃下的洗涤,(i)2xSSC、0.1%SDS;或(ii)0.5%BSA、1mMEDTA、40mMNaHPO4(pH7.2)、5%SDS。高严格条件包括并涵盖,针对在42℃下的杂交,至少约31%v/v到至少约50%v/v甲酰胺和至少约0.01M到至少约0.15M盐,以及针对在42℃下的洗涤,至少约0.01M到至少约0.15M盐。高严格条件还可以包括针对在65℃下的杂交,1%BSA、1mMEDTA、0.5MNaHPO4(pH7.2)、7%SDS,以及针对在超过65℃下的洗涤,(i)0.2xSSC、0.1%SDS;或(ii)0.5%BSA、1mMEDTA、40mMNaHPO4(pH7.2)、1%SDS。其它严格条件在本领域中是众所周知的。熟练的操作者(addressee)应认识到,可以操作各种因素以优化杂交的特异性。最终洗涤的严格性的优化可以用于确保高程度的杂交。对于详细实例,参见CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY(同上),第2.10.1至2.10.16页和MOLECULARCLONING.ALABORATORYMANUAL(分子克隆:实验室手册)(Sambrook,etal.,eds.)(ColdSpringHarborPress1989)第1.101至1.104节。
本发明所考虑的受试者包括商业的、人道主义或流行病学感兴趣的任何动物,便利地包括灵长类、家畜(如绵羊、牛、马、驴、猪、鱼和鸟类,实验室测试动物(如小鼠、兔、豚鼠和仓鼠等)、宠物(狗和猫)或圈养的野生动物。禽类包括家禽和笼养禽类。在一些实施方案中,受试者是哺乳动物。在其它实施方案中,受试者是人类受试者。本发明的组合物和方法在人药和兽药、驯养或野生动物饲养、化妆品或用于损伤或外科手术之后皮肤的整形治疗中具有应用。供体受试者是发生造血干和/或祖细胞的移动和/或如果有的话从其收获移动的干细胞和/或祖细胞的受试者。受体受试者是向其移植了收获的干细胞和/或祖细胞的受试者。供体受试者和受体受试者可以是相同的受试者或可以是不同的受试者。
所谓“基本上互补”指的是寡核苷酸或其子序列充分互补以与靶序列杂交。因此寡核苷酸或子序列的核苷酸序列不需要反映靶序列的准确互补序列。在优选的实施方案中,寡核苷酸不含与靶序列的错配。
如本文中所使用,术语“协同”意思是当与造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂组合给药时(或反之亦然),HIF-α增效剂的治疗效果大于HIF-α增效剂和至少一种动员剂单独给药的预期的加成治疗效果。术语“协同有效量”当应用于HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂时,是指组合物(一般为药物组合物)中每种组分的量,其对刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到外周血液中是有效的,并且无论是剂量HIF-α增效剂坐标轴还是剂量至少一种动员剂坐标轴,在HIF-α增效剂的剂量对比至少一种动员剂的剂量对比刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到外周血液中的剂量响应曲线中,其产生了不交叉的效果。在现有技术中描述了用于确定协同作用的剂量响应曲线,例如Sandeetal(参见,A.Goodmanetal.,ed.,thePharmacologicalBasisofTherapeutics(治疗剂的药理基础),MacMillanPublishingCo.,Inc.,NewYork(1980)的第1080-1105页)。可以通过改变因素如剂量水平、计划表和响应,使用95%置信限度,并使用电脑生成的模型确定最佳的协同量,所述电脑生成的模型针对HIF-α增效剂和至少一种动员剂的各种组合从剂量响应曲线生成等效线图。在剂量响应曲线上造血干细胞和/或祖细胞的最高移动与最佳的剂量水平相关联。本文所用的“血小板减少症药物”是指减少与血小板减少症相关的症状、预防血小板减少症的发展或治疗现有的血小板减少症的物质的组合物。
本文所用的术语“转录控制序列”是指诱导、抑制或以其他方式控制与其可操作地连接的编码蛋白质的核酸序列的转录的核酸序列,如起始子序列、增强子序列和启动子序列。
所谓“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”、“治疗(treated)”、“治疗(treating)”等指的是包括治疗性治疗和预防性治疗两者,包括针对患者施用药物或者实施医疗程序,用于预防(prophylaxis)(预防(prevention))或治愈或降低患者患病情况下的虚弱或弊病或病症或事件发生的程度或可能性。在本发明的一些实施方案中,可以提供使用所述药剂的治疗以治疗患有高增生性细胞紊乱的患者,借此使用细胞减少性或脊髓抑制性治疗(例如,化学治疗或放射治疗)对紊乱进行治疗导致骨髓细胞性降低,从而使患者更加免疫低下和因此更易获得感染介质或疾病。因此,本发明的药剂的给药允许增强造血干细胞和/或祖细胞从骨髓到外周血液的移动。在一些实施方案中,为了通过允许使用化学治疗或放射治疗的加速给药,减低或减少高增生性细胞紊乱的症状或进展的目的,进行治疗。
所谓“载体”指的是多核苷酸分子,优选地衍生自例如可以插入或克隆多核苷酸的质粒、噬菌体、酵母或病毒的DNA分子。载体优选地包含一个或多个独特的限制性位点并且在确定的宿主细胞中能够自主复制,包括靶细胞或组织或祖细胞或其组织,或与确定的宿主的基因组成一整体,使得克隆的序列可复制。因此,载体可以是自主复制载体,即作为染色体外实体存在的载体,其复制独立于染色体复制,例如线性或闭环质粒、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。载体可以包含用于确保自我复制的任何方式。可选择的是,载体可以是,当引入到宿主细胞中时,整合到基因组中并与已经整合的染色体(或多个染色体)一起复制的载体。载体系统可以包括单个载体或质粒,一起包含待引入到宿主细胞基因组中的总DNA的两个或更多个载体或质粒,或转座子。载体的选择通常会取决于载体与引入载体的宿主细胞的相容性。在本发明的情况下,载体优选地是在动物、优选地哺乳动物细胞中具有可操作功能性的病毒载体或病毒衍生的载体。这样的载体可以衍生自痘病毒、腺病毒或酵母。载体也可以包括选择标记物,如可以用于选择适合的转化体的抗生素抗性基因。这样的抗性基因的实例对于本领域技术人员而言是已知的并且包括赋予抗生素卡那霉素和G418抗性的nptII基因和赋予抗生素潮霉素B抗性的hph基因。
本文提到的“病毒”包括任何病毒或病毒性病原体或新出现的病毒性病原体。所考虑的病毒家族包括腺病毒科(Adenoviridae)、非洲猪瘟样病毒、砂粒病毒科(Arenaviridae)(如病毒性出血热、拉沙热)、星状病毒科(Astroviridae)(星状病毒)布尼亚病毒科(Bunyaviridae)(大地病毒(LaCrosse))、杯状病毒科(Caliciviridae)(诺如病毒)、冠状病毒科(Coronaviridae)(冠状病毒)、丝状病毒科(Filoviridae)(如埃博拉病毒、马尔堡病毒)、细小病毒科(Parvoviridae)(B19病毒)、黄病毒科(Flaviviridae)(如丙型肝炎病毒、登革热病毒)、肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)(如乙型肝炎病毒、δ病毒)、疱疹病毒科(Herpesviridae)(单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)(流感病毒)、乳多空病毒科(Papovaviridae)(乳头瘤病毒)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)(如人副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、人呼吸道合胞病毒、尼帕病毒、亨德拉病毒)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)(伤风病毒)、痘病毒科(Poxviridae)(天花病毒、口疮病毒、猴痘病毒)、呼肠孤病毒科(Reoviridae)(轮状病毒)、逆转录病毒科(Retroviridae)(人类免疫缺陷病毒)、细小病毒科(Parvoviridae)(细小病毒)、乳头瘤病毒科(Papillomaviridae)(乳头状瘤病毒)、甲病毒(alphaviruses)和弹状病毒科(Rhabdoviridae)(狂犬病病毒)。
如本文中所使用,有下划线或使用斜体应的基因名称表示基因,相比之下,其蛋白产物以基因名称表示,不存在在任何下划线或斜体。例如“HIF-1α”应指HIF-1α基因,而“HIF-1α”应表示由“HIF-1α”基因的转录和翻译以及可选的剪接生成的蛋白产物或多种蛋白产物。
除非另外说明,本文描述的各个实施方案,加上必要的变更,适用于各自和每一个实施方案。
2.缩略语
CFC=集落形成细胞
HIF=低氧诱导因子
HIFα=低氧诱导因子-α
HSC=造血干细胞
HSPC=造血干细胞和祖细胞
d=天
h=小时
s=秒
i.v.=静脉内
i.p.=腹膜内
rHu=重组人类
s.c.=皮下
用于增强造血功能的组合物和方法
本发明部分基于以下出人意料发现:在HIF-α增效剂的存在下,通过动员剂如G-CSF和普乐沙福以及它们的组合,造血干细胞和/或祖细胞的移动显著增强。与单独给予干细胞动员剂所产生的数量相比,该增加的移动反过来导致更高数量的造血干细胞和祖细胞(HSPC)从骨髓中迁移到外周血液。该增加的移动还可以导致从外周血液中移动到特定组织或器官如淋巴结、心脏、肺、肝脏、皮肤、脾脏、小肠和大肠、胃或胰腺中的HSPC增加。
增加HSPC的数量或移动性也可以增加HSPC分化为各种细胞谱系的速率。HSPC可能还能够分化或开始变成成熟造血细胞的途径。例如,HSPC的分化可以导致骨髓或外周血液中普通的骨髓性祖细胞的数量增加。HSPC分化还可以导致骨髓或外周血液中的粒细胞/巨噬细胞祖细胞或巨核细胞/红细胞祖细胞的数量增加。HSPC可以分化为普通的淋巴样前体。普通骨髓性祖细胞数量的增加可以导致分化为粒细胞/巨噬细胞祖细胞或巨核细胞/红细胞祖细胞。粒细胞/巨噬细胞祖细胞可以进一步分化为粒细胞如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、组织前体细胞、单核细胞和未成熟的树突细胞。巨核细胞/红细胞祖细胞可以分化为巨核细胞和成红血细胞。普通的淋巴样前体细胞可以分化为B淋巴细胞和T淋巴细胞。B淋巴细胞可以分化为分泌抗体的细胞,其中T淋巴细胞可以分化为效应T细胞。粒细胞可以进一步分化为组织肥大细胞、巨噬细胞和未成熟的树突细胞。巨核细胞可以分化为血小板。成红血细胞可以分化为红细胞。HSPC可能还能够分化为如肌肉(骨骼肌细胞和心肌细胞)、脑、肝脏、皮肤、肺、肾脏、肠和胰腺的细胞。呈现特定分子或细胞表面标记物的细胞的数量或比例可以指示HSPC或HSPC群体。
虽然不希望受到任何理论或操作方式的限制,每10,000-15,000个骨髓细胞中有1个细胞在正常情况下可以是干细胞。在血流中,该比例可能降至1比100,000个血液细胞。在体内给予HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂可以在给药后的以下时间内使血流中的所有干细胞群体的数量增加:约1小时或更少、2小时或更少、3小时或更少、4小时或更少、6小时或更少、8小时或更少、10小时或更少、12小时或更少、14小时或更少、16小时或更少、18小时或更少、20小时或更少、22小时或更少、24小时或更少、26小时或更少、28小时或更少或30小时或更少,并且包括包括HSPC的干细胞在血液中的累积在给药后的以下时间内可以达到最高:约65小时或更少、66小时或更少、67小时或更少、68小时或更少、69小时或更少、70小时或更少、71小时或更少、72小时或更少、73小时或更少、74小时或更少、75小时或更少、76小时或更少、77小时或更少、78小时或更少、79小时或更少、80小时或更少、81小时或更少、82小时或更少、83小时或更少、84小时或更少、85小时或更少、86小时或更少、87小时或更少、88小时或更少、89小时或更少、90小时或更少、91小时或更少、92小时或更少、93小时或更少、94小时或更少、95小时或更少、96小时或更少、97小时或更少、98小时或更少、99小时或更少、100小时或更少、101小时或更少、102小时或更少、103小时或更少、104小时或更少、105小时或更少、106小时或更少、107小时或更少、108小时或更少、109小时或更少和110小时或更少。
因此,根据本发明提供了利用HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂来刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到外周血液;来刺激或增强血细胞生成;来治疗或预防免疫低下病症,该免疫低下病症包括由医学治疗引起的免疫低下病症,所述医学治疗靶向快速分裂的细胞或使细胞周期或细胞分裂中断(例如,脊髓抑制性治疗);或来进行干细胞移植的方法和组合物。
3.1HIF-α增效剂
HIF-α增效剂包括并涵盖增加HIF-α的累积或稳定性;直接提供HIF-α活性;或增加HIF-α的表达的任何活性剂,包括但不限于小分子和大分子如核酸、肽、多肽、模拟肽、碳水化合物、多糖、脂多糖、脂质或其它有机(含碳)或无机分子。HIF-α是指HIF-1α、HIF-2αHIF-3α中的一个或多个。
因此,在一些实施方案中,HIF-α增效剂可以是导致HIF-α多肽的量或活性增加的任何事物。非限制性实例包括以下药剂:改进蛋白的稳定性(例如半衰期)的药剂;阻遏或降低HIF-α多肽失活的药剂,例如通过防止羟基化和/或乙酰化;和以下药剂:增加考虑中的样品中的HIF-α多肽的量的药剂,例如通过增加由HIF-α编码序列表达的量或通过引入HIF-α编码序列的多个拷贝。因此,在不将本发明限制于任何特定机制的情况下,关于示例性的作用方式,HIF-α增效剂可以通过直接或间接作用于HIF-α多肽以稳定蛋白、保护其免受抑制或增加蛋白的活性来增加HIF-α多肽的活性。可选的是,物质可以通过抑制或另外阻遏抑制HIF-α多肽活性或降低HIF-α多肽稳定性的化合物或酶的活性,来增加HIF-α多肽的活性。
在某些实施方案中,所述方法包括:向受试者的至少一个细胞如造血干细胞或祖细胞,引入包含可操作地连接到转录控制序列的至少一个HIF-α编码序列的核酸构建体;和允许细胞表达编码的HIF-α多肽。HIF-α编码序列的非限制性实例包括:如在GenBank登记号NM001530、Q9NWT60、U22431、AB073325、AF208487和AF304431中公开的人HIF-1α编码序列;如在GenBank登记号Q9XTA5、AB018398和BAA78675中公开的牛HIF-α编码序列;如在GenBank登记号AF057308、O35800和CAA70701中公开的大鼠HIF-α编码序列;如在GenBank登记号AF003695、AAC52730、AFO57308和Q61221中公开的小鼠HIF-α编码序列;如在GenBank登记号AY713478中公开的松鼠HIF-α编码序列;如在GenBank登记号Q9YIB9中公开的禽类HIF-α编码序列;如在GenBank登记号Q98SW2中公开的两栖类HIF-α编码序列;如在GenBank登记号AY971808中公开的羚羊HIF-α编码序列;如在GenBank登记号CAB96628中公开的非洲爪蟾(Xenopuslaevis)HIF-α编码序列;如在GenBank登记号JC4851中公开的黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)HIF-α编码序列;如在GenBank登记号AY326951中公开的斑马鱼HIF-α编码序列;如在GenBank登记号ABA02179和BAA34234中公开的鸡HIF-α编码序列等。感兴趣的其它物种将是狗、猫和其它家养和农场动物如猪和马。HIF-α也可以是任何哺乳动物或非哺乳动物蛋白或其片段。HIF-α基因序列也可以通过常规克隆技术获得,例如通过使用上述HIF-α基因序列的全部或部分作为探针来恢复并确定另一物种中的HIF-α基因的序列。感兴趣的HIF-α的片段是保留HIF-α的至少一种功能或结构特征的任何片段。HIF-α的片段包括,例如由人HIF-α限定的区域:第401-603位氨基酸(Huangetal.,(1998)ProcNatlAcadSci.USA95:7987-7992);第531-575位氨基酸:(Jiangetal.(1997)JBiolChem.272:19253-19260),第556-575位氨基酸(Tanimotoetal.(2000)EMBOJ.19:4298-4309),第557-571位氨基酸(Srinivasetal.(1999)BiochemBiophysResCommun.260:557-561),和第556-575位氨基酸(IvanandKaelin(2001)Science292:464-468)。另外,HIF-α片段包括含有基序LXXLAP的至少一个发生的任何片段,例如如发生在人HIF-α天然序列的L397TLLAP和L559EMLAP处。
在其它实施方案中,HIF-α增效剂刺激或增强HIF-α的表达,其代表性实例包括金属硫蛋白和锌(参见,例如,Xueetal.(2012)AmJPhysiolHeartCircPhysiol302:H2528–H2535)。
在一些实施方案中,HIF-α增效剂抑制HIF-α相互作用蛋白的水平或活性,所述HIF-α相互作用蛋白抑制HIF-α多肽的活性。该类型的非限制性HIF-1相互作用蛋白包括vonHippel-Lindau肿瘤抑制蛋白(vHL,Honetal.(2002)Nature417:975-8;Minetal.(2002)Science296:1886-9);羟化酶,包括脯氨酰羟化酶(例如,脯氨酰-4-羟化酶)(本文中也称为HIF羟化酶如HIF脯氨酰羟化酶PHD1、PHD2和PHD3,如以下所述:Epsteinetal.(2001)Cell107:43-54,Kaelin(2005)AnnuRevBiochem.74:115-28;Schmidetal.(2004)JCellMolMed.,8:423-31;Huangetal.(2002)JBiolChem.277:39792-800;和Metzenetal.(2003)JCellSci.116:1319-26),脱羟化酶、泛素化和去泛素化酶、ARD1乙酰转移酶(例如Jeongetal.(2002)Cell111:709-20描述的)、抑制HIF-1的因子((FIH-1;如Hewitsonetal.(2002)JBiolChem.277(29):26351-5;Landoetal.(2002)GenesDev.16:1466-71;PCT申请公开号WO03028663、WO04035812、WO02074981所述);抑制性PAS结构域蛋白(IPAS,Makinoetal.(2002)Nature414:550-4)等,其与包含HIF-1异源二聚体的一种或多种蛋白相互作用和/或调节其活性。特别感兴趣的是人HIF-α相互作用蛋白(参见,例如,登记号P40337、NP000542、NP937799、NP005154、NP060372、NP003363等),及其同系物、类似物和同种型(包括动物同系物)。本领域技术人员应能容易地鉴别适于本发明的另外的HIF-α相互作用蛋白。
因此,在HIF-α多肽与几种HIF-α相互作用蛋白相互作用的HIF-α途径中,有几个可能的治疗干预点。首先,HIF-α活性或蛋白水平可以通过使用小分子使HIF-α的快速降解中断而增加(Hewitson,KSandSchofield,CJ.(2004)DrugDiscoveryToday9(16):704-711)。这将包括例如,PHD1-3(包含脯氨酰羟化酶结构域的酶1-3)的抑制剂,其包括脯氨酰-4-羟化酶抑制剂,其说明性实例包括草酸烷基酯(oxalamicacidalkylester)(例如,二甲基草酰甘氨酸)和双取代的吡啶(例如,吡啶二羧酸二乙酯);FIH(抑制HIF的因子)的抑制剂,例如二羟基苯甲酸(例如,3,4-二氢苯甲酸盐);影响HIF-α亚基降解的蛋白酶体抑制剂;会阻遏vHL复合物:HIF-α相互作用的小分子或抗体;泛素化的小分子抑制剂;和抑制性核酸分子如靶向PHD1-3和/或FIH的小干扰RNA(siRNA)。
在一些实施方案中,HIF-α增效剂是发挥抑制PHD、FIH-1或vHL编码转录物的转录或翻译功能的拮抗核酸分子。该类型的代表性转录物包括对应于任一个下述序列的核苷酸序列:(1)人PHD1核苷酸序列,如在GenBank登记号AJ310544、BC036051、NM_053046和NM_080732中阐明的;人PHD2核苷酸序列,如在GenBank登记号NM_022051和NG_015865中阐明的;人PHD3核苷酸序列,如在GenBank登记号NM_022073和AJ310545中阐明的;人FIH-1核苷酸序列,如在GenBank登记号NM_017902中阐明的;和人vHL核苷酸序列,如在GenBank登记号NM_000551和NM_198156中阐明的;(2)与(1)中提及的序列中的任一个共享至少70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%序列同一性的核苷酸序列;(3)与(1)中提及的序列在低、中和高严格条件下杂交的核苷酸序列;(4)编码下述氨基酸序列中的任一个的核苷酸序列:人PHD1氨基酸序列,如在GenPept登记号CAC42510、AAH36051、NP_444274和NP_542770中阐明的;人PHD2氨基酸序列,如在GenPept登记号NP_071334和NP_071334中阐明的;人PHD3氨基酸序列,如在GenPept登记号NP_071356和CAC42511中阐明的;人FIH-1氨基酸序列,如在GenPept登记号NP_060372中阐明的;和人vHL氨基酸序列,如在GenPept登记号NP_000542和NP_937799中阐明的;(5)编码与(4)中提及的序列中的任一个共享至少70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%序列相似性的氨基酸序列的核苷酸序列;和编码与(4)中提及的序列中的任一个共享至少70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列。
说明性的拮抗核酸分子包括反义分子、适体、核酶和形成的三股螺旋分子、RNAi和外部引导序列。核酸分子可以充当靶分子具有的特定活性的效应子、抑制剂、调节剂和刺激剂,或功能核酸分子可以具有独立于任何其它分子的从新活性。
拮抗核酸分子可以与任何大分子,如DNA、RNA、多肽或糖类链相互作用。因此,拮抗核酸分子可以与PHD、FIH-1或vHLmRNA或PHD、FIH-1或vHL的基因组DNA相互作用,或它们可以与PHD、FIH-1或vHL多肽相互作用。通常,基于靶分子与拮抗核酸分子之间的序列同源性,将拮抗核酸分子设计成与其它核酸相互作用。在其它情况下,拮抗核酸分子与靶分子之间的特异性识别不是基于拮抗核酸分子与靶分子之间的序列同源性,而是基于允许进行特异性识别的三级结构的形成。
在一些实施方案中,反义RNA或DNA通过结合到定向mRNA并防止蛋白质翻译而用于直接阻遏PHD、FIH-1或vHLmRNA的翻译。通过规范或非规范碱基配对将反义分子设计成与靶核酸分子相互作用。可以通过例如RNA酶H介导的RNA-DNA杂合体降解,可以将反义分子与靶分子的相互作用设计成促进靶分子的破坏。可选的是,可以将反义分子设计成中断正常地将发生于靶分子上的加工功能,如转录或复制。可以基于靶分子的序列设计反义分子。存在通过发现靶分子的大多数可进入区域优化反义效率的许多方法。非限制性方法包括使用硫酸二甲酯(DMS)和焦碳酸二乙酯(DEPC)的体外选择实验和DNA修饰研究。在具体实例中,反义分子以小于或等于10-6、10-8、10-10或10-12的解离常数(Kd)结合靶分子。在具体实施方案中,使用衍生自反义起始位点,例如–10到+10区域的反义寡脱氧核糖核苷酸。
适体是适合地以特定方式与靶分子相互作用的分子。适体通常是折叠成确定的二级和三级结构如茎环或鸟嘌呤四联体、长度为15-50个碱基的小核酸。适体可以结合小分子如ATP和茶碱,以及大分子如逆转录酶和凝血酶。适体可以以小于10-12M的Kd与靶分子非常紧密地结合。适合地,适体以小于10-6、10-8、10-10或10-12的Kd结合靶分子。适体可以以非常高的特异性结合靶分子。例如,已经分离了仅在分子上的单个位置不同的靶分子与另一个分子之间的结合亲和力方面具有大于10,000差异的适体。希望的是适体与靶分子的Kd比背景结合分子的Kd低至少10-、100-、1000-、10,000-或100,000-倍。用于产生感兴趣的靶标(例如,PHD、FIH-1或vHL)的适体的适合方法是“指数富集的配体的系统进化(SystematicEvolutionofLigandsbyEXponentialEnrichment)”(SELEXTM)。SELEXTM法被描述于美国专利号5,475,096和美国专利号5,270,163(也参见WO91/19813)。简单地说,将核酸混合物与靶分子在有助于结合的条件下接触。使未结合的核酸与结合的核酸分隔,并使核酸-靶复合物解离。接着扩增解离的核酸以产生配体富集的核酸混合物,该配体富集的核酸混合物按照需要经历结合、分隔、解离和扩增的重复循环以产生靶分子的高度特异性高亲和力核酸配体。
在其它实施方案中,使用抗-PHD、-FIH-1或-vHL核酶催化PHD、FIH-1或vHLRNA的特异性切割。核酶作用的机制涉及核酶分子与互补靶RNA的序列特异性杂交,接着是内切核酸切割。有几种不同类型的催化核酸酶或核酸聚合酶类型反应的核酶,所述反应给予在自然系统中发现的核酶,如锤头核酶、发夹核酶和四膜虫核酶。还有许多不是在自然系统中发现的但已经被改造成从新催化特异性反应的核酶。代表性核酶切割RNA或DNA底物。在一些实施方案中,使用切割RNA底物的核酶。在潜在RNA靶内的特异性核酶切割位点首先通过筛选靶分子的核酶切割位点来识别,核酶切割位点包括以下序列,GUA、GUU和GUC。一旦得到识别,即可评价对应于包含切割位点的靶基因区域的15-20个核糖核苷酸的RNA短序列的预期的结构特征,例如可能致使寡核苷酸序列不适合的二级结构。也可以使用核糖核酸酶保护测定,通过测试候选靶与互补寡核苷酸杂交的可及性,来评价候选靶的适用性。
形成三股螺旋的功能核酸分子是可以与双链或单链核酸相互作用的分子。当三股螺旋分子与靶区域相互作用时,形成称为三股螺旋的结构,其中有根据Watson-Crick和Hoogsteen碱基配对两者形成复合物的三条DNA链。三股螺旋分子是优选的,原因是它们能够以高亲和力和特异性结合靶区域。通常还希望形成三股螺旋的分子以小于10-6、10-8、10-10或10-12的Kd结合靶分子。
外部引导序列(EGS)是结合形成复合物的靶核酸分子的分子,并且该复合物被切割靶分子的RNA酶P识别。可以将EGS设计成特异性地靶向选择的RNA分子。RNA酶P帮助在细胞内加工转移RNA(tRNA)。可以通过使用引起RNA:EGS复合物模拟天然tRNA底物的EGS,招募细菌性RNA酶P以切割几乎任何RNA序列。类似地,可以利用真核EGS/RNA酶P-指导的RNA切割来切割真核细胞内所希望的靶标。
在其它实施方案中,可以使用介导PHD、FIH-1或vHL基因或PHD、FIH-1或vHL转录物的RNA干扰(RNAi)的RNA来降低或取消基因表达。RNAi是指通过引入与靶基因转录物同源的单链或通常是双链RNA(dsRNA)干扰或破坏靶基因产物。RNAi方法,包括双链RNA干扰(dsRNAi)或小干扰RNA(siRNA),已经广泛地记录于许多生物体中,包括哺乳动物细胞和线虫秀丽隐杆线虫(C.elegans)(Fireetal.,1998,Nature,391,806-811)。在哺乳动物细胞中,RNAi可以通过以下触发:即通过小干扰RNA(siRNA)的21个至23-个核苷酸(nt)双螺旋(Chiuetal.,2002,Mol.Cell.10:549-561;Elbashiretal.,2001,Nature411:494-498),或通过微RNA(miRNA)、功能性小发夹RNA(shRNA),或其它使用DNA模板及RNA聚合酶III启动子在体内表达的dsRNA(Zengetal.,2002,Mol.Cell9:1327-1333;Paddisonetal.,2002,GenesDev.16:948-958;Leeetal.,2002,NatureBiotechnol.20:500-505;Pauletal.,NatureBiotechnol.2002,20:505-508;Tuschl,T.,2002,NatureBiotechnol.20:440-448;Yuetal.,2002,Proc.Natl.Acad.Sci.USA99(9):6047-6052;McManusetal.,2002,RNA8:842-850;Suietal.,2002,Proc.Natl.Acad.Sci.USA99(6):5515-5520)。
在具体实施方案中,使用对应于PHD、FIH-1或vHL基因的至少一部分的dsRNA自身,尤其是产生dsRNA的构建体来降低或消除其表达。可以使用在现有技术中报道的任何技术实现RNAi介导的基因表达抑制,例如通过将编码茎环或发夹RNA结构的核酸构建体转染到靶细胞的基因组中,或通过从趋同启动子(convergentpromoter)之间开始或作为从单个启动子之后开始的头到头或尾到尾复制表达对PHD、FIH-1或vHL基因具有同源性的转染的核酸构建体。可以使用任何类似的构建体,只要其产生自身具有回折并产生dsRNA的能力的单链RNA即可,或只要其产生两个分开的RNA转录物,然后退火形成与靶基因具有同源性的dsRNA即可。
对于RNAi不需要绝对同源性,而描述了约200个碱基对的dsRNA在85%同源性时的较低阈值(PlasterkandKetting,2000,CurrentOpinioninGeneticsandDev.10:562-67)。因此,根据dsRNA的长度,RNAi编码核酸可以在其针对靶基因转录物包含的同源性水平上变化,即100-200个碱基对的dsRNA与靶基因具有至少约85%同源性,以及更长的dsRNA,即300至100个碱基对的dsRNA与靶基因具有至少约75%同源性。表达设计成与单独表达的RNA退火的单个RNA转录物的RNA编码构建体,或从趋同启动子表达单个转录物的单独构建体,其长度适合地为至少约100个核苷酸。表达设计成通过内部折叠形成dsRNA的单个RNA的RNA编码构建体,其长度通常为至少约200个核苷酸。
如果产生的dsRNA在靶向破坏的细胞谱系中对基因产物具有特异性,则用于表达dsRNA形成构建体的启动子可以是任何类型的启动子。可选择的是,启动子可以是谱系特异性的,因为其仅在特定发育谱系的细胞中表达。如果观察到与在非靶向细胞谱系中表达的基因的一些同源性重叠,则这可能是有利的。启动子也可以是通过外部控制因子或通过细胞内环境因子可诱导的。
在一些实施方案中,可以利用约21至约23个核苷酸的RNA分子介导RNAi,所述约21至约23个核苷酸的RNA分子指导与其对应的具体mRNA的切割,如Tuschletal.在U.S.2002/0086356中描述的。这样的21-至23-ntRNA分子可以包含3'羟基,可以是单链或双链的(如两个21-至23-ntRNA),其中dsRNA分子可以是平端或包含突出端(例如,5',3')。
在一些实施方案中,拮抗核酸分子是siRNA。siRNA可以通过任何适合的方法制备。例如可以参考国际公布WO02/44321,其公开了当与3'突出端碱基配对时能够序列特异性降解靶mRNA的siRNA,该国际公布通过引用并入本文中。可以使用模拟通过Dicer酶产生的siRNA的合成的短双链双链RNA,在哺乳动物细胞中实现序列特异性基因沉默。siRNA可以化学合成,或在体外合成,或可以是在细胞内部被加工成siRNA的短双链发夹样RNA(shRNA)的结果。一般使用算法和常规DNA/RNA合成仪设计合成的siRNA。供应商包括Ambion(Austin,Tex.),ChemGenes(Ashland,Mass.),Dharmacon(Lafayette,Colo.),GlenResearch(Sterling,Va.),MWBBiotech(Esbersberg,Germany),Proligo(Boulder,Colo.)和Qiagen(Vento,TheNetherlands)。也可以在体外使用试剂盒如Ambion'sSILENCERTMsiRNA构建试剂盒合成siRNA。
通常通过短发夹RNAs(shRNAs)的转录从载体产生siRNA。用于产生包含shRNA的载体的试剂盒是可获得的,例如Imgenex的GENESUPPRESSORTM构建试剂盒和Invitrogen的BLOCK-ITTM可诱导RNAi质粒和慢病毒载体。
说明性的RNAi分子(例如,PHD、FIH-1或vHLsiRNA和shRNA)可商购从SantaCruzBiotechnology,Inc.(SantaCruz,CA,USA)获得。
在一些实施方案中,HIF-α增效剂是HIF羟化酶的抑制剂,特别是HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂。抑制HIF羟化酶活性的化合物是指使至少一种HIF羟化酶(例如PHD1-3)的活性降低、消除或变弱的任何化合物。在一些实施方案中,HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂。用于确定化合物是否抑制HIF羟化酶活性的方法在本领域中是众所周知的。
在功能上,用于本发明方法中的HIF羟化酶抑制剂通过其抑制2-氧代戊二酸盐双加氧酶的活性来限定,其中所述酶对低氧诱导因子具有特异性活性。这样的化合物通常被称为HIF羟化酶抑制剂、HIF脯氨酰羟化酶抑制剂、HIF脯氨酰-4-羟化酶抑制剂、脯氨酰羟化酶抑制剂或“PHI”。在具体实施方案中,用于本发明的PHI是小分子化合物。抑制HIF羟化酶活性的化合物可以另外表现出对一种或多种2-氧代戊二酸盐-和铁依赖性双加氧酶,例如FIH(GenBank登记号AAL27308)、前胶原脯氨酰4-羟化酶(CP4H)等的抑制活性。
在具体实施方案中,用于本文提供的本发明方法和药物中的化合物是2-氧代戊二酸盐的结构模拟物,其中所述化合物相对于2-氧代戊二酸盐竞争性地和相对于铁非竞争性地抑制靶HIF脯氨酰羟化酶。PHI通常是杂环羧胺化合物,尤其是杂环羰基甘氨酸衍生物,并且可以是例如杂环羧胺,包括吡啶、嘧啶、哒嗪、萘啶、吡咯并吡啶、噻唑并吡啶、异噻唑并吡啶、喹啉、异喹啉、噌啉、β-咔啉、喹诺酮、噻吩并吡啶、苯并吡喃或1,2-苯并吡喃羧胺。更特别是,所述抑制剂可以是杂环羰基甘氨酸。
抑制HIF脯氨酰羟化酶的化合物在本领域中是已知的并且尤其描述于美国专利号5,658,933;5,620,995;5,719,164;5,726,305;6,093,730;7,323,475;美国申请系列号12/544,861;U.S.2006/0199836;U.S.2007/0298104;U.S.2008/0004309;和WO2009/073669;WO2009/089547;WO2009/100250;WO02/089799;WO02/089809;U.S.2003/0176317、U.S.2003/083351;U.S.2003/0153503、U.S.2004/0053977;美国专利号7,323,475、U.S.2006/0199836,美国专利号8,324,208;美国专利号8,323,671;美国专利号8,343,952;美国专利号8,269,008;美国专利申请公开号2012/0309977;U.S.2012/0329836;U.S.2012/0316204;美国专利申请公开号2011/0305776;美国专利号7,928,120,美国专利号7,696,223、U.S.2010/0303928、U.S.2010/0330199、U.S.2010/0331400、U.S.2010/0047367、PCT/US2009/064065、美国专利号7,897,612、美国专利号7,608,621、美国专利号7,728,130、美国专利号7,635,715、美国专利号7,569,726、美国专利号7,811,595;U.S.2007/0299086;U.S.2011/0111058;U.S.2011/0110961;美国专利号8,309,537;WO2003/049686;U.S.2003/176317;U.S.2004/0254215;WO2004/4108681;WO2005/034929;WO2005/007192;WO2004/108121;U.S.2005/020487;WO2003/053997;U.S.2003/153503;WO2007/070359;U.S.2009/0111806;美国专利号8,124,775;U.S.2009/0093483;U.S.2009/0156605;U.S.2009/0088475;U.S.2009/0099171;WO2008/137060;U.S.2009/0156633;U.S.2010/0035906;WO2008/049538;WO2008/067871;U.S.2010/0093803;U.S.2009/269420;WO2011/006355;WO2011/106226;U.S.2011/028507;WO2010/018458;WO2011/056725;WO2011/049126;WO2011/049127;WO2007/038571;U.S.2009/0082357;WO07/136990;WO09/039323;U.S.2009/0176825;U.S.2010/0113444;WO08/089051;U.S.08/0171756;WO08/089052;WO2009/039321;WO2009/039322;U.S.2009/0176825;WO09/049112;U.S.2010/0305154;U.S.2010/0305133;U.S.2010/0298324;WO2009/134847;U.S.2011/0039895;U.S.2011/0098324;U.S.2011/0160227;WO2010/022308;U.S.2011/0144167;WO2010/059549;WO2010/059552;WO2010/059555;U.S.2011/0046132;WO2009/134754;U.S.2010/0204226;WO2012/021830;U.S.2011/0077267;U.S.2012/004197;U.S.2010/0056563;U.S.2010/0137297;U.S.2010/0331358;U.S.2011/009425;U.S.2011/009406;U.S.2009/0239876;U.S.2011/0152304;WO2010/147776;WO2011/002623;WO2011/002624;WO2011/133444;WO2011/130908;WO2010/076524;WO2010/076525;WO2011/045811;U.S.2011/0130414;WO2011/048611;WO2012/106472;WO2013/013609;WO2013/017063;JP04/083570;WO09/131127;U.S.2011/112103;U.S.2012/220609;U.S.2006/040986;U.S.2004/0053918;U.S.2012/0108581;U.S.8,471,024;U.S.5,985,913;和U.S.2009/0048294。将前述专利和专利申请通过引用整体并入本文中。一方面,本发明特别考虑了前述专利和专利申请描述和/或具体例示或要求保护的一种或多种化合物的用途。
在本发明的一个实施方案中,HIF-α增效剂选自[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物X)、{[5-(4-氯-苯氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸(化合物A)、[(1-氰基-4-羟基-5-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物B)、{[7-氰基-1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸(化合物C)、[(1,3-二环己基-6-羟基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羰基)-氨基]-乙酸(化合物D)、{[2-(3,4'-二氟-二苯基-4-基甲基)-5-羟基-6-异丙基-3-氧代-2,3-二氢-哒嗪-4-羰基]-氨基}-乙酸(化合物E)、2-(6-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-[1,2,3]三唑-1-基-1,2-二氢-吡唑-3-酮(化合物F)、[(4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物H)、{[4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸(化合物J)和{[5-(3-氟-苯基)-3-羟基-吡啶-2-羰基]-氨基}-乙酸(化合物K)。在本发明的另一个实施方案中,HIF-α增效剂选自[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物X)、{[5-(4-氯-苯氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸(化合物A)、[(1-氰基-4-羟基-5-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物B)、{[7-氰基-1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸(化合物C)、[(4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物H)和{[4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸(化合物J)。
其它脯氨酰羟化酶抑制剂是众所周知的并且已经尤其描述于BioorgMedChemLett.16(21):5616-20(2006);BioorgMedChemLett.16(21):5517-22(2006);BioorgMedChemLett.16(21):5598-601(2006);BioorgMedChemLett.16(21):5687-90(2006);AnalyticalBiochemistry(2008)384(2):213-23,2009;J.Comb.Chem(2010)12(5):676-86;JCardiovascPharmacol.2010Aug;56(2):147-55。
确定任何具体化合物是否抑制HIF脯氨酰羟化酶的方法是众所周知的,其说明性实例包括美国专利号7,323,475所述的方法。任何具体化合物的抑制活性可以合宜地评价并通过确定针对一种或多种HIF脯氨酰羟化酶的IC50进行比较。针对每种HIF脯氨酰羟化酶的任何化合物的IC50可以使用本领域中已知的测定来确定。一般而言,抑制HIF脯氨酰羟化酶的化合物的IC50值会在μM范围内或更小,通常,对于一种或多种HIF脯氨酰羟化酶而言在nM范围内。化合物A、B、C、D、E、F、H、J、K和X抑制PHD2酶的IC50为0.05-1.5μM。针对PHD1和PHD3酶的示例性化合物的IC50在相似范围内。
说明性小分子PHI包括,例如在U.S.2004/0254215(WO2004/4108681)和在美国专利号7,323,475、7,629,357、7,863,292和8,017,625中公开的含氮杂芳基化合物,专门通过引用将其各自整体并入本文中。该类型的示例性化合物通过式I表示:
其中:
q为0或1;
p为0或1;
Ra为–COOH或–WR8;条件是当Ra为–COOH时,则p为0,并且当Ra为–WR8时,则p为1;
W选自氧、–S(O)n–和–NR9–,其中n为0、1或2,
R9选自氢、烷基、取代的烷基、酰基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环,以及R8选自氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环,或当W为–NR9–时,则R8和R9与它们结合的氮原子可以连接在一起以形成杂环或取代的杂环基团,条件是当W为–S(O)n–并且n为1或2时,则R8不为氢;
R1选自氢、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、氨基、取代的氨基、氨酰基、芳基、取代的芳基、卤素、杂芳基、取代的杂芳基、杂环、取代的杂环和–XR6,其中X为氧、–S(O)n–或–NR7–,其中n为0、1或2,R6选自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环,以及R7为氢、烷基或芳基,或当X为–NR7–时,则R7和R8与它们结合的氮原子可以连接在一起以形成杂环或取代的杂环基团;
R2和R3独立地选自氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、卤素、羟基、氰基、–S(O)n–(R6)–R6(其中n为0、1或2)、–NR6C(O)NR6R6、–XR6,其中X为氧、–S(O)n–或–NR7–,其中n为0、1或2,每个R6独立地选自氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环,条件是当X为–SO–或–SO2–时,则R6不是氢,并且R7选自氢、烷基、芳基,或R2、R3与悬垂于其的碳原子一起形成芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基;
R4和R5独立地选自氢、卤素、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基和–XR6(其中X为氧)、–S(O)n–或–NR7–,其中n为0、1或2,R6选自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环,以及R7为氢、烷基或芳基,或当X为–NR7–时,则R7和R8与它们结合的氮原子可以连接在一起以形成杂环或取代的杂环基团;
R选自氢、氘和甲基;
R'选自氢、氘、烷基和取代的烷基;可选择的是,R和R'与悬垂于其的碳可以连接以形成环烷基、取代的环烷基、杂环或取代的杂环基团;
R”选自氢和烷基,或R”与R'和悬垂于其的氮可以连接在一起以形成杂环或取代的杂环基团;
R”'选自羟基、烷氧基、取代的烷氧基、酰氧基、环烷氧基、取代的环烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、芳基、–S(O)、–R10,其中R10选自烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基,并且n为0、1或2;
以及其药学上可接受的盐、酯和前药;
在可选择的实施方案中,式I的化合物通过式IA表示:
其中R1、R2、R3、R4、R5、R、R'、R”、R”'和q如以上定义;以及
其药学上可接受的盐、酯、前药。
在另一个可选择的实施方案中,式I的化合物通过式IB表示:
其中R1、R2、R3、R4、R5、R”、R”'、WR8和q如以上定义;以及
其药学上可接受的盐、酯、前药。
在另一个可选择的实施方案中,本发明涉及通过式IC表示的化合物:
其中R1、R2、R3、R4、R5、R、R'、R”、R”'、WR8和q如以上定义;以及其药学上可接受的盐、酯、前药。
在又一个供选择的实施方案中,本发明涉及通过式ID表示的化合物:
其中R1、R2、R3、R4、R5、R、R'、R”、R”'和q如以上定义;
以及其药学上可接受的盐、酯、前药。
根据上式的示例性化合物包括{[4-羟基-1-(萘-2-基氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-1-(吡啶-3-基氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-1-(4-甲氧基-苯氧基)异喹啉-3-羰基]-氨基-}-乙酸;{[4-羟基-1-(3-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-(3-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基-}-乙酸;{[1-(2-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-1-(2-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-(4-乙酰氨基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-1-(4-甲磺酰胺基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(4-羟基-1-苯氨基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[4-羟基-6-(吡啶-3-基氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(吡啶-3-基氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(1-氯-4-甲氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-乙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-甲氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-乙氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-乙酰氧基-1-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-乙氧基-4-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-甲氧基甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-二甲基氨基甲酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-甲基-6-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-苄氧基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基-]-乙酸;[(4-乙氧基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-二甲基氨基甲酰基-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-甲氧基甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-对甲苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[7-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-1-甲基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-氯-4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸(化合物J);{[1-氯-4-羟基-6-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-6-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-氯-4-羟基-7-(4-三氟甲基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(4-三氟甲基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-氯-4-羟基-6-(4-三氟甲基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-6-(4-三氟甲基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-氯-7-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基)乙酸;{[7-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-氯-6-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[6-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(吡啶-4-基巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-6-(吡啶-4-基巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(7-苯亚磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(7-苯磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(6-苯亚磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(6-苯磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(6-氨基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[4-羟基-7-(4-甲氧基-苯磺酰氨基}-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(3-苯基-脲基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-6-(3-苯基-脲基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(4-羟基-1-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[1-(4-氯-苯巯基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(4-羟基-1-对甲苯基巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[4-羟基-1-(吡啶-2-基巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基-}-乙酸;{[4-羟基-1-(3-甲氧基-苯巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-1-(2-甲氧基-苯巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-1-(萘-2-基巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(1-苯亚磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-苯磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[4-羟基-7-(吡啶-2-基巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-6-(吡啶-2-基巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(1-氯-4-羟基-6,7-二苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基-]-乙酸;[(4-羟基-6,7-二苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;({4-羟基-7-[4-(甲苯-4-磺酰胺基)-苯氧基]-异喹啉-3-羰基}-氨基)-乙酸;{[4-羟基-7-(4-硝基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(4-巯基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-巯基-7-三氟甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[7-(4-苯磺酰氨基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(4-甲磺酰胺基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[7-(4-氯-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[6-(4-氯-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[6-(3-氟-5-甲氧基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[7-(3-氟-5-甲氧基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[7-(3,4-二氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[6-(3,4-二氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(4-三氟甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-6-(4-三氟甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;2-(S)-{[7-(4-氯-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;2-(S)-{[6-(4-氯-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;2-{[7-(3,4-二氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;2-(S)-[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;2-(R)-[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;2-(R)-[(4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;2-(S)-[4-羟基-{(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;2-(S)-[(7-苯磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(R)-2-[(4-羟基-1-甲氧基甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(S)-2-[(4-羟基-1-甲氧基甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(S)-2-[(4-巯基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(S)-2-{[1-(4-氯-苯巯基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;(R)-2-{[1-(4-氯-苯巯基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物X);[(4-羟基-6-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-6-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-6-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物H);[(4-羟基-6-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-6-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-6-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[7-(2,6-二甲基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-氯-7-(2,6-二甲基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[1-溴-7-(2,6-二甲基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(1-溴-7-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-6-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-7-三氟甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-6-三氟甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1,7-二溴-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(7-溴-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(6-溴-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-7-氟-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(7-氟-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-7-氟-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-苯并[g]异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-6-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-7-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-6-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-7-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-6-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-7-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-5-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-8-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-5-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-8-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-5-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-8-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-乙基巯基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[4-羟基-1-(4-甲氧基-苯巯基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;[(1-氯-4-羟基-7-碘-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-6-碘-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-7-碘-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-溴-4-羟基-7-甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-7-丁氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-6-丁氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(6-苄氧基-6-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-甲基-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-甲基-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-甲基-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-甲基-氨基]-乙酸;[羧甲基-(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[羧甲基-(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羧酸(2-氨基-乙基)-酰胺(三氟-乙酸盐);1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羧酸(2-甲氧基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羧酸(2-二甲氨基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羧酸(2-乙酰氨基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-甲氧基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-氨基-乙基)-酰胺(三氟-乙酸盐);1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-二甲氨基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-氨基-乙基)-酰胺(三氟-乙酸盐);1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-甲氧基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-二甲氨基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺;(S)-2-[(6-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-羟基-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-羟基-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-羟基-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-羟基-丙酸;(R)-2-[(1氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-羟基-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-羟基-丙酸;2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-2-甲基-丙酸;2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-2-甲基-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸(三氟-乙酸盐);(S)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸(三氟-乙酸盐);(R)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酸;(S)-2-[(6-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-戊酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-戊酸;(R)-1-(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-吡咯烷-2-羧酸;(S)-1-(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-吡咯烷-2-羧酸;(R)-1-(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-吡咯烷-2-羧酸;(S)-1-(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-吡咯烷-2-羧酸;(R)-6-氨基-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-己酸(三氟-乙酸盐);(S)-6-氨基-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-己酸(三氟-乙酸盐);(R)-6-氨基-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-己酸;三氟乙酸盐;(S)-6-氨基-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-己酸(三氟-乙酸盐);(R)-6-氨基-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-己酸;三氟乙酸盐;(S)-6-氨基-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-己酸(三氟-乙酸盐);(R)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丁二酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丁二酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丁二酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丁二酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丁二酸;1-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-环丙烷羧酸;1-[(1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-环丙烷羧酸;二氘-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;(R)-2-[(6-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(S)-2-[(7-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(R)-2-[(7-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉(ioquinoline)-3-羰基)-氨基]-丙酸;(S)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(R)-2-[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(S)-2-[(6-异丙氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(R)-2-[6-异丙氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;(S)-2-[(7-异丙氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基-丙酸;(R)-2-[(7-异丙氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;1-氯-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-羟基-1-羟甲基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羧酸(2-羟基-1-羟甲基-乙基)-酰胺;1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羧酸(2-羟基-1-羟甲基-乙基)-酰胺;{[7-(3,5-二氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[6-(3,5-二氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;({7-[4-(4-氟-苯氧基)-苯氧基]-4-羟基-异喹啉-3-羰基}-氨基)-乙酸;({6-[4-(4-氟-苯氧基)-苯氧基]-4-羟基-异喹啉-3-羰基}-氨基)-乙酸;{[7-(3-氯-4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[6-(3-氯-4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;(S)-2-{[7-(3-氟-5-甲氧基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;2-(S)-[(7-环己氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;2-(S)-{[7-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-1-甲基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;2-(S)-{[7-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;2-(S)-[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;2-(S)-[(4-羟基-1-甲基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸;2-(S)-{[4-羟基-7-(4-三氟甲基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-丙酸;{[7-(4-氯-苯氧基)-4-羟基-1-甲基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[6-(4-氯-苯氧基)-4-羟基-1-甲基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[7-(3,5-二氟-苯氧基)-4-羟基-1-甲基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;{[4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-1-甲基-异喹啉-3-羰基]-氨基-}-乙酸;{[4-羟基-6-(4-甲氧基-苯氧基)-1-甲基-异喹啉-3-羰基]-氨基-}-乙酸;[(6-环己氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(7-环己氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(7-环己氧基-4-羟基-1-甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(7-环己基巯基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(7-环己烷磺酰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-异丁基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-吡啶-2-基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-乙基-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-二甲氨基甲基-4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-1-甲基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;{[4-羟基-1-甲基-7-(4-三氟甲基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸;以及其药学上可接受的盐、酯和前药。
在一些实施方案中,小分子PHI可以选自在美国专利号7,928,120公开的氰基异喹啉化合物,通过引用将其整体并入本文。这些化合物可以通过式II表示:
其中:
R选自氢、烷基和取代的烷基;
R1、R2、R3和R4独立地选自氢、卤素、氰基、羟基、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、氨基、取代的氨基、-OR7、-SR7、-SOR7和-SO2R7,其中R7选自烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基;和
R5和R6独立地选自氢或C1-3烷基;
或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、溶剂化物和/或前药。
式II的代表性化合物包括:
{[1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、2-(S)-[(1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸、{[1-氰基-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、2-(S)-[(1-氰基-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸、2-(R)-[(1-氰基-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸、{[1-氰基-7-(4-氟苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-7-(三氟甲基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-7-氯-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-8-苯氧基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-8-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-6-甲氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-6-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[1-氰基-6-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-6-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-6-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[1-氰基-6-(2,6-二甲基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-5-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸(化合物B)、{[1-氰基-4-羟基-8-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-8-(3-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-8-(2-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-苄基-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[1-氰基-5-(4-氟-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-7-(2,6-二甲基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-6-(2-乙基-6-甲基-苯氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-6-(2,4,6-三甲基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[6-(4-氯-2,6-二甲基-苯氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-氰基-6-环己氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(6-苯磺酰基-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-6-(4-丙氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-(苯并[1,3]二氧杂环戊-5-基氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[6-(苯并[1,3]二氧杂环戊-5-基氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-6-(2,3-二氢-苯并呋喃-5-基氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-氰基-4-甲氧基-8-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸甲酯、[(1-氰基-4-甲氧基-8-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、(S)-2-[(1-氰基-4-羟基-8-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸、(R)-2-[(1-氰基-4-羟基-8-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-丙酸、{[1-氰基-4-羟基-6-(2-甲基-苯并噻唑-6-基氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-6-(2-二甲氨基-苯并噁唑(benzooxazol)-5-基氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-7-(2-二甲氨基-苯并噁唑-5-基氧基)-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-6-(2-吗啉-4-基-苯并噻唑-6-基氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-氰基-4-羟基-6-(2-甲基-苯并噁唑-6-基氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(6-氯-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-丁氧基-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-6,7-二苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-7-甲氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-7-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-6-异丙氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-5-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-8-苯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-苄氧基-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[{5-(4-氯-苯氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基)-乙酸(化合物A)和[(1-氰基-4,7-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸。
在其它实施方案中,小分子PHI可以选自美国专利号7,696,223公开的吡咯并-和噻唑并-吡啶化合物,通过引用将其整体并入本文中。这些化合物可以通过式III表示:
其中:
q为0或1;
A和B独立地选自=C(R7)-、-N(R8)-、=N-和-S-,条件是存在以下中的一个:
A为=C(R7)-和B为–N(R8)-;
A为–S-和B为=N-;
A=N-和B为–S-;或
A为–N(R8)-和B为=C(R7)-;
或中的一个是双键,而其它是单键;
R1选自羟基、烷氧基、取代的烷氧基、酰氧基、环烷氧基、取代的环烷氧基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、杂环氧基、取代的杂环氧基、巯基、硫醚、取代的烷硫基、芳巯基、杂芳巯基、氨基、取代的氨基、酰胺基和氨酰基;
R2选自氢、氘和甲基;
R3选自氢、氘、烷基和取代的烷基;
R4选自氢、烷基和取代的烷基;
R5选自氢、卤素、氰基、羟基、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷氧基、取代的环烷氧基、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、杂环氧基、取代的杂环氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、酰基、氨酰基、硝基、氨基、取代的氨基、酰胺基、巯基、磺酰基、硫醚、芳硫基和取代的芳硫基;
R6和R7各自独立地选自氢、卤素、氰基、羟基、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷氧基、取代的环烷氧基、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、杂环氧基、取代的杂环氧基、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、酰基、氨酰基、硝基、氨基、取代的氨基、酰胺基、巯基、磺酰基、硫醚、芳硫基和取代的芳硫基;
或其中当A或B为=C(R7)-,则R6和R7与与其所结合的碳原子连接在一起以形成环链烯基、取代的环链烯基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基;和
R8选自氢、羟基、烷基、取代的烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基;
或其药学上可接受的盐、单立体异构体、立体异构体的混合物、酯或前药。
式III的代表性化合物包括:
[(2-溴-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(2,3-二溴-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[3-溴-2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-2,3,-二溴-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[3-溴-1,2-二-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[1,2-二-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-1,2-二-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-溴-2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-溴-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-3-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-(4-氟-苯基)-4-羟基-3-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氯-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-3-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-甲基-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-3-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-溴-2-叔丁基-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-叔丁基-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-4-羟基-2,3-二甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(2,3-二溴-4-羟基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-1,2,3-三甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-溴-3-叔丁基-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-叔丁基-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-4-羟基-2,3-二丙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-苄基-3,7-二氯-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-9-苯基-9h-β-咔啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-1-甲基-9-苯基-9h-β-咔啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-1,9-二苯基-9h-β-咔啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-苄基-3-氯-4-羟基-7-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-苄基-3-氯-4-羟基-7-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-苄基-3-氯-7-乙基-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1,3-二苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(3-氯-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(3-氯-4-羟基-7-甲基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[1-(苯并[1,3]二氧杂环戊-5-基甲基)-3-溴-2-(4-氯-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-溴-2-(4-氯-苯基)-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-(苯并[1,3]二氧杂环戊-5-基甲基)-4-羟基-2-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[1-(苯并[1,3]二氧杂环戊-5-基甲基)-2-(4-氯-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-苯并[1,3]二氧杂环戊-5-基甲基-2-(4-氯-苯基)-4-羟基-3-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-羟基-1,2-二苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(4-氯-苯基)-4-羟基-3-甲基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2,4-二苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-4-甲基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、(S)-2-[(7-羟基-4-甲基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-丙酸、{[7-羟基-2-(4-三氟甲基-苯基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-(4-氯-苯基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-羟基-2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-(4-氟-苯基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-乙基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-苯氧基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-羟基-2-(甲基-苯基-氨基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-羟基-2-(苯氨基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-羟基-2-苯基-噻唑并[5,4-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(5-溴-吡啶-3-基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-羟基-2-吡啶-3-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-丁基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-吡啶-2-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(4-氟-苯基)-7-羟基-4-甲基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-羟基-2-苯基-4-丙基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-羟基-2-(4-苯氧基-苯基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-氰基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-4-异丁基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-羟基-2-(3-甲氧基-苯基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-呋喃-2-基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-苯基-4-噻唑-2-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-羟基-2-(2-甲氧基-苯基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-羟基-4-甲基-2-苯基-噻唑并[5,4-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(4-氰基-苯基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-羟基-2,4-二苯基-噻唑并[5,4-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(3-氯-4-氟-苯基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-苄基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[5,4-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-羟基-4-(4-吗啉-4-基-苯基)-2-苯基-噻唑并[5,4-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[4-(4-氰基-苯基)-7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[4-氰基-2-(4-氟-苯基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[4-氰基-7-羟基-2-(3-甲氧基-苯基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-氰基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[5,4-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-乙炔基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-乙酰基-7-羟基-2-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-苯基-4-哌啶-1-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(4-叔丁基-苯基)-7-羟基-噻唑并[4、5-c]吡啶-6-羰基(carbony)]-氨基}-乙酸、{[2-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯-6-基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(2-苯并[b]噻吩-3-基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-二苯基-4-基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-苯并[b]噻吩-2-基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-喹啉-3-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-苯并呋喃-2-基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-二苯并呋喃-4-基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(2,3-二氢-苯并呋喃-5-基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-羟基-2-嘧啶-5-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-(6-氯-吡啶-3-基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-(6-丁氧基-吡啶-3-基)-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-羟基-2-(6-苯巯基-吡啶-3-基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)4-氰基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基]-氨基}-乙酸,{[2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-(3-甲基-丁基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-4-羟基-1-(3-甲基-丁基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-4-羟基-1-(3-甲基-丁基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-1-环己基甲基-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-4-羟基-1-环己基甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-3-氯-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-9-甲基-9H-β-咔啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-1,9-二甲基-9H-β-咔啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-9-甲基-1-苯基-9H-β-咔啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-9-甲基-9H-β-咔啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[3-溴-7-氰基-2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-羟基-5-苯基-5H-吡啶并[4,3-b]吲哚-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-5-苯基-5H-吡啶并[4,3-b]吲哚-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-羟基-1-甲基-5-苯基-5H-吡啶并[4,3-b]吲哚-3-羰基)-氨基]-乙酸、[(1-苄基-3-氯-7-氰基-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[3-氰基-2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氰基-2-(4-氟-苯基)-4-羟基-7-甲基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3,7-二氰基-2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(7-氰基-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(3-氯-7-氰基-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2,3-二溴-1-(4-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(4-羟基-1-苯乙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2,3-二溴-7-氰基-1-(4-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(3-溴-7-氰基-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-氰基-1-(4-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(3-氯-7-氰基-4-羟基-1-苯乙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2,3-二溴-4-羟基-1-(1(S)-苯基-乙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-1-(4-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[4-羟基-1-(1S-苯基-乙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、[(2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-苯乙基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-(1S-苯基-乙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-3-溴-7-氰基-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[4-羟基-1-(1R-苯基-乙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[4-羟基-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-4-羟基-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-7-氰基-4-羟基-3-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-(1R-苯基-乙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-4-羟基-1-(4-甲氧基-苄基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-4-羟基-1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-4-羟基-1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-(4-氟-苄基)-4-羟基-2,3-二甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-4-羟基-1-(4-氟-苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-4-羟基-1-(4-氟-苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-(4-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(2-氰基-4-羟基-1-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[4-羟基-1-(2-甲氧基-苄基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[4-羟基-1-(3-甲氧基-苄基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-1-(4-氟-苯基)-4-羟基-3-苯基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸(化合物C)、{[7-氰基-1-(2-甲氧基-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-1-(3-甲氧基-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2-氰基-1-(3-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[1-(3-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-4-羟基-1-(3-甲氧基-苄基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-1-(3-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[7-氰基-1-(3,4-二氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-1-(3,4-二氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-1-(3-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[3-氯-7-氰基-1-(3-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、{[2,3-二氯-7-氰基-1-(3,4-二氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-苄基-2,3-二氯-7-羟基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-叔丁基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-叔丁基-7-羟基-4-甲基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-叔丁基-4-氰基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(4-丁基-2-叔丁基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-叔丁基-7-羟基-4-((E)-苯乙烯基)-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-叔丁基-7-羟基-4-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-叔丁基-7-羟基-4-苯乙基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(2-叔丁基-7-羟基-4-异丙基巯基甲基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-甲基-4-苯基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-甲基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-萘-2-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸、[(7-羟基-2-噻吩-2-基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸和[(2-呋喃-2-基-7-羟基-噻唑并[4,5-c]吡啶-6-羰基)-氨基]-乙酸。
在一些实施方案中,小分子PHI可以选自WO2004/108121(U.S.2005/020487)公开的可以通过式IV表示的那些小分子PHI:
其中:
A为1,2-亚芳基、1,3-亚芳基、1,4-亚芳基;或(C1-C4)-亚烃基,其任选地被一个或两个以下基团取代:卤素、氰基、硝基、三氟甲基、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-羟烷基、(C1-C6)-烷氧基、–O–[CH2]x–CfH(2f+1-g)Halg、(C1-C6)-氟烷氧基、(C1-C8)-氟链烯氧基、(C1-C8)-氟炔氧基、–OCF2Cl、–O–CF2–CHFCl;(C1-C6)-烷基巯基、(C1-C6)-烷基亚磺酰基、(C1-C6)-烷基磺酰基、(C1-C6)-烷基羰基、(C1-C6)-烷氧基羰基、氨基甲酰基、N–(C1-C4)-烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C1-C4)-烷基氨基甲酰基、(C1-C6)-烷基羰氧基、(C3-C8)-环烷基、苯基、苄基、苯氧基、苄氧基、苯胺基、N-甲基苯胺基、苯基巯基、苯基磺酰基、苯基亚磺酰基、氨磺酰基、N–(C1-C4)-烷基氨磺酰基、N,N-二-(C1-C4)-烷基氨磺酰基;或被以下基团取代:取代的(C6-C12)-芳氧基、(C7-C11)-芳烷基氧基、(C6-C12)-芳基、(C7-C11)-芳烷基,其在芳基部分携带一至五个相同或不同的选自以下的取代基:卤素、氰基、硝基、三氟甲基、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基、–O–[CH2]x–CfH(2f+1-g)Halg、–OCF2Cl、–O–CF2–CHFCl、(C1-C6)-烷基巯基、(C1-C6)-烷基亚磺酰基、(C1-C6)-烷基磺酰基、(C1-C6)-烷基羰基、(C1-C6)-烷氧基羰基、氨基甲酰基、N–(C1-C4)-烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C1-C4)-烷基氨基甲酰基、(C1-C6)-烷基羰氧基、(C3-C8)-环烷基、氨磺酰基、N–(C1-C4)-烷基氨磺酰基、N,N-二-(C1-C4)-烷基氨磺酰基;或其中A为–CR5R6,并且R5和R6各自独立地选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基,芳基,或α-氨基酸的α-碳原子的取代基,其中所述氨基酸天然L-氨基酸或其D-同分异构体。
B是–CO2H、–NH2、–NHSO2CF3、四唑基、咪唑基、3-羟基异噁唑基、–CONHCOR”'、–CONHSOR”'、CONHSO2R”',其中R”'是芳基、杂芳基、(C3-C7)-环烷基或(C1-C4)-烷基,其任选地被以下基团单取代:(C6-C12)-芳基、杂芳基、OH、SH、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-硫代烷基、(C1-C4)-亚磺酰基、(C1-C4)-磺酰基、CF3、Cl、Br、F、I、NO2、–COOH、(C2-C5)-烷氧基羰基、NH2、单-(C1-C4-烷基)-氨基、二-(C1-C4-烷基)-氨基或(C1-C4)-全氟烷基;或其中B是CO2-G羧基,其中G是醇G-OH的基,其中G选自(C1-C20)-烷基、(C3-C8)环烷基、(C2-C20)-链烯基、(C3-C8)-环链烯基、视黄基、(C2-C20)-炔基、(C4-C20)-烯炔基(alkenynyl),其中所述链烯基、环链烯基,炔基和烯炔基含有一个或多个多重键;(C6-C16)-碳环芳烷基、(C7-C16)-碳环芳烷基、杂芳基或杂芳烷基,其中杂芳烷基的杂芳基或杂芳基部分含有5或6环原子;并且其中针对G限定的基被一个或多个以下的基团取代:羟基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基,羧基、(C1-C12)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C5-C8)-环链烯基、(C6-C12)-芳基、(C7-C16)-芳烷基、(C2-C12)-链烯基、(C2-C12)-炔基、(C1-C12)-烷氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基、(C6-C12)-芳氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基、(C1-C8)-羟烷基、–O–[CH2]x–CfH(2f+1-g)–Fg、–OCF2Cl、–OCF2–CHFCl、(C1-C12)-烷基羰基、(C3-C8)-环烷基羰基、(C6-C12)-芳基羰基、(C7-C16)-芳烷基羰基、肉桂酰基、(C2-C12)-链烯基羰基、(C2-C12)-炔基羰基、(C1-C12)-烷氧基羰基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰基、(C6-C12)-芳氧基羰基、(C7-C16)-芳烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷氧基羰基、(C2-C12)-烯氧基羰基、(C2-C12)-炔氧基羰基,酰氧基、(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C6-C12)-芳氧基羰氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基羰氧基、(C3-C8)-环烷氧基羰氧基、(C2-C12)-烯氧基羰氧基、(C2-C12)-炔氧基羰氧基、氨基甲酰基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N.N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰基、N–(C6-C16)-芳基氨基甲酰基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C16)-芳基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)烷基)-氨基甲酰基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C16)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、氨基甲酰氧基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N,N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰氧基、N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C)-芳基氨基甲酰氧基、N(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–((C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N-((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、氨基、(C1-C12)-烷基氨基、二-(C1-C12)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷基氨基、(C2-C12)-链烯基氨基、(C2-C12)-炔基氨基、N–(C6-C12)-芳基氨基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳基氨基、(C1-C12)-烷氧基氨基、(C1-C12)-烷氧基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷基羰基氨基、(C3-C8)-环烷基羰基氨基、(C6-C12)-芳基羰基氨基、(C7-C16)-芳烷基羰基氨基、(C1-C12)-烷基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C6-C12)-芳基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C7-C1)-芳烷基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷基羰基氨基-(C1-C8)-烷基、(C3-C8)-环烷基羰基氨基-(C1-C8)烷基、(C6-C12)-芳基羰基氨基-(C1-C8)-烷基、(C7-C12)-芳烷基羰基氨基-(C1-C8)-烷基、氨基-(C1-C10)-烷基、N–(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、N.N-二-(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-环烷基氨基-(C1-C10)-烷基、(C1-C12)-烷基巯基、(C1-C12)-烷基亚磺酰基、(C1-C12)-烷基磺酰基、(C6-C16)-芳巯基、(C6-C16)-芳基亚磺酰基、(C6-C12)-芳基磺酰基、(C7-C16)-芳烷基巯基、(C7-C16)-芳烷基亚磺酰基、(C7-C16)-芳烷基磺酰基、氨磺酰基、N–(C1-C10)-烷基氨磺酰基、N,N-二-(C1-C10)-烷基氨磺酰基、(C3-C8)-环烷基氨磺酰基、N–(C6-C12)-烷基氨磺酰基、N–(C7-C16)-芳烷基氨磺酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C12)-芳基氨磺酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨磺酰基、(C1-C10)-烷基亚磺酰氨基、N–((C1-C10)-烷基)-(C1-C10)-烷基亚磺酰氨基、(C7-C16)-芳烷基亚磺酰氨基或N–((C1-C10)-烷基-(C7-C16)-芳烷基亚磺酰氨基;其中为芳基或包含芳基部分的基可以通过一至五个相同或不同的以下基团在芳基上进行取代:羟基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基、羧基、(C1-C12)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C6-C12)-芳基、(C7-C16)-芳烷基、(C1-C12)-烷氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基、(C6-C12)-芳氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基、(C1-C8)-羟烷基、(C1-C12)-烷基羰基、(C3-C8)-环烷基羰基、(C6-C12)-芳基羰基、(C7-C16)-芳烷基羰基、(C1-C12)-烷氧基羰基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰基、(C6-C12)-芳氧基羰基、(C7-C16)-芳烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷氧基羰基、(C2-C12)-烯氧基羰基、(C2-C12)-炔氧基羰基、(C1-C12)-烷基羰氧基、(C3-C8)-环烷基羰基氧基、(C6-C12)-芳基羰氧基、(C7-C16)-芳烷基羰氧基、肉桂酰氧基、(C2-C12)-链烯基羰氧基、(C2-C12)-炔基羰氧基、(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C6-C12)-芳氧基羰氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基羰氧基、(C3-C8)-环烷氧基羰氧基、(C2-C12)-烯氧基羰氧基、(C2-C12)-炔氧基羰氧基、氨基甲酰基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰基、N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、氨基甲酰氧基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N,N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰氧基、N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–((C7-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、氨基、(C1-C12)-烷基氨基、二-(C1-C12)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷基氨基、(C3-C12)-链烯基氨基、(C3-C12)-炔基氨基、N–(C6-C12)-芳基氨基、N–(C7-C11)-芳烷基氨基、N-烷基芳烷基氨基、N-烷基-芳基氨基、(C1-C12)-烷氧基氨基、(C1-C12)-烷氧基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷基羰基氨基、(C3-C8)-环烷基羰基氨基、(C6-C12)-芳基羰基氨基、(C7-C16)-烷基羰基氨基、(C1-C12)-烷基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C6-C12)-芳基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C7-C11)-芳烷基羰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷基羰基氨基-(C1-C8)-烷基、(C3-C8)-环烷基羰基氨基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳基羰基氨基-(C1-C8)-烷基、(C7-C16)-芳烷基羰基氨基-(C1-C8)-烷基、氨基-(C1-C10)-烷基、N–(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、N.N-二-(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-环烷基氨基-(C1-C10)-烷基、(C1-C12)-烷基巯基、(C1-C12)-烷基亚磺酰基、(C1-C12)-烷基磺酰基、(C6-C12)-芳巯基、(C6-C12)-芳基亚磺酰基、(C6-C12)-芳基磺酰基、(C7-C16)-芳烷基巯基、(C7-C16)-芳烷基亚磺酰基或(C7-C16)-芳烷基磺酰基;
X为O或S;
Q为O、S、NR'或键;
其中,如果Q是键,则R4是卤素、腈或三氟甲基;
或其中,如果Q是O、S或NR',则R4是氢、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基,其中链烯基或炔基包含一个或两个C–C多重键;式–[CH2]x–CfH(2f+1-g)–Fg–的非取代的氟烷基、(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷氧基-(C1-C4)-烷氧基-(C1-C4)-烷基、芳基、杂芳基、(C7-C11)-芳烷基,或式Z的基团
–[CH2]v–[O]w–[CH2]t-E(Z)
其中E是杂芳基、(C3-C8)-环烷基,或式F的苯基
v为0-6,
w为0或1,
t为0-3,和
R7、R8、R9、R10和R11为相同或不同,并且为氢、卤素、氰基、硝基、三氟甲基、(C1-C6)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C1-C6)-烷氧基、–O–[CH2]x–CfH(2f+1-g)–Fg、–OCF2–Cl、–O–CF2–CHFCl、(C1-C6)-烷基巯基、(C1-C6)-羟烷基、(C1-C6)-烷氧基-(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷基亚磺酰基、(C1-C6)-烷基磺酰基、(C1-C6)-烷基羰基、(C1-C8)-烷氧基羰基、氨基甲酰基、N–(C1-C8)-烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C1-C8)-烷基氨基甲酰基或(C7-C11)-芳烷基氨基甲酰基,其任选地被以下取代:氟、氯、溴、三氟甲基、(C1-C6)-烷氧基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰基、N–(C3-C8)-环烷基-(C1-C4)-烷基氨基甲酰基、(C1-C6)-烷基羰氧基、苯基、苄基、苯氧基、苄氧基、NRYRZ,其中RY和RZ独立地选自氢、(C1-C12)-烷基、(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C7-C12)-芳烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C8)-烷基、(C3-C10)-环烷基、(C3-C12)-链烯基、(C3-C12)-炔基、(C6-C12)-芳基、(C7-C11)-芳烷基、(C1-C12)-烷氧基、(C7-C12)-芳烷氧基、(C1-C12)-烷基羰基、(C3-C8)-环烷基羰基、(C6-C12)-芳基羰基、(C7-C16)-芳烷基羰基;或进一步其中RY与RZ一起是–[CH2]h,其中CH2基团可以被O、S、N–(C1-C4)-烷基羰基亚氨基或N–(C1-C4)-烷氧基羰基亚氨基取代,并且h为3至7;苯基巯基、苯基磺酰基、苯基亚磺酰基、氨磺酰基、N–(C1-C8)-烷基氨磺酰基或N,N-二-(C1-C8)-烷基氨磺酰基;或可选择的是,R7与R8、R3与R9、R9与R10或R10与R11一起是选自–[CH2]n–或–CH=CH–CH=CH–的链,其中链的CH2基任选地被O、S、SO、SO2或NRY取代;并且n为3、4或5;和如果E是杂芳基,则所述基可以携带1-3个选自针对R7-R11定义的那些的取代基,或如果E是环烷基,则该基可以携带一个选自针对R7-R11定义的那些的取代基;
或其中,如果Q是NR',则可选择的是R4为R”,其中R'和R”相同或不同并且为氢、(C6-C12)-芳基、(C7-C11)-芳烷基、(C1-C8)-烷基、(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C7-C12)-芳烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C8)-烷基、(C1-C10)-烷基羰基、任选取代的(C7-C16)-芳烷基羰基或任选取代的(C6-C12)-芳基羰基;或R'和R”一起为–[CH2]h,其中CH2基可以被O、S、N-酰基亚氨基或N–(C1-C10)-烷氧基羰基亚氨基取代,并且h为3至7。
Y是N或CR3;
R1、R2和R3为相同或不同并且为氢、羟基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基、羧基、(C1-C20)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C12)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C12)-烷氧基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C12)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C12)-烷氧基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C8)-烷基-(C1-C6)-烷氧基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)–烷氧基、(C6-C12)-芳基、(C7-C16)-芳烷基、(C7-C16)-芳链烯基、(C7-C16)-芳炔基、(C2-C20)-链烯基、(C2-C20)-炔基、(C1-C20)-烷氧基、(C2-C20)-烯氧基、(C2-C20)-炔氧基、视黄基氧基、(C1-C20)-烷氧基-(C1-C12)-烷基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C6)-烷氧基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C1-C6)-烷氧基、(C1-C16)-羟烷基、(C6-C16)-芳氧基-(C1-C8)-烷基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C7-C12)-芳烷基氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C2-C20)-烯氧基-(C1-C6)-烷基、(C2-C20)-炔氧基-(C1-C6)-烷基、视黄基氧基-(C1-C6)-烷基、–O–[CH2]xCfH(2f+1-g)–Fg、–OCF2Cl、–OCF2–CHFCl、(C1-C20)-烷基羰基、(C3-C8)-环烷基羰基、(C6-C12)-芳基羰基、(C7-C16)-芳烷基羰基、肉桂酰基、(C2-C20)-链烯基羰基、(C2-C20)-炔基羰基、(C1-C20)-烷氧基羰基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰基、(C6-C12)-芳氧基羰基、(C7-C16)-芳烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷氧基羰基、(C2-C20)-烯氧基羰基、视黄基氧基羰基、(C2-C20)-炔氧基羰基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C1-C12)-烷基羰氧基、(C3-C8)-环烷基羰基氧基、(C6-C12)-芳基羰氧基、(C7-C16)-芳烷基羰氧基、肉桂酰氧基、(C2-C12)-链烯基羰氧基、(C2-C12)-炔基羰氧基、(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C6-C12)-芳氧基羰氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基羰氧基、(C3-C8)-环烷氧基羰氧基、(C2-C12)-烯氧基羰氧基、(C2-C12)-炔氧基羰氧基、氨基甲酰基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰基、N,N-二环-(C3-C8)-烷基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰基、N–((C3-C8)-环烷基-(C1-C6)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C6)-烷基-N–((C3-C8)-环烷基-(C1-C6)-烷基)-氨基甲酰基、N-(+)-去氢枞基氨基甲酰基、N–(C1-C6)-烷基-N-(+)-去氢枞基氨基甲酰基、N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C16)-芳基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–((C1-C18)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–((C6-C16)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基;CON(CH2)h,其中CH2基可以被O、S、N–(C1-C8)-烷基亚氨基、N–(C3-C8)-环烷基亚氨基、N–(C3-C8)-环烷基-(C1-C4)-烷基亚氨基、N–(C6-C12)-芳基亚氨基、N–(C7-C16)-芳烷基亚氨基、N–(C1-C4)-烷氧基-(C1-C6)-烷基亚氨基取代,并且h为3-7;式R的氨基甲酰基
其中
Rx和Rv各自独立地选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、芳基或L-和D-氨基酸所属的α-氨基酸的α-碳的取代基,
s为1-5,
T是OH或NR*R**,并且R*、R**和R***为相同或不同并且选自氢、(C6-C12)-芳基、(C7-C11)-芳烷基、(C1-C8)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(+)-去氢枞基、(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C7-C12)-芳烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C8)-烷基、(C1-C10)-烷酰基,任选取代的(C7-C16)-芳烷酰基、任选取代的(C6-C12)-芳酰基;或R*和R**一起为–[CH2]h,其中CH2基可以被以下取代:O、S、SO、SO2、N-酰氨基、N–(C1-C10)-烷氧基羰基亚氨基、N–(C1-C8)-烷基亚氨基、N–(C3-C8)-环烷基亚氨基、N–(C3-C8)-环烷基-(C1-C4)-烷基亚氨基、N–(C6-C12)-芳基亚氨基、N–(C1-C16)-芳烷基亚氨基、N–(C1-C4)-烷氧基-(C1-C6)-烷基亚氨基,并且h为3-7;
氨基甲酰氧基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N,N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰氧基、N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–((C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰氧基氨基、(C1-C12)-烷基氨基、二-(C1-C12)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷基氨基、(C3-C12)-链烯基氨基、(C3-C12)-炔基氨基、N–(C6-C12)-芳基氨基、N–(C7-C11)-芳烷基氨基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳基氨基、(C1-C12)-烷氧基氨基、(C1-C12)-烷氧基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷酰氨基、(C3-C8)-环烷酰胺基、(C6-C12)-芳酰基氨基、(C7-C16)-芳烷酰氨基、(C1-C12)-烷酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C6-C12)-芳酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C7-C11)-芳烷酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷酰氨基-(C1-C8)-烷基、(C3-C8)-环烷酰氨基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳酰基氨基-(C1-C8)-烷基、(C7-C16)-芳烷酰氨基-(C1-C8)-烷基、氨基-(C1-C10)-烷基、N–(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、N,N-二-(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-环烷基氨基(C1-C10)-烷基、(C1-C20)-烷基巯基、(C1-C20)-烷基亚磺酰基、(C1-C20)-烷基磺酰基、(C6-C12)-芳巯基、(C6-C12)-芳基亚磺酰基、(C6-C12)-芳基磺酰基、(C7-C16)-芳烷基巯基、(C7-C16)-芳烷基亚磺酰基、(C7-C16)-芳烷基磺酰基、(C1-C12)-烷基巯基-(C1-C6)-烷基、(C1-C12)-烷基亚磺酰基-(C1-C6)-烷基、(C1-C12)-烷基磺酰基-(C1-C6)-烷基、(C6-C12)-芳巯基-(C1-C6)-烷基、(C6-C12)-芳基亚磺酰基-(C1-C6)-烷基、(C6-C12)-芳基磺酰基-(C1-C6)-烷基、(C7-C16)-芳烷基巯基-(C1-C6)-烷基、(C7-C16)-芳烷基亚磺酰基-(C1-C6)-烷基、(C7-C16)-芳烷基磺酰基-(C1-C6)-烷基、氨磺酰基、N–(C1-C10)-烷基氨磺酰基、N,N-二-(C1-C10)-烷基氨磺酰基、(C3-C8)-环烷基氨磺酰基、N–(C6-C12)-芳基氨磺酰基、N–(C7-C16)-芳烷基氨磺酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C12)-芳基氨磺酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨磺酰基、(C1-C10)-烷基亚磺酰氨基、N–((C1-C10)-烷基)-(C1-C10)-烷基亚磺酰氨基、(C7-C16)-芳烷基亚磺酰氨基和N–((C1-C10)-烷基-(C7-C16)-芳烷基亚磺酰氨基;其中芳基可以被1-5个选自以下的取代基取代:羟基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基,羧基、(C2-C16)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C12)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C12)-烷氧基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C12)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C12)-烷氧基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C8)-烷基-(C1-C6)-烷氧基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)–烷氧基、(C6-C12)-芳基、(C7-C16)-芳烷基、(C2-C16)-链烯基、(C2-C12)-炔基、(C1-C16)-烷氧基、(C1-C16)-烯氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C6)-烷氧基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C1-C6)-烷氧基、(C1-C8)-羟烷基、(C6-C16)-芳氧基-(C1-C8)-烷基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、(C7-C12)-芳烷基氧基-(C1-C8)-烷氧基-(C1-C6)-烷基、–O–[CH2]xCfH(2f+1-g)Fg、–OCF2Cl、–OCF2–CHFCl、(C1-C12)-烷基羰基、(C3-C8)-环烷基羰基、(C6-C12)-芳基羰基、(C7-C16)-芳烷基羰基、(C1-C12)-烷氧基羰基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰基、(C6-C12)-芳氧基羰基、(C7-C16)-芳烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷氧基羰基、(C2-C12)-烯氧基羰基、(C2-C12)-炔氧基羰基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C7-C16)-芳烷氧基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C3-C8)-环烷氧基-(C1-C6)-烷氧基羰基、(C1-C12)-烷基羰氧基、(C3-C8)-环烷基羰基氧基、(C6-C12)-芳基羰氧基、(C7-C16)-芳烷基羰氧基、肉桂酰氧基、(C2-C12)-链烯基羰氧基、(C2-C12)-炔基羰氧基、(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基羰氧基、(C6-C12)-芳氧基羰氧基、(C7-C16)-芳烷基氧基羰氧基、(C3-C8)-环烷氧基羰氧基、(C2-C12)-烯氧基羰氧基、(C2-C12)-炔氧基羰氧基、氨基甲酰基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰基、N,N-二环-(C3-C8)-烷基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰基、N–((C3-C8)-环烷基-(C1-C6)-烷基)氨基甲酰基、N–(C1-C6)-烷基-N–((C3-C8)-环烷基-(C1-C6)-烷基)氨基甲酰基、N-(+)-去氢枞基氨基甲酰基、N–(C1-C6)-烷基-N-(+)-去氢枞基氨基甲酰基、N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C16)-芳基氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰基、N–((C1-C16)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰基、N–((C6-C16)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)-氨基甲酰基、CON(CH2)h,其中CH2基可以被以下取代:O、S、N–(C1-C8)-烷基亚氨基、N–(C3-C8)-环烷基亚氨基、N–(C3-C8)-环烷基-(C1-C4)-烷基亚氨基、N–(C6-C12)-芳基亚氨基、N–(C7-C16)-芳烷基亚氨基、N–(C1-C4)-烷氧基-(C1-C6)-烷基亚氨基,并且h为3-7;氨基甲酰氧基、N–(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N,N-二-(C1-C12)-烷基氨基甲酰氧基、N–(C3-C8)-环烷基氨基甲酰氧基、N–(C6-C16)-芳基氨基甲酰氧基、N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C6-C12)-芳基氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–(C7-C16)-芳烷基氨基甲酰氧基、N–((C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基、N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基、N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基、N–(C1-C16)-烷基-N–((C1-C10)-烷氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C6-C12)-芳氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基、N–(C1-C10)-烷基-N–((C7-C16)-芳烷基氧基-(C1-C10)-烷基)氨基甲酰氧基氨基、(C1-C12)-烷基氨基、二-(C1-C12)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷基氨基、(C3-C12)-链烯基氨基、(C3-C12)-炔基氨基、N–(C6-C12)-芳基氨基、N–(C7-C11)-芳烷基氨基、N-烷基-芳烷基氨基、N-烷基-芳基氨基、(C1-C12)-烷氧基氨基、(C1-C12)-烷氧基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷酰氨基、(C3-C8)-环烷酰氨基、(C6-C12)-芳酰基氨基、(C7-C16)-芳烷酰氨基、(C1-C12)-烷酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C3-C8)-环烷酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C6-C12)-芳酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C7-C11)-芳烷酰基-N–(C1-C10)-烷基氨基、(C1-C12)-烷酰氨基-(C1-C8)-烷基、(C3-C8)-环烷酰氨基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳酰基氨基-(C1-C8)-烷基、(C7-C16)-芳烷酰氨基-(C1-C8)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、N–(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、N,N-二-(C1-C10)-烷基氨基-(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-环烷基氨基-(C1-C10)-烷基、(C1-C12)-烷基巯基、(C1-C12)-烷基亚磺酰基、(C1-C12)-烷基磺酰基、(C6-C16)-芳巯基、(C6-C16)-芳基亚磺酰基、(C6-C16)-芳基磺酰基、(C7-C16)-芳烷基巯基、(C7-C16)-芳烷基亚磺酰基或(C7-C16)-芳烷基磺酰基;
或其中R1与R2或R2与R3形成链[CH2]o,该链[CH2]o是C=C双键饱和或不饱和的,其中1或2个CH2基任选地被O、S、SO、SO2或NR'取代,并且R'是氢、(C6-C12)-芳基、(C1-C8)-烷基、(C1-C8)-烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C7-C12)-芳烷氧基-(C1-C8)-烷基、(C6-C12)-芳氧基-(C1-C8)-烷基、(C1-C10)-烷酰基、任选取代的(C7-C16)-芳烷酰基或任选取代的(C6-C12)-芳酰基;并且o为3、4或5;
或其中基R1和R2或R2和R3与携带它们的吡啶或哒嗪一起形成5,6,7,8-四氢异喹啉环、5,6,7,8-四氢喹啉环或5,6,7,8-四氢噌啉环;
其中R1和R2,或R2和R3形成碳环或杂环的5-或6-元芳香环;
或其中R1和R2,或R2和R3与携带它们的吡啶或哒嗪一起形成任选取代的杂环系统,所述杂环系统选自噻吩并吡啶、呋喃并吡啶、吡啶并吡啶、嘧啶并吡啶、咪唑吡啶、噻唑并吡啶、噁唑并吡啶、喹啉、异喹啉和噌啉;其中喹啉、异喹啉或噌啉优选地满足式IVa、IVb和IVc:
并且取代基R12至R23在每种情况下各自独立地具有R1、R2和R3的含义;
或其中基R1和R2;与携带它们的吡啶一起形成式IVd的化合物:
其中V是S、O或NRk,并且Rk选自氢、(C1-C6)-烷基、芳基或苄基;
其中芳基可以任选地被1-5个如以上定义的取代基取代;和
R24、R25、R26和R27在每种情况下各自独立地具有R1、R2和R3的含义;
f为1-8;
g为0或1-(2f+1);
x为0至3;和
h为3至7;
包括衍生自其的生理学活性盐和前药。
式(IV)的示例性化合物描述于欧洲专利号EP0650960和EP0650961。据此通过引用将在EP0650960和EP0650961中列出的所有化合物,特别是在化合物权利要求和工作实例的最终产物中列出的那些化合物并入本文。
此外,式(IV)的示例性化合物描述于美国专利号5,658,933中。据此通过引用将在美国专利号5,658,933中列出的所有化合物,特别是在化合物权利要求和工作实例的最终产物中列出的那些化合物并入本文。
式(IV)的另外的化合物是描述于美国专利号5,620,995中的取代的杂环羧胺;描述于美国专利号6,020,350中的3-羟基吡啶-2-羧胺酯;描述于美国专利号5,607,954中亚磺酰氨基羰基吡啶-2-羧胺;和描述于美国专利号5,610,172和5,620,996中的亚磺酰氨基羰基-吡啶-2-羧胺和亚磺酰氨基羰基-吡啶-2-羧胺酯。据此通过引用将这些专利中列出的所有化合物,特别是在化合物权利要求和工作实例的最终产物中列出的那些化合物并入本文。
式(IVa)的示例性化合物描述于美国专利号5,719,164和5,726,305。据此通过引用将在前述专利中列出的所有化合物,特别是在化合物权利要求和工作实例的最终产物中列出的那些化合物并入本文。
式(IVb)的示例性化合物描述于美国专利号6,093,730。据此通过引用将在美国专利号6,093,730中列出的所有化合物,特别是在化合物权利要求和工作实例的最终产物中列出的那些化合物并入本文。
在WO2004/108121(U.S.2005/020487)中公开的化合物可以通过式V表示:
或其药学上可接受的盐,其中:
a为1-4的整数;
b为0-4的整数;
c为0-4的整数;
Z选自(C3-C10)-环烷基、用一个或多个Y1独立地取代的(C3-C10)-环烷基、3-10元杂环烷基和用一个或多个Y1独立地取代的3-10元杂环烷基;(C5-C20)-芳基、用一个或多个Y1独立地取代的(C5-C20)-芳基、5-20元杂芳基和用一个或多个Y1独立地取代的5-20元杂芳基;
Ar1选自(C5-C20)-芳基、用一个或多个Y2独立地取代的(C5-C20)芳基、5-20元杂芳基和用一个或多个Y2独立地取代的5-20元杂芳基;
每个Y1独立地选自亲脂性官能团、(C5-C20)-芳基、(C6-C26)-烷芳基、5-20元杂芳基和6-26元烷杂芳基(alk-heteroaryl);
每个Y2独立地选自–R'、–OR'、–OR”、–SR'、–SR”、–NR'R'、–NO2、–CN、-卤素、-三卤甲基、三卤甲氧基、–C(O)R'、–C(O)OR'、–C(O)NR'R'、–C(O)NR'OR'、–C(NR'R')=NOR'、–NR'–C(O)R'、–SO2R'、–SO2R”、–NR'–SO2–R'、–NR'–C(O)–NR'R'、四唑-5-基、–NR'–C(O)–OR'、–C(NR'R')=NR'、–S(O)–R'、S(O)–R”和–NR'–C(S)–NR'R';和
每个R'独立地选自–H、(C1-C8)-烷基、(C2-C8)-链烯基和(C2-C8)-炔基;和
每个R”独立地选自(C5-C20)-芳基和用一个或多个以下基团独立地取代的(C5-C20)-芳基:OR'、–SR'、–NR'R'、–NO2、–CN、卤素或三卤甲基,
或其中c为0和Ar1是N'取代的脲-芳基,该化合物具有结构式(Va):
或其药学上可接受的盐,其中:
a、b和Z如以上定义;和
R35和R36各自独立地选自氢、(C1-C8)-烷基、(C2-C8)-链烯基、(C2-C8)-炔基、(C3-C10)-环烷基、(C5-C20)-芳基、(C5-C20)-取代的芳基、(C6-C26)-烷芳基、(C6-C26)-取代的烷芳基、5-20元杂芳基、5-20元取代的杂芳基、6-26元烷杂芳基和6-26元取代的烷杂芳基;和
R37独立地选自氢、(C1-C8)-烷基、(C2-C8)-链烯基和(C2-C8)-炔基。
在WO2003/053997(U.S.2003/153503)中公开的另外的化合物通过式VI表示:
其中
R28是氢、硝基、氨基、氰基、卤素、(C1-C4)-烷基、羧基或其代谢上不稳定的酯衍生物;(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C1-C6)-烷氧基羰基、(C2-C4)-烷酰基、羟基-(C1-C4)-烷基、氨基甲酰基、N–(C1-C4)-烷基氨基甲酰基、(C1-C4)-烷硫基、(C1-C4)-烷基亚磺酰基、(C1-C4)-烷基磺酰基、苯硫基、苯基亚磺酰基、苯基磺酰基,所述苯基或苯基基团任选地用1-4个相同或不同的卤素取代、(C1-C4)-烷氧基(alkyoxy)、(C1-C4)-烷基、氰基、羟基、三氟甲基、氟-(C1-C4)-烷硫基、氟-(C1-C4)-烷基亚磺酰基、氟-(C1-C4)-烷基磺酰基、(C1-C4)-烷氧基-(C2-C4)-烷氧基羰基、N,N-二-[(C1-C4)-烷基]氨基甲酰基-(C1-C4)-烷氧基羰基、(C1-C4)-烷基氨基-(C2-C4)-烷氧基羰基、二-(C1-C4)-烷基氨基-(C2-C4)-烷氧基羰基、(C1-C4)-烷氧基-(C2-C4)-烷氧基-(C2-C4)-烷氧基羰基、(C2-C4)-烷酰氧基-(C1-C4)-烷基或N-[氨基-(C2-C8)-烷基]-氨基甲酰基;
R29是氢、羟基、氨基、氰基、卤素、(C1-C4)-烷基、羧基或其代谢上不稳定的酯衍生物、(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C1-C6)-烷氧基羰基、(C2-C4)-烷酰基、(C1-C4)-烷氧基、羧基-(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷氧基羰基-(C1-C4)-烷氧基、氨基甲酰基、N–(C1-C8)-烷基氨基甲酰基、N,N-二-(C1-C8)-烷基氨基甲酰基、N-[氨基-(C2-C8)-烷基]-氨基甲酰基、N–[(C1-C4)-烷基氨基-(C1-C8)-烷基]-氨基甲酰基、N-[二-(C1-C4)-烷基氨基-(C1-C8)-烷基)]-氨基甲酰基、N-环己基氨基甲酰基、N-[环戊基]-氨基甲酰基、N–(C1-C4)-烷基环己基氨基甲酰基、N–(C1-C4)-烷基环戊基氨基甲酰基、N-苯基氨基甲酰基、N–(C1-C4)-烷基-N-苯基氨基甲酰基、N,N-二苯基氨基甲酰基、N-[苯基-(C1-C4)-烷基]-氨基甲酰基、N–(C1-C4)-烷基-N-[苯基-(C1-C4)-烷基]-氨基甲酰基或N,N-二-[苯基-(C1-C4)-烷基]-氨基甲酰基,所述苯基或苯基基团任选地用1-4个相同或不同的卤素取代,(C1-C4)-烷氧基、(C1-C4)-烷基、氰基、羟基、三氟甲基、N–[(C2-C4)-烷酰基]-氨基甲酰基、N–[(C1-C4)-烷氧基羰基]-氨基甲酰基、N-[氟-(C2-C6)-烷基]-氨基甲酰基、N,N-[氟-(C2-C6)-烷基]-N–(C1-C4)-烷基氨基甲酰基、N,N-[二-氟-(C2-C6)-烷基]氨基甲酰基、吡咯烷-1-基羰基、哌啶羰基、哌嗪-1-基羰基、吗啉羰基,其中所述杂环基团任选地用1-4个以下基团取代:(C1-C4)-烷基、苄基、1,2,3,4-四氢-异喹啉-2-基羰基、N,N-[二-(C1-C4)-烷基]-硫代氨甲酰基、N–(C2-C4)-烷酰氨基或N–[(C1-C4)-烷氧基羰基]-氨基;
R30是氢、(C1-C4)-烷基、(C2-C4)-烷氧基、卤素、硝基、羟基、氟-(C1-C4)-烷基或吡啶基;
R31是氢、(C1-C4)-烷基、(C2-C4)-烷氧基、卤素、硝基、羟基、氟-(C1-C4)-烷基、吡啶基或甲氧基;
R32是氢、羟基、氨基、(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、卤素、(C1-C4)-烷氧基-(C2-C4)-烷氧基、氟-(C1-C6)-烷氧基、吡咯烷-1-基、哌啶基、哌嗪-1-基或吗啉基,其中所述杂环基团任选地用1-4个相同或不同的(C1-C4)-烷基或苄基取代;和
R33和R34单独地选自氢、(C1-C4)-烷基和(C1-C4)-烷氧基;
包括衍生自其的药学上可接受的盐和前药。
公开于WO2005/034929、WO2005/007192、WO2004/108121(U.S.2005/020487)、WO2003/053997(U.S.2003/153503)和WO2003/049686(U.S.2003/176317)中的示例性化合物包括[(7-氯-3-羟基-喹啉-2-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;4-氧代-1,4-二氢-[1,10]菲咯啉-3-羧酸、[(3-羟基-6-异丙氧基-喹啉-2-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-7-三氟甲基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;4-羟基-5-甲氧基-[1,10]菲咯啉-3-羧酸乙醚;[(7-氯-3-羟基-喹啉-2-羰基)-氨基]-乙酸、钠盐;3-{[4-(3,3-二苄基-脲基)-苯磺酰基]-[2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-氨基}-N-羟基-丙酰胺;[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-6-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[1-氯-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-溴-4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;[(1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸;3-羧基-5-羟基-4-氧代-3,4-二氢-菲咯啉;3-羧基-5-甲氧基-4-氧代-3,4-二氢-1,10-菲咯啉;5-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢-[1,10]菲咯啉-3-羧酸乙酯;5-甲氧基-4-氧代-1,4-二氢-[1,10]菲咯啉-3-羧酸;3-羧基-8-羟基-4-氧代-3,4-二氢-1,10-菲咯啉;[(3-羟基-吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸;[(3-甲氧基-吡啶-2-羰基)-氨基]-乙酸;3-甲氧基-吡啶-2-羧酸N-(((十六烷氧基)-羰基)-甲基)-酰胺盐酸盐;3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((1-辛氧基)-羰基)-甲基)-酰胺;3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((己氧基)-羰基)-甲基)-酰胺;3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((丁氧基)-羰基)-甲基)-酰胺;3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((2-壬氧基)-羰基)-甲基)-酰胺消旋物;3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((庚氧基)-羰基)-甲基)-酰胺;3-苄氧基吡啶-2-羧酸N-(((辛氧基)-羰基)-甲基)-酰胺;3-苄氧基吡啶-2-羧酸N-(((丁氧基)-羰基)-甲基)-酰胺;5-(((3-(1-丁氧基)-丙基)-氨基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-((苄氧基羰基)-甲基)-酰胺;5-(((3-(1-丁氧基)-丙基)-氨基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((1-丁氧基)羰基)-甲基)-酰胺;5-(((3-十二烷氧基)-丙基)氨基)-羰基)-3-甲氧基吡啶-2-羧酸N-(((苄氧基)-羰基)-甲基)-酰胺;N-((6-(1-丁氧基)-3-羟基喹啉-2-基)-羰基)-甘氨酸;[(3-羟基-6-三氟甲氧基-喹啉-2-羰基)-氨基]-乙酸;N-((6-氯-3-羟基喹啉-2-基)-羰基)-甘氨酸;N-((7-氯-3-羟基喹啉-2-基)-羰基)-甘氨酸;[(6-氯-3-羟基-喹啉-2-羰基)-氨基]-乙酸;N-((1-氯-4-羟基-7-(2-丙氧基)异喹啉-3-基)-羰基)-甘氨酸-;N-((1-氯-4-羟基-6-(2-丙氧基)异喹啉-3-基)-羰基)-甘氨酸;N-((1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基)-乙酸;N-((1-氯-4-羟基-7-甲氧基异喹啉-3-基)-羰基)-甘氨酸;N-((1-氯-4-羟基-6-甲氧基异喹啉-3-基)-羰基)-甘氨酸;N-((7-丁氧基)-1-氯-4-羟基异喹啉-3-基)-羰基)-甘氨酸;N-((6-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基)-乙酸;((7-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基)-乙酸甲酯;N-((7-苄氧基-1-氯-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基)-乙酸;N-((8-氯-4-羟基异喹啉-3-基)-羰基)-甘氨酸;N-((7-丁氧基-4-羟基-异喹啉-3-羰基)-氨基)-乙酸;6-环己基-1-羟基-4-甲基-1H-吡啶-2-酮;7-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-苯巯基甲基-喹啉-8-醇;4-硝基-喹啉-8-醇;5-丁氧基甲基-喹啉-8-醇;3-{{4-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-苯磺酰基}-[2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-氨基}-N-羟基-丙酰胺;3-{{4-[3-(1,2-二苯基-乙基)-脲基]-苯磺酰基}-[2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-氨基}-N-羟基-丙酰胺;和其药学上可接受的盐、酯以及前药。
在其它实施方案中,PHI选自如在U.S.2010/0204226中公开的喹啉唑酮化合物,其通过式VII表示:
其中:
n为0-3;
R1是独立地选自以下的成员:卤素、–(C1-C4)-烷基、–(C1-C4)-炔基、任选地用卤素取代的–(C1-C4)-链烯基、–CF3、–OCF3、–SCF3、S(O)CF3、–C(O)–Rc、–C(O)N–Rc、–OH、–NO2、–CN、–O(C1-C4)-烷基、–S(C1-C4)-烷基、–S(O)–C1-C4烷基、–SO2、–(C1-C4)-烷基、–S–Rc、–S(O)–Rc、–SO2–Rc、–SO2N–Rc、–O–Rc、–NRaRb、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯、1H-吲哚、苄基、用一个或多个Rd成员任选取代的二苯基、用一个或多个Rd成员任选取代的苄氧基、用一个或多个Rd成员任选取代的苯基或单环杂芳基、用一个或多个Rd成员任选取代的–(C3-C8)-环烷基、用一个或多个Rc成员任选取代的–(C3-C8)-杂环烷基,并且两个相邻的R1基团可以连接以形成任选地包含一个或多个O、S或N的任选取代的3-8元环;
Ra和Rb独立地选自H、(C1-C4)-烷基、–C(O)(C1-C4)-烷基、–C(O)–Rc、–C(O)NH–Rc、–SO2–Rc、–SO2–(C1-C4)-烷基、用Rd任选取代的苯基、用Rd任选取代的苄基或用Rd任选取代的单环杂芳基环;或
Ra和Rb可以与它们连接的氮结合在一起以形成包含一个或多个O、S或N的任选取代的单环杂环烷基;
Rc是独立地选自以下的成员:–(C3-C8)-环烷基、–(C3-C8)-杂环烷基、二苯基、用一个或多个Rd成员任选取代的苯基、用Rd任选取代的苄基、萘基、茚满基、5,6,7,8-四氢-萘基,和用一个或多个Rd成员任选取代的吡啶基;
Rd是独立地选自以下的成员:–H、卤素、–OH、–(C1-C4)-烷基、–SO2–(C1-C4)-烷基、–CN或–CF3、–OCF3、–O(C1-C4)-烷基、–C(O)NH2、–O-苯基和–O-苄基;和
其对映体、非对映异构体、消旋物和药学上可接受的盐。
式VII的化合物的一些实施方案具有以下中的任一个或多个:
R1是独立地选自以下的成员:卤素、–(C1-C4)-烷基、–OCF3、–CF3、–OH、–NO2、–CN、–O(C1-C4)-烷基、–S(C1-C4)-烷基、–S(O)–(C1-C4)-烷基、–SO2–(C1-C4)-烷基、–S–Rc、–S(O)–Rc、–SO2–Rc、–O–Rc、–NRaRb、用Rd任选取代的苄氧基、用一个或多个Rd成员任选取代的苯基或单环杂芳基,以及任选地包含O、S或N的–(C3-C8)-环烷基,其中所述–(C3-C8)-环烷基任选地用Rd取代;
两个相邻的R1基团连接以形成任选地包含一个或多个O、S或N的芳香族3-8元环;
两个相邻的R1基团连接以形成包含一个或多个O、S或N的任选取代的3-8元环;
n为1、2或3;
–RaRb是独立地选自以下的成员:–H、–CH3、–CH2CH3、苯甲酰基、2,6-二甲基苯甲酰基、乙酰基、–C(O)NH-苯基、苯磺酰基、甲磺酰基、苄基、2-甲基苄基、2-氯苄基、2,6-二甲基苄基、2,6-二氟苄基、2-氰基苄基、3-氰基苄基、3-氨基甲酰基-苄基、2,6-二氯苄基、3-氯苄基和4-甲基苄基;
Ra和Rb可以与它们连接的氮结合在一起以形成任选取代的N-甲基哌嗪-1-基、3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基、哌啶基、吗啉-4-基和吡咯烷基;
Rc是独立地选自以下的成员:苯基、环己基、4-叔丁基-苯基、3,4-二甲氧基-苯基、2,6-二甲基-苯基、3,4,5-三甲氧基-苯基、萘-1-基、3-氯-苯基、4-氯-苯基、3-甲氧基-苯基、4-氟-苯基、2-氟-苯基、3-氟-苯基、3,5-二-叔丁基-苯基、4-氧代-6-间甲苯基、4-氧代-6-邻甲苯基、2,6-二氯-苯基、2,4-二氯-苯基、2,5-二氯-苯基、4-甲氧基-苯基、2,6-二甲基-苯基、萘-2-基、5,6,7,8-四氢-萘-1-基、4-氯-苯基、对甲苯基、茚满-5-基、2,3-二氯-苯基和吡啶-3-基;
Rd是独立地选自以下的成员–H、氯、氟、溴、碘、–(C1-C4)-烷基、–CF3、–OCF3、–O(C1-C4)-烷基、苯基、–O-苯基或–O-苄基;和
R1独立地选自氯、氟、溴、碘、–NO2、–OH、–CF3、–CH3、–CH2CH3、–CH2CH2CH3、–OCF3、–OCH3、–OCH2CH3、–SCH3、–SCF3、–S(O)CF3、–SO2CH3、–NH2、–N(CH3)2、–NH(CH2CH3)、氰基、异丙氧基、异丙基、仲丁基、叔丁基、乙炔基、1-氯-乙烯基、4-甲基-哌嗪基、吗啉-4-基、吡咯烷基、吡咯烷-1-羰基、哌啶基、苯基、苄基、二苯基、甲苯基、苯氧基、环丙基、环己基、苯巯基、3,4-二甲氧基-苯巯基、4-叔丁基-苯巯基、7-哌啶基、2,6-二甲基-苯氧基、3,4,5-三甲氧基-苯氧基、萘-1-基氧基、萘-2-基氧基、5,6,7,8-四氢-萘-1-基氧基、茚满-5-基氧基、3-氯苯氧基、4-氯苯氧基、2,3-二氯-苯氧基、3-甲氧基-苯氧基、4-氟苯氧基、2-氟苯氧基、3-氟苯氧基、3,5-二-叔丁基-苯氧基、3-甲基苯氧基、2,6-二氯-苯氧基、2,5-二氯苯氧基、4-甲氧基苯氧基、吡啶-3-基氧基、四氢-吡喃-4-基、3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基、7-溴-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基、3-甲氧基苯基-哌啶基和苯磺酰基。
在又一个实施方案中,PHI选自如例如在U.S.2011/0046132中公开的苯并咪唑化合物,通过引用将其整体并入本文中。在代表性实例中,所述苯并咪唑化合物通过式VIII表示:
其中:
n为2-4;
每个R1独立地选自H、卤素、–(C1-C4)-烷基、–(C3-C8)-环烷基-(C1-C4)-全卤烷基、三氟(C1-C4)-烷氧基、–OH、–NO2、–CN、CO2H、–O(C1-C4)-烷基、–S(C1-C4)-烷基、–S((C1-C4)-烷基)-Rc、–S(O)2((C1-C4)-烷基)-Rc、–S(O)–(C1-C4)-烷基、–SO2–(C1-C4)-烷基、–S–Rc、–S(O)–Rc、–SO2–Rc、–SO2–NH–Rc、–O–Rc、–CH2–O–Rc、–C(O)NH–Rc、–NRaRb、用Rd任选取代的苄氧基、用Rd任选取代的苯基或单环杂芳基、任选地包含一个或多个O、S或N的–(C3-C8)-环烷基,其中所述–(C3-C8)-环烷基任选地用Rd取代,并且两个相邻的R1基团可以连接以形成任选地包含一个或多个O、S或N的任选取代的3-8元环;
Ra和Rb各自独立地为H、C1-4烷基、–C(O)(C1-C4)-4烷基、–C(O)–Rc、–C(O)CH2–Re、(C1-C4)-烷基-Re、–SO2–Rc、–SO2–(C1-C4)-烷基、用Rd任选取代的苯基、用Rd任选取代的苄基或用Rd任选取代的单环杂芳基环;或
Ra和Rb可以与它们连接的氮结合在一起以形成任选地包含一个或多个杂原子的任选取代的单环杂环烷基环;
Rc是–(C3-C8)-环烷基、用Rd任选取代的苯基、用Rd任选取代的苄基或用Rd任选取代的单环杂芳基环;
Rd独立地为–H、卤素、–OH、–(C1-C4)-烷基或–(C1-C4)-全卤烷基、三氟(C1-C4)-烷氧基、–O(C1-C4)-烷基、–O-苯基或–O-苄基;
Re是任选地包含一个或多个O、S或N的–(C3-C8)-杂环烷基;R2和R3均是H、–CF3或(C1-C3)-烷基;每个Z是C或N,条件是不超过两个Z's可以同时是N;和
其对映体、非对映异构体、消旋物和药学上可接受的盐。
式VIII的化合物的一些实施方案具有以下中的任一个或多个:
R2和R3各自为是–H;
R1独立地选自H、卤素、–CF3、–OCF3、苯基(被高达三个–CF3、卤素、–OH、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基和–OCF3任选取代或未被取代)、苯氧基(被高达三个卤素、(C1-C4)-4烷基、(C1-C4)-烷氧基和–OCF3任选取代或未被取代)、苄氧基-苯基(被高达三个卤素任选取代或未被取代)、苄氧基、苄氧基甲基、苯巯基(被高达三个–(C1-C4)-烷基、卤素、–CF3、–OCF3和–(C1-C4)-烷氧基任选取代或不被取代)、苄基巯基(被高达三个卤素、(C1-C4)-烷基、(C3-C8)-环烷基甲基、–CF3和–OCF3任选取代或不被取代)、苯乙基巯基、苯磺酰基(被高达三个(C1-C4)-烷基、(C1-C4)--烷氧基、卤素、–CF3和–OCF3任选取代或不被取代)、苯甲磺酰基(被高达三个(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基、卤素、(C3-C8)-环烷基甲基、–CF3和–OCF3任选取代或不被取代)、苯乙磺酰基、苯亚磺酰基、氰基-二苯基-4-基甲基巯基、氰基-二苯基-4-基甲磺酰基、苯基氨基甲酰基、苄基氨基甲酰基、苄基氨基、苯基氨磺酰基、苯氨基、苯甲酰氨基和苯磺酰氨基;
两个相邻的R1基团连接以形成包含一个或多个O、S或N的任选取代的3-8元环;
所述任选取代的3-8元环是芳香族的;和
每个R1独立地选自H、卤素、–(C1-C4)-烷基、–CF3、–(C3-C8)-环烷基、–OCF3、–(C1-C4)-烷基磺酰基、–(C1-C4)-烷基亚磺酰基、(C1-C4)-烷基巯基、–NO2、–NH2、–NH–(C1-C4)-烷基、–NH–SO2–(C3-C8)-环烷基、–NH–SO2–(C1-C4)-烷基、–NH–C(O)–(C1-C4)-4烷基、–CN、–CO2H、–O(C1-C4)-烷基、–NH–(CH2)2-吗啉、–NH(CO)CH2-吗啉、–NHC(O)–CH2-哌啶、–NHC(O)–CH2–(N-甲基哌嗪)、–NH–(C1-C4)-烷基-吗啉、–S–(CH2)2-吗啉、–C(O)–NH-吗啉、吡咯烷、哌啶和吗啉。
PHI的其它实施方案适合地选自例如在U.S.2011/0077267中公开的吡啶化合物,或其药学上可接受的盐,或其溶剂化物,该吡啶化合物通过式IX表示:
其中部分结构式:
是通过下式中的任一个表示的基团:
R1是(1)氢原子、(2)(C1-C6)-烷基、(3)(C6-C14)-芳基、(4)(C3-C8)-环烷基、(5)(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基或(6)(C3-C8)-环烷基-(C1-C6)-烷基;
R2是(1)氢原子、(2)(C1-C10)-烷基、(3)任选地被相同或不同的1-5个选自下述基团B的取代基取代的(C1-C14)-芳基、(4)任选地被相同或不同的1-5个选自下述基团B的取代基取代的(C3-C8)-环烷基、(5)任选地被相同或不同的1-5个选自下述基团B的取代基取代的(C3-C8)-环链烯基、(6)任选地被相同或不同的1-5个选自下述基团B的取代基取代的杂芳基(其中所述杂芳基除了碳原子以外具有1-6个选自氮原子、氧原子和硫原子的杂原子)、(7)(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基基团(其中(C6-C14)--芳基任选地被相同或不同的1-5个选自下述基团B的取代基取代)或(8)(C3-C8)-环烷基-(C1-C6)--烷基基团(其中(C3-C8)-环烷基任选地被相同或不同的1-5个选自下述基团B的取代基取代);和
R3是(1)氢原子、(2)卤素原子、(3)(C1-C6)-烷基、(4)(C6-C14)-芳基、(5)(C3-C8)-环烷基或(6)(C6-C14)-芳基-(C1-C6)-烷基;和R4和R5各自独立地为(1)氢原子或(2)(C1-C6)-烷基,基团B:(a)卤素原子、(b)(C1-C6)-烷基、(c)(C3-C8)-环烷基、(d)氰基和(e)卤素-(C1-C6)-烷基。
PHI的其它实施方案适合地选自如在美国专利号8324208中公开的嘧啶基化合物,该嘧啶基化合物通过式XI表示
R1和R4各自独立地选自氢、—NR5R6、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C10)-烷基、(C5-C8)-环链烯基、(C5-C8)-环链烯基-(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-杂环烷基、(C3-C8)-杂环烷基-(C1-C10)-烷基、芳基、芳基-(C1-C10)-烷基、杂芳基和杂芳基-(C1-C10)-烷基;
R2是—NR7R8或—OR9;
R3是H或(C1-C4)-烷基;
其中R5和R6各自独立地选自氢、(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-环烷基-(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-杂环烷基、(C3-C8)-杂环烷基-(C1-C10)-烷基、芳基、芳基-(C1-C10)-烷基、杂芳基、杂芳基-(C1-C10)-烷基、—C(O)C1-C4烷基、—C(O)C3-C6环烷基、—C(O)C3-C6杂环烷基、—C(O)芳基、—C(O)杂芳基和—S(O)2(C1-C4)-烷基,或当R5和R6连接到相同氮原子时,R5和R6与它们连接的氮结合在一起以形成任选地包含选自氧、氮和硫的另外的杂原子的5-或6-或7-元饱和的环,
R7和R8各自独立地选自氢、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-杂环烷基、芳基和杂芳基,和R9是H或阳离子,或未被一个或多个取代基取代或被一个或多个取代基,适合地1-6个取代基,适合地1-3个取代基取代的(C1-C10)-烷基,所述取代基独立地选自(C3-C6)-环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基;
X是O或S;和
Y是O或S;
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9的任何碳或杂原子未被取代或其中可能被一个或多个取代基,适合地1-6个取代基,适合地1-3个取代基取代,所述取代基独立地选自(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-卤代烷基、卤素、—OR10、—NR5R6、氧代、氰基、硝基、—C(O)R10、—C(O)OR10、—SR10、—S(O)R10、—S(O)2R10、—NR5R6、—CONR5R6、—N(R5)C(O)R10、—N(R5)C(O)OR10、—OC(O)NR5R6、—N(R5)C(O)NR5R6、—SO2NR5R6、—N(R5)SO2R10、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基、(C3-C6)-环烷基、(C3-C6)-杂环烷基、芳基、(C1-C6)-烷基-芳基、杂芳基和(C1-C6)-烷基-杂芳基、其中R5和R6与以上定义相同和R10选自氢、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基、—C(O)(C1-C4)-烷基、—C(O)芳基、—C(O)杂芳基、—C(O)(C3-C6)-环烷基、—C(O)(C3-C6)-杂环烷基、—S(O)2(C1-C4)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-杂环烷基、(C6-C14)-芳基、芳基-(C1-C10)-烷基、杂芳基和杂芳基-(C1-C10)-烷基;和/或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
PHI的其它实施方案适合地选自如在美国专利号7811595中公开的吡啶化合物,该吡啶化合物通过式XII表示:
其中R和R1独立地为:i)氢;ii)取代或未被取代的苯基;或iii)取代或未被取代的杂芳基;所述取代基是:i)(C1-C4)-线性、分支或环烷基;ii)(C1-C4)-线性、分支或环烷氧基;iii)(C1-C4)-线性、分支或环卤代烷基;iv)卤素;v)—CN;vi)—NHC(O)R4vii)—C(O)NR5aR5b;或viii)杂芳基;或ix)两个取代基结合在一起以形成具有5-7个原子的稠环;
R4是(C1-C4)-线性、分支或环烷基;
R5a和R5b独立地为:i)氢;ii)C1-C4线性、分支或环烷基;或iii)R5a和R5b结合在一起以形成具有3-7个原子的环;
R2是:i)—OR6;或ii)—NR7aR7b;
R6是氢或(C1-C4)-线性、分支或环烷基;
R7a和R7b独立地为:i)氢;或ii)(C1-C4)-线性、分支或环烷基;或iii)R7a和R7b结合在一起以形成具有3-7个环原子的环;R3是氢、甲基或乙基;
L是具有式:-[C(R8aR8b)]n-的连接单位;
R8a和R8b各自独立地为氢、甲基或乙基;
指数n为1-3;和
R9是氢或甲基;或其药学上可接受的盐;条件是R和R1不都是氢。
PHI的其它适合的实施方案选自在美国专利号7608621中公开的化合物,所述化合物通过式XIII表示:
R1选自氢、—NR5R6、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、C2-C10)-炔基、(C3-C8)-环烷基、(C1-C10)-烷基-(C3-C8)-环烷基、(C5-C8)-环链烯基、(C1-C10)-烷基-(C5-C8)-环链烯基、(C3-C8)-杂环烷基、(C1-C10)-烷基-(C3-C8)-杂环烷基、芳基、(C1-C10)-烷基-芳基、杂芳基和(C1-C10)-烷基-杂芳基;
R4选自氢、COOR9、CONR7R8、—NR5R6、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基、(C3-C8)-环烷基、(C1-C10)-烷基-(C3-C8)-环烷基、(C5-C8)-环链烯基、(C1-C10)-烷基-(C5-C8)-环链烯基、(C3-C8)-杂环烷基、(C1-C10)-烷基-(C3-C8)-杂环烷基、芳基、(C1-C10)-烷基-芳基、杂芳基和(C1-C10)-烷基-杂芳基;
R2是—NR7R8或—OR9;
R3是H或(C1-C4)-烷基;
R5和R6各自独立地选自氢、(C1-C10)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C1-C10)-烷基-(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-杂环烷基、(C1-C10)-烷基-(C3-C8)-杂环烷基、芳基、(C1-C10)-烷基-芳基、杂芳基、(C1-C10)-烷基-杂芳基、—CO((C1-C4)-烷基)、—CO((C3-C6)-环烷基)、—CO((C3-C6)-杂环烷基)、—CO(芳基)、—CO(杂芳基)和—SO2((C1-C4)-烷基);或R5和R6与它们连接的氮结合在一起形成任选地包含选自氧、氮和硫的另外一个杂原子的5-或6-或7-元饱和的环;
R7和R8各自独立地选自氢、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-杂环烷基、芳基和杂芳基;
R9是H或阳离子,或未被取代或被一个或多个取代基取代的C1-C10烷基,所述取代基独立地选自(C3-C6)-环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基;
并且其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9的任何任何碳或杂原子未被取代或其中可能被独立地选自以下的一个或多个取代基取代:(C1-C6)-烷基、芳基、杂芳基、卤素、—OR10、—NR5R6、氰基、硝基、—C(O)R10、—C(O)OR10、—SR10、—S(O)R10、—S(O)2R10、—NR5R6、—CONR5R6、—N(R5)C(O)R10、—N(R5)C(O)OR10、—OC(O)NR5R6、—N(R5)C(O)NR5R6、—SO2NR5R6、—N(R5)SO2R10、(C1-C10)-链烯基、(C1-C10)-炔基、(C3-C6)-环烷基、(C3-C6)-杂环烷基、芳基和杂芳基;其中R5和R6与如以上定义的相同和R10是氢、(C1-C10)-烷基、(C2-C10)-链烯基、(C2-C10)-炔基、—CO((C1-C4)-烷基)、—CO(芳基)、—CO(杂芳基)、—CO((C3-C6)-环烷基)、—CO((C3-C6)-杂环烷基)、—SO2((C1-C4)-烷基)、(C3-C8)-环烷基、(C3-C8)-杂环烷基、(C6-C14)-芳基、(C1-C10)-烷基-芳基、杂芳基或(C1-C10)-烷基-杂芳基;
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
其它PHI包括但不限于基底基抑制剂,如3-环外亚甲基脯氨酸肽样化合物(exomethyleneprolinepeptidelikecompounds,Tandonetal.(1998)Bioorg.Med.Chem.Lett.8:1139-44)、脯氨酸的衍生物、4(S)羟脯氨酸的衍生物和4-酮脯氨酸(4-ketoproline)的衍生物。此外,鉴于以下事实:PHD多肽的活性是铁、2-氧代戊二酸盐和抗坏血酸依赖性的(KivirikkoandPihlajaniemi(1998)T.AdvEnzymolRelatAreasMolBiol.72:325-98)并且靶向HIF-α的PHD的活性如以上讨论的那些也依赖于这些辅因子(BruickandMcKnight(2001)Science294(5545):1337-40),适合的化合物的实例包括基于辅因子的抑制剂如2-氧代戊二酸盐类似物、抗坏血酸类似物和铁螯合剂如去铁敏(DFO)和低氧模拟性氯化钴(CoCl2),或可以模拟低氧的其它因子。作为适于本发明的目标化合物,还可以是脯氨酰羟化酶抑制剂,如去铁酮、2,2'-二吡啶基、环匹罗司、二甲基乙二酰氨基乙酸(二甲基草酰甘氨酸(dimethyloxallylglycine))(DMOG)、L-含羞草素(Mim)和3-羟基-1,2-二甲基-4(1H)-吡啶酮(OH-吡啶酮)。DMOG是PHD的细胞可渗透的竞争性抑制剂。其作用是,在0.1-1mM的浓度下,在培养的细胞中将HIF-α表达稳定在正常的氧张力下。本发明涵盖的其它PHD抑制剂包括但不限于,酮戊二酸、杂环羧胺、菲咯啉、异羟肟酸盐和杂环羰基甘氨酸(包括但不限于吡啶羧胺、喹啉羧胺、异喹啉羧胺、噌啉羧胺、β咔啉羧胺,包括取代的喹啉-2-羧胺和其酯;取代的异喹啉-3-羧胺和N-取代的芳基磺酰基氨基异羟肟酸(参见例如,WO05/007192、WO03/049686和WO03/053997)等。还感兴趣的是使用现有技术中描述的方法描述或鉴别的化合物,包括美国专利号6,787,326、6,767,705和6,436,654;U.S.2004/0161794、2004/0152655、2004/0146964、2004/0096848、2004/0087556、2003/0229108和2002/0048794;以及WO04/066949、WO04/047852、WO04/043359、WO04/000328、WO03/100438、WO03/085110、WO03/080566、WO03/074560、WO03/049686、WO03/018014、WO02/12326和WO02/074981(各自通过引用并入本文)。
本发明涵盖的作为HIF-α增效剂的其它目标化合物包括,与HIF-1途径相互作用或调节HIF-1途径的化合物。与HIF-1α水平和HIF-1α活性相关的这样的化合物和途径的一般报道公开于Semenza(2003,NatureRev.Cancer721)Ratcliffeetal.(2003,NatureMedicine677)和Woutersetal.(2004,DrugResistanceUpdates25)中(通过引用将其各自整体并入本文)。这样的化合物的说明书实例包括而不限于雷帕霉素(参见,例如,Abraham(2004)CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology279:299-319;Arshametal.(2003)J.BiolChem.278(32),29655-29660)、姜黄色素(参见,例如,Sukhatme,VP.WO03/094904)、菲布他丁(fibrostatin)(参见,例如,Ishimaruetal.(1988)JAntibiotics,41(11):1668-74)、含羞草素(参见,例如,Warneckeetal.(2003)FASEBJ.17(9):1186-1188;Parketal.,WO03/018014;Clementetal.(2002)IntJCancer100(4):491-498)、3羟基,1,2二甲基4-吡啶酮(参见例如,Weidmannetal.,WO97/41103;Weidmannetal.,EP/650961;Iyeretal.(1998)Exp.LungRes.24(1):119-32)、喜树碱(参见,例如,Rapisardaetal.(2002)CancerRes.62(15):4316-4324)、白藜芦醇(参见,例如,Caoetal.,(2004)ClinCancerRes.10(15):5253-63)、类黄铜(参见,例如,Hasebeetal.(2003)BiolPharmBulletin26(10):1379-1383;Fanetal.(2003)EurJPharm.481(1):33-40);Majamaaetal.(1984)EurJBiochem138:239-245;andMajamaaetal.(1985)BiochemJ.229:127-133;KivirikkoandMyllyharju(1998)MatrixBiol16:357-368;Bickeletal.(1998)Hepatology28:404-411;Friedmanetal.(2000)ProcNatlAcadSciUSA97:4736-4741;Franklin(1991)BiochemSocTrans19):812-815;以及Franklinetal.(2001)BiochemJ353:333-338;等(通过引用将其各自整体并入本文)。在一些实施方案中,HIF-α增效剂包括以下化合物或其衍生物或类似物:槲皮素、吡啶2,4-二羧酸二乙酯(2,4-DPD)、二甲基乙二酰氨基乙酸(DMOG)、2-(草酰-氨基)-丙酸、N-草酰甘氨酸(NOG)、[2,2’]二吡啶基,二羟基苯甲酸、吡啶2,4-二羧酸、4-羟基-异喹啉-3-羰基甘氨酸和8-硝基-7-氧代-4a,7,8,10b-四氢-[1,10]菲咯啉-3-羧酸。
此外,已知将HIF-α稳定在含氧量正常的条件下的许多生长因子和细胞因子,包括胰岛素、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、白细胞介素-1β(Zelzeretal.(1998)EMBOJ17:5085-94;Feldseretal.(1999)CancerRes59:3915-8);Richardetal.(2000)JBiolChem275:26765-71;Gorlachetal.(2001)CircRes89:47-54;Haddadetal.(2001)FEBSLett505:269-74;Stiehletal.(2002)FEBSLett512:15-62;Thorntonetal.(2000)BiochemJ350Pt1,307;Hellwig-Burgeletal.(1999)Blood94:1561;Sandauetal.(2001)Blood97:1009;Zhouetal.(2003)AmJPhysiolCellPhysiol284:C439;Zhouetal.(2003)MolBiolCell14:2216;Kasunoetal.(2004)JBiolChem279:2550)(通过引用将其各自整体并入本文)。类似地,报道了将HIF-1α稳定在常氧下的NO和其它某些反应性氧类别(Brune&Zhou(2003)CurrMedChem10(10):845-55;Palmeretal.(2000)MolPharmacol58:1197-203(通过引用将其各自整体并入本文)。适合的是,这样的化合物可以用作开发另外的HIF-α增效剂的潜在先导化合物。
用于衍生其它适合化合物的代表性化合物和一般结构包括以下描述的那些:
用于治疗纤维化疾病的3-羟基吡啶-2-羧胺的制备。Weidmann,Klaus;Baringhaus,Karl-heinz;Tschank,Georg;Bickel,Martin.(HoechstA.-G.,Germany).EP900202A1(通过引用将其整体并入本文)。
低氧诱导性因子-α(HIF-α)稳定剂用于增强红细胞生成的用途Klaus,StephenJ.;Molineaux,ChristopherJ.;Neff,ThomasB.;Guenzler-Pukall,Volkmar;LansetmoParobok,Ingrid;Seeley,ToddW.;Stephenson,RobertC。(Fibrogen,Inc.,USA)。WO2004108121A1(通过引用将其整体并入本文)。
作为脯氨酰-4-羟化酶抑制剂取代的3-羟基喹啉-2-羧胺的制备。Weidmann,Klaus;Baringhaus,Karl-Heinz;Tschank,Georg;Bickel,Martin。(HoechstA.-G.,Germany;FibrogenInc.)。EP765871A1(通过引用将其整体并入本文)。
用于治疗纤维化疾病的吡啶羧胺和相关化合物。Weidmann,Klaus;Baringhaus,Karl-Heinz;Tschank,Georg;Bickel,Martin。(HoechstA.-G.,Germany)。EP673929A1(通过引用将其整体并入本文)。
脯氨酰4-羟化酶的新型抑制剂。5.使用2,2'-二吡啶和其5,5'-二羧酸衍生物观察到的奇妙的结构-活性关系。Hales,NeilJ.;Beattie,JohnF.Infect.Res.Dep.,ZenecaPharm.,Macclesfield/Cheshire,UK.JournalofMedicinalChemistry(1993),36(24),3853-8(通过引用将其整体并入本文)。
脯氨酰4-羟化酶抑制剂在四氯化碳诱导的大鼠肝脏纤维化中的有益效果。Bickel,M.;Baader,E.;Brocks,D.G.;Engelbart,K.;Guenzler,V.;Schmidts,H.L.;Vogel,G.H.HoechstA.-G.,Frankfurt,Germany.JournalofHepatology(1991),13(Suppl.3),S26-S34(通过引用将其整体并入本文)。
通过菲布他丁C(由编号为23924的小串链霉菌灰孢亚种(Streptomycescatenulaesubsp.GriseosporaNo.23924)产生的一种新型抑制剂)抑制脯氨酰羟化酶活性和胶原生物合成。Ishimaru,Takenori;Kanamaru,Tsuneo;Takahashi,Toshiyuki;Okazaki,Hisayoshi.Cent.Res.Div.,TakedaChem.Ind.,Ltd.,Osaka,Japan.JournalofAntibiotics(1988),41(11),1668-74(通过引用将其整体并入本文)。
作为脯氨酸羟化酶抑制剂的MBP039-06及其使用暗球腔菌属(Phaeosphaeria)的制备。Furui,Megumi;Takashima,Junko;Sudo,Keiko;Chiba,Noriko;Mikawa,Takashi。(MitsubishiChemicalIndustriesCo.,Ltd.,Japan)。JP05239023A2(通过引用将其整体并入本文)。
P-1894B的绝对构型,一种有效的脯氨酰羟化酶抑制剂。Ohta,Kazuhiko;Mizuta,Eiji;Okazaki,Hisayoshi;Kishi,Toyokazu.Cent.Res.Div.,TakedaChem.Ind.,Ltd.,Osaka,Japan.Chemical&PharmaceuticalBulletin(1984),32(11),4350-9(通过引用将其整体并入本文)。
用于化妆品、药物和营养品的新型姜黄色素/四氢姜黄色素衍生物的制备。Rieks,Andre;Kaehler,Markus;Kirchner,Ulrike;Wiggenhorn,Kerstin;Kinzer,Mona.(AndreRieks-LaborfuerEnzymtechnologieG.m.b.h.,Germany)。WO04/031122(通过引用将其整体并入本文)。
紫草酸B的药理学综述。Peng,Zonggen;Chen,Hongshan.DepartmentofVirology,InstituteofMedicinalBiotechnology,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing,Peop.Rep.China.ZhongguoYaoxueZazhi(Beijing,China)(2003),38(10),744-747(通过引用将其整体并入本文)。
抑制脯氨酸羟化酶的四环素类和其使用链霉菌属物种的制备Furui,Megumi;Takashima,Junko;Sudo,Keiko;Chiba,Noriko;Sashita,Reiko.(MitsubishiChemicalIndustriesCo.,Ltd.,Japan).JP06339395A2(通过引用将其整体并入本文)。
一种新型脯氨酸羟化酶抑制剂MBP049-13和其使用蛇孢腔菌(Ophiobolus)的制备。Furui,Megumi;Takashima,Junko;Mikawa,Takashi;Yoshikawa,Nobuji;Ogishi,Haruyuki.(MitsubishiKaseiK.K.,Japan).JP04074163A2(各自通过引用并入本文)。
HIF-α包含氧依赖性降解结构域(ODDD),该氧依赖性降解结构域具有N-端部分(NODDD)和C端部分(CODDD)两者。在ODDD中的任意脯氨酰残基处的羟基化将HIF-α亚基靶向vHL蛋白用于降解;因此,阻断vHL与HIF-α的相互作用导致HIF-α的形成。另外,编码HIF-αNODDD或CODDD的肽(参见,例如,U.S.2006/0216295的图,通过引用将其整体并入本文中)能够通过使PHD酶饱和或vHL结合在体外上调HIF调节的转录物(Williametal.(2002)ProcNatlAcadSci.USA99(16):10423-10428),这表明肽治疗可能也是有效的。
一个可选择的策略是通过增加HIF-αmRNA转录而增加HIF-α。在增加HIF-α转录中有用的化合物包括,例如o-取代的氨基甲酰基-苯氧基乙酸,如Aganietal.(1998,MolPharmacol54:749-754)公开的。
本发明不仅涵盖已知的HIF-α增效剂,而且还涵盖通过任何适合的筛选测定鉴别的HIF-α增效剂。因此,本发明扩展至筛选调节剂的方法,所述调节剂用于增强HIF-α,进而增强造血干细胞和/或祖细胞的动员剂的造血功能。在一些实施方案中,筛选方法包括:(1)使制备物与受试药剂接触,其中所述制备物包含(i)多肽,其包含对应于选自PHD(例如,HIF-αPHD)多肽、FIH-1多肽、vHL多肽或这些中的任意一个的变体或衍生物的HIF-α-抑制性相互作用多肽的至少一个片段的氨基酸序列;或(ii)多核苷酸,其包含调节选自PHD基因、FIH-1基因或vHL基因表达的基因序列(例如,转录控制序列)的至少一部分,其中所述基因序列可操作地连接到报道基因;(2)检测多肽的功能活性或报道基因的表达产物的水平相对于在缺乏受试药剂的情况下的参考水平或功能活性的变化。检测到多肽或表达产物的水平或活性相对于参考水平或功能活性的降低,表明受试药剂对于增强造血干细胞和/或祖细胞的动员剂的造血功能是有用的。适合的是,这通过分析或确定受试药剂是否增强造血干细胞和/或祖细胞的动员剂的造血功能来证实。在一些实施方案中,受试药剂抑制PHD的脯氨酰水解酶活性,如通过以下确定:使制备物与受试药剂接触并测量受试药剂是否抑制底物的脯氨酸残基(例如,HIF-α的脯氨酸残基)的羟基化,所述制备物包含(a)多肽,其包含对应于PHD的至少一个片段或其变体或衍生物的氨基酸序列和PHD的底物。在其它实施方案中,受试药剂抑制FIH-1的活性,如通过以下确定的:使制备物与受试药剂接触并测量受试药剂是否增强HIF-1多肽的转录活性,所述制备物包含(i)多肽,其包含对应于FIH-1的至少一个片段或其变体或衍生物的氨基酸序列和(ii)HIF-1多肽。在又一个实施方案中,受试药剂抑制vHL的活性,如通过以下确定的:使制备物与受试药剂接触并测量受试药剂是否降低HIF-α多肽或其片段的降解,所述制备物包含(A)多肽,其包含对应于vHL或其变体或衍生物的至少一个片段的氨基酸序列,和(B)HIF-α多肽或其片段。适合的是,在以上实施方案中,受试药剂可以抑制HIF-α与多肽之间的结合,如通过以下确定的:使包含HIF-α和多肽的制备物与受试药剂接触并测量HIF-α与多肽的结合。在这些实施方案中,受试药剂可以结合到HIF-α或结合到多肽,并且当其降低或取消HIF-α与多肽的结合时,测试为阳性。
落入本发明范围内的调节剂包括:HIF-α-抑制性相互作用多肽(例如,PHDFIH-1或vHL)水平或功能活性的拮抗剂,其包括拮抗抗原结合分子,和抑制剂肽片段、反义分子、核酶、RNAi分子和共抑制分子,以及HIF-α-抑制性相互作用多肽功能的多糖和脂多糖抑制剂。
候选药剂涵盖多种化学类别,尽管通常其是有机分子,优选地分子量大于50道尔顿到小于约2,500道尔顿的小的有机化合物。候选药剂包含对于与蛋白质结构相互作用特别是氢键合必需的功能基团,并且通常包括至少一个胺、羰基、羟基或羧基基团,最好是至少两个功能化学基团。候选药剂通常包含被上述功能基团中的一个或多个取代的环碳或杂环结构或芳香或多芳香结构。候选药剂还在生物分子中发现,所述生物分子包括但不限于:肽、糖、脂肪酸、类固醇、嘌呤、嘧啶、衍生物、结构类似物或它们的组合。
HIF-α-抑制性相互作用多肽的小(非肽)分子调节剂是特别有利的。在这一点上,小分子是令人满意的,原因是这样的分子与更大的蛋白质基药物相比,在口服给药之后更容易被吸收,具有更少的潜在抗原决定簇或更可能穿过细胞膜。有机小分子也可以具有获得进入适合的细胞并影响基因的表达(例如,通过与基因表达涉及的调节区域或转录因子相互作用)的能力;或通过抑制或增强辅助分子的结合影响基因的活性。
可选择的是,可获得的或容易地产生细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物的文库。另外,天然或合成产生的文库和化合物易于通过常规化学、物理和生物化学手段修饰,并且可以用于生成组合文库。抑制的药理学药剂可以经历定向或随机化学修饰,如酰化、烷化、酯化、胺化(amidification)等以生成结构类似物。
筛选可能也涉及抑制药理活性化合物及其化学类似物。
可以通过任何适合的方法实现本发明的调节剂的筛选。例如,所述方法包括:使表达多核苷酸的细胞与疑似具有调节活性的药剂接触,所述多核苷酸对应于编码HIF-α-抑制性相互作用多肽的基因,和筛选HIF-α-抑制性相互作用多肽的水平或功能活性的调节,或由多肽编码的转录物的水平的调节,或多肽或转录物的下游细胞靶(下文中称为靶分子)的活性或表达的调节。可以使用技术实现检测这样的调节,所述技术包括但不限于ELISA、基于细胞的ELISA、抑制ELISA、蛋白质印迹、免疫沉淀、狭线或点渍测定、免疫染色、RIA、闪烁亲近测定法、使用荧光物质如荧光素或若丹明的原结合分子缀合物或抗原缀合物的荧光免疫测定、乌赫特朗尼双向扩散分析、使用抗生物素蛋白-生物素或链霉抗生物素蛋白-生物素检测系统的免疫测定,和包括逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)的核酸检测测定。
应当理解的是,调节或表达HIF-α-抑制性相互作用多肽的多核苷酸可以是为测试主题的细胞中天然存在的,或为了测试目的其可能已经被引入到宿主细胞中。此外,天然存在的或引入的多核苷酸可以组成性地表达-从而提供在筛选下调序列的编码产物的表达的药剂中有用的模型,其中所述下调可以在核酸水平上或在表达产物水平上。此外,就将多核苷酸引入细胞的程度而言,所述多核苷酸可以包含编码HIF-α-抑制性相互作用多肽的全部编码序列,或其可以包含该编码序列的一部分(例如,HIF-α-抑制性相互作用多肽的配体结合域)或调节编码HIF-α-抑制性相互作用多肽的对应基因的表达的部分(例如,PHD启动子、FIH-1启动子或vHL启动子)。例如,可以将与多核苷酸天然相关的启动子引入到为测试主题的细胞。在这种情况下,在仅适用启动子的情况下,可以通过例如将启动子可操作地连接到适合的报道基因多核苷酸来实现检测启动子活性的调节,所述报道基因多核苷酸包括但不限于,绿色荧光蛋白(GFP)、荧光素酶、β-半乳糖苷酶和儿茶酚胺乙酰基转移酶(CAT)。可以通过测量与报道基因多核苷酸相关的活性来确定表达的调节。
这些方法提供了用于进行假定的调节剂如蛋白质或非蛋白质剂的高通量筛选机制,所述调节剂包含合成、组合、化学和天然文库。这些方法还促进了结合编码靶分子的多核苷酸或调节上游分子表达的药剂的检测,所述上游分子随后调节编码靶分子的多核苷酸的表达。因此,这些方法提供了检测直接或间接调节本发明的靶分子的表达或活性的药剂的机制。
在具体实施方案中,筛选羟化酶活性的化合物。羟化酶活性的测定在现有技术中是标准技术。这样的测定可以直接或间接地测量羟化酶活性。例如,测定可以测量存在于酶底物中的羟基化残基(例如,脯氨酸等),所述酶底物例如靶蛋白、合成的肽模拟物或其片段(参见,例如,Palmerinietal.(1985)JChromatogr339:285-292)。在化合物的存在下羟基化的残基(例如,脯氨酸等)的降低指示抑制羟化酶活性的化合物。可选择的是,测定可以测量羟基化反应的其它产物(例如由2-氧代戊二酸盐形成琥珀酸盐(参见,例如,Cunliffeetal.(1986)BiochemJ240:617-619;andKauleandGunzler(1990)AnalBiochem184:291-297)。
可以使用如以上描述的那些程序来鉴别抑制HIF羟化酶活性的化合物。在测定中使用的靶蛋白可以包括HIFα或其片段,例如,HIF(556-575)。酶可以包括例如,获得自任何来源的HIF脯氨酰羟化酶(参见,例如,GenBank登记号AAG33965等)。人HIF脯氨酰羟化酶是优选的。酶也可以存在于粗细胞裂解物或部分纯化形式中。例如,测量HIF羟化酶活性的程序描述于Ivanetal.(2001,Science292:464-468;and2002,ProcNatlAcadSciUSA99:13459-13464)和Hirsilaetal.(2003,JBiolChem278:30772-30780)中;另外的方法描述于国际公布号WO03/049686中。测量并比较在化合物不存在和存在下的酶活性将鉴别抑制HIF-α羟基化的化合物。
在某些方面,适合的化合物是稳定HIF-α的化合物。抑制HIF脯氨酰羟化酶的化合物阻止或降低HIF蛋白的HIFα亚基的羟基化。该羟基化脯氨酸的缺乏导致HIF的稳定化(通常称为活化)。测定HIF通过化合物的稳定化可以用作间接测量化合物抑制HIF脯氨酰羟化酶的能力。化合物稳定或激活HIF-α的能力可以通过以下测量,例如直接测量样品中的HIF-1α,间接测量HIF-1α如通过测量与vHL蛋白相关的HIF-1α的降低(参见,例如,国际公布号WO2000/69908)或激活HIF-1α响应性靶基因或报道基因构建体(参见,例如,美国专利号5,942,434)。测量和比较在化合物不存在和存在下的HIF和/或HIF-响应性靶蛋白的水平,会鉴别稳定HIF-1α和/或激活HIF的化合物。用于本发明方法的适合的化合物可以使用以下测定鉴别和表征,所述测定描述于国际公布号WO2005/118836或描述于国际公布号WO2003/049686中的实施例10中,通过引用将二者整体并入本文中。具体构思了通过这些测定可鉴别的化合物,以用于本发明中。
在可选择的实施方案中,使用以下测定筛选受试药剂,例如U.S.2004/0146964、U.S.2005/0214894、U.S.2008/0213404、U.S.2010/0272726和U.S.20110301095中公开的测定,通过引用将其各自整体并入本文。
可以在动物模型中进一步测试化合物,以鉴别在体内具有最有效的那些化合物。这些分子可以充当用于通过例如使化合物经历连续修饰、分子建模和在合理药物设计中使用的其它常规程序进一步开发药物的“先导化合物”。
3.2造血干细胞和/或祖细胞的动员剂
已经证明,几类药剂通过使祖细胞和干细胞从骨髓中“移动”到外周血液中来增加祖细胞和干细胞的循环。这些包括降低趋化因子,特别是CXCL12的表达或功能的药剂(功能为将趋化因子结合到其受体并进一步信号传导),以及阻遏或拮抗趋化因子受体CXCR4的那些药剂。
因此,在一些实施方案中,动员剂可以是降低趋化因子,更特别是CXCL12,也称为SDF-1的表达或功能的药剂。SDF-1的人氨基酸序列对应于GenBank登记号NP_000600。α同种型具有GenBank登记号NP_954637。β同种型具有GenBank登记号NP_000600。γ同种型具有GenBank登记号NP_001029058。
可选择的是,动员剂可以是阻遏或拮抗趋化因子受体,特别是CXCR4的药剂。CXCR4的人氨基酸序列对应于GenBank登记号CAA12166。
趋化因子是化学引诱物蛋白质的超家族。趋化因子调节许多生物应答,并且其促进将多谱系的白细胞和淋巴细胞招募到身体器官组织。根据蛋白质中的前两个半胱氨酸残基的相对位置,可以将趋化因子分类为两个家族。在一个家族中,前两个半胱氨酸被一个氨基酸残基分开,CXC趋化因子,而在另一个家族中,前两个半胱氨酸相邻,CC趋化因子。两个小亚基仅包含两个半胱氨酸(C)之一或在半胱氨酸之间具有三个氨基酸(CX3C)。在人类中,CXC趋化因子的基因在第4号染色体上聚集(除了SDF-1基因,其已经被定位于第10号染色体),且CC趋化因子的那些基因在第17号染色体上聚集。
趋化因子的分子靶标是细胞表面受体。一种这样的受体是CXC趋化因子受体4(CXCR4),其是偶联到G1的7跨膜蛋白并且之前称为LESTR(Loetscher,M.,Geiser,T.,O'Reilly,T.,Zwahlen,R.,Baggionlini,M.,andMoser,B.,(1994)J.Biol.Chem,269,232-237)、HUMSTR(Federsppiel,B.,Duncan,A.M.V.,Delaney,A.,Schappert,K.,Clark-Lewis,I.,andJirik,F.R.(1993)Genomics16,707-712)和融合素(Feng,Y.,Broeder,C.C.,Kennedy,P.E.,andBerger,E.A.(1996)HIV-1entrycofactor:FunctionalcDNAcloningofaseven-transmembraneGprotein-coupledreceptor,Science272,872-877)。CXCR4广泛表达于造血起源的细胞,并且其与CD4是人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)的主要辅助受体(Feng,Y.,Broeder,C.C.,Kennedy,P.E.,andBerger,E.A.(1996)HIV-1entrycofactor:FunctionalcDNAcloningofaseven-transmembraneGprotein-coupledreceptor,Science272,872-877)。
趋化因子被认为是通过结合到七个跨膜G蛋白偶联的受体而介导其作用,并将白细胞子集吸引到炎症部位(Baglioninietal.(1998)Nature392:565-568)。已经证明,许多趋化因子在淋巴样组织中组成性表达,这表明它们可能在调节淋巴样器官之间和淋巴样器官内的淋巴细胞运输中具有体内稳态功能(KimandBroxmeyer(1999)J.Leuk.Biol.56:6-15)。
基质细胞衍生因子1(SDF-1),也称为CXCL12,是已经发现从骨髓基质中组成性分泌的趋化因子的CXC家族的成员(Tashiro,(1993)Science261,600-602)。人类和小鼠SDF-1的预测蛋白序列大约92%相同。基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)和基质细胞衍生因子-1β(SDF-1β)是紧密相关的(本文统称为SDF-1)。SDF-1α和SDF-1β的天然氨基酸序列是已知的,如同编码这些蛋白的基因组序列一样(参见1996年10月8日授权的美国专利号5,563,048和1998年5月26授权的美国专利号5,756,084)。基因组克隆的鉴定已经显示,α和β同种型是单个基因可选择性剪接的结果。α形式衍生自外显子1-3,而β包含来自外显子4的另外的序列。全部人类基因大约10kb。SDF-1最初被表征为前B细胞刺激因子和B细胞和单核细胞的高效趋化因子(Bleuletal.(1996)J.Exp.Med.184:1101-1110)。
SDF-1的生物作用可以由趋化因子受体CXCR4(也称为融合素或LESTR)介导,该CXCR4表达于包括造血干细胞的单核白细胞。SDF-1被认为是CXCR4的天然配体,并且CXCR4被认为是SDF-1的天然受体(Nagasawzaetal.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:726-732)。SDF-1的基因消除与围生期致死率相关,包括心脏发育异常、B细胞淋巴细胞增殖和骨髓细胞生成(Nagasawaetal.(1996)Nature382:635-637)。SDF-1在功能上与其它趋化因子的不同在于,据报道其在骨髓祖细胞的运输、输出并返回中具有基础作用(Aiuti,A.,etal.(1996)J.Exp.Med.185,111-120和Nagasawa,T.,etal.(1996)Nature382,635-638)。SDF-1还在结构上与其它CXC趋化因子不同,因为其与其他CXC趋化因子仅具有约22%的氨基酸序列同一性。
降低CXCL12的表达或阻遏或拮抗CXCR4的药剂,可以选自有机小分子、多肽、核酸和碳水化合物。在更加具体的实施方案中,降低CXCL12表达的多肽选自细胞因子、集落刺激因子、蛋白酶或除了CXCL12以外的趋化因子。细胞因子可以选自白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-11(IL-11)、白细胞介素-7(IL-7)和白细胞介素-12(IL12)。蛋白酶可以选自金属蛋白酶(如MMP2或MMP9)、丝氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶G或弹性蛋白酶)、半胱氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶K)和二肽基肽酶-1(DDP-1或CD26)。除了CXCL12以外的趋化因子可以选自IL-8、MIP-1α和Groβ。集落刺激因子可以选自粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、干细胞因子、FLT-3配体或它们的组合。核酸可以是DNA或RNA分子。核酸可以是对CXCL12或CXCR4特异性小干扰RNA(siRNA)分子或反义分子。碳水化合物可以是选自岩藻多糖和硫酸化的葡聚糖的硫酸化的糖类。
适合的是,动员剂(或多种动员剂)选自集落刺激因子如G-CSF和GM-CSF,促红细胞生成素(其现在通常用于经受化学治疗的癌症患者中以将血红蛋白维持在接近正常范围内,还具有一些移动CD34+细胞的能力),干细胞因子(SCF),多糖如酵母聚糖,趋化因子如IL-8和Gro-β,生长因子如血管内皮生长因子(VEGF),和CXCR4拮抗剂。
在一些实施方案中,与HIF-α增效剂组合使用的动员剂或动员剂中的至少一种是G-CSF或GM-CSF,或其变体、衍生物或类似物。先前已经公开了G-CSF的核酸序列和编码的氨基酸序列,以及共享其生物化学特性和免疫学特性的化学合成的多肽(美国专利号6,379,661;6,004,548;6,830,705;5,676,941;6,027,720;5,994,518;5,795,968;5,214,132;5,218,092;6,261,550;4,810,643;4,810,321,通过引用将其各自整体并入本文)。还涵盖保留其三维结构的G-CSF分子的类似物和保持其生物和结构完整性的杂合分子,如Osslund描述的(美国专利号6,261,550,通过引用并入本文)。功能性G-CSF变体的实例包括与全长人类G-CSF氨基酸序列或其核苷酸序列具有至少70、75、80、85、90或95%序列同一性或相似性的任何蛋白质、肽或其片段。用于改进功能性或停留血清清除率的G-CSF的修饰包括但不限于聚乙二醇和其聚乙二醇衍生物,糖基化形式(LenogastrimTM)(WO2000/44785,通过引用并入本文)、正亮氨酸类似物(美国专利号5,599,690,通过引用并入本文)、在末端添加氨基酸以改进折叠、稳定性或靶向,和融合蛋白如G-CSF和白蛋白融合蛋白(AlbugraninTM)(美国专利号6,261,250,通过引用并入本文)。生物活性或功能活性相对于天然肽的提高可以降低治疗所需要的剂量和/或期间。还可以使用功能类似于G-CSF的任何化学或生物实体。G-CSF或名称为非格司亭的药物目前作为和其聚乙二醇改性的或聚乙二醇化形式出售,药物名称为乙二醇化非格司亭,作为NeulastaTM出售。
GM-CSF的编码序列和氨基酸序列以及用于产生重组蛋白质的各种方法是已知的(美国专利号5,641,663,通过引用并入本文)。功能性GM-CSF变体的实例包括与全长人类GM-CSF氨基酸序列或其编码序列具有至少70、75、80、85、90或95%序列同一性或相似性的任何蛋白质、肽或其片段。用于改进功能性或停留血清清除率的GM-CSF的修饰包括但不限于聚乙二醇和其聚乙二醇衍生物,糖基化形式、正亮氨酸类似物、在末端添加氨基酸以改进折叠、稳定性或靶向,和融合蛋白。生物活性或功能活性相对于天然肽的提高可以降低治疗所需要的剂量和/或期间。还可以使用功能类似于GM-CSF的任何化学或生物实体。目前已经出售的GM-CSF或药物名称沙格司亭的实例包括 和
在具体实施方案中,单独使用G-CSF、或其变体、衍生物或类似物,或与另一种HSPC的动员剂组合使用,以用于与HIF-α增效剂同时给药。在该类型的说明性实例中,HIF-α增效剂是PHI(例如,小分子PHI,其包括选在通过前面式I-IX中的任意一个表示的化合物的小分子PHI)。
在一些实施方案中,与HIF-α增效剂组合使用的动员剂或动员剂中的至少一种是CXCR4拮抗剂。说明性的CXCR4拮抗剂包括芳香族连接的聚胺大环化合物,如描述于美国专利号5,583,131,作为U.S.RE42,152重新授予,专门通过引用将其整体将其并入本文中。一方面,CXCR4拮抗剂是1,1'-[1,4-亚苯基双(亚甲基)]-双-1,4,8,11-四氮杂环十四烷(AMD3100;普乐沙福;)。
在其它实施方案中,小分子CXCR4拮抗剂可以选自在美国专利申请公开号2012/0301427中公开的大环化合物,专门通过引用将其整体将其并入本文中。这些化合物包含被三个侧基包围的“核心”氮原子,三个侧基中的两个适合地为苯并咪唑基甲基和四氢喹啉基,和第三个为包含另外的氮的侧基。
小分子CXCR4拮抗剂的其它实施方案包括在美国专利申请公开号2012/0101280中公开的化合物,专门通过引用将其整体将其并入本文中。
在其它实施方案中,CXCR4拮抗剂选自在例如如在美国专利申请公开号2012/0283196中公开的β-发夹模拟肽,专门通过引用将其整体将其并入本文中。
在具体实施方案中,在如前述专利和专利申请中描述的CXCR4拮抗剂,例如普乐沙福,单独使用或与HSPC的另一种动员剂组合使用,用于与HIF-α增效剂同时给药。在该类型的说明性实例中,HIF-α增效剂是PHI。
适合的是,使用至少两种动员剂,用于与HIF-α增效剂同时给药。在具体实施方案中,所述至少两种动员剂包含CXCR4拮抗剂和集落刺激因子如G-CSF或GM-CSF或其变体、衍生物或类似物。在该类型的说明性实例中,CXCR4拮抗剂是普乐沙福或类似化合物,而集落刺激因子是G-CSF或其变体、衍生物或类似物。在这些实施方案中,HIF-α增效剂适合地为PHI(例如,小分子PHI,其包括但不限于选自根据式I-IX中的任意一个的化合物的小分子PHI)。
4.治疗和预防应用
根据本发明,HIF-α增效剂被提议用于增强造血干细胞和/或祖细胞的动员剂的造血特性的活性剂。因此,可以将HIF-α增效剂与至少一种动员剂(“组合治疗”),和任选地与药学上可接受的载体同时给予个体(例如,在同一组成中或在不同的组成中),以刺激或增强血细胞生成和更特别是增加患者中,特别是外周血液中的造血干细胞、祖细胞和粒细胞如嗜中性粒细胞的数量,所述血细胞生成包括造血干细胞和/或祖细胞从骨髓移动,所述造血干细胞和/或祖细胞包括粒细胞/巨噬细胞祖细胞和/或巨核细胞/红细胞祖细胞。
在一方面,本发明因此提供了用于将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到供体受试者的外周血液中的方法,所述方法包括给予受试者有效量的HIF-α增效剂,以将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到受试者的外周血液中HIF-α增效剂。在该实施方案中,适合的供体受试者是已经给予、正在给予或将要给予动员剂的供体受试者。
在另一方面,本发明提供了用于将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到供体受试者的外周血液中的方法,所述方法包括、由或基本上由以下组成:同时给予供体受试者有效量的HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂,以将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到受试者的外周血液中。
上述方法可以进一步包括从受试者收集或收获移动的造血干细胞和/或祖细胞,和任选地培养和/或储存所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞,以及进一步任选地将所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞输注或移植到受体受试者中。
要给予的HIF-α增效剂和至少一种动员剂的剂量可以取决于要治疗的受试者,包括其年龄、性别、体重和一般健康情况。剂量也可以考虑HIF-α增效剂与其靶分子的结合亲和力或调节活性,动员剂(或多种动员剂)的造血能力,其生物利用度和其在体内的药代动力学性质。在这一点上,用于给予的药剂的准确量也可以取决于执业医生的判断。在确定在治疗免疫低下病症中要给予的药剂的有效量中,医师或兽医可以评价疾病或病症随时间的进展。在任何事件中,本领域技术人员无需大量实验就可以容易地确定本发明的药剂的适合剂量。给予患者的活性剂的剂量应足以随时间在患者中实现有益应答,如血细胞生成增强或与免疫低下病症相关的症状的减少,包括贫血、血小板减少症、粒细胞缺乏症和/或嗜中性粒细胞减少症减少。剂量可以以任何适合的间隔给药以加强血细胞生成或改善免疫低下病症的症状。这样的间隔可以使用本领域技术人员已知的常规程序确定,并且可以根据使用的活性剂的类型及其配方变化。例如,间隔可以是每天、每隔一天、每周、每两周、每月、每两个月、每季度、每半年或每年。
剂量和间隔可以单独地调整,以提供足以维持HIF-α增效剂调节作用和造血功能增强作用的活性剂的血浆水平。全身给药的一般患者剂量为1-2000mg/天、10-1000mg/天、50-500mg/天、100-800mg/天,通常为1-250mg/天,和通常为10-150mg/天。就患者体重而言,一般剂量为0.02-25mg/kg/天、0.5-15mg/kg/天、1.0-10mg/kg/天、1-5mg/kg/天,通常为0.02-3mg/kg/天,通常为0.2-1.5mg/kg/天。就患者体表面积而言,般剂量为0.5-1200mg/m2/天、10-800mg/m2/天、50-500mg/m2/天、75-200mg/m2/天,通常为0.5-150mg/m2/天,通常为5-100mg/m2/天。用于治疗特定疾病的有效剂量的动物测试,将提供人类剂量的进一步预测性指示。各种注意事项已被描述,例如Gilmanetal.,(eds.)(1990)GoodmanandGilman’s:ThePharmacologicalBasesofTherapeutics(治疗的药理基础),8thEd.(第八版),PergamonPress,andRemington'sPharmaceuticalSciences(雷明顿:药物科学),17thed.(第17版)(1990),MackPublishingCo.,Easton,Pa中。其中讨论了给药方法,例如用于口服、静脉内给药、腹膜内给药或肌肉内给药,透皮扩散及其它给药方法。药学上可接受的载体一般包括水、盐水、缓冲液和例如在MerckIndex,Merck&Co.,Rahway,N.J中描述的其它化合物。
因此,HIF-α增效剂和动员剂(或多种动员剂)可以以刺激或增强血细胞生成的有效量提供。该过程可以涉及与动员剂(或多种动员剂)分别、同时或顺序地给予HIF-α增效剂。在一些实施方案中,这可以通过给予包含两种类型药剂的单一组成或药理学制剂实现,或通过同时给予两种或更多种单独的组成或制剂,其中一种组成包含HIF-α增效剂和其它药剂,动员剂(或多种动员剂)。应当认识到,如果使用超过一种动员剂,则可以单独、同时或顺序地给予动员剂。
在其它实施方案中,使用HIF-α增效剂的治疗可以在使用动员剂(或多种动员剂)的治疗之前或之后,间隔数分钟到数天。在将HIF-α增效剂与动员剂(或多种动员剂)分开应用的实施方案中,一般应确保大量的时期不在每次递送的时间之间到期,使得HIF-α增效剂与动员剂(或多种动员剂)仍能够对血细胞生成发挥有利地联合效应,特别是维持或增强受试者移动造血干细胞和/或祖细胞的能力,包括增加粒细胞如嗜中性粒细胞的数量。在这种情况下,预期将在彼此的约1-12小时内,更适合地,在彼此的约2-6小时内给予两种模式。然而在一些情况下,可能希望显著延长治疗的时期,其中在各自给药之间有几个小时(2、3、4、5、6或7)到几天(1、2、3、4、5、6、7或8)的停顿。
可以想到,将希望HIF-α增效剂或动员剂(或多种动员剂)的不止一次给药。可以使用各种组合,其中HIF-α增效剂为“A”而动员剂(或多种动员剂)为“B”,示例如下:
A/B/AB/A/BB/B/A/A/A/B/B/A/AA/B/BB/B/B/AB/B/A/BA/A/B/BA/B/A/BA/B/B/AB/B/A/AB/A/B/AB/A/A/BB/B/B/AA/A/A/BB/A/A/AA/B/A/AA/A/B/AA/B/B/BB/A/B/BB/B/A/B。交替地,A/B/AB/A/B/A/B等;B/B/A/A/B/B/A/A/B/B等;B/B/B/AB/B/B/A/B/B/B等;A/A/B/BA/B/A/B/A等;B/B/AB/B/A/AB/B/A/A等;B/ABB/A/A/BB/B/A/A/A等;和A/A/A/B/A/B/A/A/A/B/A/B等。预期了其它组合。再者,与单独给予相同量的动员剂相比,以有效增强血细胞生成有效的组合量将两者药剂递送到受试者的免疫系统。
可以将HIF-α增效剂和动员剂(或多种动员剂)直接给予受试者,或可能希望在给药之前将HIF-α增效剂和动员剂(或多种动员剂)之一或两者与载体蛋白如卵清蛋白或血清白蛋白缀合。虽然对于活性剂来说单独给药是可能的,但一般希望将其作为药物组合物呈递。这样的组合物通常包含至少一种活性剂或成分,与其一种或多种可接受的载体。每种载体从与其它成分相容和对患者无害的意义上来说应同时在药学和生理学上是可接受的。组合物包含适于口服给药、直肠给药、鼻腔给药、局部给药或胃肠外给药(包括皮下、肌肉内、静脉内和透皮给药)。组合物可以便利地以单位剂量形式呈递,并且可以通过药剂学领域中众所周知的许多方法制备。参见,例如Gilman,etal.(eds.)(1990)GoodmanandGilman’s:ThePharmacologicalBasesofTherapeutics(,8thEd.,PergamonPress;andRemington’sPharmaceuticalSciences,17thed.(1990),MackPublishingCo.,Easton,Pa.;Avis,etal.(eds.)(1993)PharmaceuticalDosageForms,ParenteralMedicationsDekker,N.Y.(药剂用量形式:胃肠外药物);Lieberman,etal.(eds.)(1990)PharmaceuticalDosageForms:TabletsDekker,N.Y.(药剂用量形式:片剂);以及Lieberman,etal.(eds.)(1990)PharmaceuticalDosageForms:DisperseSystemsDekker,N.Y(药剂用量形式:分散系统)。本发明的方法可以与其它治疗剂组合或与其它治疗剂联合使用。
本发明的方法和应用对移动受试者的HSPC是有用的。受试者可以患有免疫低下病症或患有获得免疫低下病症的风险增加,所述免疫低下病症可能由例如先天失常(例如,先天性白细胞减少症)、儿童或成年人周期性中性粒细胞减少症、感染后中性粒细胞减少症和骨髓增生异常综合征或医学治疗引起,所述医学治疗如由使用细胞减少性、脊髓抑制性或免疫抑制性疗法(例如,化学治疗、放射治疗和免疫抑制药物如类固醇)的治疗诱导的,特别是与移植排斥的治疗和高增生性细胞紊乱如癌症和自身免疫性疾病的治疗诱导的。可择的是,受试者是可以充当HSPC的同种异体、同基因或异种供体的个体,并且治疗用于移动和收集HSPC,以随后递送到患有免疫低下病症或患有获得免疫低下病症的风险增加的受体。此外,治疗可以用于由于例如由于对生长因子不敏感而“难以移动”的患者或供体。治疗可以进一步用于引起受体对器官移植的耐受性。
治疗还可以用于癌症治疗方法和用于抑制、改善或切除癌细胞和/或肿瘤的方法中。例如,像正常HSPC一样,其恶性相对物(counterpart)即白血病启动细胞(LIC)存在于骨髓(BM)生境(bonemarrowniches)中,该生境提供支持其生存和生长的结构性和病理性状况的。LIC通过与其BM微环境相互作用对抗传统的癌症治疗(例如,细胞减少性或脊髓抑制性治疗),这可能是在癌症治疗(例如,细胞减少性或脊髓抑制性治疗)诱导的缓解期之后白血病复发的元凶。可以将通过诱导LIC的移动(例如,通过给予治疗)使LIC与其生境分离与传统的癌症治疗(例如,细胞减少性或脊髓抑制性治疗)组合使用,以提供更加有效或改进的癌症治疗方法和用于抑制、改善或切除癌细胞和/或肿瘤的方法。
此外,治疗可以用于基因疗法。由于多能造血干细胞是自我更新的,并且产生祖细胞以及成熟的血液细胞,因此干细胞是基因疗法的适合的靶标。在移动之后,可以收集HSPC。可以修饰HSPC以在再引入个体后递送基因产物。可以将细胞在修饰之后再注入到受影响的个体中。
在一些实施方案中,将治疗给予患者以刺激或增强HSPC从骨髓到外周血液的移动,然后从患者收集或收获移动的HSPC。可以通过本领域众所周知的方式从供体受体收集包含移动的HSPC的血液。在典型方案中,通过例如分离术从供体收集移动的细胞,然后按照需要储存/培养/扩增/分级。为了确保捕获大量再植细胞,一般希望在移动的HSPC水平最高时收集供体的血液。为了优化从移动的血液中收获的HSPC的数量,可以通过本领域技术人员众所周知的方法监测HSPC水平,收集时间与HSPC最高一致。
如果需要,可以通过在体外使用刺激TNFα和GM-CSF受体的因子处理供体细胞使其富集。可选择的是,或此外,可以使用刺激FLT3和G-CSF受体的因子如FL和G-CSF。更特别是,造血组织如骨髓和血液可以通过本领域技术人员众所周知的方法从供给收获并单独或组合使用TNFα、GM-CSF、FL、SCF、IL-7、IL-12和G-CSF处理,以选择性丰富HSPC。
通常将从供体收获的细胞,在单独地或组合补充了TNFα、GM-CSF、FL、SCF、IL-7、IL-12和G-CSF的培养基中体外培养几天。给予的GM-CSF的浓度通常在1,000U/mL范围内。在可选择的实施方案中,通常可以以200U/mL的浓度给予TNFα。本领域技术人员能够容易地确定G-CSF、SCF、IL-7、IL-12和FL的适合浓度,如通过滴定实验或通过参考本文提供的工作实例。
在一些应用中,可能希望使用本领域已知的常规方法,例如以下讨论的来处理培养的细胞仪去除引起移植物抗宿主病(GVHD)的细胞。然后,可以使用本领域技术人员已知的技术,例如以下讨论的技术,从培养物中选择性地收集丰富的HSPC。
为了确保将HSPC富集到再植量,通常期望在HSPC峰值水平时收集培养的细胞。与体内移动一样,根据所用的细胞因子的给药方案,在不同天培养的造血细胞的体外富集产生HSPC的峰值水平。为了优化从培养的细胞中收集的HSPC数量,可以通过本领域技术人员公知的方法对HSPC水平进行监测,并定时收集以与HSPC峰相一致。
收集后,可以将HSPC重悬浮、储存、扩增和/或分级分离并给予受体。该受体可以是原始供体,因而HSPC的给药是用于自体干细胞移植。或者,该受体不是供体,HSPC的给药是用于同种异体的同源的或异种的干细胞移植。在一些实施方案中,在受体经历非脊髓抑制性预处理方案后,移植同种异体或异种干细胞(“微型同种异体”或“微型异种”干细胞移植)。
一旦HSPC被移动到受体的外周血液中或在培养的细胞中富集,它们可以以总的白血细胞或外周血液单核细胞的形式用作供体细胞,或通过利用能适合地结合特异性标记物以选择那些具有或缺乏各种标记物的细胞的特异性抗体的各种方法选择性富集。这些技术可以包括,例如,流式细胞术,其使用荧光激活细胞分选(FACS)和特定的荧光染料;生物素-亲和素或生物素-链霉亲和素,其使用共轭到细胞表面标记物-特异性抗体的生物素和亲和素或者结合于固相支持物如亲和柱基质或塑料表面的链霉亲和素;磁分离,其使用抗体包被的磁珠,破坏性分离如抗体和补体或结合到细胞毒素或放射性同位素的抗体。
如果将移动的血液用于自体移植,则外周血液单核细胞(PBMC)可以被再注入到患者中而无需修饰,所不同的是在癌症患者的情况下,该细胞制剂通常首先清除肿瘤细胞。与此相反,如果将移动的血液转移到同种异体的或异种的受体时,PBMC可首先被产GHVD细胞耗竭,留下在PBMC群体中富集的HSPC。在这方面,可用抗-αβTCR和抗-γδTCR抗体处理PBMC以耗竭T细胞,用抗-CD19以耗竭B细胞以及用抗-CD56以耗竭NK细胞。重要地,需要注意的是,抗Thy-1抗体不应该用于耗竭产GVHD细胞,因为它们将耗竭T细胞和HSPC。因此,重要的是,仔细选择适当的标记物作为靶标用于选择感兴趣的细胞和除去不希望的细胞类型。
通过特异性标记物的抗体进行分离可以是阴性或阳性选择程序。在阴性分离中,使用对存在于不希望的细胞上的标记具有特异性的抗体。可以除去或裂解抗体结合的细胞,保留剩余的所需混合物。在阳性分离中,使用对存在于期望的细胞上的标记物具有特异性的抗体。分离和保留抗体结合的细胞。应当理解的是,阳性和阴性分离可以基本上同时或以连续的方式使用。
最常见的用于基于抗体的分离的技术,是使用流式细胞术如FACS。通常,通过流式细胞术分离按如下进行。将造血细胞的悬浮混合物离心并再悬浮于介质中。加入与荧光染料缀合的抗体,以允许抗体与特异性细胞表面标记物结合。然后通过一个或多个离心和再悬浮步骤洗涤细胞混合物。将混合物通过基于不同荧光特性分离细胞的FACS运行。可在不同性能和能力水平获得FACS系统,包括多色分析。可以通过受大小和粒度影响的前向和侧向散射特征信息,以及通过某些细胞表面标记物的阳性和/或阴性表达来鉴定HSPC。
流式细胞术之外,其他分离技术也可以提供更快的分离。一种这样的方法是通过亲和层析的基于生物素-亲和素的分离。通常,这样的技术通过将洗涤的骨髓与对特异性标记物的生物素偶联的抗体培一起孵育后将其通过亲和素柱来实施。将生物素-抗体-细胞络合物结合至经由生物素-亲和素相互作用的柱,而其它细胞通过柱子。最后,柱结合的细胞可以通过扰动或其它方法获得释放。生物素-亲和素系统的特异性非常适合于快速阳性分离。
流式细胞术和生物素亲和素技术提供细胞分离的高特异性手段。如果需要,分离可以通过特异性少的技术来启动,然而,该技术可从造血细胞源除去大量的非HSPC。通常希望从移动的血液中裂解红细胞后再使用。例如,磁性珠分离可用于最初除去谱系定向的(lineagecommitted)、分化的造血细胞群,包括T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞和巨噬细胞(MAC),以及次要细胞群包括巨核细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。理想的是,可以除去至少约70%,和通常至少约80%存在的总造血细胞。
示例性的初始分离技术是密度梯度分离。这里,离心移动的血液被,并除去上清液。将细胞再悬浮于,例如,含10%HAS的RPMI1640培养基(Gibco)中,并放置在用例如Ficoll或Percoll或Eurocollins介质制备的密度梯度中。然后可通过离心进行分离,或可以通过例如Cobel&CellSeparator'2991(Cobev,Lakewood,Colo.)自动进行分离。其他分离程序可能是令人满意的,这依赖于造血细胞混合物和其内容物的来源。
富集的细胞培养物或移动的血液中包含的HSPC可以以总单核细胞、或部分纯化的或高度纯化的细胞群的形式使用。如果这些细胞组合物是分离的组合物,那么它们可适合地同时给药,但可以在相对近的期间内分别给药。给药方式一般为但不限于静脉注射。
一旦给药,据信,这些细胞回归到受体体内的各种造血细胞位点,包括骨髓。计算特定受体物种应给予的细胞数量。例如,在大鼠中,给予的耗尽T细胞的骨髓成分通常为每受体约1×107个细胞和5×107个细胞之间。在小鼠中,给药的T细胞耗竭骨髓成分通常为每受体约1×106个细胞和5×106个细胞之间。在人类中,给予的耗尽T细胞耗的骨髓成分通常为每千克体重受体约1×108个细胞和3×108个细胞之间。对于跨物种植入,可能需要更大的细胞数量。
在小鼠中,给予的HSPC的数量适当地为每受体约100-300HSPC之间。在大鼠中,给予的HSPC的数量通常为每受体约600-1200HSPC之间。在人类中,给予的HSPC的数量适当地为每受体约1×105-1×106HSPC之间。所使用的特定细胞的量会取决于许多因素,包括受体的健康状态。此外,细胞与各种细胞因子的共同给药可以进一步促进植入。
除了全身照射,受体可以由医学治疗调理调,所述医学治疗采用与技术基本上摧毁了受体的免疫系统所用的技术相同的技术,包括例如辐射、毒素、抗体结合至毒素或放射性同位素,或这些技术一些组合,导致免疫抑制和骨髓抑制(myeloablation)或细胞减少。然而,与基本上破坏免疫系统的情况相比,当免疫抑制和细胞减少时,使用的药剂的水平或量小得多。例如,基本上摧毁受体的剩余免疫系统经常包括用950拉德(R)的全身照射(TBI)来致死照射受体。无论受体的种类如何,这个照射水平是相当恒定的。已经获得750RTBI的一致性异种的(大鼠→小鼠)嵌合体,并且获得600RTBT的一致性同种异体的(小鼠)嵌合体。嵌合体通过PB分型(PBtyping)建立,且由混合淋巴细胞反应(MLR)和细胞毒性淋巴细胞(CTL)应答证实耐受性。
根据本发明制备的移动的血液和富集的培养细胞可用于建立同种异体嵌合体和异种嵌合体。当如前述的供体和受体为不同物种时,可以建立异种嵌合体。已经在大鼠和小鼠之间、仓鼠和小鼠之间以及黑猩猩和狒狒之间建立了异种嵌合体。人类和其它灵长类动物之间的异种嵌合体也是可能的。人类和其它哺乳动物如猪之间的异种嵌合体同样是可行的。
应当理解的是,虽然以上公开的方法涉及一种受体和一种供体,本发明包括将HSPC从两个供体移入到一个单一受体的方法。
在一些实施方案中,尤其是采用本发明组合治疗制备的移动的细胞和富集培养的细胞可用于重建受体的造血系统,这通过基本上破坏受体的免疫系统或使受体的免疫系统免疫抑制和骨髓抑制或细胞减少,然后给予受体包含同源的或自体的纯化的HSPC的同源或自体细胞组合物,所述HSPC与受体的HSPC是MHC相同的。
如上所述,本发明的组合治疗特别用于免疫低下病症的治疗或预防,包括靶向造血干细胞的医学治疗,如靶向快速分裂细胞或使细胞周期或细胞分裂中断的治疗,导致免疫抑制和骨髓抑制或细胞减少的治疗等导致的免疫低下病症。造血干细胞和/或祖细胞的HIF-α增效剂和动员剂(或多种动员剂)可作为医学治疗后的治疗性使用或可作为给药治疗前或与医学治疗一起的预防性使用。因此,本发明进一步考虑了组合治疗,其使用引起免疫低下病症的医学治疗和HIF-α增效剂拮抗剂与造血干细胞和/或祖细胞中的至少一种动员剂的组合给药。
众所周知,化学治疗和放射治疗靶向快速分裂的细胞和/或破坏细胞周期或细胞分裂。这些治疗通常被提供作为治疗包括癌症和自身免疫性疾病的高增生性细胞紊乱的一部分,旨在通过治愈性治疗减缓其进展或逆转疾病的症状。因此,在一些实施方案中,该组合治疗用于治疗高增生性细胞紊乱,包括癌症和自身免疫性疾病。
本发明所涵盖的代表性癌症包括但不限于,肉瘤、黑色素瘤、腺瘤,实体组织(例如乳腺、卵巢、前列腺、结肠、肺、皮肤、肾、膀胱、胰腺、头和颈部)癌包括口腔、咽喉、喉和肺的鳞状细胞癌;缺氧肿瘤;造血癌;神经系统癌;良性病变如乳头状瘤;白血病和淋巴瘤,其示例性实例包括癌,如鳞状细胞癌、非小细胞癌(例如非小细胞肺癌)、小细胞癌(例如小细胞肺癌)、基底细胞癌、汗腺癌、皮脂腺癌、腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、未分化癌、支气管癌、黑色素瘤、肾细胞癌、肝癌-肝脏细胞癌、胆管癌、胆管细胞型肝癌、乳头状癌、移行细胞癌、绒毛膜癌、semonoma、胚胎性癌、乳腺癌、胃肠癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌,以及颈部和头部区域的鳞状细胞癌;肉瘤,如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、软骨肉瘤(chordosarcoma)、血管肉瘤、内皮瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤和间皮肉瘤;血液学癌症,如骨髓瘤、白血病(例如急性骨髓性白血病、急性早幼粒细胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓单核白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞性白血病、粒白血病、毛细胞白血病、青少年骨髓单核白血病、大颗粒淋巴细胞白血病、单核细胞白血病、T细胞白血病、T细胞幼淋巴细胞白血病)、淋巴瘤(例如AIDS相关淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、恶性淋巴瘤、MALT淋巴瘤、蕈样肉芽肿、浆细胞、前体T细胞淋巴瘤、网状细胞肉瘤、甲状腺淋巴瘤,或何杰金病,包括结节硬化或混合细胞型亚型),以及神经系统的肿瘤,包括神经胶质瘤、脑膜瘤、神经管细胞瘤、神经鞘瘤和epidymoma。在具体实施方案中,所述癌症是白血病,非何杰金氏淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
本发明所涵盖的另外的血液学病症的非限制性实例包括骨髓增生异常综合征(例如,耐火贫血、难治性血细胞减少、慢性骨髓白血病或无分类骨髓增生异常综合征),骨髓增生性疾病(例如,红细胞增多症,原发性血小板增多症和原发性或特发性骨髓纤维化)和再生障碍性贫血。
本发明所涵盖的自身免疫性疾病的非限制性实例包括南美锥虫病、慢性阻塞性肺病、克罗恩病(两种类型的特发性炎性肠病“IBD”之一)、皮肌炎、1型糖尿病、子宫内膜异位症、肺出血肾炎综合征(Goodpasture’ssyndrome)、格雷夫斯病(Graves’disease)、格林-巴利综合征(GBS,Guillain-Barresyndrome)、桥本氏病(Hashimoto’sdisease)、化脓性汗腺炎、川崎病(Kawasakidisease)、IgA肾病、特发性血小板减少性紫癜、间质性膀胱炎、红斑狼疮、混合性结缔组织病、硬斑病、重症肌无力、发作性睡病、神经性肌强直、寻常天疱疮、恶性贫血、牛皮癣、牛皮癣关节炎、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、类风湿性关节炎、精神分裂症、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、颞动脉炎(也称为“巨细胞动脉炎”)、溃疡性结肠炎(两种类型的特发性炎性肠病“IBD”之一)、血管炎、白癜风、韦格纳肉芽肿病、乳糜泻、慢性甲状腺炎(桥本甲状腺炎)、恶性贫血、自身免疫性肝炎、白塞氏病、葡萄膜炎、动脉粥样硬化、中风、抗磷脂抗体综合征等。
因此,在一些实施方案中,该治疗会另外采用化疗剂,其可从细胞生长抑制剂和细胞毒性剂中适当的选择。细胞生长抑制剂的非限制性实例选自:(1)微管稳定剂例如但不限于紫杉烷类、紫杉醇、多西他赛、埃坡霉素和laulimalides;(2)激酶抑制剂,其示例性的实例包括格列卫、特罗凯TM(TarcevaTM)、(盐酸埃罗替尼(ErlotinibHCl))、BAY-43-9006、分割激酶结构域受体酪氨酸激酶亚组的抑制剂(例如PTK787/ZK222584和SU11248);(3)受体激酶靶向抗体,其包括但不限于,曲妥单抗西妥昔单抗贝伐单抗(阿瓦斯丁TM)、利妥昔单抗帕妥珠单抗(OmnitargTM);(4)mTOR途径抑制剂,其示例性的实例包括雷帕霉素和CCI-778;(5)Apo2L/Trail,抗血管生成剂例如但不限于血管内皮抑素、考布他汀(combrestatin)、血管抑素、血小板反应蛋白和血管内皮细胞生长抑制剂(VEGI);(6)抗肿瘤免疫治疗的疫苗,其代表性的实例包括活化的T-细胞、非特异性免疫促进剂(即干扰素、白介素);(7)抗生素细胞毒性剂例如但不限于多柔比星、博来霉素、更生霉素、柔红霉素、表阿霉素、丝裂霉素和米托蒽醌(mitozantrone);(8)烷化剂,其示例性的实例包括美法仑、卡莫司汀、洛莫司汀、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丁酸氮芥、福莫司汀、白消安、替莫唑胺和塞替派;(9)激素抗肿瘤药,其非限制性实例包括尼鲁米特、醋酸环丙孕酮、阿那曲唑、依西美坦、他莫昔芬、雷洛昔芬、比卡鲁胺、氨鲁米特、醋酸亮丙瑞林、枸橼酸托瑞米芬、来曲唑、氟他胺、醋酸甲地孕酮和醋酸戈舍瑞林;(10)性腺激素例如但不限于醋酸环丙孕酮和乙酸甲羟孕酮;(11)抗代谢物,其示例性的实例包括阿糖胞苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、托泊替康、羟基脲、硫鸟嘌呤、氨甲喋呤、利血生、雷替曲塞和卡培他滨;(12)合成代谢剂例如但不限于诺龙;(13)肾上腺类固醇激素,其示例性的实例包括甲基强的松龙乙酸酯、地塞米松、氢化可的松、泼尼松龙和泼尼松;(14)肿瘤剂例如但不限于伊立替康、卡铂、顺铂、奥沙利铂、依托泊苷和达卡巴嗪;(15)拓扑异构酶抑制剂,其示例性的实例包括托泊替康和伊立替康。
示例性的细胞毒性剂可选自sertenef、恶病质素、异环磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲蜜胺、泼尼氮芥、二溴卫矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺(TEMODARTM,Schering-PloughCorporation,Kenilworth,NJ)、环磷酰胺、庚铂、雌莫司汀、二丙胺磺酯、氯乙环磷酰胺、尼莫司汀、二溴螺氯铵、嘌嘧替派、洛铂、沙铂、甲基丝裂霉素、顺铂、阿霉素、伊罗夫文、右异环磷酰胺、顺-胺二氯(2-甲基-吡啶)铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺、GPX100、(反、反、反)-双-mu-(己烷-1,6-二胺)-mu-[二胺-铂(II)]双[二胺(氯)铂(II)]四氯化物、二氮丙啶基精胺(diarizidinylspermine)、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3,7-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比星、柔红霉素、蒽双咪腙、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮、3'-deansino-3'-吗啉代-13-脱氧-10-羟基洋红霉素、安那霉素、加柔比星、依利奈法德、MEN10755、4-去甲氧基-3-脱氨基-3-吖丙啶基-4-甲基磺酰道诺霉素(daunombicin)(见国际公开WO00/50032)、甲氨蝶呤(methoxtrexate)、吉西他滨和它们的混合物。
在一些实施方案中,HIF-α增效剂和动员剂的共同给药与放射治疗联合使用,所述放射治疗例如但不限于,共形外照射放射治疗(4-8周给出分数10-100灰色),无论是单次或分次,高剂量率近距离放射治疗,永久性间隙近距离治疗,全身放射性同位素(例如,锶89)或放射标记的抗体或肽。在该类型的示例性实例中,放射疗法与放射增敏剂联合给药。放射增敏剂的示例性实例包括但不限于乙丙昔罗、依他硝唑、氟路索、米索硝唑、尼莫唑、替莫卟吩和替拉扎明。
免疫低下病症一般会导致致病性感染,因此本发明还延伸至罹患免疫低下病症个体的感染的治疗和/或预防,或延伸至易于感染由于已知与免疫低下病症的发生相关联的治疗而导致的这种情况的个人的治疗。相应地,由医学治疗引起的免疫低下病症可能将所讨论的个体暴露于较高的感染风险。根据本发明,预防性治疗个体的感染是有可能的,该个体在已知能产生这种条件的治疗之前或期间患有免疫低下病症。在已知产生免疫低下病症的治疗之前或期间,通过共同给予HIF-α增效剂和一种或多种动员剂(在此也称为“HIF-α增效剂/动员剂组合”或“联合治疗”)的预防性治疗,也能够防止随后的感染或降低个体感染表现病症的风险。因此,在一些实施方案中,本发明延伸到辅助联合疗法,其同时使用HIF-α增效剂/动员剂组合和抗感染剂,所述抗感染剂有效对抗由如上概括描述的医学治疗导致的免疫低下病症引发或具有发展的风险的感染。
抗感染剂适合地选自抗微生物剂,其包括但不限于能杀死或抑制微生物如病毒、细菌、酵母、真菌、原生动物等生长的化合物,因此包括抗生素、抗阿米巴药、抗真菌剂、抗原虫剂、抗疟药、抗结核药和抗病毒剂。抗感染剂在其范围内还包括驱肠虫剂和杀线虫剂。示例性抗生素包括喹诺酮类(例如氨氟沙星、西诺沙星、环丙沙星、依诺沙星、氟罗沙星、氟甲喹、洛美沙星、萘啶酸、氟哌酸、氧氟沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、奥索利酸、培氟沙星、罗索沙新、替马沙星、托氟沙星、司帕沙星、克林沙星、加替沙星、莫西沙星、吉米沙星和加雷沙星),四环素类,甘氨环素类和恶唑烷酮(例如金霉素、去甲金霉素、强力霉素、赖甲环素、甲烯、二甲胺四环素、土霉素、四环素、替加环素,利奈唑胺、eperozolid),糖肽,氨基糖苷类(例如丁胺卡那霉素、阿贝卡星、丁苷菌素、地贝卡星、福提霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素(meomycin)、奈替米星、核糖霉素、西索米星、大观霉素、链霉素、妥布霉素),β-内酰胺类(例如亚胺培南、美罗培南、比阿培南、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢孟多、头孢曲秦、头孢西酮、头孢唑啉、头孢克肟、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢尼西、头孢哌酮、头孢雷特、头孢噻肟、头孢替安、头孢咪唑、头孢匹胺、头孢泊肟、头孢磺啶、头孢他定、头孢特仑、头孢替唑、头孢布烯、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢唑喃、头孢乙腈、头孢氨苄、头孢来星、头孢噻啶、头孢菌素、头孢匹林、头孢拉定、头孢美唑(cefinetazole)、头孢西丁、头孢替坦、氨曲南、卡卢莫南、氟氧头孢、拉氧头孢、美西林、阿莫西林、氨苄青霉素、阿洛西林、羧苄青霉素苄青霉素、卡非西林、氯唑西林、双氯西林、甲氧西林、美洛西林、奈夫西林、苯唑西林、青霉素G、哌拉西林、磺苄青霉素、替莫西林、替卡西林、头孢、SC004、KY-020、头孢地尼、头孢布烯、FK-312、S-1090、CP-0467、BK-218、FK-037、DQ-2556、FK-518、头孢唑兰、ME1228、KP-736、CP-6232、Ro09-1227、OPC-20000、LY206763),利福霉素类,大环内酯类(例如阿奇霉素、克拉霉素、红霉素、竹桃霉素、罗他霉素、罗沙米星、罗红霉素、醋竹桃霉素),酮内酯类(例如泰利霉素、喹红霉素),库马霉素,林可酰胺类(例如克林霉素、林可霉素)和氯霉素。
示例性抗病毒剂包括硫酸阿巴卡韦、阿昔洛韦钠、盐酸金刚烷胺、安普那韦、西多福韦、地拉韦定甲磺酸盐、去羟肌苷、依非韦伦、泛昔洛韦、福米韦生钠、膦甲酸钠、更昔洛韦、茚地那韦硫酸盐、拉米夫定、拉米夫定/齐多夫定、那非那韦甲磺酸盐、奈韦拉平、奥塞米韦磷酸盐、利巴韦林、盐酸金刚乙胺、利托那韦、沙奎那韦、沙奎那韦甲磺酸盐、司他夫定、盐酸伐昔洛韦、扎西他滨、扎那米韦和齐多夫定。
抗阿米巴药或抗原虫剂的非限制性实例包括阿托伐醌、氯盐酸、磷酸氯喹、甲硝唑、盐酸甲硝唑和喷他脒羟基乙磺酸盐。驱肠虫剂可选自甲苯咪唑、双羟萘酸噻嘧啶、阿苯达唑、伊维菌素和噻菌灵中的至少一种。示例性的抗真菌剂可选自两性霉素B、两性霉素B胆甾醇硫酸盐复合物、两性霉素B脂质复合物、两性霉素B脂质体、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黄霉素微粒、灰黄霉素超微粒、伊曲康唑、酮康唑、制霉菌素和盐酸特比萘芬。非限制性抗疟药的实例包括盐酸氯喹、磷酸氯喹、强力霉素、硫酸羟氯喹、盐酸甲氟喹、磷酸伯氨喹、乙胺嘧啶、和含磺胺多辛的乙胺嘧啶。抗结核药包括但不限于氯法齐明、环丝氨酸、氨苯砜、盐酸乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺、利福布丁、利福平、利福喷丁和硫酸链霉素。
还已知靶向快速分裂细胞和/或破坏细胞周期或细胞分裂的医学治疗(例如化学治疗和放射治疗)是免疫受损的,因为免疫系统的细胞包括造血细胞受到破坏或在数量上实质性减少,从而导致以中性粒细胞减少症、粒细胞缺乏症、血小板减少症和/或贫血为特征的免疫抑制状态。因此,本发明特别用于治疗或预防从如上文概括提到的医学治疗中表征的这些情况中的任一种或多种。
贫血、血小板减少症、中性粒细胞减少症和粒细胞缺乏症通常由实验室测量来定义,分别指示降低的血细胞比容(体积%)、降低的血小板计数(每mm3)、降低的中性粒细胞计数(每mm3)、降低的总粒细胞(即,中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)或白细胞计数(每mm3)。确定这些值的方法在本领域中是公知的,包括自动化方法以及手工方法。根据受试者的年龄和性别、测量方法和实验室执行测量规范,健康非妊娠人类的血细胞比容和血小板计数正常值的下限稍微有些差异。然而,一般来说,当血细胞比容小于约37-40%时,成年人受试者被称为贫血。同样,通常当血小板计数低于约100,000mm3时,成年人受试者被认为血小板减少症。贫血也经常依据减少的血红蛋白(g/dL)或红血细胞计数(每mm3)报道。在健康成年人中这些指标正常值的典型下限分别为12-13g/dL和约4.1×106/mm3。当中性粒细胞计数下降低于1000/mm3时,通常成年人受试者被认为患有中性粒细胞减少症。此外,当总粒细胞计数下降低于500个细胞/mm3时,通常成年人被认为患有粒细胞缺乏症。对于其他物种,所有这些参数的相应值是不同的。
造血功能障碍如贫血、血小板减少症、中性粒细胞减少症和粒细胞缺乏症,也经常与和其严重程度有关的临床症状和体征相关联。贫血可表现为面色苍白、全身乏力或虚弱、运动耐力降低、气促劳累、心率快、心律不齐、胸痛(心绞痛)、充血性心脏衰竭和头痛急促。血小板减少症一般表现为自发的或无法控制的出血、瘀斑和易碰伤。中性粒细胞减少症与感染有关,包括源自内源性微生物菌群的主要感染和缺乏炎症。
因此,本发明考虑辅助联合治疗,所述辅助联合治疗使用HIF-α增效剂/动员剂组合和治疗如上概括描述造血功能障碍的辅助治疗。在一些实施方案中,辅助联合治疗会采用HIF-α增效剂/动员剂组合和选自贫血药物、血小板减少症药物、粒细胞缺乏症药物或中性粒细胞减少症药物中的药物,其示例性实例包括类固醇、类固醇诱导剂和免疫调节剂。
类固醇包括但不限于全身性给予的皮质类固醇,包括甲泼尼龙、泼尼松龙和泼尼松、可的松、氢化可的松。类固醇诱导剂包括但不限于促肾上腺皮质激素(ACTH)。
皮质类固醇抑制细胞因子产生、粘附蛋白活化、炎症细胞迁移和活化。与系统性皮质类固醇有关的副作用包括,例如,葡萄糖代谢的可逆异常、食欲增加、液体潴留、体重增加、情绪改变、高血压、消化性溃疡和骨无菌性坏死。与较长期使用相关的一些副作用包括肾上腺轴的抑制、生长抑制、皮肤变薄、高血压、糖尿病、皮质醇增多症、白内障、肌无力,并且在极少数情况下,免疫功能受损。建议以最低有效剂量使用这些类型的化合物。
目前市场上或开发中常用的贫血药物包括重组人EPO(EPOGEN;PROCRIT)、铁制剂(亚铁的和三价铁的,CHROMAGEN,FEOSOL,INFED,IROSPAN,NEPHRO-FER,NEPHRO-VITE,NIFEREX,NU-IRON,SLOWFE)、维生素B12、维生素B6、叶酸(CHROMAGEN,FERRO-FOLIC,NEPHRO-FER,NIFEREX)、抗坏血酸、维生素的D某些代谢物(钙三醇和阿尔法骨化醇、CALCIJEX、ROCALTROL)、雄性激素、合成代谢类固醇(ANADROL)、肉毒碱。在一个具体的实施方案中,贫血药物是重组EPO。
普通使用或开发的治疗血小板减少症的药物包括糖皮质激素(强的松、强的松、甲基强的松龙、SOLUMEDROL)、重组TPO、重组MGDF、聚乙二醇化重组MGDF和利索茶碱。在一个具体实施方案中,血小板减少症药物是重组TPO。
普通使用或开发的治疗中性粒细胞减少症的药物包括糖皮质激素(泼尼松龙、泼尼松、甲泼尼龙、SOLUMEDROL)、免疫球蛋白G(SANDOGLOBULIN,IVEEGAM,GAMMAR-P,GAMIMNEN,GAMMAGARDS/D)、雄性激素、重组IFN-γ(ACTIMMUNE)和子宫转铁蛋白。抗生素经常与中性粒细胞减少症药物联合给药来治疗或减少感染的风险。
如上所述,本发明包括HIF-α增效剂/动员剂组合与其他药剂或助剂的共同给药。应该理解的是,在包括给予HIF-α增效剂/动员剂与其他药剂的实施方案中,所述组合中的活性药剂的剂量可依其自身包括有效量,其他药剂可进一步增强对患者的治疗或预防益处。可选择的是,HIF-α增效剂/动员剂组合和其他药剂可一起包括预防或治疗免疫低下病症或感染的有效量。还应当理解的是,有效量可以根据特定治疗方案进行限定,包括例如给药时间和给药次数、给药方式、制剂等。
在一些实施方案中,本发明考虑给予高剂量的医学治疗,其诱导免疫低下病症,而不诱导副作用或抑制副作用的诱导。通常,当医学治疗如化学治疗和放射治疗高剂量给药时,可能会发生多种副作用,包括诱导免疫低下病症和感染。由于有这些副作用的后果,不在如此高的剂量给予医学治疗。根据本发明,这种通常诱导副作用的高剂量的医学治疗(例如,高剂量的化学治疗剂或辐射)可以被施用而不引起副作用,只要受试者还接收HIF-α增效剂以及造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂的同时给药即可。通常由医学治疗诱导的副作用的类型和程度,取决于所使用的特定的治疗。
适合的是,HIF-α增效剂/动员剂组合和任选的辅助治疗,按常规时间表给药。可选择的是,如症状出现,可以给予辅助治疗。本文使用的“常规时间表”,是指预定的指定时间期限。常规时间表可以包括长度相同或不同的时间期限,只要时间表是预先确定的即可。例如,常规时间表可以包括HIF-α增效剂每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周、每月或者任何设定的天或周数,每两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月等,给予HIF-α增效剂。另外,预定的常规时间表可涉及第一个星期每天,接着几个月按月,在那之后每三个月同时给予HIF-α增效剂和动员剂。常规时间表覆盖任何特定组合,只要在包含某天给药的适当时间表的这个时间前确定即可。
另外,本发明提供了药物组合物,其用于刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞的移动,或用于刺激或增强血细胞生成,或用于干细胞移植或用于治疗或预防免疫低下病症,包括由如上广泛描述的医学治疗造成的病症。该药物组合物包括HIF-α增效剂和至少一种造血干细胞和/或祖细胞的动员剂,任选地配制于药学上可接受的载体中。在具体实施方案中,药物组合物包括PHI(例如,小分子PHI,包括选自根据式I-IX中任一个化合物的那些化合物)以及集落刺激因子(例如,G-CSF或其变体、衍生物或类似物)和CXCR4拮抗物(例如,小分子CXCR4拮抗物)中之一或两者。
所述药物组合物可以包括如上广泛描述的辅助或附加药物。在一些实施方案中,所述HIF-α增效剂和动员剂会以预防或治疗免疫低下病症(例如贫血、血小板减少症或中性粒细胞减少症)的有效量存在于药物组合物中。预防或治疗免疫低下病症的有效量,是指能完全或部分地防止免疫低下病症的发展、预防其恶化或治疗已确定的存在该病症的量。在一些情况下,预防或治疗免疫低下病症的有效量可完全或部分地预防或治疗该情况的临床症状。
除了从生理上衡量的临床结果,体外测定法测量红细胞、血小板、粒细胞和总白细胞计数,其也可以用于确定特定HIF-α增效剂的治疗有效量。这些方法是本领域中公知的标准医学实验室技术。在常见的实践中,这样的测量可以由为此目的设计的自动细胞计数设备完成,或者它们可以手动执行。当细胞数特别低时,手动计数可能比自动计数更准确。
本发明的组合物以药学上可接受的解决溶液给药,其可以常规地含有药学上可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体、佐剂和任选的其它治疗成分。特别是,HIF-α增效剂可以以药学上可接受的固体形式配制,例如片剂、胶囊、囊片、粉剂、丸剂等。根据治疗的特定条件病症,制剂可全身或局部给药。配制技术和给药技术可见于GoodmanandGilman:ThePharmacologicalBasesofTherapeutics,8thEd.,supra;Remington’sPharmaceuticalSciences,17thed.,MackPublishingCo.(古德曼和吉尔曼的:治疗剂的药理学基础,第8版,同上),同上;Remington’sPharmaceuticalSciences,17thed.,MackPublishingCo.(雷明顿的药物科学,第17版,Mack出版公司),同上;PharmaceuticalDosageForms,ParenteralMedicationsDekker,N.Y.(药物剂型,胃肠药物德克尔,N.Y.,),同上;药物剂型:片剂,德克尔,N.Y.(PharmaceuticalDosageForms:TabletsDekker,N.Y.),同上;harmaceuticalDosageForms:DisperseSystemsDekker,N.Y(药物剂型:分散系统,德克尔,N.Y.),同上。适合的途径可以,例如,包括口服、直肠、经粘膜或肠内给药;肠胃外递送,包括肌肉内注射、皮下注射、髓内注射,以及鞘内注射、直接心室内注射、静脉内注射、腹膜内注射、鼻内注射或眼内注射。对于注射,可以将本发明的活性药剂或药物配制在水溶液中,优选在生理相容的缓冲液如Hank溶液(Hanks’solution)、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中。对于经粘膜给药,将适合待渗透的屏障的渗透剂用于制剂中。这样的渗透剂通常为本领域已知。
该药物可以很容易地采用本领域公知的药学上可接受的载体制成适于口服给药的剂量。这种载体能够使本发明的化合物配制成剂量形式如片剂、丸剂、胶囊剂、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等,用于待治疗的患者口服摄取。这些载体可选自糖、淀粉、纤维素及其衍生物、麦芽、明胶、滑石、硫酸钙、植物油、合成油、多元醇、藻酸、磷酸盐缓冲溶液、乳化剂、等渗盐水和无热原水。
用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性剂的水溶液。另外,活性剂的悬浮液可以制备为适当的油性注射悬浮液。适合的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油如芝麻油,或合成脂肪酸酯,如乙基油酸酯或甘油三酸酯,或脂质体。水性注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质,如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地,悬浮液还可以含有适当的稳定剂或能增加化合物的溶解度以允许制备高浓度溶液的试剂。
口服使用的药物制剂可以通过以下方式获得:将活性剂与固体赋形剂组合,任选地研磨所得混合物,并,如果需要,加入适合的助剂后加工颗粒混合物,以获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂是,特别是填充剂如糖,包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇;纤维素制剂,诸如,例如,玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。如果需要,可以加入崩解剂,如交联聚乙烯基吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如藻酸钠。这样的组合物可以通过任何药学方法制备,但是所有的方法都包括使如上所述的一种或多种药物与构成一种或多种必需成分的载体联合的步骤。在一般情况下,本发明的药物组合物可以其本身已知的方式制备,例如,通过常规混合、溶解、制粒、制锭、研磨、乳化、包封、包埋或冻干方法。
糖衣丸芯具有合适的涂层。为了这个目的,可使用浓缩的糖溶液,其可任选含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯基吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇或二氧化钛、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或色素加入到片剂或糖衣丸包衣中,用于鉴别或表征不同组合的活性剂剂量。
可以口服使用的药物包括由明胶制成的推入配合胶囊,以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨醇制成的软密封胶囊。推入配合胶囊可以包含与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉或润滑剂如滑石或硬脂酸镁和任选的稳定剂混合的活性剂。在软胶囊中,活性剂可溶解或悬浮在适合的液体中,如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外,可以加入稳定剂。
本发明的药物的剂量形式也可包括注射或植入专门为此目的设计的控释装置或经修饰的以这种方式附加地起作用的其它形式植入物。本发明的活性剂的控释可通过对其涂覆例如疏水性聚合物包括丙烯酸树脂、蜡、高级脂肪醇、聚乳酸和聚乙醇酸以及某些纤维素衍生物如羟丙基甲基纤维素来实现。另外,控释可通过使用其它聚合物基质、脂质体或微球来实现。
本发明的药物可以以与药学相容的反离子的盐的形式提供。药学上相容的盐可以与许多酸形成,包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐倾向于更溶于水性或相应的游离碱形式的其它质子溶剂中。
对于在本发明的方法中使用的任何化合物,治疗有效剂量可以最初从细胞培养试验估计。例如,可以在动物模型中配制剂量以达到包括在细胞培养物中测定的IC50的循环浓度范围(例如,活性剂的浓度,其实现了PHD多肽活性的半最大抑制)。此类信息可用于更准确地确定在人类中有用的剂量。
这类药物的毒性和治疗功效可通过标准药学方法在细胞培养物或实验动物中确定,例如,用于确定LD50(50%群体的致死剂量)和ED50(50%群体的治疗有效剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数,其可以表示为比率LD50/ED50。表现出大的治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养试验和动物研究获得的数据可用于配制一系列的剂量,用于人类使用。这类化合物的剂量优选处于包括具有很少或无毒性的ED50的循环浓度范围内。剂量可以在此范围内根据所使用的剂型和采用的给药途径而变化。确切的制剂、给药途径和剂量可以通过考虑患者的病情的个体医生来选择。(参见例如Fingletal.,1975,in“ThePharmacologicalBasisofTherapeutics”,Ch.1p1(Fingl等人,1975,“治疗学的药理学基础”,第一章,第一页))。
或者,人们可以以局部而非全身的方式给予化合物,例如,通过将该化合物直接注射到组织中,优选皮下组织或网膜组织,通常为长效制剂(depotformulation)或缓释制剂。
此外,人们可以在靶向药物递送系统中给予药物,例如,在涂有组织特异性抗体的脂质体中。脂质体将靶向组织并被组织选择性吸收。
在局部给药或选择性摄取的情况下,药剂的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
为了使本发明可以容易理解并付诸实践效果,现在通过下列非限制性实施例的方式说明特别优选的实施方案。
实施例
实施例1
化合物X与G-CSF协同增强HSC移动
为了评估HIF-1α蛋白的药理学稳定性是否将增强响应G-CSF的HSC移动,用重组人G-CSF(rhuG-CSF)处理C57BL/6小鼠1-3天,每日两次,以及PHD抑制剂即化合物X,处理3天,每日1次。在用化合物X处理的骨髓白细胞中(图1A)证明了HIF-1α蛋白的药理稳定性。另外,与单独用G-CSF相比,化合物X与G-CSF的联合处理显著增加HIF-1α蛋白的稳定性。对集落形成细胞(CFCs)到血液和脾脏的移动进行测定(图1B)。将化合物X添加到G-CSF的处理,在G-CSF处理2天后,使每毫升血中移动的CFCs增加2.5倍,在G-CSF处理3天后,使移动到脾脏的CFC增加6倍。值得注意的是,化合物X单独应用3天没有诱导CFC移动到血液中。这些结果表明,化合物X与G-CSF协同作用于HSPC移动。为了评估化合物X处理的最佳持续时间,在组织提取之前,给予化合物X1-4天,最后2天给予G-CSF(图1C)。响应2天的G-CSF,CFC进入血液和脾脏的移动,随化合物X处理的期间逐渐增加,在化合物X给药第3天达到峰值。
实施例2
化合物X与普乐沙福协同增强CFC移动
本发明人接下来评估化合物X与普乐沙福协同提高移动的能力。由于注射后1h(小时)普乐沙福移动达峰(7),采用这个时间点每天给药化合物X共1-4天然后处死(图1D)。与G-CSF类似地,响应于普乐沙福的每毫升血液移动的CFC数量,在用化合物X处理2至3天后显著增加,证明了在CXCR4抑制和PHD抑制之间的协同作用。由于响应普乐沙福的移动是非常迅速的,用包括或未包括化合物X的普乐沙福处理1小时后,HSPC未显著移动到脾脏(图1D)。
实施例3
PHD的抑制与G-CSF和普乐沙福的组合的协同作用
由于化合物X分别与G-CSF和普乐沙福协同作用,接下来评估G-CSF、普乐沙福和化合物X对移动的联合作用。将其分成两个实验,其中一个实验G-CSF给药2天,另一个给药4天(图2)。在两个实验中C57BL/6小鼠在4个处理组中:(G)单独的G-CSF250μg/kg/天;(G+X3)G-CSF+20mg/kg/天,化合物X3天;(GP1)收获前1小时G-CSF与16mg/kg普乐沙福一起;(G+P1X3)G-CSF与普乐沙福和化合物X一起,剂量同上。在血液和脾脏中测定CFCs的移动、表型Lin-CD41-Sca1+Kit+HSPC和Lin-CD41-Sca1+Kit+CD48-CD150+HSC。与单独用G-CSF移动2天的小鼠相比,G+X3组(G-CSF+化合物X)小鼠移动到血液的CFC多4倍,且到脾脏的CFC多47倍(p<0.001;图2B)。用G-CSF处理4天后,添加化合物X导致CFC/mL血液的数量增加4倍(P<0.01),且CFC/脾的数量进一步显著增加(P<0.01;图2B)。化合物X单独没有移动作用(数据未显示)。果然,响应于用G-CSF处理2天,普乐沙福使CFC的移动增强10倍(P<0.005)。最有趣的是,响应于G-CSF加普乐沙福处理2天,化合物X的添加将CFC/mL到血液中的移动进一步增加2.5倍,以及将CFC/脾脏的移动增加4倍(P<0.005;图2B)。响应于G-CSF,加普乐沙福处理4天,化合物X的添加也使CFC/mL血液的移动提高了2.5倍(P<0.005;图2B)。
与用G-CSF单独移动的小鼠相比,G-CSF连同化合物X移动2天的小鼠使表型HSC的数量增加3倍,而Lin-Sca1+Kit+HSPC的数量在血液中增加2倍,在脾脏中增加3倍(p<0.005;图2C-D)。此外,G-CSF加普乐沙福处理2天后,添加化合物X连同G-CSF和普乐沙福使血液中表型HSC的移动增加3倍,HSPC的移动增加2.5倍,在脾脏中增加4倍(P<0.01;图2C-D)。用G-CSF和普乐沙福处理4天后,将化合物X添加到G-CSF和普乐沙福也显著增加表型HSC和HSPC在血液中的数量(P<0.001;图2C-D)。
HSC移动的这种协同增长,在移植与来自同类供体的2×105BM个细胞竞争的20μL移动的血液后,在长期竞争性再植试验(competitiverepopulationassay)中进一步被证实。CD45.2/CD45.1嵌合体显示,2天的G-CSF+普乐沙福+化合物X的组合(G2P1X3)移动的竞争性再植HSC比G-CSF+普乐沙福多6倍(G2P1,P<0.01)。与G-CSF+普乐沙福相比,用2天G-CSF+1h普乐沙福+3天化合物X(G2P1X3)处理后,移动的长期竞争性再植HSC的数量(移植后16周测量)加倍(G2P1,P<0.05;图3a)。最有趣的是,移植前用G-CSF处理4天后,随着化合物X的添加,移动的再植单元数量的这种增加甚至更显著。与单独的G-CSF(G4)相比,向G-CSF添加化合物X(G4X3)使移动的再植单元的数量增加了6倍(P<0.001;图3B)。与单独的G-CSF+普乐沙福(G4P1)相比,化合物X与G-CSF和普乐沙福的组合(G4P1X3)使再植单元的移动增加3倍(P<0.001;图3B)。这些数据表明,化合物X协同地增加了可移植的HSC以响应G-CSF与普乐沙福的已经有效组合的移动。
实施例4
HSPC中HIF-1α基因缺失损害它们的移动
由于本发明人发现化合物X能稳定骨髓HSPC中的HIF-1α蛋白,决定进一步研究HIF-1α在响应G-CSF的HSPC移动中的作用。首先建立突变株,其中将两个Hif1α等位基因敲除(floxed),Cre-诱导的YFP报告子敲入Rosa26基因包载基因座(genetraplocus)R26RYFP(10),在HSC特异性Scl基因增强子片段(SclCreER)(11)的控制下,并在HSC中特异性表达他莫昔芬诱导型Cre重组酶(CreER融合蛋白)。通过流式细胞术测量Cre-诱导的YFP报告子的表达,用三苯氧胺处理这些Hif1afl/flR26RYFP/YFPSclCreER小鼠3天,在30±9%的Lin-Sca1+Kit+CD48-CD150+HSCs、10±5%Lin-Sca1+Kit+HSPCs中引起Cre激活(图4A),但在Lin-Sca1-Kit+骨髓性祖细胞或谱系阳性细胞中几乎未检测到。
Hif1afl/flR26RYFP/YFPSclCreER小鼠和对照Hif1aWT/WTR26RYFP/YFPSclCreER小鼠的同年龄组(cohorts)用三苯氧胺诱导3天,然后自三苯氧胺诱导的最后一天开始用G-CSF诱导3天。最后一次G-CSF注射后24小时收获组织。与用三苯氧胺和G-CSF处理的对照Hif1aWT/WTR26RYFP/YFPSclCreER小鼠相比,HSPC中Hif1a基因缺失显著减少CFCs(P<0.01;图4B)、HSPC(P<0.05)和HSCs(P<0.02)向Hif1aWT/WTR26RYFP/YFPSclCreER小鼠的血液和脾脏中的移动(图4C)。由于在用三苯氧胺和G-CSF处理的Hif1afl/flR26RYFP/YFPSclCreER小鼠中,Hif1a从约30%的HSC中缺失,我们利用这种镶嵌缺失来计算每只个体小鼠的移动到血液或脾脏的YFP-(Hif1a基因未缺失)和YFP+(Hif1a缺失)Lin-Sca1+Kit+HSPCs相对于骨髓内剩余的Hif1a-完整或Hif1a缺失的HSPCs数量的比例。在每只个体小鼠中,离开骨髓移动到血液或脾脏中的YFP+Hif1a-缺失的HSPC的比例显著低于YFP+Hif1a-完整的HSPC的比例(图4D)。这进一步表明,HSPCs中Hif1a基因的缺失严重地损害其响应G-CSF的移动。
实施例5
骨祖细胞中HIF-1α的表达对最佳的HSPC移动是必需的
由于骨祖细胞和它们的后代对HSC保留于BM中和响应G-CSF(6,12-15)的移动具有重要的作用,因此生成Hif1a基因在表达osterix(转录因子)(Sp7基因)的骨祖细胞中有条件缺失的Hif1afl/flosxYFPCre小鼠(16)。与对照Hif1aWT/WTosxYFPCre小鼠相比,在G-CSF给药的早期时间点,Hif1afl/flosxYFPCre小鼠延迟了CFC移动到血液和脾脏(图5A,5B,5C)。这表明,HIF-1α在HSPC移动中的效果并不完全是HSPC自主的,而是需要在形成生境如骨祖细胞和成骨细胞的细胞中表达。
实施例6
化合物A、B和C增强HSC移动
另外,检测PHD抑制剂形式的HIF-α增效剂增强由G-CSF诱导的移动的能力。在雄性7周龄C57BL/6小鼠中对化合物A、化合物B或化合物C进行检测。小鼠每天两次皮下注射rhuG-CSF,每次注射剂量125μg/kg,共四天。在实验开始的第1天,小鼠每天一次灌服20mg/kg化合物A、化合物B、化合物C或载体对照,共3天。
在治疗结束时,通过心脏穿刺收集血液,通过颈脱位法处死小鼠并收获脾脏。移除股骨,清理并用1mLPBS+10%新生牛血清(NCS)冲洗骨髓。
通过流式细胞仪,采用对谱系标记物(CD3、CD5、CD45R/B220、F4/80、Gr1、CD41、TER119)、Sca-1、Kit、CD48和CD150具有特异性的抗体测量处理后留在骨髓中的表型造血干细胞和祖细胞的数量。同样地,测定表型移动到血液和脾脏中的造血干细胞的数量。还对血液和脾脏进行了集落测定,以确定每毫升血液和每脾脏集落形成细胞的数量。将所有结果都表示为平均值±标准偏差,每组n=6。采用斯氏t检验计算显著性差异水平。
如图6A-B所示,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理没有显著改变骨髓中表型造血干细胞和祖细胞(HSPC)的总数。这些结果表明,这些处理没有改变移动的HSC和HPC的表型,并暗示移动的细胞应在移植后移入。
如图7A-B所示,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理导致表型HSCs(LSK48-150+)的数量显著增加约3倍或更多,以及移动到血液的HSPCs(LSK48-150-和LSK)的数量显著增加约2倍或更多。与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理没有显著改变骨髓性祖细胞(LKS-)向血液中的移动。
如图8A-B所示,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理导致移动到脾脏的表型HSCs(LSK48-150+)和HSPC(LSK48+和LSK)的数量显著增加约2倍。与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理也使骨髓性祖细胞(LKS-)到脾脏的移动显著增加约3倍。
如图9A-B所示,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理导致从骨髓移动的表型HSC(LSK48-150+)和HSPC(LSK48+和LSK)的总数显著增加约2倍。此外,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理导致从骨髓移动的骨髓性祖细胞(LKS-)的总数显著增加大约6倍。
如图10所示,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A或化合物C与G-CSF联合处理增加从骨髓移动到血液的集落形成单位的数量。用化合物B与G-CSF联合处理后,移动到血液的CFUs的数量没有显著变化。这一发现被认为是反映了与其它化合物相比,化合物B能快速诱导移动。因此,血液和组织收集实验所使用的时间点错过化合物B的诱导峰周期。与载体(vehicle)和G-CSF相比,对于化合物B与G-CSF组合,这种假设得到移动到脾脏的CFU的统计学显著数量的支持,因为已知移动的干细胞和祖细胞被吸收并保留在脾脏一段时间。再者,由化合物B与G-CSF联合移动的CFU总数与由化合物A或化合物C与G-CSF联合移动的CFU数量是相当的。
如图11所示,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理导致每毫升血液白细胞数量显著增加。再者,与载体对照联合G-CSF相比,用化合物A、化合物B或化合物C与G-CSF联合处理导致脾脏重量显著增加约2倍。
总之,所述结果表明,示例性PHD抑制剂与G-CSF增强造血干细胞和/或祖细胞的移动。与单独使用G-CSF相比,采用PHD抑制剂和G-CSF组合能使移动的表型HSCs和HSPC的水平显著升高。另外,移动的HSC和HSPC是功能性的,并保留增殖和分化的能力,这可由CFU试验证明。
实施例7
化合物D、E和F增强HSC移动
进一步检测PHD抑制剂形式的HIF-α增效剂增强由G-CSF处理诱导的造血干细胞和/或祖细胞的移动的能力。在上文实施例6所述的雄性7周龄C57BL/6小鼠中检测了与rhuG-CSF组合的化合物D、化合物E和化合物F。化合物D以60mg/kg给予,而化合物E和F以20mg/kg给予。对血液和组织样品进行收集、处理,并通过如实施例6中所述流式细胞术和集落试验进行分析。
与载体对照联合G-CSF相比,化合物D、化合物E或化合物F与G-CSF联合处理没有显著改变BM中HSC和祖细胞的总数。
用化合物D、化合物E或化合物F与G-CSF联合处理后,表型骨髓性祖细胞(LKS-)和造血干细胞和祖细胞(LKS+)到血液和脾脏的总移动示于图12A-B。与载体对照和G-CSF联合相比,用化合物E或化合物F与G-CSF联合处理导致从骨髓移动的HSCs(LSK48-150+)HSPC(LSK48+和LSK)和骨髓性祖细胞(LKS-)的总数显著增加。与载体对照和G-CSF联合相比,化合物D与G-CSF联合显著增加移动的骨髓性祖细胞(LKS)的总数。
与载体对照和G-CSF联合相比,用化合物D、化合物E或化合物F与G-CSF联合处理显著增加从骨髓移动到血液和脾脏的CFU的数量。参见图13。
与载体对照和G-CSF联合相比,用化合物D或化合物E与G-CSF联合处理导致每毫升血液白细胞数量显著增加。此外,与载体对照和G-CSF联合相比,用化合物D、化合物E或化合物F与G-CSF联合处理导致脾脏重量显著增加约2倍。
总之,由示例性的PHD抑制剂获得的结果表明,这些PHD抑制剂增强G-CSF诱导的表型HSC和HSPC的移动。与单独使用G-CSF相比,采用PHD抑制剂和G-CSF组合能使移动的表型HSC和HSPC的水平显著升高。再者,移动的HSC和HSPC是功能性的,并保留增殖和分化的能力,这正如CFU试验所证明。
实施例8
化合物H、J和K增强HSC移动
对另外的PHD抑制剂增强由G-CSF处理诱导的移动的能力进行了检测。在上文实施例6所述的雄性7周龄C57BL/6小鼠中对与G-CSF组合的化合物H、化合物J和化合物K进行检测。化合物H和J以60mg/kg给予,而化合物K以100mg/kg给予。对血液和组织样品进行收集、处理,并通过如实施例6中所述流式细胞术和集落试验进行分析。
与载体对照和G-CSF联合相比,用化合物H、化合物J或化合物K与G-CSF联合处理没有显著改变BM中HSC和祖细胞的总数。
与载体对照和G-CSF联合相比,用化合物H或化合物J与G-CSF联合处理导致移动到血液和脾脏的表型HSC(LSK48-150+)和HSPC(LSK48+和LSK)的总数显著增加。参见图14A-B。
与载体对照相比,用化合物J与G-CSF联合处理导致移动到血液的集落形成单位的数量显著增加。参见图15。与载体对照和G-CSF联合相比,用化合物H或化合物J与G-CSF联合处理导致移动到的脾脏的集落形成单位的数量和移动的CFUs的总数(血液和脾脏)显著增加。用化合物K或载体对照与G-CSF联合处理后,移动到脾脏的CFU数量或CFU总数没有显著变化。用化合物K与G-CSF联合缺乏显著移动可能反映生物利用度差或使用了亚最佳给药方案。
结果表明,所说示例性PHD抑制剂增强了由rhuG-CSF处理诱导的表型HSC和HSPC的移动。与使用载体对照和G-CSF相比,采用PHD抑制剂与G-CSF组合能使移动的表型HSC和HSPC的水平显著升高。另外,移动的HSC和HSPC是功能性的,并保留增殖和分化的能力,这正如CFU试验所证明。
实施例的讨论
本研究首次探索HIF-1α蛋白的药理学稳定对用于移植的HSC移动到血液的体内影响。本发明人发现,采用HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂即化合物X,HIF-1α的药理学稳定与G-CSF和普乐沙福协同作用显著增加从骨髓移动到血液的HSC数量。确实,施用化合物X与G-CSF和普乐沙福的联合给药能使每毫升血液中长期再植的HSC数量增至三倍。使用HIF脯氨酰羟化酶的其他抑制剂(化合物A、B、C、D、E、F、H、J和K)时,也得到类似的结果。最后,Hif1a基因的条件性缺失表明,在HSC中HIF-1α表达对响应G-CSF的有效移动很关键。有趣的是,在小生境细胞(nichecell)如骨祖细胞和成骨细胞中,HSC最佳的移动还需要HIF-1α的存在。
HIF-1α稳定协同增加响应G-CSF和普乐沙福的HSC移动的机制仍不清楚。使HSCs和骨祖细胞中Hif1a的条件性缺失的结果表明,HIF-1α蛋白稳定对HSC移动的显性效果是细胞自主性的,微环境对最大的移动非常重要。
材料和方法
小鼠品系
C57BL/6小鼠购自澳大利亚珀斯的澳大利亚资源中心(AustralianResourceCentre,PerthAustralia)。所有基因修饰的小鼠已经与C56BL/6背景回交至少10次。B6.129-Hif1atm3Rsjo/J(Hif1aflox/flox)小鼠购自杰克逊实验室(JacksonLaboratory)(缅因州巴港,BarHarbor,Maine)。使SclCreER转基因小鼠和在骨祖细胞特异性osterix(Sp7)基因启动子的控制下表达YFP和Cre重组酶的融合蛋白的osxYPFCre小鼠,与C57BL/6背景回交至少10次,SclCreER转基因小鼠表达由HSC特异性Scl基因增强子驱动(11)的他莫昔芬诱导型Cre重组酶,所述增强子即B6-Gt(ROSA)26Sortm1(EYFP)Cos/J(缩写为R26RYFP),其具有侧翼为loxP的STOP序列,随后是插入基因捕获ROSA26基因座中的增强型黄色荧光蛋白报告基因(EYFP)。
具有HIF1A基因HSC特异性他莫昔芬诱导型缺失和YPF报告子诱导的SclCreERR26RYFP/YFPHif1aflox/flox小鼠,以及具有两个Hif1a野生型等位基因的对照SclCreERR26RYFP/YFP小鼠,通过使三个亲本品系而产生。同样,通过将Hif1aflox/flox小鼠与osxCre转基因小鼠和R26RYFP/YFP系杂交而产生osxCreHif1aflox/flox小鼠。通过PCR使用等位基因特异性引物根据耳夹对后代进行基因分型。
移动处理
所有程序都获得昆士兰大学(UnivesityofQueensland)的动物实验伦理委员会批准。所有实验均采用9-12周龄C57BL/6雄性小鼠或与C57BL-6回交至少10次的转基因小鼠执行。皮下注射重组人G-CSF(Amgen公司,ThousandOaks,CA),每日两次,每次注射125μg/kg,连续4天。腹膜内注射普乐沙福(AMD3100十氢氯化物,TocrisBioscience,Bristol,UK),作为相当于10mg/kgAMD3100碱的单剂量16mg/kg。普乐沙福给药1小时后收获组织。每天腹膜内注射化合物X和A-F,每次注射20mg/kg,例外的是化合物D每次注射60mg/kg。化合物H和J以60mg/kg给予,化合物K以100mg/kg给予。对照小鼠注射等体积的生理盐水。在指定的时间点,用异氟烷麻醉小鼠然后心脏穿刺以收获血液。然后通过颈椎脱位对小鼠实施安乐死并收获BM和骨骼。
他莫昔芬对SclCreER转基因的诱导
用在含有10%乙醇的花生油中稀释的他莫昔芬游离碱每日灌饲SclCreER小鼠,持续3天,以诱导SclCreER转基因。在他莫昔芬灌饲的最后一天开始给予G-CSF,共3天。G-CSF处理后,通过颈椎脱位对小鼠实施安乐死并收获骨髓和骨骼。
细胞计数和集落试验
对于骨髓集落试验,将10μL全血或含50000BM或脾脏细胞的白细胞悬液保藏于35mm皮氏培养皿中,用1ml补充了16%甲基纤维素(高粘度MethocellMC,FlukaSigma-Aldrich,StLouis,MO)和35%FCS的IMDM覆盖。加入最佳浓度的小鼠IL-3、IL-6和可溶性试剂盒配体,作为从稳定转染的BHK细胞系的条件培养基。在37℃含有5%CO2的湿润培养箱中培养7天后计数集落。
流式细胞术
用PBS加2%NCS冲洗后,使富集的中央BM细胞在4℃在370×g下沉淀5分钟,并再悬浮于CD16/CD32杂合体2.4G2上清液中,以阻断IgGFc受体。如先前所述,用生物素化的谱系抗体混合物(CD3、CD5、B220、CD11b、GR-1、Ter119)和生物素化的CD41以及链霉亲和素(SAV)-太平洋蓝(PacificBlue)、抗Sca-1-PECY7、抗KIT-APC、CD48-FITC和CD150-PE对HSCs进行染色(17)。从CyAn(DakoCytomation)流式细胞仪获得数据,并在利用FlowJo软件(TreeStar,Ashland,OR)用单色对照补偿后进行分析。
竞争性再植试验
如前所述,在竞争性再植试验中测定竞争性再植HSC中移动的血液样本的含量(12,17)。收获血液前的一天,采用11.0Gy的致死剂量照射受体同类系的B6.SJLCD45.1+雌性小鼠,剂量分两次间隔4小时。来自6只移动的CD45.2+C57BL/6供体小鼠的50μL血样汇集到(pooled)每个治疗组中,从该集合体中取20μL血液等份,与来自未处理的B6.SJLCD45.1+的200,000竞争性全BM细胞混合至总体积200μL的生理盐水中,球后注射到每个致死剂量照射的受体中。移植后头3周用抗生素维持受体,移植后8、12和16周尾部放血以确定在髓、B和T细胞系中CD45.2(试验供体血液)对CD45.1(竞争性全BM细胞)的嵌合性,所述确定通过流式细胞仪,采用CD45.1-PE、CD45.2、别藻蓝蛋白(APC)、CD3-FITC、B220-别藻蓝蛋白(APC)-花青苷(CY)7、CD11b-PECY7、Ly6G太平洋蓝进行。如先前所述,计算再植单位(RU)中的含量(18-19)。
统计学分析
取决于分布常态,采用双尾t检验或非参数曼-惠特尼(Mann-Whitney)分析处理组之间的差异。p<0.05的值被认为是显著。数据表示为平均值±标准偏差。
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Claims (53)
1.HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂用于刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞移动的用途。
2.HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂用于干细胞移植的用途。
3.如权利要求1或2所述的用途,其中所述HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶(PHD)的抑制剂。
4.如权利要求1或2所述的用途,其中所述至少一种动员剂选自集落刺激因子、CXCR4拮抗剂,或它们的组合。
5.如权利要求1或2所述的用途,其中所述至少一种动员剂是G-CSF。
6.如权利要求1或2所述的用途,其中所述至少一种动员剂是普乐沙福。
7.如权利要求1或2所述的用途,其中所述HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂,以及所述至少一种动员剂包含集落刺激因子。
8.如权利要求7所述的用途,其中所述集落刺激因子是G-CSF。
9.如权利要求7所述的用途,其中所述至少一种动员剂进一步包含普乐沙福。
10.如权利要求3所述的用途,其中所述HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂是杂环羧胺化合物。
11.如权利要求10所述的用途,其中所述杂环羧胺化合物是杂环羰基甘氨酸。
12.如权利要求3所述的用途,其中所述HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂选自[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[5-(4-氯-苯氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-5-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-氰基-1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1,3-二环己基-6-羟基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(3,4'-二氟-二苯基-4-基甲基)-5-羟基-6-异丙基-3-氧代-2,3-二氢-哒嗪-4-羰基]-氨基}-乙酸、2-(6-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-[1,2,3]三唑-1-基-1,2-二氢-吡唑-3-酮、[(4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸,和{[5-(3-氟-苯基)-3-羟基-吡啶-2-羰基]-氨基}-乙酸。
13.如权利要求3所述的用途,其中所述HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂是式(I)的化合物、式(II)的化合物、式(III)的化合物或式(IV)的化合物。
14.一种用于将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到供体受试者的外周血液中的方法,所述方法包括、由或基本上由以下组成:同时给予所述受试者有效量的HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞中的至少一种动员剂,以将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到受试者的外周血液中。
15.如权利要求14所述的方法,其中所述受试者患有免疫低下病症或处于获得免疫低下病症的风险中。
16.如权利要求14所述的方法,其中所述受试者患有高增生性细胞紊乱并且已经、正在或将要进行引起或很可能引起免疫低下病症的医学治疗。
17.如权利要求16所述的方法,其中所述高增生性细胞紊乱是癌症或自身免疫性疾病。
18.如权利要求16所述的方法,其中所述高增生性细胞紊乱是选自白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤的癌症。
19.如权利要求14所述的方法,所述方法进一步包括从受试者收集或收获移动的造血干细胞和/或祖细胞。
20.权利要求19所述的方法,所述方法进一步包括培养和/或储存所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞。
21.如权利要求19或20所述的方法,所述方法进一步包括将所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞移植到受体受试者中。
22.如权利要求21所述的方法,其中所述受体受试者是所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞的供体,并且所述移植是自体移植。
23.如权利要求21所述的方法,其中所述受体受试者不是所述收集或收获的移动的造血干细胞和/或祖细胞的供体,并且所述移植是同源移植、同种异体移植或异种移植。
24.如权利要求21-23中任一项所述的方法,其中所述受体受试者患有免疫低下病症或已经在进行导致免疫低下病症的医学治疗。
25.如权利要求21-24中任一项所述的方法,所述方法进一步包括在干细胞移植之前、与干细胞移植同时或在干细胞移植之后给予所述供体受试者有效量的HIF-α增效剂和造血干细胞和/或祖细胞的动员剂,以将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到受试者的外周血液中。
26.如权利要求14所述的方法,其中所述HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶(PHD)的抑制剂。
27.如权利要求26所述的方法,其中所述HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂是杂环羧胺化合物。
28.如权利要求27所述的方法,其中所述杂环羧胺化合物是杂环羰基甘氨酸。
29.如权利要求26所述的方法,其中所述HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂选自[(4-羟基-7-苯巯基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[5-(4-氯-苯氧基)-1-氰基-4-羟基-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸、[(1-氰基-4-羟基-5-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[7-氰基-1-(2-氟-苄基)-4-羟基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-羰基]-氨基}-乙酸、[(1,3-二环己基-6-羟基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-嘧啶-5-羰基)-氨基]-乙酸、{[2-(3,4'-二氟-二苯基-4-基甲基)-5-羟基-6-异丙基-3-氧代-2,3-二氢-哒嗪-4-羰基]-氨基}-乙酸、2-(6-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-[1,2,3]三唑-1-基-1,2-二氢-吡唑-3-酮、[(4-羟基-7-苯氧基-异喹啉-3-羰基)-氨基]-乙酸、{[4-羟基-7-(4-甲氧基-苯氧基)-异喹啉-3-羰基]-氨基}-乙酸,和{[5-(3-氟-苯基)-3-羟基-吡啶-2-羰基]-氨基}-乙酸。
30.如权利要求26所述的方法,其中所述HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂是式(I)的化合物、式(II)的化合物、式(III)的化合物或式(IV)的化合物。
31.如权利要求14所述的方法,其中所述至少一种动员剂选自集落刺激因子、CXCR4拮抗剂或它们的组合。
32.如权利要求14所述的方法,其中所述至少一种动员剂是G-CSF。
33.如权利要求14所述的方法,其中所述至少一种动员剂是普乐沙福。
34.如权利要求14所述的方法,其中所述HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂,并且所述至少一种动员剂包含集落刺激因子。
35.如权利要求34所述的方法,其中所述集落刺激因子是G-CSF。
36.如权利要求35所述的方法,其中所述至少一种动员剂进一步包含普乐沙福。
37.如权利要求14所述的方法,其中将所述动员剂和HIF-α增效剂同时给予所述受试者。
38.如权利要求14所述的方法,其中在给予所述动员剂之前将所述HIF-α增效剂给予所述受试者。
39.如权利要求14所述的方法,其中在给予所述动员剂给药之后将所述HIF-α增效剂给予所述受试者。
40.一种用于增加在受试者中的药物剂量的方法,其中所述药物导致患免疫低下病症或增加患免疫低下病症的风险,所述方法包括、由或基本上由以下组成:将所述药物以通常诱导副作用的剂量,与有效量的造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂和HIF-α增效剂一起同时给予所述受试者,以抑制或预防所述副作用的诱导。
41.如权利要求40所述的方法,其中所述HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶(PHD)的抑制剂。
42.如权利要求40所述的方法,其中所述至少一种动员剂选自集落刺激因子、CXCR4拮抗剂或它们的组合。
43.如权利要求40所述的方法,其中所述至少一种动员剂是G-CSF。
44.如权利要求40所述的方法,其中所述至少一种动员剂是普乐沙福。
45.如权利要求40所述的方法,其中所述HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂,并且所述至少一种动员剂包含集落刺激因子。
46.如权利要求45所述的方法,其中所述集落刺激因子是G-CSF。
47.如权利要求46所述的方法,其中所述至少一种动员剂进一步包含普乐沙福。
48.HIF-α增效剂用于刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞的移动的用途。
49.HIF-α增效剂用于干细胞移植的用途。
50.如权利要求48或49所述的用途,其中在同时给予造血干细胞和/或祖细胞的至少一种动员剂的供体受试者中,使用所述HIF-α增效剂来刺激或增强造血干细胞和/或祖细胞的移动。
51.一种用于将造血干细胞和/或祖细胞从骨髓中移动到供体受试者的外周血液中的方法,所述方法包括,给予所述受试者有效量的HIF-α增效剂,以将造血干细胞和/或祖细胞从所述骨髓中移动到所述受试者的外周血液中。
52.如权利要求51所述的方法,其中同时给予所述供体受试者造血干细胞和/或祖细胞中的至少一种动员剂。
53.如权利要求48、49或50所述的用途,或权利要求51或52所述的方法,其中所述HIF-α增效剂是HIF脯氨酰羟化酶的抑制剂,并且所述造血干细胞和/或祖细胞中的至少一种动员剂是集落刺激因子。
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