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Abstract

一种绿脓杆菌分子分型方法，它涉及一种绿脓杆菌的分型方法。本发明绿脓杆菌分子分型方法：一、菌株收集；二、药物敏感实验；三、基因分型：建立绿脓杆菌AFLP分型的实验条件，然后聚类分析。本发明AFLP采用Pst？I酶切，将24株临床株分为10个群21个型，成功建立了绿脓杆菌AFLP分子分型方法。

Description

一种绿脓杆菌分子分型方法
技术领域
本发明涉及一种绿脓杆菌的分型方法。
背景技术
铜绿假单胞菌是临床上最常见的条件致病菌之一，广泛分布于自然界、正常人皮肤、肠道、呼吸道，医院病房及医疗器械等均有此菌的存在，故很容易造成机会性感染，易呈多重耐药的特性，己逐渐成为医院感染的主要病原菌，常引起肺炎、泌尿系感染、菌血症、烧伤感染和囊性纤维化继发感染。对于机体免疫力低下，年龄较大，气管切开或插管等侵入性操作的患者，重症监护病房患者及长期应用广谱抗生素的患者更成为该菌感染等的主要对象。能够准确的对绿脓杆菌进行分型对绿脓杆菌的防治具有重大的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种绿脓杆菌分子分型方法。
本发明绿脓杆菌分子分型方法：
一、菌株收集；
二、药物敏感实验；
三、基因分型：建立绿脓杆菌AFLP分型的实验条件，然后聚类分析，即实现绿脓杆菌分子分型。
AFLP的基本原理就是利用PCR技术选择性扩增基因组DNA限制性内切酶单酶切的限制性片段。基因组DNA经限制性内切酶消化后，将双链NDA接头(adapter)连接于限制性片段的两端。然后根据接头序列和限制位点邻近区域的碱基序列，设计一个3'末端含数个随机变化的选择性碱基的PCR引物进行特异性扩增，只有那些限制位点的侧翼序列与引物3'末端选择碱基相匹配的限制片段才能得以扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离显示其多态性，当不同基因组DNA中因限制性酶切位点的数量和位置不同时，产生一系列大小位置不同的条带，不同谱带显示多态性。
本发明共分离到126株临床感染绿脓杆菌，对15种常用抗生素(青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺类、氨基糖甙类、喹诺酮类、磺胺类)均表现出不同程度的耐药。未发现泛耐药及全敏感菌株。分离株几乎对所有的青霉素类、磺胺类及一代头孢菌素表现出全耐药，对氨基糖甙类、喹诺酮类，特别是碳青霉烯类和三代头孢敏感性较高。AFLP采用PstI酶切，将24株临床株分为10个群21个型，成功建立了绿脓杆菌AFLP分子分型方法。
AFLP技术作为流行病学分型的快速筛查方法，其高度的重复性和一致率，已世所公认。相对于其他分子分型技术，扩增片段长度多态性分析的最大优点在于扩增产物可以直接在琼脂糖凝胶上进行电泳分析，不需要探针杂交，无需费时的引物选择，不要求特别的仪器设备，在普通的PCR实验室即可进行操作，实验重复性好，结果稳定可靠。AFLP技术也有其缺陷：首先，该技术对基因组的纯度、浓度，电泳的时间、温度等均有一定要求，需要经验丰富的专业操作人员在严格规范的实验条件下进行操作。其次，由于AFLP技术对全基因组进行分析，信息量大，片段多，分析及比对十分困难。
附图说明
图1是实施例1中1～12号菌株电泳结果。
图2是实施例1中13～24号菌株电泳结果。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式绿脓杆菌分子分型方法：
一、菌株收集；
二、药物敏感实验；
三、基因分型：建立绿脓杆菌AFLP分型的实验条件，然后聚类分析，即实现绿脓杆菌分子分型。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤二采用纸片扩散法对菌株进行抗生素敏感性试验。其它与实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点是：步骤二具体操作步骤为：选取麦康凯平板纯培养的单个菌落，用生理盐水将浓度调至0.5麦氏管浊度；然后用无菌棉签蘸取校正好的菌液，在管内壁将多余的菌液旋转挤去后，在M'H琼脂表面均匀涂布三次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹l周；再置室温下干燥3～5分钟，贴上抗生素纸片，纸片与纸片的距离不得小于24mm；37℃孵育16～18小时，用卡尺测量其抑菌圈直径。其它与实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二或三的不同点是：步骤三AFLP采用PstI酶切。其它与实施方式一、二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一的不同点是：步骤三具体操作步骤为：①、细菌基因组DNA提取；②、限制性酶切连接反应；③、酶切产物的纯化；④、选择性PCR扩增；⑤、聚类分析。其它与实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一的不同点是：步骤三⑤、聚类分析：
以条带的选择为基础，AFLP扩增产物以0、1统计，在相同迁移位置上有扩增带的标记为1，无扩增带者标记为0；在150～2000bp条带分析范围内，使用Checkcross软件，按容许误差虫≤2.0％、最优化位置≤0.5％方式进行处理；形成二进制数列的距阵图，数据导入NTSYS-pc软件，应用Dice系数，按非算术平均数的加权配对法进行聚类分析。其它与实施方式一至五之一相同。
实施例1
绿脓杆菌分子分型：
一、菌株收集：对哈尔滨地区三所三甲医院(哈尔滨医科大学附属第二医院、黑龙江省医院、哈尔滨市第五医院)住院的医院感染患者送检的痰、血液、尿液、粪便和脓液等样本，由医院进行样本的初步分离鉴定，并剔除同一患者相同样本重复菌株，总共获得菌株126株。
标准菌株是铜绿假单胞菌ATCC27853及大肠杆菌ATCC25922，均购自中国医学微生物菌种保藏中心。
二、药物敏感实验：选取麦康凯平板纯培养的单个菌落，用生理盐水将浓度调至0.5麦氏管浊度；然后用无菌棉签蘸取校正好的菌液，在管内壁将多余的菌液旋转挤去后，在M'H琼脂表面均匀涂布三次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹l周；再置室温下干燥3～5分钟，贴上抗生素纸片，纸片与纸片的距离不得小于24mm；37℃孵育16～18小时，用卡尺测量其抑菌圈直径。
三、基因分型：①、细菌基因组DNA提取，基因组提取试剂盒说明书提取绿脓基因组DNA，用紫外分光光度仪分析OD260/OD280，分析提取的DNA的纯度，并确定所提取的DNA的含量；
②、限制性酶切(PstI酶切)连接反应；
③、酶切产物的纯化，酶切连接产物中加入47μL蒸馏水，33μL醋酸铵，配成100μL体系；按以下步骤纯化：(1)加入100μL的冷乙醇，室温放置5min，12000×g离心力离心10min；
(2)去上清，加入70％乙醇洗涤，12000×g离心力离心10min；
(3)去上清，风干，pH8.0TE重悬，溶解。4℃短期保存，-20℃长期保存，作为选择性PCR扩增的模板DNA；
④、选择性PCR扩增，酶切连接的纯化产物，以蒸馏水进行适当的稀释后，取以5μL作为PCR扩增的模板DNA；扩增参数：94℃4min；(94℃1min，60℃lmin，72℃2.5min)，33个循环；电泳：10μL扩增物，以0.75μgMarker为分子量标记，1.6％琼脂糖(含0.59μg/mlEB)，1.0×TBE电泳缓冲液，5V/cm电压，电泳4～4.5h，凝胶成像系统拍照，BIO-RAD软件分析电泳结果；
⑤、聚类分析，以条带的选择为基础，AFLP扩增产物以0、1统计，在相同迁移位置上有扩增带的标记为1，无扩增带者标记为0；在150～2000bp条带分析范围内，使用Checkcross软件，按容许误差虫≤2.0％、最优化位置≤0.5％方式进行处理；形成二进制数列的距阵图，数据导入NTSYS-pc软件，应用Dice系数，按非算术平均数的加权配对法进行聚类分析。
本实施例步骤二按照美国国家临床实验室标准化委员会美国实验室标准化研究所(CLSI)2007年版的标准判断结果，以敏感(susceptibleS)、中介(intermediateI)、耐药(resistantR)报告结果，判定标准见表1。
表1常用抗生素抑菌耐药判定标准
本实施例限制性酶切反应按表2中的组分配置反应体系，37℃水浴3h。
表2
实验结果：
126株PA主要分离自痰培养102株(80.95％)，其次是尿培养8株，由PA引起的医院感染主要发生于内科、外科及ICU病房，其构成比分别是30.95％、29.37％及21.43％，结果见表3。
表3菌株的标本来源及科室分布(n，％)
医院感染PA主要来源于痰液检出率高达80.95％，说明医院感染主要以呼吸道感染为主，原因可能与呼吸道感染症状明显、病原学检查标本易留取、疾病易于诊断有关。控制呼吸道感染是今后医院感染预防控制的重点。另外，来自内科、外科及ICU病房的PA感染占81.75％的比例，可能与入住患者病情重、住院时间长、各种侵袭性操作如气管切开、泌尿道插管等使用多且持续时间长，加之抗菌药物及放化疗治疗等有关，因此，对上述患者应尽量减少侵袭性操作，并注意增强其抵抗力，做好室内空气、物品及医护人员手的消毒工作。
126株临床分离的PA对15种常用抗生素均表现出不同程度的耐药性。耐药率从高到低依次如下：CZO(99.7％)、SAM(99.5％)、AMP(98.9％)、SXT(98.7％)、CTX(80.6％)、GEN(50.8％)、ATM(46.5％)、TZP(45.1％)、FEP(44.7％)、LVX(39.9％)、MEM(39.1％)、CAZ(38.0％)、AMK(37.5％)、CIP(37.096)、IPU(34.6％)。未发现泛耐药及全敏感菌株。
哈尔滨地区收集到的126株医院感染PA对15种抗生素均表现出不同程度的耐药性，其中有28株表现为多重耐药，多重耐药率达22.3％。药敏结果显示，头孢唑啉(99.7％)、氨苄西林/舒巴坦(99.5％)、氨苄西林(98.9％)、复方新诺明(98.7％)，耐药率高达98％及以上，该几种药物已经完全失去抗菌功能，临床上不应该常规使用；对β-内酰胺类抗生素的耐药性较低的分别是头孢他啶(37.5％)、哌拉西林/他唑巴坦(44.4％)、头孢砒肟(44.7％)和氨曲南(46.5％)，说明头孢他啶仍是该地区治疗PA感染的首选β-内酰胺类药物，但是第三代头孢菌素对细菌耐药性的产生有强大的诱导作用，从而导致铜绿假单胞菌对头孢菌素的敏感率不断下降，所以应严格控制三代头孢菌素的应用；氨基糖甙类药物阿米卡星在本组研究中的耐药性为37.5％，但因其有耳毒性、肾毒性，临床上不建议作为首选药物；环丙沙星和左氧氟沙星作为喹诺酮类抗生素的典型代表，耐药率分别为37.0％和39.6％，应该注意的是，该类药物因有中枢神经系统反应和影响软骨发育的副作用，临床上应该特别注意用药指征；作为多重耐药PA理想治疗药物的碳青霉稀类，在本实验中亚胺培南和美罗培南的耐药率分别是34.6％和39.1％。
AFLP分析结果：从不同科室、不同来源中选取24株绿脓杆菌进行AFLP分析。都扩增得到带型清晰的DNA指纹图谱(如图1、图2)。鉴于部分菌株在2000～2500bp之间条带较淡，且片段大小分析时容易产生误差，故只对150～2000bp之间的片段进行分析。经Checkcross软件分析，24株绿脓杆菌，经AFLP-Pstl-G引物在29条不同位置共扩增251条带，平均每个菌株扩增10.46条带。其中1、4、5、20、21号菌株扩增效率最高，均为12条带；8、11号菌株扩增效率最低，共7条带。
24株绿脓杆菌，经Checkcross软件对AFLP扩增图谱进行分析，共分为21个不同的AFLP型。以NTSYS-pc软件进行聚类分析.按Dice系数≥0.8，作为流行病学相关菌源的判定标准，结果21个不同的AFLP型，可归类为10个群，依次A、B、C、D至J的顺序进行排列(见表4)，每一个群所包含的菌株数分别占总菌株数的41.67％、8.33％、8.33％、833％、4.17％、8.33％、4.17％、4.17％、8.33％、4.17％。A群为优势苗群，包括7个AFLP型，共10株菌；B、C、D、F、J群均为两个AFLP型2株菌；而E、G、H、J群则均只有一个AFLP型一株菌。
表4
应用了AFLP技术，对哈尔滨地区临床收集的24株绿脓杆菌进行了分子分型。本次研究没有发现该地区有优势AFLP型，大多AFLP型都只有单一菌株，最多的一型也只有3株同型菌株。该地区有一明显优势菌群：AFLP-A群，24株分型菌株中有10株(占41.67％)同属于该群，而其他B～J群均只有1～2个AFLP型。
实验结果说明AFLP是一种稳定、精确的基因分型方法，适合作为院内感染的同源性分析；同时，PA的耐药性与AFLP分型无直接联系。

Claims (6)

1.一种绿脓杆菌分子分型方法，其特征在于按以下步骤对绿脓杆菌进行分子分型：
一、菌株收集；
二、药物敏感实验；
三、基因分型：建立绿脓杆菌AFLP分型的实验条件，然后聚类分析，即实现绿脓杆菌分子分型。
2.根据权利要求1所述的绿脓杆菌分子分型方法，其特征在于步骤二采用纸片扩散法对菌株进行抗生素敏感性试验。
3.根据权利要求2所述的绿脓杆菌分子分型方法，其特征在于步骤二具体操作步骤为：选取麦康凯平板纯培养的单个菌落，用生理盐水将浓度调至0.5麦氏管浊度；然后用无菌棉签蘸取校正好的菌液，在管内壁将多余的菌液旋转挤去后，在M'H琼脂表面均匀涂布三次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹l周；再置室温下干燥3～5分钟，贴上抗生素纸片，纸片与纸片的距离不得小于24mm；37℃孵育16～18小时，用卡尺测量其抑菌圈直径。
4.根据权利要求1所述的绿脓杆菌分子分型方法，其特征在于步骤三AFLP采用PstI酶切。
5.根据权利要求1所述的绿脓杆菌分子分型方法，其特征在于步骤三具体操作步骤为：①、细菌基因组DNA提取；②、限制性酶切连接反应；③、酶切产物的纯化；④、选择性PCR扩增；⑤、聚类分析。
6.根据权利要求5所述的绿脓杆菌分子分型方法，其特征在于步骤三⑤、聚类分析：
以条带的选择为基础，AFLP扩增产物以0、1统计，在相同迁移位置上有扩增带的标记为1，无扩增带者标记为0；在150～2000bp条带分析范围内，使用Checkcross软件，按容许误差虫≤2.0％、最优化位置≤0.5％方式进行处理；形成二进制数列的距阵图，数据导入NTSYS-pc软件，应用Dice系数，按非算术平均数的加权配对法进行聚类分析。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102947467A (zh) * 2010-02-26 2013-02-27 肯塔生物技术股份公司 铜绿假单胞菌血清分型检测方法和试剂盒以及用于该方法和试剂盒的寡核苷酸序列
CN104745677A (zh) * 2013-12-30 2015-07-01 黑龙江省科学院大庆分院 大豆疫霉菌对甲霜灵抗性的aflp指纹图谱构建

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102947467A (zh) * 2010-02-26 2013-02-27 肯塔生物技术股份公司 铜绿假单胞菌血清分型检测方法和试剂盒以及用于该方法和试剂盒的寡核苷酸序列
CN104745677A (zh) * 2013-12-30 2015-07-01 黑龙江省科学院大庆分院 大豆疫霉菌对甲霜灵抗性的aflp指纹图谱构建

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAN SPEIJER ET AL.: ""Application of Different Genotyping Methods for Pseudomonas aeruginosa in a Setting of Endemicity in an Intensive Care Unit"", 《JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY》 *
JEAN-PAUL PIRNAY ET AL.: ""Pseudomonas aeruginosa displays an epidemic population structure"", 《ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 *
娄静等: ""AFLP 技术在细菌学分型和流行病学调查中的应用"", 《疾病监测》 *
邢进: ""北京地区实验动物中绿脓杆菌耐药分析及PFGE和MLVA分型方法比较"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

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