CN105358560B - 双重选择性PI3δ和γ激酶抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及双重delta(δ)及gamma(γ)PI3K蛋白激酶调节剂、其制备方法、含有其的药物组合物及用其治疗、预防和/或改善Pi3K激酶介导的疾病或病症的方法。

Description

双重选择性PI3δ和γ激酶抑制剂

本申请要求2013年6月7日提交的印度专利申请第2501/CHE/2013号以及2013年12月3日提交的印度专利申请第5567/CHE/2013号的权益，每篇申请均据此以引用的方式全文并入。

发明领域

本发明提供双重delta(δ)及gamma(γ)PI3K蛋白激酶调节剂、其制备方法、含有其的药物组合物以及用其治疗、预防和/或改善Pi3K激酶介导的疾病或病症的方法。

发明背景

磷酸肌醇-3激酶(PI3K)属于一类细胞内脂质激酶，所述激酶磷酸化磷酸肌醇脂质(PI)的肌醇环的3位羟基，从而产生脂质第二信使。虽然α及β同种型的普遍分布，但δ和γ的表达只限于循环造血细胞及内皮细胞。与PI3K-α或β不同，缺乏γ或δ表达的小鼠不显示任何不利的表型，表明这些特定同种型的靶向不会导致明显的毒性。

最近，已提出将磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)途径的靶向抑制剂作为免疫调节剂。此兴趣源于以下事实：PI3K途径在免疫细胞信号传导中主要经由产生一种膜结合的第二信使磷脂酰肌醇(3，4，5)-三磷酸(PIP3)发挥多重功能。PIP3将蛋白质募集至脂质双层的细胞质侧，包括蛋白激酶及GTP酶，引发在免疫细胞黏着、迁移以及细胞-细胞通讯的调节中重要的下游信号传导级联的复杂网络。

4种I类PI3K同种型在其组织分布方面显著不同。PI3Kα和PI3Kβ是普遍存在的且是受体酪氨酸激酶(RTK)的经活化的下游，而PI3Kδ和PI3Kγ主要限于造血及内皮细胞且分别是RTK和G蛋白偶联受体(GPCR)的经活化的下游。小鼠遗传学研究已揭露PI3Kα和PI3Kβ对正常发育而言必不可少，而PI3Kδ和/或PI3Kγ的损失得到具有选择性免疫缺陷的可存活的后代。

PI3Kδ和PI3Kγ的表达模式及功能已使得对开发PI3Kδ/γ抑制剂作为用于以下许多疾病的药剂产生极大的兴趣，所述疾病包括类风湿性关节炎、过敏、哮喘、慢性阻塞性肺病及多发性硬化症(Hirsch等人，Pharmacol.Ther.，118，192-205，2008；Marone等人，Biochim.Biophys.Acta.，1784，159-185，2008；Rommel等人，Nat.Rev.Immunol.，7，191-201，2007；Ruckle等人，Nat.Rev.Drug Discov.，5，903-918，2006)。使用药理学方法及遗传学方法两者的研究已显示该两种同种型经常显示彼此协同的相互作用(Konrad等人，J.Biol.Chem.，283，33296-33303，2008；Laffargue等人，Immunity，16，441-451，2002)。举例而言，在肥大细胞中，PI3Kδ对响应于Fc-受体的IgE交联的去颗粒而言必不可少(Ali等人，J.Immunol.，180，2538-2544，2008)，但PI3Kγ在放大该反应中发挥重要作用(Laffargue等人，Immunity，16，441-451，2002)。类似作用已见于其它细胞功能中，包括淋巴细胞归巢及嗜中性粒细胞呼吸爆发，其中PI3Kγ发挥关键作用且PI3Kδ放大每个过程。PI3Kδ和PI3Kγ的非冗余但相关的作用使得难以确定两种同种型(单独或组合)中的哪种在特定炎症性病症中得以最佳靶向。使用缺乏PI3Kδ和/或PI3Kγ或表达PI3Kδ和PI3Kγ的激酶-死变体的小鼠的研究在理解其作用方面是有价值的工具。举例而言，PI3Kδ敲除小鼠显示出降低的嗜中性粒细胞趋化性、减少的抗体产生(T细胞依赖性和非依赖性两者)(Jou等人，Mol.Cell.Biol.，22，8580-8591，2002)、减少数量的成熟B细胞(Clayton等人，J.Exp.Med.，196，753-763，2002；Jou等人，Mol.Cell.Biol.，22，8580-8591，2002)、以及响应于抗IgM在其增殖方面的减少(Jou等人，2002)。此表型在PI3Kδ激酶-死变体中有复制且使用PI3Kδ选择性抑制剂时，伴随减少数量的肥大细胞及肥大细胞增殖以及减弱的过敏反应。PI3Kγ敲除含有较大数量但较小响应性的嗜中性粒细胞、较小数量且较小响应性的巨噬细胞，并且树突细胞呈现减少的肥大细胞去颗粒(Laffargue等人，2002)、较高比率的CD4+与CD8+T细胞)、增加的胸腺细胞凋亡、CXCR3对活化T细胞减少的诱导以及减弱的心肌收缩力。对心脏组织的后一种作用是对于以PI3Kγ抑制剂向患者长期给药的担忧。然而，此问题在当PI3Kγ激酶-死变体(其更好地模拟激酶的抑制而非蛋白质的损失)显示类似的免疫细胞表型时得以极大地缓和，但重要的是没有心脏缺陷。心脏作用在后来显示系由于支架作用而非PI3Kγ的催化活性导致。双重PI3Kδ/PI3Kγ敲除是可行的但在T细胞发育及胸腺细胞存活方面呈现出严重缺陷。PI3Kγ敲除/PI3Kδ激酶-死亡组合产生类似表型，表明至少在免疫系统内部，PI3Kδ的作用或许仅是催化作用。使用敲除及激酶死亡小鼠解释研究可具有挑战性，此是由于所述模型仅提供免疫系统的稳态图片，缺乏暂时的及剂量控制，并且不允许充分了解动态免疫反应将如何对可逆性抑制做出反应。具有变化型态的选择性抑制剂(PI3Kδ、PI3Kγ及PI3Kδ/γ)为白细胞信号传导研究所必需的，以便评定每种PI3K对免疫细胞活化的相对贡献(Olusegon等人，Chemistry&Biology，1，123-134(2010)，包括其中所引用的参考文献)。

δ/γ的双重抑制被强烈地视为气道的过敏性及非过敏性炎症以及其它自身免疫疾病中的干预策略。对于PI3K-δ和γ参与哮喘及COPD中所潜在的各种细胞过程中的科学证据源于抑制剂研究及基因靶向方法。再者，对于常规疗法诸如皮质类固醇在若干COPD患者中的抗性已归因于PI3Kδ/γ途径的上调。因此，PI3K-δ/γ信号传导的中断提供一种目的在于抵消免疫炎性反应的新型策略。由于PI3K-δ和γ在介导炎症细胞功能性诸如白细胞迁移和活化以及肥大细胞去颗粒中所发挥的关键性作用，所以阻断这些同种型也可能为治疗类风湿性关节炎同样有效的策略。鉴于这些同种型在免疫监督中确定的关键性，特别是靶向δ和γ同种型的抑制剂将预期减缓在气道炎症和类风湿性关节炎中所遭遇的免疫反应的进展(William等人Chemistry&Biology，17，123-134，2010以及Thompson等人Chemistry&Biology，17：101-102，2010)。

关于PI3K及相关蛋白激酶途径的综述及研究已由以下给出：Liu等人，NatureReviews Drug Discovery，8，627-644，2009)；Nathan T.等人，Mol Cancer Ther.，8(1)，2009；Marone等人，Biochimica et Biophysica Acta，1784，159-185，2008以及Markman等人，Annals of Oncology Advance Access，2009年8月出版。类似地，关于PI3Kδ和γ的作用的综述及研究已由以下给出：William等人，Chemistry&Biology，17，123-134，2010以及Timothy等人J.Med.Chem.，55(20)，8559-8581，2012。所有这些文献公开内容均据此以全文引用的方式并入。

化合物诸如IPI-145及CAL130已经报导作为Pi3Kδ/γ的双重抑制剂。IPI-145是在用于癌症、哮喘以及类风湿性关节炎的临床研究中。IPI-45已经报导具有75mg BID的最大耐受剂量(MTD)(第55届Annula Meeting New Oreleans-LA，2013年12月7-10日)。没有关于CAL-130出于临床目的而在研究中的报导。

仍然存在对于用于治疗与δγPI3K激酶介导的事件相关联的疾病及病症的双重δ/γPI3K调节剂的未满足的需要。

在本文中对国际公布第WO 11/055215号和第WO 12/151525号以及美国公布第2011/0118257号及第2012/0289496号做出进一步参考，每篇公布以全文引用的方式并入本文中。

发明概述

本发明涉及PI3Kδ和γ蛋白激酶的选择性双重抑制剂。这些化合物适用于治疗PI3K相关疾病、病症或疾患例如增殖性疾病，诸如癌症的药物组合物中。PI3Kδ和γ蛋白激酶两者的抑制可在某些疾病及病症的治疗中提供有益的作用。

本发明的选择性双重抑制剂包括下列化合物、其药学上可接受的盐及其前药：

(RS)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物A)

(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物A1)

(R)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物A2)

本发明化合物的化学结构如下显示。

在一个实施方案中，本发明涉及化合物(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，化合物(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮或其药学上可接受的盐基本上不含(例如，含有小于约10重量％，诸如小于约5重量％、小于约2.5重量％、小于约1重量％、小于约0.1重量％或不含)(R)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮及其药学上可接受的盐。

在另一实施方案中，化合物(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮或其药学上可接受的盐具有大于约90％，诸如大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％、大于约98％、大于约99％、大于约99.5％、大于约99.9％或大于约99.99％的对映异构体过量。

在一个优选实施方案中，本发明涉及化合物(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物A1)。

本发明进一步提供一种药物组合物，其包含一种或多种本发明化合物(诸如化合物A1)以及药学上可接受的载剂。药物组合物可进一步包含一种或多种其它活性剂(诸如下文讨论的抗癌剂及活性剂)。在一个实施方案中，药物组合物包括治疗有效量的一种或多种本发明化合物。

另一实施方案为一种通过向患者施用有效量的至少一种本发明化合物在患者中抑制PI3Kδ和γ的方法。

又一实施方案为一种通过向患者施用有效量的至少一种本发明化合物在患者中治疗、预防和/或抑制PI3K蛋白激酶介导的疾病、病症或疾患(诸如癌症或其它增殖性疾病或病症)的方法。

本发明的又一实施方案为一种通过向患者施用有效量的至少一种本发明化合物在患者中抑制PI3K、特别是PI3Kδ和γ激酶的方法。

本发明的又一实施方案为一种通过向需要该治疗的患者施用有效量的至少一种本发明化合物而经由调节蛋白激酶(诸如PI3δ和γ激酶)来治疗炎症性、自身免疫或增殖性疾病的方法。在一个实施方案中，本发明化合物抑制PI3Kδ和γ蛋白激酶两者。

本发明的又一实施方案为一种通过向需要该治疗的患者以与至少一种其它抗炎剂、免疫调节剂或抗癌剂(或其组合)组合(同时或依次)施用有效量的至少一种本发明化合物而经由调节蛋白激酶(诸如PI3δ和γ激酶)来治疗炎症性、自身免疫或增殖性疾病的方法。在一个实施方案中，本发明化合物抑制PI3Kδ和γ蛋白激酶两者。

本发明化合物适用于治疗多种癌症，所述癌症包括但不限于以下：

癌瘤，包括但不限于膀胱癌、乳房癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌以及皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴系的造血系肿瘤，包括但不限于白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin′s lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤及伯基特淋巴瘤(Burkett′s lymphoma)；

骨髓系的造血系肿瘤，包括但不限于急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征及早幼粒细胞性白血病；

间充质来源的肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤及横纹肌肉瘤；

中枢及末梢神经系统的肿瘤，包括但不限于星形细胞瘤(astrocytoma)、神经母细胞瘤、神经胶质瘤及神经鞘瘤；以及

其它肿瘤，包括但不限于黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤(keratoctanthoma)、甲状腺滤泡性癌症及卡波西氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma)。

在一个实施方案中，施用本发明化合物以治疗白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征及早幼粒细胞性白血病。

由于蛋白激酶一般而言在调节细胞增殖中的关键作用，所以本发明的蛋白激酶抑制剂可充当可逆性细胞生长抑制剂，且可因此适用于治疗特征为异常细胞增殖的任何疾病过程，例如，良性前列腺肥大、家族性腺瘤病息肉病、神经纤维瘤病、动脉粥样硬化、肺纤维化、关节炎、银屑病、血管球性肾炎、血管成形术或血管手术后的再狭窄、肥厚性瘢痕形成、炎症性肠病、移植排斥、内毒素性休克以及真菌感染。

作为细胞凋亡调节剂的本发明化合物适用于治疗癌症(包括但不限于在上文中所提及的那些类型)、病毒感染(包括但不限于疱疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus)及腺病毒)、自身免疫疾病(包括但不限于系统性红斑狼疮、自身免疫介导的血管球性肾炎、类风湿性关节炎、银屑病、炎症性肠病及自身免疫性糖尿病)、神经变性病症(包括但不限于阿尔茨海默氏病、AIDS相关性痴呆、帕金森氏症、肌萎缩性侧索硬化、色素性视网膜炎、脊髓性肌萎缩及小脑变性)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、与心肌梗塞相关的缺血性损伤、中风及再灌注损伤、心律不齐、动脉粥样硬化、毒素诱发或酒精相关的肝病、血液系统疾病(包括但不限于慢性贫血及再生障碍性贫血)、肌骨胳系统的退行性疾病(包括但不限于骨质疏松症及关节炎)、阿斯匹林敏感性鼻窦炎、囊肿性纤维化、多发性硬化症、肾病以及癌症疼痛。本发明化合物也适用于预防、抑制或遏止HIV感染个体中的AIDS发展。

本发明化合物可调节细胞RNA及DNA合成的程度。这些试剂因此适用于治疗病毒感染，包括但不限于HIV、人类乳头状瘤病毒、疱疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏病毒、辛德毕斯病毒及腺病毒。

本发明化合物适用于癌症的化学预防。化学预防是定义为通过阻断起始性突变诱发事件或通过阻断已遭受损伤的前恶性细胞的进展来抑制侵袭性癌症的发展，或抑制肿瘤复发。本发明化合物也适用于抑制肿瘤血管生成及转移。本发明的一个实施方案为一种通过施用有效量的一种或多种本发明化合物在有此需要的患者中抑制肿瘤血管生成或转移的方法。

本发明的另一实施方案为一种治疗以下的方法：免疫系统相关疾病(例如自身免疫疾病)、涉及炎症的疾病或病症(例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、炎症性肠病、肾沉淀性肾炎、神经炎症性疾病、多发性硬化症、葡萄膜炎及免疫系统病症)、癌症或其它增殖性疾病、肝疾病或病症或肾疾病或病症。所述方法包括施用有效量的一种或多种本发明化合物。

免疫病症的实例包括但不限于银屑病、类风湿性关节炎、血管炎、炎症性肠病、皮炎、骨关节炎、哮喘、炎症性肌肉疾病、过敏性鼻炎、阴道炎、间质性膀胱炎、硬皮病、骨质疏松症、湿疹、同种异体或异种移植(器官、骨髓、干细胞及其它细胞及组织)移植物排斥、移植物抗宿主疾病、红斑狼疮、炎症性疾病、I型糖尿病、肺纤维化、皮肌炎、休格伦氏综合征(Sjogren′s syndrome)、甲状腺炎(例如桥本氏(Hashimoto′s)及自身免疫甲状腺炎)、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血、多发性硬化症、囊肿性纤维化、慢性复发性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、过敏性结膜炎及异位性皮炎。

在一个实施方案中，本文所述的化合物适用作免疫抑制剂以预防移植移植物排斥、同种异体或异种移植排斥(器官、骨髓、干细胞、其它细胞及组织)以及移植物抗宿主疾病。在其它实施方案中，移植移植物排斥是由组织或器官移植引起。在另外的实施方案中，移植物抗宿主疾病是由骨髓或干细胞移植引起。一个实施方案为一种通过施用有效量的一种或多种本发明化合物预防或降低移植移植物排斥、同种异体或异种移植排斥(器官、骨髓、干细胞、其它细胞及组织)或移植物抗宿主疾病的风险的方法。

本发明化合物也适用于与以下各项组合(共同或依次施用)：已知的抗癌治疗，诸如放射疗法或细胞生长抑制剂或细胞毒性剂或抗癌剂，诸如DNA相互作用剂，诸如顺铂或阿霉素；拓扑异构酶II抑制剂，诸如依托泊苷；拓扑异构酶I抑制剂，诸如CPT-11或拓扑替康；微管蛋白相互作用剂，诸如紫杉醇、多西紫杉醇或埃博霉素(例如伊沙匹隆)，天然出现的或合成的；激素剂，诸如三苯氧胺；胸苷酸合酶抑制剂，诸如5-氟尿嘧啶；及抗代谢物，诸如氨甲蝶呤、其它酪氨酸激酶抑制剂诸如易瑞沙(Iressa)及OSI-774；血管生成抑制剂；EGF抑制剂；VEGF抑制剂；CDK抑制剂；SRC抑制剂；c-Kit抑制剂；Her1/2抑制剂及针对生长因子受体的单株抗体，诸如爱必妥(erbitux)(EGF)及赫赛汀(herceptin)(Her2)以及其它蛋白激酶调节剂。

本发明化合物也适用于与一种或多种类固醇抗炎药物、非甾类抗炎药物(NSAID)或免疫选择性抗炎衍生物(ImSAID)组合(共同或依次施用)。

本发明进一步提供一种药物组合物，其包含一种或多种本发明化合物以及药学上可接受的载剂。药物组合物可进一步包含一种或多种以上所鉴定的活性成分，诸如其它抗癌剂。

又一实施方案为一种通过施用治疗有效量的本发明化合物来治疗有此需要的患者的白血病的方法。举例而言，本发明化合物有效用于治疗慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、急性骨髓性白血病(AML)、多发性骨髓瘤(MM)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)以及无痛非霍奇金氏淋巴瘤(I-NHL)。

又一实施方案为一种通过施用治疗有效量的本发明化合物来治疗有此需要的患者的白血病的方法。举例而言，本发明化合物有效用于治疗自身免疫病症，诸如哮喘、COPD、类风湿性关节炎、银屑病、狼疮及实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)。

又一实施方案为一种通过施用治疗有效量的本发明化合物来治疗有此需要的患者的过敏性鼻炎的方法。

附图简述

图1描绘根据测定7中所述的脂多糖诱导的肺嗜中性粒细胞增多模型，在来自用0、0.3、1、3及10mg/kg化合物A1(po)处理的动物的支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜中性粒细胞计数的条形图。

图2描绘根据测定8中所述的脂多糖诱导的大鼠气囊炎症模型，在来自用0、1、3及10mg/kg化合物A1(po)处理的动物的腹腔灌洗液中的嗜中性粒细胞计数的条形图。

图3描绘根据测定9中所述的程序，在施用0、1、3及10mg/kg化合物A1(po)之后的禁食雌性Wistar大鼠中的脂多糖诱导的血浆TNF-α浓度的条形图。

图4A及4B描绘根据测定10A中的程序，在乙酰甲胆碱激发及用OVA/SAL或OVA/OVA或0.3、1或3mg/kg化合物A1处理之后的致敏雄性豚鼠中，提高的暂停(Penh)或PEF/PIF(最高呼气流/最高吸气流)比率分别的图。

图4C-4E描绘根据测定10A中的程序，在卵白蛋白致敏的雄性豚鼠中且用0、0.3、1或3mg/kg化合物A1处理，在BALF中的嗜酸性粒细胞计数、在BALF中的总细胞计数以及嗜酸性粒细胞百分比分别的条形图。

图5A及5B描绘根据测定10B中的程序，在乙酰甲胆碱激发及用SAL/SAL、OVA/SAL或OVA/OVA或3mg/kg化合物A1处理之后的卵白蛋白致敏小鼠中，Penh)或PEF/PIF比率分别的图。

图5C-5E描绘根据测定10B中的程序，在卵白蛋白致敏的小鼠中且用0或3mg/kg化合物A1处理，在BALF中的嗜酸性粒细胞计数、在BALF中的总细胞计数以及嗜酸性粒细胞百分比分别的条形图。

图6A及6B描绘根据测定11中的程序，在使用以对照或15mg/kg/BID的化合物A1处理的Lewis大鼠的胶原蛋白诱发的关节炎中，踝及膝分别的个别组织病理学得分的条形图。

图6C及6D描绘根据测定11中的程序，在使用以媒介物或15mg/kg/BID的化合物A1处理的Lewis大鼠的胶原蛋白诱发的关节炎模型中，踝及膝分别的总计组织病理学得分的条形图。

图7A及7B描绘在如测定15所述的香烟烟雾诱导的细胞浸润模型中，在雄性Balb/c小鼠中施用0.3、1或3mg/kg/BID的化合物A1之后，在BALF中的巨噬细胞及嗜中性粒细胞计数的条形图。

图8描绘显示根据测定3中的程序通过化合物A1抑制白血病细胞系(MOLT-4、Jurkat、CCRF-CEM、Hut-78及HuT-102)中的AKT磷酸化的图。

图9描绘显示根据测定4中的程序，通过化合物A1抑制人类全血中的由fMLP或抗FcεR1诱导的CD63阳性细胞百分比的图。

图10描绘显示根据测定6D，通过化合物A1抑制抗人类CD3/CD28诱导的细胞因子(TNFα、IFNγ及IL2)的图。

发明详述

如本文所用，除非另外指示，否则以下定义应适用。本文所定义的其它许多基团可优选经取代。在定义中的取代基的清单为示例性的且不应解释为限制在说明书别处所定义的取代基。

某些本文所述的化合物含有一个或多个不对称中心，且可因此产生对映异构体、非对映异构体及其它立体异构形式，其可就绝对立体化学而言定义为(R)-或(S)-。除非另外指示，否则本发明的化学实体、药物组合物及方法意谓包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式及中间体混合物。例如，中间体混合物的非限制性实例包括以10∶90、13∶87、17∶83、20∶80或22∶78的比率的R∶S或S∶R异构体的混合物。光学活性(R)-及(S)-异构体可使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。当本文所述的化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心时，且除非另外指出，否则所述化合物意欲包括E及Z几何异构体两者。

术语“互变异构体”是指特征在于处于平衡中的异构形式相对易于相互转化的化合物。这些异构体意欲由本发明所涵盖。“互变异构体”为通过互变异构化而相互转化的在结构上不同的异构体。“互变异构化”为一种异构化形式且包括质子转移或质子位移互变异构化，其视为是酸-碱化学的子集。“质子转移互变异构化”或“质子位移互变异构化”涉及质子的迁移，伴随有键级的改变，经常发生单键与相邻双键的互换。在可能互变异构化的情况下(例如在溶液中)，可实现互变异构体的化学平衡。互变异构化的一实例为酮-烯醇互变异构化。酮-烯醇互变异构化的一特定实例为戊烷-2，4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的相互转化。互变异构化的另一实例为酚-酮互变异构化。酚-酮互变异构化的一特定实例为吡啶-4-醇与吡啶-4(1H)-酮互变异构体的相互转化。

术语“前药”是指一种化合物，其为化合物的在体内通过正常代谢过程转化为其活性形式的非活性前驱体。前药设计一般论述于Hardma等人(编)，Goodman及Gilman的ThePharmacological Basis of Therapeutics，第9版，第11-16页(1996)中。透彻讨论提供于Higuchi等人，Prodrugs as Novel Delivery Systems，第14卷，ASCD Symposium Series，及Roche(编)，Bioreversible Carriers in Drug Design，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press(1987)中。说明而言，前药可经由水解例如酯或酰胺键，藉此在所得产物上引入或暴露官能团来转化为药理学活性形式。前药可设计来与内源性化合物反应以形成水溶性缀合物，其进一步增强化合物的药理学性质，例如使循环半衰期增加。或者，前药可设计来用例如葡糖醛酸、硫酸酯、谷胱甘肽、氨基酸或乙酸酯在官能团上受到共价修饰。所得缀合物可经不活化且分泌于尿中，或使得比母体化合物更强效。高分子量缀合物也可分泌至胆汁中、进行酶促裂解且释放回至循环中，藉此有效增加最初施用的化合物的生物半衰期。

术语“酯”是指一种化合物，其通过酸与醇之间的反应且脱水而形成。酯可由通式RCOOR′(其中R为药物且R′为化学基团)表示。

这些前药及酯意欲涵盖在本发明的范围内。

另外，本发明也包括不同之处仅在于以下的化合物：存在一个或多个同位素富集原子，例如用氘或氚置换氢，或由¹³C-或¹⁴C-富集碳置换碳。

本发明化合物也可在一个或多个构成这些化合物的原子处含有非天然比例的原子同位素。举例而言，化合物可用放射性同位素(诸如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)或碳-14(¹⁴C))进行放射性标记。本发明化合物的所有同位素变化形式无论具有放射性与否均涵盖于本发明的范围内。

本发明的药学上可接受的成盐部分包括衍生自无机碱(诸如Li、Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Zn及Mn)的盐；有机碱(诸如N，N′-二乙酰基乙二胺、还原葡糖胺、三乙胺、胆碱、氢氧化物、二环己胺、二甲双胍、苯甲胺、三烷基胺及硫胺素)的盐；手性碱(诸如烷基苯胺、甘氨醇及苯基甘氨醇)的盐；天然氨基酸(诸如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、组氨酸、鸟氨酸(omithine)、赖氨酸、精氨酸及丝氨酸)的盐；本发明化合物与以下的季铵盐：烷基卤化物、烷基硫酸盐，诸如MeI及(Me)₂SO₄；非天然氨基酸(诸如D-异构体或经取代的氨基酸)的盐；胍盐；及经取代的胍的盐，其中取代基选自硝基、氨基、烷基、烯基、炔基、铵或经取代的铵盐及铝盐。适当时盐可包括酸加成盐，其为硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、过氯酸盐、硼酸盐、氢卤化物、乙酸盐、酒石酸盐、顺丁烯二酸盐、柠檬酸盐、反丁烯二酸盐、丁二酸盐、双羟萘酸盐(palmoate)、甲烷磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、苯磺酸盐、抗坏血酸盐、甘油磷酸盐及酮戊二酸盐。

当在本文中将范围用于物理性质(诸如分子量)或化学性质(诸如化学式)时，意欲包括范围的所有组合及子组合及其中的特定实施例。术语“约”当提及数值或数值范围时意谓所提及的数值或数值范围为在实验变化性内(或在统计实验误差内)的近似值，因此该数值或数值范围可例如在所述数值或数值范围的1％与15％之间变化。术语“包含(comprising)”(及相关术语，诸如“包含(comprise；comprises)”或“具有”或“包括”)包括那些实施方案，例如物质、组合物、方法或工艺或其类似物的“由所述特征组成”或“基本上由所述特征组成”的任何组成的一个实施方案。

以下缩写及术语自始至终具有所指示的含义：PI3-K＝磷酸肌醇3-激酶；PI＝磷脂酰肌醇；AIDS＝获得性免疫不全综合征；HIV＝人类免疫缺陷病毒；MeI＝碘甲烷；ND：未测定。

本文所用的缩写具有其在化学及生物技术内常规的含义。

术语“细胞增殖”是指一种细胞数目因分裂而改变的现象。此术语也涵盖细胞生长，因此细胞形态已根据增殖信号而改变(例如尺寸增大)。

如本文所用，术语“共施用”、“组合施用”及其语法等效物涵盖向动物施用两种或两种以上试剂以便试剂和/或其代谢物同时存在于动物体内。共施用包括在个别组合物中同时施用、在个别组合物中在不同时刻施用，或在存在有两种试剂的组合物中施用。

术语“有效量”或“治疗有效剂量”是指本文所述的化合物的足以实现如下所定义的预定应用(包括但不限于疾病治疗)的该量。治疗有效量可视预定应用(体外或体内)或所治疗的受试者及疾病状况，例如受试者的体重及年龄、疾病状况的严重性、施用方式及其类似因素而变化，这些因素可易于由本领域普通技术人员所确定。术语也应用于将在目标细胞中诱发特定反应(例如血小板黏着和/或细胞迁移的减少)的剂量。特定剂量将视以下而变：所选特定化合物、欲遵循的给药方案、其是否与其它化合物组合施用、施用时间安排、其所投向的组织，及携带其的物理传递系统。

如本文所用，“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”或“改善”可互换使用。这些术语是指用于获得包括但不限于以下的有益或所需结果的手段：治疗益处和/或预防益处。治疗益处意谓根除或改善所治疗的潜伏病症。另外，如下达成治疗益处：根除或改善一种或多种与潜伏病症相关的生理症状，使得在患者中观察到改良，但患者可能仍受该潜伏病症折磨。对于预防益处，可向处于产生特定疾病的风险中的患者，或向报告疾病的一种或多种生理症状，即使可能尚未确诊此疾病的患者施用组合物。

当术语“治疗作用”用于本文中时涵盖如上所述的治疗益处和/或预防益处。预防作用包括延迟或消除疾病或疾患的出现、延迟或消除疾病或疾患的症状发作、减缓、阻止或逆转疾病或疾患的进展，或其任何组合。

术语“受试者”或“患者”是指动物(例如狗、猫、马或猪)，诸如哺乳动物，例如人类。本文所述的方法可适用于人类治疗与兽医应用两者。在一些实施方案中，患者为哺乳动物，且在一些实施方案中，患者为人类。

“放射疗法”意谓使用从业者已知的方法及组合物使患者暴露于辐射发射体，诸如α粒子发射性放射性核素(例如锕及钍放射性核素)、低线性能量转移(LET)辐射发射体(即β发射体)、变换电子发射体(例如锶-89及钐-153-EDTMP)，或高能辐射，其包括不限于x射线、γ射线及中子。

“信号转导”为一种过程，在此期间刺激性或抑制性信号经传输至细胞中及在细胞内传输以引发细胞内反应。信号转导路径的调节剂是指调节一种或多种映像至相同特异性信号转导路径的细胞蛋白质的活性的化合物。调节剂可加强(激动剂)或抑制(拮抗剂)信号传导分子的活性。

术语“选择性抑制”当应用于生物活性剂时是指与脱靶信号传导活性相比，试剂经由直接或间接地与目标相互作用来选择性减小目标信号传导活性的能力。

术语“药学上可接受的载剂”或“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何及所有溶剂、分散介质、涂层、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂、一种或多种合适的稀释剂、填充剂、盐、崩解剂、黏合剂、润滑剂、助流剂、润湿剂、控制释放基质、着色剂/调味剂、载剂、赋形剂、缓冲剂、稳定剂、增溶剂及其组合。除非任何常规介质或试剂与活性成分不兼容，否则将涵盖其于本发明的治疗组合物中的使用。补充活性成分也可并入组合物中。

在某些实施方案中，一种或多种本文所述的化合物特异性结合至PI3激酶或选自由以下组成的组的蛋白激酶：mTor、DNA依赖性蛋白激酶(Pubmed蛋白质登录号(PPAN)AAA79184)、AbI酪氨酸激酶(CAA52387)、Bcr-Abl、造血细胞激酶(PPAN CAI19695)、Src(PPAN CAA24495)、血管内皮生长因子受体2(PPAN ABB82619)、表皮生长因子受体(PPANAG43241)、EPH受体B4(PPAN EAL23820)、干细胞因子受体(PPAN AAF22141)、酪氨酸蛋白激酶受体TIE-2(PPAN Q02858)、fms相关酪氨酸激酶3(PPAN NP_004110)、血小板衍生生长因子受体α(PPAN NP_990080)、RET(PPAN CAA73131)及任何其它相关蛋白激酶、以及其任何功能突变体。

在其它实施方案中，本文所述的化合物针对pi 10α、pi 10β、pi 10γ或pi 10δ的IC₅₀小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约10nM、小于1nM或小于约0.5nM。在一些实施方案中，本文所述的化合物针对mTor的IC₅₀小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约10nM、小于1nM或小于约0.5nM。在一些其它实施方案中，一种或多种本文所述的化合物呈现双重结合特异性且能够抑制PI3激酶(例如I类PI3激酶)以及具有小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约10nM、小于1nM或小于约0.5nM的IC₅₀值的蛋白激酶(例如mTor)。

在另外的实施方案中，本发明化合物呈现一种或多种本文所公开的功能特征。举例而言，一种或多种本文所述的化合物特异性结合至PI3激酶。在一些实施方案中，本文所述的化合物针对pi 10α、pi 10β、pi 10γ或pi 10δ的IC₅₀小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约10nM、小于约1nM、小于约0.5nM、小于约100pM或小于约50pM。

在其它实施方案中，本发明化合物选择性地抑制I型或I类磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-激酶)的一个或多个成员，所述激酶具有约100nM或较小、约50nM或较小、约10nM或较小、约5nM或较小、约100pM或较小、约10pM或较小或约1pM或较小的IC₅₀值，如体外激酶测定中所测量。

在又一方面中，选择性抑制I型PI3-激酶的一个或多个成员的抑制剂、或选择性抑制一个或多个I型PI3-激酶介导的信号传导途径的抑制剂替代性地可理解为是指一种化合物，其关于给定的I型PI3-激酶呈现50％抑制性浓度(IC₅₀)，该浓度与关于剩余其它I型PI3-激酶的抑制性IC₅₀相比低至少10倍、低至少20倍、低至少50倍、低至少100倍、低至少1000倍。

如本文所用，术语“双重PI3-激酶δ/γ抑制剂”及“双重PI3-激酶δ/γ选择性抑制剂”是指一种化合物，与PI3K家族的其它同功酶相比其更有效地抑制PI3-激酶δ和γ同功酶两者的活性。双重PI3-激酶δ/γ抑制剂因此对于PI3-激酶δ和γ比常规的PI3K抑制剂诸如CAL-130、渥曼青霉素及LY294002(其为非选择性PI3K抑制剂)更有选择性。

在治疗各种疾患(例如特征在于炎症反应的疾患，包括但不限于自身免疫性疾病、过敏性疾病及关节炎疾病)中，PI3激酶δ和γ的抑制可具有治疗益处。重要的是，抑制PI3激酶δ和γ功能并不显得影响生物功能，诸如活力及繁殖力。

如本文使用的“炎症反应”的特征在于发红、发热、肿胀及疼痛(即炎症)且通常涉及组织损伤或破坏。炎症反应通常为一种由组织损伤或破坏引发的局部保护反应，其用以破坏、稀释或隔开(螯合)有害试剂与受损组织。炎症反应显著地与流入白细胞和/或白细胞(例如嗜中性粒细胞)趋化相关。炎症反应可由感染病原性生物体及病毒、非感染性方式(诸如创伤，或心肌梗塞或中风后的再灌注)、对外来抗原的免疫反应及自身免疫性疾病引起。受作用于用本发明的方法及化合物进行的治疗的炎症反应涵盖与特异性防御系统的反应相关的疾患，以及与非特异性防御系统的反应相关的疾患。

本发明的治疗方法包括用于改善与炎症细胞活化相关的疾患的方法。“炎症细胞活化”是指在炎症细胞(包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、粒细胞(多形核白细胞，包括嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞及嗜酸性粒细胞)肥大细胞、树突细胞、兰格罕氏细胞(Langerhans cell)及内皮细胞)中，由增殖细胞反应的刺激物(包括但不限于细胞因子、抗原或自体抗体)诱导、产生可溶性介体(包括但不限于细胞因子、氧自由基、酶、前列腺素类化合物或血管活性胺)，或细胞表面表达新的或增加数目的介体(包括但不限于主要组织兼容性抗原或细胞黏着分子)。本领域普通技术人员应了解，在这些细胞中这些表型的一者或组合的活化可有助于炎症性疾患的起始、延续或恶化。

如本文使用，“自身免疫疾病”是指病症的任何群组，其中组织损伤是与对身体自身成分的体液或细胞介导的反应相关。

如本文所用，“移植排斥”是指针对移植组织(包括器官或细胞(例如骨髓)的任何免疫反应，其特征在于失去移植组织及周围组织的功能、疼痛、肿胀、白细胞增多及血小板减少。

如本文所用，“过敏性疾病”是指由过敏引起的任何症状、组织损伤或失去组织功能。

如本文所用，“关节炎疾病”是指特征在于可归因于多种病因学的关节炎症病变的任何疾病。

如本文所用，“皮炎”是指特征在于可归因于多种病因学的皮肤炎症的一大家族皮肤疾病中的任一者。

如先前所述，术语“双重PI3激酶δ/γ选择性抑制剂”一般是指比PI3K家族的其它同功酶更有效地抑制PI3激酶δ和γ同功酶的活性的化合物。化合物作为酶活性(或其它生物活性)抑制剂的相对效力可通过测定每种化合物将活性抑制至预定程度的浓度且接着比较结果来确定。通常，优选测定为在生物化学测定中抑制50％活性的浓度，即，50％抑制性浓度或“IC₅₀”。IC₅₀测定可使用本领域中已知的常规技术完成。一般而言，IC₅₀可通过在一定浓度范围内的研究中的抑制剂存在下测量给定酶的活性来测定。接着针对所用抑制剂浓度对实验上获得的酶活性值进行绘图。显示50％酶活性(与任何抑制剂不存在下的活性相比)的抑制剂的浓度被视为IC₅₀值。类似地，其它抑制性浓度可经由适当的活性测定来定义。举例而言，在一些背景下，可能需要确定90％抑制性浓度，即IC₉₀等等。

因此，双重PI3激酶δ/γ选择性抑制剂替代地可理解为是指关于PI3激酶δ和γ呈现50％抑制性浓度(IC₅₀)的化合物，即，与关于任何或所有其它I类PI3K家族成员的IC₅₀值相比低至少10倍、低至少20倍、或低至少30倍。在本发明的一个替代实施方案中，术语双重PI3激酶δ/γ选择性抑制剂可理解为是指关于PI3激酶δ和γ呈现IC₅₀的化合物，即，与关于任何或所有其它PI3K I类家族成员的IC₅₀值相比低至少30倍、低至少50倍、低至少100倍、低至少200倍或低至少500倍。双重PI3激酶δ/γ选择性抑制剂通常以使得其选择性地抑制PI3激酶δ和γ活性两者的量施用，如上所述。

在某些实施方案中，本发明化合物呈现几乎相等(约1∶1)或最大比率1∶5的PI3激酶δ和γ抑制，即，本发明化合物对于PI3激酶δ和γ酶两者呈现几乎相等的IC₅₀值或在两者之间有至多3至8倍差异。

本发明方法可以体内或离体应用于细胞群体。“体内”意谓在活的个体内部，如在动物或人类内部或在受试者体内。在上下文中，本发明方法可治疗性或预防性地用于个体中。“离体”或“体外”意谓在活的个体之外。离体细胞群体的实例包括体外细胞培养及生物样品，包括但不限于由个体获得的流体或组织样品。所述样品可通过本领域中已知的方法获得。示例性生物流体样品包括血液、脑脊髓液、尿液及唾液。示例性组织样品包括肿瘤及其体组织切片。在上下文中，本发明可用于多种目的，包括治疗及实验目的。举例而言，本发明可离体或体外使用以确定PI3激酶δ选择性抑制剂对于给定适应症、细胞类型、个体及其它参数的最佳施用时程和/或剂量。由该用途收集的信息可用于实验或诊断目的或在诊所中用于确定体内治疗的方案。本发明可适用于的其它离体用途在下文中描述或将为本领域普通技术人员所显而易见。

本发明化合物可通过本领域中已知的方法来制备，诸如描述于国际公布第WO2011/055215号、第WO 2012/151525号及第WO 2013/164801号中的那些方法，所有公布由此以引用方式并入。

药物组合物

本发明提供一种药物组合物，其包含一种或多种本发明化合物及一种或多种药学上可接受的载剂或赋形剂。在一个实施方案中，药物组合物包括治疗有效量的本发明化合物。药物组合物可包括一种或多种如本文所述的其它活性成分。

药用载剂和/或赋形剂可选自稀释剂、填充剂、盐、崩解剂、黏合剂、润滑剂、助流剂、润湿剂、控制释放基质、着色剂、调味剂、缓冲剂、稳定剂、增溶剂及其组合。

在一个实施方案中，本文所述的药物组合物含有约0.1mg至约1,000mg，诸如约1mg至约1,000mg或约20mg至约800mg或50mg至约600mg或50mg至约600mg一种或多种本发明化合物。100mg至约400mg一种或多种本发明化合物。

本发明的药物组合物可单独施用或与一种或多种其它活性剂组合施用。需要时，主题化合物与其它试剂可混合成一种制剂，或两种组分可调配成个别制剂以对其加以独立或同时的组合使用。

本发明的化合物及药物组合物可通过使化合物能够传递至作用部位的任何途径施用，诸如经口、鼻内、表面(例如经皮)、十二指肠内、非经肠(包括静脉内、动脉内、肌肉内、血管内、腹膜内或通过注射或输注)、皮内、乳房内、鞘内、眼内、眼球后、肺内(例如气溶胶化药物)或皮下(包括用于长期释放的储库施用，例如包埋在脾囊下、脑部或在角膜中)、舌下、经肛门、经直肠、经阴道或通过手术植入(例如包埋在脾囊下、脑部或在角膜中)。

组合物可以固体、半固体、液体或气态形式施用，或可呈干燥散剂，诸如冻干形式。药物组合物可包装为便于传递的形式，包括(例如)固体剂型，诸如胶囊、药囊、扁囊剂、明胶、纸、片剂、栓剂、团粒、丸剂、含片及锭剂。包装类型一般将取决于施用途径。也涵盖可植入持续释放调配物，以及经皮调配物。

治疗方法

欲施用的化合物的量取决于所治疗的哺乳动物、病症或疾患的严重度、施用速率、化合物配置及指定医师的判断。然而，有效剂量是在每公斤体重每日约0.001mg至约100mg，优选每公斤每日约1mg至约35mg的范围内，单次给药或分次给药。对于70公斤的人，此量将为约0.05至7g/日，优选约0.05至约2.5g/日。本发明化合物的有效量可以单次剂量或多次剂量(例如，每日两次或三次)施用。

本发明化合物可与抗癌剂(例如化学治疗剂)、治疗抗体及辐射治疗中的一或多者组合使用。

本发明化合物可结合用以减轻炎症性疾患(诸如脑脊髓炎、哮喘及本文所述的其它疾病)的症状的其它试剂来调配或施用。这些试剂包括非甾类抗炎药物(NSAID)。

实施例

下文提供的实施例及制备进一步说明及例示本发明化合物及制备此类化合物的方法。应了解，本发明的范围不以任何方式受限于以下实施例及制备的范围。在以下实施例中，除非另作说明，否则具有单个手性中心的分子是以外消旋混合物形式存在的。除非另作说明，否则具有两个或多个手性中心的这些分子作为非对映异构体的外消旋混合物存在。单一对映异构体/非对映异构体可通过本领域技术人员已知的方法获得。

如本文所用，上标1是指国际公布第WO 11/055215号且上标2是指国际公布第WO12/151525号。这些参考文献描述各种中间体是如何制备的。

中间体

中间体1：3-(3-氟苯基)-2-(1-羟丙基)-4H-色烯-4-酮：向2-(1-溴丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮¹(8.80g，24.36mmol)于DMSO(85ml)中的溶液中添加正丁醇(5ml)且加热至120℃持续3小时。使反应混合物冷却至室温(RT)，用水猝灭且用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗产物通过用乙酸乙酯∶石油醚的柱层析纯化以得到呈黄色固体状的标题化合物(2.10g，29％)，其未经进一步纯化便用于下一步骤中。

中间体2：3-(3-氟苯基)-2-丙酰基-4H-色烯-4-酮：将DMSO(1.90ml，26.82mmol)添加至二氯甲烷(70ml)中且冷却至-78℃。接着添加草酰氯(1.14ml，13.41mmol)。10分钟之后，逐滴添加于二氯甲烷(20ml)中的中间体1(2.00g，6.70mmol)且搅拌20分钟。添加三乙胺(7ml)且搅拌1h。反应混合物用水猝灭且用二氯甲烷萃取。有机层经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗产物通过用乙酸乙酯∶石油醚的柱层析纯化以得到呈黄色液体状的标题化合物(1.20g，60％)，其按原样用于下一步骤中。

中间体3：(+)/(-)-3-(3-氟苯基)-2-(1-羟丙基)-4H-色烯-4-酮：在氮气吹扫下向中间体2(0.600g，2.02mmol)于DMF(7.65ml)中的溶液中添加甲酸∶三乙胺5∶2共沸物(1.80ml)，随后添加[(S，S)tethTsDpenRuCl](3.0mg)。将反应混合物在80℃下在连续氮气吹扫下加热1.5小时。将反应混合物用水猝灭，用乙酸乙酯萃取，经硫酸钠干燥且浓缩。粗产物通过用乙酸乙酯∶石油醚的柱层析纯化以得到呈黄色固体状的标题化合物(0.450g，74％)。质量：299.0(M⁺)。对映异构体过量：78％，如通过chiralpak AD-H柱HPLC测定，在后洗脱的异构体(保留时间：9.72分钟)中富集。

中间体4：(+)/(-)-3-(3-氟苯基)-2-(1-羟丙基)-4H-色烯-4-酮：标题化合物通过使用类似于针对中间体3所述的程序，使用中间体2(0.600g，2.02mmol)、DMF(7.65ml)、甲酸∶三乙胺5∶2共沸物(1.80ml)及[(R，R)tethTsDpenRuCl](3.0mg)以黄色固体状获得(0.500g，83％)。质量：298.9(M⁺)。对映异构体过量：74.8％，如通过chiralpak AD-H柱HPLC测定，在快速洗脱的异构体(保留时间：8.52分钟)中富集。

中间体5：(R)-3-(3-氟苯基)-2-(1-羟丙基)-4H-色烯-4-酮：

步骤1：(R)-2-(1-(苄氧基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮：向于二氯甲烷(20ml)中的2-(3-氟苯基)-1-(2-羟苯基)乙酮(2.15g，9.36mmol)添加HATU(4.27g，11.23mmol)及R-(+)2-苄氧基丁酸(2.00g，10.29mmol)且搅拌10分钟，接着逐滴添加三乙胺(14.0ml，101.1mmol)且在RT下搅拌24h。反应混合物用水猝灭，用二氯甲烷萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗产物通过用乙酸乙酯∶石油醚的柱层析纯化以得到呈黄色固体状的标题化合物(1.65g，45％)。¹H-NMR(δppm，CDCl₃，400MHz)：8.24(dd，J＝7.9，1.5Hz，1H)，7.74(dt，J＝7.1，1.7Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.3，0.4Hz，1H)，7.44-7.06(m，10H)，4.51(d，J＝7.8Hz，1H)，4.34(d，J＝7.8Hz，1H)，4.25(dd，J＝7.8，6.2Hz，1H)，2.17-1.90(m，2H)，0.95(t，J＝7.5Hz，3H)。质量：389.0(M⁺)。

步骤2：(R)-3-(3-氟苯基)-2-(1-羟丙基)-4H-色烯-4-酮：向于冷却至0℃的二氯甲烷(15ml)中的(R)-2-(1-(苄氧基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮(1.50g，3.86mmol)的二氯甲烷(15ml)中逐份添加氯化铝(1.00g，7.72mmol)且在RT下搅拌6h。反应混合物用2NHCl溶液猝灭，用二氯甲烷萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗产物通过用乙酸乙酯∶石油醚的柱层析纯化以得到呈黄色固体状的标题化合物(0.552g，48％)。¹H-NMR(δppm，CDCl₃，400MHz)：8.24(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.72(m，，1H)，7.52(dd，J＝8.4，0.5Hz，1H)，7.44(m，2H)，7.12-7.01(m，3H)，4.49(t，J＝7.0Hz，1H)，1.94(m，2H)，0.93(t，J＝7.5Hz，3H)。质量：299.0(M⁺)。纯度：96.93％。[α]²⁵ _D-14.73(c＝1，CHCl₃)。对映异构体过量：85.92％，如通过chiralpak AS-3R柱HPLC测定，在快速洗脱的异构体(保留时间：8.57分钟)中富集。

化合物A

(RS)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮

向中间体1(2.50g，8.41mmol)于THF(25ml)中的溶液中添加9-三苯甲基-9H-嘌呤-6-基氨基甲酸叔丁酯(4.81g，10.09mmol)及三苯基膦(3.31g，12.62mmol)且在RT下搅拌5分钟。添加偶氮二甲酸二异丙酯(2.5ml，12.62mmol)且在RT下搅拌2h。浓缩反应混合物且用乙酸乙酯∶石油醚进行柱层析以得到黄色中间体。向中间体中添加二氯甲烷(65ml)及三氟乙酸(7.9ml)且在RT下搅拌所得混合物12h。接着用碳酸氢钠水溶液碱化反应混合物，用二氯甲烷萃取且经硫酸钠干燥。粗产物通过用甲醇∶二氯甲烷的柱层析纯化以得到呈浅褐色固体状的标题化合物(1.05g，30％)。MP：148-150℃。质量：415.6(M+)。

化合物A1

(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮

方法A：向中间体3(0.250g，0.838mmol)于THF(5ml)中的溶液中添加9-三苯甲基-9H-嘌呤-6-基氨基甲酸叔丁酯(0.479g，1.00mmol)及三苯基膦(0.329g，1.25mmol)且在RT下搅拌所得混合物5分钟。接着添加偶氮二甲酸二异丙酯(0.25ml，1.25mmol)且在RT下搅拌12h。浓缩反应混合物且用乙酸乙酯∶石油醚进行柱层析以得到黄色中间体。向于二氯甲烷(6ml)中的中间体中添加三氟乙酸(1.2ml)且在RT下搅拌12h。用碳酸氢钠水溶液碱化反应混合物，用二氯甲烷萃取且经硫酸钠干燥。粗产物通过用甲醇∶二氯甲烷的柱层析纯化以得到呈灰白色固体状的标题化合物(0.015g，4％)。MP：137-140℃。¹H-NMR(δppm，DMSO-d₆，400MHz)：12.94(s，1H)，8.12-8.10(m，4H)，7.84-7.80(m，1H)，7.61(d，J＝8.3Hz，1H)，7.50-7.41(m，2H)，7.28-7.18(m，3H)，5.20-5.06(m，1H)，2.10-1.90(m，2H)，0.84(t，J＝3.7Hz，3H)。对映异构体过量：77.4％，如通过chiralpak AD-H柱HPLC测定，在快速洗脱的异构体(保留时间＝7.90分钟)中富集。

方法B：向中间体5(2.60g，8.68mmol)于THF(52ml)中的溶液中添加9-三苯甲基-9H-嘌呤-6-基氨基甲酸叔丁酯(4.96g，10.42mmol)及三苯基膦(2.76g，13.03mmol)且在RT下搅拌所得混合物5分钟。接着添加偶氮二甲酸二异丙酯(0.25ml，1.25mmol)且在RT下搅拌12h。浓缩反应混合物且用乙酸乙酯∶石油醚进行柱层析以得到黄色中间体。向于二氯甲烷(55ml)中的中间体中添加三氟乙酸(14.2ml)且在RT下搅拌12h。用碳酸氢钠水溶液碱化反应混合物，用二氯甲烷萃取且经硫酸钠干燥。粗产物通过用甲醇∶二氯甲烷的柱层析纯化以得到呈浅黄色固体状的标题化合物(1.00g，27％)。MP：168-170℃。质量：416.5(M⁺+1)。对映异构体过量：86.5％，如通过chiralpak AD-H柱HPLC测定，在快速洗脱的异构体(保留时间＝7.90分钟)中富集。

方法C：标题化合物通过制备型SFC条件在CHIRALPAK AY-H柱(250×30mm；5μm)上，使用甲醇∶CO₂(35∶65)作为流动相在80g/min的流速下从化合物A(1.090g)分离。灰白色固体(0.378g)。e.e.100％。Rt：2.37分钟。质量：416.1(M⁺+1)。MP：149-152℃。

化合物A2

(R)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮

方法A：标题化合物通过以下操作以灰白色固体状获得(0.015g，4％)：使用类似于针对化合物A1(方法A)所述程序的程序，使用9-三苯甲基-9H-嘌呤-6-基氨基甲酸叔丁酯(0.479g，1.00mmol)、中间体4(0.250g，0.838mmol)、三苯基膦(0.329g，1.25mmol)、THF(5ml)及偶氮二甲酸二异丙酯(0.25ml，1.25mmol)，接着用三氟乙酸(1.2ml)及二氯甲烷(6m1)裂解中间体。MP：139-141℃。质量：415.6(M+)。对映异构体过量：81.6％，如通过chiralpak AD-H柱HPLC测定，在后洗脱的异构体(保留时间＝10.81分钟)中富集。

方法B：标题化合物通过制备型SFC条件在CHIRALPAK AY-H柱(250×30mm；5μm)上，使用甲醇∶CO₂(35∶65)作为流动相在80g/min的流速下从化合物A(1.090g)分离。灰白色固体(0.434g)。e.e.98％。Rt：3.71分钟。质量：416.1(M⁺+1)。MP：162-164℃。

生物测定

本文所述的化合物的药理学性质可通过许多药理学测定来证实。已用根据本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐进行的药理学测定例示如下。

测定1：PI3激酶酶活性的荧光测定

磷酸肌醇3激酶(PI3K)属于一类脂质激酶，所述激酶在调节若干关键细胞过程中发挥关键性作用。PI3K能够磷酸化磷酸肌醇的3羟基位置，藉此产生参与下游信号传导事件中的第二信使。同质时间解析荧光(HTRF)测定允许检测因4，5-磷酸氢磷脂酰肌醇(PIP2)通过PI3K同种型(诸如α、β、γ或δ)磷酸化而形成的3，4，5-三磷酸酯(PIP3)。

针对α、β、γ或δ的PI3K同种型活性是使用经修改的PI3K人类HTRF^TM测定试剂盒(Millipore，Billerica，MA)来测定。所有孵育均在室温下进行。简言之，将0.5μl 40X抑制剂(于100％DMSO中)或100％DMSO添加至含有14.5μl 1X反应缓冲液/PIP2(10mM MgCl₂、5mMDTT、1.38μM PIP2)有酶或无酶混合物的384孔白色板(Greiner Bio-One，Monroe，NC)的各孔中，接着添加5μl/孔的400μM ATP且再孵育30分钟。通过添加5μl/孔终止溶液(Millipore，Billerica，MA)来终止反应。接着将5μl检测混合物(Millipore，Billerica，MA)添加至各孔中且在黑暗中孵育6-18小时。在微板读取器(BMG Labtech.，Germany)上在337nm的激发波长及665nm及615nm的发射波长下，用400毫秒的积分时间(计数延迟为50毫秒)来测量HRTF比。化合物A1及A2的结果显示于以下表1中。化合物A1与WO 11/055215的实施例47的比较数据提供于表2中。

表1

表2

测定2：白血病细胞系中的体外细胞增殖测定

使用10％FBS补充型培养基来进行生长抑制测定。将细胞以5000-20,000个细胞/孔的浓度接种于96孔板中。24h之后，添加浓度范围为0.01nM至10000nM的测试化合物。在0小时(在添加测试化合物之前)及在添加测试化合物之后72h，使用溴化3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑鎓(MTT)染料还原测试来评估生长。在Fluostar Optima(BMGLabtech，德国)上在波长450nm下读取吸光度。使用GraphPad Prism分析数据且因此计算与对照相比的测试化合物所致的抑制百分比。

化合物A1使得T淋巴瘤(MOLT-4、Jurkat、CCRF-CEM、Hut-78及HuT-102)细胞活力降低，对于所测试的剂量范围GI₅₀值在1-5μM的范围内。另外，所述化合物在72h孵育期中在高达10μM下不呈现任何明显的细胞毒性。

测定3：白血病细胞系中AKT磷酸化的抑制

用所需浓度的化合物孵育MOLT-4、Jurkat、CCRF-CEM、Hut-78、HuT-102、Sez4及HH细胞48h。裂解细胞且通过蛋白质印迹测定pAKT。使用ImageJ定量条带且将肌动蛋白标准化。

化合物A1使得pAKT在T淋巴瘤(MOLT-4、Jurkat、CCRF-CEM、Hut-78及HuT-102)细胞系中的表达减少，对于所测试的剂量范围EC50值在0.5-2μM的范围内。结果显示于图8中。

测定4：在来自人类全血的嗜碱性粒细胞中的PI3Kδ和γ信号传导的抑制

通过改变抗FcεR1或fMLP诱导的CD63表达来显现的嗜碱性粒细胞中PI3Kδ和γ信号传导为一种使用试剂盒(Buhlmann Laboratories，瑞士)测定的有用的药效动力学标记。简言之，其涉及以下步骤：

●通过倒置静脉穿刺管数次来混合抗凝固血样；

●制备适于流式细胞术测量的新鲜及无热原质3.5ml聚丙烯或聚苯乙烯管；

●将49μl患者全血添加至各管中；

●将1μl 10％DMSO(背景)或化合物(10％DMSO)添加至指定管中且温和混合。在室温下孵育15分钟；

●将50μl刺激缓冲液(背景)或抗FcεRI Ab或fMLP移液至各管中；

●将100μl刺激缓冲液添加至各管中；

●温和混合。将20μl染色试剂(FITC-CD63与PE-CCR3的1∶1混合物)添加至各管中；

●温和混合，将管盖上盖子且在水浴中在37℃下孵育15分钟。(使用孵育箱因热传递不太有效而将多用约10分钟孵育时间)；

●将2ml经预温热的(18-28℃)裂解试剂添加至各管中，温和混合；

●在18-28℃下孵育5-10分钟；

●在500×g下离心所述管5分钟；

●通过使用印迹纸来倾析上清液；

●用300-800μl洗涤缓冲液再悬浮细胞沉淀；以及

●温和涡旋且在同一日在流式细胞仪上获得数据。

在不同治疗组中测定门控嗜碱性粒细胞群体内的CD63阳性细胞百分比，且针对媒介物对照标准化。

化合物A1对于Fc□R1(PI3Kδ)呈现＜40nM的EC₅₀且对于fMLP(PI3Kγ)呈现＜40nM的IC₅₀(n＝10)。结果显示于图9中。

测定4A：证明化合物A1对PI3Kδ及PI3Kγ同种型的选择性的细胞活性

测定4A1：抗IgM诱导的B细胞增殖(针对PI3Kδ选择性)

此项研究的目标在于评定化合物A1对抗IgM诱导的人类B细胞增殖的抑制性潜力。

涂铺及处理

●将分离的B细胞再悬浮至1.0×10⁶个细胞/ml。将100μl细胞悬浮液添加至96孔板的每个孔中。维持一式三份。

●添加50μl药物稀释液且充分混合。维持DMSO空白及诱导物空白。

●将经处理的板在37℃、5％CO₂下孵育30分钟且接着添加50μl 4X诱导物且通过移液进行混合。

●将板在37℃、5％CO₂下孵育72h。

●吸出培养基且添加150μl DMSO以溶解甲臜晶体。

●在A₅₆₀及A₆₄₀nm下读取吸光度。

数据证明化合物A1对PI3Kδ介导的人类B细胞增殖的诱导的抑制性潜力。参见，例如Baeker等人Journal of Immunology，134：3532-3538，1985。

测定4A2：在3T3纤维母细胞中LPA诱导的AktS473磷酸化(针对PI3Kβ选择性)

此项研究的目标在于确定化合物A1在3T3纤维母细胞中对PI3Kβ激酶介导的LPA诱导的AktS473磷酸化的作用。

●用所需浓度的测试化合物处理3T3细胞15分钟。添加1ml 2XLPA以使得最终浓度为5μM且孵育5分钟。

●丢弃培养基且用1ml冰冷的1X PBS洗涤。

●添加250μl细胞裂解缓冲液且在冰上孵育30分钟。

●离心样品且将上清液保持在-80℃下直至分析。

●样品通过蛋白质印迹，使用pAKT(S473)作为初级抗体且抗兔IgG-HRP作为二级抗体来分析。

●使用ImageJ 1.42q(NIH，USA)测定条带强度且针对肌动蛋白(上样对照)标准化。将数据使用GraphPad Prism(版本5.02)进行绘图。

结果证明化合物A1对PI3Kβ同种型的选择性。参见Albuquerque等人，J.Biol.Chem.278，39830-39838，2003。

测定4A3：在RAW 264.7巨噬细胞中c5a诱导的AktS473磷酸化(针对PI3Kγ选择性)

此项研究的目标在于确定化合物A1在RAW 264.7巨噬细胞中对PI3Kγ激酶介导的c5a诱导的AktS473磷酸化的作用。

●用所需浓度的测试化合物处理RAW 264.7细胞15分钟。添加1ml 2X c5a以使得最终浓度为50ng/ml且孵育15分钟。

●丢弃培养基且用1ml冰冷的1X PBS洗涤。

●添加250μl细胞裂解缓冲液且在冰上孵育30分钟。

●离心样品且将上清液在-80℃下储存直至分析。

●样品通过蛋白质印迹，使用pAKT(S473)作为初级抗体且抗兔IgG-HRP作为二级抗体来分析。

●使用ImageJ 1.42q(NIH，USA)测定条带强度且针对肌动蛋白(上样对照)标准化。将数据使用GraphPad Prism(版本5.02)进行绘图。

pAktS473(PI3Kδ信号传导的下游标记)的抑制表明化合物A1在c5a诱导的RAW264.7细胞中在由Akt调节的致癌途径中的作用。参见To等人Am.J.Respir.Crit.CareMed.，182，897-904，2010。

测定4A4：在3T3细胞中PDGF诱导的Akt磷酸化(针对PI3Kα选择性)

此项研究的目标在于确定化合物A1在PDGF诱导的3T3纤维母细胞中对PI3Kα激酶介导的AktS473磷酸化的作用。

●用所需浓度的测试化合物处理3T3细胞15分钟。添加1ml 2XPDGF以使得最终浓度为20ng/ml且孵育10分钟。

●丢弃培养基且用1ml冰冷的1X PBS洗涤。

●添加250μl细胞裂解缓冲液且在冰上孵育30分钟。

●离心样品且将上清液收集并在-80℃下储存直至分析。

●样品通过蛋白质印迹，使用pAKT(S473)作为初级抗体且抗兔IgG-HRP作为二级抗体来分析。

●使用ImageJ 1.42q(NIH，USA)测定条带强度且针对肌动蛋白(上样对照)标准化。将数据使用GraphPad Prism(版本5.02)进行绘图。

在10μM化合物A1下没有观察到抑制，证明化合物A1对PI3Kα同种型的选择性。参见Albuquerque等人，J.Biol.Chem.278，39830-39838，2003。

下表概述来自测定4A1-4A4的结果。

测定5：白血病细胞系中的细胞凋亡抑制

如下文所概述使用原位半胱天冬酶3试剂盒(Millipore，US)来测定白血病细胞中的细胞凋亡：

●将白血病细胞以1×10⁶个细胞/孔的密度接种于6孔板中

●添加所需浓度的测试化合物/DMSO

●在5％CO₂孵育箱中在37℃下孵育该板24小时

●在2ml离心管中收集细胞

●添加1.6μL新鲜制备的5X FLICA试剂且通过轻弹所述管来混合细胞

●在37℃下在5％CO₂下孵育管1小时

●将2ml 1X洗涤缓冲液添加至各管中且混合

●在室温下在＜400×g下离心细胞5分钟。

●谨慎移除且弃置上清液，且温和涡旋细胞沉淀以破坏任何细胞与细胞结块。

●在300μl 1X洗涤缓冲液中再悬浮细胞沉淀

●将100μL各细胞悬浮液置于黑色微量滴定板的两个孔的每一者中。避免产生气泡。

●使用490nm的激发波长及520nm的发射波长读取各微孔的吸光度

●计算与对照空白相比的通过荧光增加所表达的半胱天冬酶-3活性百分比增加。

化合物A1造成在T淋巴瘤(MOLT-4、Jurkat、CCRF-CEM、Hut-78及HuT-102)细胞系中半胱天冬酶-3活性的剂量依赖性诱导。

测定6：在人类原代CTCL细胞中对pAKT抑制的筛选

pAKT抑制的流式细胞术分析：纯化的恶性T细胞是由供体分离的且在RPMI/1％BSA中培养过夜。细胞用测试化合物孵育1.5小时，其中在最后30分钟中添加细胞因子混合物。细胞因子混合物的组成为20ng/ml IL2+5ng/ml IL7+10ng/ml IL15+10％FBS。AKT磷酸化通过流式细胞术来测定。

用化合物A1的处理造成AKT磷酸化的剂量依赖性减少，其中EC₅₀在40-300nM的范围内(抑制％数据)。

测定6A：在人类CLL细胞中对抗癌活性的筛选

原代CLL细胞使用来自干细胞技术的Rosette-Sep B细胞来富集，一般给出的纯度＞97％B细胞/CLL细胞。将细胞以2.5×10⁵/孔在所需浓度的测试化合物存在下接种在具有无血清培养基(SFM)或SFM+10％热灭活胎牛血清(体积100微升)的96孔中且在二氧化碳孵育箱中在37℃下培养3日。使用MTS测定测定细胞毒性。

化合物A1在CLL细胞中诱导细胞毒性，其中在无血清培养基中中值EC₅₀＜100nM且在10％FBS培养基中＜700nM。

测定6B：在源自患者的B淋巴瘤细胞中对抗癌活性的筛选

将来自淋巴瘤的原代细胞暴露于测试化合物[化合物A1]以评定细胞死亡的诱导。细胞源自于弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、结外边缘区淋巴瘤(EMZL)或慢性淋巴细胞性白血病(CLL，编号＝1)。细胞用所需浓度的化合物处理且在48小时孵育期之后通过流式细胞术评定细胞凋亡(Annexin V/PI)。

几乎所有的来源于B细胞淋巴瘤的原代细胞当暴露于4μM浓度下的测试化合物(化合物A1)时均经历细胞死亡的增加。该现象在来源于小细胞淋巴瘤(MZL、MCL及CLL)的原代细胞中似乎更加明显。

测定6C：在B淋巴瘤细胞系中的AKT磷酸化的抑制

将LY-1、LY-10、Daudi、JEKO、REC及MAVER细胞用所需浓度的[化合物A1]孵育48小时。裂解细胞且通过蛋白质印迹测定pAKT。使用ImageJ定量条带且针对肌动蛋白标准化。

化合物A1在所测试的B淋巴瘤细胞系中呈现20-200nM的EC₅₀。

测定6D：在抗人类CD3及CD28共刺激的原代T细胞中的细胞因子测定

此项研究的目标在于评定化合物A1对由抗人类CD3/CD28共刺激的原代T细胞所产生的细胞因子的抑制性潜力。

涂铺及处理

●用50μl抗人类CD3以100ng/ml的浓度涂覆板，在4℃下过夜或在37℃下持续2h。孵育之后，用无菌PBS洗涤板两次以移除未结合的抗体。

●将分离的人类T细胞在1.5ml管中再悬浮至0.625×10⁶个细胞/ml且添加1μl药物稀释液(1000X)。维持DMSO空白及未诱导的空白。

●将细胞在室温下用化合物孵育30分钟，接着添加至96孔板的抗人类CD3涂覆的孔中，每孔240μl。立即添加抗人类CD28，每孔10μl(25X)。

●将板在37℃、5％CO₂下孵育24h。

●在室温下在4000rpm下离心板，收集上清液且储存在-20℃下。

●使用商用ELISA试剂盒测定细胞因子，其中在450及570nm下读取吸光度。

IC₅₀值是由八个独立实验计算。化合物A1抑制抗人类CD3-CD28诱导的T细胞细胞因子，其中TNFα、IFNγ及IL2的IC₅₀分别为24、9.54及20.6nM。结果显示于图10中。

测定7：在雌性Wistar大鼠模型中的脂多糖诱导的肺嗜中性粒细胞增多

扩大的募集以及随后活化嗜中性粒细胞可能对于在气道及肺中的以下若干炎症性疾病的发展及进程而言很重要，诸如重度哮喘、慢性阻塞性肺病、囊肿性纤维化以及急性呼吸窘迫综合征。嗜中性粒细胞促成这些疾病的机制可能涉及释放蛋白水解酶，诸如嗜中性粒细胞弹性蛋白酶及氧自由基。当释放时，这些化合物可引起支气管收缩、支气管高反应性、分泌过多、上皮损伤以及气道中的组织重塑。

在检疫期之后，将禁食动物随机化且根据其体重分到各个组中。测试化合物[化合物A1]制备为在由0.5％甲基纤维素组成的媒介物中的悬浮液形，其中Tween 80作为悬浮剂。化合物或媒介物通过经口管饲法以10mL/kg的体积施用。雌性Wistar大鼠用克他明(ketamine)来麻醉且LPS溶液在化合物施用之后1小时以1mg/kg的剂量气管内施用。LPS滴注之后6小时，在麻醉下为动物放血，接着对气管进行插管且用肝素化的PBS(1单位/ml)的5-ml等分试样经由气管插管(总体积20ml)灌洗肺4次。将支气管肺泡灌洗(BAL)液在2-8℃下储存直至针对总细胞及白细胞分类计数进行测定。离心(500×g，10分钟)支气管肺泡液且将所得细胞沉淀再悬浮于0.5ml肝素化的盐水中。通过使用血细胞计数器测定BAL流体或血液中的白细胞总数且调节至1×10⁶个细胞/ml。人工计算细胞分类计数。使用cytospin 3离心一百微升细胞悬浮液以制备细胞涂片。细胞涂片用血液染色溶液染色以便区分且在显微镜下观察载玻片以根据其形态特征识别嗜酸性粒细胞。测定细胞涂片中300个白细胞中每种细胞类型的数目且表示为百分比。计算每个BALf或血液中的嗜酸性粒细胞的数目。

化合物A1显示嗜中性粒细胞至肺中的浸润的剂量依赖性减少，其中ED₅₀为6.5mg/kg，表明在炎症性病症中的治疗性作用。结果显示于图1中。

测定8：脂多糖诱导的大鼠气囊炎症模型

白细胞募集以及促炎症介质(包括不同细胞因子)的形成为炎症反应的标志。气囊模型最初是作为用于研究在类风湿性关节炎(RA)中出现的炎症过程的逼真滑膜(facsimile synovium)而开发。该模型允许差异量化在气囊壁(组织)中积聚的白细胞种类以及迁移至气囊腔(灌洗)中的那些，且其允许表征负责由多种炎症刺激所诱导的血细胞渗出的趋化因子及黏着分子。

使雌性Wistar大鼠(175-200g)在实验开始之前适应七日。将动物根据其体重随机分到各个组中。用醚使动物麻醉且皮下气囊通过在肩胛内区域中在皮肤下注射20ml无菌空气来做出(第0日)且在第4日以第二次10-ml无菌过滤空气注射来维持。在第6日，在通过在第6日皮下注射LPS溶液诱导炎症之前1小时开始经口处理。将溶解于无菌盐水(100μg/kg)中的5-ml体积的LPS溶液注射至每个囊中。在LPS施用之后6小时通过用5ml无菌盐水冲洗囊且取出4ml流体来采集囊液的样品。使用血球计在显微镜下测定存在于囊液中的白细胞数目。细胞分类含量通过用Diff-Quik染色的流体涂片的显微镜检查来测定。

化合物A1造成迁移至大鼠气囊中的嗜中性粒细胞的剂量依赖性减少，其中ED₅₀为2.6mg/kg，表明在类风湿性关节炎中的治疗性作用。结果显示于图2中。

测定9：脂多糖诱导的TNF-α产生

将禁食的雌性wistar大鼠根据其体重随机分到不同的组中。测试化合物(化合物A1)制备为由0.5％甲基纤维素组成的媒介物中的悬浮液。化合物或媒介物通过经口管饲法以10mL/kg的体积施用。LPS溶液是在化合物施用之后1小时以0.3mg/kg的剂量腹膜内施用。在LPS注射之后90分钟经由心脏穿刺在血清分离管中收集血液。将血清分离且储存在-20℃下且通过ELISA针对TNFα进行分析。

化合物A1使血浆TNFα浓度降低，表明在炎症性病症中的治疗性作用(在1、3及10mg/kg下观察到的抑制百分比分别为5％、15％及40％)。结果显示于图3中。

测定10A：在雄性豚鼠中卵白蛋白诱导的肺嗜酸性粒细胞增多

气道炎症及高反应性(AHR)为支气管哮喘的标志及区别性特征。用相同过敏原激发前致敏小鼠诱发气道炎症，其中有优先的嗜酸性粒细胞性浸润及作为结果的AHR。肺嗜酸性粒细胞增多及气道重塑连同气道张力的改变的神经控制及气道上皮剥脱可有助于哮喘中的AHR。

在检疫期之后，通过眼窝后丛法自每个个别动物的眼窝静脉收集0.3mL血液样品且在细胞测定器(ADVIA 2120，Siemens)上进行分析。根据其总细胞计数，将豚鼠随机化且分到各个组中。用不能拭除的标记笔标记耳壳以便识别。在第0日，记录重量且将动物用50μg卵白蛋白(OVA)及10mg明矾溶液(1mL)腹膜内致敏。在第7日及第14日，重复上述致敏方案。观察动物的任何疾病体征或对致敏的反应直至第19日且倘若有的话便记录。在第19、20及21日，在用测试化合物通过经口管饲法处理之后，30分钟之后使动物分别暴露于0.5％w/v、0.5％及1％卵白蛋白激发。对照组动物和假组动物用0.5％w/v甲基纤维素(媒介物)处理。假对照组在第0、7及14日用10mg明矾致敏且在第19、20及21日以相同雾化率暴露于盐水溶液(SAL)。最后一次OVA激发之后20小时，气道高反应性通过针对累积剂量的乙酰甲胆碱激发(75、100、125及150μg/ml)的全身体积描记器来测量，在测量气道反应之后，收集血液样品及BAL流体。样品通过使用neubuear室在显微镜下针对总细胞计数进行分析且人工进行白细胞分类计数。

如图4A及4B中所描绘，化合物A1造成针对致敏豚鼠的乙酰甲胆碱激发的气道高反应性的显著剂量依赖性降低。

如图4C-4E中所描绘，化合物A1造成至致敏豚鼠的支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞浸润的显著剂量依赖性减少。

测定10B：鼠类哮喘模型

气道炎症及高反应性(AHR)为支气管哮喘的标志及区别性特征。用相同过敏原激发前致敏小鼠诱发气道炎症，其中有优先的嗜酸性粒细胞性浸润及作为结果的AHR。肺嗜酸性粒细胞增多及气道重塑连同气道张力的改变的神经控制及气道上皮剥脱可促成哮喘中的AHR。在检疫期之后，将小鼠根据其体重随机化且分到4个组(n＝7)中。用不能拭除的标记笔标记尾部以便识别。在第0日，记录重量且将动物用100μg卵白蛋白及10mg明矾溶液(0.2mL)腹膜内致敏。在第7日及第14日，重复上述致敏方案。观察动物的任何疾病体征或对致敏的反应直至第24日且倘若有的话便记录。在第24、25及26日，在用测试化合物通过经口管饲法处理之后，30分钟之后使动物暴露于10％w/v卵白蛋白激发。对照组动物及假组动物用0.5％w/v甲基纤维素(媒介物)处理。假对照组在第0、7及14日用10mg明矾致敏且在第24、25及26日以相同雾化率暴露于盐水溶液。在最后一次OVA激发之后48小时，气道高反应性通过针对累积剂量的乙酰甲胆碱激发(2.5、10、50及100mg/ml)的全身体积描记器来测量，在测量气道反应之后，收集血液样品及BAL流体。通过使用neubuear室在显微镜下分析样品的总细胞计数且人工进行白细胞分类计数。如图5A及5B中所描绘，3mg/kg剂量的化合物A1造成针对卵白蛋白致敏小鼠的乙酰甲胆碱激发的气道高反应性的显著降低。

如图5C-5E中所描绘，3mg/kg剂量的化合物A1造成卵白蛋白致敏小鼠的嗜酸性粒细胞至支气管肺泡灌洗液中的浸润的显著抑制。

测定11：在Lewis大鼠中胶原蛋白诱发关节炎

使雌性wistar大鼠在开始实验之前适应七日且根据其体重随机分到各个组中。在第0日，通过皮内注射500μg II型牛胶原蛋白来处理动物，该牛胶原蛋白用含有MTB(4mg/mL)的完全弗氏佐剂(IFA)乳化，在尾根部递送。在初次免疫之后第7日，通过经由在尾根部皮内注射来加强注射300μg在弗氏不完全佐剂中的CII来处理动物。在踝关节中的关节炎发病通常在第12日与第14日之间变得在视觉上明显。作为治疗组，将动物自关节炎发病之后那天用测试化合物或媒介物(经口施用)处理直至实验结束(第28日)。通过在整个研究期中针对关节炎症体征定期进行视觉检查来获取关节炎得分。在第0、3、7、10、12、14、17、21、24及28日获取体重及爪体积、爪厚度。在第28日，研究结束之时，在尸检时抽出血液且处理成血清或血浆且收集所有关节并且将前爪及后爪两者固定于10％福尔马林中以便在由每个关节取得小块组织之后进行组织病理学分析且在-80℃下储存以便在组织匀浆中进行细胞因子分析。对于前爪及后爪的临床得分准则：0＝正常；1＝一个后爪或前爪关节受影响及或极小的弥漫性红斑及肿胀；2＝两个后爪或前爪关节受影响及或轻度弥漫性红斑及肿胀；3＝三个后爪或前爪关节受影响及或中度弥漫性红斑及肿胀；4＝明显的弥漫性红斑及肿胀，或＝四个趾关节受影响及；5＝整个爪子严重的弥漫性红斑及严重的肿胀，不能弯曲趾头。

在大鼠CIA模型中治疗性地给予化合物A1显示在膝以及踝肿胀的减轻方面的显著功效。

在研究结束时的关节的组织分析显示在15mg/kg化合物A1下的完全结构保护。为了比较，给予媒介物的动物显示滑液(S)炎症以及骨吸收、血管翳形成及软骨退化的显著证据，并且如图6A-6D中所描绘，化合物A1显示膝及踝的个别及总计的组织病理学得分方面的显著降低。

测定12：在雄性Balb/c小鼠中急性CSE诱导的细胞浸润

动物(雄性Balb/c小鼠)在开始实验之前将适应七日。将动物根据其体重随机分到各个组中。在第1日，通过经口/鼻内途径向小鼠施用测试化合物或媒介物且在施用测试化合物1小时之后，用醚使动物麻醉，且通过鼻内途径以50μl/小鼠的体积施用香烟烟雾提取物且在测试化合物施用之后每日重复将CSE暴露于动物持续4日(d1至d4)。在第5日，在最后一次CSE暴露之后24小时，在麻醉下为动物放血，且对气管进行插管且用肝素化的PBS(1单位/ml)的0.5ml等分试样经由气管插管(总体积2ml)灌洗肺4次。BAL在2-8℃下储存直至针对总细胞及白细胞分类计数进行测定。离心(500×g，10分钟)支气管肺泡液且必须将所得细胞沉淀再悬浮于0.5ml肝素化的盐水中。使用血细胞计数器测定BAL流体和血液中的白细胞总数且调节至1×10⁶个细胞/ml。人工计算细胞分类计数。使用cytospin 3离心四十微升的细胞悬浮液以制备细胞涂片。细胞涂片用血液染色溶液染色以便区分且必须在显微镜下观察以根据其形态特征识别嗜酸性粒细胞。测定细胞涂片中300个白细胞中每种细胞类型的数目且表示为百分比，且计算每个BALf中的嗜中性粒细胞及巨噬细胞的数目。

测定13：在雄性Balb/c小鼠中亚慢性CSE诱导的细胞浸润

动物(雄性Balb/c小鼠)在开始实验之前将适应七日。将动物根据其体重随机分到各个组中。在第1日，用醚使动物麻醉且通过鼻内途径以50μl/小鼠的体积施用香烟烟雾提取物且每日重复CSE暴露于动物持续8日(d1至d8)。在第9日，通过经口/鼻内途径向小鼠施用测试化合物或媒介物且在测试化合物施用1小时之后，用醚使动物麻醉且通过鼻内途径以50μl/小鼠的体积施用香烟烟雾提取物且在测试化合物施用之后每日将动物暴露于CSE持续接着的3日(d9至d11)，在第12日，在最后一次CSE暴露之后24小时，在麻醉下为动物放血，且对气管进行插管且用肝素化的PBS(1单位/ml)的0.5ml等分试样经由气管插管(总体积2ml)灌洗肺4次。BAL在2-8℃下储存直至针对总细胞及白细胞分类计数进行测定。离心(500×g，10分钟)支气管肺泡液且将所得细胞沉淀再悬浮于0.5ml肝素化的盐水中。使用血球计数器测定BAL流体和血液中的白细胞总数且调节至1×10⁶个细胞/ml。人工计算细胞分类计数。使用cytospin 3离心四十微升的细胞悬浮液以制备细胞涂片。细胞涂片用血液染色溶液染色以便区分且在显微镜下观察以根据其形态特征识别嗜酸性粒细胞。必须测定细胞涂片中300个白细胞中每种细胞类型的数目且表示为百分比，且计算每个BALf中的嗜中性粒细胞及巨噬细胞的数目。

测定14：在香烟烟雾提取物诱导的肺炎(COPD)模型中的皮质类固醇不敏感性的逆转

雌性Balb/c小鼠在开始实验之前将适应七日。接着将动物根据其体重随机分到各个组中。在第1日，用醚使动物麻醉且通过鼻内途径以50μl/小鼠的体积施用香烟烟雾提取物且每日将动物暴露于CSE持续接着的5日(d1至d6)。在第7日，通过经口管饲法以10mg/kg向小鼠施用地塞米松且60分钟之后，通过鼻内途径向小鼠施用CSE且必须重复该施用持续接着的4日(d7至d11)。自第9日至第11日，通过经口/鼻内途径向动物施用测试化合物或媒介物且在地塞米松施用之后30分钟以及30分钟之后用醚使动物麻醉且通过鼻内途径以50μl/小鼠的体积施用香烟烟雾提取物且在测试化合物施用之后每日将动物暴露于CSE持续接着的2日(即d9至d11)，在第12日，在最后一次CSE暴露之后24小时，在麻醉下为动物放血，且对气管进行插管且用肝素化的PBS(1单位/ml)的0.5ml等分试样经由气管插管(总体积2ml)灌洗肺4次。BAL必须在2-8℃下储存直至针对总细胞及白细胞分类计数进行测定。离心(500×g，10分钟)支气管肺泡液且将所得细胞沉淀再悬浮于0.5ml肝素化的盐水中。使用血细胞计数器测定BAL流体或血液中的白细胞总数且调节至1×10⁶个细胞/ml。人工计算细胞分类计数。使用cytospin 3离心四十微升的细胞悬浮液以制备细胞涂片。细胞涂片用血液染色溶液染色以便区分且必须在显微镜下观察以根据其形态特征识别嗜酸性粒细胞。测定细胞涂片中300个白细胞中每种细胞类型的数目且表示为百分比，且计算每个BAL流体中的嗜中性粒细胞及巨噬细胞的数目。

测定15：在雄性Balb/c小鼠中急性香烟烟雾诱导细胞浸润

动物(雄性Balb/c小鼠)在开始实验之前将适应七日。接着将动物根据其体重随机分到各个组中。在第1日，通过经口/鼻内途径向小鼠施用测试化合物或媒介物且在测试化合物施用1小时之后将动物置于全身暴露箱中。在第1日及第2日，将小鼠暴露于6根香烟的主流烟雾下且在第3日，暴露于8根香烟的主流烟雾下，且在第4日，暴露于10根香烟的主流烟雾下。暴露于每根香烟的烟雾持续10分钟(香烟将在前两分钟内完全燃烧且接着是动物呼吸器的气流且随后的20分钟暴露于新鲜的室内空气。在每隔一根香烟之后，将进行另外的20分钟中断，即暴露于新鲜的室内空气。对照动物将暴露于室内空气室。自第1日至第4日，通过经口或鼻内途径向动物施用测试化合物。在第5日，在最后一次香烟烟雾(CS)暴露之后24小时，在麻醉下为动物放血，且对气管进行插管且用肝素化的PBS(1单位/ml)的0.5ml等分试样经由气管插管(总体积2ml)灌洗肺4次。所收集的支气管肺泡(BAL)液必须在2-8℃下储存直至测定总细胞及白细胞分类计数。离心(500×g，10分钟)BAL流体且将所得细胞沉淀再悬浮于0.5ml肝素化的盐水中。使用血球计数器测定BAL流体和血液中的白细胞总数且调节至1×10⁶个细胞/ml。人工计算细胞分类计数。使用cytospin 3离心四十微升的细胞悬浮液以制备细胞涂片。细胞涂片用血液染色溶液染色以便区分且在显微镜下观察以根据其形态特征识别嗜酸性粒细胞。测定细胞涂片中300个白细胞中每种细胞类型的数目且表示为百分比，且计算每个BAL流体中的嗜中性粒细胞及巨噬细胞的数目。

结果：如图7A及7B中所描绘，化合物A1减少巨噬细胞及嗜中性粒细胞至BALF中的浸润，由此表明在慢性阻塞性肺病中的治疗性作用。

测定16：在小鼠中卵白蛋白诱导的鼻嗜酸性粒细胞及嗜中性粒细胞积聚

动物(小鼠)在开始实验之前将适应七日。接着将动物根据其体重随机分到各个组中。在第1日及第5日用OVA(40μg/kg i.p.)使动物免疫。为了在鼻中引发局部炎症反应，在第12-19日用OVA(3％OVA，在盐水中)反复地鼻内(10μL/鼻孔)激发小鼠。在第19日，在开始最后一次OVA激发之前2小时向非禁食小鼠鼻内(10μL/鼻孔)给予媒介物或测试化合物。2小时之后，每个动物将接受最后一次鼻内OVA(3％)激发。再过8小时之后，使每个动物麻醉且将通过经由向头部植入的气管插管滴注1ml PBS至后鼻孔中来进行鼻灌洗，该气管插管向后鼻孔前约1mm的位置延伸。此程序必须重复进行以得到约2ml灌洗液的收获。使用血球计测量鼻灌洗液样品中的总细胞数目。鼻灌洗液样品的Cytospin涂片将通过在RT下在1200rpm下离心2分钟来制备且使用Diff-Quik染色系统(Dade Behring)进行染色以便细胞分类计数。使用油浸显微术计数细胞。

测定17：在小鼠中Poly-l：C诱导的细胞积聚

特定的不含病原体的A/J小鼠(雄性，5周龄)将在开始实验之前适应七日。接着将动物根据其体重随机分到各个组中。在用3％异氟烷的麻醉下向动物鼻内施用poly(l：C)-LMW(poly-IC；1mg/mL，40μL)，每日两次，持续3日。在每次poly-l：C处理之前2小时，通过鼻内(35μL在50％DMSO/PBS中的溶液)用测试化合物处理动物。在最后一次poly-l：C激发之后24小时，使动物麻醉，对气管进行插管且收集BALF。通过使用血球计数器测定BALF中的肺泡巨噬细胞及嗜中性粒细胞的浓度且调节至1×10⁶个细胞/ml。人工计算细胞分类计数。使用cytospin 3离心四十微升的细胞悬浮液以制备细胞涂片。细胞涂片用血液染色溶液染色以便区分且在显微镜下观察以根据其形态特征识别嗜酸性粒细胞。测定细胞涂片中300个白细胞中每种细胞类型的数目且表示为百分比，且计算每个BAL流体中的嗜中性粒细胞及巨噬细胞的数目。

尽管本发明已参考特定实施方案加以描述，但应了解这些实施方案仅说明本发明的原理及应用。因此应了解，可对说明性实施方案进行众多修改且可在不脱离如上所述的本发明的精神及范围的情况下设计其它安排。意欲使随附权利要求界定本发明的范围且藉此涵盖这些权利要求及其等效物的范围内的方法及结构。

化合物A1的药物组合物

实施例I

制备如下所述含有5或10mg化合物A1的胶囊。

成分	％w/w
		化合物A1	4.5
微晶纤维素(Avicel PH102)	83.8
		羟丙基纤维素(Klucel LF)	4.5
纯化水	适量
		低取代的羟丙基纤维素(L-HPC；LH-11)	5.9
滑石	0.3
		胶状二氧化硅(Aerosil-200)	0.3
硬脂酸镁	0.6

实施例II

制备如下所述含有25、50或100mg化合物A1的胶囊。

成分	％w/w
		化合物A1	22.7

微晶纤维素(Avicel PH102)	67.2
		羟丙基纤维素(Klucel LF)	3.4
纯化水	适量
		低取代的羟丙基纤维素(L-HPC；LH-11)	5.7
滑石	0.2
		胶状二氧化硅(Aerosil-200)	0.2
硬脂酸镁	0.6

本申请中引用的所有公布及专利和/或专利申请均以引用的方式并入本文中，其引用程度如同各个别公布或专利申请经特定及个别地指示以引用的方式并入本文中一般。

Claims (23)

1.一种化合物，其选自(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮及其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物基本上不含(R)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮，及其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有大于约95％的对映异构体过量。

4.(S)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮。

5.根据权利要求4所述的化合物，其中所述化合物基本上不含(R)-2-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)-3-(3-氟苯基)-4H-色烯-4-酮。

6.根据权利要求4所述的化合物，其中所述化合物具有大于约95％的对映异构体过量。

7.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-6中任一项所述的化合物及至少一种药学上可接受的载剂。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于抑制细胞中存在的PI3δ激酶的催化活性的药物中的用途。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于抑制细胞中存在的PI3γ激酶的催化活性的药物中的用途。

10.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于抑制细胞中存在的PI3δ激酶及PI3γ激酶的催化活性的药物中的用途。

11.根据权利要求8-10中任一项所述的用途，其中所述抑制发生在患有选自以下的疾病、病症或疾患的受试者中：癌症、骨病症、炎症性疾病、免疫疾病、神经系统疾病、代谢疾病、呼吸系统疾病、血栓形成及心脏病。

12.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于治疗有需要的患者的白血病的药物中的用途。

13.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于治疗有需要的患者的哮喘或慢性阻塞性肺病的药物中的用途。

14.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于治疗有需要的患者的类风湿性关节炎、银屑病、狼疮或实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)的药物中的用途。

15.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于治疗有需要的患者的慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、急性骨髓性白血病(AML)、多发性骨髓瘤(MM)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)或无痛非霍奇金氏淋巴瘤(I-NHL)疾病的药物中的用途。

16.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物的用途，其用于制造用来治疗将受益于抑制PI3δ/γ激酶的催化活性的疾病、病症或疾患的药剂。

17.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物在制备用于治疗有需要的受试者的PI3K相关疾病、病症或疾患的药物中的用途。

18.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物与另一活性剂组合在制备用于治疗有需要的受试者的PI3K相关疾病、病症或疾患的组合药物中的用途，其中所述另一活性剂选自：抗癌剂、抗炎剂、免疫抑制剂、类固醇、非甾族抗炎剂、抗组胺剂、止痛剂及其混合物。

19.根据权利要求17所述的用途，其中所述PI3K相关疾病、病症或疾患为免疫系统相关疾病、涉及炎症的疾病或病症、癌症或其它增殖性疾病、肝疾病或肝病症、或肾疾病或肾病症。

20.根据权利要求17所述的用途，其中所述PI3K相关疾病、病症或疾患选自白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征及早幼粒细胞性白血病、银屑病、类风湿性关节炎、骨关节炎、哮喘、COPD、过敏性鼻炎及红斑狼疮。

21.一种抑制细胞中存在的PI3δ激酶的催化活性的非治疗性方法，其包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1-6中任一项所述的化合物接触。

22.一种抑制细胞中存在的PI3γ激酶的催化活性的非治疗性方法，其包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1-6中任一项所述的化合物接触。

23.一种抑制细胞中存在的PI3δ激酶及PI3γ激酶的催化活性的非治疗性方法，其包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1-6中任一项所述的化合物接触。