CN105325284A - 用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交水稻选育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交水稻选育方法，步骤如下：1)筛选含有具有剂量效应的紫米基因P，并含等位的香味基因a和等位的硬米基因H的香型紫硬米水稻保持品种和香型紫硬米水稻恢复品种；2)以香型紫硬米水稻保持品种选育得到基因型为aaPPHH的香型紫硬米保持系和香型紫硬米雄性不育系；3)以香型紫硬米水稻恢复品种选育得到基因型为aaPPHH的香型紫硬米恢复系；4)以香型紫硬米雄性不育系为母本，以香型紫硬米恢复系为父本，组配成产量高、适应性广，基因型为aaPPHH的香型紫硬米杂交水稻。本发明选育的香型紫硬米杂交水稻香味浓郁，种皮紫色，产量高，加工成的米线断口率低，烹煮性好，口感好。

Description

用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交水稻选育方法

技术领域

本发明涉及杂交水稻育种技术，具体是一种用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交水稻选育方法。

背景技术

随着城镇化的发展、环境恶化和人们生活方式的变化，特别是膳食结构的变化，各种现代慢性疾病如动脉粥样硬化，高血脂、冠心病和癌症等的发病率不断攀升，处于亚健康状态的人群比例越来越大，全国约有45％的人处于亚健康状态。这不仅给国家和社会的医疗体系带来了巨大的压力，也给人们带来了不可言喻的痛苦，人们对食品功能性需求越来越高，对既具营养,又有药用保健功能的食品更加关注和喜爱。特别是随着我国进入老龄社会，对抗衰老食品需求量更大。

紫米，也称黑米，本发明称紫米，是指花色苷或花青色素在稻米种皮、果皮内大量累积，从而使糙米呈现紫红色、紫黑色、乌黑色等颜色，因外表乌紫黑色而得名，是一种药食兼用，具有诸多保健功效的珍贵稻米，因此，也称药米、补血米、月米、长寿米、贡米和珍珠米，米质有糯型和粘型两种。

我国传统医学认为，紫黑米能补肾，改善心、肝、脾、胃之功能，固本扶正，大补气血阴阳，对消化系统功能弱的人是很好的营养补品，同时，还可滋养肌肤，防止白发早生，具有延缓衰老之功效，对头晕、贫血、眼疾、腰腿酸软等症有一定疗效。紫黑米还可辅助治疗跌打、骨折，将紫黑米捣烂外敷或用紫米酒内服外擦，可加快痊愈。古农医书记载：紫黑米“滋阴补肾，健身暖胃，明目活血”，“清肝润肠”，“滑湿益精，补肺缓筋”等功效；可入药入膳，对头昏目眩、贫血白发、腰膝酸软、夜盲耳鸣症、疗效尤佳。长期食用可延年益寿。

现代医学证实，紫黑米具有滋阴补肾，健脾暖肝、补益脾胃，益气活血，养肝明目等疗效。经常食用紫黑米，有利于防治头昏、目眩、贫血、白发、眼疾、腰膝酸软、肺燥咳嗽、大便秘结、小便不利、肾虚水肿、食欲不振、脾胃虚弱等症。

经有关水稻学者试验分析报道，紫黑米内含18种氨基酸，人体所需各种氨基酸都具有，其含量比普通大米高25.4％。还含有硒、铁、锌、钙、锰、钾、镁、磷、镁、钼等多种矿物质和微量元素，其中钾、镁、铁、锌、锰分别比普通大米高出4.4倍、6倍、1.7倍、3.8倍和1.7倍。另外内含的B1、B2、B6、B12等多种B族维生素，含量是普通大米的4倍之多，其中，维生素B1、B2的含量分别为4.1mg/kg，和2.7mg/kg，是普通大米的1.5-6.8倍。此外，含有的黄酮类活性物质，属于黄酮类花色素甙类化合物，包含矢车菊素-5-葡萄糖式、天竺-3-麦芽糖苷-5-葡萄糖等，其含量是普通大米的5倍之多。同时，其赖氨酸是普通大米的2-2.5倍，蛋白质含量是普通大米的37％；膳食纤维含量较多，淀粉消化速度比较慢，血糖指数仅有55(普通米饭为87)。因此认为，丰富的氨基酸、微量元素和矿物质有益胃肠消化，增强造血功能，可使血红蛋白升高，具有强身补脑、治疗产妇头昏等功效。富含黄酮类活性物质，对预防动脉硬化有很大的作用。维生素B群里的B1、B2、B6和B12都能够促进脂肪、蛋白质、糖类的代谢，具有燃烧脂肪、避免脂肪囤积的功效。丰富的钾元素能够吸收体内多余的盐分，并且维持体内水分的平衡，而对人体有非常好的帮助，消除水肿浮胖。丰富的膳食纤维能够促进肠道通便、增加饱腹感，抑制食欲，有助于减肥。低血糖指数不会造成血糖的剧烈波动，丰富的钾、镁等矿物质还有利于控制血压、减少患心脑血管疾病的风险，所以，可作为糖尿病人和心血管疾病患者膳食调养食品。

香稻米含有大量的蛋白质、各种氨基酸、生物碱、维生素、淀粉酶、脂肪酶、麦芽糖酶和钙、磷、铁以及丰富的锌、硒等微量元素，能增强人体的抵抗力，改善新陈代谢，是治疗坏血病、过敏性疾病、急慢性疾病的辅助药物，还能健全毛细血管，对高血压及心血管疾病患者有一定疗效。李时珍在《本草纲目》中记载，“香米能润心肺，和白药，久服轻身延年”。同时，香米饭香味浓馥，米粒晶莹，米饭芬芳而深得消费者的青睐，以香米酿成的香米酒，醇香满口，酒品质也佳。具有香味的稻米，拥有丰富的营养保健功效，经济价值甚高。

米线也叫米粉，是以大米为原料加工而成的米制品，南方地区普遍把米线作为早餐或正餐食用。改革开发后，随着人口流动增加，北方人也把米线作为食品。据报道，全国每年用于米线加工大米在100万吨以上，上百万人口城市都有米线加工企业达一百多家，特别是随着现代人们生活节凑加快，对方便米线的食用，对米线原料需求越来越大，尤其对作为药食兼用，具有保健功能的紫米线更是青睐有加。但是，大米原料品种对米线品质影响很大，优质米线对大米原料品种具有严格要求，由于米线加工原料不足，或者为了降低成本，一些不法加工企业主为了生产出来的米线不易断，耐煮，口感有劲道，超量添加食用胶，甚至工业用胶，严重危害人们健康。太原“塑料门”事件，使全国人民对米线的安全更加关注。导致这些问题发生，主要是我国对专用米线加工的水稻品种重视不够，研发不足，符合加工优质米线的高直链淀粉水稻品种极少，即使勉强可以用作加工米线的水稻品种，但也是产量低，满足不了米线加工需求，米线米价格也居高不下，导致不法商人铤而走险。另一方面，我国地方紫黑米品种多数是糯稻，即使有地方紫黑米粘稻品种，甚至选育出的紫黑米粘稻新品种，不仅产量低，也因直链淀粉含量不足，难以满足紫黑米线加工对优质原料的需求。因此，目前，具有特殊食药保健作用的特种稻米研究受到了水稻育种科学的高度关注，也成为当前水稻育种的一个热点和发展方向。为了解决以上问题，本发明专利申请人，依托云南丰富的特种稻米资源，开展了特种稻米资源创新与利用研究项目，经过十多年的探索，创建了专用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交稻的选育方法，选育的品种不仅产量高，适应性广，而且最适合用于优质米线加工，可以满足现代人们对药食兼用，保健养生食品需求。

发明内容

本发明针对我国专用于优质米线加工原料的杂交稻育种尤其专用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交稻的育种还是空白，导致优质米线稻米原料供给不足，可以用于米线加工的稻米原料价格居高不下，无法满足市场需求，特别是难以解决具有保健养生作用的紫香米线开发需求的现状，提供一种香型紫硬米三系杂交水稻的选育方法，以满足市场对紫香米线日益提高的需求。

本发明专用于加工紫米线的香型紫硬米三系杂交水稻的选育方法，包括如下步骤：

1)从香型紫硬米水稻资源中筛选含有具有剂量效应的紫米基因P，并含等位的香味基因a和等位的硬米基因H的香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI；

2)把香型紫硬米水稻保持品种I中的紫米基因P、香味基因a和硬米基因H导入配合力高的水稻保持系II中，以香型、紫米、硬米、高配合力、具保持能力为标准，系谱选择得到配合力高且基因型为aaPPHH的香型紫硬米保持系III；以三系不育系IV为母本，以香型紫硬米保持系III为父本杂交，选取后代中的不育株，以香型紫硬米保持系III为父本连续回交，以香型、紫米、硬米、雄性败育彻底、异交习性好为标准，选育得到基因型为aaPPHH的香型紫硬米雄性不育系V；

3)把香型紫硬米水稻恢复品种VI中的紫米基因P、香味基因a和硬米基因H导入水稻恢复系VII中，以香型、紫米、硬米、高配合力、花粉量大、花期较长为标准，系谱选择得到基因型为aaPPHH的香型紫硬米恢复系VIII；

4)以香型紫硬米雄性不育系V为母本，以香型紫硬米恢复系VIII为父本，组配成产量高、适应性广，基因型为aaPPHH的香型紫硬米杂交水稻IX。

本发明的关键是用来配组杂交水稻的香型紫硬米三系雄性不育系V和香型紫硬米恢复系VIII，这两者控制香味性状的基因必须等位，这两者控制硬米的基因也必须等位，且这两者控制紫米的基因有剂量效应。因此，所述香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI应含有等位香味基因，以香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI杂交，检测F₁植株地上部和种子(F₂)是否全部有香味来判断香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI的香味基因是否等位，当F₁植株地上部和种子(F₂)全部具有香味时，可判定香型硬米水稻I和香型硬米水稻VI具有等位的香味基因，本发明称该基因为a；所述香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI应含有等位硬米基因，通过香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI杂交，检测F₁植株的籽粒(F₂)是否全为硬米来判断香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI的硬米基因是否等位，当籽粒全为硬米时，可判定香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI具有等位的硬米基因，本发明称该基因为H，因硬米基因存在一定的修饰基因，当基因型为HH时表现有一定的超亲现象，其稻米(F₂)直链淀粉含量更高。而当香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI杂交后籽粒的紫色比亲本深，则香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI的紫米基因具有剂量效应，该基因在本发明中称为P。即，以所述香型紫硬米水稻保持品种I和所述香型紫硬米水稻恢复品种VI杂交，种植杂交种子，得到植株地上部和种子(F₂)全部具有香味且籽粒全为硬米表现型，同时籽粒的紫色比两个亲本都深，以此鉴定香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI含有具有剂量效应的紫米基因P，并含等位的香味基因a和等位的硬米基因H。

步骤2)和步骤3)可以同步进行，也可以分别实施。

所述紫米，是指花色苷或花青色素在稻米种皮、果皮内大量累积，从而使糙米呈现紫色乃至紫黑色。

所述香型是指水稻的地上部，包括籽粒、叶片、茎杆等均有香味。

所述硬米是指水稻籽粒的直链淀粉含量25％以上。这种籽粒做成的米饭，冷后易回生变硬，只能热食，但因能维持米线的凝胶网络，使米线耐酸和高温，不易断，口感好，具有良好的烹煮性。

所述产量高是指比一般紫米品种的产量高30％以上，比一般杂交水稻产量高5％以上。

所述适应性广是指比一般紫米品种更适宜在不同海拔、纬度，不同生态气候推广种植。

所述具保持能力是以该品种为父本与三系不育系IV杂交后，种植F₁代的表现为结实率为0％。

所述具恢复力是以该品种为父本与三系不育系IV杂交后，种植F₁代的表现为结实率大于等于75％。

步骤1)所述香型紫硬米水稻资源可为来自国内外的地方香型紫硬水稻种质资源，包括各地方老品种和通过老品种杂交选育出香型紫硬米常规品种及其衍生品种。优选为云南香型紫硬水稻种质资源。

步骤2)、步骤3)所述导入为通过常规育种或者生物技术育种，使紫米基因P、香味基因a和硬米基因H转移、重组，获得具有目标性状的新育种材料或品系。其中，生物技术育种可为转基因育种技术、体细胞杂交育种技术、分子标记辅助育种技术、单倍体育种技术和组织培养育种技术等。

所述杂交，为常规的水稻杂交，要点有：一是依据父本和母本的生物学特性，采取栽培技术措施，使父母本在同一时间开花；二是通过人工去雄(当母本为不育系时不需人工去雄)、人工授粉等外部手段将父本的花粉传到母本的柱头上进行杂交授粉，获取杂交稻种子。

所述连续回交的代数优选为6-8代，所述系谱选择的代数优选4-8代。

所述香型紫硬米水稻保持品种I优选文紫488；所述香型紫硬米水稻恢复品种VI优选文紫548。

所述水稻保持系II优选为岗46B等现行推广使用中配合力强和直链淀粉含量高的任何一种保持系或品种。

所述水稻恢复系VII优选为江恢151等现行推广使用中配合力强和直链淀粉含量高的任何一种恢复系或品种。

所述三系不育系IV可为野败型不育系珍汕97A、龙特浦A、岗型不育系岗46A、D型不育系宜香1A、印水型不育系Ⅱ-32A中的一种。

所述香型紫硬米保持系III优选成功选育出的保持系文香紫695B，所述香型紫硬米三系雄性不育系V优选成功选育出的不育系文香紫695A。所述香型紫硬米恢复系VIII优选成功选育出的恢复系文紫恢856。

本发明还提供所述香型紫硬米三系杂交水稻选育方法在水稻育种中的应用。

本发明所述香型紫硬米三系杂交水稻的选育方法，具有如下优点：

1、对香型紫硬米水稻进行杂种优势利用研究，有利于把控制具有药食兼用，具有诸多保健功效的珍贵紫米性状基因P，控制具有营养保健功效和食味品质的香味性状基因a以及控制硬米基因H这3个品质基因和高配合力、广适应性基因聚合在一体，选育出香型紫硬米杂交水稻，不仅使其药食兼用保健功效价值更好更广，而且因香味浓郁，米质硬，加工成米线具有淡香味，食味性更好，同时，因积聚优异基因，遗传基础更丰富，适宜推广范围更广，抗病性更强，尤其产量获得大幅度提高，降低了紫米线开发成本，可以最大限度满足市场需求，提高人民群众生活水平。

2、本发明创建的香型紫硬米三系雄性不育系V和香型紫硬米恢复系VIII具有等位硬米基因，糊化温度和胶稠度含量适中，因硬米基因存在一定的修饰基因，表现有一定的超亲现象，配组选育出的杂交水稻Ⅸ，其稻米(F₂)直链淀粉含量更高，不会发生分离，因直链淀粉含量增高，增加米线的硬度，保持米线的凝胶网络，有助于米线耐酸和高温，断口率低，使米线具有良好的烹煮性，口感更好。

3、以本发明方法育成的香型紫硬米杂交水稻IX，不仅产量高，适应性广，特别是除地下根部外，包括籽粒、叶片、茎杆等整个植株的地上部分均有香味，在蒸煮过程中，向外散发出令人愉快的香味，打开蒸煮工具，米饭中散发出一股扑鼻的浓郁香味，加工成米线也有淡淡的香味，增加人们的食欲，特别是紫米性状属多显性基因控制，当杂交配组双亲，即香型紫硬米雄性不育系V和香型紫硬米恢复系VIII均是紫米，杂种F₁植株因紫米基因剂量效应，稻米集聚营养保健功效含量更高，药食保健效果更佳，更受消费者青睐。

附图说明

图1为本发明以常规育种进行专用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交水稻选育的流程图。

图2为专用于加工紫香米线的香型紫硬米三系杂交水稻文紫优856的选育系谱图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的杂交技术为本领域技术人员所熟知的常规杂交技术。稻米直链淀粉等理化分析按照GB/T17891方法执行。

以下实施例中所涉及水稻品种文紫476、文紫482、文紫488、文紫493、文紫502、文紫513、文紫521、文紫538、文紫540、文紫548、文紫恢856为文山壮族苗族自治州农业科学院稻作研究所选育的品种，在文山壮族苗族自治州农业科学研究所种质库中有保存，可从该种质库引种。地方紫硬米老品种罗平黑谷、新城紫米、元阳紫米、豪皮香、子半旱谷和缅甸黑谷等为收集保存的系列地方资源品种，在文山壮族苗族自治州农业科学院稻作研究所种质库中有保存。龙特浦A，岗46A，Ⅱ-32A、文香28A等不育系和明恢63、岗46B、江恢151等恢复系为公知公用的常用不育系和恢复系，可引自种子库或各品种的选育单位。

实施例1香型紫硬米水稻资源的筛选

本发明以常规育种进行香型紫硬米三系杂交水稻选育的流程图。如图1所示，其中“香型紫硬米水稻保持品种I×水稻保持系II”处标志“可互为父母本”是指可以以香型紫硬米水稻保持品种I为母本，以水稻保持系II为父本杂交，也可以以水稻保持系II为母本，以香型紫硬米水稻保持品种I为父本杂交，“香型紫硬米水稻恢复品种VI×水稻恢复系VII”处以此类推。

如结合生物技术进行本发明的香型紫硬米三系杂交水稻选育，则为：利用常规生物技术手段，将香型紫硬米水稻I中紫米基因P、香味基因a和硬米基因H导入水稻保持系II中，得到香型紫硬米保持系III；和/或利用常规生物技术手段，将香型紫硬米水稻恢复品种VI中紫米基因P、香味基因a和硬米基因H导入水稻恢复系VII中，得到香型紫硬米恢复系VIII。

由图1可知，本发明的关键不仅是要实现香型紫硬米杂交稻三系配套，即成功选育出香型紫硬米保持系III、香型紫硬米雄性不育系V和香型紫硬米恢复系VIII，而且用来配组杂交水稻的香型紫硬米雄性不育系V和香型紫硬米恢复系VIII不仅要求配合力强、杂交种产量高，更要求控制这两种供体材料的香味和硬米性状的基因a、H的是等位的(指香型紫硬米雄性不育系V和香型紫硬米恢复系VIII的香味基因a等位，香型紫硬米雄性不育系V和香型紫硬米恢复系VIII的硬米基因H等位)，且紫米基因P最好纯合(紫米基因P具有剂量效应)，这样组配的香型紫硬米杂交水稻IX杂种优势强，香味浓郁、硬米，且籽粒紫色程度深。所以，本发明首先需要筛符合要求的香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI，作为香型、紫米、硬米基因供体材料。

三系杂交水稻育种中因受质核互作和恢保关系的影响，为了筛选能同时作为紫米基因P、香味基因a和硬米基因H的供体材料，又要对三系不育系(CMS)分别具有保持和恢复能力的亲本材料，必须首先开展紫米水稻资源尤其是香型紫硬米资源对胞质雄性不育的育性筛选鉴定试验。种植F₁种子，根据育性保持(结实率为0％)或者恢复(结实率大于等于75％)表型，初步选择结实率为0％的香型紫硬米材料作为紫米基因P、香味基因a和硬米基因H的供体保持材料，初步选择结实率大于等于75％的香型紫硬米材料紫米基因P、香味基因a和硬米基因H的供体恢复材料。再以初步选定的供体保持材料和供体恢复材料为父母本组配杂交组合，选取其中杂种F₁植株及其种子(F₂)全部有香味、紫米色度比亲本深、全部是硬米，米质理化分析直链淀粉含量25％以上的杂交组合，证明该组合的父母本具有等位的香味基因a和硬米基因H，紫米基因P为多基因控制，具有剂量效应，可将该组合父母本分别用作本发明的供体保持材料(即香型紫硬米水稻保持品种I)和供体恢复材料(即香型紫硬米水稻恢复品种VI)。

本实施例以生产上广泛应用的恢保关系相同的优良胞质雄性不育系(如野败型不育系龙特浦A，岗型不育系岗46A，D型不育系文香28A，印水型不育系Ⅱ-32A等)为母本，以香型紫硬米资源紫米品种文紫476、文紫482、文紫488、文紫493、文紫502、文紫513、文紫521、文紫538、文紫540、文紫548、罗平黑谷、新城紫米、元阳紫米、豪皮香、子半旱谷和缅甸黑谷等为父本，2005年7月在文山市州农科院网室杂交配组，获得杂交F₁种子。

2005年11月把杂交F₁种子带到三亚市文山州农科院试验基地播种，2006年3月对种植的F₁结实率进行测定，龙特浦A/文紫488、岗46A/文紫488、文香28A/文紫488、Ⅱ-32A/文紫488、龙特浦A/豪皮香、岗46A/豪皮香、文香28A/豪皮香、Ⅱ-32A/豪皮香等杂交组合的结实率均为0％。豪皮香虽然香味浓，抗性也好，米质硬，但因是地方老品种，株高高，株型较差，而文紫488香味更浓郁，株型好，和优良保持系Ⅱ杂交，容易选出具有株型更好，香味更浓，异交率高，配合力强的保持系，所以初步选择文紫488作为选育香型紫硬米保持系选育的香味a、紫米P和硬米H等基因供体品种。

同时，在F₁的结实率测定中，龙特浦A/文紫548、岗46A/文紫548、文香28A/文紫548、Ⅱ-32A/文紫548、龙特浦A/罗平黑谷、岗46A/罗平黑谷、文香28A/罗平黑谷、Ⅱ-32A/罗平黑谷等测交组合，结实率均在85％以上，其它组合结实率在15-74％，说明文紫548和罗平黑谷恢复力强。罗平黑谷虽然抗性较强，有香味，米质硬，但生育期长，又是地方老品种，株型差，杆高，不易改良，而文紫548香味浓郁，株型良好，抗稻瘟病较强，和优良恢复系杂交，容易选出株型好，香味浓，花粉量大，配合力强的恢复系，所以选择文紫548作为选育香型紫硬米恢复系选育的香味、紫米、硬米基因供体品种。

2006年7月，在文山市文山州农科院网室，用具有不同遗传背景的文紫488作母本和文紫548杂交，2006年11月，把获得的杂交种子F₁及其亲本带到三亚文山州农科院试验基地种植，2007年3月检测杂种F₁的植株和杂交稻米(F₂)米粒香味、硬米分离情况和米粒紫色深度，结果，文紫488/文紫548杂种F₁植株及其杂交种子(F₂)均是硬米型，直链淀粉含量27.2-27.6％，香味和硬米性状没有发生分离，米粒种皮紫色度比亲本深，充分说明杂交亲本的香味基因和硬米基因是等位的，紫米基因为多基因控制，具有剂量效应。

因此，选择以文紫488为本发明方法中的香型紫硬米水稻保持品种I，以文紫548为本发明方法中的香型紫硬米水稻恢复品种VI。

实施例2香型紫硬米保持系文香紫695B、不育系文香紫695A的创建

本实施例以文紫488作为本发明的香味、紫米、硬米基因供体——香型紫硬米水稻保持品种I，以岗46B作为高配合力、强保持基因供体材料——水稻保持系II，以不育系Ⅱ-32A作为三系不育系IV，按照图1选育香型紫硬米保持系III、香型紫硬米雄性不育系V，具体为：

2007年3月，在三亚市文山州农科院网室，以文紫488为母本，以岗46B为父本进行杂交，之后按照米粒具有香味、紫米、硬米等的育种目标，采用系谱法和增加选择压的方法，用咀嚼法鉴定糙米的香味有无、观察籽粒种皮紫色着色程度和对稻米进行理化分析等选择方案进行分离、加代选择，不断纯化优异性状基因，筛选优良单株。

经过两年文山、三亚来回四季加代，2009年3月，在三亚市文山州农科院试验基地，以不育系Ⅱ-32A为母本，对F₄代中综合农艺性状较好的，尤其是熟期较早，米粒种皮紫色度深、香味浓、花时早、柱头大、株叶型好的文06-95等10个单株进行杂交测配，同年4月把获得的测交组合种子F₁在文山市文山州农科院试验基地种植。2009年8月观察测交组合的败育情况，结果Ⅱ-32A/文06-95组合败育彻底，结实率为0％。

2009年8月以后，以文06-95作为回交父本，不断经过镜检，选择败育彻底、异交习性、株叶型、香味浓和米粒种皮紫色着色度深的不育单株进行回交，进行核置换。回交到F₁B₆代时，得到文06-95-12A等6个稳定的香型紫硬米不育单株。

2012年7月，以生产上广泛应用的恢复系明恢63和自主选育的文紫恢856等对6个稳定的香型紫硬米不育单株进行育性恢复、配合力、香味基因和米粒种皮紫色基因剂量效应现象进行鉴定。

具体做法是以文06-95-12A等6个稳定的香型紫硬米不育单株为母本，以明恢63和文紫恢856为父本进行杂交配组，获得测交组合F₁种子。2012年11月把测交组合F₁种子带到三亚文山州农科院试验基地种植，2013年3月对测交组合F₁进行考察，结果文06-95-12A/明恢63、文06-95-12A/文紫恢856杂交的测交组合F₁产量最高，香味浓郁，尤其文06-95-12A/文紫恢856组合米粒种皮紫色度明显比其杂交亲本深，杂交稻米(F₂)的直链淀粉含量为26.5％，和杂交双亲一致，并且文06-95-12A雄性败育彻底、稳定，异交习性和株叶型好。说明了不育单株文06-95-12A容易恢复，配合力强，和自主选育香型紫硬米品种文紫恢856的香味基因和硬米基因等位。因此选择文06-95-12A作为当选不育系，定名为文香紫695A，保持品系文06-95作为保持系，并定名为文香紫695B。然后对当选的不育单株文香紫695A进行生物学特性观察、稻瘟病抗性鉴定和品质理化分析。

至此，本实施例选育出了保持系文香紫695B(作为香型紫硬米保持系III)和不育系文香紫695A(作为香型紫硬米雄性不育系V)。

实施例3香型紫硬米恢复系文紫恢856的创建

本实施例以文紫548作为本发明的香味、紫米、硬米基因供体品种——香型紫硬米水稻恢复品种VI，以江恢151作为强恢复高配合力基因供体材料——水稻恢复系VII，按照图1选育香型紫硬米恢复系VIII，具体为：

2008年7月，在文山市文山州农科院网室，以香型紫硬米水稻文紫548为母本，以高配合力、强恢复力、广适性、米质硬的优良恢复系江恢151为父本进行杂交，之后按照米粒具有香味浓、紫米、硬米的育种目标，采用系谱法和增加选择压的方法，用咀嚼法鉴定糙米的香味有无和观察紫米种皮子色度、米质理化分析等选择方案进行分离、加代选择，纯化优异性状基因，筛选优良恢复单株。

到2010年8月，系谱选育至F₄代时，在文山市文山州农科院网室，选择F₄代中综合农艺性状较好的，糙米有香味、紫色度深的文08-821、文08-827、文08-834、文08-835、文08-856、文08-863等6个单株，和生产上广泛应用的龙特浦A、岗46A、文香28A和Ⅱ-32A等细胞质不同的三系不育系进行杂交配组，获得测交组合龙特浦A/文08-856、岗46A/文08-856、文香28A/文08-856、Ⅱ-32A/文08-856等24个，2010年11月把获得24个测交组合带到三亚文山州农科院基地种植，2011年4月对测交组合进行考种调查，结果，龙特浦A/文08-856、岗46A/文08-856、文香28A/文08-856、Ⅱ-32A/文08-856、龙特浦A/文08-834、岗46A/文08-834、文香28A/文08-863、Ⅱ-32A/文08-863等株型好，产量高，即文08-856、文08-834、文08-863等株系的恢复力和配合力强，对文08-856、文08-834、文08-863等株系进行加代，纯合优异性状基因。2011年7月，加代到F₆时，对F₆当选单株进行生物学特性观察和稻瘟病抗性鉴定，同时，以龙特浦A、岗46A、文香28A和Ⅱ-32A和文紫488作为母本，和文08-856、文08-834、文08-863等杂交配组，获得龙特浦A/文08-856、岗46A/文08-856、文香28A/文08-856、Ⅱ-32A/文08-856和文紫488/文08-856等15个组合。

2012年4月在文山市文山州农科院试验基地种植文紫488/文08-856等15个组合。2012年8月对文紫488/文08-856等15个组合进行主要经济性状考种调查，对其杂交稻米(F₂)的香味、紫色度和米质进行理化分析，结果还是龙特浦A/文08-856、岗46A/文08-856、文香28A/文08-856、Ⅱ-32A/文08-856等测交组合产量最高，特别是文紫488/文08-856不仅产量高，米粒紫色度比其亲本深，米粒直链淀粉含量为26.5％，米饭香味浓郁，冷后回生变硬，只能趁热食用，加工成米线有香味，断口率低，口感好，同时，说明文08-856品系株型好，秆粗，穗子大，花粉量大，香味馥郁，米粒红紫色着色偏暗，抗稻瘟病，把文08-856品系作为当选的香型紫硬米恢复系，并定名文紫恢856。

至此，本实施例选育出了恢复系文紫恢856，可用作本发明的香型紫硬米恢复系VIII。

实施例4香型紫硬米三系杂交水稻文紫优856的选育

本实施例参照图1的流程，以文香紫695A(选育方法见实施例2)作为香型紫硬米雄性不育系V，以文紫恢856(选育方法见实施例3)作为香型紫硬米恢复系VIII，组配香型紫硬米优质杂交水稻。

2013年7月在文山市文山州农科院基地以香型紫硬米三系不育系文香紫695A为母本，以香型紫硬米恢复系文紫恢856为父本，组配成杂交组合文香紫695A×文紫恢856，得到F₁种子。

2014年4月，在云南文山、蒙自、景洪和罗平和三亚等地种植杂交组合F₁种子，进行多点鉴定试验，鉴定F₁植株的香味情况，同时分析杂交稻米(F₂)直链淀粉含量和加工成米线的效果，尤其杂交稻米种皮紫色着色深度。另一方面，通过多点种植杂交组合F₁种子，鉴定当选单株的配合力及其杂交组合的适应性。

结果，文香紫695A×文紫恢856杂交组合表现出产量高，适应性强，杂种优势强，植株除根外，都有香味，而且杂交稻米种皮紫色度深，以其米(F₂)加工成米线，紫色，耐煮，不易断，有淡淡的香味，口感好，把文香紫695A×文紫恢856杂交组合定名为文紫优856，即本发明的香型紫硬米杂交水稻IX。文紫优856的完整选育系谱图见图2。

Claims (10)

1.一种香型紫硬米三系杂交水稻的选育方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)从香型紫硬米水稻资源中筛选含有具有剂量效应的紫米基因P，并含等位的香味基因a和等位的硬米基因H的香型紫硬米水稻保持品种I和香型紫硬米水稻恢复品种VI；

2)把香型紫硬米水稻保持品种I中的紫米基因P、香味基因a和硬米基因H导入配合力高的水稻保持系II中，以香型、紫米、硬米、高配合力、具保持能力为标准，系谱选择得到配合力高且基因型为aaPPHH的香型紫硬米保持系III；以三系不育系IV为母本，以香型紫硬米保持系III为父本杂交，选取后代中的不育株，以香型紫硬米保持系III为父本连续回交，以香型、紫米、硬米、雄性败育彻底、异交习性好为标准，选育得到基因型为aaPPHH的香型紫硬米三系雄性不育系V；

3)把香型紫硬米水稻恢复品种VI中的紫米基因P、香味基因a和硬米基因H导入水稻恢复系VII中，以香型、紫米、硬米、高配合力、花粉量大、花期较长为标准，系谱选择得到基因型为aaPPHH的香型紫硬米恢复系VIII；

4)以香型紫硬米三系雄性不育系V为母本，以香型紫硬米恢复系VIII为父本，组配成产量高、适应性广，基因型为aaPPHH的香型紫硬米杂交水稻IX。

2.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，步骤1)所述香型紫硬米水稻资源为来自国内外的地方香型紫硬米水稻种质资源。

3.根据权利要求2所述的选育方法，步骤1)所述香型紫硬米水稻资源为云南香型紫硬米水稻种质资源。

4.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述导入为通过常规育种或者生物技术育种导入。

5.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述香型紫硬米水稻保持品种I为文紫488；所述香型紫硬米水稻恢复品种VI为文紫548。

6.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述水稻保持系II为岗46B。

7.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述水稻恢复系VII为江恢151。

8.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述连续回交的代数为6-8代，所述系谱选择的代数为4-8代。

9.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述香型紫硬米保持系III为选育出的保持系文香紫695B，所述香型紫硬米三系雄性不育系V为选育出的不育系文香紫695A。所述香型紫硬米恢复系VIII为选育出的恢复系文紫恢856。

10.权利要求1-9任一项所述的香型紫硬米三系杂交水稻选育方法在水稻育种中的应用。