CN105315324A - 1-(乙基氨基酸苄酯)-β-咔啉-3-羧酸苄酯、制备、活性、纳米结构和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了下式的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯。公开了它们的制备方法，公开了它们的纳米结构，公开了它们抑制肿瘤细胞增殖的活性，进一步公开了它们抑制S180小鼠肿瘤生长的活性，阐明了它们在制备抗肿瘤疾病药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及下式的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯。涉及它们的制备方法，涉及它们体外抑制肿瘤细胞增殖的活性，涉及它们对荷S180小鼠肿瘤生长的抑制作用，进一步涉及它们的纳米结构。因而本发明涉及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明属于生物医药领域。
技术背景
癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和赘生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此，开发新的高效、低毒、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。
随着对肿瘤特性和发病本质的认识，最近几年抗肿瘤药物不断从传统的细胞毒药物向发展非细胞毒药物过渡。β-咔啉是天然来源的细胞毒性抗肿瘤化合物。发明人认识到，β-咔啉抗肿瘤的细胞毒性本质是与肿瘤细胞DNA之间的嵌插。这种形式的扦插可造成细胞毒性。发明人曾经发现，β-咔啉可以插入肿瘤细胞DNA之间的双螺旋碱基之间。在进一步的研究中，发明人认识到，β-咔啉的抗肿瘤活性来自嵌插。发明人还认识到，在β-咔啉的1位引入二肽生成β-咔啉-3-羧酸苄酯及衍生物可增强β-咔啉与肿瘤细胞的作用，增强抗肿瘤活性。根据这些认识，发明人提出1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯的发明。与发明人前期的发明1-(乙基-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯相比，本发明突出创造性在于，保留了β-咔啉与肿瘤细胞DNA之间的嵌插作用，在低剂量下显示高抗肿瘤活性。于是，1-(乙基-Ser-Ile-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯显示了良好的细胞毒作用和抗肿瘤活性。
发明的内容
本发明的第一个内容是提供下式的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯。通式中AA为L-Leu残基，L-Phe残基，L-Val残基、L-Ala残基，L-Gly残基，L-Asp(OBzl)残基，L-Glu(OBzl)残基，L-Trp残基，L-Tyr残基，L-Ser残基，L-Thr残基，L-Pro残基，L-Met残基，L-Arg(NO2)残基，L-Asn残基，L-Gln残基和L-Lys残基。
本发明的第二个内容是提供1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯的制备方法，该方法包括：
(1)将L-Trp-OBzl在三氟醋酸的催化下与1，1，3，3-四甲氧基丙烷进行Pictet-Spengler缩合，得到1-(2，2-二甲氧乙基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(2)将1-(2，2-二甲氧乙基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯在四氢呋喃中用高锰酸钾氧化，得到1-(2，2-二甲氧乙基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(3)在浓盐酸和冰醋酸的水溶液中1-(2，2-二甲氧乙基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯水解为1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(4)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Leu-OBzl还原性胺解，得到l-(乙基-Ser-Leu-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(5)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Phe-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Phe-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(6)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Val-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Val-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(7)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Ala-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Ala-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(8)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Gly-OBz还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Gly-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(9)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Asp(OBzl)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Asp(OBzl)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(10)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Glu(OBzl)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Glu(OBzl)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(11)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Trp-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Trp-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(12)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Tyr-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Tyr-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(13)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Ser-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Ser-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(14)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Thr-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Thr-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(15)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Pro-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Pro-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(16)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Met-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Met-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(17)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Arg(NO2)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Arg(NO2)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(18)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Asn-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Asn-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(19)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Gln-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Gln-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(20)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Lys(Fmoc)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(21)将1-(乙基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯冰浴下用哌啶的二甲基甲酰胺(20％)溶液脱除Fmoc保护基得得到1-(乙基-Ser-Lys-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯。
本发明的第三个内容是评价1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯抑制肿瘤细胞增殖的作用。
本发明的第四个内容是评价1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯抑制S180肿瘤小鼠的肿瘤生长的作用。
本发明的第五个内容是测定1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯的纳米结构。
附图说明
图1化合物5a-q的合成路线图。i)多聚磷酸，苄醇；ii)三氟醋酸，1，1，3，3-四甲氧基丙烷，二氯甲烷；iii)高锰酸钾，四氢呋喃；iv)浓盐酸，冰醋酸，蒸馏水；v)氰基硼氢化钠，氢氧化钠，甲醇，HCl·Ser-AA-OBz。其中5a中AA＝Leu残基；5b中AA＝Phe残基；5c中AA＝Val残基；5d中AA＝Ala残基；5e中AA＝Gly残基；5f中AA＝Asp(OBzl)残基；5g中AA＝Glu(OBzl)残基；5h中AA＝Trp残基；5i中AA＝Tyr残基；5g中AA＝Ser残基；5k中AA＝Thr残基；5l中AA＝Pro残基；5m中AA＝Met残基；5n中AA＝Arg(NO2)残基；5o中AA＝Asn残基；5p中AA＝Gln残基；5q中AA＝Lys残基。
图2化合物5a-q在纯水中5×10-6M浓度下的透射电镜照片。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一些列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备L-Trp-OBzl(1)
将36g(76.87mmol)多聚磷酸和150mL(112.5mmol)苄醇60℃下混合，搅拌下加入20g(98.04mmol)L-Trp，在60℃下油浴搅拌。48h后TLC显示原料斑点消失，停止加热使其冷却到室温后，加入大量乙醚，使其析出无色固体，过滤得到L-色氨酸苄酯磷酸盐。所得L-色氨酸苄酯磷酸盐用乙酸乙酯悬浮，再用三乙胺调pH到8，用饱和碳酸氢钠水溶液萃洗后，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液洗涤再用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到14.67g(51％)目标物，为无色固体。ESI-MS：m/e[M+]：295。
实施例2制备(3S)-1-(2，2-二甲氧乙基)-1，2，3，4，-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯(2)
在250mL的圆底烧瓶中加入50mL二氯甲烷，5mL(30.4mol)1，1，3，3-四甲氧基丙烷，5mL(67.3mmol)三氟醋酸，活化30min，再加5g(19.6mmol)L-色氨酸苄酯，室温反应7天，TLC显示原料斑点消失。冰浴下往反应混合物中滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH8，再加50mL饱和碳酸钠水溶液，二氯甲烷层用饱和碳酸氢钠水溶液洗(30mL×3)，用饱和食盐水洗(30mL×3)，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，残留物用硅胶柱层析纯化，得2.4g(36％)目标物，为黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：395。
实施例3制备1-(2，2-二甲氧乙基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(3)
在250mL的圆底烧瓶中加入4.3g(13.783mmol)(3S)-1-(2，2-二甲氧乙基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉羧酸苄酯(2)，100mL无水四氢呋喃中，搅拌至溶液澄清，再在冰浴冷却条件下，分批加高锰酸钾3.04g(19.29mmol)，30min全部加完后，室温反应8h，TLC显示原料斑点消失，过滤，滤饼用热乙酸乙酯溶解后过滤，废渣弃去，乙酸乙酯冷却后，用水和饱和食盐水洗，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，，过滤，滤液减压浓缩至干，残留物用硅胶柱层析纯化，得816mg(20％)目标物，为黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：391。
实施例4制备1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)
在100mL的圆底烧瓶中加入1g(2.475mmol)1-(2，2-二甲氧乙基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(3)，14mL醋酸，2mL水和2mL盐酸，室温搅拌4.5h，TLC显示原料斑点消失，加入50mL冰水，冰浴下搅拌10min后过滤，滤饼用水/5％碳酸氢钠水溶液水洗涤，晾干，直接应用到下一步反应。
实施例5制备1-(乙基-Ser-Leu-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5a)
在100mL的圆底烧瓶中加入662mg(1.91mmol)HCl·Ser-Leu-OBzl，26mg(0.64mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加入439mg(1.27mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加100mg(1.27mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.20)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得100mg(12.3％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：637.IR(KBr)：3277，3172，3089，3062，3034，2956，2931，2868，1712，1701，1651，1625，1568，1498，1379，1348，1309，1247，1213，1153，1139，1103，1058，904，786，746，698cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.73(s，1H)，8.68(s，1H)，8.09(d，J＝8.1Hz，1H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.54-7.12(m，13H)，5.45(s，2H)，5.17(d，J＝12.3Hz，1H)，5.08(d，J＝12.3Hz，1H)，4.67(m，1H)，3.97(m，1H)，3.75(m，1H)，3.40(m，3H)，3.14(m，3H)，1.57(m，3H)，0.84(d，J＝5.7Hz，6H)。
实施例6制备1-(乙基-Ser-Phe-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5b)
在100mL的圆底烧瓶中加入113mg(3.50mmol)HCl·Ser-Phe-OBzl，40mg(1.00mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加688mg(2.00mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加126mg(2.00mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.25)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得100mg(7.4％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：671.IR(KBr)：3230，3169，3088，3062，3030，2933，2856，1734，1716，1653，1558，1516，1456.26，1379.10，1348.24，1247，1213，1138，1105，823，790，744，696cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：12.25(s，1H)，8.84(s，1H)，8.51(d，J＝2.1Hz，1H)，7.70-7.51(m，4H)，7.44-7.24(m，9H)，7.14(s，5H)，5.42(s，2H)，5.0(s，2H)，4.61(m，1H)，3.57(m，1H)，3.32(m，5H)，3.08-2.75(m，4H)。
实施例7制备1-(乙基-Ser-Val-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5c)
在100mL的圆底烧瓶中加入420mg(1.27mmol)HCl·Ser-Val-OBzl，22mg(0.55mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加364mg(1.05mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加38mg(1.05mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.25)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得60mg(9.8％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：623.2.IR(KBr)：3230，3172，3089，3062，3034，2960，2873，1712，1653，1625，1598，1568，1500，1456，1379，1348，1307，1247，1209，1138，1107，1055，1012，894，742，696cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.68(s，1H)，8.69(s，1H)，8.90(d，J＝8.1Hz，1H)，8.04(d，J＝9.0Hz，1H)，7.74-6.93(m，13H)，5.47(s，2H)，5.21(d，J＝12.3Hz，1H)，5.08(d，J＝12.3Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.15(m，1H)，4.03(m，1H)，3.71(m，1H)，3.40-3.38(m，4H)，3.19-3.05(m，2H)，2.18(m，1H)，0.87(d，J＝6.9Hz，3H)，0.79(d，J＝6.9Hz，3H)。
实施例8制备1-(乙基-Ser-Ala-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5d)
在100mL的圆底烧瓶中加入733mg(2.42mmol)HCl·Ser-Ala-OBzl，40.4mg(1.01mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加695mg(2.02mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加127mg(2.02mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.25)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得100mg(7.9％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M-]：593.2.IR(KBr)：3230，3088，3062，3032，2935，2868，1712，1651，1568，1500，1456，1379，1348，1307，1247，1213，1153，1139，1103，1053，900，786，744，696cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.50(s，1H)，8.73(s，1H)，8.11(d，J＝8.1Hz，1H)，7.93(d，J＝7.8Hz，1H)，7.52-7.28(m，13H)，5.45(s，2H)，5.22(d，J＝12.3Hz，1H)，5.11(d，J＝12.3Hz，1H)，4.68(m，1H)，3.98(m，1H)，3.78(m，1H)，3.38(m，3H)，3.16(m，3H)，1.37(d，J＝3.3Hz，3H)。
实施例9制备1-(乙基-Ser-Gly-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5e)
在100mL的圆底烧瓶中加入655mg(2.14mmol)HCl·Ser-Gly-OBzl，36mg(0.89mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加614mg(1.79mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加112.6mg(1.79mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.25)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得100mg(9.7％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：581.2.IR(KBr)：3240，3089，3072，3034，2947，2883，1739，1718，1654，1652，1560，1500，1456，1379，1348，1303，1247，1213，1155，1139，1105，1060，968，900，788，744，696cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.87(s，1H)，8.59(s，1H)，8.29(s，1H)，8.02(d，J＝7.8Hz，1H)，7.62-6.98(m，13H)，5.36(s，2H)，5.05(s，2H)，4.07(t，J＝6.3Hz，2H)，3.96(m，1H)，3.83(m，1H)，3.41(m，1H)，3.33(m，2H)，3.13(m，2H)。
实施例10制备1-(乙基-Ser-Asp(OBzl)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5f)
在100mL的圆底烧瓶中加入514mg(1.47mmol)HCl·Ser-Asp(OBzl)-OBzl，25mg(0.61mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加421mg(1.23mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加77.5mg(1.23mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.28)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得80mg(9％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：729.2.IR(KBr)：3298，3203，3088，3064，3032，2933，2872，1732，1651，1625，1568，1500，1456，1419，1379，1348，1249，1213，1136，1103，1055，902，788，742，698cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.48(d，J＝11.7Hz，1H)，8.70(s，1H)，8.43(d，J＝8.4Hz，1H)，8.11(d，J＝7.8Hz，1H)，7.62-6.92(m，18H)，5.45(s，2H)，5.17-4.98(m，5H)，3.94(m，1H)，3.71(m，1H)，3.68-3.08(m，3H)，3.17-3.08(m，3H)，2.93(d，J＝4.5Hz，1H)，2.89(d，J＝4.5Hz，1H)。
实施例11制备1-(乙基-Ser-Glu(OBzl)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5g)
在100mL的圆底烧瓶中加入744mg(1.65mmol)HCl·Ser-Glu(OBzl)-OBzl，28mg(0.69mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加473mg(1.33mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加87mg(1.33mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.24)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，乙酸乙酯萃取(50mL×3)后合并有机相，干燥，除去溶剂，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得90mg(11％)目标物，为淡黄色油状物。 ESI-MS：m/e[M+]：743.3.IR(KBr)：3298，3032，2954，2872，1732，1651，1625，1568，1500，1456，1379，1348，1249，1213，1157，1136，788，742，698cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.79(s，1H)，8.65(s，1H)，8.15(d，J＝7.2Hz，1H)，8.05(d，J＝7.5Hz，1H)，7.62-7.25(m，18H)，5.41(s，2H)，5.13(d，J＝12.0Hz，2H)，5.04(d，J＝15.3Hz，2H)，4.2(m，1H)，3.95(m，1H)，3.77(m，1H)，3.37(m，3H)，3.11(m，2H)，2.40(m，2H)，2.26(m，1H)，2.02(m，1H)。
实施例12制备1-(乙基-Ser-Trp-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5h)
在100mL的圆底烧瓶中加入730mg(1.74mmol)HCl·Ser-Trp-OBzl，29mg(0.73mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加500mg(1.45mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加92mg(1.45mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.17)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得90mg(9％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：710.3.IR(KBr)：3323，3088，3061，3034，2926，2856，1701，1654，1624，1598，1500，1456，1379，1346，1249，1136，1056，1026，1012，906，788，758，694cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.59(s，1H)，9.34(s，1H)，8.67(s，2H)，8.05(m，2H)，7.47-7.15(m，15H)，6.85(m，3H)，5.42(s，2H)，5.09(m，2H)，4.96(m，1H)，3.87(m，1H)，3.65(m，1H)，3.30(m，2H)，3.16(m，1H)，2.91(m，3H)，2.59(m，2H)。
实施例13制备1-(乙基-Ser-Tyr-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5i)
在100mL的圆底烧瓶中加入690mg(1.74mmol)HCl·Ser-Tyr-OBzl，29mg(0.73mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加500mg(1.45mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加92mg(1.45mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.26)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得100mg(10％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：687.1.IR(KBr)：3236，3161，3088，3062，3030，2939，2864，1734，1716，1653，1546，1496，1456，1379，1346，1247，1211，1138，1062，900，786，742，696cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.80(s，1H)，8.50(s，1H)，7.95(m，2H)，7.43-7.18(m，13H)，6.80(d，J＝7.8Hz，2H)，6.65(d，J＝8.1Hz，2H)，5.35(s，1H)，5.31(s，2H)，5.15(d，J＝12.0Hz，1H)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H)，4.86(m，1H)，3.75(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(s，1H)，3.08(m，3H)，2.75(m，3H)。
实施例14制备1-(乙基-Ser-Ser-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5j)
在100mL的圆底烧瓶中加入561mg(1.66mmol)HCl·Ser-Ser-OBzl，28mg(0.69mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加476mg(1.33mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加87mg(1.33mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝12/1，Rf＝0.22)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得20mg(2％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：611.7.IR(KBr)：3273，3178，3082，3064，2937，2885，1734，1680，1653，1588，1456，1379，1348，1247，1215，1139，1060，908，781，740，696cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：11.61(s，1H)，8.66(s，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，1H)，7.57-7.20(m，13H)，5.43(s，2H)，5.22(d，J＝12.0Hz，1H)，5.17(d，J＝12.0Hz，1H)，3.99(ddd，J＝3.0，9.0，15.0Hz，2H)，3.60(t，J＝6.0Hz，1H)，3.42(m，2H)，3.19(m，2H)，2.81(m，2H)。
实施例15制备1-(乙基-Ser-Thr-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5k)
在100mL的圆底烧瓶中加入564mg(1.69mmol)HCl·Ser-Thr-OBzl，28mg(0.71mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加485mg(1.41mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加89mg(1.41mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝12/1，Rf＝0.22)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得40mg(4％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：625.7.IR(KBr)：3298，3169，3059，3034，2943，2875，1739，1708，1654，1624，1598，1650，1521，1456，1379，1348，1247，1215，1139，1062，900，783，742，698cm-1.1NMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.81(s，1H)，8.41(s，2H)，7.93(d，J＝7.8Hz，1H)，7.43-7.19(m，13H)，5.34(s，2H)，5.08(d，J＝12.0Hz，1H)，5.00(d，J＝12.3Hz，1H)，4.61(m，1H)，4.45(m，1H)，4.06(m，1H)，3.89(m，1H)，3.50(s，2H)，3.39(s，2H)，3.14(s，2H)，1.20(d，J＝6.0Hz，2H)。
实施例16制备1-(乙基-Ser-Pro-OBzl)-β-咔啉3-羧酸苄酯(5l)
在100mL的圆底烧瓶中加入500mg(1.52mmol)HCl·Ser-Pro-OBz，25mg(0.64mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加436mg(1.27mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加80mg(1.27mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.22)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得50mg(5％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：621.6.IR(KBr)3240，3172，3089，3062，3035，2945，2885，1712，1647，1566，1500，1456，1379，1348，1307，1247，1211，1155，1134，1105，999，912，786，745，696cm-1.1NMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：12.06(s，1H)，8.70(s，1H)，8.11(d，J＝9.0Hz，1H)，7.77-7.20(m，13H)，5.34(s，2H)，5.16(m，2H)，4.63(m，1H)，4.45(m，1H)，3.87(m，1H)，3.78(m，1H)，3.51(m，2H)，3.24(s，1H)，3.06(m，1H)，2.78(m，4H)，2.20(m，1H)，1.98(m，3H)。
实施例17制备1-(乙基-Ser-Met-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5m)
在100mL的圆底烧瓶中加入655mg(1.64mmol)HCl·Ser-Met-OBzl，27mg(0.68mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min后加入476mg(1.33mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，室温搅拌20min，加86mg(1.33mmol)氰基硼氢化钠)，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝13/1，Rf＝0.20)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化，得60mg(6％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：653.3.IR(KBr)：3257，3169，3088，3062，3034，2931，2864，1718，1647，1624，1598，1566，1498，1456，1379，1348，1247，1209，1190，1139，1103，1055，960，898，783，746，649cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.63(s，1H)，8.68(s，1H)，8.15(d，J＝8.1Hz，1H)，8.09(d，J＝7.8Hz，1H)，7.54-7.28(m，13H)，5.51(s，2H)，5.18(d，J＝12.3Hz，1H)，5.07(d，J＝12.0Hz，1H)，4.76(m，1H)，3.97(m，1H)，3.81(m，1H)，3.44(m，4H)，3.13(m，2H)，2.42(t，J＝7.2Hz，2H)，2.10(m，1H)，1.95(m，4H)。
实施例18制备1-(乙基-Ser-Arg(NO2)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5n)
在100mL的圆底烧瓶中加入650mg(1.50mmol)HCl·Ser-Arg(NO2)-OBzl，40mg(1.00mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加430mg(1.25mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，20min后加入79mg(1.25mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，Rf＝0.17)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，得60mg(9.4％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：725.0.IR(KBr)：3319，3230，3064，2926，2864，1734，1712，1656，1627，1597，1498，1456，1379，1247，1207，1155，1139，906，750，698cm-1.1HNMR(300MHz，CDCl3)δ/ppm：10.79(s，1H)，8.48(s，1H)，8.24(s，1H)，7.90(s，1H)，7.47-7.04(m，13H)，5.31(s，2H)，4.98(d，J＝6.6Hz，1H)，4.89(d，J＝9.01Hz，H)，4.99(m，1H)，3.88(m，3H)，3.71(s，1H)，3.25(m，2H)，3.07(m，4H)，1.78(m，2H)，1.52(m，3H)。
实施例19制备1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5o)
在100mL的圆底烧瓶中加入511mg(1.47mmol)HCl·Ser-Asn-OBzl，39mg(0.98mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加423mg(1.23mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，20min后加入77mg(1.23mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝9/1，Rf＝0.22)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，得60mg(7.6％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：637.9.IR(KBr)：3292，3186，3093，3062，3034，2954，2854，1734，1718，1670，1624，1566，1500，1456，1379，1348，1247，1209，1136，1107，1028，898，786，742，698cm-1.1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm：12.31(s，1H)，8.81(s，1H)，8.44(d，J＝9.0Hz，1H)，8.37(d，J＝6.0Hz，1H)，7.68-7.18(m，13H)，7.07(s，1H)，5.42(s，2H)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H)，4.96(d，J＝12.0Hz，1H)，4.67(m，1H)，3.59(m，1H)，3.28(m，4H)，3.18(m，1H)，2.94(m，2H)，2.71(dd，J＝6.0，15.0Hz，1H)，2.61(dd，J＝6.0，15.0Hz，1H)。
实施例20制备1-(乙基-Ser-Gln-OBzl)-β-咔啉3-羧酸苄酯(5p)
在100mL的圆底烧瓶中加入459mg(1.27mmol)HCl·Ser-Gln-OBzl·HCl，34mg(0.85mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加365mg(1.06mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，20min后加入67mg(1.06mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝9/1，Rf＝0.22)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，得50mg(7.2％)目标物，为淡黄色油状物。ESI-MS：m/e[M+]：651.9.IR(KBr)：3373，3315，3199，3093，3064，3034，2939，2860，1732，1712，1660，1624，1560，1533，1500，1456，1421，1379，1338，1255，1213，1134，1112，1041，964，900，786，746，696，605cm-1.1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm：12.37(s，1H)，8.82(s，1H)，8.37(d，J＝6.0Hz，1H)，8.28(d，J＝6.0Hz，1H)，7.69-7.22(m，13H)，6.81(s，1H)，5.42(s，2H)，5.07(d，J＝12.0Hz，1H)，5.01(d，J＝15.0Hz，1H)，4.34(m，1H)，3.62(m，1H)，3.48(m，1H)，3.33(m，3H)，3.25(m，1H)，3.05(m，2H)，2.10(t，J＝6.0Hz，2H)，1.98(m，1H)，1.81(m，1H)。
实施例21制备1-(乙基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯
在100mL的圆底烧瓶中加入730mg(1.18mmol)HCl·Ser-Lys(Fmoc)-OBzl，31mg(0.78mmol)氢氧化钠，50mL甲醇，室温搅拌30min，加337mg(0.98mmol)1-乙醛基-3-咔啉羧酸苄酯(4)，20min后加入61.8mg(0.98mmol)氰基硼氢化钠，室温搅拌21h，TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝14/1，Rf＝0.38)，冰浴下加入浓盐酸调节pH至2，减压浓缩，残留物加乙醚和水，弃去乙醚层。水层在冰浴下用2N氢氧化钠水溶液调节pH至8，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(湿柱，二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，得50mg(7.2％)目标物，为淡黄色油状物，用于下一步反应。ESI-MS：m/e[M+]：873.9。
实施例22制备1-(乙基-Ser-Lys-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯(5q)
在100mL的圆底烧瓶中加50mg(0.05mmol)1-(乙基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯，在冰浴下加入5mL20％的哌啶/N，N-二甲基甲酰胺，反应25min后TLC显示原料斑点消失(溶剂：二氯甲烷/甲醇＝5/1，Rf＝0.06)。吹干N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷溶解，饱和氯化钠水溶液萃洗3次，将有机相用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂，残留物经制备薄层层析(二氯甲烷/甲醇＝5/1)纯化，得12mg(32.4％)目标物，为淡黄色粉末。Mp：171-172℃.ESI-MS：m/e[M+]：651.9.IR(KBr)：3145，3061，3037，2929，2868，1718，1653，1597，1550，1506，1456，1379，1348，1247，1215，1139，1064，743，696cm-1.1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm：8.81(s，1H)，8.37(d，J＝9.0Hz，1H)，8.16(d，J＝6.0Hz，1H)，7.87-7.28(m，15H)，5.42(s，2H)，5.08(d，J＝15.0Hz，1H)，4.99(d，J＝12.0Hz，1H)，3.26(m，1H)，3.60(m，2H)，3.44(m，2H)，3.33(m，2H)，3.24(m，2H)，3.00(m，2H)，1.62(m，1H)，1.49(s，1H)，1.32(m，2H)，1.22(m，2H)。
实验例1评价化合物5a-q的细胞毒作用
化合物5a-q用含0.5％DMSO的1640培养基配制成所需浓度。分别将生长状态良好、处于对数生长期的HL-60、S180、MCF-7、A549细胞按照4×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL。在37℃，5％CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100μM、50μM、25μM、10μM和1μM加入经灭菌处理的化合物5a-q的溶液，对照组加入等体积溶解样品的含0.5％DMSO的1640培养基。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37℃孵育4小时，小心除去上清液后每孔加入100μLDMSO，振荡约15min溶解沉淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定OD(吸光度)值。按抑制率＝[(含0.5％DMSO的1640培养基组的OD平均值-化合物5a-q组的OD平均值)/含0.5％DMSO的1640培养基组的OD值]×100％”计算抑制率。实验平行重复3次，以抑制率对化合物5a-q的浓度作图，计算本发明化合物的IC50(半数有效抑制浓度)值。
化合物5a-q用含0.5％DMSO的DMEM培养基配制成所需浓度。分别将生长状态良好、处于对数生长期的HCT-8，SH-sy5y，细胞按照4×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL。在37℃、5％CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100μM、50μM、25μM、10μM和1μM加入经灭菌处理的化合物5a-q的溶液，对照组加入等体积溶解样品的含0.5％DMSO的DMEM培养基。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37℃孵育4小时，小心除去上清液后每孔加入100μLDMSO，振荡约15min溶解沉淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定OD(吸光度)值。按抑制率＝[(含0.5％DMSO的DMEM培养基组的OD平均值-化合物5a-q组的OD平均值)/含0.5％DMSO的DMEM培养基组的OD平均值]×100％计算抑制率。实验平行重复3次，以抑制率对化合物5a-q的浓度作图，计算本发明化合物的IC50(半数有效抑制浓度)值。
结果列入表1和表2。从结果可看出本发明化合物除51，n，o，p，q外，其余化合物都能有效地抑制六株肿瘤细胞增殖。
表1化合物5a-q抑制HCT-8，S180和SH-sy5y增殖的活性(IC50，)
n＝15
表2化合物5a-q抑制HL60，A549和MCF-7增殖的活性(IC50，)
n＝15
实验例2评价化合物5a-q抑制肿瘤生长的活性
化合物5a-q用0.5％的CMC-Na悬浮；阿霉素和阿糖胞苷用生理盐水溶解。用0.5％的CMC-Na悬浮；阿霉素和阿糖胞苷用生理盐水溶解。无菌条件下取接种于ICR小鼠7天的S180肉瘤，加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液，细胞数为1×107个/mL，接种于健康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0.2mL。肿瘤接种24h后，治疗组小鼠每日口服0.2mL化合物5a-q的CMC-Na悬浮液，剂量为1μmol/kg，每天1次，连续给药7天。空白组小鼠每口服0.2mL0.5％羧甲基纤维素钠溶液。阳性对照小鼠每天腹腔注射阿霉素(剂量为2μmol/kg)或阿糖胞苷(剂量为8.2μmol/kg)，每天1次，连续给药7天。实验进行至第8天，称小鼠体重，用乙醚将小鼠麻醉后将其断颈处死，并剖取各组小鼠的肿瘤称重，最后统计各组动物的抑瘤率。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示，瘤重抑制率％＝[1-(化合物5组瘤重/空白组瘤重)]×100％。结果列入表3。表3结果表明化合物5a-q组小鼠的瘤重显著小于空白组小鼠的瘤重，说明化合物5a-q具有良好的抗肿瘤活性。它们的这个有效剂量(1μmol/kg)比发明人公开的1-(乙基-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯的有效剂量(8.9μmol/kg)低8.9倍。
表35a-r对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
注：n＞12；a)与0.5％羧甲基纤维素钠组比较p＜0.01；b)与生理盐水比较p＜0.05；c)与0.5％羧甲基纤维素钠组比较p＜0.01，与阿糖胞苷组比较p＞0.05。
实验例3测定化合物5a-q的透射电镜照片
将5a-q按照5×10-6M的浓度配置化合物的纯水溶液，均匀的铺在铜网上，在透射电镜(TEM，JEM-1230，JEOL)下观察化合物的自组装性质。得到的照片见图2。结果表明，5a-q在水中均可形成纳米颗粒，直径在20-200nm之间。
Claims (4)
1.下式的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯，式中AA为L-Leu残基，L-Phe残基，L-Val残基、L-Ala残基，L-Gly残基，L-Asp(OBzl)残基，L-Glu(OBzl)残基，L-Trp残基，L-Tyr残基，L-Ser残基，L-Thr残基，L-Pro残基，L-Met残基，L-Arg(NO2)残基，L-Asn残基，L-Gln残基和L-Lys残基。
2.权利要求1的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯的制备方法，该方法包括：
(1)将L-Trp-OBzl在三氟醋酸的催化下与1，1，3，3-四甲氧基丙烷进行Pictet-Spengler缩合，得到1-(2，2-二甲氧乙基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(2)将1-(2，2-二甲氧乙基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯在四氢呋喃中用高锰酸钾氧化，得到1-(2，2-二甲氧乙基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(3)在浓盐酸和冰醋酸的水溶液中1-(2，2-二甲氧乙基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯水解为1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(4)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Leu-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Leu-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(5)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Phe-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Phe-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(6)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Val-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Val-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(7)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Ala-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Ala-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(8)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Gly-OBz还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Gly-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(9)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Asp(OBzl)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Asp(OBzl)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(10)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Glu(OBzl)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Glu(OBzl)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(11)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Trp-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Trp-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(12)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Tyr-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Tyr-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(13)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Ser-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Ser-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(14)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Thr-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Thr-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(15)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Pro-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Pro-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(16)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Met-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Met-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(17)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Arg(NO2)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Arg(NO2)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(18)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Asn-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Asn-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(19)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Gln-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Gln-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(20)将1-乙醛基-β-咔啉-3-羧酸苄酯与HCl·Ser-Lys(Fmoc)-OBzl还原性胺解，得到1-(乙基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；
(21)将1-(乙基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯冰浴下用哌啶的二甲基甲酰胺(20％)溶液脱除Fmoc保护基得得到1-(乙基-Ser-Lys-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯。
3.权利要求1的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯的纳米结构。
4.权利要求1的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸苄酯在制备抗肿瘤疾病药物中的应用。
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