CN105295016A - 一种用于杀灭农业害虫的药物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种新的喜树碱的胶束及这种胶束与其它农药复配得到的农药，以及制备方法，本发明还涉及到一种具体复配物、其制备和在农药中的用途。本发明的喜树碱的胶束制备方法是将mPEG₂₀₀₀-COOH溶于干燥二氯甲烷中，再依次加入喜树碱、4-二甲氨基吡啶、和N,N-二异丙基碳二亚胺，待反应完毕后有机相干燥处理后过滤蒸馏旋干得粗品，经纯化后将其加入DMSO中，经透析获得喜树碱纳米胶束。本发明的包裹啶虫脒形成的啶虫脒CPT-mPEG₂₀₀₀胶束相比于喜树碱有更好的水溶性，其毒杀活性强于喜树碱。

Description

一种用于杀灭农业害虫的药物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及用于杀灭农业害虫的药物及其制备方法和用途，确切讲是一种新的喜树碱的胶束及这种胶束与其它农药复配得到的农药，以及制备方法，本发明还涉及到一种具体复配物、其制备和在农药中的用途。

背景技术

农药一般可分为化学农药和生物农药。我国目前以化学农药为主，然而化学农药的毒性大，对环境污染也日趋严重，而且由于长期、单一使用或滥用杀虫剂，极易使害虫产生了抗药性，甚至发展为交互抗性和多抗性（HilderV.A.,etal.CropProtection,1999,18:177-191）。据统计，从1910年到2010年的百年之间，抗药害虫已从1种增加至600多种，其中80%是昆虫和螨类。抗药性的出现不仅对于农药的效力会产生很严重的消极影响，还会造成生产成本上升，防治效果下降，而且还会因为盲目用药影响到自然界的生态平衡。将作用方式和机制不同的两种或多种农药复配，可以减缓抗药性的发生速度，是克服害虫抗药性的关键；而且还能兼治多种病虫害，增强药效，减少农药使用量，降低成本。例如瑞毒霉与代森锰锌复配、多菌灵与灭菌丹复配、有机磷与拟除虫菊酯复配等，都是比较成功的农药复配方案（王肖娟，等．安徽农业科学，2007，35：3902-3904）。而在农药复配研究中，植物源杀虫剂与其他杀虫剂复配是近几年农药发展的一个热点（江兰，等．广东农业科学，2010，5：97-100）。植物源农药是利用植物的某些部位或提取其有效成份制成具有杀虫或杀菌作用的农药，其主要特点是对人畜安全；在自然环境下易分解，残留量低；为天然的混配复剂，对害虫有拒食、忌避、抑制生长抑制、控制种群等作用，害虫不易产生抗性。它的优势在于既能调节农作物的生长发育，防治病虫害，又没有化学农药的诸多副作用。因此，将植物源杀虫剂与其他杀虫剂复配不仅可以提高其对害虫的防治效果，而且大大降低了杀虫剂的使用量，减少对环境的污染。喜树碱是从中国特有的珙桐科植物喜树中分离得到的一种喹啉类生物碱，研究发现喜树碱是一种植物性杀虫剂，已明确喜树碱能造成家蝇(Muscadomestica)、马尾松毛虫（Dendrolinspunctata）不育以及对甘蔗黄螟（Argyroplceshistaceana）的毒杀作用，目前国内外对喜树碱类化合物作为农业害虫防治方面的研究主要针对喜树碱粗提物和简单衍生物的杀虫的初步测定与杀虫机理的初步探讨，以及喜树碱杀虫剂施药剂型的制备或与其他已知杀虫剂复配成混合杀虫剂等方面的研究工作，并已有相关的专利和文献报道，参见：(1)贾建文，等．华南农业大学学报，2009，30:29-35；(2)钟国华，等．昆虫学报，2008，51:449-453；(3)Zhang,L.etal.Pest.ManagSci2012,68:652-657；(4)US20020018762(2002);(5)CN100384329(2005);(6)CN101518250(2009);(7)CN1843128(2006);(8)CN100579372(2006)）。近来，发明人对喜树碱的衍生合成、杀虫构效关系进行了较为系统深入地研究，发现喜树碱对椰心叶甲、斜纹夜蛾、豆蚜、松材线虫、朱砂叶螨的多种试虫表现出较好的毒杀活性（YangL.,etal.MedicinalChemistryResearch,2014,23:980-986）。然而，喜树碱作为一个潜在的杀虫活性物质，存在溶解性差，喜树碱内酯环易于开环而丧失活性，且作用方式单一等缺点，从而大大限制了喜树碱在农药上应用。如何改善喜树碱溶解性差、解决喜树碱内酯环易于开环而丧失活性的不足，进一步得到毒杀效果更佳的农药是本领域的一个重大课题。

发明内容

本发明提供用于杀灭农业害虫的经改性可改善其水溶性的喜树碱胶束和其制备方法，以及用喜树碱胶束制备双核纳米农药的方法。本发明同时还提供喜树碱胶束与其它农药复配得到一种具体的喜树碱胶束双核纳米农药，以及这类喜树碱胶束双核纳米农药具体的用途。

本发明的喜树碱纳米胶束如式1所示

。

本发明的喜树碱纳米胶束制备方法是：将mPEG₂₀₀₀-COOH溶于干燥二氯甲烷中，再依次加入喜树碱、4-二甲氨基吡啶、和N,N-二异丙基碳二亚胺，待反应完毕后，过滤，滤液用HCl洗涤，有机相干燥处理后过滤，减压蒸馏旋干得粗品，经柱层析纯化获得喜树碱-单甲醚聚乙二醇共聚物，然后将其加入DMSO（二甲基亚砜）中，加入去离子水搅拌过夜，将该溶液转移到透析袋中（MWCO3500），经透析获得喜树碱纳米胶束。

本发明的喜树碱纳米胶束优选制备方法是将1mmolmPEG₂₀₀₀-COOH溶于20mL干燥二氯甲烷中，在0℃下，依次加入1mmol喜树碱、1mmol4-二甲氨基吡啶、1mmolN,N-二异丙基碳二亚胺，继续在0℃下反应2h。撤去冰浴，缓慢升至室温，继续搅拌充分反应，待反应完毕后，过滤，滤液用0.1NHCl洗涤三次，有机相用无水硫酸镁干燥过夜，过滤，减压蒸馏旋干得粗品，经柱层析纯化获得喜树碱-单甲醚聚乙二醇共聚物，然后将其10mg溶于1.0mL二甲基亚砜中，逐滴加入10mL去离子水，室温搅拌过夜。将该溶液转移到透析袋中，透析2天，获得喜树碱纳米胶束。

利用喜树碱纳米胶束可与其它种类的农药复配，用于制备双核纳米农药。

本发明的喜树碱-啶虫脒双核纳米农药制备方法是将喜树碱纳米胶束加入水和含有啶虫脒的DMSO中，然后将前述溶液转移到透析袋中透析得到喜树碱-啶虫脒双核纳米农药。

本发明的喜树碱-啶虫脒双核纳米农药优选制备方法是：将300mg喜树碱-单甲醚聚乙二醇2000溶于2.0mL的DMSO中，在搅拌下，依次加入200mL去离子水和含有10mg啶虫脒的1.0mL的DMSO，室温搅拌过夜，然后将该溶液转移到透析袋中（MWCO3500），透析2天，得到喜树碱-啶虫脒双核纳米药物。

用本发明的制备方法制备的喜树碱-啶虫脒双核纳米药物中喜树碱与啶虫脒含量比为88.49：11.51。

本发明的喜树碱-啶虫脒双核纳米药物可用于防治农业害虫，可用于防治松材线虫、用于防治朱砂叶螨，及用于防治甘蓝蚜。

利用纳米技术将不同的农药复配相结合，创制双核纳米农药，这是一个颇有前景的策略。虽然纳米农药已经引起了人们越来越多的关注，但利用植物源农药与聚乙二醇（PEG）形成两亲性共聚物，进一步自组装形成纳米胶束包裹其他农药，形成双核纳米农药，却未见报道。聚乙二醇（PEG）常用作农药乳化剂，将其与农药分子偶联可大大提高农药在水中的溶解性。因此，本发明将喜树碱与亲水性高分子聚合物单甲醚聚乙二醇（mPEG）通过20位酯键偶联，形成两亲性共聚物，且该两亲性共聚物在水溶液中可自组装成纳米胶束，而且其在自组装过程中还可以包裹其他农药，制备成双核纳米农药。本发明的纳米胶束技术为制备新的双核纳米农药提供了可能。利用本发明的纳米胶束可配制双核纳米药物体系，可以提高该药的稳定性、增加溶解度、改善生物利用度，提高杀虫活性和扩大其杀虫谱。本发明述实施例中公开的包裹啶虫脒形成的啶虫脒CPT-mPEG₂₀₀₀胶束，相比于喜树碱，所形成的包裹有啶虫脒的纳米农药的水溶性显著提高，经生物活性测试结果表明：本发明的药物对朱砂叶螨、松材线虫和甘蓝蚜3种试虫的毒杀活性强于喜树碱。通过计算该纳米农药的共毒系数，发现其对3种害虫的共毒系数在220.69~322.93之间，说明喜树碱和啶虫脒之间存在着显著的增效作用。

附图说明

附图1为本发明的CPT与CPT-mPEG₂₀₀₀共聚物在水中形成纳米胶束的示意图，其中I为喜树碱及其mPEG衍生物的水溶液的照片，上面的一幅是CPT和CPT-mPEG₂₀₀₀的光学照片，下面是在365nm紫外灯照射下的照片，在修饰了mPEG后，CPT-mPEG₂₀₀₀共聚物的水溶性更好，例如，喜树碱在水中溶解度大约为3μg/mL，而CPT-mPEG₂₀₀₀的溶解度超过60mg/mL(相当于>7.2mg/mL的喜树碱)，比游离的喜树碱大了2×10³倍；Ⅱ为CPT-mPEG₂₀₀₀共聚物在水中形成纳米胶束的示意图；Ⅲ为CPT-mPEG₂₀₀₀胶束的TEM图像和粒度分布示意图，其中的(a)是CPT-mPEG₂₀₀₀胶束的TEM图像(b)是CPT-mPEG2000胶束的粒度分布(DLS)。附图2为负载啶虫脒的喜树碱纳米胶束的透射电镜（TEM）图像。

附图3为CPT-mPEG₂₀₀₀的荧光强度I ₃₃₇/I ₃₃₂与其浓度对数的比值图。

附图4为CPT-mPEG₂₀₀₀的荧光光谱。附图5为负载啶虫脒的喜树碱纳米胶束的粒度分布。

具体实施方式

1：CPT-mPEG₂₀₀₀衍生物的合成

1)mPEG₂₀₀₀-COOH（2）的合成：在氮气保护下，往100mL圆底烧瓶中加入mPEG₂₀₀₀(10mmol)，用20mL的干燥二氯甲烷搅拌溶解，然后加入丁二酸酐（50mmol）、干燥吡啶（50mmol），加热至40℃，回流三天。待回流完毕后，冷却至室温，减压蒸馏旋干，加适量蒸馏水溶解，用乙酸乙酯/正己烷（1:1）洗涤数次。水相再用氯仿萃取3次，合并萃取液，无水硫酸镁干燥过夜，过滤，减压蒸馏浓缩。

2)CPT-mPEG₂₀₀₀（3）的合成：于100mL圆底烧瓶中加入mPEG₂₀₀₀-COOH(1mmol)，用20mL的干燥二氯甲烷搅拌溶解。在0℃下，依次加入CPT（348mg,1mmol）、1mmolDMAP（4-二甲氨基吡啶）、1mmolDIPC（N,N-二异丙基碳二亚胺），继续在0℃下反应2h。撤去冰浴，缓慢升至室温，继续搅拌反应16h。待反应完毕后，过滤，滤液用0.1NHCl洗涤三次，有机相用无水硫酸镁干燥过夜，过滤，减压蒸馏旋干得粗品。柱层析纯化（洗脱剂：氯仿/甲醇=20:1）得到浅黄色固体的CPT-mPEG2000，收率78%；CPT-mPEG₂₀₀₀衍生物的合成路线见式2

。

CPT-mPEG2000IR表征：ν:3440.1,2885.7,1750.0,1665.8,1618.5,1564.8,1467.9cm^-1;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.39(1H,s,H-7),8.21(1H,d,J=8.4Hz,H-12),7.93(1H,d,J=7.2Hz,H-9),7.82(1H,t,J=7.2Hz,H-10),7.66(1H,t,J=7.2Hz,H-11),5.52(2H,ABq,J=16.8Hz,H-17),5.27(2H,s,H-5),4.22(4H,s),3.87-3.79(2H,m),3.63(323H,br,mPEG),3.36(6H,s,mPEG-OCH₃),2.83(2H,s,mPEG),2.73-2.66(4H,m,mPEG),2.14(2H,m,H-19),0.97(3H,t,J=7.6Hz,H-18);¹³C-NMR(400MHz,CDCl₃):δ171.80,171.35,167.42,157.40,152.46,148.91,146.31,145.93,131.25,130.70,129.68,128.55,128.30,128.22,128.07,120.08,96.27,76.29,71.99,70.63,69.02,67.08,64.06,59.11,50.00,42.02,31.81,28.93,23.60,7.68.。

2:CPT-mPEG₂₀₀₀胶束的制备

1)CPT-mPEG₂₀₀₀胶束的制备：将CPT-mPEG₂₀₀₀（10mg）溶于1.0mLDMSO中，然后在搅拌条件下，逐滴加入10mL去离子水，室温搅拌过夜。然后将该溶液转移到透析袋中（MWCO3500），透析2天，然后将其冷冻干燥，获得棉絮状固体的CPT-mPEG₂₀₀₀胶束。

2)负载啶虫脒的CPT-mPEG₂₀₀₀胶束的制备：将CPT-mPEG（300mg）溶于2.0mL二甲基亚砜中，然后在搅拌条件下依次加入200mL去离子水和含有10mg啶虫脒的1.0mL二甲基亚砜，室温搅拌过夜。然后将该溶液转移到透析袋中（截留分子量3500），透析2天，然后将其冷冻干燥，获得棉絮状固体的负载啶虫脒的CPT-mPEG₂₀₀₀胶束。然后将该溶液转移到透析袋中（MWCO3500），透析2天。然后将其冷冻干燥，获得棉絮状固体的负载啶虫脒的CPT-mPEG₂₀₀₀胶束。得到附图1。

3)临界胶束浓度的测定：称取芘1.15mg，用甲醇溶解并使其在甲醇中的浓度为6.82×10^-6mmol/mL。取上述浓度的芘溶液0.45mL于试管中，于45℃下旋蒸除去甲醇（避光）。称取7mgCPT-mPEG₂₀₀₀样品用7mL去离子水搅拌分散24h后，分别稀释成不同浓度，用超声超3min(2son,2soff)。取上述不同浓度的共聚物溶液3mL，加入装有芘的试管中，使芘的最终浓度呈1×10^-6mmol/mL，并于65℃水浴中加热3h，使芘均匀分散，然后在室温下静置冷却过夜。用荧光分光光度计(RF-5301PC,SHIMADZU,Japan)分别测试上述样品的激发和发射光谱，激发和发射的狭缝宽度分别设定为10.0和2.5nm。对荧光激发光谱，发射波长测定为290nm。最后，将所得的不同浓度样品的激发光谱中337nm和332nm处的荧光强度值的比I₃₃₇/I₃₃₂为纵坐标，以浓度的对数值为横坐标，用ORIGIN软件作图，得到附图2和附图3。

4)药物载药量和负载效率：药物负载的胶束和空白胶束溶液用同样方式制备。然后用紫外分光光度计分别测定啶虫脒在246nm下的吸光度，再根据啶虫脒的标准曲线来计算出啶虫脒的载药量及负载效率。其计算公式如下：

5)粒度分布：预先配制好CPT-mPEG₂₀₀₀胶束的水溶液（浓度稍大于临界胶束浓度），测量前将样品超声3h。用激光光散射仪(BI-200SM,Brookhaven,USA)测定纳米胶束的动态光散射（DLS），观察纳米胶束在水溶液中的粒度及粒度分布。激光光散射的波长设定为514nm，散射角为90°。

6)透射电镜(Transmissionelectronmicroscopy,TEM)：将300目碳膜铜网用镊子夹出置于定性滤纸上，做好标记，然后将样品溶液滴在铜网上，于室温条件下风干铜网，在透射电子显微镜（JEOLJEM-1200EX）上观察。

3:生物活性测试

一）供试昆虫：

1）松材线虫（Bursaphelenchusxylophilus）：从病死马尾松（浙江省富阳松材线虫疫区）树干上钻取木屑，采用贝尔曼漏斗法分离（ViglierchioD.R.,etal.JournalofNematology,1983,15:438-444），作为线虫虫源。采用番茄灰葡萄孢（Botrytiscinerca）进行室内培养。将番茄灰葡萄孢接种于PDA平板，25℃下培养至灰葡萄孢菌丝长满平板，接种分离得到的松材线虫，继续在25℃下恒温培养7d，将载有线虫的培养基挑出，放入漏斗中，用无菌水将线虫洗出，离心消毒浓缩配制成每毫升含2500条左右的线虫悬液，备用。

2）朱砂叶螨（Tetranychuscinnabarinus）：由浙江省化工研究院提供，在人工气候室条件下[(26±1)^oC，RH(70±5)%，H/D14]，接种于蚕豆苗上培养。

3）甘蓝蚜（Brevicorynebrassicae）：采自甘肃省兰州市郊区，在人工气候室条件下[(25±1)^oC，H/D12:12]于实验室培养，备用。

二）供试药剂，参见表1

三）活性测定：

1）松材线虫毒杀活性测定：采用浸渍法（张绍勇，等．农药学学报，2011，13：127-132）。将1、2号化合物10mg（CPT的实际含量）和4号化合物10mg分别溶解到10mL丙酮中，3号化合物10mg溶解到10mLDMSO中，分别配制成质量浓度为1000mg/L的药液，并取其1mL再用丙酮分别稀释成20、50、100、250和500mg/L的供试药液。各取10μL供试药液置于96孔培养板中，加入90μL浓度为2500条/mL的松材线虫悬浮液。以空白溶剂对照。每个浓度为一处理，每处理重复3次。凡运动者或虫体呈“S”形、卷曲形、波浪形、螺旋形者均判为活虫；凡不运动且虫体呈“J”形或“C”形，或者虫体僵直、体壁无折光性者均判为死虫。处理后将培养板置于25℃恒温箱中，于处理后24h检查松材线虫的存活和死亡数，计算死亡率和校正死亡率。用几率值分析法计算各化合物的毒力回归方程、LC₅₀值和相关系数。试验结果参见表2，

表2显示的是不同浓度的喜树碱纳米农药和对照农药对松材线虫的24h校正死亡率及其半数致死浓度LC₅₀。从表中数据得出：喜树碱与mPEG相连后，改善了溶解性和生物利用度，同时其对松材线虫的毒杀活性也要比喜树碱的稍微好一些，LC₅₀为9.61mg/L；负载啶虫脒的喜树碱纳米胶束（啶虫脒CPT-mPEG₂₀₀₀），其对松材线虫的毒杀活性要比母药喜树碱和啶虫脒的好，LC₅₀为4.70mg/L。通过对松材线虫的毒杀活性结果显示，这种负载双重药物的纳米农药对松材线虫的毒杀活性均比母药的高。

2）朱砂叶螨毒杀活性测定:采用叶碟喷雾法（赵应茍，等。农药，2012.51：915-918）。将1、2号化合物10mg（CPT的实际含量）和4号化合物10mg分别溶解到10mL丙酮中，3号化合物10mg溶解到10mLDMSO中，分别配制成质量浓度为1000mg/L的药液，并取其1mL再用丙酮分别稀释成2、5、10、25、50和100mg/L的供试药液。选择室内饲养、生理状态一致的雌成螨。选取生长一致的蚕豆叶片，用打孔器做成直径2cm的叶碟，叶背朝上置于塑料皿中心的脱脂棉上，每皿3片叶蝶，用小号毛笔挑雌成螨接种到叶碟上，每叶碟45头，并加适量水，放置于(26±1)^oC，光照强度3000-4500lx、14h/d，RH50%~75%的培养室内。2h后于体视显微镜下检查成螨存活情况并计数，每皿叶碟上螨的数量不低于30头。将制备好的质量浓度为2、5、10、25、50和100mg/L的化合物药液以2.5ml剂量用Potter喷淋塔喷雾处理[66.9KP,(1.6±0.1)mg/cm²]，对照组用蒸馏水处理雌成螨，每个质量浓度为一处理，平行重复3次。待叶片上的药剂晾干，将处理过的叶碟置于(26±1)℃和14h光周期的人工气候室培养24h，并于培养皿中加少量水保湿。24h后镜检并记录死亡及存活的螨数，检查时用毛笔轻触螨体，完全不动者判定为死亡。结果参见表3，

表3显示的是不同浓度的喜树碱纳米农药和对照农药对朱砂叶螨的24h校正死亡率及其半数致死浓度LC₅₀。从表中数据得出：喜树碱在与mPEG偶联后，水溶性显著提高，同时其对朱砂叶螨的杀虫活性与喜树碱相当，LC₅₀为11.83ppm；负载啶虫脒的喜树碱纳米胶束（啶虫脒CPT-mPEG₂₀₀₀），其对朱砂叶螨的毒杀活性要比母药喜树碱和啶虫脒的好，LC₅₀为3.59ppm。通过对朱砂叶螨的毒杀活性结果显示，这种负载双重药物的纳米农药对朱砂叶螨的毒杀活性要比母药的高。

3）甘蓝蚜触杀活性测定：采用点滴法（刘慧平，等．中国生态农业学报，2006，14：160-162）。将1、2号化合物10mg（CPT的实际含量）和4号化合物10mg分别溶解到10mL丙酮中，3号化合物10mg溶解到10mLDMSO中，分别配制成质量浓度为1000mg/L的药液，往其中各加入一滴吐温80。并取其1mL再用丙酮分别稀释成20、50、100、250和500mg/L的供试药液。滴在30只甘蓝蚜幼虫的背部，5s后吸去多余溶液。将甘蓝蚜幼虫放置在温度(25+1)^oC，相对湿度85%左右的生化培养箱中，24小时后检测死亡率。对照组选用水单独测试。对照组死亡率在10%以下为有效试验，用Abbott公式对处理组死亡率进行校正。各个浓度平行试验三次，取平均值。再用SPSS统计软件（版本13.0）分析，计算致死中浓度LC₅₀。试验结果参见表4，

表4显示的是不同浓度的喜树碱纳米农药和对照农药对甘蓝蚜的24h校正死亡率及其半数致死浓度LC₅₀。从表中可以得出：喜树碱对甘蓝蚜的触杀活性一般，但与mPEG₂₀₀₀偶联，形成的CPT-mPEG₂₀₀₀衍生物后，提高溶解性和生物利用度的同时，其对甘蓝蚜的触杀活性提高了将近一倍，LC₅₀为430.47mg/L；负载啶虫脒的喜树碱纳米胶束（啶虫脒CPT-mPEG₂₀₀₀），其对甘蓝蚜的触杀活性比喜树碱和CPT-mPEG₂₀₀₀衍生物的要好，而且比喜树碱提高了将近6倍，LC₅₀为126.01mg/L，但是没有对照农药啶虫脒的高。

实施例4:共毒系数的计算：毒力评价采用孙云沛法（SunY.P.,etal.JournalofEconomicEntomology,1960,53:887-892），计算共毒系数（co-toxicitycoefficient,CTC），以CTC值来评价喜树碱和啶虫脒两种药剂的联合毒力作用。CTC值<80为拮抗作用；>120为增效作用，介于80~120之间为相加作用，CTC值≥200则有显著增效作用。其计算方法如下：

1)毒力指数（toxicityindex,TI）的计算

2)混合剂（m）的实际毒力指数（actualtoxicityindex,ATI）的计算

3）混合剂（m）的理论毒力指数（theoreticaltoxicityindex,TTI）的计算

4）共毒系数（co-toxicitycoefficient,CTC）的计算

啶虫脒CPT-PEG2000胶束对3种试虫的共毒系数参见表5，

由生物活性测试发现该喜树碱纳米农药对朱砂叶螨、松材线虫和甘蓝蚜等3种试虫的杀虫活性要比母药喜树碱和啶虫脒有不同程度的增强。因此，采用孙云沛法（SunY.P.,etal.JournalofEconomicEntomology,1960,53:887-892），通过计算共毒系数（co-toxicitycoefficient,CTC），来评价喜树碱和啶虫脒两种药剂的联合毒力作用。CTC值<80为拮抗作用；>120为增效作用，介于80~120之间为相加作用。表4显示的是啶虫脒负载的喜树碱胶束对三种试虫的共毒系数，由表4中数据可以得出，该纳米农药对朱砂叶螨、松材线虫和甘蓝蚜等3种试虫的共毒系数分别为273.50、220.69和322.93。共毒系数均大于120，说明喜树碱与啶虫脒之间存在着较强的增效作用。而且其对甘蓝蚜的增效作用最为显著。

综上所述，喜树碱与单甲醚聚乙二醇（mPEG,Mn=2000）偶联形成的CPT-mPEG₂₀₀₀共聚物，提高了水溶性和生物利用度，因此其对3种害虫的毒杀活性都要比母药喜树碱有相应的增强。本发明用纳米胶束来同时负载喜树碱和啶虫脒，通过对朱砂叶螨、松材线虫、甘蓝蚜3种昆虫的毒杀活性测试，结果发现：与母药相比，这种纳米农药对这3种昆虫的毒杀活性显著提高。通过计算该纳米胶束的共毒系数，结果表明喜树碱和啶虫脒之间有较强的增效作用。本发明工艺简单、产品纯度高，可用于防治农业重要虫害。

以上实施方式仅是对本发明的内容解说。但不应将此理解为对本发明的限制。

Claims (12)

1.一种用于杀灭农业害虫的如式1示的喜树碱纳米胶束

。

2.权利要求1所述的用于杀灭农业害虫的喜树碱纳米胶束制备方法，其特征在于：将mPEG₂₀₀₀-COOH溶于干燥二氯甲烷中，再依次加入喜树碱、4-二甲氨基吡啶、和N,N-二异丙基碳二亚胺，待反应完毕后，过滤，滤液用HCl洗涤，有机相干燥处理后过滤，减压蒸馏旋干得粗品，经柱层析纯化获得喜树碱-单甲醚聚乙二醇共聚物，然后将其加入DMSO中，加入去离子水搅拌过夜，将该溶液转移到透析袋中，经透析获得喜树碱纳米胶束。

3.根据权利要求2所述的用于杀灭农业害虫的喜树碱纳米胶束制备方法，其特征在于将1mmolmPEG₂₀₀₀-COOH溶于20mL干燥二氯甲烷中，在0℃下，依次加入1mmol喜树碱、1mmol4-二甲氨基吡啶、1mmolN,N-二异丙基碳二亚胺，继续在0℃下反应2h，撤去冰浴，缓慢升至室温，继续搅拌充分反应，待反应完毕后，过滤，滤液用0.1NHCl洗涤三次，有机相用无水硫酸镁干燥过夜，过滤，减压蒸馏旋干得粗品，经柱层析纯化获得喜树碱-单甲醚聚乙二醇共聚物，然后将其10mg溶于1.0mL二甲基亚砜中，逐滴加入10mL去离子水，室温搅拌过夜，将该溶液转移到透析袋中，透析2天，获得喜树碱纳米胶束。

4.权利要求1所述的喜树碱纳米胶束用于与其它种类的农药复配，制备的双核纳米农药。

5.一种喜树碱-啶虫脒双核纳米农药。

6.权利要求5所述的喜树碱-啶虫脒双核纳米农药制备方法，其特征在于将喜树碱纳米胶束加入水和含有啶虫脒的DMSO中，然后将前述溶液转移到透析袋中透析得到喜树碱-啶虫脒双核纳米农药。

7.根据权利要求6所述的喜树碱-啶虫脒双核纳米农药制备方法，其特征在于将300mg喜树碱-单甲醚聚乙二醇2000溶于2.0mL的DMSO中，在搅拌下，依次加入200mL去离子水和含有10mg啶虫脒的1.0mL的DMSO，室温搅拌过夜，然后将该溶液转移到透析袋中（MWCO3500），透析2天，得到喜树碱-啶虫脒双核纳米药物。

8.根据权利要求7所述的喜树碱-啶虫脒双核纳米药物制备方法，其喜树碱与啶虫脒含量比为88.49：11.51。

9.根据权利要求5所述的喜树碱-啶虫脒双核纳米药物用于防治农业害虫。

10.据权利要求5所述的喜树碱-啶虫脒双核纳米药物的用途，用于防治松材线虫。

11.根据权利要求5所述的喜树碱-啶虫脒双核纳米药物的用途，用于防治朱砂叶螨。

12.根据权利要求5所述的喜树碱-啶虫脒双核纳米药物的用途，用于防治甘蓝蚜。