CN105254692B - 一种同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法，（1）按一定比例称取桃叶珊瑚苷、京尼平苷、乙酸钴溶于乙腈‑二甲基亚砜混合溶液中，震荡，加入功能单体震荡后再加入混合交联剂TRIM‑DVB和引发剂AIBN，充分混合后，转入圆底烧瓶，脱气，通氩气，封瓶；（2）放入60℃恒温水浴锅中聚合反应完成后粉碎，过筛，沉降，过滤，洗脱，真空干燥；（3）将所得分子印迹聚合物装入固相萃取筒中，上样后洗涤和洗脱即得。本发明采用金属离子配位印迹技术，以二元化合物的金属离子配合物作为模板分子，合成了具有高选择识别性能的分子印迹聚合物，利用该聚合物同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷具备很强的实用价值。

Description

一种同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法

技术领域

本发明涉及一种采用新制备的分子印迹材料同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法。

背景技术

分子印迹技术旨在构造对目标化合物具有高选择性甚至专一结合能力的超分子化合物，由于其中的结合位点与目标分子在形状、大小及化学功能基方面的匹配性，分子印迹聚合物可用于对复杂体系中目标化合物的选择富集甚至专一识别。迄今，分子印迹技术已广泛应用在固相萃取、色谱分离、传感技术，免疫分析及模拟酶催化等领域。然而，在过去关于分子印迹的大多数研究中，主要集中在对单一模板的印迹制备与分子识别，这些研究显示了单一模板印迹聚合物较高的分子识别选择性，而对多模板同时印迹的分子印迹聚合物则研究不多。从理论上说，当几种分子与功能单体配合再被同时印迹后，得到的印迹材料应对多种模板呈现强的选择识别能力。如是这样，则可选择某一类化合物，或其中几种代表化合物作模板制备多模板印迹聚合物，利用其选择识别性可实现对植物材料中某一类化合物的同时富集和分离，这对药物中某一类活性化合物的分离富集及新药开发具有重要应用价值。

杜仲系杜仲科植物杜仲的干燥树皮，具有补肝肾、强筋骨、安胎的功效，临床用于治疗肝肾不足、腰膝酸痛、筋骨无力、头晕目眩、妊娠漏血、胎动不安等病症。其化学成分复杂，主要含有环烯醚萜类、木脂素类、苯丙素类、黄酮类。其中环烯醚萜类的主要代表化合物是桃叶珊瑚苷和京尼平苷，桃叶珊瑚苷具有保肝、镇痛、抗菌消炎及降压等作用，而京尼平苷有保肝、利胆、抗癌和解毒等功效。目前，提取桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法众多，但是传统的提取方法不仅费时费力，而且难以实现对两种化合物的同时萃取。在这里，我们将采用分子印迹技术，以桃叶珊瑚苷和京尼平苷混合物作为模板分子制备双模板分子印迹聚合物，开发一种同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是克服现有复杂样品萃取技术中选择性低、回收率不高、产品纯度低等缺陷，提供了一种分子印迹固相萃取目标物的方法，通过金属离子、多模板分子、功能单体有效配合再进行印迹的制备方法，获得一种金属Co²⁺ -二元环烯醚萜苷配位印迹材料，并以之为固相萃取材料，同时萃取杜仲中的桃叶珊瑚苷和京尼平苷。

为克服现有技术的不足，本发明采取以下工艺步骤：

（1）分子印迹材料的制备：称取模板分子桃叶珊瑚苷-京尼平苷混合物、乙酸钴溶于乙腈-二甲基亚砜混合溶液中震荡10 min，加入功能单体4-VP，震荡30 min，使其与功能单体充分作用，再加入混合交联剂TRIM-DVB（摩尔比1:1）和引发剂AIBN，充分混合后，转入圆底烧瓶，超声脱气15 min，通入氩气15 min，封瓶；将圆底烧瓶放入60 ℃恒温水浴锅中聚合反应24 h，将所得的块状聚合物粉碎，过200目筛后，用丙酮沉降3次，每次30 min，弃去上层浊液，以除去聚合物中过细的粒子，将下层沉淀真空干燥后用0.10 mmol/L的EDTA溶液洗去聚合物中的金属离子，然后用去离子水洗去残留的EDTA溶液，再将聚合物放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸（9/1, v/v）溶液洗脱除去模板分子，再用甲醇洗涤数次，最后放入真空干燥箱于60 ℃中干燥24 h即得；

（2）杜仲中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的萃取：称取20.0g分子印迹聚合物装入固相萃取筒中，加入20mL杜仲提取液，依次用10mL水、10mL甲醇-水(体积比为3:7)、10mL甲醇-水-乙腈 (体积比为4:4:2)洗涤杂质，再用20mL甲醇洗脱目标物即完成萃取。

所述复合模板分子中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的摩尔比为1:1.5-1.5:1; 金属钴离子与复合模板分子的总摩尔数之比为1:1-3:1；复合模板分子的总摩尔数与功能单体的用量比为1:3-1:10；复合模板分子与混合交联剂TRIM-DVB的总摩尔数之比为1:10-1:30。

采用本方法同时萃取杜仲中桃叶珊瑚苷和京尼平苷，桃叶珊瑚苷和京尼平苷的回收率分别可达88-93%和91-96%，回收率很高。

与现有技术相比，本发明的有益效果还在于：

本发明采用配位印迹技术，提高了模板分子与功能单体的结合强度，提高了分子印迹真实度，大幅改善了印迹效果；以Co²⁺-桃叶珊瑚苷-京尼平苷配合物为模板分子，通过优化双模板分子的配比、金属离子与模板分子的量比及功能单体用量，获得了能同时识别桃叶珊瑚苷和京尼平苷的分子印迹聚合物；将其作为固相萃取填料，在实际样品应用中成功实现了对杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的同时萃取，为植物药用活性部位的分离纯化提供了一种新的印迹材料制备和应用新方法，具备很强的实用价值。

具体实施方式

以下对同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法进行详细说明。

实施例1：

（1）分子印迹材料的制备：称取模板分子桃叶珊瑚苷-京尼平苷混合物、乙酸钴溶于乙腈-二甲基亚砜混合溶液中震荡10 min，加入功能单体4-VP，震荡30 min，使其与功能单体充分作用，再加入混合交联剂TRIM-DVB（摩尔比1:1）和引发剂AIBN，充分混合后，转入圆底烧瓶，超声脱气15 min，通入氩气15 min，封瓶；将圆底烧瓶放入60 ℃恒温水浴锅中聚合反应24 h，将所得的块状聚合物粉碎，过200目筛后，用丙酮沉降3次，每次30 min，弃去上层浊液，以除去聚合物中过细的粒子，将下层沉淀真空干燥后用0.10 mmol/L的EDTA溶液洗去聚合物中的金属离子，然后用去离子水洗去残留的EDTA溶液，再将聚合物放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸（9/1, v/v）溶液洗脱除去模板分子，再用甲醇洗涤数次，最后放入真空干燥箱于60 ℃中干燥24 h即得；

（2）杜仲中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的萃取：称取20.0g分子印迹聚合物装入固相萃取筒中，加入20mL杜仲提取液，依次用10mL水、10mL甲醇-水(体积比为3:7)、10mL甲醇-水-乙腈 (体积比为4:4:2)洗涤杂质，再用20mL甲醇洗脱目标物即完成萃取。

所述复合模板分子中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的摩尔比为1:1.1; 金属钴离子与复合模板分子的总摩尔数之比为2:1；复合模板分子的总摩尔数与功能单体的用量比为1:9；复合模板分子与混合交联剂TRIM-DVB的总摩尔数之比为1:12。

实施例2：

（1）分子印迹材料的制备：称取模板分子桃叶珊瑚苷-京尼平苷混合物、乙酸钴溶于乙腈-二甲基亚砜混合溶液中震荡10 min，加入功能单体4-VP，震荡30 min，使其与功能单体充分作用，再加入混合交联剂TRIM-DVB（摩尔比1:1）和引发剂AIBN，充分混合后，转入圆底烧瓶，超声脱气15 min，通入氩气15 min，封瓶；将圆底烧瓶放入60 ℃恒温水浴锅中聚合反应24 h，将所得的块状聚合物粉碎，过200目筛后，用丙酮沉降3次，每次30 min，弃去上层浊液，以除去聚合物中过细的粒子，将下层沉淀真空干燥后用0.10 mmol/L的EDTA溶液洗去聚合物中的金属离子，然后用去离子水洗去残留的EDTA溶液，再将聚合物放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸（9/1, v/v）溶液洗脱除去模板分子，再用甲醇洗涤数次，最后放入真空干燥箱于60 ℃中干燥24 h即得；

（2）杜仲中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的萃取：称取20.0g分子印迹聚合物装入固相萃取筒中，加入20mL杜仲提取液，依次用10mL水、10mL甲醇-水(体积比为3:7)、10mL甲醇-水-乙腈 (体积比为4:4:2)洗涤杂质，再用20mL甲醇洗脱目标物即完成萃取。

所述复合模板分子中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的摩尔比为1.1:1; 金属钴离子与复合模板分子的总摩尔数之比为2.8:1；复合模板分子的总摩尔数与功能单体的用量比为1:4；复合模板分子与混合交联剂TRIM-DVB的总摩尔数之比为1:18。

实施例3：

（1）分子印迹材料的制备：称取模板分子桃叶珊瑚苷-京尼平苷混合物、乙酸钴溶于乙腈-二甲基亚砜混合溶液中震荡10 min，加入功能单体4-VP，震荡30 min，使其与功能单体充分作用，再加入混合交联剂TRIM-DVB（摩尔比1:1）和引发剂AIBN，充分混合后，转入圆底烧瓶，超声脱气15 min，通入氩气15 min，封瓶；将圆底烧瓶放入60 ℃恒温水浴锅中聚合反应24 h，将所得的块状聚合物粉碎，过200目筛后，用丙酮沉降3次，每次30 min，弃去上层浊液，以除去聚合物中过细的粒子，将下层沉淀真空干燥后用0.10 mmol/L的EDTA溶液洗去聚合物中的金属离子，然后用去离子水洗去残留的EDTA溶液，再将聚合物放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸（9/1, v/v）溶液洗脱除去模板分子，再用甲醇洗涤数次，最后放入真空干燥箱于60 ℃中干燥24 h即得；

（2）杜仲中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的萃取：称取20.0g分子印迹聚合物装入固相萃取筒中，加入20mL杜仲提取液，依次用10mL水、10mL甲醇-水(体积比为3:7)、10mL甲醇-水-乙腈 (体积比为4:4:2)洗涤杂质，再用20mL甲醇洗脱目标物即完成萃取。

所述复合模板分子中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的摩尔比为1.4:1; 金属钴离子与复合模板分子的总摩尔数之比为1.9:1；复合模板分子的总摩尔数与功能单体的用量比为1:8；复合模板分子与混合交联剂TRIM-DVB的总摩尔数之比为1:11。

上述实施例并非对本发明作任何形式上的限制，任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围的情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应落在本发明技术方案保护的范围内。

Claims (2)

1.一种同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法，其特征在于包含以下几个步骤：

（1）分子印迹材料的制备：称取复合模板分子桃叶珊瑚苷-京尼平苷混合物、乙酸钴溶于乙腈-二甲基亚砜混合溶液中震荡10 min，加入功能单体4-VP，震荡30 min，使其与功能单体充分作用，再加入摩尔比为1:1的混合交联剂TRIM-DVB和引发剂AIBN，充分混合后，转入圆底烧瓶，超声脱气15 min，通入氩气15 min，封瓶；将圆底烧瓶放入60 ℃恒温水浴锅中聚合反应24 h，将所得的块状聚合物粉碎，过200目筛后，用丙酮沉降3次，每次30 min，弃去上层浊液，以除去聚合物中过细的粒子，将下层沉淀真空干燥后用0.10 mmol/L的EDTA溶液洗去聚合物中的金属离子，然后用去离子水洗去残留的EDTA溶液，再将聚合物放入索氏提取器中，用体积比为9:1的甲醇-乙酸溶液洗脱除去模板分子，再用甲醇洗涤数次，最后放入真空干燥箱于60 ℃中干燥24 h即得；

（2）杜仲中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的萃取：称取20.0g分子印迹聚合物装入固相萃取筒中，加入20mL杜仲提取液，依次用10mL水、10mL体积比为3:7的甲醇-水、10mL体积比为4:4:2的甲醇-水-乙腈洗涤杂质，再用20mL甲醇洗脱目标物即完成萃取。

2.根据权利要求1所述同时萃取杜仲皮中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的方法，其特征在于：所述复合模板分子中桃叶珊瑚苷和京尼平苷的摩尔比为1:1.5-1.5:1; 金属钴离子与复合模板分子的总摩尔数之比为1:1-3:1；复合模板分子的总摩尔数与功能单体的用量比为1:3-1:10；复合模板分子与混合交联剂TRIM-DVB的总摩尔数之比为1:10-1:30。