CN105232549A - Logeracemin A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Logeracemin？A在制备治疗肝纤维化药物的用途。药理试验证明，Logeracemin？A可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物。本发明涉及的Logeracemin？A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。

Description

Logeracemin A在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用

技术领域

本发明涉及化合物LogeraceminA的新用途，尤其涉及LogeraceminA在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用。

背景技术

肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，表现为细胞外基质(ECM)大量合成、分泌，而降解绝对或相对不足，使ECM在肝脏内弥漫沉积。其起始于肝细胞(HC)坏死，随之是炎症反应、纤维生成介质释放，肝星状细胞(FSC)激活，最终以肝脏结缔组织成分的合成与降解明显失去平衡。肝纤维化是多种慢性肝病共同的病理过程，是影响预后的重要因素。

过去的20年间，肝纤维化的研究取得了长足进展，证实肝纤维化与一定程度的肝硬化都是可逆的。近年来陆续出现了一些抗肝纤维化治疗方法，包括化学药、生物制剂、中药与基因疗法等，但是理想的临床治疗手段仍然缺乏(刘平.加强抗肝纤维化作用机制的研究.中华肝病杂志，2005,8(13)：561)。目前防治肝纤维的关键是针对与肝星状细胞激活相关的环节，主要是：减轻肝损伤；抑制星状细胞激活，减少细胞外基质产生；调节细胞因子紊乱，促进活化肝星状细胞凋亡。

本发明涉及的化合物LogeraceminA是一个2014年发表(Jin-BiaoXu，etal.,LogeraceminA,anAnti-HIVDaphniphyllumAlkaloidDimerwithaNewCarbonSkeletonfromDaphniphyllumlongeracemosum.J.Am.Chem.Soc.2014,136,7631-7633.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及抗艾滋病毒(Jin-BiaoXu，etal.,LogeraceminA,anAnti-HIVDaphniphyllumAlkaloidDimerwithaNewCarbonSkeletonfromDaphniphyllumlongeracemosum.J.Am.Chem.Soc.2014,136,7631-7633.)，对于本发明涉及的LogeraceminA在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于抑制肝脏成纤维细胞增殖活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抑制肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。

发明内容

本发明的目的在于根据现有LogeraceminA研究中未发现其具有抑制肝脏成纤维细胞增殖活性的报道的现状，提供了LogeraceminA在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用。

所述化合物LogeraceminA结构如式(Ⅰ)所示：

本发明对LogeraceminA抑制肝脏成纤维细胞增殖作用进行了药理试验。成纤维细胞增殖并合成大量细胞外基质(ECM)，是肝纤维化发生的重要环节。活化的肝星状细胞(HSC)具有成纤维细胞特征，NIH/3T3细胞是研究药物抗肝纤维化活性常用的细胞模型。本研究以NIH/3T3成纤维细胞为靶细胞，观察发明药物对其增殖的影响。用MTT法检测的抑制细胞增殖的试验结果表明，本发明药物对NIH/3T3的细胞增殖有显著的抑制活性。

根据药理试验结果证明LogeraceminA具有抗肝纤维化作用。

本发明涉及的LogeraceminA在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。

具体实施方式

本发明所涉及化合物LogeraceminA的制备方法参见文献(Jin-BiaoXu，etal.,LogeraceminA,anAnti-HIVDaphniphyllumAlkaloidDimerwithaNewCarbonSkeletonfromDaphniphyllumlongeracemosum.J.Am.Chem.Soc.2014,136,7631-7633.)

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：本发明所涉及化合物LogeraceminA片剂的制备：

取20克化合物LogeraceminA，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

实施例2：本发明所涉及化合物LogeraceminA胶囊剂的制备：

取20克化合物LogeraceminA，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000粒。

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

实验例一：采用MTT法评价化合物LogeraceminA对肝纤维化的抑制作用

1、方法：NIH/3T3细胞株购自引自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)的中科院上海细胞所细胞库。将对数生长期的亚融合的NIH/3T3细胞用0.25％胰酶消化，洗涤，离心后，用DMEM培养液(含10％FCS)制成1×10₄cell/ml的细胞悬液，台盼蓝染色鉴定存活率大于95％，按每孔100ul加入96孔板中，在37℃、5％CO₂培养24h同步处理后，弃上清，加入含有不同稀释浓度药物的DMEM培养液(含10％FCS)200ul，培养48h，每孔加入MTT溶液孵育4h。弃去培养液，加入150ulDMSO，振荡10分钟，使结晶溶解，酶标仪490nm处读取OD值，结果以OD₄₉₀表示。

2.结果：

2.1形态学观察

NIH/3T3在用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性，呈放射状，细胞增殖的速度快；而加药物24h后，成纤维细胞数目减少，形状变得不规则，突起变短，细胞排列混乱，细胞内代谢产物增多。

表1：MTT法检测本发明药物对NIH/3T3增殖的抑制作用

注：*，与细胞阴性对照P<0.05；**，与细胞阴性对照P<0.01

结果：本发明药物在10ug/ml-40ug/ml的浓度范围内对成纤维细胞NIH/3T3在10％小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞的增殖有显著抑制作用。

实验例2：本发明药物对转化生长因子-β₁(TGF-β₁)诱导的成纤维细胞增殖的抑制作用

TGF-β₁是促进细胞增殖和胶原生成的强活性因子，在细胞中加入TGF-β₁10ng/ml刺激细胞增殖，在检测药物对TGF-β1诱导的细胞增殖的抑制作用，以分析判断本发明药物的作用机理。

表2：MTT法检测本发明药物对TGF诱导NIH/3T3增殖的抑制作用

注：*，与细胞+TGF对照P<0.05；**，与细胞+TGF对照P<0.01

结果：本发明药物在10-40ug/ml两个浓度区间内对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞增殖的抑制作用可能是通过干预TGF信号通路实现的。

由上述实施例表明，本发明的：LogeraceminA对成纤维细胞NIH/3T3在10％小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用；LogeraceminA对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。由此证明，LogeraceminA可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物。

Claims (1)

1.LogeraceminA在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用，所述化合物LogeraceminA结构如式(Ⅰ)所示：