CN105219845A - 可同时检测副溶血弧菌和创伤弧菌的双重lamp方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种双重LAMP检测方法,该方法可同时检测副溶血弧菌和创伤弧菌。属于分子生物学技术领域。所述LAMP检测体系中含有检测副溶血弧菌基因OmpA和创伤弧菌metalloprotease基因的引物组,该引物组分别包含OmpA基因和etalloprotease基因的一对外引物F3、B3和一对内引物FIP、BIP;内引物BIP上分别含有PstI和BamHI酶切位点。该发明方法灵敏度高,特异型好,操作简单,结果观察直观明了,检测速度快。
Description
技术领域
本发明涉及病原弧菌的检测方法,具体的说是一种可同时检测副溶血弧菌和创伤弧菌的双重LAMP方法。
背景技术
创伤弧菌(Vibriovulnificus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌,主要分布于近海海洋环境中,是水产养殖虾、蟹和牡蛎等水生动物中最常见、流行最广、危害最严重的致病菌之一;副溶血弧菌(VibrioParahemolyticus),为革兰氏阴性杆菌,呈弧状、杆状、丝状等多种形状,广泛存在于海水和海产品中,是我国沿海地区常见的食物中毒病原菌。
环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是2000年由Notomi等人发明的一种新的病原核酸检测技术,该技术根据靶序列设计四条特异性引物,可以特异性识别靶序列的六个特定区域,在等温条件下,通过BstDNA聚合酶的链置换和链延伸作用,可以在1小时内对靶序列实现109倍的扩增,扩增产物加入荧光染料SYBRGreenI后,阳性结果变为绿色,阴性无变化,可以通过肉眼直接观察。目前,针对创伤弧菌和副溶血弧菌已经有LAMP检测方法的报道,只是这些检测方法均是针对单一致病菌进行的检测。双重或多重LAMP技术相对单重LAMP而言,操作更加快速、简便,并且节约检测成本,适合基层养殖场对病原的快速检测。
发明内容
本发明提供了一种可同时检测创伤弧菌和副溶血弧菌的双重LAMP检测方法,目的是实现对创伤弧菌和副溶血弧菌进行特异、灵敏、快速、简便的现场检测。改善原有检测技术只能检测单一病原的弊端。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案予以实现:
1、提供2组LAMP引物序列,创伤弧菌的引物长度分别为45bp,46bp,20bp,19bp,分别命名为metalloprotease-FIP、metalloprotease-BIP、metalloprotease-F3、metalloprotease-B3,副溶血弧菌引物长度分别为47bp,44bp,19bp,22bp,分别命名为ompA-FIP、ompA-BIP、ompA-F3、ompA-B3;
2、配置LAMP反应体系,通过LAMP反应程序对样品模板进行扩增,确定最佳反应体系和反应条件;
3、反应产物的鉴定:2%琼脂糖凝胶电泳;产物加入SYBRGreenI,观察反应管中颜色变化。
具体包括如下步骤:
1、设计LAMP引物:根据GeneBank中已知V.vulnificus的metalloprotease基因(GenBank:U50548.1)和V.parahaemolyticus的ompA基因(GenBank:JTGT01000603.1)作为靶序列,通过PrimerExploreV4在线设计软件设计四条特异性引物,对于V.vulnificus,在BIP的B1c和B2之间添加BamHI酶切位点,在FIP的F1c和F2之间添加-TTTT-连接子;V.parahaemolyticus,在BIP的B1c和B2之间添加PstI酶切位点,在FIP的F1c和F2之间添加-TTTT-连接子,设计以下两组LAMP引物:
2、配制LAMP反应体系
反应体系的终浓度为:总体系25μl,包括BstDNA聚合酶1μl(8U),10×BstDNABuffer2.5μl,PCR级甜菜碱4μl(5M),dNTPs(2.5mMeach)2.5μl,创伤弧菌和副溶血弧菌DNA模板共计1μl,FIP/BIP各1μl(0.8μM),F3/B3各1μl(0.2μM),加灭菌双蒸水使反应体系总体积达到25μl。
3、LAMP反应体系扩增:将上述反应体系进行扩增反应,反应温度58到65℃,反应时间为15到90min。
4、扩增产物检测:2%琼脂糖凝胶电泳;产物加入SYBRGreenI,观察反应管中颜色变化。
附图说明
图1反应温度温度梯度从左往右依次58℃到65℃8个梯度1,3,5,7,9,11,13,15分别为58℃,59℃,60℃,61℃,62℃,63℃,64℃,65℃的阴性对照;2,4,6,8,10,12,14,16分别为58℃,59℃,60℃,61℃,62℃,63℃,64℃,65℃加模版。M:marker
图2反应时间1—6分别代表15min,30min,45min,60min,75min,90min;M为marker
图3双重LAMP反应的琼脂糖凝胶电泳图谱及酶切分析
图4创伤弧菌和副溶血弧菌双重LAMP检测方法与普通PCR检测方法的灵敏度比较M:Marker;1-81.6×107CFU/ml-1.6×100CFU/mlCFU/ml;N:negativecontrol
图5特异性结果统计只有创伤弧菌和副溶血弧菌有扩增,其他菌均没有扩增
图6SYBRGreenI显色反应对人工感染的大菱鲆鱼的肝、肾、脾、血进行双重LAMP扩增,产物加入SYBRGreenI,感染组显示绿色(+),对照组无变化(-)。
图7双重LAMP检测方法的应用-平板计数法结合双重LAMP计数细菌的最低检出率。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
1.创伤弧菌和副溶血弧菌双重LAMP方法的建立
1.1材料
dNTPs、BstDNA聚合酶(含10×缓冲液)、PCR级甜菜碱、
1.2方法
1.2.1引物设计与合成
设计LAMP引物:根据GeneBank中已知V.vulnificus的metalloprotease基因(GenBank:U50548.1)和V.parahaemolyticus的ompA基因(GenBank:JTGT01000603.1)作为靶序列,通过PrimerExploreV4在线设计软件设计四条特异性引物,对于V.vulnificus,在BIP的B1c和B2之间添加BamHI酶切位点,在FIP的F1c和F2之间添加-TTTT-连接子;V.parahaemolyticus,在BIP的B1c和B2之间添加PstI酶切位点,在FIP的F1c和F2之间添加-TTTT-连接子,设计以下两组LAMP引物:
1.2.2LAMP扩增条件的优化
优化反应温度和反应时间:检测所用的模板用煮沸裂解法制备。分别在温度和时间上设置的不同梯度,进行优化。温度上从58℃到65℃每隔1℃设置一个梯度;时间上15min一个梯度,设置6个梯度。扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳分析;
分析温度电泳图:创伤弧菌在58℃到65℃均可发生反应,产生阶梯状扩增条带,且电泳条带亮度接近;副溶血弧菌在58℃和65℃均无明显阶梯状扩增条带,但在59℃到64℃有阶梯状扩增条带。(见图1-A和图1-B)
分析时间电泳图:创伤弧菌和副溶血弧菌均在45min时,出现明显的阶梯状条带,(见图2-A和图2-B)
比较V.vulnificus和V.parahaemolyticus两种弧菌的电泳图谱,选择62℃反应45min即可产生清晰的阶梯状扩增条带。
实施例2
限制性内切酶酶切分析
为了构建双重LAMP的检测方法,在V.vulnificus和V.parahaemolyticus两种弧菌的内引物BIP的B1互补链(B1c)和B2之间分别添加BamHI限制性酶切位点和PstI限制性酶切位点(两种弧菌的靶序列中都不含该两种限制性酶切位点),利用限制性酶切分析来确定反应的正确性和特异性。在双重LAMP反应体系中只添加一种模板,并分别对扩增产物进行一种限制性酶切。结果表明:创伤弧菌的扩增产物能够被BamHI限制性内切酶酶切,酶切得到的特异性条带见(图3-A1泳道);副溶血弧菌能够被PstI限制性内切酶酶切,酶切得到的特异性条带(见图3-B1泳道),证明了双重LAMP扩增结果的正确性。
实施例3
创伤弧菌和副溶血弧菌双重LAMP检测方法的灵敏度测定
1煮沸法提取DNA。
2为了检测LAMP方法的灵敏度,将提取创伤弧菌和副溶血弧菌基因组DNA进行10倍梯度稀释,共8个梯度,各浓度级分别取1μL作为模版,进行优化条件后的LAMP扩增,扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳分析。
3分别取1μL作为PCR模板,F3/B3各1μl(20mM),Taq酶0.5μl,dNTPs(2.5mMeach)1μl,Taq10×buffer2.5μl,ddH2O18μl,进行PCR扩增,94℃预变性5min;94℃变性30s,57℃退火40s,72℃延伸40s,25个循环;72℃延伸5min。扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳分析。
PCR方法对2种致病菌不同稀释度的菌悬液进行灵敏度的检测,结果发现:创伤弧菌最低均能检测到1.6x103CFU/ml,分别产生224bp的扩增条带(图4C);副溶血弧菌最低均能检测到1.6x104CFU/ml,分别产生207bp的扩增条带(图4D)。双重LAMP检测方法灵敏度高,创伤弧菌最低能够检测到16CFU/ml,是普通PCR方法的102倍;副溶血弧菌最低能够检测到16CFU/ml,是普通PCR方法的103倍。
实施例4
1用煮沸法制备鱼肠道弧菌(Vibrioichthyoenteri),创伤弧菌(Vibriovulnificus),副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus),鳗弧菌(Vibrioanguillarum),哈维氏弧菌(Vibrioharveyi),大肠杆菌(E.coli),恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida),藤黄微球菌(Micrococcusluteus),金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus),无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)的DNA模板,进行LAMP扩增,扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳分析。结果只有创伤弧菌和副溶血弧菌有扩增条带(图5)。
实施例5
双重LAMP方法具体检测鱼体内的创伤弧菌和副溶血弧菌
1选取大菱鲆作为试验动物,通过腹腔注射方式分别人工感染2种弧菌。感染12h后,无菌操作,分别取血、肾、肝及脾组织,匀浆。匀浆液进行10倍梯度稀释,选择合适的稀释度涂布LB固体培养基平板,计数。剩余血、肾、肝及脾组织的匀浆液经煮沸,进行10倍梯度稀释,双重LAMP方法检测其最低检出率,扩增产物进行2%琼脂糖凝胶分析。
结果显示,双重LAMP方法可以在所有的感染组样品中,检测到2种弧菌的存在。向双重LAMP扩增反应管中加入1μl(1:10)SYBRGreenI,目测反应管中颜色的变化。结果发现,感染组的所有组织的反应管中均发生了阳性反应,颜色变为典型的绿色(+);对照组健康大菱鲆的所有组织的反应管中颜色变为橙色(—)(图6)。
2结合平板计数和双重LAMP方法,计算各细菌感染组中所取组织细菌检出率(图7)。结果表明:感染创伤弧菌的大菱鲆,脾、肾、肝和血液中创伤弧菌的最低检出率分别为21CFU/ml、25CFU/ml、19CFU/ml和23CFU/ml;感染副溶血弧菌的大菱鲆,脾、肾、肝和血液中创伤弧菌的最低检出率分别为24CFU/ml、21CFU/ml、18CFU/ml和27CFU/ml。
Claims (2)
1.可同时检测创伤弧菌和副溶血弧菌的双重LAMP检测方法,其特征在于包括下述步骤:
(1)根据GeneBank中已知创伤弧菌metalloprotease基因(GenBankaccessionno::U50548.1)和副溶血弧菌ompA基因(GenBankaccessionno::JTGT01000603.1)作为靶序列,通过PrimerExploreV4在线设计软件设计四条特异性引物,对于V.vulnificus,在BIP的B1c和B2之间添加BamHI酶切位点,在FIP的F1c和F2之间添加-TTTT-连接子;对于V.parahaemolyticus,在BIP的B1c和B2之间添加PstI酶切位点,在FIP的F1c和F2之间添加-TTTT-连接子,设计以下两组LAMP引物:
(2)配制LAMP反应体系
反应体系的终浓度为:总体系25μl,包括BstDNA聚合酶1μl(8U),10×BstDNABuffer2.5μl,PCR级甜菜碱4μl(5M),dNTPs(2.5mMeach)2.5μl,DNA模版1μl,FIP/BIP各1μl(0.8μM),F3/B3各1μl(0.2μM),加双蒸水使反应体系总体积达到25μl;
(3)LAMP反应体系扩增:将上述反应体系进行扩增反应,反应温度58℃到65℃,反应时间为45min到90min;
(4)扩增产物检测:2%琼脂糖凝胶电泳;产物加入SYBRGreenI,观察反应管中颜色变化。
2.如权利要求1所叙述的创伤弧菌和副溶血弧菌的双重LAMP检测方法,其特征在于步骤(3)中的最适反应温度是62℃,最适反应时间45min。
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Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105506121A (zh) * | 2016-01-10 | 2016-04-20 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 用于副溶血性弧菌和创伤弧菌检测的一组核苷酸序列 |
CN105695570A (zh) * | 2016-01-22 | 2016-06-22 | 青岛农业大学 | 一种可同时检测四种弧菌的多重lamp方法 |
CN106434900A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-02-22 | 上海生物信息技术研究中心 | 同时快速恒温检测创伤弧菌和霍乱弧菌的方法、引物及试剂盒 |
CN107475374A (zh) * | 2017-08-01 | 2017-12-15 | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种精确定量检测食品中创伤弧菌的试剂盒及检测方法 |
CN109097484A (zh) * | 2018-08-20 | 2018-12-28 | 天津农学院 | 一种用于检测鱼源创伤弧菌金属蛋白酶基因的引物以及荧光定量pcr检测方法 |
CN109880896A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-06-14 | 中山大学 | 一种用于快速鉴别细菌多粘菌素耐药基因mcr具体分型的多重LAMP试剂盒和检测方法 |
CN110093430A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-08-06 | 宁波大学 | 一种用于检测海水浴场致病菌的高通量定量检测试剂盒 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000024776A1 (fr) * | 1998-10-26 | 2000-05-04 | Akira, Shizuo | Nouveau recepteur du type toll et gene de ce recepteur |
CN102732599A (zh) * | 2011-04-12 | 2012-10-17 | 南开大学 | 双重聚合酶链反应方法检测海水样品中的创伤弧菌和副溶血弧菌 |
CN103525950A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-01-22 | 东南大学 | 一种用于鉴别cva6和非cva6肠道病毒的rt-pcr引物对及其应用 |
-
2015
- 2015-07-28 CN CN201510452614.8A patent/CN105219845B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000024776A1 (fr) * | 1998-10-26 | 2000-05-04 | Akira, Shizuo | Nouveau recepteur du type toll et gene de ce recepteur |
CN102732599A (zh) * | 2011-04-12 | 2012-10-17 | 南开大学 | 双重聚合酶链反应方法检测海水样品中的创伤弧菌和副溶血弧菌 |
CN103525950A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-01-22 | 东南大学 | 一种用于鉴别cva6和非cva6肠道病毒的rt-pcr引物对及其应用 |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105506121A (zh) * | 2016-01-10 | 2016-04-20 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 用于副溶血性弧菌和创伤弧菌检测的一组核苷酸序列 |
CN105695570A (zh) * | 2016-01-22 | 2016-06-22 | 青岛农业大学 | 一种可同时检测四种弧菌的多重lamp方法 |
CN106434900A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-02-22 | 上海生物信息技术研究中心 | 同时快速恒温检测创伤弧菌和霍乱弧菌的方法、引物及试剂盒 |
CN106434900B (zh) * | 2016-08-30 | 2020-02-14 | 上海生物信息技术研究中心 | 同时快速恒温检测创伤弧菌和霍乱弧菌的方法、引物及试剂盒 |
CN107475374A (zh) * | 2017-08-01 | 2017-12-15 | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种精确定量检测食品中创伤弧菌的试剂盒及检测方法 |
CN109097484A (zh) * | 2018-08-20 | 2018-12-28 | 天津农学院 | 一种用于检测鱼源创伤弧菌金属蛋白酶基因的引物以及荧光定量pcr检测方法 |
CN110093430A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-08-06 | 宁波大学 | 一种用于检测海水浴场致病菌的高通量定量检测试剂盒 |
CN109880896A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-06-14 | 中山大学 | 一种用于快速鉴别细菌多粘菌素耐药基因mcr具体分型的多重LAMP试剂盒和检测方法 |
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C06 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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