CN105218632A - 作为转谷氨酰胺酶抑制剂的肽或拟肽、其制备方法及用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及作为转谷氨酰胺酶抑制剂的肽衍生物和拟肽，其制备方法，含有所述化合物的医药组合物以及所述转谷氨酰胺酶抑制剂的用途，特别是用于治疗腹腔病和转谷氨酰胺酶相关疾病的用途。

Description

作为转谷氨酰胺酶抑制剂的肽或拟肽、其制备方法及用途
本申请是申请号200780041331.8，申请日2007年11月8日，发明名称为“作为转谷氨酰胺酶抑制剂的迈克尔系统”的分案申请。
技术领域
本发明涉及作为转谷氨酰胺酶抑制剂的肽衍生物及拟肽，其制备方法，含有所述化合物的医药组合物以及所述转谷氨酰胺酶抑制剂的用途。
背景技术
转谷氨酰胺酶为转移酶类别的一部分，且根据EC命名法，其准确称为“蛋白质-谷氨酰胺胺γ-谷氨酰基转移酶”，且给其指定EC编号EC2.3.2.13.。
氨基酸赖氨酸的ε-氨基和氨基酸谷氨酰胺的γ-谷氨酰基经由转谷氨酰胺酶连接，同时释放氨且形成异肽键。
转谷氨酰胺酶在哺乳动物细胞的胞外基质的稳定(例如，Aeschlimann和Paulsson,Thromb.Haemostasis,71,第402-415页,1994)和程序性细胞死亡(细胞凋亡)(例如，Fesus等人,FEBSLett.,284,第109-11页,1991)中发挥重要作用。
另外，转谷氨酰胺酶在许多诸如心血管领域(血栓形成)、自身免疫疾病(腹腔病、杜林病(Duhring'sdisease))、神经退化性疾病(阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease)、帕金森病(Parkinson'sdisease)、亨廷顿病(Huntington'sdisease))、皮肤病(鱼鳞病、银屑病、痤疮)等治疗领域中以及在伤口愈合和发炎性疾病(组织纤维化)(J.M.Wodzinska,Mini-Reviewsinmedicalchemistry,2005,5,279-292)中发挥重要作用。
然而，腹腔病，一种谷蛋白不耐受，是最重要的适应症之一。腹腔病的特征在于小肠粘膜慢性炎症。在所关注的患者中，肠上皮在摄取含谷蛋白食品后依次受到破坏，从而导致对营养物的吸收降低，这又对所关注的患者产生重大影响且与诸如失重、贫血、腹泻、恶心、食欲不振及疲劳等症状相关联。由于这些研究结果，因此强烈需要开发所述酶的抑制剂。
发明内容
本发明旨在提供转谷氨酰胺酶的新颖抑制剂、含有所述抑制剂的医药调配物和合成所述抑制剂的方法。此外，所述抑制剂存在新的用途。
所述目标由独立权利要求的技术教示实现。本发明的其它有利的实施例、各方面和详情由从属权利要求、说明书和实例产生。
已令人惊讶地发现化合物且尤其肽衍生物和诸如具有至少一个接受体取代双键的拟肽等肽样结构是特别适用的转谷氨酰胺酶抑制剂。所述接受体取代双键优选为由羰基官能团(C＝O)和与其共轭的碳碳双键(C＝C)形成的迈克尔系统(Michaelsystem，MS)，因此为C＝C-C＝O型迈克尔接受体系统。然而，通常不需要共轭系统。具有至少一个烯性双键的化合物(其中双键具有至少一个吸电子基团)是非常合适的转谷氨酰胺酶抑制剂。所述具有接受体取代双键的化合物或相应迈克尔系统很可能是自杀型抑制剂，与转谷氨酰胺酶不可逆结合。此外，优选为接受体取代双键经由亚乙基(-C2H4-)或羰基亚乙基(-CO-C2H4-)与主链结合，其中所述主链优选具有肽、肽样或拟肽结构。本发明的主链残基具有以下结构：
接受体取代双键-C2H4-主链
或接受体取代双键-CO-C2H4-主链。
术语“接受体取代双键”表示与吸电子基团(例如C＝O、C＝S、P＝O、P＝S、N＝O、S＝O、N＝N、C≡N)共轭且能够与亲核试剂进行亲核加成以及与如氧、硫和氮的原子形成共价键的双键。
在人类转谷氨酰胺酶中相应分类为TG1、TG2、TG3、TG4、TG5、TG6、TG7和FXIII或FXIIIa。另外，非人类转谷氨酰胺酶可为抗寄生虫治疗中所关注的标靶。
因此，适合作为根据本发明的转谷氨酰胺酶抑制剂的化合物可由以下通用结构[TGI1]描述：
接受体取代双键-(CO)m-C2H4-主链
其中
m可等于0或1，且
接受体取代双键具有至少一个优选负电性≥2.20、进一步优选≥2.50、特别优选≥2.80的负电性能够共轭的吸电子残基，且
主链为由至少两个氨基酸或至少一个二拟肽形成的肽或拟肽和/或主链具有至少一个酰胺键。主链在本文中也将称为残基A。带有迈克尔系统的主链具有的至少一个羰基与带有具有迈克尔系统的侧链的碳原子邻接。
因此，本发明的另一方面涉及作为医药的根据通式[TGI1]的化合物以及其在医学中的用途。
接受体取代双键也将如下表示：
其中取代基Z1、Z2和Z3中至少有一个为能够共轭的吸电子残基，且其中三个取代基Z1、Z2和Z3中有两个可为氢或任何其它吸电子或放电子残基。因此，转谷氨酰胺酶抑制剂的通式[TGI2]也可如下表示：
(Z1)(Z2)C＝C(Z3)-(CO)m-C2H4-主链
其中m和Z1、Z2和Z3具有本文中所述的含义，且然而，其中三个部分Z1、Z2和Z3中至少有一个为能够共轭的吸电子残基。
如果接受体取代双键具有两个或三个设计为Z1、Z2和Z3的不为氢的部分，那么优选为两个或三个残基的平均负电性≥2.20，进一步优选≥2.40，特别优选≥2.60。当评定负电性时，不考虑主链的呈亚乙基或羰基亚乙基形式的连接子。
主链优选为具有2到20个氨基酸的肽，其中氨基酸还包括非蛋白原性氨基酸；或具有2到20个氨基酸的拟肽，其中优选包括1到10个、进一步优选1到5个且特别优选1到3个氨基酸模拟物。此外，主链优选具有1到19个、进一步优选1到10个、更进一步优选1到6个且特别1到4个酰胺键。
经至少一个吸电子基团取代的乙烯基或相应迈克尔接受体系统似乎是转谷氨酰胺酶抑制剂的重要组分，且其与肽或至少肽样主链组合引起形成有效的转谷氨酰胺酶抑制剂。已令人惊讶地发现优选仅极少数氨基酸或氨基酸衍生物或类似物的优选肽、肽样或拟肽主链与带有接受体取代双键的侧基组合的所述组合相对于具有迈克尔系统的已知抑制剂具有较高活性和选择性。因此，似乎不仅迈克尔接受体系统或相应接受体取代双键的存在很重要，而且其确切结构也很重要。已证明具有接受体取代双键或相应迈克尔系统的侧基相对于谷氨酰胺呈生物电子等排是有利的。
肽、肽衍生物以及拟肽是至少一个迈克尔系统的合适主链。肽或肽样主链可由2到20个氨基酸或氨基酸模拟物组成，这些氨基酸或氨基酸模拟物优选经由肽键或例如酯键、碳酸酯键、胺基甲酸酯键(urethanelinkages，carbamatelinkages)和/或脲键彼此连接。带有迈克尔系统的主链具有的至少一个羰基与带有具有迈克尔系统的侧链的碳原子邻接。
如以下结构中所示，已令人惊讶地发现根据本发明的转谷氨酰胺酶抑制剂的抑制效能表面上的三个特征的特征在于：第一，存在亲电子接受体取代双键，其另外经由亚乙基或羰基亚乙基连接子与主链结合，及第三，主链显示肽样或蛋白原性结构。
具有接受体取代双键的本发明基团具有以下通用结构：
其中化合物包含至少一个具有残基Z1、Z2和Z3的接受体取代烯烃，所述烯烃经由具有残基R1、R2、R3和R4的亚乙基或经由具有残基R1、R2、R3和R4的羰基亚乙基与至少第二位经取代基团A结合，其中
A表示肽残基、肽衍生物或拟肽残基；
m为0或1；
残基Z1、Z2、Z3彼此独立地表示以下基团：-H、-CO-(C1-C6烷基)、-CO-R6、-CO-R7、-CO-(C1-C6卤素烷基)、-CO-(C3-C10杂芳基)、-CO-(C6-C15芳基)、-COO-(C1-C6卤素烷基)、-COO-(C3-C10杂芳基)、-COO-(C6-C15芳基)、-COO-(C1-C6烷基)、-COO-R8、-COO-R9、-CN、-COOH、-CO-NH(C1-C6烷基)、-CO-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CO-NR10R11、-CO-NH2、-CO-N(CR12R13R14)(CR15R16R17)、-NO2、-CS-(C1-C6烷基)、-CS-R18、-CS-R19、-CS-O-(C1-C6烷基)、-CS-O-R20、-CS-O-R21、-CS-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CS-NR22R23、-CS-NH2、-CS-N(CR24R25R26)(CR27R28R29)、-SO-R30、-SO-R31、-SO2-R32、-SO2-R33、-SO-CR34R35R36、-SO-CR37R38R39、-SO2-CR40R41R42、-SO2-CR43R44R45、-SO-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-SO-NR46R47、-SO-NH2、-SO-N(CR48R49R50)(CR51R52R53)、-SO2-N(C1-C6-烷基)(C1-C6烷基)、-SO2-NR54R55、-SO2-NH2、-SO2-N(CR56R57R58)(CR59R60R61)、-SO2-OH、-SO2-OR62、-SO2-CR63R64R65、-SO2-OCR66R67R68、-O-P(O)(OH)2、-O-P(O)(OR69)(OR70)、-O-P(O)(O-C1-C6-烷基)(O-C1-C6-烷基)、-P(O)(OR71)(OR72)、-P(O)(O-C1-C6烷基)(O-C1-C6烷基)、-CF2-P(O)(OR73)(OR74)、-CF2-P(O)(O-C1-C6烷基)(O-C1-C6烷基)；
残基Z1、Z2和Z3中至少有一个不为氢，
残基Z1和Z2一起也可形成残基-CO-O-CO-CH2-或-CO-O-CH2-CH2-，
残基Z2和Z3一起也可形成残基-CO-Z’-CH2-、-CO-O-CH2-、-CO-O-CO-、-CO-NH-CO-或-Z’-CH2-CH2-，其中
Z’表示以下基团中的一个：-CH2-、-CF2-、-C2H4-、-CF2-CH2-、-CH2-CH2-、-O-、-O-CH2-、-NH-或-NH-CH2-；
且残基R1-R74彼此独立地表示以下所述的基团中的一个。
优选其中R1、R2、R3和R4表示氢的化合物，R1、R2、R3和R4表示氢产生通式[G]，其中残基A和Z1到Z3具有以上所说明的含义且m为0或1。
在m＝1的情况下，无须Z1、Z2或Z3表示能够共轭的基团，因为已有一个羰基与双键共轭。在这种情况下，优选为残基Z1、Z2或Z3中至少有一个表示吸电子基团。优选化合物特别是其中m＝1且残基Z1、Z2或Z3、优选Z1或Z2中至少有一个表示另一能够共轭的基团的化合物。
接受体取代双键的优选形式为由羰基官能团与双键共轭形成的具有以下通用结构[A]的迈克尔系统：
其中
Z表示羟基、氨基、C1-C6烷基氨基(-NH(C1-C6烷基))、C1-C6二烷基氨基(-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基))、C1-C6烷氧基(-O-(C1-C6烷基))、C1-C6烷基、C1-C6卤素烷基、C3-C10杂芳基或C6-C15芳基。
m为0或1；且
A表示迈克尔系统所结合的化合物的残基。
A也是由其衍生的肽或肽样主链，然而，其中A无须含有氨基酸或肽键，而且可包含任选包括杂原子、芳香族化合物、杂芳香族化合物、杂环或碳环的碳主链且可任选含有氨基酸类似物或肽类似物。残基A可包含至多30个、优选20个诸如N、S、O、P、F、Cl、Br等杂原子和至多80个、优选至多70个、进一步优选至多60个且特别优选至多50个碳原子，其可包含于直链、支链、饱和、不饱和以及经取代碳链和碳环或杂环中。
残基A优选包含第二位取代原子，优选烯性侧链所结合的碳原子。羰基(C＝O)优选与所述优选第二位取代碳原子结合。残基A的碳原子(该原子具有侧链)也可第三位经取代且优选与三个或四个碳原子结合，其中所述碳原子中的一个为侧链的一部分。此外，侧链也可与残基A的硫或氮原子结合。
折线意思是通式[A]涵盖两种异构形式(Z-异构体，E-异构体)，因此包含两种以下异构体：
本文中使用的术语“C1-C6烷基”包含以下残基：-CH3、-C2H5、-C3H7、-CH(CH3)2、-C4H9、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-C(CH3)3、-C5H11、-CH(CH3)-C3H7、-CH2-CH(CH3)-C2H5、-CH(CH3)-CH(CH3)2、-C(CH3)2-C2H5、-CH2-C(CH3)3、-CH(C2H5)2、-C6H13、-C2H4-CH(CH3)2、-C3H6-CH(CH3)2、-C2H4-CH(CH3)-C2H5、-CH(CH3)-C4H9、-CH2-CH(CH3)-C3H7、-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-CH(CH3)-C2H5、-CH2-CH(CH3)-CH(CH3)2、-CH2-C(CH3)2-C2H5、-C(CH3)2-C3H7、-C(CH3)2-CH(CH3)2、-C2H4-C(CH3)3、-CH(CH3)-C(CH3)3、-环-C3H5、-环-C4H7、-环-C5H9和-环-C6H11。
优选残基-CH3、-C2H5、-C3H7、-CH(CH3)2、-C4H9、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-C(CH3)3和-C5H11。特别优选残基-CH3、-C2H5、-C3H7和-CH(CH3)2。
术语C1-C6烷氧基指-O-(C1-C6烷基)且术语C1-C6烷基氨基指-NH-(C1-C6)烷基。术语C1-C6二烷基氨基描述为-N[(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)]，其中两个烷基残基可相同或不同。-CH3、-C2H5、-C3H7、-CH(CH3)2和-C4H9是优选的C1-C6烷基。特别优选-O-CH3、-O-C2H5、-O-C3H7、-O-CH(CH3)2、-O-C(CH3)3。
术语C1-C6卤素烷基指C1-C6烷基，其中一个、两个、三个、四个、五个乃至所有氢原子经卤素原子(-F、-Cl、-Br、-I)置换。优选以下基团：-NHCH3、-NHC2H5、-NHC3H7、-NH-环-C3H5、-NHCH(CH3)2、-NHC(CH3)3、-N(CH3)2、-N(C2H5)2、-N(C3H7)2、-N(环-C3H5)2。
术语C6-C15芳基优选指诸如可经至多5个选自包含残基R6-R50的群组的取代基取代的苯基、甲苯基、苯甲基、苯乙烯基、二甲基苯基、三甲基苯基、二甲基苯甲基、三甲基苯甲基或萘基等基团。取代基R6到R50如下所定义。
基团Z可指以下残基：CR7R8R9、-CR10R11-CR12R13R14、-CR15R16-CR17R18-CR19R20R21、-O-CR22R23R24、-O-CR25R26-CR27R28R29、-O-CR30R31-CR32R33-CR34R35R36、-NH-CR37R38R39、-NH-CR40R41-CR42R43R44、-NH-CR45R46-CR47R48-CR49R50R51，其中取代基R7到R45可独立地选自以下清单。
术语C3-C10杂芳基指具有至少三个碳原子和至少一个选自氮、氧和/或硫的杂原子的环状、双环状或三环状芳香族残基。
以下是C3-C10杂芳基的优选实例：
其中这些基团可经至多5个选自以下清单的取代基R52到R56或R80到R84取代。
其它优选迈克尔系统具有以下结构：
其中
Z’表示以下基团中的一个：-CH2-、-CF2-、-C2H4-、-CF2-CH2-、-CH2-CH2-、-O-、-O-CH2-、-NH-或-NH-CH2-；
折线代表双键的构型可为“Z”或“E”。
如果预期具有以下结构的特别优选的迈克尔系统：
其中Z具有本文中所定义的含义，迈克尔系统表示氨基酸或氨基酸衍生物或类似物侧链，其中氨基酸为所述分子的肽或肽样残基的一部分。
整个分子可如下示意性表示：
其中A表示肽、肽衍生物或拟肽且化合物可如下表示：
或
或
或
其中D可表示化学键或以下基团中的一个：
-CH2-、-CL1L2-、-CF2-、-C2H4-、-CH2-CF2-、-CF2-CH2-、-CH＝CH-、-CH(OH)-CH2-、-C(＝O)-CH2-、-CH2-NH-、-CH2-O-、-CH(OH)-CH2-NH-、-CHQ-C2H4-、-CHQ-CH2-CF2-、-CHQ-CF2-CH2-、-CHQ-CH＝CH-、-CHQ-CH(OH)-CH2-、-CHQ-C(＝O)-CH2-、-CHQ-CH2-NH-、-CHQ-CH2-O-、-CHQ-P(＝O)(OH)-NH-、-CHQ-P(＝O)(OH)-O-、-CHQ-P(＝O)(OH)-S-、-CHQ-P(＝O)(OH)-CH2-或-CHQ-CH(OH)-CH2-NH-，其中L1、L2及Q彼此独立地表示天然氨基酸的侧链残基或残基-R59、-R60、-R61，且残基R1到R4和R59、R60、R61、X、X’和Y具有如下所定义的含义。变量m可为0或1。
其中下式是D表示化学键的结果：
基团A表示至少一个接受体取代烯烃(MS)或相应一个本文中所述类型的迈克尔系统(MS)所结合的肽、肽衍生物或拟肽主链。
显然，肽或肽样化合物也可具有两个或三个相同或不同接受体取代烯烃或迈克尔系统。带有迈克尔接受体的侧链或相应具有接受体取代烯烃的侧链可连接于A的任何位置。
在最简单的实施例中，A优选表示由两个经由肽键(酰胺键)彼此连接的氨基酸AS1和AS2符号表示的二肽或相应二肽衍生物：AS1-AS2。
AS1或AS2或AS1和AS2带有接受体取代烯烃(MS)作为侧链，优选带有迈克尔系统，且二肽(二肽衍生物)优选具有连接于C-末端的基团Y及连接于N-末端的基团X和X'。
肽、肽衍生物和拟肽以常用表示法说明，即，自N-末端朝C-末端的方向。
因此，二肽可如下表示：
根据本发明，也可使用三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽和十肽和具有至多20个氨基酸或氨基酸样化合物的肽。然而，优选三肽、四肽和五肽，且特别优选四肽。
三肽(三肽衍生物)可具有以下结构：
四肽(四肽衍生物)可具有以下结构：
五肽(五肽衍生物)可具有以下结构：
MS1和MS2可指两个相同或两个不同接受体取代烯烃，且三肽、四肽和五肽也可带有两个以上接受体取代烯烃且优选两个以上迈克尔系统。
然而，在所有肽、肽衍生物或拟肽中，每个氨基酸最多存在一个接受体取代烯烃或迈克尔系统。
可使用诸如丙氨酸(Ala，A)、半胱氨酸(Cys，C)、天冬氨酸(Asp，D)、谷氨酸(Glu，E)苯丙氨酸(Phe，F)、甘氨酸(Gly，G)、组氨酸(His，H)、异亮氨酸(Ile，I)、赖氨酸(Lys，K)、亮氨酸(Leu，L)、蛋氨酸(Met，M)、天冬酰胺(Asn，N)、脯氨酸(Pro，P)、谷氨酰胺(Gln，Q)、精氨酸(Arg，R)、丝氨酸(Ser，S)、苏氨酸(Thr，T)、缬氨酸(Val，V)、色氨酸(Trp，W)和酪氨酸(Tyr，Y)等天然氨基酸以及诸如4-羟基脯氨酸、N,N,N-三甲基赖氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N-乙酰基赖氨酸、ω-N-甲基精氨酸、瓜氨酸或鸟氨酸等氨基酸衍生物作为氨基酸(AS、AS1、AS2、......AS19、AS20)。
除L-氨基酸外，肽或肽衍生物中也可使用D-氨基酸以及L-氨基酸和D-氨基酸的组合。
术语“氨基酸”不仅包括天然氨基酸或其衍生物，而且包括具有至少一个氨基官能团或至少一个铵官能团或至少一个羧酸官能团或至少一个甲酸酯官能团的通用化合物。所述化合物应或必须能够形成甜菜碱结构和/或应或必须能够形成肽键或相应酰胺键。
因此，术语“氨基酸”也定义具有下式的化合物：
其中
p和q彼此独立地为0、1、2、3、4、5。
L1、L2、L3、L4彼此独立地表示天然氨基酸的侧链残基或残基-R57、-R59、-R60、-R61、-CR62R63R64、-CR65R66-CR67R68R69、-CR70R71-CR72R73-CR74R75R76，其中R57到R76具有以下所说明的含义。在一个实施例中，残基L1到L4表示氢。
在拟肽的情况下，酰胺键(-NH-CO-)优选经不同官能团置换。举例来说，可使酰胺氮烷基化以使拟肽含有以下结构片段：
作为可用作肽主链(peptidicbackground)中的氨基酸组分的氨基酸类似物应命名为例如硫羰基氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸或δ-氨基酸，而非蛋白原性氨基酸通常标记为氨基酸类似物。氨基酸类似物的其它实例为：
此外，拟肽可含有以下形式的氨基酸，其也称为二肽类似物：
其中残基L1和L2彼此独立地具有以上“氨基酸”下所说明的含义。本文中，前述化合物称为二肽类似物，但视为一个氨基酸(AS)。因此，假定二肽类似物视为一个氨基酸而不是两个氨基酸，那么本文中所定义的包含4个氨基酸的残基可包含4个前述二肽类似物而不是仅最多2个所述二肽类似物。
关于天然氨基酸、非天然氨基酸和肽类似物的立体化学和相应关于本发明肽或拟肽的立体化学可为L和D或相应R和S，如此对映异构形式和非对映异构形式和对映异构体和/或非对映异构体的混合物属于本文中所揭示的本发明肽、肽衍生物和拟肽的定义范围内。
优选本发明肽以及使用以下本发明肽作为转谷氨酰胺酶抑制剂，其中肽或拟肽为具有以下通式(I)、(II)或(III)的化合物：
其中
MS为接受体取代烯烃，优选具有以下结构的迈克尔系统：
且
E表示以下基团：-CH2-、-CF2-、-C2H4-、-CH2-CF2-、-CF2-CH2-、-CH＝CH-、-CH(OH)-CH2-、-C(＝O)-CH2-、-CH2-NH-、-CH2-O-、-CH(OH)-CH2-NH-、-P(＝O)(OH)-NH-、-P(＝O)(OH)-O-、-P(＝O)(OH)-S-、-P(＝O)(OH)-CH2-、-CH(OH)-CH2-NH-、-C(＝O)-NH-、-C(＝O)-O-或-C(＝O)-NX”-；
Q和Q'彼此独立地表示天然氨基酸的侧链残基或Q连同X'一起形成丙烯基残基或Q'连同X”一起形成丙烯基残基；
Y表示羟基、氨基、C1-C6烷基氨基、C1-C6二烷基氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤素烷基、C3-C10杂芳基或C6-C15芳基；或Y表示具有至多6个氨基酸且经由酰胺键结合的肽残基，这一肽残基的C-末端羰基官能团带有羟基、氨基、C1-C6烷基氨基、C1-C6二烷基氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤素烷基、C3-C10杂芳基或C6-C15芳基；或Y表示具有至多60个碳原子、优选至多30个碳原子的拟肽残基；且
X”表示氢或C1-C6烷基；且
-NXX’为氨基、-NH-CHO、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环或C3-C5氮杂芳基；或基团-NXX’为包含至多60个碳原子、优选至多30个碳原子的拟肽残基的一部分；
或
X’表示氢或C1-C6烷基；且
X表示具有至多6个氨基酸且经由酰胺键结合的肽残基，这一肽残基的N-末端带有氨基、-NH-CHO、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环或C3-C5氮杂芳基；
其中C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环以及C3-C5氮杂芳基中的任一个都可独立地经至多5个选自R80、R81、R82、R83、R84的残基取代。
残基R1到R84以及残基L1、L2、L3、L4彼此独立地表示以下基团：
-H、-OH、-OCH3、-OC2H5、-OC3H7、-O-环-C3H5、-OCH(CH3)2、-OC(CH3)3、-OC4H9、-OPh、-OCH2-Ph、-OCPh3、-SH、-SCH3、-SC2H5、-SC3H7、-S-环-C3H5、-SCH(CH3)2、-SC(CH3)3、-NO2、-F、-Cl、-Br、-I、-N3、-CN、-OCN、-NCO、-SCN、-NCS、-CHO、-COCH3、-COC2H5、-COC3H7、-CO-环-C3H5、-COCH(CH3)2、-COC(CH3)3、-COOH、-COCN、-COOCH3、-COOC2H5、-COOC3H7、-COO-环-C3H5、-COOCH(CH3)2、-COOC(CH3)3、-OOC-CH3、-OOC-C2H5、-OOC-C3H7、-OOC-环-C3H5、-OOC-CH(CH3)2、-OOC-C(CH3)3、-CONH2、-CONHCH3、-CONHC2H5、-CONHC3H7、-CONH-环-C3H5、-CONH[CH(CH3)2]、-CONH[C(CH3)3]、-CON(CH3)2、-CON(C2H5)2、-CON(C3H7)2、-CON(环-C3H5)2、-CON[CH(CH3)2]2、-CON[C(CH3)3]2、-NHCOCH3、-NHCOC2H5、-NHCOC3H7、-NHCO-环-C3H5、-NHCO-CH(CH3)2、-NHCO-C(CH3)3、-NHCO-OCH3、-NHCO-OC2H5、-NHCO-OC3H7、-NHCO-O-环-C3H5、-NHCO-OCH(CH3)2、-NHCO-OC(CH3)3、-NH2、-NHCH3、-NHC2H5、-NHC3H7、-NH-环-C3H5、-NHCH(CH3)2、-NHC(CH3)3、-N(CH3)2、-N(C2H5)2、-N(C3H7)2、-N(环-C3H5)2、-N[CH(CH3)2]2、-N[C(CH3)3]2、-SOCH3、-SOC2H5、-SOC3H7、-SO-环-C3H5、-SOCH(CH3)2、-SOC(CH3)3、-SO2CH3、-SO2C2H5、-SO2C3H7、-SO2-环-C3H5、-SO2CH(CH3)2、-SO2C(CH3)3、-SO3H、-SO3CH3、-SO3C2H5、-SO3C3H7、-SO3-环-C3H5、-SO3CH(CH3)2、-SO3C(CH3)3、-OCF3、-OC2F5、-O-COOCH3、-O-COOC2H5、-O-COOC3H7、-O-COO-环-C3H5、-O-COOCH(CH3)2、-O-COOC(CH3)3、-NH-CO-NH2、-NH-CO-NHCH3、-NH-CO-NHC2H5、-NH-CO-NHC3H7、-NH-CO-NH-环-C3H5、-NH-CO-NH[CH(CH3)2]、-NH-CO-NH[C(CH3)3]、-NH-CO-N(CH3)2、-NH-CO-N(C2H5)2、-NH-CO-N(C3H7)2、-NH-CO-N(环-C3H5)2、-NH-CO-N[CH(CH3)2]2、-NH-CO-N[C(CH3)3]2、-NH-CS-NH2、-NH-CS-NHCH3、-NH-CS-NHC2H5、-NH-CS-NHC3H7、-NH-CS-NH-环-C3H5、-NH-CS-NH[CH(CH3)2]、-NH-CS-NH[C(CH3)3]、-NH-CS-N(CH3)2、-NH-CS-N(C2H5)2、-NH-CS-N(C3H7)2、-NH-CS-N(环-C3H5)2、NH-CS-N[CH(CH3)2]2、-NH-CS-N[C(CH3)3]2、-NH-C(＝NH)-NH2、-NH-C(＝NH)-NHCH3、-NH-C(＝NH)-NHC2H5、-NH-C(＝NH)-NHC3H7、-OC6H4-OCH3、-NH-C(＝NH)-NH-环-C3H5、-NH-C(＝NH)-NH[CH(CH3)2]、-CF2Cl、-NH-C(＝NH)-NH[C(CH3)3]、-NH-C(＝NH)-N(CH3)2、-NH-C(＝NH)-N(C2H5)2、-NH-C(＝NH)-N(C3H7)2、-NH-C(＝NH)-N(环-C3H5)2、-OC6H4-CH3、-NH-C(＝NH)-N[CH(CH3)2]2、-NH-C(＝NH)-N[C(CH3)3]2、-O-CO-NH2、-O-CO-NHCH3、-O-CO-NHC2H5、-O-CO-NHC3H7、-O-CO-NH-环-C3H5、-O-CO-NH[CH(CH3)2]、-O-CO-NH[C(CH3)3]、-O-CO-N(CH3)2、-O-CO-N(C2H5)2、-O-CO-N(C3H7)2、-O-CO-N(环-C3H5)2、-O-CO-N[CH(CH3)2]2、-O-CO-N[C(CH3)3]2、-O-CO-OCH3、-O-CO-OC2H5、-O-CO-OC3H7、-O-CO-O-环-C3H5、-O-CO-OCH(CH3)2、-O-CO-OC(CH3)3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2Cl、-CH2Br、-CH2I、-CH2-CH2F、-CH2-CHF2、-CH2-CF3、-CH2-CH2Cl、-CH2-CH2Br、-CH2-CH2I、环-C3H5、环-C4H7、环-C5H9、环-C6H11、环-C7H13、环-C8H15、-Ph、-CH2-Ph、-CPh3、-CH3、-C2H5、-C3H7、-CH(CH3)2、-C4H9、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-C(CH3)3、-C5H11、-CH(CH3)-C3H7、-CH2-CH(CH3)-C2H5、-CH(CH3)-CH(CH3)2、-C(CH3)2-C2H5、-CH2-C(CH3)3、-CH(C2H5)2、-C2H4-CH(CH3)2、C6H13、-C3H6-CH(CH3)2、-C2H4-CH(CH3)-C2H5、-CH(CH3)-C4H9、CH2-CH(CH3)-C3H7、-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-CH(CH3)-C2H5、-CH2-CH(CH3)-CH(CH3)2、-CH2-C(CH3)2-C2H5、-C(CH3)2-C3H7、-C(CH3)2-CH(CH3)2、-C2H4-C(CH3)3、-CH(CH3)-C(CH3)3、-CH＝CH2、-CH2-CH＝CH2、-C(CH3)＝CH2、-CH＝CH-CH3、-C2H4-CH＝CH2、-C7H15、-C8H17、-CH2-CH＝CH-CH3、-CH＝CH-C2H5、-CH2-C(CH3)＝CH2、-CH(CH3)-CH＝CH、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝CH-CH3、-CH＝CH-CH＝CH2、-C3H6-CH＝CH2、-C2H4-CH＝CH-CH3、-CH2-CH＝CH-C2H5、-CH＝CH-C3H7、-CH2-CH＝CH-CH＝CH2、-CH＝CH-CH＝CH-CH3、-CH＝CH-CH2-CH＝CH2、-C(CH3)＝CH-CH＝CH2、-CH＝C(CH3)-CH＝CH2、-CH＝CH-C(CH3)＝CH2、-C2H4-C(CH3)＝CH2、-CH2-CH(CH3)-CH＝CH2、-CH(CH3)-CH2-CH＝CH2、-CH2-CH＝C(CH3)2、-CH2-C(CH3)＝CH-CH3、-CH(CH3)-CH＝CH-CH3、-CH＝CH-CH(CH3)2、-CH＝C(CH3)-C2H5、-C(CH3)＝CH-C2H5、-C(CH3)＝C(CH3)2、-C(CH3)2-CH＝CH2、-CH(CH3)-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝CH-CH＝CH2、-CH＝C(CH3)-CH＝CH2、-CH＝CH-C(CH3)＝CH2、-C4H8-CH＝CH2、-C3H6-CH＝CH-CH3、-C2H4-CH＝CH-C2H5、-CH2-CH＝CH-C3H7、-CH＝CH-C4H9、-C3H6-C(CH3)＝CH2、-CH2-CH2-CH2-OCH3、-C2H4-CH(CH3)-CH＝CH2、-CH2-CH(CH3)-CH2-CH＝CH2、-CH2NH2、-CH(CH3)-C2H4-CH＝CH2、-C2H4-CH＝C(CH3)2、-C2H4-C(CH3)＝CH-CH3、-CH2-CH(CH3)-CH＝CH-CH3、-CH(CH3)-CH2-CH＝CH-CH3、-CH2OH、-CH2SH、-CH2-CH＝CH-CH(CH3)2、-CH2-CH＝C(CH3)-C2H5、-CH2-CH2-CH2NH2、-CH2-C(CH3)＝CH-C2H5、-CH(CH3)-CH＝CH-C2H5、-CH2-CH2NH2、-CH＝CH-CH2-CH(CH3)2、-CH＝CH-CH(CH3)-C2H5、-CH＝C(CH3)-C3H7、-C(CH3)＝CH-C3H7、-CH2-CH(CH3)-C(CH3)＝CH2、-CH2-CH2SH、-CH(CH3)-CH2-C(CH3)＝CH2、-CH(CH3)-CH(CH3)-CH＝CH2、-CH2-CH2-CH2OH、-CH2-C(CH3)2-CH＝CH2、-C(CH3)2-CH2-CH＝CH2、-CH2-C(CH3)＝C(CH3)2、-CH(CH3)-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)2-CH＝CH-CH3、-CH2-CH2-CH2SH、-CH(CH3)-C(CH3)＝CH-CH3、-CH＝C(CH3)-CH(CH3)2、-C(CH3)＝CH-CH(CH3)2、-C(CH3)＝C(CH3)-C2H5、-CH＝CH-C(CH3)3、-C(CH3)2-C(CH3)＝CH2、-CH(C2H5)-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)(C2H5)-CH＝CH2、-CH(CH3)-C(C2H5)＝CH2、-CH2-C(C3H7)＝CH2、-CH2-C(C2H5)＝CH-CH3、-CH(C2H5)-CH＝CH-CH3、-C(C4H9)＝CH2、-C(C3H7)＝CH-CH3、-C(C2H5)＝CH-C2H5、-C(C2H5)＝C(CH3)2、-C[C(CH3)3]＝CH2、-C[CH(CH3)(C2H5)]＝CH2、-C[CH2-CH(CH3)2]＝CH2、-C2H4-CH＝CH-CH＝CH2、-C6H4-OCH3、-CH2-CH＝CH-CH2-CH＝CH2、-CH＝CH-C2H4-CH＝CH2、-C6H4-OH、-CH2-CH＝CH-CH＝CH-CH3、-CH＝CH-CH2-CH＝CH-CH3、-CH2-CH2-OCH3、-CH＝CH-CH＝CH-C2H5、-CH2-CH＝CH-C(CH3)＝CH2、-CH2-CH2OH、-CH2-CH＝C(CH3)-CH＝CH2、-CH2-C(CH3)＝CH-CH＝CH2、-CH2-OCH3、-CH(CH3)-CH＝CH-CH＝CH2、-CH＝CH-CH2-C(CH3)＝CH2、-CH＝CH-CH(CH3)-CH＝CH2、
-CH＝C(CH3)-CH2-CH＝CH2、-C(CH3)＝CH-CH2-CH＝CH2、-CH＝CH-CH＝C(CH3)2、-CH2-C6H4-OCH3、-CH＝CH-C(CH3)＝CH-CH3、-CH＝C(CH3)-CH＝CH-CH3、-CH2-C6H4-OH、-C(CH3)＝CH-CH＝CH-CH3、-CH＝C(CH3)-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝CH-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝C(CH3)-CH＝CH2、-CH＝CH-CH＝CH-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡C-CH3、-CH2-C≡CH、-C2H4-C≡CH、-CH2-C≡C-CH3、-C≡C-C2H5、-C3H6-C≡CH、-C2H4-C≡C-CH3、-CH2-C≡C-C2H5、-C≡C-C3H7、-CH(CH3)-C≡CH、-CH2-CH(CH3)-C≡CH、-CH(CH3)-CH2-C≡CH、-CH(CH3)-C≡C-CH3、-C4H8-C≡CH、-C3H6-C≡C-CH3、-C2H4-C≡C-C2H5、-CH2-C≡C-C3H7、-C≡C-C4H9、-C≡C-C(CH3)3、-C2H4-CH(CH3)-C≡CH、-CH2-CH(CH3)-CH2-C≡CH、-CH2-C≡C-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H4-C≡CH、-CH2-CH(CH3)-C≡C-CH3、-CH(CH3)-CH2-C≡C-CH3、-CH(CH3)-C≡C-C2H5、-C≡C-CH(CH3)-C2H5、-C≡C-CH2-CH(CH3)2、-CH(C2H5)-C≡C-CH3、-C(CH3)2-C≡C-CH3、-CH(C2H5)-CH2-C≡CH、-CH2-CH(C2H5)-C≡CH、-C(CH3)2-CH2-C≡CH、-CH2-C(CH3)2-C≡CH、-CH(CH3)-CH(CH3)-C≡CH、-CH(C3H7)-C≡CH、-C(CH3)(C2H5)-C≡CH、-C≡C-C≡CH、-CH2-C≡C-C≡CH、-C≡C-C≡C-CH3、-CH(C≡CH)2、-C2H4-C≡C-C≡CH、-CH2-C≡C-CH2-C≡CH、-C≡C-C2H4-C≡CH、-CH2-C≡C-C≡C-CH3、-C≡C-CH2-C≡C-CH3、-C≡C-C≡C-C2H5、-CH(CH3)-C≡C-C≡CH、-C(C≡CH)2-CH3，
以及前述化合物的立体异构形式、E/Z异构体、对映异构体、对映异构混合物、非对映异构体、非对映异构混合物、外消旋体、互变异构体、端基异构体(anomer)、酮-烯醇形式、甜菜碱形式、前药、溶剂化物、水合物和药理学上可接受的盐。
关于其中X和X'表示氢且Y表示羟基的通式(I)化合物不要求绝对的物质保护。
特别对残基R1、R2、R3、R4来说，优选为没有一个残基或一个、两个、三个或所有四个残基表示氟且其余残基表示氢的情形。
其中m＝0的本发明化合物可通过使保护基(PG1和PG2)在C-末端和N-末端处连接于氨基酸Glu(谷氨酸)(1)，然后将侧链的羧基官能团还原成醛(2)以及将所得醛转化为接受体取代亲电子双键(3)来制备。此后，去除保护基且必要时(任选)，用肽片段或拟肽延长N-末端(4)。C-末端羰基官能团活化后，也可任选用肽片段或拟肽延长C-末端(5)。合成的有序过程描绘于以下流程中：
或者，首先可使主链成形且然后在谷氨酸侧链处产生接受体取代亲电子双键。为达到这一目的，制备C-末端和N-末端处受保护的肽或拟肽(1)，将谷氨酸的侧链羧基官能团还原成醛(2)以及将所得醛转化为接受体取代亲电子双键(3)。最后，可去除保护基。
肽合成
其中m＝1的本发明化合物可通过使保护基(PG1和PG2)在C-末端和N-末端处连接于氨基酸Glu(谷氨酸)(1)，然后将侧链的羧基官能团转化成酮基(2)以及将所得酮基的末端羰基官能团转化为接受体取代亲电子双键(3)来制备。此后，去除保护基且必要时(任选)，用肽片段或拟肽延长N-末端(4)。C-末端羰基官能团活化后，也可任选用肽片段或拟肽延长C-末端(5)。合成的有序过程描绘于以下流程中：
或者，首先可使主链成形且然后在谷氨酸侧链处产生接受体取代亲电子双键。为达到这一目的，制备C-末端和N-末端处受保护的肽或拟肽(1)，将谷氨酸的侧链的羧基官能团转化为二酮基(2)以及将所得二酮基的末端羰基官能团转化为接受体取代亲电子双键(3)。最后，可去除保护基。
肽合成
术语“前药”描述含有根据通式(I)、(II)、(III)、[A]或[B]化合物的活性成分的前体且进一步包含可在生理条件下裂解的基团或在生理条件下释放根据通式(I)、(II)、(III)、[A]或[B]的化合物。
优选的接受体取代烯烃特别为具有至少一个共轭双键和一个羰基官能团的迈克尔系统且特别为所述选自以上所提及的迈克尔系统类型的迈克尔系统。
根据本发明优选的其它接受体取代烯烃(MS)具有以下结构：
能够共轭的亚砜、砜、磺酸、酯、酰胺和膦酸酯基团可与优选烷基、芳基和烷芳基残基的任何其它残基连接。在上述化学结构中包括氢的其它残基的存在由硫、氮和氧原子处的连续键(continuingbond)说明。
拟肽残基可含有诸如S、N、O、P等杂原子以及选自R1到R84的清单的杂环、碳环、芳香族化合物、杂芳香族化合物和官能团，且可由至多80个、优选至多60个、进一步优选至多50个且特别优选至多40个碳原子组成。
特别优选为基团L1-L4、R6-R76和Q、Q'、Q”、Q”'、Q””彼此独立地表示天然氨基酸或由其衍生的衍生物的侧链。
所述特别优选的侧链为：-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-CH2-CH3、-CH2-CH2-S-CH3、-CH2-CH2-CH2-(脯氨酸链)、-CH2-Ph、-CH2-OH、-CH(OH)-CH3、-CH2-CO-NH2、-CH2-CH2-CO-NH2、-CH2-SH、-CH2-CH2-CH2-CH2-NH2、-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝NH)-NH2、-CH2-COOH、-CH2-CH2-COOH、
本发明肽或拟肽具有通式(I)、(II)或(III)：
其中
式(I)包含至少一个带有迈克尔接受体系统或相应接受体取代双键(MS)的氨基酸。残基Y可包含具有1到6个氨基酸或氨基酸类似物、优选1到4个、进一步优选1到3个且特别优选1到2个氨基酸或氨基酸类似物的氨基酸链(肽残基)。上述二肽类似物也称为氨基酸类似物。如果使用至少一个氨基酸类似物或氨基酸衍生物，那么获得可包含2到40个碳原子、优选3到30个、进一步优选4到25个且特别优选5到20个碳原子的拟肽残基Y。另一方面，Y也可表示如上所定义的羟基、氨基、C1-C6烷基氨基、C1-C6二烷基氨基、C1-C6烷氧基、C6-C19芳烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤素烷基、C3-C10杂芳基或C6-C15芳基且优选C1-C4烷氧基。
C6-C19芳氧基优选由以下残基表示：-Ph、-CL5L6-Ph，其中L5和L6可独立地选自-H、-CH3、-C2H5、-C3H7、-CH(CH3)2、-C4H9、-Ph和-CH2-Ph。
如果Y表示肽残基，那么所述肽残基的C-末端也可带有前述基团中的一个。
如前所描述，本文中所使用的术语“氨基酸”不仅包含天然氨基酸而且包含天然氨基酸的衍生物和诸如上述二肽类似物等氨基酸类似物。
具体来说，侧链已经修饰的天然氨基酸和具有诸如烯丙基或丙炔基侧链等非天然侧链的氨基酸称为氨基酸衍生物或氨基酸类似物。经修饰侧链的其它实例为-CH2-CH2-S-(C2-C6烷基)；-CH2-S-(C1-C6烷基)；由-CH2-CH2链或-CH2-CH2-CH2-CH2链取代环状脯氨酸-CH2-CH2-CH2链；由一个或一个以上亲核试剂在苯丙氨酸的苯基残基处加以取代；使酪氨酸、苏氨酸和丝氨酸的羟基醚化或酯化以形成-CH2-O-(C1-C6烷基)、-CH2-O-CO-(C1-C6烷基)、-CH2-O-CO-O-(C1-C6烷基)、-CH2-O-CO-NH-(C1-C6烷基)、-CH(CH3)-O-(C1-C6烷基)、-CH(CH3)-O-CO-(C1-C6烷基)、-CH(CH3)-O-CO-O-(C1-C6烷基)、-CH(CH3)-O-CO-NH-(C1-C6烷基)、邻、间或对CH2-C6H4-O-(C1-C6烷基)、邻、间或对CH2-C6H4-O-CO-(C1-C6烷基)、邻、间或对CH2-C6H4-O-CO-O-(C1-C6烷基)、邻、间或对CH2-C6H4-O-CO-NH-(C1-C6烷基)；在组氨酸的咪唑环处取代；取代色氨酸的苯环或在色氨酸的杂环处加成；使天冬酰胺或谷氨酰胺还原成-CH2-CH2-NH2、-CH2-CH2-CH2-NH2；使天冬酰胺或谷氨酰胺衍生为-CH2-CO-NH(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CO-NH(C1-C6烷基)、-CH2-CO-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CO-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)；使赖氨酸衍生为-CH2-CH2-CH2-CH2-NH(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-CH2-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CO-(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CO-O-(C1-C6烷基)；使精氨酸衍生为-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝NH)-NH(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝NH)-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝O)-NH2、-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝O)-NH(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝O)-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-NH2；或使胍基环化为咪唑；使天冬氨酸或谷氨酸酯化或还原成-CH2-CH2-OH、-CH2-CH2-CH2-OH、-CH2-CH2-O-(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-O-(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-O-CO-(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-O-CO-(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-O-CO-NH(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-O-CO-NH(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-O-CO-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-CH2-O-CO-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-CH2-COO(C1-C6烷基)、-CH2-CH2-COO(C1-C6烷基)。
表示本发明化合物的C-末端的基团Y的类似事实对表示本发明化合物的N-末端的基团-NXX'来说也成立。
基团X、X’、X”、X”’和X””可表示氢原子或C1-C6烷基，且基团-NXX’可表示氨基、C1-C10烷基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环或C3-C5氮杂芳基，其中残基具有以上所定义的含义且包含关于例如C1-C6烷基残基的定义。优选残基C7为庚基残基，优选残基C8为辛基残基，优选残基C9为壬基残基且优选残基C10为癸基残基，其中其它烷基残基以及环烷基残基和支链烷基残基也是可能的残基。
基团-NXX'优选表示诸如乙酰基酰胺、苯甲酸酰胺或带有杂环的羧酸等酰胺和氨基保护基。X'此外可表示诸如苯甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、环戊氧基羰基、乙基硫基羰基、异丙基硫基羰基、苯甲基硫基羰基、甲基硫基羰基、乙基硫基羰基、异丙基羰基、环丙基羰基、2-吡啶基硫基甲基羰基、羟基乙基羰基、噻吩-3-羰基、异噁唑-5-羰基或烟酸残基等残基。
此外，优选为X代表以下残基的情况：
如果基团-NXX'是氮杂环，那么优选以下氮杂环：
已令人惊讶地发现当基团-NXX'处于紧邻接迈克尔系统处时，即当氨基(-NXX')和产生亲电子双键的亚乙基连接子结合于氨基酸或氨基酸类似物的同一碳原子时，基团-NXX'不应为未经取代氨基(-NH2)。如果亚乙基连接子和氨基-NXX'位于同一碳原子上，那么残基X和X'中的至少有一个应不为氢且优选表示诸如以上关于X所示的烷基或酰基。
此外，基团-NXX'可为包含2到30个碳原子、优选2到40个、进一步优选3到30个、更进一步优选4到25个且特别优选5到20个碳原子的拟肽残基的一部分。此外，X可表示具有1到6个氨基酸或氨基酸类似物键、优选1到4个、进一步优选1到3个且特别优选1到2个氨基酸或氨基酸类似物的肽残基，所述残基经由酰胺键结合，其中所述肽残基或拟肽残基的N-末端可带有氨基、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环或C3-C5氮杂芳基，其中C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环和C3-C5氮杂芳基可独立地经至多5个选自如以上所定义的R80、R81、R82、R83、R84的残基取代。
如果Y和X表示肽残基或拟肽残基，那么优选为X和Y中所含的氨基酸的总数为1到5且进一步优选数目为1到4，同时特别优选数目为2到3。
下式是本发明化合物的其他优选通式：
其中MS、E、Q、Q'、X和Y具有本文中所揭示的含义。
在一特定实施例中，侧链残基Q或Q'、Q”、Q”'和/或Q””相应连同邻接氮原子一起形成吡咯烷环，如此本发明化合物中存在至少一个氨基酸脯氨酸或脯氨酸衍生物或脯氨酸模拟物。也有可能根据本发明的化合物中存在两个、三个、四个或四个以上脯氨酸氨基酸，其中优选为一个脯氨酸氨基酸。
特别优选三肽和四肽，如此本申请案优选还涉及通式(IV)肽和由其衍生的四肽。
其中
MS为如本文中所述的接受体取代烯烃且MS优选为具有至少一个共轭双键和如本文中所述的羰基官能团的迈克尔系统；
Q、Q'和Q”彼此独立地表示天然氨基酸的侧链残基；或Q连同X”一起形成丙烯基残基；或Q'连同X”'一起形成丙烯基残基；或Q”连同X””一起形成丙烯基残基；
Y表示羟基、氨基、C1-C6烷基氨基、C1-C6二烷基氨基、C1-C6烷氧基、C6-C19芳氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤素烷基、C3-C10杂芳基或C6-C15芳基；或Y表示具有至多6个氨基酸且经由酰胺键结合的肽残基，所述肽残基的C-末端羰基官能团带有羟基、氨基、C1-C6烷基氨基、C1-C6二烷基氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤素烷基、C3-C10杂芳基或C6-C15芳基；或Y表示具有至多60个碳原子、优选至多30个碳原子的拟肽残基；且
X”、X”’、X””彼此独立地表示氢或C1-C6烷基；且
-NXX’为氨基、-NH-CHO、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环或C3-C5氮杂芳基或基团-NXX’为具有至多60个碳原子、优选至多30个碳原子的拟肽残基的一部分；
或
X’表示氢或C1-C6烷基；且
X表示具有至多6个氨基酸且经由酰胺键结合的肽残基，所述肽残基的N-末端带有氨基、-NH-CHO、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环或C3-C5氮杂芳基，
其中C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C10烷基氨基、C1-C8烷氧基羰基氨基、C6-C12芳烷氧基羰基氨基、C1-C10二烷基氨基、C2-C6氮杂环以及C3-C5氮杂芳基中的任何一个可独立地经至多5个选自R80、R81、R82、R83、R84的残基取代，
其中残基R80、R81、R82、R83、R84彼此独立地具有以上含义。
在X和Y都不表示肽残基或氨基酸残基(包含氨基酸类似物和拟肽残基)的情况下，式(IV)产生具有优选结构的四肽。
根据式(IV)，仅存在所述接受体取代烯烃(MS)或仅存在相应所述迈克尔系统(MS)，其位于本发明化合物的N-末端处的末端位置。同样可存在两个、三个或四个相同或不同的接受体取代烯烃或相应迈克尔接受体系统。另外，接受体取代烯烃或相应迈克尔系统可位于任何氨基酸处，如由以下通式IVA-IVD可见：
侧链Q连同残基X”、结合于X”的氮和结合于Q的碳一起可形成吡咯烷环，如此根据本发明的化合物含有脯氨酸氨基酸。
类似地，侧链Q'连同基团X”'和结合于X”'的氮和结合于Q'的碳一起可形成吡咯烷环。
侧链Q”连同残基X””、结合于X””的氮和结合于Q”的碳一起可形成吡咯烷环，正如Q”'可与结合于Q”'的手性碳原子和基团X和结合于X的氧原子一起形成杂环基残基一样。
此使得形成具有脯氨酸氨基酸的以下四肽VA到VD：
此外，特别优选通式(V)的四肽：
其中
MS、Q、Q’、X、X’和Y具有本文中所述的含义。
特别优选具有以下结构的迈克尔系统(MS)：
其中Z和Z'具有本文中所揭示的含义。
其它优选结构：
此外，优选为肽、肽衍生物或拟肽含有氨基酸谷氨酰胺、脯氨酸、缬氨酸和/或亮氨酸，且具体来说序列脯氨酸-亮氨酸。
优选具有通式VE到VM的以下亚结构：
优选，Y为羟基、C1-C6烷氧基或C6-C19芳氧基。优选，X'为氢且X为苯基或烷氧基羰基。特别优选具有式VN和VO的化合物以及化合物1和2：
化合物1
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯
化合物7
Nα-乙酰基-L-天冬酰胺酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酸甲酯
提及如下其它本发明化合物：
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物2)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酸甲酯(化合物3)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酸甲酯(化合物4)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-异戊基酰胺(化合物5)；
[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸-1-乙酰基]-L-缬氨酰基-L-脯氨酸甲酯(化合物6)；
Nα-乙酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-脯氨酰基-甘氨酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-丝氨酰基-L-亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯(化合物8)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸-甲酯(化合物9)；
Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-谷氨酰基-L-丙氨酸甲酯(化合物10)；
Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-谷氨酰基甲酯(化合物11)；
Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯二甲酸]-1-甲酰基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物12)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯二甲酸]-1-甲酰基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物13)；
Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-(对氟)-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物14)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-(对氟)-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物15)；
[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸1-乙酰基]-L-缬氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物16)；
[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸-1-乙酰基]-L-环己基甘氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物17)；
[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸-1-乙酰基]-L-环己基甘氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物18)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酸-L-酪氨酸甲酯(化合物19)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物20)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-亮氨酰基-L-脯氨酰基-L-谷氨酰胺甲酯(化合物21)；
Nα-乙酰基-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物22)；
Nα-(5-甲基异噁唑-3-羰基)-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-异丙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(化合物23)；
Nα-(2-氟苯甲酰基)-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-缬氨酰基-L-4-氟脯氨酰基-亮氨酸异丙酯(化合物24)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物25)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-甘氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物26)；
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物27)；
Nα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物28)；
Nα-噻吩-2-羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物29)；
Nα-呋喃-3-羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物30)；
Nα-异噁唑-5-羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物31)；
Nα-(5-甲基-异噁唑-3-羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物33)；
Nα-(反-3-(3-噻吩基)丙烯酰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物34)；
Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物35)；
Nα-(4-三氟甲氧基-苯磺酰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物36)；
Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-环己基甘氨酸-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物37)；
Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物38)；
(E)-(S)-6-苯甲氧基羰基氨基-6-[3-((R)-2-苯基氨甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-苯基氨甲酰基]-己-2-烯酸乙酯(化合物39)；
(E)-(S)-6-苯甲氧基羰基氨基-6-{1-[(S)-3-羧基-1-(3-甲基-丁基氨甲酰基)-丙基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基氨甲酰基}-己-2-烯酰酸异丙酯(化合物40)；
Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-2-氨基-6-甲烷磺酰基]-己-5-烯基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.1)；
Nα-苯甲氧基羰基)-[(E)-(L)-2-氨基-6-二甲基氨磺酰基)-己-5-烯基]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.2)；
Nα-苯甲氧基羰基)-[(L)-2-氨基-4-(3-氧代-环戊-1-烯基]-丁酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.3)；
Nα-苯甲氧基羰基)-[(L)-2-氨基-5-(2-氧代-亚二氢呋喃-(3E)-基)]-戊酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.4)；
Nα-苯甲氧基羰基)-[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.5)；
Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-戊基酰胺基}-L-谷氨酰胺酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸甲酯(化合物3.2.6)；
Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-异丙酰基}-L-(对氟-苯丙氨酰基)-L-脯氨酸(化合物3.2.7)；
Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-苯甲酰基}-L-苯丙氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酰基酰胺(化合物3.2.8)；
Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-7-氨基-2-氧代-辛-3-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酸甲酯(化合物3.2.9)；
Nα-苯甲氧基羰基)-[(Z)-(L)-2-氨基-7-氧代-辛-5-烯-二甲酸]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.10)；
Nα-苯甲氧基羰基)-[(Z)-(L)-2-氨基-6-氰基-己-5-烯-二甲酸]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.11)；
Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-(八氢吲哚-2-羧基)-L-亮氨酰基酰胺(化合物4.1)；
Nα-(哌啶基-4-羰基)-{[(E)-(L)-2-氨基-6-苯基磺酰基]-己-5-烯基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-1-环戊基甲基-2-氧代-2-(1H-四唑-5-基)-乙基酰胺(化合物4.2)；
Nα-苯甲氧基羰基)-[(E)-(L)-2-氨基-6-苯甲氧基磺酰基-己-5-烯基]-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基苯甲基磺酰胺(化合物4.3)；
(E)-(S)-6-[(S)-1-((S)-2-乙基氨甲酰基吡咯烷-1-羰基)-2-甲基-丙基氨甲酰基]-6-(2-哌啶-4-基-乙基氨基)-己-2-烯-甲酸异丙酯(化合物5.1)；
(S)-2-[((S)-1-{(E)-2R,5S)-2-(4-氟苯甲基)-9-甲烷磺酰基-5-[(5-甲基-异噁唑-3-羰基)-氨基]-4-氧代-壬-8-烯酰基}吡咯烷-2-羰基)-氨基]-4-甲基-戊酸甲酯(化合物5.3.b)；
(E)-(6R,9S)-9-苯甲氧基羰基氨基-6-[2-(2-乙基氨甲酰基-八氢吲哚-1-基)-1-甲基-2-氧代乙基氨甲酰基]-8-氧代-10-苯基-癸-2-烯酸异丙酯(化合物5.4)；
哌啶-4-羰基-((E)-(S)-5-苯甲基磺酰基-1-{2-[2-((S)-2-苯甲基磺酰基氨基羰基-八氢吲哚-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-乙酰基}-4-烯基)酰胺(化合物5.6)；
(E)-5-(N’-乙酰基-N-羧基-肼基)-[戊-2-烯酰基)-1-乙酰基]-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物5.7)；
具有由共轭双键和羰基官能团形成的至少一个接受体取代烯烃或相应至少一个迈克尔系统的本文中所述的化合物以及根据通式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物特别适用于治疗和预防腹腔病和其它转谷氨酰胺酶相关疾病。
腹腔病也称为乳糜泻、非热带或地方性腹泻、谷蛋白敏感肠病、谷蛋白不耐受或肠性幼稚型。腹腔病以导致小肠粘膜慢性炎症的“谷蛋白”不耐受为特征。
谷蛋白是醇溶谷蛋白(prolamin)和麦谷蛋白(gluenin)的混合物且存在于许多诸如小麦、保加(bulgur)(小麦品种)、斯卑尔脱(spelt)(小麦品种)、一粒(einkorn)(小麦品种)、二粒(emmer)(小麦品种)、卡姆(kamut)(小麦品种)、大麦、格鲁克恩(Grünkern)(未成熟的斯卑尔脱谷物)、燕麦、裸麦、黑小麦(小麦与裸麦之间的杂交物)等谷类中。谷类的所述类型包括约7-15％含量的蛋白质，其中约90％的蛋白质是谷蛋白。在小麦的情况下，醇溶谷蛋白称为麦醇溶蛋白(gliadin)；且在裸麦的情况下，称为裸麦醇溶蛋白(secalin)；在大麦的情况下，称为大麦醇溶蛋白(hordein)；且在燕麦的情况下，称为燕麦蛋白(avenin)。
与转谷氨酰胺酶相关的其它疾病为诸如纤维化、血栓形成、神经退化性疾病、白内障、痤疮、银屑病、皮肤老化和念珠菌病等疾病。
神经退化性疾病的最重要的实例包括亨廷顿病、帕金森病和阿尔茨海默病，其中可由本文中所述的化合物治疗的神经退化性疾病的其它实例还包括半侧帕金森半侧萎缩(hemiparkinson-hemiatrophy)、震颤麻痹综合征、肌萎缩侧索硬化、痴呆、AIDS相关痴呆、老年痴呆、色素性视网膜炎、肌肉萎缩、脊髓性肌萎缩、副肿瘤小脑退化(paraneoplasticcerebellardegeneration，PCD)、小脑萎缩、锥体束外萎缩、共济失调、多发性硬化、母斑病、脆性X相关颤抖/共济失调综合征(fragileX-associatedtremor/ataxiasyndrome，FXTAS)(也称为脆性X综合征)、进行性核上眼神经麻痹症(progressivesupranuclearpalsy，PSP)、纹状体黑质退化(striatonigraldegeneration，SND)、橄榄桥脑小脑退化(olivopontocerebellardegeneration，OPCD)、夏伊-德雷格综合征(ShyDragersyndrome，SDS)、皮质基底退化、路易体性痴呆(Lewybodydementia)、路易体病、特发性体位性低血压(idiopathicorthostatichypotension，IOH)、多系统萎缩、额颞痴呆、利替可-波帝格病(Lytico-Bodigdisease)(帕金森氏症/痴呆/肌萎缩侧索硬化)、进行性苍白球萎缩、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatzdisease)、X连锁肌张力障碍(鲁巴格(Lubag))、伴随纹状体坏死线粒体细胞病、神经棘红细胞症、多动腿综合征、威尔逊病(Wilson'sdisease)和多系统萎缩(multiplesystematrophy，MSA)、多发性神经病、炎症性肠病、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、溃疡性结肠炎、炎症、类风湿性疾病、注意力缺失过动症(Attention-DeficitHyperactivityDisorder，ADHD)。
在很大程度上，本文中所述的化合物具有碱性和酸性特征且大部分以其甜菜碱结构存在。因此，优选使用本文中所述的肽、肽衍生物和拟肽的盐。
因此，对应于本发明的式(I)或[A]化合物可自身投入或以药理学上有效的盐形式投入。因为通式[A]或(I)的化合物可具有碱性特征和酸性特征，所以可由常规方法获得所述化合物的盐。
式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物的盐的合适实例包含酸加成盐、碱金属盐以及与胺形成的盐。因此，可提及诸如钠盐或钾盐、锂盐等碱金属盐或镁盐、钙盐、烷基氨基盐或例如与诸如蛋氨酸、色氨酸、赖氨酸或精氨酸等氨基酸形成的氨基酸盐。以下酸是形成式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物的酸加成盐的酸：硫酸、磺酸、磷酸、硝酸、亚硝酸、高氯酸、氢溴酸、盐酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、乙二酸、葡糖酸(gluconicacid)(葡糖酸(glyconicacid)、右旋糖酸)、乳酸、苹果酸、酒石酸、丙醇二酸(羟基丙二酸(hydroxymalonicacid、hydroxypropanediacid))、富马酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、丙二酸、丁酮二酸、丙酮酸、苯乙酸、(邻、间、对)甲苯甲酸、苯甲酸、对氨基苯甲酸、对羟基苯甲酸、水杨酸、对氨基水杨酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、羟基乙烷磺酸、乙烯磺酸、对甲苯磺酸、奈磺酸、萘胺磺酸、对氨基苯磺酸、樟脑磺酸、奎尼酸(quinicacid)、邻甲基扁桃酸、氢苯磺酸、苦味酸(2,4,6-三硝基苯酚)、己二酸、d-邻甲苯基酒石酸、诸如蛋氨酸、色氨酸、精氨酸等氨基酸且尤其诸如谷氨酸或天冬氨酸等酸性氨基酸。
在本文中所揭示的化合物中，可通过加入碱来制备盐。因此，盐可用诸如NaOH、KOH、NH4OH、四烷基氢氧化铵等无机和有机碱形成。
此外，本发明涉及医药组合物，其包含至少一种根据通式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物和/或其药理学上可接受的盐和至少一种药理学上可接受的载剂、佐剂或至少一种药理学上可接受的溶剂。
医药组合物可以以下形式提供：滴剂、口用喷雾、鼻用喷雾、药丸、片剂、膜片剂、多层片剂、栓剂、凝胶剂、软膏、糖浆、吸入粉剂、颗粒、乳液、分散液、微胶囊、胶囊、粉剂或注射液。
此外，可制备与其它物质的组合制剂，其中一种或一种以上通式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的至少一种化合物的其它活性成分以混合或组合形式投入。优选使用转谷氨酰胺酶阻断剂补充无谷蛋白饮食。显然，可指示补充投入维生素、矿物和微量元素。推荐其中使用例如脯氨酰基内肽酶或其它肽酶的酶制剂投药。此外，也可考虑与消炎剂(类固醇和非类固醇)、T-细胞沉默子或细胞因子或与单克隆抗体或佐珠林(zonulin)的组合。
医药组合物特别用于治疗和预防腹腔病和与转谷氨酰胺酶相关或由转谷氨酰胺酶引起的其它疾病。
此外，通式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物可任选利用基本上无毒的医药学上可接受的载剂、佐剂或稀释剂以其医药学活性盐形式投入。药物以已知方式于合适剂量的常规固体或流体载剂或于合适剂量的稀释剂和常规医药学上可接受的佐剂/赋形剂(expedient)中制备。优选制剂以诸如药丸、片剂、膜片剂、包衣片剂、胶囊、粉剂、沉积物和缓释形式等适于口服的可投入形式提供。
片剂、膜片剂、包衣片剂、明胶胶囊和不透明胶囊是优选的医药调配物。任何医药组合物含有每调配物5mg到500mg、优选10mg到250mg的量且最优选10mg到100mg的量的至少一种通式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物和/或其医药学上可接受的盐。
另外，本发明的目标还包括经口、不经肠、皮肤、真皮内、胃内、皮内、血管内、静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内、阴道内、颊内、透皮、直肠、皮下、舌下、局部、经皮或吸入施用的除典型媒剂和稀释剂外还含有通式[A]、[B]、[C]、[D]、[E]、[F]、(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物和/或其医药学上可接受的盐作为活性组分的医药制剂。
本发明的医药组合物含有本文中所揭示的肽或拟肽中的一种作为活性组分，所述组分通常与就预定投药形式而选择的合适载剂物质混合，所述预定投药形式即根据常规医药实践可经口投入的诸如片剂、胶囊(经固体、半固体或液体填充)、粉剂、可经口投入的凝胶剂、酏剂、可分散颗粒、糖浆、悬浮液等剂型。举例来说，活性成分组分可与任何口服的无毒的医药学上可接受的惰性载剂组合，对于呈片剂或胶囊形式的经口投药来说，所述载剂诸如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露糖醇、乙醇(液体形式)等。此外，需要时，可向混合物中添加合适粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。粉剂和片剂可由按本发明组合物重量约5％到按本发明组合物重量约95％的范围的所述惰性载剂组成。
合适粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖、由玉米制成的甜味剂、诸如阿拉伯胶(acacia)等天然和合成胶、海藻酸钠、羧基甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。用于所述剂型中的可能的润滑剂包括硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜尔胶(guargum)等。需要时，还可包括甜味剂和香料添加剂和防腐剂。一些以上所使用的术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等在下文更详细地论述。
另外，本发明组合物可调配成缓释形式以提供任何一种或一种以上组分或活性组分的控释速率，以求优化治疗作用，即抗组胺活性等。合适缓释剂型包括含有具有不同降解速率的各层或浸渍有活性组分的控释聚合物基质的层状片剂和含有所述浸渍或囊封多孔聚合物基质的片剂或胶囊形式。
呈液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液，诸如不经肠注射用水或水丙二醇溶液，或对于经口溶液、悬浮液和乳液添加甜味剂和遮光剂。
适于吸入的气雾剂制剂可包括可与诸如压缩惰性气体(例如，氮气)等医药学上可接受的载剂组合的溶液和呈粉末形式的固体。
对于栓剂制剂，熔融诸如脂肪酸甘油酯的混合物(例如可可油)等低熔点蜡且通过搅拌或类似混合操作均匀分散其中的活性组分。然后以适当形式倾倒熔融的均匀混合物，冷却且因此硬化。
此外，包括使用之前即刻转化为用于经口或不经肠投药的流体形式制剂的固体形式制剂。所述流体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳液。
此外，本发明化合物可经由经皮施用投入。经皮组合物可具有膏状物、洗剂、气雾剂和/或乳液形式。
术语胶囊是指其中可含有活性成分的包含甲基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉的专用容器或肠衣。硬壳胶囊通常由具有相对较高的凝胶强度的骨和猪皮明胶的混合物制得。胶囊本身可含有少量着色剂、遮光剂、软化剂和防腐剂。
术语片剂描述含有活性组分和合适稀释剂的压缩或浇铸固体剂型。片剂可通过压缩混合物或由湿法造粒、干法成粒或压实获得的颗粒制得，所述方法为所属领域的技术人员所知。
经口凝胶剂是指分散或溶解于亲水性半固体基质中的活性组分。
组合物的粉剂是指含有活性组分和合适稀释剂的粉末混合物，所述混合物可悬浮于水或果汁中。
合适的稀释剂是通常构成组合物或剂型的最大部分的物质。合适的稀释剂包括诸如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇等糖；源自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；和诸如微晶纤维素等纤维素。组合物中的稀释剂的量可在按总组合物重量约5％到约95％范围内，优选构成按重量约25％到约75％且进一步优选按重量约30％到约60％。
术语崩解剂是指加入组合物中以求支持医药物质崩解和释放的物质。合适的崩解剂包括淀粉、诸如羧基甲基淀粉钠等可溶于冷水中的改性淀粉；天然和合成胶，诸如刺槐豆胶、caraya、瓜尔胶、黄芪胶和琼脂；纤维素衍生物诸如甲基纤维素和羧基甲基纤维素钠、微晶纤维素和诸如交联羧甲基纤维素钠等交联微晶纤维素；海藻酸盐，诸如海藻酸和海藻酸钠；粘土，诸如膨润土和泡沫体混合物。用于组合物中的崩解剂的量可在按组合物重量约2％到20％且进一步优选按重量约5％到约10％范围内。
粘合剂表征粘合或“胶粘”粉末的物质且其因此充当调配物中的“胶”。粘合剂加入早已在稀释剂或崩解剂中利用的粘聚淀粉。合适的粘合剂包括诸如蔗糖等糖；源自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉；诸如阿拉伯胶、明胶和黄芪胶等天然胶；诸如海藻酸、海藻酸钠和海藻酸铵钙等海藻衍生物；诸如甲基纤维素和羧基甲基纤维素钠和羟基丙基甲基纤维素等纤维素物质；聚乙烯基吡咯烷酮和诸如硅酸镁铝等无机化合物。组合物中的粘合剂的量可在按总组合物重量约2％到约20％范围内，优选构成按重量约3％到约10％且进一步优选按重量约3％到约6％。
术语润滑剂是指加入剂型中以通过降低摩擦力允许片剂、颗粒剂等在压缩后从铸模或压模释放的物质。合适的润滑剂包括诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾等金属硬脂酸盐；硬脂酸；高熔点蜡和诸如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙二醇和D,L-亮氨酸等水可溶性润滑剂。由于润滑剂必须存在于颗粒的表面上以及颗粒与压片机的部件之间的事实，因此其通常在压缩之前的最后一个步骤期间加入。组合物中的润滑剂的量可在按总组合物重量约0.2％到约5％范围内，优选构成按重量约0.5％到约2％且进一步优选按重量约0.3％到约1.5％。
润滑剂是防止结块且提高颗粒流动特征以使流动平稳且均一的物质。合适的润滑剂包括二氧化硅和滑石。组合物中的润滑剂的量可在按总组合物重量约0.1％到约5％范围内，优选构成按重量约0.5％到约2％。
着色剂是使组合物或剂型着色的佐剂。所述佐剂可包括吸附于合适的吸附构件上的食品级着色剂，诸如粘土或氧化铝。所使用的着色剂的量可自按组合物重量约0.1％到约5％不等且优选按重量约0.1％到约1％。
如本文中所使用，转谷氨酰胺酶抑制剂的“医药学有效量”是有效在活体外治疗的细胞和活体内治疗的患者中实现所需生理学效果的量或活性。医药学有效量尤其是指足以抑制与转谷氨酰胺酶相关的一个或一个以上临床界定的病理过程达一段时间的量。有效量可根据特定抑制剂变化且另外视多个因素以及与待治疗的个体相关的病状和疾病的严重程度而定。如果例如活体内投入抑制剂，那么应考虑诸如患者的年龄、体重和健康状况等因素以及剂量反应曲线和关于由临床前动物研究所获得的毒性的数据。如果使呈本文中所述的肽或拟肽形式的抑制剂与活体内细胞接触，那么应设计多个临床前活体外研究以确定诸如吸收、半衰期、剂量、毒性等参数。确定已知医药学活性成分的医药学有效量属于所属领域的技术人员的一般技能。
以下实例打算借助于所选择的化合物说明本发明而不将本发明的范围限制于所述确切的实例。对所属领域的技术人员来说将显而易见根据类似的合成方法制得的类似化合物属于本发明的范围。
附图说明
图1显示制备L-2-氨基-庚-5-烯-二甲酸衍生物的合成流程。
图2显示替代性制备L-2-氨基-庚-5-烯-二甲酸衍生物的合成流程。
图3显示利用L-2-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸乙酯实例一般合成根据本发明的化合物的两种变化形式，其中在变化形式1中，将侧链修饰为必需的迈克尔系统(即接受体取代双键)是在合成主链后在受保护主链的谷氨酸处进行，且其中在变化形式2中，第一步制备具有必需的迈克尔系统(即接受体取代双键)的氨基酸嵌段且使这一嵌段经由酰胺键在C-末端和/或N-末端处与其它氨基酸或寡肽连接。
在图3中，以下缩写具有相应的含义：
EWG：吸电子基团
TBTU：四氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N-N-N'-N'-四甲基脲鎓
HOBt：1-羟基苯并三唑
DIPEA：N-乙基二异丙基胺
TFA：三氟乙酸
DMD：二甲基二氧杂环丙烷
图4显示具有非蛋白原性氨基酸的抑制剂的制备。
HATU：六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N-N-N'-N'-四甲基脲鎓
图5显示含吡啶酮肽的制备。
图6显示具有环内双键的迈克尔接受体化合物的制备。
图7显示具有环外双键的本发明迈克尔接受体化合物的制备。
图8显示本发明乙烯磺酸衍生物的制备。
图9显示具有可变C-末端残基的根据本发明的抑制剂的固相合成。
锚意思是例如三苯甲基(X＝O)、2-氯三苯甲基(X＝O)、塞伯(Sieber)酰胺(X＝NH)
图10显示羰基替代物和利用四唑(10a)和磺酰胺(10b)实例合成C-末端残基。
图11显示含有羧酸替代物的根据本发明的抑制剂的汇集合成。
图12显示制备化合物5.1的反应的综述。
图13显示制备具有羟基亚甲基(5.2.a)或酮基亚甲基电子等排物(5.2.b)的根据本发明的抑制剂的反应的综述。
图14显示制备化合物5.3.a和5.3.b的反应的综述。
图15显示制备化合物5.4的反应的综述。
图16显示制备根据本发明的羟基乙基氨基电子等排物的一般合成流程。
图17显示制备化合物5.6的反应的综述。
图18显示制备化合物5.7的反应的综述。
图19显示分析抗体和自身抗体的浓度的抗TG2ELISA中所测定的光密度OD450值。
在抗TG2ELISA中，可测定培养基对照的OD450为1.285。在PT-麦胶蛋白刺激活检的上清液中，测定到明显增加的抗体浓度(OD450＝2.144)，而在与抑制剂(1)预培养的活检中，抗体浓度仅稍有增加(OD450＝1.401)。
在患有腹腔病的患者中，摄取麦胶蛋白(谷类蛋白质，例如面包中的谷类蛋白质)使得与TG2相比自身抗体产生增加。
抗TG2ELISA中所测定的消光(OD450)与样品中的自身抗体浓度相关。用PT-麦胶蛋白治疗后明显增加的自身抗体浓度证明活检模型(相应自身抗体产生)可刺激且因此适于评估转谷氨酰胺酶抑制剂。
与抑制剂(1)预培养后对应于自身抗体浓度的OD450的微小增加显示抑制剂在生物模型中具有所需效果。其在用PT-麦胶蛋白治疗后明显降低自身抗体产生的刺激。
图20显示测定干扰素-γ值的干扰素-γELISA中所测量的数据。
在与抑制剂(1)预培养的活检中，24小时后仅可测量到86pg/ml干扰素-γ且48小时后仅可测量到426pg/ml。
由干扰素-γELISA，可评定样品中的干扰素-γ的浓度。
干扰素-γ属于炎症反应的所谓的主要的细胞因子(递质)。对于患有腹腔病的患者来说其意思是摄取谷类蛋白质后，产生主要的细胞因子干扰素-γ。干扰素-γ浓度的增加导致小肠粘膜炎症，腹腔病的一个主要症状。
在图20中，显示培养活检使得干扰素-γ产生，然而如所预期，较长培养时间产生较高干扰素-γ浓度。与转谷氨酰胺酶抑制剂(1)预培养使得24小时后以及48小时后的干扰素-γ浓度急剧下降。因此，活检模型中可显示转谷氨酰胺酶抑制剂(1)抑制主要细胞因子干扰素-γ的产生。结合实例1的数据，得到用转谷氨酰胺酶抑制剂治疗腹腔病的原理论证。
具体实施方式
合成的一般描述
根据本发明的迈克尔接受体系统的结构
迈克尔接受体是与至少一个吸电子取代基共轭的烯烃。因此，对于所述迈克尔接受体的制备，所有产生所述烯烃的反应都是合适的。实例(但不限于)为金属有机基的烯基化反应、科里-温特(Corey-Winter)烯烃合成、霍纳-瓦得沃斯-埃蒙斯(Horner-Wadworth-Emmons)反应、克诺维纳盖尔(Knoevenagel)缩合反应、威蒂格(Wittig)反应、威蒂格-霍纳(Wittig-Horner)反应、朱丽叶-奈格尔(Julia-Lythgoe)烯化反应和彼得森(Peterson)烯化反应。这些和其它烯烃形成反应属于所属领域技术人员的一般技能。本文中特别优选的是醛与合适经取代的磷叶立德(Phosphoryylide)或相应膦酸酯反应的反应(威蒂格反应、威蒂格-霍纳反应、霍纳-瓦得沃斯-埃蒙斯反应)。Dragovich等人可显示这一反应类型用于合成迈克尔接受体系统的广泛应用(Dragovich等人,J.Med.Chem.1998,41,15,2806-2818)。因此，所需要的试剂可大量购得(例如西格玛-阿尔德里奇(Sigma-Aldrich))或描述于文献中。在以下一般合成中，给出醛的这些烯化反应的说明。下文更进一步给出具体执行实例。
起点是合适经取代的醛，即具有其中X为任何残基的一般结构的醛：
这一醛例如可如本文中关于化合物1.4所揭示由谷氨酸衍生物制备。
用合适溶剂(例如，苯、甲苯或DMF)溶解1当量磷叶立德(例如三苯基鏻叶立德)且用碱(例如NaH、n-BuLi、NaNH2)去质子化。反应结束后，加入1当量的相应醛。反应结束后，在真空下去除溶剂且用色谱法纯化所得烯烃。
一般规则1：
合成具有烷氧基羰基乙烯基迈克尔系统的化合物的一般规则：
母体化合物为C-末端和N-末端处具有保护基的氨基酸Glu(谷氨酸)。可使用诸如叔丁氧基羰基、第三丁基酯或2-苯基异丙基酯等酸不稳定保护基作为保护基。由氢化二异丁基铝将侧链选择性还原成醛，且随后使其与磷烷反应形成迈克尔系统。例如借助于三氟乙酸的酸诱导保护基裂解后，肽残基或肽类似物或氨基酸类似物或一个或两个烷基残基连接于N-末端。所述过程优选利用例如活性酯或羧酸酐的活化羧酸执行，且随后使C-末端与肽残基或肽类似物或氨基酸类似物的氨基反应或执行酯化。这些反应可普遍使用，为所属领域的技术人员所熟知，且因此可向具有迈克尔系统的氨基酸的C-末端与N-末端中加入任何肽或肽样残基。
代替最初在氨基酸谷氨酸处形成迈克尔系统且然后如上所述修饰C-末端，可合成所需的合成肽，之后使其具有保护基且此时进行一或多条谷氨酸侧链的修饰以形成迈克尔系统或若干迈克尔系统。产生迈克尔系统后，可部分或完全去除保护基。
一般规则2：
合成具有烷氧基羰基乙烯基迈克尔系统的化合物的一般规则：
同样，母体化合物为C-末端和N-末端处具有保护基的氨基酸Glu(谷氨酸)且借助于重氮甲烷且随后二甲基二氧杂环丙烷使侧链转化为邻接二酮基化合物(乙二醛)。随后使二酮基侧链与所需磷烷反应以形成迈克尔系统。例如借助于三氟乙酸的酸诱导保护基裂解后，肽残基或肽类似物或氨基酸类似物或一个或两个烷基残基连接于N-末端。所述过程优选利用例如活性酯或羧酸酐的活化羧酸执行，且随后使C-末端与肽残基或肽类似物或氨基酸类似物的氨基反应或进行酯化。这些反应可普遍执行，为所属领域的技术人员所熟知，且因此可向具有迈克尔系统的氨基酸的C-末端与N-末端中加入任何肽或肽样残基。
代替最初在氨基酸谷氨酸处形成迈克尔系统且然后如上所述修饰C-末端，可合成所需的合成肽，之后使其具有保护基且此时将一或多条谷氨酸侧链修饰为迈克尔系统或若干迈克尔系统。形成迈克尔系统后，可部分或完全去除保护基。
实例
使人类组织转谷氨酰胺酶失活的一般方法
通过加入150μl水(所得缓冲液为50mMNaH2PO4、150mMNaCl，pH＝8)复原250μg冻干的his标记重组人类组织转谷氨酰胺酶(His6-rh-TG2)。
制备于DMSO中的10mM抑制剂储备溶液且用缓冲液(相应为50mMTris-HCl、10mMCaCl2、5mMDTT，pH＝7.5)稀释到抑制混合物所需的浓度的20倍(至少1/50稀释，产生2％的DMSO浓度)。
在比色杯中放入900μl包含55.56mMTris、11.11mMCaCl2、0.11％PEG8000、5.56mMDTT、5.56mM甘氨酸甲酯和50μMAbz-APE(CAD-DNP)QEA-OH的pH＝7.5的分析溶液且在分光光度计的测量池中使其温度为37℃。向所述溶液中加入50μl相应的抑制剂溶液(使得DMSO于混合物中的浓度小于0.2％)。
用51μl缓冲液(50mMTris、100mMNaCl、5mMDTT，pH＝7.5)稀释7μl以上复原的转谷氨酰胺酶溶液。向含有相应的抑制剂浓度的分析溶液中加入50μl所述酶溶液(10μgHis6-rhTG2)。将混合物在37℃下培养5分钟，之后执行测量。(λ激发(exc)＝313nm且λ发射(em)＝418nm，15min)
通过分析增加荧光所获得的直线的斜率测量所得酶活性。
使用DMSO代替抑制剂储备溶液以测定非抑制酶活性。通过相对于抑制剂浓度的对数绘制所得酶活性确定IC50值。IC50定义为预培养5分钟后酶活性降低到50％时抑制剂的浓度。
活检实例1
将直径为约2mm的活检从患有腹腔病的患者的十二指肠下部移出后储藏在冰冷的PBS中最多30分钟。将单一活检转移到24孔细胞培养皿的空腔中且涂布500μlTrowellT8培养基。
对于预培养，向活检中加入最终浓度为5μM的转谷氨酰胺酶抑制剂(1)且将其在37℃的温度下在培养箱中在鼓CO2(5％)气体下培养30分钟。随后，用以1mg/ml的最终浓度使用的胃蛋白酶-胰蛋白酶消化后的麦胶蛋白(PT麦胶蛋白)刺激。PT麦胶蛋白如Wieser和Belitz(WieserH和BelitzHD(1992),ZLebenmUntersForsch194:229-234)所述产生。用蛋白酶胃蛋白酶和胰蛋白酶处理模拟胃肠道中的消化。因此，所得麦胶蛋白肽对应于摄取谷类蛋白质后十二指肠中所出现的麦胶蛋白肽。然后将活检在培养箱中在以上条件下再培养48小时。
将对照与无抑制剂的培养基一起培养和在不存在无抑制剂的培养基下培养或与PT麦胶蛋白一起培养。
48小时后，取50μl样品且借助于抗TG2ELISA试剂盒分析。
在抗TG2ELISA中可测量培养基对照的OD450为1.285。
在经PT麦胶蛋白刺激的活检的上清液中测量到抗体浓度显著增加(OD450＝2.144)，而在与抑制剂(1)一起预培养的活检中可观察到抗体浓度微小增加，OD450为1.401(参见图19)。
活检实例2
如活检实例1中所述培养和处理活检。24和48小时后，从经PT麦胶蛋白刺激的活检和与抑制剂(1)一起预培养，随后也用PT麦胶蛋白刺激的活检中取50μl样品，且借助于干扰素-γElisa分析样品。24小时后，在经PT麦胶蛋白刺激的活检中就可测量到653pg/ml的极高干扰素-γ值，48小时后，这一值增加到1177pg/ml。在与抑制剂(1)一起预培养的活检中，24小时后，所测量到的干扰素-γ值仅为86pg/ml，且48小时后，虽然加以刺激，但仅为426pg/ml(参见图20)。
所需肽序列的合成：
使用标准方法合成非修饰肽序列。一般来说，文献中已知的所有方法都可用于肽合成。(也参见BodanzkyM,BodanzkyA.,Thepracticeofpeptidesynthesis,SpringerVerlag,1994)。以举例的方式描述两种最常使用的方法。
1.肽序列溶液合成：由叔丁氧基羰基保护基(Boc保护基)保护待偶合的氨基酸的α-氨基官能团；通过六氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓(TBTU)、1-羟基苯并三唑(HOBt)和N,N-二乙基异丙基胺与游离胺偶合；由存于二氯甲烷(DCM)中的三氟乙酸(TFA)裂解Boc保护基。随后执行下一个氨基酸的偶合。
2.肽序列固相合成：由购得的经由2-氯三苯甲基连接子结合的起始氨基酸起始，相应地偶合序列的9-芴基甲基(Fmoc)保护氨基酸。所使用的其它试剂是TBTU、HOBt和DIPEA。反应条件为所属领域的技术人员所知。关于其它信息，例如参见FmocSolidPhasePeptideSynthesis,Apracticalapproach,Chan,W.C.,WhiteP.D.,OxfordUniversityPress。
在以下说明中，描述合成不同抑制剂所需的一些例示性肽。
L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-异戊酰胺(5.1)
Boc-L-脯氨酰基-异戊酰胺
将479mg(5.5mmol)异戊酰胺溶解于5mlDMF中。向所述溶液中加入1.06gBoc-脯氨酸(5mmol)、1.57gTBTU(4.9mmol)、675mgHOBt(5mmol)和1.71mlDIPEA(10mmol)于15mlDMF中的溶液。1小时后，在真空下去除溶剂且将油性残余物溶解于200ml乙酸乙酯中。分别用50ml10％柠檬酸、10％NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤有机相三次。经Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂。
产量：1.38g。
裂解Nα-叔丁氧基羰基保护基
将以此方式合成的中间化合物溶解于25ml二氯甲烷中且添加25mlTFA。将混合物在室温下搅拌1小时。在真空下去除溶剂且通过与甲醇共蒸馏并在高真空下干燥去除TFA残余物。
Boc-L-缬氨酰基-脯氨酰基-异戊酰胺
将三氟乙酸盐(脯氨酰基-异戊酰胺三氟乙酸盐)溶解于DMF中，且加入1.15gBoc-缬氨酸(5.33mmol)、1.6gTBTU(5.1mmol)、719mgHOBt(5.33mmol)和1.88mlDIPEA(11mmol)于20mlDMF中的溶液。1小时后，在真空下去除溶剂且将油性残余物溶解于200ml乙酸乙酯中。分别用50ml10％柠檬酸、10％NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤有机相三次。经Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂。
产量：1.75g
ESI-MS:406.4[M+Na]+
L-丝氨酰基-L-亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯(8.1)
根据上述标准方法由甘氨酸甲酯起始在溶液中合成标题中所列的化合物。
下文以举例的方式描述第一次偶合。后续偶合在相同条件下进行。
Nα-叔丁氧基羰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯
将850mgNα-叔丁氧基羰基-L-异亮氨酸(3.68mmol)以及1.18gTBTU(3.68mmol)和497mgHOBt(3.68mmol)一起溶解于10mlDMF中。通过加入1.9mlDIPEA(11.1mmol)，将溶液的pH值调节到约11，且将反应混合物与461.4mg甘氨酸甲酯盐酸盐(3.68mmol)于5mlDMF中的溶液混合。将混合物在室温下搅拌45分钟，且随后在真空下去除溶剂。将所获得的油性残余物溶解于200ml乙酸乙酯中，且分别用50ml10％柠檬酸、10％NaHCO3和水洗涤三次。用Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂。获得无色固体。
产量：1.08g(理论产量的97％)。
裂解Nα-叔丁氧基羰基保护基
将受保护肽溶解于二氯甲烷中且与相同体积的三氟乙酸混合。1小时后，在真空下去除溶剂。通过与甲醇共蒸馏若干次去除酸性残余物。可使所获得的胺直接与下一种氨基酸偶合。
借助于若干次偶合和去保护反应获得呈浅棕色固体形式的标题中所列的化合物(8.1)。
ESI-MS:502.2[M+Na]+
Nα-乙酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-脯氨酰基-甘氨酸(8.2)
借助于固相肽合成合成标题中所列的化合物。由购得的H-甘氨酸-2-氯三苯甲基酯(聚合物结合)起始，相应地借助于TBTU、HOBt和DIPEA偶合序列的Fmoc保护氨基酸。反应条件为所属领域的技术人员所知。关于其它信息，例如参见FmocSolidPhasePeptideSynthesis,Apracticalapproach,Chan,W.C.,WhiteP.D.,OxfordUniversityPress。
从高分子载体裂解且通过用乙醚洗涤纯化所获得的粗产物后，获得呈纯形式的标题中所列的化合物。
ESI-MS:407.2[M+Na]+
下文描述抑制剂的合成。除非另外定义，否则上下文中所使用的肽根据以上方法中的一种合成。
1.合成6-氨基-庚-2-烯-二甲酸衍生物
1.2.Nα-叔丁氧基羰基-L-谷氨酸5-甲酯1-叔丁酯
将2.3gN-叔丁氧基羰基-L-谷氨酸1-叔丁酯(7.58mmol)溶解于80ml甲醇中，且在室温下逐滴加入新制成的重氮甲烷溶液(23mmol，)。1小时后，在真空下去除溶剂。利用硅胶色谱法纯化化合物。(色谱柱：18.5×4cm，DCM/MeOH＝99/1，Rf＝0.99)
产量：1.3g
ESI-MS:340.2[M+Na]+
1.3N,N-二-(叔丁氧基羰基)-L-谷氨酸5-甲酯1-叔丁酯
将1.3gN-叔丁氧基羰基-L-谷氨酸5-甲酯1-叔丁酯(1.2.，4.12mmol)溶解于15ml乙腈中且与100mgN,N-二甲基-4-氨基吡啶(DMAP)混合。在氮气氛下加入1.79g二碳酸二叔丁酯(di-tert.-butyl-bicarbonate)(8.2mmol)于7ml乙腈中的溶液。搅拌整夜后，在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所获得的粗产物。
(色谱柱：33×3.5cm，石油醚/乙酸乙酯＝92/8，Rf＝0.32)
产量：1.3g
ESI-MS:440.3[M+Na]+
1.4N,N-二-(叔丁氧基羰基)-L-2-氨基-5-氧代戊酸叔丁酯
将1.31gN,N-二-(叔丁氧基羰基)-L-谷氨酸5-甲酯1-叔丁酯(1.3，3.14mmol)溶解于40ml无水乙醚中且在氩气氛下冷却到-78℃。在所述温度下，缓慢逐滴加入3.45ml氢化二异丁基铝(1M于己烷中)的溶液。加入后，将混合物在-78℃下再搅拌15分钟，之后通过加入1.5ml水使反应混合物在所述温度下中止。在剧烈搅拌下将混合物解冻到室温且经硅藻土过滤不透明的溶液。浓缩滤液到干且通过与甲苯共蒸馏去除残余水。利用硅胶色谱法纯化化合物(色谱柱：37×3.2cm，石油醚/乙酸乙酯＝92/8到90/10)。
产量：890mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝9.65(s,1H,H-4),4.63(dd,1H,H-1,J1/2a＝4.8Hz,J1/2b＝9.85Hz),2.51-2.50(m,1H,H-3a),2.48-4.40(m,1H,H-3b),2.27-2.20(m,1H,H-2a),1.98-1.91(m,1H,H-2b),1.44(s,18H,6×CH3(Boc)),1.92(s,9H,3×CH3(O-tBu)
ESI-MS:410.4[M+Na]+，428.4[M+H2O+Na]+
1.5N,N-二-(叔丁氧基羰基)-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酰基-7-叔丁酯
在8ml无水苯中放入160mgN,N-二-(叔丁氧基羰基)-L-2-氨基-5-氧代戊酸1-叔丁酯(1.4，0.413mmol)，且在室温下在氩气氛下加入152mg(乙氧基羰基亚甲基)-三苯基磷烷(0.413mmol)的溶液。搅拌整夜后，在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化所获得的油性残余物。(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)
Rt：98-103.6min
产量：80mg
ESI-MS:480.3[M+Na]+
1.7Nα-苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酯
将80mgN,N-二-(叔丁氧基羰基)-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酰基-7-叔丁酯(1.5，0.175mmol)溶解于7.5ml二氯甲烷中且在氮气氛下冷却到0℃。向所述溶液中缓慢加入5mlTFA。在所述温度下搅拌两小时后，在真空下去除溶剂。在高真空下从所获得的棕色残余物(L-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸1-乙酯，1.6)中去除残余TFA。获得64mg棕色固体(就TFA盐来说，为116％)。通过将所获得的产物加入65.4mgN-(苯甲氧基羰基)-丁二酰亚胺(0.262mmol)于4mlDMF中的溶液中使其进一步反应。在氮气氛下加入DIPEA以使pH值调节到约6。1小时后，在真空下浓缩所获得的澄清溶液到干且经制备型HPLC纯化固体残余物。(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)
Rt:64.0-66.5min
产量：64mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝7.62(d,1H,NH),7.37-7.30(m,5H,芳基-H),6.87(dt,1H,H-4,J4/3＝6.9HzJ4/5＝15.6Hz),5.84(d,1H,H-5,J5/4＝15.6Hz),5.02(s,2H,苯甲基-CH2),4.11(q,2H,H-6a,H-6b,J6/7＝7.1Hz),4.08-4.00(m,1H,H-1),2.30-2.23(m,2H,H-3a,H-3b),1.90-1.80(m,1H,H-2a,H-2b),1.20(t,3H,CH3-7)
ESI-MS:358.2[M+Na]+
1.8N,N-二-(叔丁氧基羰基)-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-甲酰基-7-叔丁酯
在20ml无水苯中放入445mgN,N-二-(叔丁氧基羰基)-L-2-氨基-5-氧代戊酸1-叔丁酯(1.4，1.15mmol)，且在室温下在氩气氛下加入385mg(甲氧基羰基亚甲基)-三苯基磷烷(1.15mmol)的溶液。搅拌整夜后，在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所获得的油性残余物。(色谱柱：29×2.4cm，石油醚/乙酸乙酯＝99.5/0.5)
产量：424mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝6.66(dt,1H,H-4,J4/3＝6.8HzJ4/5＝15.9Hz),5.64(d,1H,H-5,J5/4＝15,9Hz),4.45-4.2(m,1H,H-1),3.44(s,3H,CH3-6),2.01-1.95(m,2-H,H-3a,H-3b),1.95-1.86(m,1H,H-2a),1.78-1.67(m,1H,H-2b),1.24(s,18H,6×CH3(Boc))，
ESI-MS:466.3[M+Na]+
1.9Nα-叔丁氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酯
将50mgN,N-二-(叔丁氧基羰基)-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-甲酰基-7-叔丁酯(1.8，0.11mmol)溶解于5ml二氯甲烷中且在氮气氛下冷却到0℃。在所述温度下加入5ml三氟乙酸，且将混合物在室温下搅拌两小时。在真空下去除溶剂且将所获得的浅绿色残余物(L-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸1-甲酯)与甲醇共蒸馏若干次以去除残余TFA。获得88mg三氟乙酸盐(理论产量的139％)。将油性残余物溶解于4mlDMF中且与36mgBoc-OSu(1.65mmol)混合。通过加入DIPEA，将pH值调节到约6。在室温下搅拌整夜后，在真空下去除溶剂且通过制备型HPLC获得呈纯形式的产物。(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
Rt:53.5-56.5min
产量：23mg
ESI-MS:310.1[M+Na]+
1.10Nα-乙酰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-甲酯
如1.9所描述，最初制备L-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸1-甲酯(0.1mmol)。将中间产物溶解于10mlDMF中且在氮气氛下加入68mg乙酸五氟苯酯(0.3mmol)于4mlDMF中的溶液。将混合物在室温下搅拌整夜，之后在真空下去除溶剂。通过制备型HPLC获得纯产物。
(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
Rt:54.6-56.8min
产量：19mg
ESI-MS:252.1[M+Na]+
1.11Nα-苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-甲酯
如1.10所描述，最初制备L-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸1-甲酯三氟乙酸盐(0.02mmol)。将中间产物溶解于20mlDMF中且在氮气氛下加入75mgN-(苯甲氧基羰基)-丁二酰亚胺(0.3mmol)于7mlDMF中的溶液。将混合物在室温下搅拌整夜，之后在真空下去除溶剂。通过制备型HPLC获得纯产物。(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)
Rt:38.4-42.4min
产量：25mg
ESI-MS:344.1[M+Na]+
1.12L-2-(4-氯-丁酰基氨基)-戊烷二甲酸1-叔丁酯5-甲酯
将933mgL-谷氨酸5-甲酯1-叔丁酯盐酸盐(3.68mmol)溶解于20ml无水二氯甲烷中且在加入1.28mlDIPEA(7.5mmol)后冷却到0℃。向所述溶液中加入518.5mg4-氯丁酰氯。将混合物搅拌整夜同时缓慢加热到室温。将溶液用二氯甲烷稀释到100ml并用10％柠檬酸以及饱和NaCl溶液洗涤(各三次)。经Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂。获得呈无色油状物的纯形式产物。
产量：1.15g
ESI-MS:344.1[M+Na]+
1.13L-2-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-戊烷二甲酸1-叔丁酯5-甲酯
将1.15g2-(4-氯-丁酰基氨基)-戊烷二甲酸1-叔丁酯5-甲酯(1.12，3.58mmol)溶解于10mlDMF中。将混合物在氩气氛下冷却到0℃且加入173mg氢化钠(60％于矿物油中)。15分钟的时间后，去除冰浴且将混合物在室温下搅拌4小时。在高真空下去除溶剂且将残余物溶解于200ml乙酸乙酯中。用1NHCl、10％NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤后，经Na2SO4干燥产物且再次在真空下去除溶剂。
获得呈浅黄色油状物形式的纯产物。
产量：908mg
ESI-MS:308.3[M+Na]+，252.3[M-t-Bu+Na]+
1.14(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷-1-基-)庚-2-烯-二甲酸1-乙酯
将100mg2-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-戊烷二甲酸1-叔丁酯5-甲酯(1.13，0.35mmol)溶解于10ml无水乙醚中且在氩气氛下冷却到-78℃。在所述温度下，缓慢逐滴加入0.385ml氢化二异丁基铝于己烷中的一摩尔浓度溶液。30分钟后，通过加入1ml水使混合物中止且随后解冻到室温。将反应溶液利用硅藻土(diatomaceousearth)过滤，用乙醚重新洗涤两次且浓缩合并的有机相。
产量：83mg
ESI-MS:278.2[M+Na]+
1.15(L)-(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸1-乙酯
将70mg(E)-6-(2-氧代-吡咯烷-1-基-)庚-2-烯-二甲酸1-乙酯(1.14，0.27mmol)溶解于5ml苯中，经分子筛干燥。在氮气氛下加入95mg羧基亚甲基三苯基磷烷的溶液且将混合物在室温下搅拌整夜。在真空下去除溶剂且将所获得的油性残余物溶解于10ml二氯甲烷中并与10ml三氟乙酸混合。1小时后，在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所获得的粗产物。(色谱柱：21×1.2cm，石油醚/乙酸乙酯：8/2)
ESI-MS:292.1[M+Na]+
制备6-氨基-庚-2-烯-二甲酸的替代保护基策略
为实现正交保护基策略，可执行以下步骤：
将例如Z-Glu(OMe)-OH的在氮气下保护的谷氨酸衍生物溶解于二氯甲烷中且与2-苯基异丙醇和N,N-二甲基-4-氨基吡啶(DMAP)以及1.5当量二环己基碳二亚胺混合。在室温下搅拌整夜后，通过过滤从沉淀固体移出产物且借助于硅胶色谱法纯化所获得的粗产物。获得呈纯形式的产物(Z-Glu(OMe)-OiPrPh)。
如章节1.3中所述，在氮气下通过叔丁氧基羰基保护基保护Z-Glu(OMe)-iPrPh且如章节1.4中所述，将产物还原成醛Z,Boc-Glu(H)-IPrPh。如章节1.8中所述，在威蒂格反应条件下执行转化为烯烃的转化，然后因用存于二氯甲烷中的1％TFA处理而可实现羧基保护基以及两个氨基保护基中的一个裂解。由此，视威蒂希试剂的选择可直接获得如1.7或1.8的化合物，所述化合物可用于诸如与胺偶合(图2)等其它反应。在3.6中给出执行实例。
2.合成具有药效基团的肽环境的抑制剂
本发明抑制剂的一个优选实施例是在合适部位加入根据本发明的药效基团的蛋白原性α-氨基酸的肽序列。在下文中，提供这些肽抑制剂中的若干种。
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物1)
将15mgNα-苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酯(1.7，44.7μmol)以及HATU溶解于5mlDMF中。向所述溶液中加入22.8μlDIPEA(134.2μl)且将所获得的黄色溶液立即加入L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(根据方法1制备)的三氟乙酸盐(20.4mg，44.7μmol)的溶液中。将pH值(借助于湿润指示棒(indicatorstick)测定)调节到9。为此目的，再需要44.7μmolDIPEA。10分钟后，在真空下去除溶剂且通过制备型HPLC纯化棕色油性残余物。(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)
Rt:37.8-40.32min
产量：17mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.19(d,1H,H-3),7.88(d,1H,H-6),7.47(d,1H,H-14),7.37-7.31(m,5H,芳基-H),6.87(dt,1H,H-10,J10/9＝6.6Hz,J11/10＝15.4Hz),5.81(d,1H,H-11,J11/10＝15.4Hz),5.02(s,2H,苯甲基-CH2),4.37-4.28(m,2H,H-5,H-4),4.28-4.20(m,1H,H-2),4.10(q,2H,H-12a,H-12b),4.08-4.00(m,1H,H-7),3.73-3.67(m,1H,H-4ca),3.61(s,3H,OMe),3.60-3.52(m,1H,H-4cb),2.27-2.15(m,2H,H-9a,H-9b),2.10-2.00(m,1H,H-4a/1),2.00-1.90(m,2H,H-4b/1,次甲基-H(Val)),1.88-1.78(m,3H,H-4a/2,H-4b/2),1.78-1.65(m,2H,H-8a,次甲基-H(Leu)),1.65-1.60(m,1H,H-8b),1.58-1.50(m,1H,CH2a-Leu),1.50-1.43(m,1H,CH2b-Leu),1.22(t,3H,CH3-16),0.89(dd,6H,2×CH3-Val),0.84(dd,6H,2×CH3-Leu)
ESI-MS:681.4{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物2)
将33.5mgNα-苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酯(1.7，0.1mmol)溶解于7.5mlDMF中且依次与38mgHATU(0.1mmol)和51μlDIPEA(0.3mmol)混合且立即加入H-Gln-Pro-Leu-OMe(0.1mmol)(根据方法1合成)的三氟乙酸盐于7.5mlDMF中的溶液中。通过逐步加入DIPEA，将pH值调节到9。进一步加工如关于化合物1所述(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。
Rt＝33.9-36.1min
产量：28mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.19(d,1H,H-3),8.11(d,1H,H-8),7.45(d,1H,H-16),7.37-7.28(m,5H,芳基-H),7.20(br.s.,1H,CONH2),6.87(dt,1H,H-12,J12/13＝15.6Hz),6.78(br.s.,1H,CONH2),5.82(d,1H,H-11,J13/12＝15.6Hz),5.03(s,2H,苯甲基-CH2),4.50-4.43(m,1H,H-5),4.37-4.34(m,1H,H-4),4.27-4.22(m,1H,H-2),4.10(q,2H,H-14a,H-14b),4.05-4.00(m,1H,H-9),3.65-3.57(m,2H,H-4ca,H-4cb),3.61(s,3H,OMe),2.25-2.19(m,2H,H-11a,H-11b),2.16-2.10(m,2H,H-7a,H-7b),2.10-2.00(m,1H,H-4a/1),1.95-1.70(m,5H,H-4a/2,H-4b/1,H-4b/2,H-6a,H-10a),1.71-1.60(m,3H,H-10b,次甲基-H(Leu),H-6b),1.65-1.60(m,1H,H-8b),1.60-1.51(m,1H,CH2a-Leu),1.51-1.45(m,1H,CH2b-Leu),1.21(t,3H,CH3-16),0.87(dd,6H,2×CH3-Leu)
ESI-MS:710.4{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酸甲酯(化合物3)
将33.5mgNα-苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酯(1.7，0.1mmol)溶解于7.5mlDMF中且依次与38mgHATU(0.1mmol)和51μlDIPEA(0.3mmol)混合。将以此方式活化的氨基酸加入21.5mg苯丙氨酸甲酯盐酸盐(购得)于7.5mlDMF中的溶液中。通过逐步加入DIPEA，将pH值调节到约9。将混合物在室温下搅拌30分钟。进一步加工如关于化合物1所述进行：(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。
Rt＝39.6-42.0min
产量：29mg
ESI-MS:519.2{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酸甲酯(化合物4)
将32mg(1.11，0.1mmol)溶解于7mlDMF中且依次与38mgHATU(0.1mmol)和51μlDIPEA(0.3mmol)混合。将所述溶液加入Gln-Pro-OMe三氟乙酸盐的溶液中。进一步处理和加工如关于化合物1所述进行。
Rt＝28.8-31.2min
ESI-MS:583.3{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-异戊酰胺(化合物5)
将22mgNα-苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酯(1.7，0.066mmol)溶解于5mlDMF中且依次与25mgHATU(0.066mmol)和33.5μlDIPEA(0.0196mmol)混合并立即加入H-Val-Pro-异丙酰胺(5.a)(0.0657mmol)的三氟乙酸盐于5mlDMF中的溶液中。通过逐步加入DIPEA，将pH值调节到9。进一步加工如关于化合物1所述进行：(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。
Rt＝37.3-40.3min
产量：20mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝7.86(d,1H,H-6),7.69(t,1H,H-3),7.48(d,1H,H-14),7.39-7.28(m,5H,芳基-H),6.88(dt,1H,H-10,J10/9＝7.0Hz,J10/11＝14.3Hz),5.80(d,1H,H-11,J11/10＝14.3Hz),5.02(s,2H,苯甲基-CH2),4.33-4.30(m,1H,H-5),4.30-4.22(m,1H,H-4),4.10(q,2H,H-12a,H-12b),4.08-4.03(m,1H,H-7),3.73-3.67(m,1H,H-4ca),3.60-3.54(m,1H,H-4cb),3.14-3.06(m,1H,H-2a),3.05-2.95(m,1H,H-2b)2.25-2.17(m,2H,H-9a,H-9b),2.04-1.90(m,3H,H-4a/1,H-4b/1,次甲基-H(Val)),1.85-1.70(m,3H,H-4a/2,H-4b/2,H-10a),1.68-1.60(m,1H,H-10b),1.60-1.50(m,1H,次甲基-H(异丙酰胺)),1.31-1.24(m,2H,H-3a,H-3b),1.21(t,3H,CH3-13),0.89(d,12H,4×CH3)
ESI-MS:623.5{M+Na}+
[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸1-乙酰基]-L-缬氨酰基-L-脯氨酸甲酯(化合物6)
将27mg(L)-(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸1-乙酯(1.15，0.1mmol)溶解于7.5mlDMF中且依次与38mgHATU(0.1mmol)和51μlDIPEA(0.3mmol)混合。将以此方式活化的氨基酸加入0.1mmolH-Val-Pro-OMe三氟乙酸盐于7.5mlDMF中的溶液中。通过逐步加入DIPEA，将pH值调节到约9。将混合物在室温下搅拌30分钟。进一步加工如关于化合物1所述进行：(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。
ESI-MS:502.3[M+Na]+
L-谷氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酸甲酯(7.1)
根据肽合成的标准方法合成标题中所列的化合物。
ESI-MS:332.1[M+H]+
Nα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酸甲酯(7.2)
将29mgNα-叔苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-甲酯(1.9.，0.1μmol)连同38mgHATU(0.1mmol)一起溶解于5mlDMF中。向所述溶液中加入51μlDIPEA(0.3mmol)且将所获得的黄色溶液立即加入44mg(L-谷氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酸甲酯(7.1，0.1mmol)的三氟乙酸盐)的溶液中。通过逐步加入DIPEA，将pH值设定为9。30分钟后，在真空下去除溶剂且通过制备型HPLC纯化棕色油性残余物(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
产量：38mg
ESI-MS:623.2[M+Na]+
Nα-乙酰基-L-天冬酰胺酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酸甲酯(化合物7)
将38mgNα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}}-L-谷氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酸甲酯(7.2，63μmol)溶解于5ml二氯甲烷中，与相同体积的三氟乙酸混合且在室温下搅拌1小时。在所述时间段后，在真空下去除溶剂。通过与甲醇共蒸馏若干次去除酸性残余物。将所获得的油性残余物溶解于4mlDMF中。向所述溶液中加入11mgNα-乙酰基-L-天冬酰胺、24mgHATU和33μlDIPEA的溶液。用DIPEA将所得溶液的pH值调节到约7。1小时后，在真空下去除溶剂。借助于制备型HPLC执行纯化。(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A:0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
Rt:37.0-39.8min
产量：27mg
ESI-MS:679.3[M+Na]+
Nα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-丝氨酰基-L-亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯(8.3)
将29mgNα-叔苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-甲酯(1.9，0.1mmol)连同38mgHATU(0.1mmol)一起溶解于5mlDMF中。向所述溶液中加入51μlDIPEA(0.3mmol)且将所获得的黄色溶液立即加入L-丝氨酰基-L-亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯(8.1)的三氟乙酸盐(64mg，0.1mmol)的溶液中。通过逐步加入DIPEA，将pH值调节到9。30分钟后，在真空下去除溶剂且通过制备型HPLC纯化棕色油性残余物(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
产量：39mg
ESI-MS:807.5{M+Na}+
Nα-乙酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-脯氨酰基-甘氨酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-丝氨酰基-L-亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯(化合物8)
将39mgNα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-丝氨酰基-L-亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯(8.3，49μmol)溶解于5ml二氯甲烷中。一旦加入了相同体积的三氟乙酸，就将混合物在室温下搅拌1小时且随后在真空下去除溶剂。通过与甲醇共蒸馏若干次去除酸性残余物。将所获得的油性残余物溶解于4mlDMF中。
通过加入26μlDIPEA使20mg(50μmol)Nα-乙酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-脯氨酰基-甘氨酸(8.2)、19mgHATU(50μmol)于DMF中的溶液活化且随后加入去保护的8.3的三氟乙酸盐的以上所合成的溶液中。通过逐步加入DIPEA，将pH值调节到约7。1小时后，在真空下去除溶剂。借助于制备型HPLC执行纯化。(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
Rt:13.6-15.4min
产量：15mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.34(t,1H),8.25-8.16(m,2H),8.09(d,1H),8.01(d,1H),7.99(d,1H),7.89(t,1H),7.81-7.73(m,2H),6.68(dt,1H),5.85(d,1H),4.49-3.65(若干多重峰,13H),3.64(s,3H),3.61(s,3H),3.56(m,2H),3.55-3.42(m,2H),2.18-2.12(m,2H),2.07-1.55(若干多重峰,7H),1.84(s,3H),1.51-1.38(m,4H),1.13-1.04(m,1H),0.89-0.78(若干多重峰,18H)
ESI-MS:1059.8[M+Na]+
制备其中m＝1的根据本发明的抑制剂
令人惊讶地得出，当用羰基扩充作为亲电子双键(即，接受体取代双键)与肽主链之间的连接子的亚乙基时，也可获得有效的抑制剂。这一完全新颖的药效基团(即，作为抑制剂的不可分割的部分的经由亚乙基羰基连接的亲电子双键)尚未描述，对于其它酶也未描述。这些本发明抑制剂的合成顺序列于图3中。
Nα-苯甲氧基羰基-L-谷氨酰基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(9.1)
根据肽合成的标准方法合成标题中所列的化合物。
ESI-MS:627.3[M+Na]
Nα-苯甲氧基羰基-(5-氧代-6-重氮基)-L-正亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(9.2)
将1.83gNα-苯甲氧基羰基-L-谷氨酰基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(9.1，2.12mmol)溶解于40ml无水THF中且冷却到-15℃。在氩气氛下依次向所述溶液中加入1.8ml二异丙基乙基胺(10.6mmol)和1.43ml氯甲酸异丁酯(10.6mmol)。10分钟后，加入重氮甲烷于乙醚(约33mmol)中的新制备溶液。将反应混合物搅拌整夜，且在真空下去除溶剂。借助于硅胶色谱法执行纯化。
ESI-MS:651.4[M+Na]，623.4[M-N2+Na]
Nα-苯甲氧基羰基-(L-7-氨基-1,2-二氧代-己酰基)-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(9.3)
将100mgNα-苯甲氧基羰基-(5-氧代-6-重氮基)-L-正亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(9.2，0.16mmol)溶解于20ml无水丙酮中。在氩气氛下在0℃下加入3ml新制备的二甲基二氧杂环丙烷溶液(约0.1M)。10分钟后，在真空下去除溶剂，将残余物溶解于无水二氯甲烷中且经Na2SO4干燥(1％/min)。
ESI-MS:639.4[M+Na]，657.4[M+H2O]
Nα-苯甲氧基羰基-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(化合物9)
将98mgNα-苯甲氧基羰基-(L-2-氨基-5,6-二氧代-己酰基)-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯(9.3,0.16mmol)溶解于无水苯中。向所述溶液中加入52mg(乙氧羰基亚甲基)三苯基磷烷(0.15mmol)。将混合物在室温下在氩气氛下搅拌1小时。在真空下去除溶剂且通过制备型HPLC纯化固体残余物(SynergieMax，4μm，250×21.2mm，洗提剂A：0.1％TFA/水；洗提剂B：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
这一过程期间，分离两种产物。在真空下去除溶剂且在高真空下干燥残余物。
Rt:37-40min7mg
Rt:40-43min27mg
Z异构体(洗提份37-40min)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.24(d,1H,H-3),7.89(d,1H,H-8),7.51(d,1H,H-19),7.43-7.30(m,5H,芳基-H),6.76(d,1H,H-14,J14/15＝12.1Hz),6.18(d,1H,H-15,J14/15＝12.1Hz),5.06(s,1H,苯甲基-CH2),4.43-4.34(m,2H,H-5,H-7),4.32-4.26(m,1H,H-2),4.15(q,2H,H-17a,H-17b),4.12-3.96(m,1H,H-10),3.76-3.70(m,1H,H-5ca),3.65(s,3H,OMe),3.63-3.55(m,1H,H-5cb),2.60-2.66(m,2H,H-12a,H-12b),2.13-2.03(m,1H,H-5a/1),2.03-1.92(m,2H,H-5b/1,次甲基-H(Val)),1.92-1.81(m,3H,H-5a/2,H-5b/2,H-11a),1.81-1.70(m,2H,H-11b,次甲基-H(Leu),1.63-1.55(m,1H,CH2a-Leu)),1.55-1.47(m,1H,CH2b-Leu),1.21(t,3H,CH3-18),0.94(d,6H,2×CH3-Val),0.90(d,6H,2×CH3-Leu)
ESI-MS:709.5{M+Na}+
E异构体(洗提份40-43min)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.22(d,1H,H-3),7.90(d,1H,H-8),7.51(d,1H,H-19),7.43-7.30(m,5H,芳基-H),6.97(d,1H,H-14,J14/15＝16,1Hz),6.72(d,1H,H-15,J14/15＝16.1Hz),5.07(s,1H,苯甲基-CH2),4.43-4.33(m,2H,H-5,H-7),4.30-4.28(m,1H,H-2),4.25(q,2H,H-17a,H-17b),4.15-3.97(m,1H,H-10),3.77-3.71(m,1H,H-5ca),3.65(s,3H,OMe),3.63-3.58(m,1H,H-5cb),2.85-2.73(m,2H,H-12a,H-12b),2.13-2.03(m,1H,H-5a/1),2.03-1.92(m,2H,H-5b/1,次甲基-H(Val)),1.92-1.81(m,3H,H-5a/2,H-5b/2,H-11a),1.81-1.70(m,2H,H-11b,次甲基-H(Leu),1.63-1.55(m,1H,CH2a-Leu)),1.55-1.47(m,1H,CH2b-Leu),1.28(t,3H,CH3-18),0.96(dd,6H,2×CH3-Val),0.90(dd,6H,2×CH3-Leu)
ESI-MS:709.5{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物25)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.53(d,1H),8.19(d,1H),7.37-7.17(m,11H),6.83(dt,1H),5.78(d,1H),5.01(s,1H),4.73-4.65(m,1H),4.42-4.35(m,1H),4.32-4.25(m,1H),4.10(q,2H),3.99-3.92(m,1H),3.56(s,3H),3.55-3.43(m,2H),3.00(dd,1H),2.76(dd,1H),2.21-2.10(m,2H),2.10-2.00(m,1H),1.95-1,75(m,3H),1.72-1.42(m,5H),1.19(t,3H),0.91(d,3H),0.87(d,3H)
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-甘氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物26)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.20(d,1H),8.01(d,1H),7.50(d,1H),7.37-7.25(m,5H),6.87(dt,1H),5.81(d,1H),5.02(s,1H),4.39-4.35(m,1H),4.28-4.22(m,1H),4.11(q,2H),4.07-4.03(m,1H),4.01(dd,1H),3.80(dd,1H),3.61(s,3H),3.61-3.42(m,2H),2.32-2.20(m,2H),2.08-2.01(m,1H),1.95-1.88(m,1H),1.88-1.73(m,2H),1.81-1.60(m,3H),1.59-1.45(m,2H),1.21(t,3H),0.88(d,3H),0.83(d,3H)
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物27)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.14(d,1H),8.10(d,1H),7.42(d,1H),7.37-7.31(m,5H),6.87(dt,1H),5.82(d,1H),5.02(s,1H),4.53-4.45(m,1H),4.40-4.35(m,1H),4.25-4.18(m,1H),4.10(q,2H),4.05-3.97(m,1H),3.60(s,3H),3.56-3.50(m,1H),2.28-2.18(m,2H),2.09-2.00(m,1H),1.98-1.87(m,2H),1.87-1.73(m,2H),1.73-1.55(m,2H),1.55-1.50(m,1H),1.50-1.49(m,1H),1.21(m,6H),0.89(d,3H),0.84(d,3H)
2.1制备具有药效基团肽环境的抑制剂。(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸实例中氨基官能团处的反应
根据本发明的药效基团可例如(但不限于)由诸如谷氨酸等氨基酸制得。因此，例如当利用羧基甲基威蒂希试剂(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸时，获得具有α-氨基的本发明抑制剂。这一氨基可由可对氨基进行的任何反应修饰。
令人惊讶地得出，当所述氨基(-NXX')(只要其位于紧邻药效基团处)酰化或烷基化时，可主要获得有效抑制剂。具体来说，其将不会以游离伯胺形式存在。如果使用例如(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸作为生物电子等排药效基团，那么须通过取代氮原子处的两个氢中的至少一个(例如酰化)使氨基官能团变成较低极性的化合物。合成在这一氮处具有不同的非极性基团的抑制剂的实例在下文中给出，但不限于此。此外，除酰化反应外，可实现氨基的所有其它已知反应，只要不出现将引发迈克尔接受体结构元件降解的极高pH值或其它条件。
合成根据本发明的抑制剂中氨基官能团的修饰的一般描述：
本发明抑制剂中氨基的修饰通常可毫无困难地根据所述情况下的常见程序执行。给出如在(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸衍生物实例中氨基优选在已知条件下自身与药效基团反应的特例。通过例如(但不限于)以下合成顺序快速获取所述抑制剂的若干衍生物：用此处所述的方法使1.9的酯类似物Nα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酯与合适胺连接。从所得酰胺酸解裂解Boc保护基。这种盐在低pH值下稳定。当介质的pH值不高于9时，氨基的进一步转化不会碰到问题。
Nα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物28)
由283mgBoc-Gln-Pro-Leu-OMe(0.6mmol)起始，通过用三氟乙酸处理制备游离胺(H-Gln-Pro-Leu-OMe)的盐。将所得的微黄色油状物溶解于10mlDMF中。将Nα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酯(0.6mmol)溶解于10mlDMF中且加入229mgHATU(0.6mmol)和307μlDIPEA。将所得溶液立即加入上述胺(H-Gln-Pro-Leu-OMe)的溶液中且通过继续加入DIPEA使pH值约为9。在室温下搅拌1小时后，在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化产物。(色谱柱：32.5×3.2.cm，二氯甲烷/甲醇：95/5)
产量：345mg
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.10(d,1H),7.86(d,1H),7.07(s,1H),6.78-6.72(m,2H),6.66(s,1H),5.71(d,1H),4.42-4.33(m,1H),4.29-4.21(m,1H),4.19-4.10(m,1H),4.00(q,2H),3.85-3.79(m,1H),3.57-3.45(m,5H),3.49(s,3H),2.15-2.05(m,2H),2.05-2.01(m,2H),1.95-1.88(m,1H),1.80-1.72(m,2H),1.72-1.65(m,2H),1.65-1.45(m,3H),1.45-1.37(m,1H),1.37-1.31(m,1H),1.08(t,3H),0.78(d,3H),0.73(d,3H)
ESI-MS:676,4{M+Na}+
Nα-噻吩-2-羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物29)
将100mgNα-叔丁氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(28，0.152mmol)溶解于5ml二氯甲烷中且加入5ml三氟乙酸。将混合物在室温下搅拌1小时，且随后在真空下去除溶剂。将所得胺H-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯溶解于5mlDMF中。向19.6mg2-噻吩甲酸(0.153mmol)和58.2mgHATU(0.1553mmol)于5mlDMF中的溶液中加入52μlDIPEA(＝0.306mmol)。将混合物立即加入上述胺的溶液中。通过继续加入DIPEA，将pH值调节到约9。30分钟后，在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC色谱法纯化所得残余物。(SynergyMax，4μm，250×21.2mm，A洗提剂：0.1％FTA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％FTA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.44(de,1H),8.24(d,1H),8.22(d,1H),7.88(dd,1H),7.77(dd,1H),7.24(br.s.,1H),7.16(dd,1H),6.95-6.87(m,1H),6.80(br.S.,1H),5.83(d,1H),4.49-4.41(m,2H),4.37-4.33(m,1H),4.26-4.21(m,1H),4.08(q,2H),3.65-3.59(m,5H),2.31-2.23(m,2H),2.19-2.11(m,2H),2.09-1.99(m,1H),1.95-1,75(若干多重峰,6H),1.73-1.63(m,2H),1.59-1.51(m,1H),1.51-1.44(m,1H),1.19(t,3H),0.89(d,3H),0.83(d,3H)
ESI-MS:686,4{M+Na}+
根据相同方法，制备和纯化以下化合物：
Nα-呋喃-3-羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物30)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.24(m,3H),8.14(d,1H),7.73(t,1H),7.25(br.s,1H),6.94-6.86(m,2H),6.79(br.S.,1H),5.83(d,1H),4.49-4.41(m,2H),4.37-4.33(m,1H),4.28-4.21(m,1H),4.09(q,2H),3.66-3.59(m,5H),2.30-2.23(m,2H),2.18-2.11(m,2H),2.08-2.00(m,1H),1.95-1.64(若干多重峰,8H),1.59-1.51(m,1H),1.51-1.44(m,1H),1.20(t,3H),0.89(d,3H),0.84(d,3H)
ESI-MS:648.5{M+Na}+
Nα-异噁唑-5-羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物31)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8.70(d,1H),8.56(d,1H),8.13(d,1H),8.02(d,1H),7.03(br.s,1H),6.95(d,1H),6.71(dt,1H),6.59(br.S.,1H),5.65(d,1H),4.33-4.24(m,2H),4.18-4.15(m,1H),4.09-4.04(m,1H),3.91(q,2H),3.47-3.40(m,5H),2.13-2.04(m,2H),2.00-1.93(m,2H),1.90-1.82(m,1H),1.78-1.60(若干多重峰,6H),1.55-1.45(m,2H),1.39-1.34(m,1H),1.34-1.24(m,1H),1.01(t,3H),0.71(d,3H),0.65(d,3H)
ESI-MS:671.4{M+Na}+
Nα-(5-甲基-异噁唑-4-羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物32)
根据Street等人,J.Med.Chem.2004,3642-3657制备所使用的5-甲基-异噁唑-4-甲酸。
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8,97(s,1H),8,27(d,2H),8,22(d,1H),7,21(br.s,1H),6,90(dt,1H),6,77(br.S.,1H),5,83(d,1H),4,50-4,41(m,2H),4,38-4,33(m,1H),4,28-4,21(m,1H),4,08(q,2H),3,65-3,58(m,5H),2,61(s,3H),2,28-2,20(m,2H),2,18-2,11(m,2H),2,09-2,00(m,1H),1,95-1,77(若干多重峰,6H),1,72-1,61(m,2H),1,59-1,52(m,1H),1,52-1,45(m,1H),1,19(t,3H),0,89(d,3H),0,83(d,3H)
ESI-MS:685,5{M+Na}+
Nα-(5-甲基-异噁唑-3-羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物33)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8,51(d,1H),8,27(d,1H),8,21(d,1H),7,21(br.s,1H),6,88(dt,1H),6,77(br.s.,1H),5,83(d,1H),4,50-4,43(m,2H),4,38-4,33(m,1H),4,27-4,21(m,1H),4,09(q,2H),3,65-3,59(m,5H),2,50(s,3H),2,28-2,21(m,2H),2,19-2,10(m,2H),2,09-2,00(m,1H),1,95-1,77(若干多重峰,6H),1,72-1,61(m,2H),1,59-1,52(m,1H),1,52-1,45(m,1H),1,19(t,3H),0,88(d,3H),0,84(d,3H)
ESI-MS:685,5{M+Na}+
Nα-(反-3-(3-噻吩基)丙烯酰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物34)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8,20(m,2H),8,14(d,1H),7,87(s,1H),7,60(s,1H),7,42(d,1H),7,33(s,1H),7,21(br.s.,1H),6,88(dt,1H),6,76(br.s.,1H),6,56(d,1H),5,83(d,1H),4,55-4,40(m,2H),4,40-4,31(m,1H),4,29-4,20(m,1H),4,08(q,2H),3,70-3,48(m,5H),2,28-2,21(m,2H),2,19-2,10(m,2H),2,09-2,00(m,1H),1,95-1,77(若干多重峰,6H),1,72-1,61(m,2H),1,59-1,52(m,1H),1,52-1,45(m,1H),1,18(t,3H),0,88(d,3H),0,83(d,3H)
ESI-MS:712,5{M+Na}+
Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物35)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8,21(d,1H),8,13(d,1H),7,95(d,1H),7,21(br.s,1H),6,86(dt,1H),6,77(br.s.,1H),5,83(d,1H),4,46-4,42(m,2H),4,37-4,33(m,1H),4,29-4,22(m,1H),4,11(q,2H),3,68-3,59(m,5H),2,25-2,16(m,2H),2,16-2,10(m,2H),2,08-2,00(m,1H),1,94-1,78(若干多重峰,3H),1,84(s,3H),1,78-1,45(若干多重峰,6H)1,20(t,3H),0,89(d,3H),0,84(d,3H)
ESI-MS:618,5{M+Na}+
Nα-(4-三氟甲氧基-苯磺酰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物36)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8,24(d,1H),8,19(d,1H),8,14(d,1H),7,88(d,2H),7,54(d,2H),7,21(br.s.,1H),6,80(br.s.),6,76(dt,1H),5,70(d,1H),4,34-4,30(m,1H),4,26-4,20(m,1H),4,18-4,13(m,1H),4,09(q,2H),3,84-3,79(m,1H),3,60(s,3H),3,58-3,47(m,2H),2,18-1,97(若干多重峰,3H),1,91-1,84(m,1H),1,84-1,76(若干多重峰,4H),1,70-1,44(若干多重峰,6H),1,20(t,3H),0,88(d,3H),0,82(d,3H)
ESI-MS:800,5{M+Na}+
制备含有非蛋白原性氨基酸的抑制剂
术语“氨基酸”不应仅理解为天然存在的氨基酸或其衍生物而且通常应理解为具有至少一个氨基官能团和至少一个羧酸官能团的化合物。氨基酸在广义上应能够形成甜菜碱结构和/或应能够形成酰胺键。特别优选的形式是非蛋白原性α-氨基酸。所述非蛋白原性氨基酸可降低活性成分的活体内新陈代谢。
制备含有非蛋白原性氨基酸的抑制剂的一般合成描述：
这些氨基酸在其保护基和偶合化学方面可类似于蛋白原性氨基酸处理。因此，合成通常遵循上述方法。
此处，根据所属领域的技术人员熟知的方法用Boc或Fmoc保护基保护购得的非天然氨基酸的氨基官能团。相应的肽残余物的形成在溶液中或在固相上进行。随后从保护基释放肽片段且与带有药效基团的酸偶合。
如果打算进一步在N-末端处延长，那么使用衍生物1.9。所得产物可如实例7和8中所述进一步延长。
通过利用如1.10或1.11的衍生物，可获得具有稳定端基的较短抑制剂。
在下文中，所述含有非蛋白原性氨基酸的本发明抑制剂的两个实施例列于37和38中。
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-环己基甘氨酸-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物37)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8,19(d,1H),7,90(d,1H),7,45(d,1H),7,36-7,30(m5H),6,86(dt,1H),5,81(d,1H),5,02(s,2H),4,37-4,28(m,2H),4,28-4,18(m,1H),4,08(q,2H),4,06-4,00(m,1H),3,54(s,3H),3,56-3,44(m,2H),2,28-2,15(m,2H),2,09-1,98(m,1H),1,98-1,87(m,1H),1,87-1,56(若干多重峰,11H),1,56-1,51(m,1H),1,51-1,45(m,1H)1,20(t,3H),,1,08-1,02(m,3H),1,01-0,95(m,2H),0,89(d,3H),0,83(d,3H)
ESI-MS:721,6{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物38)
500-MHz-1H-NMR-cosy(DMSOd6):δ[ppm]＝8,06(d,1H),7,86(d,1H),7,54(d,1H),7,37,25(m5H),6,86(dt,1H),5,81(d,1H),5,11-5,05(m,1H),5,02(,s,2H),4,72-4,66(m,1H),4,32-4,24(m,1H),4,09(q,2H),4,09-4,01(m,1H),3,92-3,83(m,1H),3,61(s,3H),3,45-3,37(m,1H),2,31-2,18(m,2H),2,18-2,09(m,1H),2,07-1,99(m,1H),1,83-1,70(m,1H),1,70-1,46(若干多重峰,6H),1,32-1,27(m,1H),1,20(t,3H),0,93-0,74(m,12H)
ESI-MS:695,6{M+Na}+
含有非天然氨基酸的本发明抑制剂的另一优选形式可通过利用芳香族或脂肪族分子制备，其氨基和羧酸官能团不位于同一碳原子上且因此不是α-氨基酸。
令人惊讶地，所述结构上高度多样的抑制剂也显示良好的高抑制效能。
作为这类本发明抑制剂的实施例，给出化合物39。在化合物39中，间氨基-苯甲酸与带有药效基团的氨基酸1.9连接。含有“非α-氨基酸”的本发明抑制剂的合成遵循如本文中关于含有蛋白原性氨基酸的抑制剂所述的相同途径(图4)。在说明书的第19页到第21页，揭示更多的氨基酸类似物以及二肽模拟物，这些类似物和模拟物可根据本文中所述的一般合成说明使用或可并入非蛋白原性主链中。
(E)-(S)-6-苯甲氧基羰基氨基-6-[3-((R)-2-苯基氨甲酰基-吡咯烷-1羰基)-苯基氨甲酰基]-己-2-烯酸乙酯(化合物39)
将215mgboc-脯氨酸(1mmol)、135mgHOBt(1mmol)和305mgTBTU溶解于10mlDMF中。将342μlDIPEA(2mmol)加入所述溶液中且立即加入93mg苯胺于5mlDMF中的溶液中。在室温下搅拌1小时后，在真空下去除溶剂且将所得残余物溶解于200ml乙酸乙酯中。洗涤溶液三次，每次用30ml10％柠檬酸溶液、饱和NaHCO3溶液和水。经Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂。其得到213mgNα-叔丁氧基羰基-L-脯氨酰基苯胺。用TFA于二氯甲烷(1/1)中的10ml溶液处理1小时后，在真空下去除溶剂，且用乙醚处理油性残余物，得到111mgL-脯氨酰基苯胺。
将100mgL-脯氨酰基苯胺(0.52mmol)溶解于DMF中。向其中加入118mgboc-3-氨基-苯甲酸(0.5mmol)、71mgHOBt(0.5mmol)、157mgTBTU(0.5mmol)和170μlDIPEA(1mmol)的溶液。将混合物在室温下搅拌1小时，且随后在真空下去除溶剂。将残余物溶解于200ml乙酸乙酯中。洗涤溶液三次，每次用30ml10％柠檬酸溶液、饱和NaHCO3溶液和水。经Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂。此得到174mg呈白色固体的化合物39.1。
通过用存于二氯甲烷中的TFA(参见上文)处理从160mg化合物39.1(0.39mmol)裂解boc保护基。用乙醚处理残余物后，得到145mg伯胺(39.2)三氟乙酸盐。
将42mg39.2(0.1mmol)溶解于3mlDMF中。将29mgNα-叔丁氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-甲酯(1.9，0.1mmol)和38mgHATU(0.1mmol)溶解于5mlDMF中。向这一溶液中加入51μlDIPEA(0.3mmol)且立即向这一所得溶液中加入39.2的溶液。通过继续加入DIPEA，将pH值调节到9。30分钟后，在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化棕色油性残余物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0,1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0,1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
产量：43mg
ESI-MS:649,3{M+Na}+
实例40含有作为拟肽结构元件的吡啶酮。吡啶酮是非蛋白原性氨基酸的另一个实例(但不限于此)。合成途径对应于Dragovich等人(DragovichP.S.等人,J.Med.Chem.2002,45,1607-1623)公开的途径。
合成含吡啶拟肽的一般描述(参见图5)：将吡啶基插入二肽类似物形式中。由此，关键步骤是在吡啶衍生物(例如40.1)的氮与合适经取代的α-羟基甲酸(例如40.2)之间形成C-N键。所得二肽类似物(例如40.3)可在后续或先前反应中在羧酸以及氨基官能团处进一步修饰。由此，可使用本文中所包括或文献中已知的所有方法。
(E)-(S)-6-苯甲氧基羰基氨基-6-{1-[(S)-3-羧基-1-(3-甲基-丁基氨甲酰基)-丙基]-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-3-基氨甲酰基}-己-2-烯酰酸异丙酯(化合物40)
类似地操作这一合成。如文献中所述由购得的2-羟基-3-硝基吡啶起始制备化合物40.1(参见图5流程)。获得N-boc-(2-羟基-3-氨基吡啶)(40.1)。如下实现40.2的制备：将671mg购得的D-Nα-叔丁氧基羰基-谷氨酸-5-烯丙酯(Boc-Glu(O烯丙基)-OH，2.34mmol)溶解于中10mlDMF中且相继加入738mgTBU(2.3mmol)、316mgHOBT(2.34mmol)和605mg(800μl)。将这一所得溶液立即加入224mg异戊胺(2.57mmol)于5mlDMF中的溶液中。将混合物在室温下搅拌1小时，且随后在真空下去除溶剂。将油性残余物溶解于200ml二氯甲烷中且用10％柠檬酸溶液、10％NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤。干燥有机相和在真空下去除溶剂后，得到589mg呈纯形式的Boc-Glu(O烯丙基)-异戊酰胺。用存于二氯甲烷中的TFA处理后，裂解boc保护基，且所释放的氨基如文献(Winitz等人,J.Am.Soc.Chem.,1956,78,2423-2428)中所述经由重氮化作用转化为羟基。借助于硅胶色谱法(色谱柱：18×2.3cm，DCM/甲醇＝98/2)纯化后，得到221mg(D)-4-羟基-4-(3-甲基丁基氨甲酰基)-丁酸烯丙酯。
将200mg所得(D)-4-羟基-4-(3-甲基丁基氨甲酰基)-丁酸烯丙酯(0.77mmol)和140mgDIPEA(1.08mmol)溶解于二氯甲烷中且在氩气氛下冷却到-10℃。向所述溶液中逐滴加入132.9mg甲烷磺酰氯(0.92mmol)。30分钟后，用二氯甲烷稀释溶液且用饱和NaCl溶液洗涤。经Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂。此得到183mg甲磺酸酯40.2，其不经进一步纯化即可使用。
将237mg上述羟基吡啶40.1(1.13mmol)溶解于10ml无水THF中。加入43mgNaH(60％于矿物油中，1.08mmol)且在室温下在氮气氛下搅拌20分钟。向这一溶液中加入165mg甲磺酸酯40.2(0.49mmol)且使反应批料在回流下沸腾48小时。将反应批料随后用200ml乙醚稀释且用10％KHSO4溶液洗涤两次并用饱和NaCl溶液洗涤两次。借助于硅胶色谱法纯化所得残余物。(色谱柱：22×1.8cm，DCM/甲醇＝99/1)。此得到138mg呈纯形式的化合物40.3。
将125mg40.3(0.28mmol)溶解于无水THF中。在氩气氛下加入242mg吗啉(2.8mmol)且随后加入32mg四(三苯基膦)钯。将混合物在室温下搅拌45分钟。在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化所得羧酸(synergymax，4μm，250×21.2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。通过用存于二氯甲烷中的TFA处理裂解boc保护基后，得到101mg呈三氟乙酸盐形式的游离氨基酸4.4。
将35.8mg羧酸1.7(0.1mmol)连同38mgHATU(0.1mmol)一起溶解于5mlDMF中。向这一溶液中加入51μlDIPEA(0.3mmol)且向所得黄色溶液中加入42mg氨基酸4.4(0.1mmol)的溶液。通过继续加入DIPEA，将pH值调节到9。30分钟后，在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化棕色油性残余物(synergymax，4μm，250×21.2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；b洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
产量：23mg
ESI-MS:649,2{M+Na}+
3.制备具有替代乙烯电子受体基团的抑制剂
根据本发明的抑制剂含有乙烯电子受体基团。当合适醛(例如1.4)与合适鏻叶立德以威蒂格反应或霍纳-瓦得沃斯-埃蒙斯反应(J.Am.Chem.Soc,1961,83,1733)反应时，可获得所述迈克尔接受体系统。
制备可用于制备根据本发明的烯烃的本发明乙烯电子受体化合物(迈克尔系统)的其它实例(但不限于此)：脱酰化反应(Tetrahedon2004,2337)、克诺维纳盖尔缩合反应(J.Chem.Soc.PerkinTrans.1986,2137)或彼得森烯化反应(J.Chem.Soc.Perkin.Trans1,1985,1949)。特别优选的是与鏻叶立德的反应。合适经取代的鏻叶立德可购得或可容易地制备(例如J.Chem.Soc.,PerkinTrans1,1985,1481；J.Med.Chem.,1987,1995)。具有不同Z和Z'的根据式G的本发明抑制剂的相应前体的合成实例(但不限于此)提供于下文中。这些前体的进一步转化可用1.7或1.9所述的程序以及实例1到38进行。
3.1制备带有药效基团的氨基酸
N,N-二-(叔丁氧基羰基)-[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-7-叔丁酯(化合物3.1)
将100mgN,N-二-(叔丁氧基羰基)-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酰基-7-叔丁酯(1.8，0,22mmol)溶解于1ml乙醇中且加入503μl1摩尔浓度的NaOH溶液。将混合物在室温下搅拌3小时。通过加入各20ml的水和乙醚稀释溶液且随后用2摩尔浓度的HCl溶液将pH值调节到约2。将水相萃取两次，每次用20ml乙酸乙酯，且经Na2SO4干燥合并的有机相。在真空下去除溶剂后，得到呈无色油状物的游离羧酸。
产量：94mg
ESI-MS:452,4{M+Na}+
N,N-二-(叔丁氧基羰基)-[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-戊基酰胺基-7-叔丁酯(化合物UU3.2)
将90mg3.2获得的产物溶解于3.5ml无水二氯甲烷中。相继加入42mg二环己基碳二亚胺和30mg1-氨基戊烷。
将混合物在室温下搅拌整夜。随后在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所得残余物。(色谱柱：21×1.8cm，石油醚/乙酸乙酯＝9/1)。
产量：80mg
ESI-MS:521,2{M+Na}+
N,N-二-(叔丁氧基羰基)-[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-异丙酰基-7-叔丁酯(化合物3.3)
将100mgN,N-二-(叔丁氧基羰基)-L-2-氨基-5-氧代-戊酸-1-叔丁酯(1.4，0.258mmol)溶解于3ml无水苯中且加入93.5mg(异丙氧基羰基亚甲基)-三苯基磷烷(0.258mmol)(由文献中已知的常见程序制备)。将混合物在室温下搅拌5小时。随后在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所得油性残余物。(色谱柱：29×2.3cm，DCM/甲醇＝99.5/0.5)。
产量：91mg
ESI-MS:494.4{M+Na}+
N,N-二-(叔丁氧基羰基)-[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-苯甲酰基-7-叔丁酯(化合物3.4)
将100mgN,N-二-(叔丁氧基羰基)-L-2-氨基-5-氧代-戊酸-1-叔丁酯(1.4，0.258mmol)溶解于3ml无水苯中且加入109.2mg(苯甲氧基羰基亚甲基)-三苯基磷烷(SigmaAldrich，0.258mmol)。将混合物在室温下搅拌18小时。随后在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所得油性残余物(色谱柱：28×2.3cm，DCM/甲醇＝99/1)。
产量：94mg
ESI-MS:542,4{M+Na}+
也可制备呈环內和环外系统形式的根据本发明的迈克尔接受体。图6显示环戊烯酮(3.5)的制备(Novák等人,LiebigsAnn.Chem.1986,509-524)。
N,N-二-(叔丁氧基羰基)-[((L)-2-氨基-4-(3)-氧代-环戊-1-烯基)-丁酸]-1-叔丁酯(化合物3.5)
根据文献进行制备。
产量：126mg
ESI-MS:493,3
如1.7所述执行保护基的裂解和苯甲氧基羰基保护基的引入。
在合成过程中，所述的乙烯电子受体化合物中的一些显示在存在强酸的情况下不充分稳定。因此，1.7或1.9所述的条件不适合所述迈克尔接受体的合成。在例如关于化合物3.7到3.9提供的情况下，可成功进行1.16所述的合成的变化形式作为替代合成途径(3.6)。此得到的化合物根据本文中所述的方法(图2)进一步加工产生更加酸不稳定的迈克尔接受体。图7显示具有环外双键的合成嵌段(3.7)的制备。因此，所需的三苯基鏻盐不可购得，但可如文献中所述制得(BaldwinnJ.E.,J.Org.Chem.,1971,10,1441-1443)。
Nα-叔丁氧基羰基、Nα-苯甲氧基羰基-[L-2-氨基-5-氧代-戊酸]-1-2-苯基-2-丙酯(化合物3.6)
将2,95gZ-Glu(OMe)-OH(10mmol)溶解于200ml无水二氯甲烷中且在氮气氛下冷却到0℃。加入2.88g二环己基碳二亚胺(14mmol)和122mgN,N-二甲基氨基-吡啶(1mmol)。将混合物在0℃下搅拌15分钟且随后加入1.63g2-苯基-异丙醇(12mmol)。再过30分钟后，去除冰浴且将反应溶液在室温下再搅拌整夜。滤出沉淀固体且将所得粗产物借助于硅胶色谱法纯化(产量：1.53g)。
将以此方式获得的异丙基苯基酯(1.53g，3.7mmol)溶解于10ml乙腈中且接连加入90mgN,N-二甲基氨基-吡啶(0.7mmol)和1.58ml二碳酸二叔丁酯(Boc2O，7.4mmol)。将混合物在室温下在氮气氛下搅拌整夜。在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化油性残余物。此得到呈无色粘稠油状物的纯中间体(Z,Boc-Glu(OMe)-OiPrPh)。
将1.1gZ,Boc-Glu(OMe)-OiPrPh(2.14mmol)溶解于25ml无水乙醚中且在氩气氛下冷却到-78℃。缓慢逐滴加入2.36ml氢化二异丁基铝于正己烷中的1摩尔浓度溶液，且随后搅拌30分钟。通过加入1ml水使反应中止且随后使溶液解冻到室温。经硅藻土过滤制剂且浓缩滤液直到干燥。硅胶色谱法得到纯醛(Z,Boc-Glu(H)-OiPrPh，UU3.6
产量：667mg
ESI-MS:506,2[M+Na]+，406[M-Boc+Na]+
(L)-2-苯甲氧基羰基氨基-5-[2-氧代-亚二氢呋喃-(3E)-基]-戊酸(化合物3.7)
将12.4mgNaH(60％于矿物油中，0.3mmol)保持在氩气氛下且加入133mg溴化α-三苯基鏻-丁内酯(Baldwin，1971)于3.5ml无水DMF中的溶液。在室温下搅拌混合物直到停止形成气体，且随后加入溶解于0.5ml无水DMF中的150mg醛UU3.6(0.3mmol)。搅拌整夜后，在真空下去除溶剂且所获得的残余物是借助于硅胶色谱法纯化(产量：112mg)。
通过用存于二氯甲烷中的2％TFA处理，去除严重酸不稳定保护基且借助于硅胶色谱法获得呈纯形式的标题中所列的化合物(色谱柱：29.5×2.3cm，DCM/甲醇＝8/2)。
产量：65mg
ESI-MS:356,0[M+Na]+
Nα-苯甲氧基羰基)-[(E)-(L)-7-氨基-2-氧代-辛-3-烯-二甲酸]-1-乙酯(化合物3.8)
将556mgNα-叔丁氧基羰基、N-苯甲氧基羰基-L-2-氨基-5-氧代-戊酸-1-(2-苯基异丙基酯，3.6，1.15mmol)保持在20ml无水二甲苯中，且在室温下在氩气氛下加入432mg(三苯基磷叶立德)丙酮酸乙酯(Sigma-Aldrich，1.15mmol)的溶液。在115℃下搅拌4小时后，在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所得油性残余物(色谱柱：29×2.4cm，石油醚/乙酸乙酯＝99/1)。
通过将以上所获得的前体在室温下于具有1-2％TFA的二氯甲烷中搅拌1小时制备化合物3.8。借助于硅胶色谱法执行纯化。
产量：324mg
ESI-MS:386,2{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-[(Z)-(L)-2-氨基-7-氧代-辛-5-烯酸](化合物3.9)
将125mg3.6(0.258mmol)溶解于3ml无水苯中。向所述溶液中加入82mg乙炔-三苯基磷烷(0.258mmol)。将混合物在60℃下搅拌2小时。在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所获得的残余物。随后利用存于二氯甲烷中的2％TFA去除保护基和借助于制备型HPLC纯化得到化合物3.9。
(synergymax，4μm，250×21.2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，25％B到100％B，1％/min)。
产量：58mg
ESI-MS:328,1{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-(Z)-(L)-2-氨基-6-氰基-己-5-烯酸(化合物3.10)
将125mg3.6(0,.58mmol)溶解于3ml无水苯中。向所述溶液中加入78mg(三苯基磷叶立德)乙腈(Sigma-Aldrich，0.258mmol)。将混合物在70℃下搅拌4小时。在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所获得的残余物。随后，利用存于二氯甲烷中的2％TFA去除保护基且借助于制备型HPLC纯化得到化合物3.13。
产量：78mg
ESI-MS:311,2{M+Na}+
通过利用相应膦酸酯或鏻盐，还可经由霍纳-瓦得沃斯-埃蒙斯反应制备乙烯砜(例如3.11、3.12a和3.13)。特别关注的是可由以下反应进一步多样化的那些乙烯砜。Roush等人描述一种针对cruazin和木瓜蛋白酶的抑制剂的合成途径。(RoushW.R.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,2001,11,2759(和其中所引用的参见文献)；RoushW.R.,J.Am.Chem.Soc.,1998,120,10994)。文献中，由乙烯磺酸酯(例如参见图8流程中的3.12a)起始，产生磺酰氯(3.12.b)且随后转化为乙烯磺胺、N-烷氧基磺胺或具有不同残基的磺酸酯(图8流程)。实例列于3.14到3.16中。
令人惊讶地得出，所述具有磺酰基残基作为吸电子基团的迈克尔接受体也是转谷氨酰胺酶的有效抑制剂。实施例列于3.2.1中。
Nα-苯甲氧基羰基-(E)-(L)-2-氨基-6-甲烷磺酰基-己-5-烯酸(化合物3.11)
化合物3.11的制备可用3.7中所述的方法实现。制备乙烯砜所需的试剂((EtO)2P(＝O)SO2Me)可通过例如用间氯苯甲酸氧化购得的试剂((EtO)2P(＝O)SO2Me)(一种所属领域的技术人员已知的程序)获得。
合成的详细描述：
将10mgNaH(60％于矿物油中，0.258mmol)溶解于5ml无水DMF中且在氮气氛下加入59mg(EtO)2P(＝O)SO2Me(0.258mmol)。气体形成停止后，加入130mgUU3.6(0.258mmol)且将溶液在室温下搅拌整夜。在真空下去除溶剂且将存于二氯甲烷中的1％TFA溶液倒在所获得的残余物上。30分钟后，在真空下浓缩溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所得残余物(色谱柱：29×2.3cm，二氯甲烷/甲醇99/1)。
产量：89mg
ESI-MS:364,2[M+Na]+
Nα-苯甲氧基羰基、Nα-叔丁氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-乙氧基磺酰基-己-5-烯酸]-1-(2-苯基-2-丙酯)(化合物3.12a)
向119.8mgNaH(3mmol)中加入780mg(3mmol)乙基二乙基磷酰基甲烷磺酸酯(Carretero等人,1987)于20ml无水DMF中的溶液。气体形成停止后，加入1.45gUU3.6(3mmol)溶解于10ml无水DMF中的溶液。将混合物在室温下搅拌整夜。在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化所获得的残余物。去除Z异构体后，因此获得纯形式的化合物3.12.a(参见图8流程)。(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
产量：1,5g
ESI-MS:512,2{M-Boc+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基、N-叔丁氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-氯磺酰基-己-5-烯酸]-1-(2-苯基-2-丙酯)(化合物3.12b)
将1.47g化合物3.12a(2.5mmol)溶解于100ml丙酮中且加入941mg碘化四丁基铵(2.55mmol)。将溶液在回流下加热直到沸腾整夜。随后在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化四铵盐(参见图8流程)(色谱柱：2.5×27cm，DCM/MeOH/TEA8/2/0.1)。将所获得的盐(1.27g)溶解于无水二氯甲烷中且向溶液中加入一滴无水DMF。随后加入235mg三光气(0.8mmol)且将混合物在室温下在氮气氛下搅拌1小时。将溶液洗涤两次，每次用30ml水，经Na2SO4干燥且在真空下去除溶剂。因此，获得足够纯的形式的标题中所列的化合物，其不经进一步纯化即执行以下反应。
产量：803mg
ESI-MS:502.1{M-Boc+Na}+
以举例的方式说明具有替代残基的乙烯乙烯砜的制备。
通过利用((EtO)2P(＝O)SO2Phe)根据关于化合物3.11所述的相同合成途径可获得化合物UU3.13。
Nα-苯甲氧基羰基-(E)-(L)-2-氨基-6-苯基磺酰基-己-5-烯酸(化合物3.13)
ESI-MS:426.1[M+Na]+
Nα-苯甲氧基羰基-((E)-(L)-2-氨基-6-苯甲氧基磺酰基)-己-5-烯酸(化合物3.14)
将150mgNα-苯甲氧基羰基,Nα-叔丁氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-氯磺酰基-己-5-烯酸]-1-(2-苯基-2-丙酯)(3.12b，0.25mmol)溶解于10ml无水DCM中。接着，在氩气氛下加入30mg苯甲醇和42mg1,8-二氮杂二环[5,4,0]-十一-7-烯(DBU，0.27mmol)。
将混合物在室温下搅拌整夜。向溶液中加入200μlTFA，将溶液再搅拌30分钟。在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化油性残余物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0,1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
产量：60,6mg
ESI-MS:456.2{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-二甲基氨磺酰基]-己-5-烯酸(化合物UU3.15)
将150mgNα-苯甲氧基羰基,Nα-叔丁氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-氯磺酰基-己-5-烯酸]-1-(2-苯基-2-丙酯)(3.12b，0.25mmol)溶解于10ml无水DCM中。接着，在氩气氛下加入42mg1,8-二氮杂二环[5,4,0]-十一-7-烯(DBU，0.27mmol)和138μl2摩尔浓度的二甲胺(0.27mmol)于THF中的溶液。
将混合物在室温下搅拌整夜。向溶液中加入200μlTFA，将溶液再搅拌30分钟。在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化所得油性残余物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，40％B到100％B，1％/min)。
产量：66mg
ESI-MS:393.12{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-((E)-(L)-2-氨基-6-苯甲氧基氨磺酰基)-己-5-烯酸(化合物UU3.16)
根据3.14和3.15中所述的程序通过利用44mgO-苯甲基羟基胺盐酸盐(0.27mmol)作为亲核试剂制备标题中所列的化合物。
产量：53mg
ESI-MS:393.12{M+Na}+
根据1.和2.中所述的方法，可由3.中所述的带有药效基团的氨基酸制备表2中所列的抑制剂。另外，下文(3.2)给出一些实施例。
3.2以举例的方式提供含有替代乙烯电子受体基团的抑制剂
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-2-氨基-6-甲烷磺酰基]-己-5-烯基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.1)
将27mgNα-苯甲氧基羰基-(E)-(L)-2-氨基-6-甲烷磺酰基-己-5-烯酸(3.11，79μmol)溶解于2.5mlDMF中。接着，加入30mgHATU(79μmol)和27mlDIPEA(158μmol)且将所得溶液立即加入H-Gln-Pro-Leu-OMe(79μmol)(根据方法1制备)的三氟乙酸盐于5mlDMF中的溶液中。通过继续加入DIPEA，将pH值调节到9。如关于化合物1所述执行加工：(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。
产量：40mg
ESI-MS:716.5{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-二甲基氨磺酰基]-己-5-烯基]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.2)
将33mgNα-苯甲氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-二甲基氨磺酰基]-己-5-烯酸(3.15，89μmol)溶解于2.5mlDMF中。接着，加入34mgHATU(89μmol)和30μlDIPEA(158μmol)且将所得溶液立即加入H-Gln-Pro-Leu-OMe(89μmol)(根据方法1制备)的三氟乙酸盐于5mlDMF中的溶液中。通过继续加入DIPEA，将pH值调节到9。如关于化合物1所述执行加工：(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，35％B到100％B，1％/min)。
产量：42mg
ESI-MS:745.3{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基-[(L)-2-氨基-4-(3)-氧代-环戊-1-烯基]-丁酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.3)
如1.7所述将化合物3.5去保护且使其转化为Nα-苯甲氧基羰基保护衍生物。将30.3mgNα-苯甲氧基羰基-[(L)-2-氨基-4-(3)-氧代-环戊-1-烯基]-丁酸(0.1mmol)溶解于7.5mlDMF中。接着，加入38mgHATU(0.1mmol)和51μlDIPEA(0.3mmol)且将所得溶液立即加入H-Gln-Pro-Leu-OMe(0.1mmol)(根据方法1制备)的三氟乙酸盐于7.5mlDMF中的溶液中。通过继续加入DIPEA，将pH值调节到9。如关于化合物1所述执行加工：(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
产量：26mg
ESI-MS:692.2{M+Na}+
Nα-苯甲氧基羰基[(L)-2-氨基-5-(2-氧代-亚二氢呋喃-(3E)-基)]-戊酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物3.2.4)
将58mg(L)-2-苯甲氧基羰基氨基-5-[-2-氧代-亚二氢呋喃-(3E)-基]-戊酸(3.7,0.17mmol)溶解于10mlDMF中。接着，加入64mgHATU(0.17mmol)和87μlDIPEA(0.5mmol)且将所得溶液立即加入H-Gln-Pro-Leu-OMe(0.17mmol)(根据方法1制备)的三氟乙酸盐于10mlDMF中的溶液中。通过继续加入DIPEA，将pH值调节到9。如关于化合物1所述执行加工：(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，25％B到100％B，1％/min)。
产量：46mg
ESI-MS:708.4{M+Na}+
4.C-末端的变化
显然，在人类疾病的治疗中使用本发明转谷氨酰胺酶抑制剂作为活性成分取决于化合物的生物可用性和新陈代谢。肽活性成分的新陈代谢通常相对较快。因此，有效剂量降低。为抵制这一过程，通常使肽活性成分转化为拟肽。这些模拟物可在C-末端含有除上述甲酯以外的其它酯、伯酰胺、仲酰胺和叔酰胺以及作为非肽官能团的为C-末端端基的游离羧酸。本发明抑制剂的固相合成显示于图9中。肽固相系统的一般合成说明的详细列表可见于例如FmocSolidPhasePeptideSynthesis,Apracticalapproach,Chan,W.C.,WhiteP.D.,OxfordUniversityPress中。作为一个具体实施例，以化合物4.1给出C-末端酰胺的合成。可通过利用相应胺在第一个偶合步骤中获得仲酰胺。(实例请参见化合物5或5.1的合成)
举例来说，可制备四唑或磺酰胺作为羰基替代物(JohansonA.等人,Bioorg.&Med.Chem.,11,2003,2551-68，参见图10)。
令人惊讶地，所得部分高极性的分子是高度有效的转谷氨酰胺酶抑制剂。
下文描述一些具体实施例。
根据本发明的抑制剂的固相合成的实例
Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-(八氢吲哚-2-羧基l)-L-亮氨酰基酰胺(化合物4.1)
根据文献已知的方法通过用存于DMF中的20％哌啶处理从Fmoc保护基释放364mg塞伯酰胺树脂(0.2mmol，NovaBiochem)。根据所属领域的技术人员所知的方法通过利用141mgFmoc-Leu-OH(0.4mmol，Fluka)、126mgTBTU(0.39mmol，Fluka)、54mg(0.4mmol)和136μlDIPEA(0.8mmol)使所得氨基与Fmoc-Leu-OH偶合。1小时后，滤出反应批料且重复彻底洗涤。由凯撒测试(Kaisertest)证明偶合反应是否完成。通过用存于DMF中的20％哌啶处理高分子载体裂解Fmoc保护基。滤出反应溶液且用DMF彻底洗涤树脂。在以上所列举的条件下用157mgFmoc-L-八氢吲哚-2-甲酸(Fmoc-Oic-OH，0.4mmol)酰化聚合结合亮氨酸所释放的氨基。由凯撒测试证明反应是否完成。随后滤出反应批料且用DMF彻底洗涤高分子载体。从Oic裂解Fmoc保护基且洗涤反应溶液后，使带有药效基团的氨基酸Nα-苯甲氧基羰基-{(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸}-1-乙酯(1.7)与所释放的氨基偶合。因此，将134mg1.7(0.4mmol)溶解于DMF中。接着，加入150mgHATU(0.39mmol)和136μlDIPEA且然后加入到聚合结合胺中。1小时后，滤出反应溶液且用DMF彻底洗涤树脂。由凯撒测试证明反应是否完成。
通过用1％TFA于二氯甲烷中的溶液处理载体物质30分钟实现标题中所列的化合物从高分子载体的裂解。在真空下浓缩所得产物溶液且借助于制备型HPLC纯化残余物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0,1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
产量：78mg
ESI-MS:720.3{M+Na}+
Na-(哌啶基-4-羰基)-{[(E)-(L)-2-氨基-6-苯基磺酰基]-己-5-烯基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-1-环戊基甲基-2-氧代-2-(1H-四唑-5-基)-乙酰胺(化合物4.2)
以汇集方式进行合成(综述：参见图11流程)。如3.11所述制备带有药效基团的氨基酸(Na-(N-boc-(哌啶基-4-羰基))-{[(E)-(L)-2-氨基-6-苯基磺酰基]-己-5-烯酸，4.2.1)。使用N-boc-(哌啶基-4-甲酸)代替Z-OSu，N-boc-(哌啶基-4-甲酸)可由所属领域的技术人员已知的方法由市面上的哌啶基-4-甲酸制备。L-1-环戊基甲基-2-氧代-2-(1H-四唑-5-基)-乙酰胺(4.2.2)可由母体化合物Na-叔丁氧基羰基-β-环戊基丙氨酸(Bachem)根据文献(JohansonA.等人,Bioorg.&Med.Chem.,11,2003,2551-68)中已知的方法制备。裂解boc保护基后，由HCl/乙醚溶液获得胺4.2.2的盐酸盐。
首先固相形成标题中所列的化合物：根据所属领域的技术人员已知的方法和4.1所列的方法，利用424mgTBTU(1.32mmol)、182mgHOBt(1.35mmol)和483μlDIPEA(2.7mmol)使0.5gH-Pro-2ClTrt-树脂(Fluka，0.45mmol)与455mgFmoc-Phe-OH偶合。凯撒测试和用DMF洗涤反应溶液后，用存于DMF中的20％哌啶裂解Fmoc保护基，且接着利用283mgTBTU(0.88mmol)和121mgHOBt(0.9mmol)与342mg(0.9mmol)带有药效基团的氨基酸4.2.1偶合。通过用1％TFA于二氯甲烷中的溶液处理高分子载体30分钟从高分子载体裂解中间体Nα-(哌啶基-4-羰基)-{[(E)-(L)-2-氨基-6-苯基磺酰基]-己-5-烯基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酸(4.2.3)。浓缩滤液且将所获得的残余物与甲醇重复共蒸馏(产量：134mg)。
向72mg4.2.3(0.12mmol)于5mlDMF中的溶液中相继加入38mgTBTU(0.12mmol)、16mgHOBt(0.12mmol)和62μlDIPEA(0.36mmol)且将所得溶液立即加入上述化合物4.2.2的盐酸盐(29.3mg)于2mlDMF中的溶液中。在室温下搅拌1小时后，在真空下去除溶剂。通过用TFA/DCM(1/1)处理从所得残余物裂解boc保护基，且借助于制备型HPLC纯化标题中所列的化合物。(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
产量：68mg
ESI-MS:816.3{M+H}+
Nα-苯甲氧基羰基-[(E)-(L)-2-氨基-6-苯甲氧基磺酰基-己-5-烯基]-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基苯甲基磺酰胺(化合物4.3)
根据文献中已知的方法和上述方法借助于存于DMF中的TBTU、HOBt和DIPEA使290mg化合物4.3.1(1mmol，根据文献(JohansonA.等人,Bioorg.&Med.Chem.,11,2003,2551-2568，参见图10流程10b)中已知的方法制备)与boc-缬氨酸偶合。为纯化产物，将所得残余物溶解于乙酸乙酯中且相继用10％柠檬酸、饱和NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤且随后经Na2SO4干燥(产量：342mg)。从100mg中间体(0.22mmol)裂解boc基团，且如上所述使所得胺与98mg(＝0.22mmol)带有药效基团的氨基酸UU3.14偶合。
在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化标题中所列的化合物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
产量：100mg
ESI-MS:791.3{M+Na}+
5.使根据本发明的抑制剂转化为拟肽
肽活性成分通常会经历活体内快速酶促降解或其它新陈代谢反应。所产生的代谢物通常显示较低抑制活性和/或较低的标靶选择性。因为能够水解肽键的酶过剩，所以这一降解主要发生于肽主链本身。为抵制这一过程，即降低所存在的肽抑制剂的活体内降解，通常制备肽样或生物电子等排氨基酸嵌段。电子等排物或生物电子等排物是“显示引发类似生物效应的化学和物理性质的基团或分子”(参见ThornberC.W.,Chem.Soc.Rev.,8,563-580)。原则上，当发现活体内更稳定的生物电子等排基团时，可更换有效肽抑制剂中的每个基团。
因此，下文描述拟肽的一些实例(但不限于此)和一些常用生物电子等排基团的合成。
通过仲胺取代酰胺键
(E)-(S)-6-[(S)-1-((S)-2-乙基氨甲酰基-吡咯烷-1-羰基)-2-甲基-丙基氨甲酰基]-6-(2-哌啶-4-基-乙基氨基)-己-2-烯酸异丙酯(化合物5.1)
反应综述：参见图12流程
合成的详细描述：
独立地形成部分分子5.1.5和5.1.6。
如关于化合物5.a所述，由乙胺于水中的70％水溶液和boc-Pro-OH起始，进行胺5.1.6的合成。
如下制备部分分子5.1.5：
向1gB-boc-4-哌啶乙酰基醛(Aldrich，4.4mmol)于30ml无水二氯甲烷中的溶液中加入1.92gH-Glu(OMe)-OtBu(Bachem，8.8mmol)和4g分子筛逐滴加入467μl乙酸(8.8mmol)和2.84g三乙酰氧基硼氢化钠(13.2mmol，Aldrich)于无水二氯甲烷中的溶液且将反应溶液在室温下在保护气体下搅拌36小时。由薄层色谱图判断，此后反应批料中不再存在反应物。经硅藻土过滤稍不透明的溶液。用100ml二氯甲烷稀释滤液且用40ml1NNaOH洗涤。去除有机相且用20l二氯甲烷再萃取水相三次。经Na2SO4干燥合并的有机相且在真空下去除溶剂。将所得粗产物不经进一步纯化即溶解于乙腈中且由boc2O和DMAP使其转化为化合物UU5.1.3，假定完全转化。以与1.3的合成的相同方式进行反应。借助于硅胶色谱法执行纯化(色谱柱：30×2.3cm，石油醚/乙酸乙酯：9/1，产量：977mg)。
将950mg甲酯(1.8mmol)溶解于无水乙醚中且如关于1.4的合成所述在78℃下还原成醛5.1.3。转化完成且可使粗产物不经再次色谱纯化即在威蒂格反应条件下转化为迈克尔接受体。因此，将醛5.1.3的粗产物溶解于20ml苯中，且在室温下加入651mg(2-丙氧基羰基亚甲基)-三苯基磷烷(1.8mmol)。将混合物在这一温度下搅拌整夜，且随后在真空下去除溶剂。借助于硅胶色谱法纯化化合物(色谱柱：22×2.3cm，石油醚/乙酸乙酯：9/1，产量：522mg)。如在室温下用TFA/DCM(1/1)处理所述进行所有三个保护基的裂解。可借助于制备型HPLC执行后续纯化。Synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。获得211mg游离氨基酸5.1.4。
将200mg5.1.4(0.55mmol)在室温下溶解于DMF中且加入248mgboc-OSu(1.15mmol)。用DIPEA将pH值调节到8-9，且将溶液在室温下搅拌整夜。在真空下去除溶剂和硅胶色谱法(色谱柱：20×1.3cm，二氯甲烷/甲醇：95/5)后，获得178mg纯化化合物5.1.5。
制备实例5.1
在存在HOBt的情况下通过利用TBTU毫无疑问地使羧酸5.1.5与胺5.1.6偶合。因此，将50mg羧酸(95μmol)溶解于DMF中。向所述溶液中相继加入29mgTBTU、13mgHOBt和40μlDIPEA。加入碱后立即将溶液加入5.1.6(95μmol)的三氟乙酸盐(33mg)的溶液中。用DIPEA将pH值调节到约10且在室温下搅拌1小时后，在真空下去除溶剂。将油性残余物溶解于50ml乙酸乙酯中且洗涤两次，每次用10ml存于水中的10％柠檬酸和饱和NaHCO3溶液。通过用存于二氯甲烷中的TFA处理从所得产物裂解两个boc保护基。可借助于制备型HPLC获得呈纯化形式的标题中所列的化合物(5.1)werden(synergymax，4μm，250×21.2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
产量：19mg
ESI-MS:550.4{M+H}+
由酮基亚甲基或羟基亚甲基取代酰胺键
使肽主链在活体内稳定的另一种选择在于由碳原子取代酰胺键的氮原子。标记所得化合物为酰胺键的羟基亚甲基或酮基亚甲基电子等排物。合成大部分通过二肽类似物执行，所述类似物单独制备且随后并入相应的分子环境。所述模拟物和类似物详细论述于本文的第19页到第21页。令人惊讶地，根据本发明的抑制剂可以这种方式修饰而不减弱其抑制效能。
作为本发明抑制剂的这种拟肽修饰的实例(但不限于此)，图11到13中给出化合物5.2到5.4的合成。本发明抑制剂5.2(图13)和5.3(分别a和b；图14)的制备由合适的异噁唑作为二肽类似物进行。
当残基A为烯性侧链所连接的仲取代原子、优选碳原子时，优选获得有效抑制剂。优选氮原子与这一优选仲取代的碳原子结合。已令人惊讶地发现，当这一氮原子经其它原子、优选碳原子取代时，也可获得有效抑制剂，如E＝CH2的式(II)中所示。
X＝NH、CH2、Oa.o.
这一氮经取代的拟肽抑制剂的可能的合成显示于图15中。作为一实施例(但不限于此)，给出化合物UU5.4。
作为在本发明抑制剂的不同位置制备羟基亚甲基和酮基亚甲基电子等排物的一个具体实施例，给出化合物5.3a和b和5.4的合成。
羟基亚甲基和酮基亚甲基生物电子等排物的合成的一般描述(图11和12流程)：
羟基亚甲基和酮基亚甲基结构元件的制备可例如经由如Haug等人和Litera等人(Haug,B.E.等人,Org.Lett.,2004,6,4783-4786；Litera,J.等人,Collet.Czech,Chem.Commun.,1998,63,231-244，参见图13流程)所述的化合物5.2.1进行。
举例来说，图13流程中的合成顺序由文献中所述的内酯5.2.1起始。这一内酯优选在DMF中热处理下用胺、优选肽氨基酸或肽打开为羟基亚乙基类似物。用氢化钠后续环化成噁唑烷酮。如1.3中所述，用另一boc基团保护噁唑烷酮的酰胺官能团。可由所属领域的技术人员已知的方法通过利用氟化四丁铵(TBAF)或在外消旋化反应情况下通过THF/水混合物中的乙酸实现伯醇的释放。根据斯文(Swern)的变化形式(Omura,K.；Swern,D.Tetrahedron,1978,34,1651-1660)能够后续氧化成为醛。通过用合适鏻叶立德以威蒂格反应或霍纳-瓦得沃斯-埃蒙斯反应(JACS,1961,83,1733)转化合适醛获得根据本发明的迈克尔接受体系统。作为实例(但不限于此)，与图11流程中的化合物1.5类似，使用(乙氧基羰基亚甲基)-三苯基磷烷。用TFA打开噁唑烷酮且使所释放的β-氨基醇(5.2.2)在氮原子处衍生。
根据本发明的抑制剂还可通过用氨基官能团使异氰酸酯转化为脲衍生物(参见图11流程，化合物5.2.a，由例如Davies,J.S.,J.Chem.Soc.PerkinTrans2,1992,1225-1231所说明)来获得。可用合适的活性酯(例如Z-OSu)通过形成氨基甲酸酯实现5.2.2和类似化合物中的游离氨基官能团的衍生化，或如3.中所述，用羧酸通过形成酰胺键实现衍生化。合成酮基亚甲基类似物的实例(但不限于此)可由羟基亚甲基衍生物经由根据戴斯-马丁(Dess-Martin)(Dess,D.B；Martin,J.C.JOC,1983,48,4155)方法后续氧化制备。
羟基亚甲基和酮基亚甲基生物电子等排物的一般合成说明(图15)：
经由Ghosh等人和Brady等人(Ghosh,A.K；JACS,2000,122,3522；Brady,S.F.,Bioorg&Med.Chem.Lett.,2004,14,601)所述的化合物5.4.1制备E＝CH2的根据本发明的抑制剂。作为一个实例(但不限于此)，图15中给出合成顺序。
合成的一般描述(参见图15)
合成顺序由文献(Ghosh,A.K；JACS,2000,122,3522；Brady,S.F.,Bioorg&Med.Chem.Lett.,2004,14,601)中所述的内酯5.4.1起始。用LiOH将这一内酯打开为羟基亚乙基类似物。优选用胺进行C-末端羧基官能团的后续衍生。由斯文的变化形式能够后续氧化仲羟基官能团以及伯醇。当用合适鏻叶立德以威蒂格反应或霍纳-瓦得沃斯-埃蒙斯反应转化合适醛时，又获得迈克尔接受体系统。如本文中其它地方所述，裂解N-末端处的boc基团后，这一氮处可发生相同的连续反应。
实施例
S)-2-[((S)-1-{(E)-2R,5S}-2-(4-氟苯甲基)-9-甲烷磺酰基-5-[(5-甲基-异噁唑-3-羰基)-氨基]-4-氧代-壬-8-烯酰基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基]-4-甲基-戊酸甲酯(化合物5.3.b)
将750mg[(1S)-1-[(4R)-4-(4-氟)-苯甲基-5-氧代-四氢-呋喃-(2R)-2-基]-4-(叔丁基-二甲基硅烷基氧基)-丁基]-碳酰二胺酸叔丁酯(5.3.1，参见图14流程，根据Haug等人,Org.Lett.,2004,6,4783-4786制备，1.51mmol)溶解于20mlTHF中且加入759mgH-Pro-Leu-OMe(3.14mmol)。通过加入DIPEA将反应批料的pH值调节到约11且加热到40℃历时4小时。在真空下去除溶剂且将所得油性残余物溶解于200ml乙酸乙酯中。将有机相用NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，且经Na2SO4干燥。获得1.0g粗产物(5.3.2)，其不经另外的纯化即可用于进一步转化。在搅拌下向1g5.3.2(1.36mmol)于8ml无水DMF中的溶液中加入271mgNaH(60％于矿物油中)。在室温下搅拌3小时后，加入5ml饱和NaCl溶液且将混合物萃取三次，每次用20ml乙酸乙酯。经Na2SO4干燥合并的有机相且在真空下去除溶剂。借助于硅胶色谱法纯化产物(5.3.3)(色谱柱：21×2.3cm，二氯甲烷/甲醇：95/5，产量：685mg)。
如关于化合物1.3所述，将670mg5.3.3(1mmol)溶解于乙腈中且用叔丁氧基羰基保护氮。再借助于硅胶色谱法纯化产物(5.3.4)(色谱柱：26×2.3cm，二氯甲烷/甲醇：99/1，产量：596mg)。
将590mg硅醚5.3.4(0.77mmol)溶解于25mlTHF中且在室温下加入乙酸于THF和水(10/2/6)中的10ml溶液。在室温下搅拌1小时后，在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所得固体残余物(色谱柱：21×1.2cm，二氯甲烷/甲醇：9/1，产量：465mg)。以斯文氧化将所获得的伯醇氧化为醛5.3.5。因此，将100mg乙二酰氯(0.786mmol)溶解于5ml二氯甲烷中。将这一溶液在氮气氛下冷却到-60℃且随后缓慢逐滴加入132mgDMSO(1.7mmol)于2ml二氯甲烷中的溶液。将混合物在-60℃下再搅拌10分钟且随后加入460mg(0.715mmol)上述醇于2ml二氯甲烷中的溶液。在这一温度下再搅拌15分钟后，加入3.5g三乙胺(35mmol)。将溶液在-60℃下搅拌5分钟，然后移走低温恒温器。溶液在30分钟期间解冻到0℃。在这一温度下，加入10ml水，且将反应批料剧烈搅拌10分钟。去除有机相，且将水相洗涤两次，每次用10ml二氯甲烷。经Na2SO4干燥合并的有机相且在真空下浓缩到干燥。如关于化合物3.11所述，所得醛5.3.5不经进一步纯化即可以霍纳-瓦得沃斯-埃蒙斯反应转化为乙烯砜5.3.6。借助于制备型色谱法执行纯化(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。产量(5.3.6)：419mg。
在15mlTFA/DCM(1/1)溶液中处理400mg噁唑烷酮5.3.6(0.55mmol)得到定量产量(400mg)的呈三氟乙酸盐形式的氨基醇5.3.7。其不经另外的纯化即可使用。
将8.7mg5-甲基-异噁唑-4-甲酸(69μM，制备：Street等人,J.Med.Chem.,2004,3642-3657)溶解于2mlDMF中且加入26mgHATU(138μmol)和23μlDIPEA(140μmol)。将这一溶液立即加入50mg氨基醇5.3.7(69μmol)于3mlDMF中的溶液中。在室温下搅拌30分钟后，反应结束。在真空下去除溶剂且借助于制备型色谱法纯化产物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
产量(5.3.a)：38mg
ESI-MS:729.4{M+Na}+
将19mg5.3.a(27μmol)溶解于2ml二氯甲烷中且向这一溶液中加入存于二氯甲烷中的12.5mg1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并二氧杂环戊烯-3-(1H)-酮(Dess-MartinPeriodan，29.7μmol)。将溶液在室温下搅拌20分钟。在真空下去除溶剂且借助于制备型色谱法纯化标题中所列的化合物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。
产量(5.3.b)：11mg
ESI-MS:727.4
(E)-(6R,9S)-9-苯甲氧基羰基氨基-6-[2-(2-乙基氨甲酰基-八氢吲哚-1-基)-1-甲基-2-氧代乙基氨甲酰基]-8-氧代-10-苯基-癸-2-烯酸-异丙酯(化合物5.4)
由文献(Ghosh,A.JACS,2000,122,3522；Brady,S.F.Bioorg&Med.Chem.Lett.,2004,14,601)中已知的内酯5.4.1起始合成。其如其中所述加以制备。将363mg5.4.1(1mmol)溶解于5ml甲醇中且与1.1ml1NLiOH溶液一起在室温下搅拌整夜。随后用1NHCl将pH值调节到3-4，且在真空下去除溶剂。将所得油性残余物溶解于100ml二氯甲烷中且用10％柠檬酸洗涤两次和用饱和NaCl溶液洗涤两次。经Na2SO4干燥有机相且在真空下去除溶剂后，获得350mg呈纯形式的羧酸UU5.4.2。
将335mg羧酸5.4.2(0.87mmol)溶解于5mlDMF中且相继加入276mgTBTU(0.86mmol)、118mgHOBt和451μlDIPEA。此后立即向这一溶液中加入334mg胺H-Ala-Oic-NHEt(0.87mmol)的三氟乙酸盐(334mg)的溶液。在室温下搅拌1小时后，在真空下去除溶剂且借助于制备型色谱法纯化所得固体残余物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)。获得409mg二醇5.4.3。
将118μl乙二酰氯(1.38mmol)溶解于10ml二氯甲烷中。将这一溶液在氮气氛下冷却到-60℃且随后缓慢逐滴加入212μlDMSO(3mmol)于5ml二氯甲烷中的溶液。将溶液在-60℃下再搅拌10分钟且随后加入398ml上述二醇5.4.3(0.63mmol)于2ml二氯甲烷中的溶液。在这一温度下再搅拌15分钟后，加入6.2g三乙胺(60mmol)。将溶液在-60℃下搅拌5分钟且随后移走低温恒温器。溶液在30分钟期间解冻到约0℃。在这一温度下，加入10ml水，且将反应批料剧烈搅拌10分钟。去除有机相，且将水相洗涤两次，每次用10ml二氯甲烷。经Na2SO4干燥合并的有机相且在真空下浓缩以干燥。根据HPLC和薄层色谱法所得醛5.4.4是纯的且不经进一步纯化即可使用。
根据化合物3.3的制备说明，将300mg醛5.4.4(0.48mmol)溶解于15ml苯中且转化为烯烃5.4.5。借助于硅胶色谱法执行纯化(色谱柱：20×2.3cm，二氯甲烷/甲醇：98/2，产量：227mg)
将50mg烯烃5.4.5(70μmol)溶解于3ml二氯甲烷中且加入1.5ml三氟乙酸。在室温下搅拌45分钟后，向这一溶液中加入5ml甲醇，且将混合物在真空下浓缩以干燥。
将所得残余物溶解于5mlDMF中且加入17.4mgN-(苯甲氧基羰基氧基)-丁二酰亚胺(Z-OSu，70μmol，Fluka)。用DIPEA将溶液的pH值调节到约8-9。将溶液在室温下搅拌两小时，且随后在真空下去除溶剂。通过用制备型HPLC纯化(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，30％B到100％B，1％/min)，获得呈纯形式的标题中所列的化合物。
产量：30mg
ESI-MS:767.4{M+Na}+
由羟基乙基氨基取代酰胺键
上述拟肽的特征在于相应更换或去除酰胺键的一个原子。因此，产生不经历新陈代谢或以至少比最初肽键低得多的程度经历新陈代谢的新化学结构。这一使得化学与生物电子等排结构之间可能的差异最小的策略确保所获得的化合物仍是有效的根据本发明的抑制剂。已令人惊讶地发现即使高级的结构修饰也得到有效的转谷氨酰胺酶抑制剂。这一取代的一个实例(但不限于此)是羟基乙基氨基。
羟基乙基氨基生物电子等排物的合成的一般描述
羟基乙基氨基生物电子等排物的合成的实例(但不限于此)描述于图16中。作为实施例，给出化合物5.6的合成(也参见图17)。
对于本发明抑制剂的羟基乙基氨基类似物的制备，优选使例如化合物5.5.1(Aldrich)的合适取代的环氧化物与胺反应。这些胺优选为在C-末端处经保护的氨基酸。特别优选的是肽或拟肽。所使用的胺特别可早已含有本发明的药效基团，即与吸电子基团共轭的双键。可经由戴斯-马丁反应或类似反应使所得羟基乙基氨基类似物中的仲羟基氧化成酮。必要时，在合成过程中，可在这一阶段将新形成的仲氨基官能团邻位保护成boc基团。裂解后，获得所述类型的boc保护基胺5.5.2。如果本发明药效基团不紧邻羟基乙基氨基生物电子等排物，那么如(但不限于)图16流程中所述，可将如上所述的药效基团并入用于打开环氧化物或位于伯氨基官能团处的胺形式中。然而，根据本发明的抑制剂的带有药效基团的侧链可位于分子的任何位置。在图17流程中，给出实施例5.6的合成。此处，羟基乙基氨基生物电子等排物出现在紧邻本发明药效基团处。
哌啶-4-羰基-((E)-(S)-5-苯甲基磺酰基-1-{2-[2-((S)-2-苯甲基磺酰基氨基羰基-八氢-吲哚-1基)-2-氧代-乙基氨基]-乙酰基}-4-烯基)-酰胺(化合物5.6)
如文献(PicoA.等人,J.Org.Chem.,2003,68,.5075-5083)中所述制备所需的环氧化物(5.6.1，参见图17流程)。以化合物4.3.1合成和文献(JohansonA.等人,Bioorg.&Med.Chem.,11,2003,2551-2568)中之前所述的合成途径的类似方式制备氨基组分(N[(S)-1-(2-氨基-乙酰基)八氢-吲哚-2-羰基]-苯甲基磺酰胺)。
将980mg5.6.1(2.83mmol)溶解于20ml甲醇中且相继加入1.03gN[(S)-1-(2-氨基-乙酰基)八氢-吲哚-2-羰基]-苯甲基磺酰胺(2.83mmol)和100mg三乙胺(1mmol)。将溶液在回流下沸腾5小时。在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化所得固体残余物(色谱柱：32×3.5cm，二氯甲烷/甲醇：95/5)。获得1.12g呈白色固体的纯形式化合物5.6.2。将1.1g化合物5.6.2(1.54mmol)溶解于THF中且在室温下加入2ml1摩尔浓度的氟化四丁铵(TBAF)于THF中的溶液。在这一温度下搅拌30分钟后，在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化产物(5.6.3)(色谱柱：26×2.8cm，二氯甲烷/甲醇：90/10，产量：781mg)。
将760mg二醇5.6.3(1.27mmol)溶解于15ml二氯甲烷中且加入1.18g1,1,1-三(乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并二氧杂环戊烯-3-(1H)-酮(Dess-MartinPeriodan，2.79mmol)于二氯甲烷中的溶液。将溶液在室温下搅拌30分钟。在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化中间体(5.6.4)(色谱柱：30×2.8cm，二氯甲烷/甲醇：98/2，产量：474mg)。
将257mg(EtO)2P(＝O)SO2Phe(0.85mmol)溶解于10ml无水DMF中且在氮气氛下在室温下加入34mgNaH(60％于矿物油中)。
气体产生停止后，加入460mg5.6.4(0.77mmol)于10ml无水DMF中的溶液，且将溶液在室温下搅拌整夜。在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化中间体(UU5.6.4)(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，25％B到100％B，1％/min)。产量：498mg。
毫无疑问地通过用10mlTFA/DCM＝1/1溶液处理裂解boc保护基，且所得伯胺(5.6.5)不经进一步纯化即可使用。将化合物5.6.5的粗产物溶解于10mlDMF中，且加入195mgN-boc-哌啶-4-甲酸-N-羟基丁二酰亚胺(0.6mmol)。通过加入DIPEA将pH值调节到约8-9。在室温下搅拌1小时后，反应结束。在真空下去除溶剂且所得油性残余物无需进一步在TFA/DCM＝1/1的10ml溶液中加工即溶解。在室温下搅拌30分钟后，反应结束。在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化标题中所列的化合物。
产量：402mg
ESI-MS:742.3{M+H}+
接受体取代双键的优选形式为由羰基官能团与双键共轭形成的迈克尔系统，其显示以下通用结构[G]：
在一个实施例中，经由A与本发明药效基团结合的原子是氮。优选羰基(C＝O)与这一优选叔取代氮原子结合。
已令人惊讶地发现，以这种方式取代的本发明化合物也可有效抑制转谷氨酰胺酶。
合成的一般描述：
图18中显示一种合成顺序作为实例(但不限于此)。由Hill等人(Hill,R.D.；Vederas,J.C.,JOC,1999,64,9538-9546)所公开的化合物5.7.1起始制备本发明抑制剂。通过在存在吡啶的情况下与双(五氟苯基)碳酸酯的反应，形成五氟苯基酯5.7.2，五氟苯基酯5.7.2与醇化物反应形成经不同保护的酯，例如5.7.3。在可制备例如5.7.6的醛之前，必须如本文中所述例如经由如5.7.5的醇保护仲肼氮。举例来说，这一保护基可通过在存在DMAP的情况下与二碳酸二叔丁酯反应并入。在二甲酰胺5.7.4成功还原成醇5.7.5后，可例如通过斯文氧化反应使醇氧化为醛5.7.6。本发明抑制剂的进一步合成可由5.7.6起始根据本文中所述的方法(例如参见化合物3.11)执行。以化合物5.7给出实施例。
(E)-5-(N'-乙酰基-N-羧基-肼基)-[(戊-2-烯酰基)-1-乙酰基]-L缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯(化合物5.7)
将693mg酰肼5.7.1(4mmol，图18流程；Hill,R.D.；Vederas,J.C.JOC,1999,64,9538-95469)溶解于20ml无水THF中且加入326μl吡啶(4mmol)。两分钟后，加入1.43g双(五氟苯基)碳酸酯(3.62mmol，Fluka)且将溶液在室温下搅拌整夜。在真空下去除溶剂且借助于硅胶色谱法纯化残余物(色谱柱：39×2.8cm，二氯甲烷/甲醇：95/5，产量：1.24g)。
再将1.22g五氟苯基酯UU5.7.2(3.18mmol)溶解于35ml无水THF中。向这一溶液中加入540mg2-苯基-2-正丙醇钾(3.1mmol)。将溶液在室温下搅拌两小时，且在真空下去除溶剂。将所得固体残余物溶解于200ml乙酸乙酯中且用10％Na2CO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤。经Na2SO4干燥有机相。在真空下去除溶剂后，获得628mg2-苯基-2-丙醇酯5.7.3。粗产物不经进一步纯化即可用于后续合成。
将628mg5.7.3(1.87mmol)溶解于20ml乙腈中且加入817mg二碳酸二叔丁酯(3.74mmol)和46mgDMAP(0.37mmol)。将溶液在室温下搅拌整夜，且在真空下去除溶剂。借助于硅胶色谱法执行化合物5.4.1的后续纯化(色谱柱：32×2.2cm，二氯甲烷/甲醇:99/1，产量：521mg)。
将510mg5.4.1(1.17mmol)溶解于20ml甲醇中且在0℃下加入110mg硼氢化钠(2.95mmol)。将溶液在这一温度下搅拌整夜。随后，向反应溶液中加入56ml1％柠檬酸溶液，然后使反应溶液解冻到室温。将水相萃取五次，每次用100ml乙醚，且经Na2SO4干燥合并的有机相。此得到388mg醇5.7.5，其对连续反应(斯文氧化(Swernoxygenation)为醛5.7.6)来说足够纯。因此，将137mg乙二酰氯(1.07mmol)溶解于5ml二氯甲烷中。将这一溶液在氮气氛下冷却到-60℃，且随后缓慢逐滴加入180mgDMSO(2.33mmol)于2ml二氯甲烷中的溶液。将溶液在-60℃下再搅拌10分钟，且随后加入388mg(0.983mmol)上述醇于5ml二氯甲烷中的溶液。在这一温度下再搅拌15分钟后，加入4.8g三乙胺(48mmol)。将溶液在-60℃下搅拌5分钟，然后移走低温恒温器。在约30分钟期间将溶液解冻到0℃。在这一温度下，加入15ml水，且将反应批料剧烈搅拌10分钟。去除有机相，且将水相洗涤两次，每次用20ml二氯甲烷。经Na2SO4干燥合并的有机相且在真空下浓缩以干燥。在真空下去除溶剂后，获得354mg5.7.6。这一醛不经进一步纯化即可用于后续威蒂格反应。因此，将340mg5.7.6(0.866mmol)溶解于15ml苯中且在室温下加入301mg(0.866mmol)(乙氧基羰基亚甲基)-三苯基磷烷。将溶液在室温下搅拌整夜，且随后在真空下去除溶剂。借助于制备型HPLC(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，25％B到100％B，1％/min)纯化后，获得300mg纯烯烃5.7.7。
通过将290mg化合物5.7.7(0.63mmol)溶解于10ml二氯甲烷中且相继加入100μl三异丙基硅烷和100μl三氟乙酸从纯化产物裂解酸不稳定保护基。30分钟后，在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化所获得的残余物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。因此，获得131mg游离羧酸5.7.8。
将50mg5.7.8(0.2mmol)溶解于3mlDMF中。向这一溶液中加入77mg(0.2mmol)HATU和68μlDIPEA(0.4mmol)。将这一溶液立即加入H-Val-Pro-Leu-OMe的三氟乙酸盐(91mg)于2mlDMF中的溶液中。在室温下搅拌1小时后，在真空下去除溶剂且借助于制备型HPLC纯化标题中所列的化合物(synergymax，4μm，250×21,2mm，A洗提剂：0.1％TFA/水；B洗提剂：90％AcCN/10％水/0.1％TFA。梯度：8ml/min，5％B到100％B，1％/min)。
产量：78mg
ESI-MS:590,1{M+Na}+
(化合物42)
根据图3变化形式2的反应流程制备化合物42。此证明根据本发明的主链可由完全非蛋白原性氨基酸制备。
(化合物43)
根据图3变化形式1的反应流程制备化合物43。此证明根据本发明的主链可由完全非蛋白原性氨基酸制备。
(化合物44)
根据图3变化形式2的反应流程制备化合物44。此证明可毫无疑问地制备具有13个氨基酸的本发明主链。
化合物43和44分别显示对TG2的5μM和15μM的IC50。
爱尔兰塞特犬(IrishSetter)活体内实验的实例
给5周大的狗(爱尔兰塞特犬)喂食含小麦饮食。动物显示腹泻症状和体重增加不良。
通过空肠活检，可见肠绒毛部分降解和上皮内淋巴细胞数目增加。
在每次进餐之前喂食这只狗75毫克/公斤体重的存于酸稳定调配物中的转谷氨酰胺酶抑制剂(1)。此后，观察到腹泻减少且体重增加。两个月后，借助于活检显示肠绒毛显示正常长度且上皮内淋巴细胞的数目显著降低。
实例：TG6和TG7的重组产生
分别由TG6-cDNA和TG7-cDNA根据标准程序用PCR扩增编码TG6和TG7的基因(两者都是根据美国专利7,052,890的技术现况)。通过所使用的引物，在5'端插入Ndel限制位点和六个组氨酸密码子且在3'端插入BglII限制位点(TG6)和HindIII限制位点(TG7)。
用限制核酸内切酶Ndel和BglII处理Tg6PCR产物。在Ndel和BamHI处，插入限制性载体pET3a。用限制核酸内切酶Ndel和HindIII处理Tg7PCR产物且在相同处插入限制性载体pET28b。
用所获得的质体转化大肠杆菌菌株BL21(DE3)(Novagen,Darmstadt)。用IPTG诱导各个每种菌株的培养物并加以收集。在高压均质化下破坏细胞后，离心破坏物且经由金属离子亲和色谱在HiTrap螯合HP色谱柱(GE-Helathcare)上纯化上清液。由SDS-PAGE用考马斯亮蓝染色(Coomassiestaining)分析纯化蛋白质TG6和TG7。用于产生TG6和TG7的所有程序都为所属领域的技术人员所熟知。
以与以上实验说明类似的方式制备根据通式(A)的化合物的其它实例10到43且这些实例具有以下取代模式：
表1
根据其中m＝0的通式[G]的化合物的实例3.2.1到3.2.11由化合物3.1到3.12根据1.、2.和3.2所述的方法制备且显示以下取代模式：
表2

Claims (7)

1.一种肽或拟肽，其具有以下通式(I)、(II)或(III)：
其中
MS是具有以下结构的接受体取代烯烃：
E表示以下基团：-C(＝O)-CH2-或-C(＝O)-NH-；
m为0或1；
R1-R4为氢；
Z1和Z3为-H；
Z2表示：-H、–COCH3、–CO2H、–CO2CH3、–CO2C2H5、–CO2CH(CH3)2、–CO2Ph、–CO2CH2Ph、–CONH2、–CONHC5H11、–CON(CH3)2、–COCO2C2H5、–SO2CH3、–SO2Ph、–SO3CH2Ph、–SO2NMe2、–CN、–NO2、
或
残基Z1和Z2一起能表示残基-CO-O-CH2-CH2-，
残基Z1和Z3一起能表示残基-CO-CH2-CH2-，
残基Z2和Z3一起也能表示残基-CO-CH2-CH2；
Q表示-H或
Q'表示
Y与–NXX’在通式(I)中定义如下:
Y与–NXX’在通式(II)中定义如下:
Y与–NXX’在通式(III)中定义如下:
X”表示氢；
以及前述化合物的甜菜碱形式、溶剂化物、水合物以及药理学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的肽或拟肽，其选自由以下各物组成的群组：
化合物1：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物2：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物3：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酸甲酯；
化合物4：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酸甲酯；
化合物5：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-异戊基酰胺；
化合物6：[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸-1-乙酰基]-L-缬氨酰基-L-脯氨酸甲酯；
化合物7：Nα-乙酰基-L-天冬酰胺酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酸甲酯；
化合物8：Nα-乙酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-脯氨酰基-甘氨酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-丝氨酰基-L-亮氨酰基-L-缬氨酰基-L-异亮氨酰基-甘氨酸甲酯；
化合物9：Nα-苯甲氧基羰基-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸-甲酯；
化合物10：Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-谷氨酰基-L-丙氨酸甲酯；
化合物11：Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-谷氨酰基甲酯；
化合物12：Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物13：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物14：Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-(对氟)-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物15：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-(对氟)-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物16：[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸1-乙酰基]-L-缬氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物17：[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸-1-乙酰基]-L-环己基甘氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物18：[(E)-(L)-6-(2-氧代-吡咯烷酮-1-基)-庚-2-烯-二甲酸-1-乙酰基]-L-环己基甘氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物19：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酸-L-酪氨酸甲酯；
化合物20：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物21：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-亮氨酰基-L-脯氨酰基-L-谷氨酰胺甲酯；
化合物22：Nα-乙酰基-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物23：Nα-(5-甲基异噁唑-3-羰基)-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-异丙酰基}-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-亮氨酸甲酯；
化合物24：Nα-(2-氟苯甲酰基)-{[L-7-氨基-4-氧代-辛-2-烯-二甲酸]-1-甲酰基}-L-缬氨酰基-L-4-氟脯氨酰基-亮氨酸异丙酯；
化合物25：Nα-苯甲氧基羰基-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物3.2.1：Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-2-氨基-6-甲烷磺酰基]-己-5-烯基}-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物3.2.2：Nα-苯甲氧基羰基)-[(E)-(L)-2-氨基-6-二甲基氨磺酰基)-己-5-烯基]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物3.2.3：Nα-苯甲氧基羰基)-[(L)-2-氨基-4-(3-氧代-环戊-1-烯基]-丁酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物3.2.4：Nα-苯甲氧基羰基)-[(L)-2-氨基-5-(2-氧代-亚二氢呋喃-(3E)-基)]-戊酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物3.2.5：Nα-苯甲氧基羰基)-[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；
化合物3.2.6：Nα-乙酰基-{[(E)-(L)-6.氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-戊基酰胺基}-L-谷氨酰胺酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸甲酯；
化合物3.2.7：Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-异丙酰基}-L-(对氟-苯丙氨酰基)-L-脯氨酸；
化合物3.2.8：Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-6-氨基-庚-2-烯-二甲酸]-1-苯甲酰基}-L-苯丙氨酰基-L-高脯氨酰基-L-亮氨酰基酰胺；
化合物3.2.9：Nα-苯甲氧基羰基)-{[(E)-(L)-7-氨基-2-氧代-辛-3-烯-二甲酸]-1-乙酰基}-L-苯丙氨酸甲酯；
化合物3.2.10：Nα-苯甲氧基羰基)-[(Z)-(L)-2-氨基-7-氧代-辛-5-烯-二甲酸]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯；以及
化合物3.2.11：Nα-苯甲氧基羰基)-[(Z)-(L)-2-氨基-6-氰基-己-5-烯-二甲酸]-L-谷氨酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酸甲酯。
3.一种化合物作为制备药物组成物的用途，所述药物组成物作为转谷氨酰胺酶抑制剂，其中所述化合物具有以下通式(I)、(II)或(III)中的一个：
其中
MS是具有以下结构的迈克尔系统：
且其中m、E、R1、R2、R3、R4、Q、Q’、NXX’、X”、Y、Z1、Z2和Z3具有与权利要求1中所定义相同的含义。
4.一种根据权利要求1所述的化合物用于制备治疗腹腔病或血栓形成的医药组合物的用途。
5.一种用于抑制转谷氨酰胺酶的医药组合物，其包含至少一种根据通式(I)或(II)或(III)的作为转谷氨酰胺酶抑制剂的化合物或其药理学上可接受的盐和至少一种药理学上可接受的载剂、赋形剂或溶剂。
6.一种制备根据权利要求1所述的其中m＝0的肽或拟肽的方法，其具有以下合成流程：
(0)提供谷氨酸
(1)在谷氨酸的C-末端和N-末端处连接保护基(PG1和PG2)
(2)将谷氨酸的侧链的羧基官能团还原成醛
(3)将所得醛转化为接受体取代亲电子双键
(4)去除所述保护基，以及
(5)用肽片段或拟肽延长所述C-末端和/或所述N-末端
或
根据以下合成流程：
(1)制备含有谷氨酸的C-末端和N-末端经保护肽或拟肽
(2)将谷氨酸的侧链的羧基官能团还原成醛
(3)将所得醛转化为接受体取代亲电子双键，以及
(4)可选去除所述保护基。
7.一种制备根据权利要求1所述的其中m＝1的肽或拟肽的方法，其具有以下合成流程：
(0)提供谷氨酸
(1)在谷氨酸的C-末端和N-末端处连接保护基(PG1和PG2)
(2)将谷氨酸的侧链的羧基官能团还原成二酮基
(3)将所得二酮基的末端羰基官能团转化为接受体取代亲电子双键
(4)去除所述保护基，以及
(5)用肽片段或拟肽延长所述C-末端和/或所述N-末端
或
根据以下合成流程：
(1)制备含有谷氨酸的C-末端和N-末端经保护肽或拟肽
(2)将谷氨酸的侧链的羧基官能团还原成二酮基
(3)将所得二酮基的末端羰基官能团转化为接受体取代亲电子双键，以及
(4)可选去除所述保护基。
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